CN102177874B - 桑蚕卵胚胎发育进程检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及桑蚕卵胚胎发育控制方法，具体公开了一种基于代谢量变化的桑蚕卵胚胎发育进程检测方法：(1)构建待检测品种的桑蚕的活化桑蚕卵孵化过程中因代谢而减少的质量和胚胎的发育进程的关联关系的模型；(2)在待检测的孵化过程中的桑蚕卵中取一个以上作为样本，然后称量该样本的质量，对照步骤(1)所得模型，根据桑蚕卵的质量的减少情况确定桑蚕卵胚胎发育进程。该发明可以准确测定同一批次桑蚕卵的发育进程，具有操作方便，省工省力的优点，适合我国主蚕区进行推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种桑蚕卵胚胎发育进程的检测方法，具体涉及基于代谢量变化的桑蚕卵胚胎发育进程检测方法。
背景技术
桑蚕（Bombyx mori L.）在我国已经被人工驯养5700多年，属鳞翅目蚕蛾科完全变态昆虫，世代包括卵、幼虫、蛹和成虫（蛾）四个虫态。桑蚕卵从活化到孵化约需要13~14天，人们为了实现桑蚕卵孵化整体，蚁蚕强健以及适时孵化的目的，在13~14天内要根据胚胎的发育进行进程对环境条件进行调整，这一操作过程称之为催青。
为了便于识别蚕卵不同的发育时期，生产上对不同发育阶段的桑蚕卵进行编号（甲：滞育后期、乙1：滞育期后、乙2：伸展期、丙1：最长期前、丙2：最长期、丁1：肥厚期、丁2：突起发生期、戊1：突起发达前期、戊2：突起发达后期、戊3：缩短期、己1反转期、己2：反转终了期、己3：气管形成期、己4：眼点期、己5：转青期），其中丙2、戊3、己4是三个重要的时期，分别为加温的起点时期、升温时期和确定发种时期。
催青的条件控制方法有很多种，但目前生产上普遍采用的是简化催青法，即把已经活化的桑蚕卵在温度为10~15℃，湿度75~80%的环境下进行中间感温7~10天，胚胎发育到丙2时期进行升温，用22℃，湿度80~85%催青到戊3，再用25℃，湿度85~90%催青至孵化。为了鉴定胚胎不同的发育时期，在生产上需要对催青过程中的桑蚕卵进行每天解剖，对胚胎的形态特征进行鉴别，确定发育进程。由于桑蚕卵很小，早期的胚胎上还附着大量的卵黄，影响对胚胎特征的识别；另外，解剖桑蚕卵只能是逐粒进行鉴定，由于桑蚕卵的孵化控制是一个批量控制的行为，所以传统的解剖也存在一定的误差，即个体特征不能反应整批发育进程。
我国各蚕区都有相应的当家桑品种，即主要饲养的品种，同一品种的遗传特征一致，但不同批次在制种和感温处理等过程中存在一定的发育进程差异，而生产上都需要对不同批次进行全部解剖，需要花费大量的劳力，生产上的迫切需要对各品种建立相应的省力化检测胚胎发育进程的方法。
发明内容
本发明的发明目的是提供一种桑蚕卵胚胎发育进程的检测方法。
为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种桑蚕卵胚胎发育进程的检测方法，包括以下步骤：
(1) 构建待检测品种的桑蚕的活化桑蚕卵孵化过程中因代谢而减少的质量和胚胎的发育进程的关联关系的模型；
(2) 在待检测的孵化过程中的桑蚕卵中取一个以上作为样本，然后称量该样本的质量，对照步骤(1)所得模型，根据桑蚕卵的质量的减少情况确定桑蚕卵胚胎发育进程。
上述技术方案中，步骤(1)具体包括以下步骤：取待检测品种的活化桑蚕卵，在催青环境条件下进行催青，采用常规方法确定胚胎的每个发育阶段；称量每个发育阶段的桑蚕卵的平均质量，活化桑蚕卵特定时期的平均重量为M1，桑蚕卵孵化前特定时期的平均重量为M2；每个发育阶段的桑蚕卵的质量如下所示：
滞育期后的桑蚕卵的平均质量 m 乙1 ；
伸展期的桑蚕卵的平均质量 m 乙2 ；
最长期前的桑蚕卵的平均质量 m 丙1 ；
最长期的桑蚕卵的平均质量 m 丙2 ；
肥厚期的桑蚕卵的平均质量 m 丁1 ；
突起发生期的桑蚕卵的平均质量 m 丁2 ；
突起发达前期的桑蚕卵的平均质量 m 戊1 ；
突起发达后期的桑蚕卵的平均质量 m 戊2 ；
缩短期的桑蚕卵的平均质量 m 戊3 ；
反转期的桑蚕卵的平均质量 m 己1 ；
反转终了期的桑蚕卵的平均质量 m 己2 ；
气管形成期的桑蚕卵的平均质量 m 己3 ；
眼点期的桑蚕卵的平均质量 m 己4 ；
转青期的桑蚕卵的平均质量 m 己5 ；
计算桑蚕卵质量减少总量Δ＝M1－M2；
根据等式X%= 
计算得到每个发育阶段的桑蚕卵平均质量减少百分比X%，其中，m选自：m 乙1 、m 乙2 、m 丙1 、m 丙2 、m 丁1 、m 丁2 、m 戊1 、m 戊2 、m 戊3 、m 己1 、m 己2 、m 己3 、m 己4 或m 己5 ；
建立每个胚胎发育阶段和对应发育阶段的桑蚕卵的平均质量减少百分比X%的对应关系。
上述技术方案中，X可以通过将测量得到的桑蚕卵的质量代入上述等式计算得到，并非一个未知数。
上述技术方案中，所述桑蚕卵胚胎发育进程的检测方法适用于所有品种。
上述技术方案中，步骤(1)中为了避免因个体的不同而导致误差，在建立活化桑蚕卵孵化过程中因代谢而减少的质量和胚胎的发育进程时，作为样本的桑蚕卵数量应大于1500粒。
上述技术方案中，步骤(1)中，所述活化桑蚕卵选自但不限于：经低温自然解除滞育的桑蚕卵，经盐酸浸酸解除滞育的桑蚕卵，经冷藏后再进行盐酸浸酸处理而解除滞育的桑蚕卵或多化性桑蚕卵。
上述技术方案中，步骤(1)中，催青环境条件的控制方法为常规方法，并且所述催青环境与步骤(2)中待检测的桑蚕卵所在的催青环境相同；在确定胚胎的各个发育阶段时采用的是常规的解剖方法，为了避免因个体的不同而导致误差，每一处理需要同时重复识别10个以上的胚胎。
上述技术方案中，称量桑蚕卵的天平优选为精度大于千分之一克的电子天平。
优选的技术方案中，建立胚胎发育阶段和对应发育阶段的桑蚕卵的质量减少百分比X%的对应关系时，采用胚胎发育阶段和对应发育阶段的桑蚕卵的质量减少百分比X%的对应表。
优选的技术方案中，建立胚胎发育阶段和对应发育阶段的桑蚕卵的质量减少百分比X%的对应关系时，以胚胎发育阶段的时间为横坐标，以对应发育阶段的桑蚕卵的质量减少百分比X%为纵坐标，得到一标准曲线。
上述技术方案中，步骤(2)具体为：测得待检测的桑蚕卵的平均质量m，计算所述桑蚕卵的质量减少百分比a%=
，选择与a最接近的X，即使|a-X|（|a-X|表示a和X的差的绝对值）值最小的X，参照步骤(1)建立的模型，确定X对应的胚胎发育阶段，则所述待检测的桑蚕卵的发育阶段即该X所对应的胚胎发育阶段，并且，当a小于X，则所述待检测的桑蚕卵的发育阶段处于该X所对应的胚胎发育阶段的前面；当a大于X，则所述待检测的桑蚕卵的发育阶段处于该X所对应的胚胎发育阶段的后面。
由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：
1．本发明所述方法检测的是桑蚕卵整体的发育进程，较传统方法更具有代表性。
2．本发明所述方法具有操作方便，实用性强的特点，适合在我国主要蚕区进行推广应用。
附图说明
图1是实施例中的胚胎解剖图。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：
实施例一：一种基于代谢量变化的桑蚕卵胚胎发育进程检测方法
⑴材料及设备：桑蚕卵采用苏州大学育成的品种（苏秀×春丰），催青控制箱为广东省韶关鑫腾科普仪器有限公司生产的250D人工气候箱，天平为日本岛津公司生产的万分之一克精度的电子天平。
样本：每区取2000粒卵，设3个重复，同时设5000粒平行区用于解剖鉴定发育阶段。
⑵活化、感温及催青：活化为低温自然解除，感温为15℃处理10天，催青按照简化催青技术处理。
⑶蚕卵解剖及形态鉴定：采用碱法(20% KOH)进行解剖，将存有50mL碱液的小烧杯置于酒精灯烧开后移去酒精灯，将存有50粒左右的桑蚕卵置于碱液5秒，经温水(35℃)漂洗后放于存有温水9cm的二重皿内，用胶头吸管反复冲洗，直到胚胎逸出，取出胚胎用显微镜进行形态鉴定。
⑷数据统计及关系式的建立
苏秀×春丰胚胎各发育特征与代谢量关联表
| 重量(g) | 发育阶段 | 代谢减少百分量(%) |
| 1.1400 | 乙1 | 0.00% |
| 1.1385 | 乙2 | 1.39% |
| 1.1381 | 丙1 | 1.76% |
| 1.1366 | 丙2 | 3.12% |
| 1.1310 | 丁1 | 8.30% |
| 1.1294 | 丁2 | 9.81% |
| 1.1266 | 戊1 | 12.44% |
| 1.1218 | 戊2 | 16.88% |
| 1.1169 | 戊3 | 21.39% |
| 1.1091 | 已1 | 28.61% |
| 1.1008 | 已2 | 36.30% |
| 1.0891 | 已3 | 63.13% |
| 1.0594 | 已4 | 74.66% |
| 1.0320 | 已5 | 100.00% |
注：重量为2000粒卵3区的平均重量。
⑸应用：实际催青过程中，取2000粒卵(3个重复)置于同样的环境中进行催青处理，催青升温后第3天想知道胚胎的发育情况，直接用天平称3个样的重量，实际得到了数据为1.1268g、1.1272g、1.1284g，平均为1.1275g。
根据公式为算得代谢减少百分量(%)为11.36%，根据表2即可查得该发育阶段为戊1的前面，生产上用戊1－进行表示。
⑹发育阶段的解剖验证：采用步骤⑶所述的方法，对该时期的蚕卵进行解剖，显微镜观察形态如图1所示，三个特征（上唇突起不明显、胸部六对突起明显和尾部肛陷不明显）证明发育阶段为戊1－，和本实施例的检测方法结果一致。
Claims (2)
1.一种桑蚕卵胚胎发育进程的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1) 构建待检测品种的桑蚕的活化桑蚕卵孵化过程中因代谢而减少的质量和胚胎的发育进程的关联关系的模型；
(2) 在待检测的孵化过程中的桑蚕卵中取一个以上作为样本，然后称量该样本的质量，对照步骤(1)所得模型，根据桑蚕卵的质量的减少情况确定桑蚕卵胚胎发育进程；
步骤(1)具体包括以下步骤：取待检测品种的活化桑蚕卵，在催青环境条件下进行催青，采用常规方法确定胚胎的每个发育阶段；称量每个发育阶段的桑蚕卵的平均质量，活化桑蚕卵特定时期的平均重量为M1，桑蚕卵孵化前特定时期的平均重量为M2；每个发育阶段的桑蚕卵的质量如下所示：
滞育期后的桑蚕卵的平均质量 m 乙1 ；
伸展期的桑蚕卵的平均质量 m 乙2 ；
最长期前的桑蚕卵的平均质量 m 丙1 ；
最长期的桑蚕卵的平均质量 m 丙2 ；
肥厚期的桑蚕卵的平均质量 m 丁1 ；
突起发生期的桑蚕卵的平均质量 m 丁2 ；
突起发达前期的桑蚕卵的平均质量 m 戊1 ；
突起发达后期的桑蚕卵的平均质量 m 戊2 ；
缩短期的桑蚕卵的平均质量 m 戊3 ；
反转期的桑蚕卵的平均质量 m 己1 ；
反转终了期的桑蚕卵的平均质量 m 己2 ；
气管形成期的桑蚕卵的平均质量 m 己3 ；
眼点期的桑蚕卵的平均质量 m 己4 ；
转青期的桑蚕卵的平均质量 m 己5 ；
计算桑蚕卵质量减少总量Δ＝M1－M2；
根据等式X%= 
计算得到每个发育阶段的桑蚕卵平均质量减少百分比X%，其中，m选自：m 乙1 、m 乙2 、m 丙1 、m 丙2 、m 丁1 、m 丁2 、m 戊1 、m 戊2 、m 戊3 、m 己1 、m 己2 、m 己3 、m 己4 或m 己5 ；
建立每个胚胎发育阶段和对应发育阶段的桑蚕卵的平均质量减少百分比X%的对应关系；
步骤(2)具体为：
测得待检测的桑蚕卵的平均质量m，计算所述桑蚕卵的质量减少百分比a%=
，选择与a最接近的X；
参照步骤(1)建立的模型，确定X对应的胚胎发育阶段，则所述待检测的桑蚕卵的发育阶段即该X所对应的胚胎发育阶段，并且，当a小于X，则所述待检测的桑蚕卵的发育阶段处于该X所对应的胚胎发育阶段的前面；当a大于X，则所述待检测的桑蚕卵的发育阶段处于该X所对应的胚胎发育阶段的后面。
2.根据权利要求1所述桑蚕卵胚胎发育进程的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，称量每个发育阶段的桑蚕卵的平均质量，作为样本的桑蚕卵数量应大于1500粒。
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| 万飞.桑蚕普种催青技术.《河南农业》.2003,(第15期),第14页. * |
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| 陈金蛾等.家蚕幼虫关联基因在胚胎期的表达.《浙江大学学报（农业与生命科学版）》.2008,第34卷(第1期),第34-44页. * |
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