CN115399294A - 一种三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法，包括以下步骤：(1)使用CO2处理三叶斑潜蝇成虫，将其分装到多孔板内；(2)保持程序升降恒温箱温度稳定；(3)待三叶斑潜蝇成虫恢复正常活动后，将24孔板放置到程序升降恒温箱，设置温度上升斜率和最高温度；(4)启动电脑录像，待三叶斑潜蝇成虫全部无法运动，停止程序升降恒温箱工作和电脑录像，拿出多孔板；(5)确认三叶斑潜蝇成虫CTmax值。本方法采用设备均为实验室常用仪器，操作简单；能够更加准确的测定出在动态温度下三叶斑潜蝇成虫的高温耐受能力，对于三叶斑潜蝇成虫的近缘物种也具有一定的参考价值。
Description
技术领域
本发明属于昆虫学领域，具体涉及三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法。
背景技术
三叶斑潜蝇(Liriomyzatrifolii)属于双翅目Diptera，潜蝇科Agromyzidae，植潜蝇亚科Phytomyzidae，其幼虫以潜食叶片为害，成虫在叶片上取食、产卵为害，同时成虫取食、产卵造成的植物伤口也为病菌提供了侵染途径。目前广泛分布在海南、云南、福建、山东、安徽、江苏等地，对我国的蔬菜和花卉生产造成了巨大的危害。在温度季节性升高及日间逐渐升高的过程中，三叶斑潜蝇的耐热性是否随之变化反映了三叶斑潜蝇对高温适应能力的强弱，从而影响三叶斑潜蝇种群的夏季分布。目前关于高温与三叶斑潜蝇关系的研究方法，多为在恒定温度下研究三叶斑潜蝇的发育、繁殖、存活等生活史性状，而三叶斑潜蝇在田间环境的温度存在昼夜和季节的周期变化，因此用恒定高温试验所得的生物学数据解释田间种群动态易出现偏差。
临界高温(Critical thermal maximum,CTmax)指昆虫耐热上限温度，昆虫在此温度下会痉挛、丧失运动能力，并最终死亡。目前该指标主要用于衡量各虫态以及不同地理种群之间的耐热性差异。
发明内容
发明目的：本发明的目的是为了提供一种测定三叶斑潜蝇成虫CTmax的简便方法，能够更加准确的测定出在动态温度下美洲斑潜蝇成虫的高温耐受能力。
技术方案：本发明所述的一种三叶斑潜蝇CTmax的动态测定方法，包括以下步骤：
(1)使用CO2处理三叶斑潜蝇成虫，使之无法活动，并将其分装到多孔板内；
(2)将程序升降恒温箱温度设置为适宜三叶斑潜蝇成虫饲养的温度，并使恒温箱内稳定保持该温度；
(3)待步骤(1)所述经CO2处理的三叶斑潜蝇成虫恢复正常活动后，将装有三叶斑潜蝇成虫的多孔板放置到步骤(2)所述程序升降恒温箱，设置温度上升斜率和最高温度；
(4)启动温度上升程序，温度开始上升的同时启动电脑录像，待步骤(3)所述多孔板中的三叶斑潜蝇成虫全部无法活动，停止程序升降恒温箱工作和电脑录像，拿出多孔板；
(5)通过步骤(4)所述电脑录像观察三叶斑潜蝇成虫到达临界状态的时间点和程序升降恒温箱记录的该临界状态时间点的对应温度，对多孔板中的每一只三叶斑潜蝇成虫最高耐受温度进行确认，即得三叶斑潜蝇成虫CTmax值。
优选的，所述多孔板为12孔板或者24孔板。
优选的，在所述步骤(1)测定前对多孔板进行预处理，具体为，使用解剖针对多孔板每个孔对应的盖子扎透气孔，并用光源照射多孔板，将反光最亮的孔用记号笔标记，该孔不放置三叶斑潜蝇成虫。
优选的，步骤(2)所述适宜三叶斑潜蝇成虫饲养的温度为25～27℃。
优选的，步骤(3)中，判断三叶斑潜蝇成虫恢复正常活动的标准为，上下颠倒多孔板，叶斑潜蝇成虫不跌落。
优选的，步骤(3)所述温度上升斜率设置为0.1℃/min～1℃/min。
进一步优选的，步骤(3)所述温度上升斜率设置为0.5℃/min
优选的，步骤(3)所述最高温度设置为50～60℃。
优选的，步骤(5)所述三叶斑潜蝇成虫到达临界状态的判定标准为，当三叶斑潜蝇成虫突然从孔壁上跌落至底部，虫体发生痉挛。
优选的，所述24孔板，孔直径为16mm，深度17mm。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：(1)可以快速有效的测定三叶斑潜蝇成虫的CTmax，对于三叶斑潜蝇的近缘物种，南美斑潜蝇和美洲斑潜蝇成虫的CTmax测定也具有一定的参考价值；(2)采用24孔板，电脑以及程序升降恒温箱，均为实验室常用仪器，操作简单；(3)本方法设定的不同温度上升斜率参数，能够更加准确的测定出在动态温度下美洲斑潜蝇成虫的高温耐受能力。
附图说明
图1为24孔板示意图，A为24孔板本体，B为24孔板盖子；
图2为程序升降恒温箱示意图；
图3为24孔板放置在程序升降恒温箱示意图；
图4为电脑观察图像；
图5为三叶斑潜蝇成虫CTmax值箱形图。
具体实施方式
为进一步了解本发明的内容，结合附图及实施例对本发明作详细描述。
实施例1
(1)如图1、图5所示，使用解剖针对24孔板每个孔对应的盖子扎2个透气孔，并用光源照射24孔板，将反光最亮的第二排第三列孔用记号笔标记，为避免观察不准确，该孔不放置三叶斑潜蝇成虫。
(2)使用CO2处理5只三叶斑潜蝇成虫，使之无法运动，并将其分装到24孔板内，每孔分装一只三叶斑潜蝇成虫，24孔板的孔直径为16mm，深度为17mm。
(3)将如图2所示的程序升降恒温箱温度设置为25℃，并使恒温箱内稳定保持该温度。
(4)上下颠倒24孔板，叶斑潜蝇成虫不跌落，即三叶斑潜蝇成虫恢复正常活动时，如图3所示，将装有三叶斑潜蝇成虫的24孔板放置到程序升降恒温箱，设置温度上升斜率为0.1℃/min和最高温度55℃；
(5)温度开始上升的同时启动如图4所示的电脑录像，待24孔板中的5只三叶斑潜蝇成虫全部从孔壁上跌落至底部，虫体发生痉挛，停止程序升降恒温箱工作和电脑录像，拿出24孔板；
(6)通过电脑录像观察三叶斑潜蝇成虫到达临界状态的时间点和程序升降恒温箱记录的该临界状态时间点的对应温度，对多孔板中的每一只三叶斑潜蝇成虫最高耐受温度进行确认，即得三叶斑潜蝇成虫CTmax值。
实验重复三次，结果如图5。
实施例2
与实施例1步骤相似，不同之处在于设置程序升降恒温箱温度上升斜率为0.5℃/min。最终获得三叶斑潜蝇成虫CTmax值。
实验重复三次，结果如图5。
实施例3
与实施例1步骤相似，不同之处在于设置程序升降恒温箱温度上升斜率为1℃/min。最终获得三叶斑潜蝇成虫CTmax值。
实验重复三次，结果如图5。
实施例4
与实施例1步骤相似，不同之处在于设置程序升降恒温箱起始温度为26℃，终止温度为50℃；最终获得三叶斑潜蝇成虫CTmax值。
实验重复三次，结果如图5。
实施例5
与实施例1步骤相似，不同之处在于设置程序升降恒温箱起始温度为27℃，终止温度为60℃。最终获得三叶斑潜蝇成虫CTmax值5。
实验重复三次，结果如图5。
从图5可以看出，0.1℃/min和1℃/min处理的数值相比于0.5℃/min离散程度更大，同时0.1℃/min的处理需要4小时左右，具有重复性差的特点。而1℃/min的处理需要20分钟左右，但是其中的数据离散程度过大。而0.5℃/min的处理需要40分钟左右，并且数据的离散程度较小。
研究结果表明，刚羽化的三叶斑潜蝇成虫具有较为顽强的生命力，更能体现出一个种群的温度耐受能力。本实验中发现：1℃/min的温度上升斜率导致实验数据之间差异较大，缺乏关联性；0.1℃/min的温度上升斜率导致了实验时长激增，不利于大批次的实验处理；0.5℃/min的温度上升斜率，一方面测得的数据符合物种耐受性实际情况，另一方面所用时间较短，有利于大批次进行重复。综上所述，0.5℃/min的温度上升斜率为本实验中最优温度上升斜率。
Claims (8)
1.一种三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)使用CO2处理三叶斑潜蝇成虫，使之无法活动，并将其分装到多孔板内；
(2)将程序升降恒温箱温度设置为适宜三叶斑潜蝇成虫饲养的温度，并使恒温箱内稳定保持该温度；
(3)待步骤(1)所述经CO2处理的三叶斑潜蝇成虫恢复正常活动后，将装有三叶斑潜蝇成虫的多孔板放置到步骤(2)所述程序升降恒温箱，设置温度上升斜率和最高温度；
(4)启动温度上升程序，温度开始上升的同时启动电脑录像，待步骤(3)所述多孔板中的三叶斑潜蝇成虫全部无法活动，停止程序升降恒温箱工作和电脑录像，拿出多孔板；
(5)通过步骤(4)所述电脑录像观察三叶斑潜蝇成虫到达临界状态的时间点和程序升降恒温箱记录的该临界状态时间点的对应温度，对多孔板中的每一只三叶斑潜蝇成虫最高耐受温度进行确认，即得三叶斑潜蝇成虫CTmax值。
2.根据权利要求所述的一种三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法，其特征在于，所述多孔板为12孔板或者24孔板。
3.根据权利要求1中所述的一种三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法，其特征在于，在所述步骤(1)测定前对多孔板进行预处理，具体为，使用解剖针对多孔板每个孔对应的盖子扎透气孔，并用光源照射多孔板，将反光最亮的孔用记号笔标记，该孔不放置三叶斑潜蝇成虫。
4.根据权利要求1中所述的一种三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法，其特征在于，步骤(2)所述适宜三叶斑潜蝇成虫饲养的温度为25～27℃。
5.根据权利要求1中所述的一种三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法，其特征在于，步骤(3)中，判断三叶斑潜蝇成虫恢复正常活动的标准为，上下颠倒多孔板，三叶斑潜蝇成虫不跌落。
6.根据权利要求1中所述的一种三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法，其特征在于，步骤(3)所述温度上升斜率设置为0.1℃/min～1℃/min。
7.根据权利要求1中所述的一种三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法，其特征在于，步骤(3)所述最高温度设置为50～60℃。
8.根据权利要求1中所述的一种三叶斑潜蝇成虫CTmax的动态测定方法测定方法，其特征在于，步骤(5)所述三叶斑潜蝇成虫到达临界状态的判定标准为，当三叶斑潜蝇成虫突然从孔壁上跌落至底部，虫体发生痉挛。
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