CN115389402A - 一种血液肿瘤测定试剂盒以及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血液肿瘤测定试剂盒以及检测方法，属于医疗检测技术领域，包括试剂盒本体，所述试剂盒本体内部左右侧壁靠近下端前侧固定连接有底板，所述底板下方的试剂盒本体内底面固定连接有蓄电池，所述底板后侧面固定连接有第二隔板，所述第二隔板与试剂盒本体后侧面直接滑动插接有废液槽，所述底板上端面左右对称固定连接有L形结构的第一隔板，所述试剂盒本体内部前侧上端固定连接有管架，所述管架左右侧两侧设有试剂槽，所述底板上方设有离心机构；本发明过通过盘式电机带动第一圆盘以1500r/min的速度旋转，试管内的溶液在离心力的作用下混合的更加均匀。
Description
技术领域
本发明涉及医疗检测技术领域，更具体地说，涉及一种血液肿瘤测定试剂盒以及检测方法。
背景技术
恶性肿瘤是我国发病率和死亡率较高的疾病。经过统计，我国恶性肿瘤每年发病率约为273.36/10万，死亡率约为164.73/10万。白血病作为血液肿瘤中一种常见类型，是一种预后较差、死亡率较高的造血系统恶性肿瘤，近年来我国白血病发病率呈上升趋势。
在肿瘤的发生发展过程中细胞凋亡的减弱都起着非常重要的作用。多种凋亡相关分子调控了细胞凋亡的过程，抗凋亡与促凋亡因子的相对水平则决定了细胞的命运（生存或是死亡）。细胞凋亡是指细胞在环境变化后通过程序性化控制进行细胞死亡的一种方式。在免疫反应、发育、生殖细胞成熟等许多生理活动过程中起着关键性的作用。研究证明Bcl-2蛋白质家族的改变与肿瘤的发生密切相关，其中Bcl-2基因的重排就直接导致了某些淋巴瘤的发生，很多实体瘤的发生也与Bcl-2家族基因的突变有一定的关系。因此，可通过检测Bcl-2蛋白质家族在白血病细胞系中的表达水平来判断Bcl-2蛋白质家族与抗肿瘤药物敏感性是否存在相关性，这就需要用到测定试剂盒。
现有的试剂盒功能较为单一，只能够对蛋白质测定试剂进行存放，在蛋白质测定过程中，需要人工使试管内部溶液摇匀，操作费时费力，使用很不方便，而且容易出现溶液混合不均匀的情况，使蛋白质的测定误差较大。
针对上述技术问题，现有专利公告号：CN216944196U，公开了一种蛋白质测定试剂盒，通过将试管固定在试管固定架的内部，随后启动电机，电机的输出轴通过带动转轴使凸轮旋转，从而使凸轮挤压试管固定架侧面的侧板，试管固定架受力向一侧运动使复位弹簧压缩，随着凸轮的旋转，试管固定架的一侧不再受到凸轮的挤压，在复位弹簧的作用下，试管固定架复位，如此循环，使试管固定架在第二容腔的内部快速晃动，使试管内部的溶液快速混合。
上述专利虽然能够加快溶液的混合速度，但是，通过电机带动凸轮旋转来带动试管晃动的方式，溶液只是在试管内来回晃动，混合效果较差，且在长期使用后，凸轮与试管固定架之间会发生磨损，不仅降低试管固定连架的晃动幅度，还降低试管固定架与凸轮的使用寿命。
发明内容
本发明的目的在于提供一种血液肿瘤测定试剂盒以及检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。
一种血液肿瘤测定试剂盒，包括试剂盒本体，试剂盒本体内部左右侧壁靠近下端前侧固定连接有底板，底板下方的试剂盒本体内底面固定连接有蓄电池，底板后侧面固定连接有第二隔板，第二隔板与试剂盒本体后侧面直接滑动插接有废液槽，底板上端面左右对称固定连接有L形结构的第一隔板，试剂盒本体内部前侧上端固定连接有管架，管架左右侧两侧设有试剂槽，底板上方设有离心机构；
离心机构包括固定连接在底板上端面靠近后侧中心位置的盘式电机，盘式电机的输出轴端部固定连接有驱动轴，驱动轴上端固定连接有第一圆盘，第一圆盘上端面靠近外沿位置环形等距开设有四个第一插孔。
进一步的，第一圆盘内部中心位置对应四个第一插孔开设有四个相互交叉呈十字形结构的第一圆孔，且四个第一插孔分别与对应位置的第一插孔连通，第一圆孔内滑动连接有第一活动块，第一活动块靠近对应位置第一插孔的一端均固定连接有圆弧形结构的夹板，第一圆孔内侧面对应第一活动块固定连接有第一夹板。
进一步的，第一活动块环形外侧面靠近第一插孔的一侧滑动套设有第一固定套环，且第一固定套环环形外侧面与第一圆孔内壁固定连接，第一活动块环形外侧面远离第一固定套环的一侧固定套设有第一活动套环，第一活动套环与第一固定套环之间通过弹簧弹性连接。
进一步的，四个第一圆孔的交叉位置处设有第一定位销，第一定位销上部呈锥形结构，且第一定位销下部呈螺栓结构，第一圆盘上端面中心位置开设有供顶定位销插入的第一销孔，驱动轴上端面中心位置开设有与第一定位销下部螺栓结构匹配的第一螺孔。
进一步的，第一圆盘环形外侧面均匀固定连接有一圈轮齿，第一圆盘左右对称设有第二圆盘，第二圆盘的环形外侧面均匀固定连接有一圈与第一圆盘环形外侧面轮齿啮合的轮齿，第二圆盘下端面均固定连接有转轴，转轴下端与第一隔板上端面转动连接；
第二圆盘内部中心位置对应四个第二插孔开设有四个相互交叉呈十字形结构的第二圆孔，且四个第二插孔分别与对应位置的第二插孔连通，第二圆孔内滑动连接有第二活动块，第二活动块靠近对应位置第二插孔的一端均固定连接有圆弧形结构的夹板，第二圆孔内侧面对应第二活动块固定连接有第二夹板。
进一步的，第二活动块环形外侧面靠近第二插孔的一侧滑动套设有第二固定套环，且第二固定套环环形外侧面与第二圆孔内壁固定连接，第二活动块环形外侧面远离第二固定套环的一侧固定套设有第二活动套环，第二活动套环与第二固定套环之间通过弹簧弹性连接。
进一步的，四个第二圆孔的交叉位置处设有第二定位销，第二定位销上部呈锥形结构，且第二定位销下部呈螺栓结构，第二圆盘上端面中心位置开设有供顶定位销插入的第二销孔，驱动轴上端面中心位置开设有与第二定位销下部螺栓结构匹配的第二螺孔。
进一步的，盘式电机的输出轴端部环形外侧面固定套设有主锥齿轮，主锥齿轮左右对称啮合有副锥齿轮，副锥齿轮相互远离的一侧均固定连接有支杆，支杆环形外侧面转动套设有L形结构的吊板，吊板的水平部分分别与第一隔板固定连接，支杆相互远离的一端均固定连接有扇叶。
进一步的，两个第一隔板与扇叶对应位置处分别开设有贯穿至试剂盒本体外侧的通风口，通风口内侧均开设有贯穿至试剂盒本体前侧的板槽，板槽内滑动连接有挡板，挡板前侧面固定连接有推板；
第一隔板竖直部分的内壁与试剂盒本体相对应的内壁上均竖直等距固定连接有三组平行的架板，架板上搭设有载板，试剂盒本体前侧面对应第一隔板内侧与试剂盒本体形成的矩形空间开设有槽口，槽口下端面通过合页铰接有封板。
一种血液肿瘤测定试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
S1：使用抗凝管采集受试者外周血10ml，与等体积PBS混匀后小心加于白细胞分离液液面上，将试管置于第一插孔内并夹紧，启动盘式电机以1500r/min离心20min，随后吸取中间云雾状白细胞，加PBS后3000r/min离心10min，弃上清，加PBS洗涤沉淀，将细胞悬液转移至1.5ml EP管中，再将EP管插入第二圆盘的第二插孔内并夹紧，以3000r/min离心20min，弃上清，获得白细胞；
S2：使用抗凝管采集受试者骨髓1ml，与等体积PBS混匀后小心加于白细胞分离液液面上，将试管置于第一插孔内并夹紧，启动盘式电机以1500r/min离心20min，吸取中间云雾状白细胞，加PBS后3000r/min离心10min，弃上清，加PBS洗涤沉淀，将细胞悬液转移至1.5ml EP管中，再将EP管插入第二圆盘的第二插孔内并夹紧，以3000r/min离心20min，弃上清，获得白细胞；
S3：在第一隔板内的载板上放置培养皿，通过培养皿将白血病及淋巴瘤细胞培养至对数生长期，用不同抗肿瘤药物处理24小时至72小时不等的时间，离心，PBS重悬清洗，弃尽上清，用PI和Annexin Ⅴ重悬并染色，并采用流式细胞仪进行检测细胞凋亡比例；
S4：采用流式细胞仪对S1和S2中得到的白细胞进行肿瘤细胞比例检测，如果比例达到50%-90%则通过蛋白免疫印迹技术获得Bcl-2家族蛋白表达水平，通过Bcl-2家族蛋白表达水平与S3中细胞凋亡比例的对比得到抗肿瘤药物敏感性与Bcl-2蛋白质家族表达水平的相关关系。
相比于现有技术，本发明的优点在于：
1.本方案通过将试管放入第一圆盘上的第一插孔内，在第一定位销拧入第一螺孔内的过程中可同时带动四个第一活动块向外扩张，从而带动夹板将试管夹紧，启动盘式电机带动第一圆盘以1500r/min的速度旋转，试管内的溶液在离心力的作用下混合的更加均匀。
2.本方案通过将第一圆盘的直径设置为第二圆盘的二倍，使得第一圆盘以1500r/min的速度旋转时，第二圆盘能够以3000r/min旋转，从而保证盘式电机以恒定的输出功率保持运行，可避免盘式电机变换功率以达到不同的转速而导致盘式电机负荷过大，节约电能的同时延长盘式电机的寿命。
3.本方案可在第一隔板与试剂盒本体之间形成的矩形空腔内培养白血病及淋巴瘤细胞，当矩形空腔需要通风时，可拉动推板带动挡板离开通风口，盘式电机工作过程中可带动扇叶旋转，从而对矩形空腔内部通风散热，防止温度过高造成培养的白血病及淋巴瘤细胞发生死亡。
附图说明
图1为本发明的整体结构立体图；
图2为本发明试剂盒本体去盖示意图；
图3为本发明图2中的试剂盒本体爆炸示意图；
图4为本发明图2中的图试剂盒半剖示意图；
图5为本发明图1中的A-A处剖面图；
图6为本发明图5中的B处放大图；
图7为本发明图5中的C处放大图。
图中标号说明：
1、试剂盒本体；11、底板；12、蓄电池；13、第一隔板；14、盘式电机；15、驱动轴；16、转轴；17、第二隔板；18、废液槽；2、第一圆盘；21、第一插孔；22、第一夹板；23、第一定位销；24、第一圆孔；25、第一活动块；26、第一固定套环；27、第一活动套环；28、第一螺孔；29、第一销孔；3、第二圆盘；31、第二插孔；32、第二夹板；33、第二定位销；34、第二圆孔；35、第二活动块；36、第二固定套环；37、第二活动套环；38、第二螺孔；39、第二销孔；4、通风口；41、挡板；42、推板；43、封板；44、槽口；45、板槽；5、架板；51、载板；6、主锥齿轮；61、副锥齿轮；62、支杆；63、扇叶；64、吊板；7、试剂槽；8、管架。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述；显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-7，一种血液肿瘤测定试剂盒，包括试剂盒本体1，试剂盒本体1内部左右侧壁靠近下端前侧固定连接有底板11，底板11下方的试剂盒本体1内底面固定连接有蓄电池12，底板11后侧面固定连接有第二隔板17，第二隔板17与试剂盒本体1后侧面直接滑动插接有废液槽18，底板11上端面左右对称固定连接有L形结构的第一隔板13，试剂盒本体1内部前侧上端固定连接有管架8，管架8左右侧两侧设有试剂槽7，底板11上方设有离心机构；离心机构包括固定连接在底板11上端面靠近后侧中心位置的盘式电机14，盘式电机14的输出轴端部固定连接有驱动轴15，驱动轴15上端固定连接有第一圆盘2，第一圆盘2上端面靠近外沿位置环形等距开设有四个第一插孔21，第一圆盘2内部中心位置对应四个第一插孔21开设有四个相互交叉呈十字形结构的第一圆孔24，且四个第一插孔21分别与对应位置的第一插孔21连通，第一圆孔24内滑动连接有第一活动块25，第一活动块25靠近对应位置第一插孔21的一端均固定连接有圆弧形结构的夹板，第一圆孔24内侧面对应第一活动块25固定连接有第一夹板22；
第一活动块25环形外侧面靠近第一插孔21的一侧滑动套设有第一固定套环26，且第一固定套环26环形外侧面与第一圆孔24内壁固定连接，第一活动块25环形外侧面远离第一固定套环26的一侧固定套设有第一活动套环27，第一活动套环27与第一固定套环26之间通过弹簧弹性连接，四个第一圆孔24的交叉位置处设有第一定位销23，第一定位销23上部呈锥形结构，且第一定位销23下部呈螺栓结构，第一圆盘2上端面中心位置开设有供顶定位销插入的第一销孔29，驱动轴15上端面中心位置开设有与第一定位销23下部螺栓结构匹配的第一螺孔28。
上述方案实施时，在试剂盒本体1的左右侧面转动连接有U形结构的提柄，通过提柄可方便对试剂盒本体1进行搬运，在试剂盒本体1上端配套设有盒盖以对试剂盒本体1内部的部件进行防护，管架8上端面前侧面开设有供胶头滴管放出的管槽，以及若干个大小不一的圆孔，圆孔内插设有不同规格的试管、抗凝管以及EP管，需要检测时，打开盒盖，取出管架8上的胶头滴管、试管以及抗凝管，使用抗凝管采集受试者外周血10ml，用胶头滴管吸取试剂槽7内等体积的PBS试剂与受试者外周血混匀后，使用胶头滴管小心加于盛有白细胞分离液的试管内，且外周血与PBS混合液位于白细胞分离液的液面上方，使用抗凝管采集受试者骨髓1ml，用胶头滴管吸取试剂槽7内等体积的PBS试剂与受试者骨髓混匀后，使用胶头滴管小心加于盛有白细胞分离液的试管内，且骨髓与PBS混合液位于白细胞分离液的液面上方，两种试样各两份，随后将四个试管分别置于第一圆盘2上的四个第一圆孔24内，旋动第一定位销23使得第一定位销23下部的螺栓不断进入第一螺孔28内，第一定位销23的锥形上部在下降过程中会同时挤压四个第一活动块25，第一活动块25相互靠近的一端均呈半球形结构，从而方便将四个第一活动块25向外推动，四个第一活动块25向外扩张时会带动第一活动套环27一起移动，且第一活动块25向外扩张的同时分别带的第一夹板22对试管进行夹紧，从而压缩第一活动套环27与第一固定套环26之间的弹簧，避免试管在离心过程中发生混动，随后启动盘式电机14带动驱动轴15旋转，进而带动第一圆盘2旋转，使得第一圆盘2以1500r/min的速度旋转，试管内的溶液在离心力的作用下混合的更加均匀。
作为本发明的一种实施方式，参照图2至图7，第一圆盘2环形外侧面均匀固定连接有一圈轮齿，第一圆盘2左右对称设有第二圆盘3，第二圆盘3的环形外侧面均匀固定连接有一圈与第一圆盘2环形外侧面轮齿啮合的轮齿，第二圆盘3下端面均固定连接有转轴16，转轴16下端与第一隔板13上端面转动连接，第二圆盘3内部中心位置对应四个第二插孔31开设有四个相互交叉呈十字形结构的第二圆孔34，且四个第二插孔31分别与对应位置的第二插孔31连通，第二圆孔34内滑动连接有第二活动块35，第二活动块35靠近对应位置第二插孔31的一端均固定连接有圆弧形结构的夹板，第二圆孔34内侧面对应第二活动块35固定连接有第二夹板32；
第二活动块35环形外侧面靠近第二插孔31的一侧滑动套设有第二固定套环36，且第二固定套环36环形外侧面与第二圆孔34内壁固定连接，第二活动块35环形外侧面远离第二固定套环36的一侧固定套设有第二活动套环37，第二活动套环37与第二固定套环36之间通过弹簧弹性连接，四个第二圆孔34的交叉位置处设有第二定位销33，第二定位销33上部呈锥形结构，且第二定位销33下部呈螺栓结构，第二圆盘3上端面中心位置开设有供顶定位销插入的第二销孔39，驱动轴15上端面中心位置开设有与第二定位销33下部螺栓结构匹配的第二螺孔38。
基于上述实施例，本方案实施时，待第一圆盘2以1500r/min的速度旋转20min后关闭盘式电机14，旋出第一定位销23，使得四个第一活动块25失去限位，四个第一活动块25在弹簧的作用下发生回弹，从而带动第一活动块25端部的第一夹板22回弹，使得试管松弛，进而方便取出试管，使用胶头滴管吸取含有外周血的试管内溶液中间云雾状白细胞至新的试管内，在新的试管内加PBS后，将新的试管置于左侧第二圆盘3的第二插孔31内，使用胶头滴管吸取含有骨髓的试管内的溶液中间云雾状白细胞至新的试管内，在新的试管内加PBS后，将新的试管置于右侧第二圆盘3上的第二插孔31内，随后分别将第二定位销33拧入对应位置转轴16上端的第二螺孔38内，同理，第二定位销33拧入第二螺孔38的过程中会带动四个第二活动块35向外扩张，从而带动第二活动块35端部的第二夹板32将试管夹紧，防止试管在离心的过程中发生晃动，随后启动盘式电机14使得第一圆盘2继续以1500r/min的速度旋转，由于第一圆盘2的直径是第二圆盘3的两倍，从而使第二圆盘3以3000r/min的速度旋转，待第二圆盘3离心10min后，关闭盘式电机14，旋出第二定位销33，使得第二活动块35失去限位，第二定位销33在第二活动套环37与第二固定套环36之间弹簧的弹力作用下发生回弹，从而带动第二活动块35端部的第二夹板32回弹，使得试管松弛，方便将试管分别从第二插孔31中取出，将左侧试管中的上清液通过胶头滴管吸取至废液槽18内，随后加PBS洗涤沉淀，将细胞悬液通过胶头滴管转移至1.5ml EP管中，最后再将EP管重新插入左侧第二圆盘3上的第二插孔31内，将右侧试管中的上清液通过胶头滴管吸取至废液槽18内，随后加PBS洗涤沉淀，将细胞悬液通过胶头滴管转移至1.5ml EP管中，最后再将EP管重新插入左侧第二圆盘3上的第二插孔31内，再次启动盘式电机14使得第二圆盘3继续以3000r/min的速度旋转，待第二圆盘3离心20min后关闭盘式电机14，将左侧EP管取出后通过胶头滴管将上清液吸取至废液槽18内，获得白细胞，将右侧管取出后通过胶头滴管将上清液吸取至废液槽18内，获得白细胞，最后采用流式细胞仪对外周血和骨髓样本中富集的白细胞进行肿瘤细胞比例检测，如果比例达到50%-90%则通过蛋白免疫印迹技术获得Bcl-2家族蛋白表达水平，盘式电机14在检测过程中始终保持恒定的输出功率，可避免盘式电机14变换功率以达到不同的转速而导致盘式电机14负荷过大，节约电能的同时延长盘式电机14的寿命，且废液槽18的设置方便了废液的集中收集，在第一圆盘2和第二圆盘3上方设有盖板，用以对第一圆盘2环形外侧面以及第二圆盘3环形外侧面上的轮齿进行遮盖。
作为本发明的一种实施方式，参照图2至图5，盘式电机14的输出轴端部环形外侧面固定套设有主锥齿轮6，主锥齿轮6左右对称啮合有副锥齿轮61，副锥齿轮61相互远离的一侧均固定连接有支杆62，支杆62环形外侧面转动套设有L形结构的吊板64，吊板64的水平部分分别与第一隔板13固定连接，支杆62相互远离的一端均固定连接有扇叶63；
两个第一隔板13与扇叶63对应位置处分别开设有贯穿至试剂盒本体1外侧的通风口4，通风口4内侧均开设有贯穿至试剂盒本体1前侧的板槽45，板槽45内滑动连接有挡板41，挡板41前侧面固定连接有推板42；
第一隔板13竖直部分的内壁与试剂盒本体1相对应的内壁上均竖直等距固定连接有三组平行的架板5，架板5上搭设有载板51，试剂盒本体1前侧面对应第一隔板13内侧与试剂盒本体1形成的矩形空间开设有槽口44，槽口44下端面通过合页铰接有封板43。
基于上述实施例，本方案实施时，在试剂盒本体1使用的过程中，可将装有白血病及淋巴瘤细胞的培养皿置于第一隔板13与试剂盒本体1之间形成的矩形空腔内的载板51上进行培养，在第一隔板13竖直部分的内壁与试剂盒本体1相对应的内壁上均竖直等距固定连接有三组平行的架板5，可对载板51的位置进行调节，从而适应不同大小的培养皿，在白血病及淋巴瘤细胞培养至对数生长周期的过程中，当白血病及淋巴瘤细胞需要通风散热时，可通过拉动推板42以带动挡板41离开通风口4，盘式电机14运行过程中会带动主锥齿轮6旋转，从而同时带动两个副锥齿轮61旋转，进而带动支杆62旋转，使得两个扇叶63同步旋转，使得矩形空腔内的空气得以流动，从而防止白血病及淋巴瘤细胞温度过高发生死亡，当白血病及淋巴瘤细胞培养至对数生长周期时，打开封板43，抽出载板51，用不同抗肿瘤药物处理培养皿内的细胞24小时至72小时不等的时间，离心，PBS重悬清洗，弃尽上清，用PI和Annexin Ⅴ重悬并染色，并采用流式细胞仪进行检测细胞凋亡比例，通过Bcl-2家族蛋白表达水平与S3中细胞凋亡比例的对比得到抗肿瘤药物敏感性与Bcl-2蛋白质家族表达水平的相关关系。
一种血液肿瘤测定试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
S1：使用抗凝管采集受试者外周血10ml，与等体积PBS混匀后小心加于白细胞分离液液面上，将试管置于第一插孔21内并夹紧，启动盘式电机14以1500r/min离心20min，随后吸取中间云雾状白细胞，加PBS后3000r/min离心10min，弃上清，加PBS洗涤沉淀，将细胞悬液转移至1.5ml EP管中，再将EP管插入第二圆盘3的第二插孔31内并夹紧，以3000r/min离心20min，弃上清，获得白细胞；
S2：使用抗凝管采集受试者骨髓1ml，与等体积PBS混匀后小心加于白细胞分离液液面上，将试管置于第一插孔21内并夹紧，启动盘式电机14以1500r/min离心20min，吸取中间云雾状白细胞，加PBS后3000r/min离心10min，弃上清，加PBS洗涤沉淀，将细胞悬液转移至1.5ml EP管中，再将EP管插入第二圆盘3的第二插孔31内并夹紧，以3000r/min离心20min，弃上清，获得白细胞；
S3：在第一隔板13内的载板51上放置培养皿，通过培养皿将白血病及淋巴瘤细胞培养至对数生长期，用不同抗肿瘤药物处理24小时至72小时不等的时间，离心，PBS重悬清洗，弃尽上清，用PI和Annexin Ⅴ重悬并染色，并采用流式细胞仪进行检测细胞凋亡比例；
S4：采用流式细胞仪对S1和S2中得到的白细胞进行肿瘤细胞比例检测，如果比例达到50%-90%则通过蛋白免疫印迹技术获得Bcl-2家族蛋白表达水平，通过Bcl-2家族蛋白表达水平与S3中细胞凋亡比例的对比得到抗肿瘤药物敏感性与Bcl-2蛋白质家族表达水平的相关关系。
工作原理：需要检测时，打开盒盖，取出管架8上的胶头滴管、试管以及抗凝管，使用抗凝管采集受试者外周血10ml，与等体积PBS混匀后，使用胶头滴管小心加于盛有白细胞分离液的试管内，且外周血与PBS混合液位于白细胞分离液的液面上方，使用抗凝管采集受试者骨髓1ml，与等体积PBS混匀后，使用胶头滴管小心加于盛有白细胞分离液的试管内，且骨髓与PBS混合液位于白细胞分离液的液面上方，两种试样各两份，随后将试管分别置于第一圆盘2上的四个第一圆孔24内，旋动第一定位销23使得第一定位销23下部的螺栓不断进入第一螺孔28内，第一定位销23的锥形上部在下降过程中会同时挤压四个第一活动块25，第一活动块25向外扩张的同时分别带的第一夹板22对试管进行夹紧，从而压缩第一活动套环27与第一固定套环26之间的弹簧，避免试管在离心过程中发生混动，随后启动盘式电机14带动驱动轴15旋转，进而带动第一圆盘2旋转，使得第一圆盘2以1500r/min的速度旋转，试管内的溶液在离心力的作用下混合的更加均匀；
待第一圆盘2以1500r/min的速度旋转20min后关闭盘式电机14，旋出第一定位销23，取出试管，使用胶头滴管吸取含有外周血的试管内溶液中间云雾状白细胞至新的试管内，在新的试管内加PBS后，将新的试管置于左侧第二圆盘3的第二插孔31内，使用胶头滴管吸取含有骨髓的试管内的溶液中间云雾状白细胞至新的试管内，在新的试管内加PBS后，将新的试管置于右侧第二圆盘3上的第二插孔31内，随后分别将第二定位销33拧入对应位置转轴16上端的第二螺孔38内，同理，第二定位销33拧入第二螺孔38的过程中会带动四个第二活动块35向外扩张，从而带动第二活动块35端部的第二夹板32将试管夹紧，防止试管在离心的过程中发生晃动，随后启动盘式电机14使得第一圆盘2继续以1500r/min的速度旋转，由于第一圆盘2的直径是第二圆盘3的两倍，从而使第二圆盘3以3000r/min的速度旋转，待第二圆盘3离心10min后，关闭盘式电机14，分别取出左右两侧的试管，将左侧试管中的上清液通过胶头滴管吸取至废液槽18内，随后加PBS洗涤沉淀，将细胞悬液通过胶头滴管转移至1.5ml EP管中，最后再将EP管重新插入左侧第二圆盘3上的第二插孔31内，将右侧试管中的上清液通过胶头滴管吸取至废液槽18内，随后加PBS洗涤沉淀，将细胞悬液通过胶头滴管转移至1.5ml EP管中，最后再将EP管重新插入左侧第二圆盘3上的第二插孔31内，再次启动盘式电机14使得第二圆盘3继续以3000r/min的速度旋转，待第二圆盘3离心20min后关闭盘式电机14，将左侧EP管取出后通过胶头滴管将上清液吸取至废液槽18内，获得白细胞，将右侧管取出后通过胶头滴管将上清液吸取至废液槽18内，获得白细胞，最后采用流式细胞仪对外周血和骨髓样本中富集的白细胞进行肿瘤细胞比例检测，如果比例达到50%-90%则通过蛋白免疫印迹技术获得Bcl-2家族蛋白表达水平，盘式电机14在检测过程中始终保持恒定的输出功率，可避免盘式电机14变换功率以达到不同的转速而导致盘式电机14负荷过大，节约电能的同时延长盘式电机14的寿命，且废液槽18的设置方便了废液的集中收集；
在试剂盒本体1使用的过程中，可将装有白血病及淋巴瘤细胞的培养皿置于第一隔板13与试剂盒本体1之间形成的矩形空腔内的载板51上进行培养，在白血病及淋巴瘤细胞培养至对数生长周期的过程中，当白血病及淋巴瘤细胞需要通风散热时，可通过拉动推板42以带动挡板41离开通风口4，盘式电机14运行过程中会带动主锥齿轮6旋转，从而同时带动两个副锥齿轮61旋转，进而带动支杆62旋转，使得两个扇叶63同步旋转，使得矩形空腔内的空气得以流动，从而防止白血病及淋巴瘤细胞温度过高发生死亡，当白血病及淋巴瘤细胞培养至对数生长周期时，打开封板43，抽出载板51，用不同抗肿瘤药物处理培养皿内的细胞24小时至72小时不等的时间，离心，PBS重悬清洗，弃尽上清，用PI和Annexin Ⅴ重悬并染色，并采用流式细胞仪进行检测细胞凋亡比例，通过Bcl-2家族蛋白表达水平与S3中细胞凋亡比例的对比得到抗肿瘤药物敏感性与Bcl-2蛋白质家族表达水平的相关关系。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式；但本发明的保护范围并不局限于此。任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其改进构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种血液肿瘤测定试剂盒，包括试剂盒本体（1），其特征在于：所述试剂盒本体（1）内部左右侧壁靠近下端前侧固定连接有底板（11），所述底板（11）下方的试剂盒本体（1）内底面固定连接有蓄电池（12），所述底板（11）后侧面固定连接有第二隔板（17），所述第二隔板（17）与试剂盒本体（1）后侧面直接滑动插接有废液槽（18），所述底板（11）上端面左右对称固定连接有L形结构的第一隔板（13），所述试剂盒本体（1）内部前侧上端固定连接有管架（8），所述管架（8）左右侧两侧设有试剂槽（7），所述底板（11）上方设有离心机构；
所述离心机构包括固定连接在底板（11）上端面靠近后侧中心位置的盘式电机（14），所述盘式电机（14）的输出轴端部固定连接有驱动轴（15），所述驱动轴（15）上端固定连接有第一圆盘（2），所述第一圆盘（2）上端面靠近外沿位置环形等距开设有四个第一插孔（21）。
2.根据权利要求1所述的一种血液肿瘤测定试剂盒，其特征在于：所述第一圆盘（2）内部中心位置对应四个第一插孔（21）开设有四个相互交叉呈十字形结构的第一圆孔（24），且四个第一插孔（21）分别与对应位置的第一插孔（21）连通，所述第一圆孔（24）内滑动连接有第一活动块（25），所述第一活动块（25）靠近对应位置第一插孔（21）的一端均固定连接有圆弧形结构的夹板，所述第一圆孔（24）内侧面对应第一活动块（25）固定连接有第一夹板（22）。
3.根据权利要求2所述的一种血液肿瘤测定试剂盒，其特征在于：所述第一活动块（25）环形外侧面靠近第一插孔（21）的一侧滑动套设有第一固定套环（26），且第一固定套环（26）环形外侧面与第一圆孔（24）内壁固定连接，所述第一活动块（25）环形外侧面远离第一固定套环（26）的一侧固定套设有第一活动套环（27），所述第一活动套环（27）与第一固定套环（26）之间通过弹簧弹性连接。
4.根据权利要求3所述的一种血液肿瘤测定试剂盒，其特征在于：四个所述第一圆孔（24）的交叉位置处设有第一定位销（23），所述第一定位销（23）上部呈锥形结构，且第一定位销（23）下部呈螺栓结构，所述第一圆盘（2）上端面中心位置开设有供顶定位销插入的第一销孔（29），所述驱动轴（15）上端面中心位置开设有与第一定位销（23）下部螺栓结构匹配的第一螺孔（28）。
5.根据权利要求4所述的一种血液肿瘤测定试剂盒，其特征在于：所述第一圆盘（2）环形外侧面均匀固定连接有一圈轮齿，所述第一圆盘（2）左右对称设有第二圆盘（3），所述第二圆盘（3）的环形外侧面均匀固定连接有一圈与第一圆盘（2）环形外侧面轮齿啮合的轮齿，所述第二圆盘（3）下端面均固定连接有转轴（16），所述转轴（16）下端与第一隔板（13）上端面转动连接；
所述第二圆盘（3）内部中心位置对应四个第二插孔（31）开设有四个相互交叉呈十字形结构的第二圆孔（34），且四个第二插孔（31）分别与对应位置的第二插孔（31）连通，所述第二圆孔（34）内滑动连接有第二活动块（35），所述第二活动块（35）靠近对应位置第二插孔（31）的一端均固定连接有圆弧形结构的夹板，所述第二圆孔（34）内侧面对应第二活动块（35）固定连接有第二夹板（32）。
6.根据权利要求5所述的一种血液肿瘤测定试剂盒，其特征在于：所述第二活动块（35）环形外侧面靠近第二插孔（31）的一侧滑动套设有第二固定套环（36），且第二固定套环（36）环形外侧面与第二圆孔（34）内壁固定连接，所述第二活动块（35）环形外侧面远离第二固定套环（36）的一侧固定套设有第二活动套环（37），所述第二活动套环（37）与第二固定套环（36）之间通过弹簧弹性连接。
7.根据权利要求6所述的一种血液肿瘤测定试剂盒，其特征在于：四个所述第二圆孔（34）的交叉位置处设有第二定位销（33），所述第二定位销（33）上部呈锥形结构，且第二定位销（33）下部呈螺栓结构，所述第二圆盘（3）上端面中心位置开设有供顶定位销插入的第二销孔（39），所述驱动轴（15）上端面中心位置开设有与第二定位销（33）下部螺栓结构匹配的第二螺孔（38）。
8.根据权利要求1所述的一种血液肿瘤测定试剂盒，其特征在于：所述盘式电机（14）的输出轴端部环形外侧面固定套设有主锥齿轮（6），所述主锥齿轮（6）左右对称啮合有副锥齿轮（61），所述副锥齿轮（61）相互远离的一侧均固定连接有支杆（62），所述支杆（62）环形外侧面转动套设有L形结构的吊板（64），所述吊板（64）的水平部分分别与第一隔板（13）固定连接，所述支杆（62）相互远离的一端均固定连接有扇叶（63）。
9.根据权利要求8所述的一种血液肿瘤测定试剂盒，其特征在于：两个所述第一隔板（13）与扇叶（63）对应位置处分别开设有贯穿至试剂盒本体（1）外侧的通风口（4），所述通风口（4）内侧均开设有贯穿至试剂盒本体（1）前侧的板槽（45），所述板槽（45）内滑动连接有挡板（41），所述挡板（41）前侧面固定连接有推板（42）；
所述第一隔板（13）竖直部分的内壁与试剂盒本体（1）相对应的内壁上均竖直等距固定连接有三组平行的架板（5），所述架板（5）上搭设有载板（51），所述试剂盒本体（1）前侧面对应第一隔板（13）内侧与试剂盒本体（1）形成的矩形空间开设有槽口（44），所述槽口（44）下端面通过合页铰接有封板（43）。
10.适用于上述权利要求1-9任意一项所述的一种血液肿瘤测定试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1：使用抗凝管采集受试者外周血10ml，与等体积PBS混匀后小心加于白细胞分离液液面上，将试管置于第一插孔（21）内并夹紧，启动盘式电机（14）以1500r/min离心20min，随后吸取中间云雾状白细胞，加PBS后3000r/min离心10min，弃上清，加PBS洗涤沉淀，将细胞悬液转移至1.5ml EP管中，再将EP管插入第二圆盘（3）的第二插孔（31）内并夹紧，以3000r/min离心20min，弃上清，获得白细胞；
S2：使用抗凝管采集受试者骨髓1ml，与等体积PBS混匀后小心加于白细胞分离液液面上，将试管置于第一插孔（21）内并夹紧，启动盘式电机（14）以1500r/min离心20min，吸取中间云雾状白细胞，加PBS后3000r/min离心10min，弃上清，加PBS洗涤沉淀，将细胞悬液转移至1.5ml EP管中，再将EP管插入第二圆盘（3）的第二插孔（31）内并夹紧，以3000r/min离心20min，弃上清，获得白细胞；
S3：在第一隔板（13）内的载板（51）上放置培养皿，通过培养皿将白血病及淋巴瘤细胞培养至对数生长期，用不同抗肿瘤药物处理24小时至72小时不等的时间，离心，PBS重悬清洗，弃尽上清，用PI和Annexin Ⅴ重悬并染色，并采用流式细胞仪进行检测细胞凋亡比例；
S4：采用流式细胞仪对S1和S2中得到的白细胞进行肿瘤细胞比例检测，如果比例达到50%-90%则通过蛋白免疫印迹技术获得Bcl-2家族蛋白表达水平，通过Bcl-2家族蛋白表达水平与S3中细胞凋亡比例的对比得到抗肿瘤药物敏感性与Bcl-2蛋白质家族表达水平的相关关系。
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