CN115353548B - 一种具有美白功效的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽及其应用 - Google Patents
一种具有美白功效的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115353548B CN115353548B CN202211144515.XA CN202211144515A CN115353548B CN 115353548 B CN115353548 B CN 115353548B CN 202211144515 A CN202211144515 A CN 202211144515A CN 115353548 B CN115353548 B CN 115353548B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tyrosinase
- pearl oyster
- inhibitory peptide
- tyrosinase inhibitory
- peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 title claims abstract description 179
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 title claims abstract description 179
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 123
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 108
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 title claims abstract description 27
- 241000490567 Pinctada Species 0.000 claims abstract description 95
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 claims abstract description 7
- 108010058393 monophenolase Proteins 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 6
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 5
- 101710147108 Tyrosinase inhibitor Proteins 0.000 claims description 3
- CCZXBOFIBYQLEV-IHPCNDPISA-N Trp-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O CCZXBOFIBYQLEV-IHPCNDPISA-N 0.000 abstract description 7
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 20
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 14
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 11
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 10
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 8
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 230000036564 melanin content Effects 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 7
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 6
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 241001212699 Pinctada martensii Species 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 4
- WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N L-Dopa Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 2
- 241000219173 Carica Species 0.000 description 2
- 235000009467 Carica papaya Nutrition 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 description 2
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 2
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 108700024526 zebrafish sox32 Proteins 0.000 description 2
- XKZQKPRCPNGNFR-UHFFFAOYSA-N 2-(3-hydroxyphenyl)phenol Chemical compound OC1=CC=CC(C=2C(=CC=CC=2)O)=C1 XKZQKPRCPNGNFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 101800000068 Antioxidant peptide Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000000425 Chaenomeles speciosa Species 0.000 description 1
- 235000005078 Chaenomeles speciosa Nutrition 0.000 description 1
- 208000009701 Embryo Loss Diseases 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000283070 Equus zebra Species 0.000 description 1
- LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 206010027146 Melanoderma Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 235000017831 Pseudocydonia sinensis Nutrition 0.000 description 1
- 208000031320 Teratogenesis Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007854 depigmenting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000037427 ion transport Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004725 rapid separation liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 229910052724 xenon Inorganic materials 0.000 description 1
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical compound [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
- A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
- A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
本发明涉及一种具有美白功效的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽及其应用。该珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的序列为:WLL(Trp‑Leu‑Leu)。该珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在分子层面和生物层面都具有良好的酪氨酸酶抑制活性,可抑制黑色素的合成,表现出良好的美白活性。
Description
技术领域
本发明涉及活性肽技术领域,更具体地,涉及一种具有美白功效的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽及其应用。
背景技术
近年来,基于肽的皮肤美白剂研究备受关注。研究发现,部分天然蛋白的水解物具有美白功能,可抑制酪氨酸酶活性并抑制黑色素生成。Grazia Luisi等发现一些小肽和氨基酸具有抗氧化和酪氨酸酶抑制双重活力,经典抗氧化肽谷胱甘肽(GSH)也被报道具有皮肤美白和抗衰老作用。生物活性肽由多种氨基酸组成,营养价值和功能活性并存,具有性质稳定和安全低敏的优点。食源性美白活性肽兼具抗氧化和美白活性,可口服和外用,比如名称为一种多功能马氏珠母贝源美白肽的制备方法及应用提供了一种具有酪氨酸酶抑制活性的多功能马氏珠母贝源美白肽,但相关研究还较少,因此继续开展相关研究具有重要意义。
发明内容
本发明的首要目的是克服上述现有具有酪氨酸酶抑制活性的食源性肽仍然较少的问题,提供一种具有美白功效的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽。该珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在分子层面、细胞层面和生物层面都具有良好的酪氨酸酶抑制活性,可抑制黑色素的合成,表现出良好的美白活性。
本发明的进一步目的是提供上述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用。
本发明的进一步目的是提供上述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备美白药物中的应用。
本发明的进一步目的是提供上述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备功能性食品中的应用。
本发明的进一步目的是提供上述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备化妆品中的应用。
本发明的上述目的通过以下技术方案实现:
一种具有美白功效的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的序列为:WLL。
该珍珠贝酪氨酸酶抑制肽序列为:WLL,即Trp-Leu-Leu。
本发明的发明人从珍珠贝肉(马氏珠母贝)中获得了该特定序列的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽,分子量为430.2580Da。经实验发现,该珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在分子层面和生物层面都具有良好的酪氨酸酶抑制活性,可抑制黑色素的合成,表现出良好的美白活性。
上述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用也在本发明的保护范围内。
优选地,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备具有酪氨酸酶单酚酶抑制活性和/或酪氨酸酶二酚酶抑制活性的抑制剂中的应用。
研究发现,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶的氨基酸残基通过氢键、静电相互作用和疏水互相作用结合,可有效抑制酪氨酸酶的活性。
一方面,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶的ASP353、GLU356、LYS376、GLN307形成7个氢键,与酪氨酸酶的活性中心稳定结合,可以抑制酪氨酸酶活力。
优选地,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备与酪氨酸酶的氨基酸残基ASP353、GLU356、LYS376、GLN307通过氢键结合的酪氨酸酶抑制剂中的应用。
另一方面,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶形成了6个疏水相互作用,3个静电相互作用。疏水相互作用形成的疏水环境有助于氢键的形成,静电相互作用形成的引力有助于提高氨基酸之间结合的稳定性。
优选地,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备与酪氨酸酶的氨基酸残基LYS379、TRP358、TYR311、LYS376通过疏水相互作用结合的酪氨酸酶抑制剂中的应用。
优选地,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备与酪氨酸酶的氨基酸残基ASP354、GLU356、ASP357通过静电相互作用结合的酪氨酸酶抑制剂中的应用。
上述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备美白药物中的应用也在本发明的保护范围内。
优选地,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备抑制黑色素合成的药物中的应用。
上述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备功能性食品中的应用也在本发明的保护范围内。
上述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备化妆品中的应用也在本发明的保护范围内。
优选地,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在酪氨酸酶抑制剂、美白药物、功能性食品或化妆品中的添加量为0.01~1.00mg/mL。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:
该珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在分子层面、细胞层面和生物层面都具有良好的酪氨酸酶抑制活性,可抑制黑色素的合成,表现出良好的美白活性。
附图说明
图1为实施例1的体外酪氨酸酶抑制活性评价结果图。
图2为珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)对接的3D和2D可视化图,其中,图2A是珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)对接的3D可视化图,图2B是珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)对接的2D可视化图。
图3为实施例2的体外酪氨酸酶抑制活性结果图。
图4为实施例3的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽对斑马鱼存活率影响的实验结果图。
图5为实施例3的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽对斑马鱼黑色素含量的影响的实验结果图。
图6为实施例3珍珠贝酪氨酸酶抑制肽对酪氨酸酶活力的影响的实验结果图。
具体实施方式
为了更清楚、完整的描述本发明的技术方案,以下通过具体实施例进一步详细说明本发明,应当理解,此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明,并不用于限定本发明,可以在本发明权利限定的范围内进行各种改变。
各实施例中使用的主要材料与试剂说明如下:
珍珠贝肉(马氏珠母贝肉)由北海黑珍珠海洋生物科技有限公司(中国广西)提供。中性蛋白酶(10kU/g)购自南宁庞博生物工程有限公司(中国南京)。L-酪氨酸、L-多巴、酪氨酸酶(BR,蘑菇,500U/mg,25kU)购自上海源叶生物科技有限公司(中国南京)。Western及IP细胞裂解液、苯甲基磺酰氟(PMSF)购自上海碧云天生物技术有限公司(中国上海)。其他试剂均为分析纯,超纯水为实验室自制。
实施例1珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的制备
将珍珠贝肉搅碎成肉糜,加超纯水(料液比1:1,w/w)并调整pH为7.25,加入中性蛋白酶(酶底比0.4%,w/w),50℃下酶解3h,酶解结束后立即在90℃下灭酶15min,冷却室温后在4000r/min下离心15min获得珍珠贝肉酶解液,并保存于-20℃用于进一步分析。
采用超滤膜(3kDa)按照分子量大小分离珍珠贝肉酶解液,获得分子量≥3kDa和<3kDa两个组分。分别将珍珠贝肉酶解液、≥3kDa组分和<3kDa组分作为样液,进行体外酪氨酸酶抑制活性评价。
体外酪氨酸酶抑制活性实验的具体过程如下:
分别以L-酪氨酸和L-多巴作为单酚底物和二酚底物,取40μL L-酪氨酸溶液(0.5mM)或L-多巴溶液(0.5mM),加入40μL样液和80μL磷酸缓冲溶液(0.05M,pH 6.8),在37℃保温10min后加入40μL酪氨酸酶溶液(250U/mL)启动反应,在酶标仪(Enspire XenonLight Module,200Perkin–Elmer,Beaconsfield,U.K.)波长475nm下分别测0min和30min吸光值。根据公式(1)计算酪氨酸酶抑制率(包括酪氨酸酶的单酚酶抑制率和酪氨酸酶的二酚酶抑制率)。
酪氨酸酶抑制率/%=[1-(ΔA1-ΔA2)/(ΔA3-ΔA4)]×100% (1)
式中:A1为底物、样液、酪氨酸酶和PBS体系的吸光值;A2为样液、酪氨酸酶和PBS体系的吸光值;A3为底物、酪氨酸酶和PBS体系的吸光值;A4为酪氨酸酶和PBS体系的吸光值。
珍珠贝肉酶解液、≥3kDa组分和<3kDa组分的体外酪氨酸酶抑制活性评价结果如图1所示,其中,图1A为酪氨酸酶的单酚酶抑制活性结果图,图1B为酪氨酸酶的二酚酶抑制活性结果图。从图1可知,珍珠贝肉酶解物、≥3kDa组分和<3kDa组分都具有酪氨酸酶单酚酶抑制活性和酪氨酸酶单酚酶抑制活性;在0.5mg/mL和1mg/mL下,<3kDa组分的活性都优于酶解物和≥3kDa组分,其中在0.5mg/mL下具有显著性(p<0.05),这表明,活性更好的肽组分主要集中于<3kDa组分中。在1mg/mL下,<3kDa组分的二酚酶抑制活性为15.96%,略高于木瓜籽活性肽的<1kDa组分(约15%)及1-3kDa组分(约5%)(木瓜籽活性肽的数据来源于文献:Skin-care functions of peptides prepared from Chinese quince seedprotein:Sequences analysis,tyrosinase inhibition and molecular docking study,YejunDeng etc.Industrial Crops and Products,Volume 148,June 2020,112331),说明<3kDa组分具有更好的酪氨酸酶抑制能力。将以<3kDa组分作为进一步研究对象,进行肽段分析。
采用LC-MS/MS对<3kDa组分进行结构鉴定,<3kDa组分鉴定出404个肽段,再以氨基酸残基≤10,置信度≥30为条件初步筛选,获得117个肽段。LC-MS/MS鉴定的具体过程为:经脱盐处理后的<3kDa加载在液相为Easy nLC1200纳升液相系统(ThermoFisher,USA)中,经分析柱C18反相色谱柱(2μm,75μm×25cm,Acclaim PepMap RSLC)洗脱。洗脱程序为B液(80%乙腈,0.1%甲酸)0~60min:5%~38%。采用ThermoFisher Q Exactive系统(ThermoFisher,USA)结合纳升喷雾Nano Flex离子源(ThermoFisher,USA)进行质谱,喷雾电压为1.9kV,离子传输管加热温度为275℃。通过一级和二级质谱先后确定肽段分子质量和氨基酸序列,MS/MS原始文件通过使用pFind搜索引擎进行分析。通过检索UniProt中Pinctada martensi物种蛋白数据库,对肽序列进行匹配,确定肽段的一级结构。
将117个肽段分别与酪氨酸酶(PDB ID:2y9x)进行分子对接,筛选结合能低较低的肽段。分子对接的过程为:将鉴定所得的肽段和酪氨酸酶(PDB ID:2y9x)在Autodock vina软件上进行分子对接,模拟肽与酪氨酸酶的可能结合方式,筛选具有最优酪氨酸酶抑制潜力的肽序列。酪氨酸酶的三维坐标从蛋白质数据库(https://www.rcsb.org/)中下载。肽的三维结构采用MarvinSketch设计,并导出能量最小化的三维构象,随后将酪氨酸酶和肽分别导入AutoDockTools(ADT)进行去水加氢等预处理。设置对接盒子中心为center_x:-7.384、center_y:-23.549和center_z:-19.8,尺寸为size_x:47.25,size_y:47.25,size_z:47.25。为了提高对接准确度,将穷举数为20,其他为默认参数。运行AutoDock vina对接程序,根据内置打分函数选取最优对接构象并使用Discovery Studio Visualizer进行可视化分析。
其中,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽(序列为:WLL,即Trp-Leu-Leu)与酪氨酸酶(2y9x)对接结果如表1所示。珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)的结合能为-8.2kcal/mol,与酪氨酸酶(2y9x)具有很好的结合作用,理论上表明珍珠贝酪氨酸酶抑制肽具有和酪氨酸酶活性中心紧密结合的能力。
表1珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)分子对接结果
珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)形成不同的分子间作用力,其作用类型及数量如表2所示。
表2珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)分子对接位点
珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)对接的3D和2D可视化结果如图2所示,其中,图2A是珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)对接的3D可视化图,图2B是珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)对接的2D可视化图。从图2可知,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽,与酪氨酸酶(2y9x)的氨基酸残基ASP353、GLU356、LYS376和GLN307形成7个氢键(包括Conventional Hydrogen Bond和Carbon Hydrogen Bond),键长范围为珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)的氨基酸残基LYS379、TRP358、TYR311、LYS376形成了6个疏水相互作用(包括Alkyl和Pi-Alkyl),珍珠贝酪氨酸酶抑制肽与酪氨酸酶(2y9x)的氨基酸残基ASP354、GLU356、ASP357形成了3个静电相互作用(包括Salt Bridge、AttractiveCharge和Pi-Anion)。疏水相互作用形成的疏水环境有助于氢键的形成,静电相互作用形成的引力有助于提高氨基酸之间结合的稳定性。这表明分子机制上珍珠贝酪氨酸酶抑制肽能与酪氨酸酶(2y9x)活性中心稳定结合,可以抑制酪氨酸酶活力。
珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的合成:采用固相合成法,由南京杰肽生物技术公司合成,合成的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的纯度>98%,在-20℃下保存,用于后续的测试实验。
实施例2珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的体外酪氨酸酶抑制活性评价
以珍珠贝酪氨酸酶抑制肽作为样液,按前述提及的体外酪氨酸酶抑制活性实验对珍珠贝酪氨酸酶抑制肽进行体外酪氨酸酶抑制活性评价,结果如图3所示,在1mg/mL下,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽对酪氨酸酶的单酚酶抑制率为57.50%,对酪氨酸酶的二酚酶抑制率为15.96%,表明珍珠贝酪氨酸酶抑制肽具有良好的酪氨酸酶单酚酶抑制活性和酪氨酸酶二酚酶抑制活性。
珍珠贝酪氨酸酶抑制肽中疏水性氨基酸残基比例为100%,氨基酸残基Trp和Leu的疏水侧链可直接与酪氨酸酶的疏水区域相互作用,抑制酪氨酸酶活性。同时含苯环的氨基酸残基Trp和重复的氨基酸残基Leu-Leu都可以增强珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的酪氨酸酶抑制能力。
实施例3基于斑马鱼模型研究珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的美白功效
3.1斑马鱼的培养
将野生型斑马鱼饲养于水温28.5℃、pH 7.5~8.5环境中,将10组斑马鱼按雌雄1:2的配种比例置于带隔板的配种缸中,雌雄分开,暗处理12h后恢复光照处理并抽出隔板使斑马鱼交配获得鱼卵,其中健康斑马鱼卵受精率达≥80%即可选择用于实验。
3.2珍珠贝酪氨酸酶抑制肽对斑马鱼存活率影响
斑马鱼卵敏感性高,活性实验前先进行毒性验证。收集健康斑马鱼卵在96孔板中,以每孔1尾的密度铺板,每孔加入180μL含珍珠贝酪氨酸酶抑制肽(25、50、100、150、200、250和500μg/mL)的斑马鱼培养水,每24h观察胚胎死亡情况及致畸情况,连续观察5d,观察不同浓度珍珠贝酪氨酸酶抑制肽对斑马鱼发育的影响,结果如图4所示。从图4可知,在25~500μg/mL浓度范围内,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽处理的斑马鱼均全部存活,生理状态正常。将在此基础上进行珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的美白功效研究。
3.3珍珠贝酪氨酸酶抑制肽对斑马鱼黑色素含量的影响
刚产的斑马鱼卵通体透明,随着受精卵的发育,斑马鱼卵体表和体内的黑色素逐步生成,最终鱼卵发育成鱼,可直接观察到斑马鱼体表黑色生成情况,反映样品对斑马鱼中黑色素合成的影响,进而评估美白效果。谷胱甘肽(GSH)是具有抗氧化效果和美白效果的短段,常被应用于功能性食品或化妆品中,可作为美白活性肽的阳性对照。
黑色素含量测定的具体过程为:收集受精24h后的健康斑马鱼卵,在12孔板中以每孔20尾的密度铺板,分别加入2mL含珍珠贝酪氨酸酶抑制肽(10、50和200μg/mL)的斑马鱼培养水,分别设置空白组(仅含培养水)、阳性对照组(含10、50和200μg/mL GSH的培养水)。在28.5℃下恒温处理48h后,取斑马鱼于体视镜(Nikon SMZ460,Nikon corporation,Japan)下观察形态及黑色素分布情况并拍摄背视图和侧视图,结果如图5A所示。收集其余斑马鱼用蒸馏水洗涤后冰冻(-80℃)处死,加入冰浴后的200μL Western及IP细胞裂解液(含1%(体积分数)1mM PMSF)并反复冻融3次破碎鱼体,4000r/min离心10min,得上清液和沉淀。取沉淀用于测定黑色素含量,沉淀加入250μL NaOH溶液(1M,10%DMSO),85℃水浴2h,取100μL加入96孔板中,在405nm下测定吸光值。每个样品均以BCA试剂盒(碧云天)进行归一化处理。根据公式(2)分别计算相对黑色素含量。
相对黑色素含量/%=(At/Ao)×100% (2)
式中:At为珍珠贝酪氨酸酶抑制肽处理组或阳性对照(GSH)组的吸光值;A0为空白组的吸光值。
相对黑色素含量的测试结果如图5所示。从图5A可知,与空白组对比,在200μg/mL下,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽处理的斑马鱼在背视图中头部黑色“V”字型斑点区域明显减少,在侧视图中腹部的黑色斑点减淡,鱼体比空白组透明的现象。
从图5B可知,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽处理的马鱼黑色素含量都比空白组显著降低(p<0.05)。在浓度为10、50和200μg/mL的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽处理下,斑马鱼中黑色素相比空白组分别降低了13.23%、36.51%和40.39%。这表明了珍珠贝酪氨酸酶抑制肽表现出良好的黑色素抑制能力。当浓度为50和200μg/mL时,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽处理组比相同浓度的阳性对照组(GSH)分别降低了13.96%和16.45%的黑色素,表明珍珠贝酪氨酸酶抑制肽表现出比阳性对照(GSH)更强的黑色素抑制作用。
3.4珍珠贝酪氨酸酶抑制肽对斑马鱼酪氨酸酶活力的影响
对酪氨酸酶活力的影响的具体过程为:取步骤3.3中黑色素含量测定的具体过程中离心后得到的上清液,在96孔板中将20μL上清液和180μL L-多巴(1mg/mL)混匀后避光37℃孵育2h,475nm下测定吸光值,根据公式(3)分别计算相对酪氨酸酶活力。
相对酪氨酸酶活力/%=(At’/Ao’)×100% (3)
式中:At’为珍珠贝酪氨酸酶抑制肽处理组或阳性对照(GSH)组的吸光值;A0’为空白组的吸光值。
从图6可知,与空白组相比,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽可显著降低斑马鱼体内的酪氨酸酶活力(p<0.05)。在浓度为10、50和200μg/mL的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽处理下,斑马鱼酪氨酸酶活力相比空白组分别降低了39.36%、50.33%和64.99%,同时分别比相同浓度的阳性对照组(GSH)降低8.68%、15.30%和28.55%。这表明,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽表现出良好的酪氨酸酶抑制能力,且珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的酪氨酸酶抑制能力显著优于GSH(p<0.05)。以上结果表明,珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在斑马鱼模型上具有良好的酪氨酸酶抑制活力,可通过抑制酶活力降低黑色素生成量,达到美白效果。
显然,本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例,而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (5)
1.珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用,其特征在于,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的序列为:WLL。
2.根据权利要求1所述应用,其特征在于,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备具有酪氨酸酶单酚酶抑制活性和/或酪氨酸酶二酚酶抑制活性的抑制剂中的应用。
3.珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备美白药物中的应用,其特征在于,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的序列为:WLL。
4.权利要求3所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备抑制黑色素合成的药物中的应用。
5.珍珠贝酪氨酸酶抑制肽在制备具有美白功效的化妆品中的应用,其特征在于,所述珍珠贝酪氨酸酶抑制肽的序列为:WLL。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211144515.XA CN115353548B (zh) | 2022-09-20 | 2022-09-20 | 一种具有美白功效的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211144515.XA CN115353548B (zh) | 2022-09-20 | 2022-09-20 | 一种具有美白功效的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115353548A CN115353548A (zh) | 2022-11-18 |
CN115353548B true CN115353548B (zh) | 2024-03-15 |
Family
ID=84006548
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211144515.XA Active CN115353548B (zh) | 2022-09-20 | 2022-09-20 | 一种具有美白功效的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115353548B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115477686B (zh) * | 2022-09-22 | 2024-01-30 | 北海黑珍珠海洋生物科技有限公司 | 一种具有美白功效的珍珠贝活性肽及其应用 |
CN117106016A (zh) * | 2023-09-01 | 2023-11-24 | 海南大学 | 阿胶源酪氨酸酶抑制肽及其应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001066584A1 (fr) * | 2000-03-07 | 2001-09-13 | Biowindow Gene Development Inc. Shanghai | Nouveau polypeptide, proteine humaine pax 9, et polynucleotide codant pour ce polypeptide |
KR20030077271A (ko) * | 2002-03-26 | 2003-10-01 | 주식회사 태평양 | 멜라닌 생성 억제 펩티드, 그 제조방법, 및 이를함유하는 피부 외용제 조성물 |
WO2005115447A2 (en) * | 2004-05-25 | 2005-12-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Human anti-cancer immunotherapy |
WO2007148723A1 (ja) * | 2006-06-23 | 2007-12-27 | Kinki University | 真珠貝の貝殻、真珠の色調を制御する遺伝子とそのタンパク質 |
CN113248564A (zh) * | 2021-02-10 | 2021-08-13 | 渤海大学 | 具有酪氨酸酶抑制作用的活性肽 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040014652A1 (en) * | 2000-06-01 | 2004-01-22 | Andre Trouet | Tumor activated prodrug compounds and methods of making and using the same |
-
2022
- 2022-09-20 CN CN202211144515.XA patent/CN115353548B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001066584A1 (fr) * | 2000-03-07 | 2001-09-13 | Biowindow Gene Development Inc. Shanghai | Nouveau polypeptide, proteine humaine pax 9, et polynucleotide codant pour ce polypeptide |
KR20030077271A (ko) * | 2002-03-26 | 2003-10-01 | 주식회사 태평양 | 멜라닌 생성 억제 펩티드, 그 제조방법, 및 이를함유하는 피부 외용제 조성물 |
WO2005115447A2 (en) * | 2004-05-25 | 2005-12-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Human anti-cancer immunotherapy |
WO2007148723A1 (ja) * | 2006-06-23 | 2007-12-27 | Kinki University | 真珠貝の貝殻、真珠の色調を制御する遺伝子とそのタンパク質 |
CN113248564A (zh) * | 2021-02-10 | 2021-08-13 | 渤海大学 | 具有酪氨酸酶抑制作用的活性肽 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
珍珠水解液的美白作用机理研究;邓云云;王笑月;李才广;孟宏;董卯;李丽;;中国现代中药(第07期);全文 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115353548A (zh) | 2022-11-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN115353548B (zh) | 一种具有美白功效的珍珠贝酪氨酸酶抑制肽及其应用 | |
CN116621925A (zh) | 一种具有美白功效的珍珠贝黑色素抑制肽及其应用 | |
Fukami | Structure, regulation, and function of phospholipase C isozymes | |
US9753018B2 (en) | Selenium-containing compound | |
Sohn et al. | Profilin: at the crossroads of signal transduction and the actin cytoskeleton | |
Jockusch et al. | The profile of profilins | |
Zhang et al. | A novel matrix protein p10 from the nacre of pearl oyster (Pinctada fucata) and its effects on both CaCO 3 crystal formation and mineralogenic cells | |
Zhu et al. | Identification and molecular mechanisms of novel antioxidant peptides from two sources of eggshell membrane hydrolysates showing cytoprotection against oxidative stress: A combined in silico and in vitro study | |
Satouh et al. | Molecular characterization of radial spoke subcomplex containing radial spoke protein 3 and heat shock protein 40 in sperm flagella of the ascidian Ciona intestinalis | |
Gong et al. | Culture of outer epithelial cells from mantle tissue to study shell matrix protein secretion for biomineralization | |
Zhang et al. | Biomineralization mechanism of the pearl oyster, pinctada fucata | |
Slocinska et al. | Identification and characterization of uncoupling protein 4 in fat body and muscle mitochondria from the cockroach Gromphadorhina cocquereliana | |
Fath et al. | Membrane motility mediated by unconventional myosin | |
Muraeva et al. | Mechanisms of adaption to salinity stress in marine gastropods Littorina saxatilis: a proteomic analysis | |
Huang et al. | Vitamin D 3/VDR inhibits inflammation through NF-κB pathway accompanied by resisting apoptosis and inducing autophagy in abalone Haliotis discus hannai | |
Xiao et al. | Mitochondria: transportation, distribution and function during spermiogenesis | |
Chan et al. | Illumination enhances the protein abundance of sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPases-like transporter in the ctenidium and whitish inner mantle of the giant clam, Tridacna squamosa, to augment exogenous Ca2+ uptake and shell formation, respectively | |
Kingtong et al. | Proteomic identification of protein associated to mature spermatozoa in the Pacific oyster Crassostrea gigas | |
CN115477686B (zh) | 一种具有美白功效的珍珠贝活性肽及其应用 | |
CA2471307A1 (en) | Protein complexes and methods for their use | |
CN109627289B (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的bh3多肽类似物 | |
Xin et al. | Calmodulin regulates the calcium homeostasis in mantle of Crassostrea gigas under ocean acidification | |
KR100864127B1 (ko) | 생식선 자극 활성을 갖는 펩티드 및 그 제법 | |
CN103478261A (zh) | 一种婴幼儿配方奶粉 | |
Kong et al. | The effects of protein kinase a catalytic subunit on sperm motility regulation in Pacific abalone Haliotis discus hannai |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |