CN115315447A

CN115315447A - 免疫激活多特异性抗原结合分子及其用途

Info

Publication number: CN115315447A
Application number: CN202180020903.4A
Authority: CN
Inventors: 直井壮太朗; 冯舒; 颜素婉
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2020-03-31
Filing date: 2021-03-30
Publication date: 2022-11-08
Also published as: SG11202105566TA; EP4126958A1; JP2021175391A; WO2021200896A1; AR121692A1; US20230147840A1; TW202204410A; KR20220161156A

Abstract

提供抗原结合分子，其包含第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，所述第一抗原结合部分能够结合CD3和CD137(4‑1BB)但不同时结合CD3和CD137(即对CD3和CD137进行双结合而非同时地结合)；所述第二抗原结合部分能够结合在癌症组织中特异性表达的分子，特别是磷脂酰肌醇聚糖‑3(GPC3)。由于对CD3和CD137进行双结合而非同时地结合且具有微调的结合动力学，以及与GPC3进行结合，多特异性抗原结合分子对癌细胞表现出强烈的细胞毒活性并且具有减少的副作用。此外，通过采用抗体工程技术和分子形式设计(包括框架区和/或恒定区的带电荷突变、VH/VL交换和Fc区选择)，提供了具有良好稳定性、可制造性/可生产性和结构同质性的多特异性抗原结合分子。

Description

免疫激活多特异性抗原结合分子及其用途

技术领域

本发明涉及用于癌症免疫疗法的多特异性抗原结合分子及其使用方法。

背景技术

抗体作为药物受到了关注，因为它们在血浆中高度稳定并且几乎没有副作用。在多种治疗性抗体中，一些类型的抗体需要效应细胞以产生抗肿瘤应答。抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)是效应细胞通过抗体的Fc区与存在于NK细胞和巨噬细胞上的Fc受体结合而针对抗体结合细胞表现出的细胞毒性。迄今为止，已开发出多种可诱导ADCC发挥抗肿瘤功效的治疗性抗体作为治疗癌症的药物((Nat.Biotechnol.(2005)23,1073-1078)。

除了通过招募NK细胞或巨噬细胞作为效应细胞诱导ADCC的抗体之外，自20世纪80年代以来，采用通过招募T细胞作为效应细胞的细胞毒性的T细胞招募抗体(TR抗体)已为人所知(NPL2至4)。TR抗体是一种双特异性抗体，其识别并结合在T细胞上形成T细胞受体复合物的任何一个亚基，特别是CD3ε链和癌细胞上的抗原。目前正在开发几种TR抗体。卡妥索单抗(Catumaxomab)是一种针对EpCAM的TR抗体，已在欧盟获批用于治疗恶性腹水。此外，最近发现一种称为“双特异性T细胞衔接器(BiTE)”的TR抗体表现出很强的抗肿瘤活性(NPL5和6)。博纳吐单抗(Blinatumomab)是一种针对CD19的BiTE分子，于2014年首次获得FDA批准。与利妥昔单抗(Rituximab)相比，博纳吐单抗已被证明在体外针对CD19/CD20阳性癌细胞表现出更强的细胞毒活性，可诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)(NPL7)。

然而，众所周知，三功能抗体以不依赖于癌抗原的方式同时与T细胞和细胞(例如NK细胞或巨噬细胞)结合，因此在细胞上表达的受体是交连的，并且以不依赖于抗原的方式诱导各种细胞因子的表达。由于这种细胞因子表达的诱导，认为三功能抗体的全身施用会引起细胞因子风暴样副作用。事实上，据报道，在I期临床试验中，5μg/身体的极低剂量是对非小细胞肺癌患者全身施用卡妥索单抗的最大耐受剂量，而施用更高的剂量会导致各种严重的副作用(NPL 8)。当以如此低的剂量施用时，卡妥索单抗永远无法达到有效的血液水平。即，以如此低的剂量施用卡妥索单抗不能达到预期的抗肿瘤效果。

近年来，通过使用具有对FcγR(PTL 1)的结合活性降低的Fc区，提供了一种经修饰的抗体，其引起由T细胞介导的细胞毒活性同时避免不良反应。然而，鉴于其分子结构，即使这样的抗体在结合癌抗原时也不能作用于两种免疫受体，即CD3ε和FcγR。

尚不知道这样一种抗体，其以癌症抗原特异性方式发挥由T细胞介导的细胞毒活性和由T细胞以外的细胞介导的细胞毒活性同时避免不良反应。

同时，与卡妥索单抗不同，双特异性sc(Fv)2格式分子(BiTE)没有Fcγ受体结合位点，因此它不会以不依赖于癌抗原的方式使T细胞和NK细胞和巨噬细胞等细胞上表达的受体交联。然而，由于双特异性sc(Fv)2是没有Fc区的经修饰的低分子量抗体分子，因此问题在于其施用于患者后的血液半衰期明显短于常规用作治疗性抗体的IgG型抗体。事实上，据报道，体内施用的双特异性sc(Fv)2的血液半衰期约为数小时(NPL9和10)。博纳吐单抗是一种与CD19和CD3结合的sc(Fv)2分子，已被批准用于治疗急性淋巴细胞白血病。已揭示，博纳吐单抗在患者中的血清半衰期小于2小时(NPL 11)。在博纳吐单抗的临床试验中，其使用微型泵通过持续静脉输注施用。这种施用方法不仅给患者带来极大的不便，而且还存在由于设备故障等导致医疗事故的潜在风险。因此，不能说这样的施用方法是理想的。

T细胞在肿瘤免疫中起重要作用，且已知被两种信号激活：1)T细胞受体(TCR)与主要组织相容性复合物(MHC)I类分子呈递的抗原肽的结合并激活TCR；和2)T细胞表面的共刺激物与抗原呈递细胞上的配体的结合并激活共刺激物。此外，T细胞表面上属于肿瘤坏死因子(TNF)超家族和TNF受体超家族的分子例如CD137(4-1BB)的激活，已被描述为对T细胞激活很重要(NPL 12)。在这方面，CD137激动剂抗体已被证明显示出抗肿瘤作用，且这在实验上已被证明主要是由于CD8阳性T细胞和NK细胞的激活(NPL 13)。还可以理解的是，经过工程改造的具有嵌合抗原受体分子的T细胞(CAR-T细胞)可以增强功效的持久性，其中该嵌合抗原受体分子由作为细胞外结构域的肿瘤抗原结合结构域和作为细胞内结构域的CD3和CD137信号转导结构域组成(Porter,NENGLJMED,2011,365；725-733(NPL 14))。

然而，由于此类CD137激动剂抗体的非特异性肝毒性，其产生的副作用是临床和非临床上的问题，且药物制剂的开发并未取得进展(Dubrot,Cancer Immunol.Immunother.,2010,28,512-22(NPL 15)。已提出该副作用的主要原因涉及抗体通过抗体恒定区与FCγ受体进行结合(Schabowsky,Vaccine,2009,28,512-22(NPL 16)。此外，据报道，对于靶向属于TNF受体超家族的受体来在体内发挥激动剂活性的激动剂抗体，需要通过FCγ受体表达细胞(FcγRII表达细胞)的抗体交联(Li，Proc Natl Acad Sci USA.2013,110(48),19501-6(NPL 17)。WO2015/156268(PTL 2)描述了具有CD137激动活性的结合结构域和针对肿瘤特异性抗原的结合结构域的双特异性抗体仅在表达肿瘤特异性抗原的细胞存在时才能发挥CD137激动活性并激活免疫细胞。

已经报道了包含肿瘤特异性抗原(EGFR)结合结构域、CD137结合结构域和CD3结合结构域的三特异性抗体(WO2014116846)。然而，由于具有这种分子形式的抗体可以同时结合三种不同的抗原，因此推测这些三特异性抗体，通过同时与CD3和CD137结合，可能导致表达CD3ε的T细胞和表达CD137的细胞(例如T细胞、B细胞、NK细胞、DC等)之间的交联。在这种情况下，目前尚不知道这样一种抗体，其既能发挥由T细胞介导的细胞毒活性，又能通过CD137以癌抗原特异性方式激活T细胞和其他免疫细胞的活性，同时避免不良反应。

磷脂酰肌醇聚糖-3(Glypican-3)(GPC3)是一种细胞外基质蛋白，其在胚胎组织中表达，特别是在肝脏和肾脏中表达，并参与器官发生。尽管GPC3在成人组织中胎盘以外的正常组织细胞中不表达，但其在各种癌组织中表达，因此其作为癌症治疗的靶分子、肿瘤标志物、诊断标志物是有用的。最近描述了一种识别GPC3的残基524至563的治疗性mAb(NPL18和19)。命名为GC33的单特异性mAb可诱导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，并表现出对小鼠皮下移植的HepG2和HuH-7异位异种移植物的肿瘤生长抑制作用。WO2016/047722(PTL 4)公开了一种双特异性抗体，该抗体与CD3和GPC3结合，并表现出对表达GPC3的癌细胞的细胞毒活性。

引用列表

专利文献

PTL 1：WO2012/073985

PTL 2：WO2015/156268

PTL 3：WO2014116846

PTL 4：WO2016/047722

非专利文献

NPL 1：Nat.Biotechnol.(2005)23,1073-1078

NPL 2：Nature.1985 Apr 18-24；314(6012):628-31.

NPL 3：Int J Cancer.1988 Apr 15；41(4):609-15.

NPL 4：Proc Natl Acad Sci U S A.1986 Mar；83(5):1453-7.

NPL 5：Proc Natl Acad Sci U S A.1995 Jul 18；92(15):7021-5.

NPL 6：Drug Discov Today.2005 Sep 15；10(18):1237-44.

NPL 7：Int J Cancer.2002 Aug 20；100(6):690-7.

NPL 8：Cancer Immunol Immunother(2007)56(10),1637-44

NPL 9：Cancer Immunol Immunother.(2006)55(5),503-14

NPL 10：Cancer Immunol Immunother.(2009)58(1),95-109

NPL 11：Nat Rev Drug Discov.2014Nov；13(11):799-801.

NPL 12：Vinay,2011,Cellular&Molecular Immunology,8,281-284

NPL 13：Houot,2009,Blood,114,3431-8

NPL 14：Porter,N ENGL J MED,2011,365；725-733

NPL 15：Dubrot,Cancer Immunol.Immunother.,2010,28,512-22

NPL 16：Schabowsky,Vaccine,2009,28,512-22

NPL 17：Li,Proc Natl Acad Sci USA.2013,110(48),19501-6

NPL 18：Ishiguro,T.et al.,(2008).Cancer research 68,9832-9838

NPL 19：Nakano,K.et al.,(2009).Biochemical and biophysical researchcommunications 378,279-284

发明内容

技术问题

本发明的目的是提供多特异性抗原结合分子，所述多特异性抗原结合分子可以有效地且特异性地将T细胞招募至靶标癌细胞，尤其是表达磷脂酰肌醇聚糖3(GPC3)的细胞，例如癌细胞，并且可以通过T细胞针对含有表达GPC3细胞的靶标癌组织的的细胞毒活性来治疗癌症；生产抗原结合分子的方法；以及包含所述抗原结合分子作为活性成分的药物组合物。本发明还提供了获得多特异性抗原结合分子的方法，所述多特异性抗原结合分子更有效地诱导T细胞依赖的细胞毒性，同时避免现有技术多特异性抗原结合分子可能具有的不良的毒性问题或副作用。

问题的解决方案

具体而言，本发明提供了一种抗原结合分子，其包含：第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，所述第一抗原结合部分能够与CD3和CD137(4-1BB)结合，但不同时与CD3和CD137结合(即与CD3和CD137双结合，但不能同时结合)；所述第二抗原结合部分能够与在癌症组织中特异性表达的分子特别是磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)结合。

有利地，通过除了与CD3的结合能力还具有与CD137的双结合能力，本发明的多特异性抗原结合分子与仅结合CD3的T细胞募集双特异性抗体相比，表现出增强的T细胞依赖的细胞毒活性，其由共刺激物CD137信号转导与CD3信号转导的协同作用所产生。此外，由于抗原结合分子与CD3和CD137的结合是非同时的(即不同时与CD3和CD137结合)，因此不会发生相同抗原结合分子与在不同免疫细胞(例如T细胞)上表达的CD3和/或CD137的同时结合，从而避免了由于不同免疫细胞之间不希望的交联而引起的全身毒性问题，当在体内施用与CD3和T细胞上表达的第二种分子(例如CD137)能够同时结合的传统多特异性抗原结合分子时，这种交联被认为是造成不良反应的原因。

此外，通过对CD137的结合活性进行工程化和改进且不会不利地影响本发明的抗原结合分子的双结合活性CD3，发明人已经从超过1000种变体中选择包含特定重链互补决定区(HCDR)或重链可变区(VH)以及特定轻链互补决定区(LCDR)或轻链可变区(VL)的抗原结合分子，其以癌症抗原(GPC3)依赖的方式对肿瘤表现出优异的T细胞依赖的细胞毒活性。一方面，发明人惊奇地发现，通过设计最佳的CD3和CD137结合特性，选择的抗原结合分子表现出强T细胞依赖的细胞毒活性和低毒性。

最后，开发多特异性抗体的一个共同挑战是生产临床上足够数量和纯度的多特异性抗体构建体，这是由于在共表达时不同特异性的抗体重链和抗体轻链错配，其会降低正确组装的构建体的产量并导致所需的多特异性抗体可能难以从其中分离的许多非功能性副产物。一方面，通过精巧的抗体工程和分子形式设计(包括框架区和/或恒定区中的带电突变、VH/VL交换和Fc区选择)，本发明提供了设计用于T细胞激活和重定向的多特异性抗原结合分子，其结合了良好的抗癌功效和低毒性以及具有良好的稳定性、可制造性/可生产性和结构同质性。

作为上述所有努力的结果，抗原结合分子及其药物组合物可用于靶向表达GPC3的细胞，用于在治疗各种癌症尤其是与GPC3相关的癌症(例如GPC3阳性肿瘤)的免疫疗法中的用途。

更具体地，本公开提供以下内容。

[1]一种多特异性抗原结合分子，其包含第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，该第一抗原结合部分能够与CD3和CD137结合，但不与CD3和CD137同时结合，该第二抗原结合部分能够与磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)结合；

其中该第一抗原结合部分包含选自以下(a1)至(a15)中的任一项：

(a1)SEQ ID NO:17的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:31的重链CDR 2、SEQ IDNO:45的重链CDR 3、SEQ ID NO:64的轻链CDR 1、SEQ ID NO:69的轻链CDR 2和SEQ ID NO:74的轻链CDR 3；

(a2)SEQ ID NO:18的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:32的重链CDR 2、SEQ IDNO:46的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；

(a3)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；

(a4)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR 2、SEQ IDNO:47的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ ID NO:75的轻链CDR 3；

(a5)SEQ ID NO:20的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:34的重链CDR 2、SEQ IDNO:48的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；

(a6)SEQ ID NO:22的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:36的重链CDR 2、SEQ IDNO:50的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；

(a7)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；

(a8)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR 2、SEQ IDNO:51的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ ID NO:76的轻链CDR 3；

(a9)SEQ ID NO:24的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:38的重链CDR 2、SEQ IDNO:52的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ ID NO:73的轻链CDR 3；

(a10)SEQ ID NO:25的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:39的重链CDR 2、SEQID NO:53的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；

(a11)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:66的轻链CDR 1、SEQ ID NO:71的轻链CDR 2和SEQ IDNO:76的轻链CDR 3；

(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；

(a13)SEQ ID NO:27的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:41的重链CDR 2、SEQID NO:55的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；

(a14)SEQ ID NO:28的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:42的重链CDR 2、SEQID NO:56的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；和

(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR 2、SEQID NO:84的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ IDNO:75的轻链CDR 3。

[1A][1]所述的多特异性抗原结合分子，其中能够与磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)结合的第二抗原结合部分包含SEQ ID NO:235的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:244的重链CDR2、SEQ ID NO:253的重链CDR3、SEQ ID NO:268的轻链CDR1、SEQ ID NO:274的轻链CDR2和SEQ ID NO:280的轻链CDR3。

[1B][1]或[1A]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，还包含Fc结构域。

[1C][1B]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述Fc结构域包含能够稳定缔合的第一Fc区亚基和第二Fc区亚基，并且其中与天然人IgG1 Fc结构域相比，Fc结构域表现出对人FCγ受体的降低的结合亲和力。

[1D][1C]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一Fc区亚基选自包含以下的组：

(c1)包含234位的Ala和235位的Ala的Fc区多肽；

(c2)包含234位的Ala、235位的Ala和297位的Ala的Fc区多肽；

(c3)包含234位的Ala、235位的Ala、297位的Ala、354位的Cys和366位的Trp的Fc区多肽；和

其中所述第二Fc区多肽选自包含以下的组：

(c4)包含234位的Ala和235位的Ala的Fc区多肽；

(c5)包含234位的Ala、235位的Ala和297位的Ala的Fc区多肽；和

(c6)包含234位的Ala、235位的Ala、297位的Ala、349位的Cys、366位的Ser、368位的Ala和407位的Val的Fc区多肽；和

其中所述氨基酸位置使用EU索引编号进行编号。

[1E][1B]至[1D]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述Fc结构域为IgG Fc结构域，优选为人IgG Fc结构域，更优选为人IgG1 Fc结构域。

[2][1]至[1E]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合部分包含选自以下(a1)至(a15)中的任一项：

(a1)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的轻链可变区；

(a2)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；

(a3)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；

(a4)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区；

(a5)包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；

(a6)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；

(a7)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；

(a8)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；

(a9)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；

(a10)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；

(a11)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链可变区；

(a12)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；

(a13)包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；

(a14)包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区；和

(a15)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。

[3][1]至[2]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合部分包含包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:262的氨基酸序列的轻链可变区。

[4][1B]至[3]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述Fc结构域包含SEQ ID NO:317所示的第一Fc亚基和SEQ ID NO:323所示的第二Fc亚基。

[5][1]至[4]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自为Fab分子。

[6][5]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合部分在Fab重链的C末端与Fc结构域的第一或第二亚基中任一个的N末端融合，并且所述第二抗原结合部分在Fab重链的C末端与Fc结构域剩余亚基的N末端融合。

[7][5]或[6]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合部分是交叉Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区进行交换以及其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，并且其中所述第一抗原结合部分是常规Fab分子，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。

[8][7]所述的多特异性抗原结合分子，其中在所述第一抗原结合部分的轻链的恒定结构域CL中，123位和/或124位的氨基酸独立地被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(按照Kabat进行编号)取代，并且其中在所述第一抗原结合部分的重链的恒定结构域CH1中，147位的氨基酸和/或213位的氨基酸独立地被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)取代(根据KabatEU索引进行编号)。

[8A][8]所述的多特异性抗原结合分子，其中在所述第一抗原结合部分的轻链的恒定结构域CL中，123位和124位的氨基酸分别为精氨酸(R)和赖氨酸(K)(按照Kabat进行编号)，并且其中在所述第一抗原结合部分的重链的恒定结构域CH1中，147位和213位的氨基酸为谷氨酸(E)(根据Kabat EU索引进行编号)。

[9][8]至[8A]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其包含选自以下(a1)至(a6)中任一组合的四种多肽：

(a1)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链4)；

(a2)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链4)；

(a3)包含SEQ ID NO:286的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:291的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链4)；

(a4)包含SEQ ID NO:286的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:292的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链4)；

(a5)包含SEQ ID NO:287的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:293的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQID NO:225的氨基酸序列的多肽链(链4)；和

(a6)包含SEQ ID NO:287的氨基酸序列(链1)的多肽链和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:294的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQID NO:225的氨基酸序列多肽链(链4)；

且其中优选地，该四条多肽链(链1至链4)按照图2所示的方向相互连接和/或缔合。

[10]分离的多核苷酸或多个多核苷酸，其编码[1]至[9]中任一项所述的多特异性抗原结合分子。

[11]载体，其编码[10]所述的多核苷酸或多个多核苷酸。

[12]宿主细胞，其包含[10]所述的多核苷酸或多个多核苷酸，或[11]所述的载体。

[13]生产[1]至[9C]中任一项所述的多特异性抗原结合分子的方法，其包括以下步骤：

a)在适于抗原结合分子表达的条件培养[12]所述的宿主细胞，和

b)回收所述抗原结合分子。

[13A]通过[13]所述的方法生产的多特异性抗原结合分子。

[14]药物组合物，其包含[1]至[9]中任一项所述的多特异性抗原结合分子和药学上可接受的载体。

[15][1]至[9]中任一项所述的多特异性抗原结合分子或[14]所述的药物组合物，其诱导细胞毒性，优选地诱导T细胞依赖性细胞毒性。

[16][1]至[9]中任一项所述的多特异性抗原结合分子或[14]所述的药物组合物，用于作为药物。

[17][1]至[9]中任一项所述的多特异性抗原结合分子或[14]所述的药物组合物，用于治疗有需要的个体中的疾病。

[18][17]所述的多特异性抗原结合分子或药物组合物，其中所述疾病是癌症，优选地表达GPC3的癌症或GPC3阳性的癌症。

[19][1]至[9]中任一项所述的多特异性抗原结合分子或[14]所述的药物组合物用于制备用于治疗有需要的个体中的疾病的药物中的用途。

[20]治疗个体疾病的方法，包含向所述个体施用治疗有效量的[1]至[9]中任一项所述的多特异性抗原结合分子或[14]所述的药物组合物。

[21][19]所述的用途或[20]所述的方法，其中所述疾病是癌症，优选地GPC3阳性的癌症或表达GPC3的癌症。

[22]用于诱导靶细胞裂解的方法，包含在T细胞存在下使靶细胞与[1]至[9]中任一项所述的多特异性抗原结合分子或[14]所述的药物组合物接触。

[23]包含[14]所述的药物组合物的试剂盒；和包装说明书，其包含用于向受试者施用以治疗癌症或延缓癌症进展的说明(instructions)，所述癌症优选GPC3阳性的癌症或表达GPC3的癌症。

本发明的另一方面涉及：

[24]多特异性抗原结合分子，其包含选自以下(a1)至(a6)中任一组合的四种多肽：

且其中优选地，所述四条多肽链(链1至链4)按照图2所示的方向相互连接和/或缔合。

本发明的又一方面涉及：

[25]抗原结合分子，其包含SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR2、SEQ ID NO:84的重链CDR3、SEQ ID NO:65的轻链CDR1、SEQ ID NO:70的轻链CDR2和SEQ ID NO:75的轻链CDR3。

[26]抗原结合分子，其包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQID NO:60的氨基酸序列的轻链可变区。

本发明的又一方面涉及：

[27]多特异性抗原结合分子，其包含：

(i)第一抗原结合部分，其与人CD3结合；和

(ii)第二抗原结合部分，其与人磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)结合；

其中所述第一抗原结合部分包含选自以下(a1)至(a15)中的任一项：

(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR 2、SEQID NO:54的重链CDR 3、SEQ ID NO:63的轻链CDR 1、SEQ ID NO:68的轻链CDR 2和SEQ IDNO:73的轻链CDR 3；

(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR 2、SEQID NO:84的重链CDR 3、SEQ ID NO:65的轻链CDR 1、SEQ ID NO:70的轻链CDR 2和SEQ IDNO:75的轻链CDR 3；

以及(iii)还包含Fc结构域，所述Fc结构域由能够稳定结合的第一Fc区亚基和第二Fc区亚基组成，并且其中与天然人IgG1 Fc结构域相比，所述Fc结构域表现出对人FCγ受体的降低的结合亲和力；

其中所述第一Fc区亚基是包含234位的Ala、235位的Ala、297位的Ala、354位的Cys和366位的Trp的Fc区多肽；和

其中所述第二Fc区多肽是包含234位的Ala、235位的Ala、297位的Ala、349位的Cys、366位的Ser、368位的Ala和407位的Val的Fc区多肽；和

其中氨基酸位置使用EU索引编号进行编号。

[28][27]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合部分包含选自以下(a1)至(a15)中的任一项：

[29][27]或[28]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合部分包含SEQ ID NO:235的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:244的重链CDR2、SEQ ID NO:253的重链CDR3、SEQ ID NO:268的轻链CDR1、SEQ ID NO:274的轻链CDR2和SEQ ID NO:280的轻链CDR3。

[30][27]至[29]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合部分包含包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:262的氨基酸序列的轻链可变区。

[31][27]至[30]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述Fc结构域包含SEQ ID NO:317所示的第一Fc区亚基和SEQ ID NO:323所示的第二Fc区亚基。

[32][27]至[31]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合部分和第二抗原结合部分各自是Fab分子。

[33][32]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合部分在Fab重链的C末端与所述FC结构域的第一Fc区亚基或第二Fc区亚基中任一个的N末端融合，并且所述第二抗原结合部分在Fab重链的C末端与所述Fc结构域的剩余Fc区亚基的N末端融合。

[34][32]或[33]所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合部分是交叉Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区进行交换并且其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，并且其中第一抗原结合部分是常规(conventional)Fab分子，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。

[35][34]所述的多特异性抗原结合分子，其中在所述第一抗原结合部分的轻链的恒定结构域CL中，123位和124位的氨基酸分别为精氨酸(R)和赖氨酸(K)(根据Kabat进行编号)，并且其中在所述第一抗原结合部分的重链的恒定结构域CH1中，147位和213位的氨基酸为谷氨酸(E)(根据EU编号进行编号)。

[36][27]至[35]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其包含选自以下(a1)至(a6)中任一组合的四种多肽：

(a6)包含SEQ ID NO:287的氨基酸序列(链1)的多肽链和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:294的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQID NO:225的氨基酸序列多肽链(链4)。

[37]分离的多核苷酸或多个多核苷酸，其编码[27]至[36]中任一项所述的多特异性抗原结合分子。

[38]载体，其编码[37]所述的多核苷酸或多个多核苷酸。

[39]宿主细胞，其包含[37]所述的多核苷酸或多个多核苷酸，或[38]所述的载体。

[40]生产[27]至[36]中任一项所述的多特异性抗原结合分子的方法，其包含以下步骤：

a)在适于抗原结合分子表达的条件培养[39]所述的宿主细胞，和

b)回收所述抗原结合分子。

[41]药物组合物，其包含[27]至[36]中任一项所述的多特异性抗原结合分子和药学上可接受的载体。

[42][27]至[36]中任一项所述的多特异性抗原结合分子或[41]所述的药物组合物，其诱导细胞毒性，优选地T细胞依赖性细胞毒性。

[43][27]至[36]中任一项所述的多特异性抗原结合分子或[41]或[42]所述的药物组合物，其用作药物。

[44][27]至[36]中任一项所述的多特异性抗原结合分子，或[41]或[42]所述的药物组合物，其用于治疗癌症，优选地表达GPC3的癌症或GPC3-阳性的癌症。

附图说明

[图1]图显示了Biacore串联阻断试验结果，该试验评估了AE05和AE15对CD3和CD137的非同时结合。

[图2]图示意地描绘了各种抗体形式，并带有每个成分的注释。图(a)描绘了利用FAST-Ig的1+1双特异性抗体，以及图(b)描绘了利用CrossMab技术的1+1双特异性抗体。

[图3]图显示了亲和力成熟的GPC3/双-Ig变体三特异性抗体的CD3激动活性测量的结果。每张图显示了由与NFAT-luc2 Jurkat报告细胞共培养的SK-pca60细胞系通过分为板1(左)和板2(右)的选择抗体检测到的平均发光单位+/-标准偏差(s.d.)。E:T比率为5，持续24小时。以0.02nM、0.2nM和2nM添加抗体。

[图4]图了显示亲和力成熟的GPC3/双-Ig变体三特异性抗体的CD137激动活性测量的结果。每张图显示了由与过表达CD137的Jurkat NFκB报告细胞共培养的SK-pca60细胞系通过分为板1(左)和板2(右)的选择抗体检测到的平均发光单位+/-标准偏差(s.d.)。E:T比率为5，持续5小时。以0.5nM、2.5nM和5nM添加抗体。

[图5]图显示了亲和力成熟的GPC3/双-Ig变体三特异性抗体的CD137激动活性测量的结果。(a)由与过表达CD137的Jurkat NFκB报告细胞共培养的SK-pca60细胞系通过一组选择的抗体检测到的平均发光单位+/-标准偏差(s.d.)。(b)与(a)类似，在第二个板中分析由与过表达CD137的Jurkat NFκB报告细胞共培养的SK-pca60细胞系通过其他组的抗体检测到的平均发光单位+/-标准偏差(s.d.)。

[图6]图显示了GPC3/双-Ig变体的细胞毒性测量的结果。SK-pca60在以5nM起始的3倍系列稀释液的选择的GPC3/双-Ig三特异性分子存在下与PBMC共培养。E:T比率为0.5。使用实时xCELLigence系统进行分析。在显示的每个图中绘制了在大约120小时获得的平均细胞生长抑制(％)值+/-s.d.。

[图7]图显示了GPC3/双-Ig变体的平均细胞毒性(细胞生长抑制(％)值+/-s.d.)的图。SK-pca60在选择的GPC3/双-Ig三特异性分子以5nM和10nM存在下与PBMC共培养，E:T为0.5，并使用实时xCELLigence系统进行分析。在所示图表中绘制了在120小时获得的平均细胞生长抑制(％)值+/-s.d.。

[图8]图显示了PBMC溶液中的抗原非依赖性细胞因子(IFNγ)释放的测量的结果。SK-pca60在以5nM起始的3倍系列稀释液的选择的GPC3/双-Ig三特异性分子存在下与PBMC共培养。E:T比率为0.5。在48小时时间点分析共培养的上清液。图表显示了IFNγ的平均浓度+/-s.d.。将抗体分为板1(上图)和板2(下图)用于评估。

[图9]图显示了PBMC溶液中抗原非依赖性细胞因子(IL-2)释放的测量的结果。SK-pca60在以5nM起始的3倍系列稀释液的选择的GPC3/双-Ig三特异性分子存在下与PBMC共培养。E:T比率为0.5。在48小时时间点分析共培养的上清液。图表显示IL-2的平均浓度+/-s.d.。将抗体分为板1(上图)和板2(下图)用于评估。

[图10]图显示了PBMC溶液中抗原非依赖性细胞因子(IL-6)释放的测量的结果。SK-pca60在以5nM起始的3倍系列稀释液的选择的GPC3/双-Ig三特异性分子存在下与PBMC共培养。E:T比率为0.5。在48小时时间点分析共培养的上清液。图表显示IL-6的平均浓度+/-s.d.。将抗体分为板1(上图)和板2(下图)用于评估。

[图11]图显示了AE05和AE15 CrossMab抗体针对SK-pca60细胞系的TDCC活性的测量的结果。细胞生长抑制(％)。E:T比率为5.以0.008nM、0.04nM、0.2nM、1.0nM和5nM添加抗体。

[图12]图示意地描绘了三特异性抗体，抗体AB(mAb AB)相对于抗体A(mAb A)和抗体B(mAb B)的设计和构建。

[图13]图示意地描绘了三特异性抗体，抗体AB(mAb AB)的命名规则。

[图14]图显示了对GPC3阴性细胞的抗原非依赖性Jurkat激活的测量的结果。将亲代CHO与NFAT-luc2 Jurkat报告细胞以E:T为5进行共培养24小时并使用LDH测定进行分析。图表描绘了在0.5nM、5nM和50nM孵育的不同抗体形式的平均发光单位+/-标准偏差(s.d.)。

[图15]图显示了对GPC3阴性细胞的抗原非依赖性Jurkat激活的测量的结果。将过表达CD137的CHO细胞与NFAT-luc2 Jurkat报告细胞以E:T为5共培养24小时。图表描绘了在0.5nM、5nM和50nM孵育的不同抗体形式的平均发光单位+/-标准偏差(s.d.)。

[图16]图显示了PBMC溶液中的抗原非依赖性细胞因子(IFNγ)释放的测量的结果。在48小时时间点分析以3.2nM、16nM和80nM添加到PBMC溶液中的亲和力成熟的GPC3/双-Ig变体或GPC3/CD137×CD3三特异性抗体的上清液。图表显示了IFNγ的平均浓度+/-s.d.。将抗体分为板1(上图)和板2(下图)用于评估。

[图17]图显示了PBMC溶液中抗原非依赖性细胞因子(TNFα)释放的测量的结果。在48小时时间点分析以3.2nM、16nM和80nM添加到PBMC溶液中的亲和力成熟的GPC3/双-Ig变体或GPC3/CD137×CD3三特异性抗体的上清液。图表显示了TNFα的平均浓度+/-s.d.。将抗体分为板1(上图)和板2(下图)用于评估。

[图18]图显示了PBMC溶液中抗原非依赖性细胞因子(IL-6)释放的测量的结果。在48小时时间点分析以3.2nM、16nM和80nM添加到PBMC溶液中的亲和力成熟的GPC3/双-Ig变体或GPC3/CD137×CD3三特异性抗体的上清液。图表显示IL-6的平均浓度+/-s.d.。将抗体分为板1(上图)和板2(下图)用于评估。

[图19]图显示了在huNOG小鼠模型中针对sk-pca-13a异种移植物的抗体的体内功效测量的结果。Y轴表示肿瘤体积(mm³)，X轴表示肿瘤植入后的天数。

[图20]图显示了在人源化CD3/CD137小鼠模型中针对LLC1/hGPC3癌细胞系的抗体的体内功效测量的结果。Y轴表示肿瘤体积(mm³)，X轴表示肿瘤植入后的天数。

[图21]图显示了在施用了每种抗体的小鼠中血浆IL-6浓度的测量的结果。小鼠在抗体注射后2小时取血，并使用Bio-Plex Pro Mouse Cytokine Th1 Panel测量血浆IL-6浓度。

[图22]图显示了在人源化CD3/CD137小鼠模型中针对LLC1/hGPC3异种移植物的抗体的体内功效测量的结果。Y轴表示肿瘤体积(mm³)，X轴表示肿瘤植入后的天数。

[图23]图显示了在施用了每种抗体的小鼠中血浆IL-6浓度的测量的结果。小鼠在抗体注射后2小时取血，并使用Bio-Plex Pro Mouse Cytokine Th1 Panel测量血浆IL-6浓度。

[图24]图显示在人源化CD3/CD137小鼠模型中针对LLC1/hGPC3癌细胞系的抗体的体内功效测量的结果。Y轴表示肿瘤体积(mm³)，X轴表示肿瘤植入后的天数。

[图25]图显示了在人源化CD3/CD137小鼠模型中针对Hepa1-6/hGPC3癌细胞系的抗体的体内功效测量的结果。Y轴表示肿瘤体积(mm³)，X轴表示肿瘤植入后的天数。

[图26]图显示了在人源化CD3/CD137小鼠模型中针对Hepa1-6/hGPC3癌细胞系的功效研究中注射后第4天抗GPC3/双-Fab抗体的血浆浓度测量的结果。

[图27]图显示了FAST-Ig和CrossMab的cIEF分析结果。

实施方案说明

本文描述或引用的技术和程序通常被本领域技术人员充分理解并且通常使用常规方法学来使用，例如Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual 3dedition(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.中描述的广泛使用的方法学；分子生物学中的现行方案(F.M.Ausubel等编辑,(2003))；酶学方法系列(Academic Press,Inc.)：PCR 2：实用方法(M.J.MacPherson，B.D.Hames和G.R.Taylor编辑(1995))，Harlow和Lane编辑(1988)抗体、实验室手册和动物细胞培养(R.I.Freshney编辑(1987))；寡核苷酸合成(M.J.Gait编辑，1984)；分子生物学方法，Humana Press；细胞生物学：实验室手册(J.E.Cellis编辑，1998年)学术出版社；动物细胞培养(R.I.Freshney)编辑，1987)；细胞和组织培养简介(J.P.Mather和P.E.Roberts，1998年)Plenum Press；细胞和组织培养：实验室程序(A.Doyle,J.B.Griffiths和D.G.Newell编辑，1993-8)J.Wiley和Sons；实验免疫学手册(D.M.Weir和C.C.Blackwell编辑)；哺乳动物细胞的基因转移载体(J.M.Miller和M.P.Calos编辑，1987)；PCR：聚合酶链式反应，(Mullis等人编辑，1994)；免疫学的现行方案(J.E.Coligan等人编辑,1991)；分子生物学短方案(Wiley和Sons，1999)；免疫生物学(C.A.Janeway和P.Travers，1997)；抗体(P.Finch，1997)；抗体：一种实用的方法(D.Catty编辑,IRL出版社,1988-1989)；单克隆抗体：一种实用的方法(P.Shepherd和C.Dean编辑，牛津大学出版社，2000年)；使用抗体：实验室手册(E.Harlow和D.Lane(冷泉港实验室出版社，1999年)；抗体(M.Zanetti和J.D.Capra编辑，Harwood Academic Publishers，1995年)；和癌症：肿瘤学原则和实践(V.T.DeVita等人编辑，J.B.Lippincott Company，1993)。

提供以下定义和详细描述以有助于理解本文所说明的本公开。

定义

氨基酸

在本文中，氨基酸由单字母代码或三字母代码或两者描述，例如Ala/A、Leu/L、Arg/R、Lys/K、Asn/N、Met/M、Asp/D、Phe/F、Cys/C、Pro/P、Gln/Q、Ser/S、Glu/E、Thr/T、Gly/G、Trp/W、His/H、Tyr/Y、Ile/I或Val/V。

氨基酸的改变

对于抗原结合分子的氨基酸序列中的氨基酸改变(在本说明书中也称为“氨基酸取代”或“氨基酸突变”)，可以适当地使用已知方法如定点诱变法(Kunkel et al.(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1985)82,488-492))和重叠延伸PCR。此外，几种已知的方法也可以用作氨基酸改变方法以取代非天然氨基酸(Annu Rev.Biophys.Biomol.Struct.(2006)35,225-249；和Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2003)100(11),6353-6357)。例如，适合使用含有tRNA的无细胞翻译系统(Clover Direct(Protein Express))，该tRNA具有与终止密码子之一的UAG密码子(琥珀密码子)的互补琥珀抑制tRNA结合的非天然氨基酸。

在本说明书中，当描述氨基酸改变的位点时，术语“和/或”的含义包括适当组合“和”和“或”的每一个组合。具体而言，例如，“位置33、55和/或96处的氨基酸被取代”包括以下氨基酸改变的变体：(a)位置33，(b)位置55，(c)位置96，(d)位置33和55，(e)位置33和96，(f)位置55和96，以及(g)位置33、55和96处的氨基酸。

此外，在本文中，作为表示氨基酸改变的表述，可以适当地使用在表示特定位置的数字的前后分别显示改变前后的氨基酸的1个字母或3个字母的代码的表述。例如，当取代抗体可变区中包含的氨基酸时使用的改变N100bL或Asn100bLeu表示在位置100b(根据Kabat编号)用Leu取代Asn。即，数字表示根据Kabat编号的氨基酸位置，数字前写的1个字母或3个字母的氨基酸代码表示取代前的氨基酸，数字后写的1个字母或3个字母的氨基酸代码表示取代后的氨基酸。类似地，当取代抗体恒定区中包含的Fc区的氨基酸时使用的改变P238D或Pro238Asp表明用Asp取代在位置238处(根据EU编号)的Pro。即，数字表示根据EU编号的氨基酸位置，数字前写的1个字母或3个字母的氨基酸代码表示取代前的氨基酸，数字后写的1个字母或3个字母的氨基酸代码表示取代后的氨基酸。

多肽

如本文所用，术语“多肽”是指由通过酰胺键(也称为肽键)线性连接的单体(氨基酸)组成的分子。术语“多肽”是指两个或多个氨基酸的任何链，而不是指特定长度的产物。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用于指代两个或多个氨基酸的链的任何其他术语都包括在“多肽”的定义中，并且术语“多肽”可以用来代替这些术语中的任何一个，或与这些术语中的任何一个互换使用。术语“多肽”还意指多肽的表达后修饰的产物，包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/封闭基团衍生、蛋白水解切割或通过非天然发生的氨基酸修饰。多肽可以源自天然生物来源或通过重组技术产生，但不一定翻译自指定的核酸序列。它可以任何方式产生，包括通过化学合成。如本文所述的多肽的大小可为约3或更多、5或更多、10或更多、20或更多、25或更多、50或更多、75或更多、100或更多、200或更多、500或更多、1,000或更多、或2,000或更多氨基酸。多肽可以具有确定的三维结构，尽管它们不一定需要具有这样的结构。具有确定的三维结构的多肽被称为折叠的，不具有确定的三维结构而是可以采用大量不同构象的多肽被称为未折叠的。

百分比(％)氨基酸序列同一性

相对于参考多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为在比对序列并引入空格后，候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比，如有必要，以实现最大的百分比序列同一性，并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分。用于确定百分比氨基酸序列同一性的目的的比对可以以本领域技术范围内的各种方式实现，例如，使用公开可用的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN、Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括在被比较序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。然而，出于本文的目的，使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生％氨基酸序列同一性值。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.编写，源代码已与用户文档一起提交给华盛顿特区美国版权局，20559，在美国版权注册号为TXU510087。ALIGN-2程序可从加利福尼亚州南圣弗朗西斯科的Genentech,Inc.公开获得，或者可以从源代码编译。应编译ALIGN-2程序以在UNIX操作系统上使用，包括数字UNIX V4.0D。所有序列比较参数均由ALIGN-2程序设置，不会发生变化。在使用ALIGN-2进行氨基酸序列比较的情况下，给定氨基酸序列A与、和或针对给定氨基酸序列B(可以备选地表述为给定氨基酸A与、和或针对给定氨基酸序列B具有或包括特定％氨基酸序列同一性)的％氨基酸序列同一性计算如下：

分数X/Y的100倍

其中X是序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，其中Y是B中氨基酸残基的总数。将理解，氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，A与B的％氨基酸序列同一性将不等于B与A的％氨基酸序列同一性。除非另有特别说明，本文使用的所有％氨基酸序列同一性值都是如上一段所述使用ALIGN-2计算机程序获得的。

重组方法和组合物

可以使用重组方法和组合物产生抗体和抗原结合分子，例如，如美国专利号4,816,567中所述。在一个实施方案中，提供了编码本文所述抗体的分离的核酸。此类核酸可编码包含抗体的VL的氨基酸序列和/或包含VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在另一个实施方案中，提供了一种或多种包含此类核酸的载体(例如，表达载体)。在另一个实施方案中，提供了包含这种核酸的宿主细胞。在一个这样的实施方案中，宿主细胞包括(例如，已用以下转化)：(1)包含核酸的载体，所述核酸编码包括抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列，或(2)包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列的核酸的第一载体，和包含编码包含抗体的VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一个实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如Y0、NS0、Sp2/0细胞)。在一个实施方案中，提供了制备本发明的多特异性抗原结合分子的方法，其中所述方法包括在适合表达抗体的条件下培养如上文所提供的包含编码抗体的核酸的宿主细胞，并且任选地从所述宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收所述抗体。

对于本文所述抗体的重组生产，分离例如如上所述编码抗体的核酸，将其插入一种或多种载体中以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序(例如，通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)容易地分离和测序此类核酸。

用于克隆或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，抗体可以在细菌中产生，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(另见Charlton,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ,2003),pp.245-254，描述了抗体片段在大肠杆菌中的表达。)表达后，抗体可从可溶部分中的细菌细胞糊(paste)中分离，并可进一步纯化。

除原核生物外，真核微生物如丝状真菌或酵母是编码抗体的载体的合适克隆或表达宿主，包括糖基化途径已被“人源化”的真菌和酵母菌株，从而产生具有部分或完全的人糖基化模式的抗体。参见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)和Li等,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。

用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞也来源于多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了许多杆状病毒株，它们可以与昆虫细胞结合使用，特别是用于草地贪夜蛾细胞的转染。

植物细胞培养物也可用作宿主。参见，例如，美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述了用于在转基因植物中生产抗体的PLANTIBODIES^TM技术)。

脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，适于悬浮生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。其他有用的哺乳动物宿主细胞系的例子是由SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚胎肾系(如Graham et al.,J.Gen Virol.36:59(1977)中描述的293或293细胞)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(TM4细胞，例如，Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所描述的)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT060562)；TRI细胞，如Mather et al.,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述；MRC5细胞；和FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系，例如Y0、NS0和Sp2/0。对于适用于抗体生产的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ),pp.255-268(2003)。

本文所述的抗原结合分子的重组生产可以用类似于上述那些的方法通过使用宿主细胞进行，所述宿主细胞包含(例如，已经转化有)一种或多种载体，所述载体包含编码氨基酸序列的核酸，所述氨基酸序列包含整个抗原结合分子或抗原结合分子的一部分。

抗原结合分子和多特异性抗原结合分子

如本文所用，术语“抗原结合分子”是指包含抗原结合位点的任何分子或对抗原具有结合活性的任何分子，并且可以进一步指这样的分子，例如具有长度为大约五个氨基酸或更多的肽或蛋白质。肽和蛋白质不限于来源于生物体的那些，例如，它们可以是由人工设计的序列产生的多肽。它们也可以是任何天然存在的多肽、合成多肽、重组多肽等。包含已知稳定构象结构如α/β桶作为支架，并且其中部分分子被制成抗原结合位点的支架分子，也是本文所述的抗原结合分子的一个实施方案。

“多特异性抗原结合分子”是指特异性结合多于一种抗原的抗原结合分子。术语“双特异性”是指抗原结合分子能够特异性结合至少两个不同的抗原决定簇。术语“三特异性”是指抗原结合分子能够特异性结合至少三个不同的抗原决定簇。

在某些实施方案中，本申请的多特异性抗原结合分子是三特异性抗原结合分子，即能够特异性结合三种不同抗原-能够结合CD3或CD137中的任一种但不同时结合两种抗原，并且能够特异性结合GPC3。

在第一方面，本公开提供了多特异性抗原结合分子，其包含

(i)第一抗原结合部分，其能够结合CD3和CD137但不同时结合CD3和CD137；和

(ii)第二抗原结合部分，其能够结合磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)，优选人GPC3。

本公开的一个方面提供了多特异性抗原结合分子，其包含第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，该第一抗原结合部分能够与CD3和CD137结合，但不与CD3和CD137同时结合，该第二抗原结合部分能够与磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)结合；其中所述第一抗原结合部分包含选自以下(a1)至(a15)中的任一项：

(a1)SEQ ID NO:17的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:31的重链CDR2、SEQ IDNO:45的重链CDR3、SEQ ID NO:64的轻链CDR1、SEQ ID NO:69的轻链CDR2和SEQ ID NO:74的轻链CDR3；

(a2)SEQ ID NO:18的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:32的重链CDR2、SEQ IDNO:46的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a3)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR2、SEQ IDNO:47的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a4)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR2、SEQ IDNO:47的重链CDR3、SEQ ID NO:65的轻链CDR1、SEQ ID NO:70的轻链CDR2和SEQ ID NO:75的轻链CDR3；

(a5)SEQ ID NO:20的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:34的重链CDR2、SEQ IDNO:48的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a6)SEQ ID NO:22的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:36的重链CDR2、SEQ IDNO:50的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a7)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR2、SEQ IDNO:51的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a8)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR2、SEQ IDNO:51的重链CDR3、SEQ ID NO:66的轻链CDR1、SEQ ID NO:71的轻链CDR2和SEQ ID NO:76的轻链CDR3；

(a9)SEQ ID NO:24的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:38的重链CDR2、SEQ IDNO:52的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a10)SEQ ID NO:25的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:39的重链CDR2、SEQ IDNO:53的重链CDR3、SEQ ID NO:66的轻链CDR1、SEQ ID NO:71的轻链CDR2和SEQ ID NO:76的轻链CDR3；

(a11)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR2、SEQ IDNO:54的重链CDR3、SEQ ID NO:66的轻链CDR1、SEQ ID NO:71的轻链CDR2和SEQ ID NO:76的轻链CDR3；

(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR2、SEQ IDNO:54的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a13)SEQ ID NO:27的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:41的重链CDR2、SEQ IDNO:55的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a14)SEQ ID NO:28的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:42的重链CDR2、SEQ IDNO:56的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；和

(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR2、SEQ IDNO:84的重链CDR3、SEQ ID NO:65的轻链CDR1、SEQ ID NO:70的轻链CDR2和SEQ ID NO:75的轻链CDR3。

本公开的一个方面提供了多特异性抗原结合分子，其包含第一抗原结合部分和第二抗原结合部分，该第一抗原结合部分能够与CD3和CD137结合，但不与CD3和CD137同时结合，该第二抗原结合部分能够与磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)结合；

其中该能够与磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)结合的第二抗原结合部分包含SEQ IDNO:235的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:244的重链CDR2、SEQ ID NO:253的重链CDR3、SEQ ID NO:268的轻链CDR1、SEQ ID NO:274的轻链CDR2和SEQ ID NO:280的轻链CDR3。

其中所述多特异性抗原结合分子还包含Fc结构域。

其中所述多特异性抗原结合分子还包含Fc结构域，和

其中所述Fc结构域由能够稳定缔合的第一Fc区亚基和第二Fc区亚基组成，并且其中与天然人IgG1 Fc结构域相比，Fc结构域对人Fcγ受体的结合亲和力降低。

其中所述多特异性抗原结合分子还包含Fc结构域，

其中所述Fc结构域由能够稳定缔合的第一Fc区亚基和第二Fc区亚基组成，并且其中与天然人IgG1 Fc结构域相比，Fc结构域对人Fcγ受体的结合亲和力降低，并且

其中所述第一Fc区亚基选自包含以下的组：

(c1)包含234位的Ala和235位的Ala的Fc区多肽；

(c2)包含234位的Ala、235位的Ala和297位的Ala的Fc区多肽；

其中所述第二Fc区多肽选自包含以下的组：

(c4)包含234位的Ala和235位的Ala的Fc区多肽；

(c5)包含234位的Ala、235位的Ala和297位的Ala的Fc区多肽；

其中所述氨基酸位置使用EU索引编号进行编号。

其中所述多特异性抗原结合分子还包含Fc结构域，和

其中所述Fc结构域为IgG Fc结构域，优选人IgG Fc结构域，更优选人IgG1 Fc结构域。

其中所述第一抗原结合部分包含选自以下(a1)至(a15)中的任何一种：

其中所述第二抗原结合部分包含包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:262的氨基酸序列的轻链可变区。

其中所述多特异性抗原结合分子还包含Fc结构域，和

其中所述Fc结构域包含SEQ ID NO:317所示的第一Fc区亚基和SEQ ID NO:323所示的第二Fc区亚基。

其中第一和第二抗原结合部分中的每一个是Fab分子。

其中所述多特异性抗原结合分子还包含Fc结构域，

其中所述第一抗原结合部分在所述Fab重链的C末端与所述Fc结构域的第一Fc区亚基或第二Fc区亚基中任一个的N末端融合，并且所述第二抗原结合部分在Fab重链的C末端与所述Fc结构域的剩余Fc区亚基的N末端融合。

其中所述第一和第二抗原结合部分中的每一个是Fab分子，并且

其中所述第二抗原结合部分是交叉(crossover)Fab分子，其中所述Fab轻链和所述Fab重链的可变区进行交换以及其包含重链可变区和轻链可变区，并且其中第一抗原结合部分是常规Fab分子，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。

其中第一和第二抗原结合部分中的每一个是Fab分子，

其中所述第二抗原结合部分是交叉Fab分子，其中所述Fab轻链和所述Fab重链的可变区进行交换以及其包含重链可变区和轻链可变区，并且其中第一抗原结合部分是常规Fab分子，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，并且

其中在所述第一抗原结合部分的轻链的恒定结构域CL中，123位和/或124位的氨基酸独立地被赖氨酸(K)、精氨酸(R)或组氨酸(H)(按照Kabat进行编号)取代，并且其中在所述第一抗原结合部分的重链的恒定结构域CH1中，147位的氨基酸和/或213位的氨基酸独立地被谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)取代(根据Kabat EU索引进行编号)。

其中第一和第二抗原结合部分中的每一个是Fab分子，

其中在所述第一抗原结合部分的轻链的恒定结构域CL中，123位和124位的氨基酸分别为精氨酸(R)和赖氨酸(K)(按照Kabat进行编号)，并且其中在所述第一抗原结合部分的重链的恒定结构域CH1中，147位和213位的氨基酸为谷氨酸(E)(根据Kabat EU索引进行编号)。

其包含选自以下(a1)至(a6)中任一项的四种多肽组合：

(a1)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的重链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的轻链(链2)，以及包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的重链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的轻链(链4)；

(a2)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的重链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的轻链(链2)，以及包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的重链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的轻链(链4)；

(a3)包含SEQ ID NO:286的氨基酸序列的重链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的轻链(链2)，以及包含SEQ ID NO:291的氨基酸序列的重链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的轻链(链4)；

(a4)包含SEQ ID NO:286的氨基酸序列的重链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的轻链(链2)，以及包含SEQ ID NO:292的氨基酸序列的重链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的轻链(链4)；

(a5)包含SEQ ID NO:287的氨基酸序列的重链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的轻链(链2)，以及包含SEQ ID NO:293的氨基酸序列的重链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的轻链(链4)；和

(a6)包含SEQ ID NO:287的氨基酸序列的重链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的轻链(链2)，以及包含SEQ ID NO:294的氨基酸序列的重链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的轻链(链4)。

本发明的多特异性抗原结合分子的成分可以以多种构型相互融合。图2中描绘了示例性构型。在特定实施方案中，多特异性抗原结合分子包含由能够稳定缔合的第一亚基和第二亚基组成的Fc结构域。

根据上述实施方案中任一项，多特异性抗原结合分子的组分(例如抗原结合部分、Fc结构域)可以直接或通过各种接头，特别是包含一个或多个氨基酸，通常约2-20个氨基酸的肽接头融合，接头在本文中进行描述或在本领域中是已知的。合适的非免疫原性肽接头包括，例如，(G4S)n、(SG4)n、(G4S)n或G4(SG4)n肽接头，其中n通常为1至10之间的数字，通常为2至4。

焦谷氨酰化

已知当抗体在细胞中表达时，抗体在翻译后被修饰。翻译后修饰的例子包括重链C末端的赖氨酸被羧肽酶切割；通过焦谷氨酰化将重链和轻链N末端的谷氨酰胺或谷氨酸修饰为焦谷氨酸；糖基化；氧化；脱酰胺；和糖化，并且已知这种翻译后修饰发生在各种抗体中(Journal of Pharmaceutical Sciences,2008,Vol.97,p.2426-2447)。

本发明的多特异性抗原结合分子还包括经过翻译后修饰的多特异性抗体。经翻译后修饰的本发明的多特异性抗原结合分子的实例包括在重链可变区的N末端经焦谷氨酰化和/或在重链C末端的赖氨酸缺失的多特异性抗体。在本领域中已知，由于N末端的焦谷氨酰化和C末端赖氨酸的缺失而导致的这种翻译后修饰对抗体的活性没有任何影响(Analytical Biochemistry,2006,Vol.348,p.24-39)

抗原结合部分

如本文所用，术语“抗原结合部分”是指特异性结合抗原的多肽分子。在一个实施方案中，抗原结合部分能够将其所连接的部分(例如第二抗原结合部分)引导至靶位点，例如引导至表达癌抗原(GPC3)的特定类型的肿瘤细胞。在另一个实施方案中，抗原结合部分能够通过其靶抗原，例如T细胞受体复合物抗原(CD3)或共刺激分子(CD137)激活信号传导。抗原结合部分包括如本文进一步定义的抗体及其片段。具体的抗原结合部分包括抗体的抗原结合结构域或抗体可变区，包括抗体重链可变区和抗体轻链可变区。在某些实施方案中，抗原结合部分可包含如本文进一步定义和本领域已知的抗体恒定区。有用的重链恒定区包括五种同种型中的任何一种：α、δ、ε、γ或μ。有用的轻链恒定区包括两种同种型中的任何一种：κ和λ。

如本文所用，关于抗原结合部分等的术语“第一”、“第二”、“第三”和“第四”是为了当每种类型的部分有一个以上时便于区分。除非明确说明，否则这些术语的使用不旨在赋予多特异性抗原结合分子特定顺序或方向。

能够与CD3和CD137结合但不能同时结合的抗原结合部分

本文所述的多特异性抗原结合分子包含至少一个能够结合CD3和CD137但不同时结合CD3和CD137的抗原结合部分(本文也称为“双抗原结合部分”或“第一抗原结合部分”或“双-Ig”或“双-Fab”)。在特定实施方案中，多特异性抗原结合分子包含不超过两个能够特异性结合CD3和CD137但不同时结合CD3和CD137的抗原结合部分。在一个实施方案中，多特异性抗原结合分子提供与CD3或CD137的单价结合，但不同时与CD3和CD137结合。

在某些实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)通常是Fab分子，特别是常规的Fab分子。在某些实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)是包含抗体轻链可变区和重链可变区(VL和VH)的结构域。包含抗体的轻链可变区和重链可变区的此类结构域的合适实例包括“单链Fv(scFv)”、“单链抗体”、“Fv”、“单链Fv2(scFv2)”、“Fab”、“F(ab')₂”等。

在某些实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)特异性结合CD3的部分肽的全部或部分。在特定实施方案中，CD3是人CD3或食蟹猴CD3，最特别是人CD3。在特定实施方案中，第一抗原结合部分对人和食蟹猴CD3具有交叉反应性(即特异性结合)。在一些实施方案中，第一抗原结合部分能够特异性结合CD3的ε亚基，特别是SEQ ID NO:7(NP_000724.1)(RefSeq注册号显示括号内)中所示的CD3的人CD3ε亚基。在一些实施方案中，第一抗原结合部分能够与真核细胞表面上表达的CD3ε链进行特异性结合。在一些实施方案中，第一抗原结合部分与在T细胞表面上表达的CD3ε链进行结合。

在某些实施方案中，CD137是人CD137。在一些实施方案中，本发明的抗原结合分子的有利实例包括与选自由以下组成的组的抗体所结合的人CD137表位相同的表位进行结合的抗原结合分子：

识别包含SPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGC序列(SEQ ID NO:21)的区域的抗体，

识别包含DCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGC序列(SEQ ID NO:35)的区域的抗体，

识别包含LQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAEC序列(SEQ ID NO:49)的区域的抗体，和

识别在人CD137蛋白中包含LQDPCSNCPAGTFCDNNRNQIC序列(SEQ ID NO:105)的区域的抗体。

在具体实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)包含下表1中所示的抗体可变区序列中的任一种。在具体实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)包含表1中所示的重链可变区和轻链可变区的组合中的任何一种。

(表1)

双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“双-Fab”)可变区的SEQ ID NO

在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)包含与SEQ ID NO:6具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的重链可变区序列和与SEQ ID NO:58具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的轻链可变区序列。在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)包含包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区。

在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)包含与SEQ ID NO:14具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的重链可变区序列和与SEQ ID NO:58具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的轻链可变区序列。在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)包含包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区。

在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)包含与SEQ ID NO:81具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的重链可变区序列和与SEQ ID NO:58具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的轻链可变区序列。在一个实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”)包含包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的轻链可变区。

在具体实施方案中，双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“双-Fab”)包含下表2中所示的HVR序列组合中的任何一种。

(表2)

双抗原结合部分(“第一抗原结合部分”或“双-Fab”)的HVR(CDR)序列的SEQ ID NO

本发明的多特异性抗原结合分子还包括经过翻译后修饰的多特异性抗体。经翻译后修饰的本发明的多特异性抗原结合分子的实例包括在重链可变区的N末端经焦谷氨酰化和/或在重链C末端的赖氨酸缺失的多特异性抗体。在本领域中已知，由于N末端的焦谷氨酰化和C末端赖氨酸的缺失而导致的这种翻译后修饰对抗体的活性没有任何影响(Analytical Biochemistry,2006,Vol.348,p.24-39)。

能够与GPC3结合的抗原结合部分

本文所述的多特异性抗原结合分子包含至少一个能够结合GPC3的抗原结合部分(本文也称为“GPC3抗原结合部分”或“第二抗原结合部分”)。在某些实施方案中，多特异性抗原结合分子包含一个能够结合GPC3的抗原结合部分。

在某些实施方案中，多特异性抗原结合分子包含两个能够结合GPC3的抗原结合部分。在特定的此类实施方案中，这些抗原结合部分中的每一个特异性地结合GPC3的相同表位。在甚至更具体的实施方案中，所有这些抗原结合部分都是相同的(identical)。在一个实施方案中，多特异性抗原结合分子包含能够特异性结合GPC3的免疫球蛋白分子。在一个实施方案中，多特异性抗原结合分子包含不超过两个能够结合GPC3的抗原结合部分。

在某些实施方案中，GPC3抗原结合是交叉Fab分子，即其中Fab重链和轻链的可变区或恒定区被交换的Fab分子。

在某些实施方案中，GPC3抗原结合部分是交叉Fab分子，其中Fab轻链和Fab重链的可变区被交换，并且其包含重链可变区以及轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列以及该轻链可变区包含SEQ ID NO:262的氨基酸序列。

在特定实施方案中，多特异性抗原结合分子包含至少一个对磷脂酰肌醇聚糖3(GPC3)特异的抗原结合部分。在一个实施方案中，对GPC3特异的抗原结合部分包含至少一个重链互补决定区(CDR)和至少一个轻链CDR，该重链互补决定区(CDR)选自由SEQ ID NO:235、SEQ ID NO:244和SEQ ID NO:253组成的组，以及该轻链CDR选自由SEQ ID NO:268、SEQID NO:274和SEQ ID NO:280组成的组。

在一个实施方案中，对GPC3特异的抗原结合部分包含SEQ ID NO:235的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:244的重链CDR2、SEQ ID NO:253的重链CDR3、SEQ ID NO:268的轻链CDR1、SEQ ID NO:274的轻链CDR2和SEQ ID NO:280的轻链CDR3。

在进一步的实施方案中，对GPC3特异的抗原结合部分包含与SEQ ID NO:226具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的重链可变区序列和与SEQ ID NO:262具有至少约95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的轻链可变区序列，或其保留功能的变体。

在一个实施方案中，对GPC3特异的抗原结合部分包含包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:262的氨基酸序列的轻链可变区。

抗原

如本文所用，术语“抗原”是指多肽大分子上与抗原结合部分结合、形成抗原结合部分-抗原复合物的位点(例如连续的氨基酸段或由不连续氨基酸的不同区域组成的构象构型)。有用的抗原决定簇可存在于例如肿瘤细胞表面、病毒感染细胞表面、其他患病细胞的表面、免疫细胞的表面、游离于血清中和/或细胞外基质(ECM)。除非另有说明，本文称为抗原的蛋白质(例如CD3、CD137、GPC3)可以是来自任何脊椎动物来源的任何天然形式的蛋白质，包括哺乳动物例如灵长类动物(例如人)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。在特定实施方案中，抗原是人CD3、人CD137或人GPC3。在本文中提及特定蛋白质时，该术语包括“全长”、未加工的蛋白质以及由细胞中加工产生的任何形式的蛋白质。该术语还包括天然存在的蛋白质变体，例如剪接变体或等位基因变体。

在某些实施方案中，本文所述的多特异性抗原结合分子结合在来自不同物种的在CD3、CD137或GPC3中保守的CD3、CD137或GPC3的表位。在某些实施方案中，本申请的多特异性抗原结合分子是三特异性抗原结合分子，即它能够特异性结合三种不同的抗原——能够结合CD3或CD137中的任一种但不同时结合两种抗原，并且能够特异性结合GPC3。

在某些实施方案中，多特异性抗原结合分子特异性结合CD3的部分肽的全部或部分。在特定实施方案中，CD3是人CD3或食蟹猴CD3，最特别是人CD3。在特定实施方案中，多特异性抗原结合分子对人和食蟹猴CD3具有交叉反应性(即特异性结合)。在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子能够特异性结合CD3的ε亚基，特别是SEQ ID NO:7(NP_000724.1)(RefSeq注册号显示在括号内)中所示的CD3的人CD3ε亚基。在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子能够特异性结合在真核细胞表面上表达的CD3ε链。在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子结合在T细胞表面上表达的CD3ε链。

抗原结合结构域

术语“抗原结合结构域”是指抗体的一部分，其包含与抗原的部分或全部特异性结合并互补的区域。抗原结合结构域可以由例如一个或多个抗体可变结构域(也称为抗体可变区)提供。优选地，抗原结合结构域包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)两者。这种优选的抗原结合结构域包括例如“单链Fv(scFv)”、“单链抗体”、“Fv”、“单域抗体或VHH”、“单链Fv2(scFv2)”、“Fab”和“F(ab')₂”。

可变区

术语“可变区”或“可变结构域”是指参与抗体与抗原结合的抗体重链或轻链的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个高变区(HVR)。(参见，例如Kindt等，KubyImmunology，第6版，W.H.Freeman and Co.，第91页(2007))。单个VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域来分别筛选互补VL或VH结构域的文库，从而分离结合特定抗原的抗体。参见，例如，Portolano等，J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson等，Nature 352：624-628(1991)。

HVR或CDR

如本文所用，术语“高变区”或“HVR”是指在序列上高变(“互补决定区”或“CDR”)和/或形成结构上定义的环(“高变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触”)的抗体可变结构域的每个区域。高变区(HVR)也称为“互补决定区”(CDR)，这些术语在本文中可互换使用，指的是形成抗原结合区的可变区部分。通常，抗体包含六个HVR：VH中的三个(H1，H2，H3)和VL中的三个(L1，L2，L3)。

本文中的示例性HVR包括：

(a)出现在氨基酸残基26-32(L1)，50-52(L2)，91-96(L3)，26-32(H1)，53-55(H2)和96-101(H3)处的高变环(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))；

(b)出现在氨基酸残基24-34(L1)，50-56(L2)，89-97(L3)，31-35b(H1)，50-65(H2)和95-102(H3)处的CDR(Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；

(c)出现在氨基酸残基27c-36(L1)，46-55(L2)，89-96(L3)，30-35b(H1)，47-58(H2)和93-101(H3)处的抗原接触(MacCallum等人，J.Mol.Biol.262：732-745(1996))；和

(d)(a)、(b)和/或(c)的组合，包括HVR氨基酸残基46-56(L2)，47-56(L2)，48-56(L2)，49-56(L2)，26-35(H1)，26-35b(H1)，49-65(H2)，93-102(H3)和94-102(H3)。

除非另有说明，否则可变结构域中的HVR残基和其他残基(例如FR残基)在本文中根据Kabat等编号，见上文。

HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3也分别被称为“H-CDR1”、“H-CDR2”、“H-CDR3”、“L-CDR1””、“L-CDR2”和“L-CDR3”。

能够与CD3和CD137结合

可以通过本领域中已知的方法来确定本发明的抗体可变区是否“能够与CD3和CD137结合”。

例如，这可以通过电化学发光法(ECL法)来确定(BMC Research Notes 2011,4:281)。

具体而言，例如，由经生物素标记的待测抗原结合分子的能够与CD3和CD137结合的区(例如Fab区)构成的低分子抗体或者其单价抗体(缺少通常抗体所携带的两个Fab区之一的抗体)与用磺基标签(Ru络合物)标记的CD3或CD137混合，将混合物添加到链霉亲和素固定的板上。在该操作中，待测试的生物素标记的抗原结合分子与平板上的链霉亲和素结合。使磺基标签发光，利用Sector Imager 600或2400(MSD K.K.)等检测发光信号，从而确认待测抗原结合分子的上述区域与CD3或CD137的结合。

或者，可以通过ELISA或FACS(荧光活化细胞分选术)、ALPHAScreen(增强的发光接近均质测定)或基于表面等离子共振(SPR)现象的BIACORE法等来进行该测定(Proc.Natl.Acad.Sci.USA (2006)103(11),4005-4010)。

具体而言，例如，可以使用基于表面等离子共振(SPR)现象的相互作用分析仪Biacore(GE Healthcare Japan Corp.)来进行该测定。Biacore分析仪包括任意型号，例如Biacore T100、T200、X100、A100、4000、3000、2000、1000、8K或C。可将Biacore的任意传感器芯片，例如，CM7、CM5、CM4、CM3、C1、SA、NTA、L1、HPA或Au芯片用作传感器芯片。通过例如胺偶联、二硫化物偶联(disulfide coupling)、醛偶联的偶联方法将捕获本发明的抗原结合分子的蛋白(例如蛋白A、蛋白G、蛋白L、抗人IgG抗体、抗人IgG-Fab、抗人L链抗体、抗人Fc抗体、抗原蛋白或抗原肽)固定在传感器芯片上。将CD3或CD137作为分析物注射在芯片上，测定相互作用以获取传感图。在该操作中，CD3或CD137的浓度可以根据测定样品的相互作用强度(例如KD等)在数μM至数pM的范围内选择。

或者，可以将CD3或CD137代替抗原结合分子固定在传感器芯片上，使待评价的抗体样品与CD3或CD137相互作用。根据由相互作用的传感图算出的解离常数(KD)值、或根据抗原结合分子样品作用后相对于作用前水平的传感图的增加程度，可以确认本发明的抗原结合分子的抗体可变区是否具有对CD3或CD137的结合活性。

在一些实施方案中，使用例如Biacore T200仪器(GE Healthcare)或Biacore 8K仪器(GE Healthcare)在37℃(对于CD137)或25℃(对于CD3)下评估本发明的抗体可变区与目的抗原(即CD3或CD137)的结合活性或亲和力。使用胺偶联试剂盒(例如GE Healthcare)，将抗人Fc(例如GE Healthcare)固定在CM4传感器芯片的所有流通池上。将抗原结合分子或抗体可变区捕获到抗Fc传感器表面上，然后将抗原(CD3或CD137)注射到流通池上。抗原结合分子或抗体可变区的捕获水平的目标可以为200个共振单位(RU)。重组人CD3或CD137可以以2000到125nM的剂量注射，其通过两倍连续稀释，然后进行解离来制备。在包含20mMACES，150mM NaCl，0.05％吐温20、0.005％NaN₃的ACES pH 7.4中制备所有抗原结合分子或抗体可变区和分析物。每个周期用3M MgCl₂再生传感器表面。通过使用例如Biacore透视评估软件2.0版(Biacore Insight Evaluation software)(GE Healthcare)或Biacore 8K评估软件(GE Healthcare)将数据处理并将其拟合为1:1结合模型来确定结合亲和力。计算KD值以评估本发明的抗原结合结构域的特异性结合活性或亲和力。

ALPHAScreen是通过使用两种类型的珠子(供体和受体)的ALPHA技术，基于下述原理来实施的：仅在这两种珠子通过结合于供体珠子的分子和结合于受体珠子的分子之间的生物学相互作用靠近时检测到发光信号。供体珠子内的激光激发的光敏剂将周围的氧转换为具有激发状态的单线态氧。单线态氧扩散至供体珠子周围，到达靠近供体珠子的受体珠子，从而引起珠子的化学发光反应，最终发出光。在结合于供体珠子的分子和结合于受体珠子的分子不发生相互作用时，供体珠子产生的单线态氧不会到达受体珠子。因此，不会发生化学发光反应。

将观察相互作用的物质的一个(配体)固定在传感器芯片的金薄膜上。从传感器芯片的背面照射光使得在金薄膜和玻璃之间的界面发生全反射。结果，在一部分反射光中形成了反射强度(SPR信号)下降的位点。将观察相互作用的物质的另一个(分析物)注射到传感器芯片的表面。分析物与配体结合时，固定化配体分子的质量会增加，从而改变传感器芯片表面的溶剂的折射率。折射率的变化使SPR信号的位置发生移位(相反，结合分子的解离会使信号返回到原始位置)。Biacore系统在纵坐标上绘制位移量，即传感器芯片表面上的质量变化，并显示依赖于时间的质量变化作为测定数据(传感器图)。由传感图可确定与被捕获到传感器芯片表面上的配体结合的分析物的量(在分析物相互作用前后的传感图上的响应的变化量)。但是，由于结合量也取决于配体的量，必须在使用基本上相同的配体量的条件下进行比较。由传感图的曲线可确定动力学即缔合速率常数(ka)和解离速率常数(kd)，而由这些常数之间的比值可确定亲和力(KD)。BIACORE法中还优选使用抑制测定法。抑制测定法的实例描述在Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010中。

不同时结合CD3和CD137(4-1BB)

术语“不同时结合CD3和CD137(4-1BB)”或“不与CD3和CD137(4-1BB)同时结合”是指本发明的抗原结合部分或抗体可变区不能在与CD3结合的状态下与CD137结合，而抗原结合部分或抗体可变区不能在与CD137结合的状态下与CD3结合。在本文中，短语“不同时与CD3和CD137结合”也包括表达CD3的细胞和表达CD137的细胞不交联、或者不同时结合各自在不同细胞上表达的CD3和CD137。该短语进一步包括下述的情形：当CD3和CD137如可溶性蛋白那样不在细胞膜上表达、或者二者均存在于同一细胞上时，可变区能够同时结合CD3和CD137，但不同时结合各自在不同细胞上表达的CD3和CD137。这样的抗体可变区没有特别限定，只要抗体可变区具有这些功能即可。其实例可包括：通过将IgG型抗体可变区的一部分氨基酸改变以与所期望的抗原结合而获得的可变区。待改变的氨基酸选自，例如在与CD3或CD137结合的抗体可变区中，其改变不消除与抗原的结合的氨基酸。

在本文中，短语“在不同细胞上表达”仅是指抗原在分开的细胞上表达。这样的细胞组合可以是，例如，同一类型的细胞例如T细胞与另一种T细胞，或者可以是不同类型的细胞例如T细胞和NK细胞。

本发明的抗原结合分子是否“不同时与CD3和CD137结合”可如下进行确认：确认抗原结合分子对CD3和CD137都具有结合活性，然后使CD3或CD137预先结合到包含具有结合活性的可变区的抗原结合分子上，然后通过上述方法确定其对另一个是否具有结合活性。或者，这也可以通过确定抗原结合分子与固定在ELISA板或传感器芯片上的CD3或CD137的结合是否被加入到溶液中的另一个抑制来确认。在一些实施方案中，本发明的抗原结合分子与CD3或CD137的结合被抗原结合分子与另一个的结合抑制了至少50％，优选60％以上，更优选70％以上，更优选80％以上，进一步优选90％以上，或甚至更优选95％以上。

在一方面，当一种抗原(例如CD3)被固定时，可以通过现有技术中已知的方法(即ELISA，BIACORE等)在存在另一种抗原(例如CD137)的情况下确定对抗原结合分子与CD3的结合的抑制。在另一方面，当CD137被固定时，也可以在CD3存在下确定对抗原结合分子与CD137的结合的抑制。当进行上述两个方面中的任何一个时，如果结合被抑制至少50％，优选60％以上，优选70％以上，进一步优选80％以上，进一步优选90％以上，甚至更优选95％以上，则确定本发明的抗原结合分子不同时与CD3和CD137结合。

在一些实施方案中，作为分析物注射的抗原的浓度比待固定的其他抗原的浓度高至少1倍、2倍、5倍、10倍、30倍、50倍或100倍。

以优选的方式，作为分析物注射的抗原的浓度比待固定的其他抗原的浓度高100倍，并且结合被抑制至少80％。

在一个实施方案中，计算了抗原结合分子的CD3(分析物)结合活性的KD值与抗原结合分子的CD137(固定化)结合活性的KD之比(KD(CD3)/KD(CD137))，CD3(分析物)的浓度是KD值比(KD(CD3)/KD(CD137)高于CD137(固定化)浓度的10倍、50倍、100倍或200倍，可用于上面的竞争性测量。(例如，当KD值的比为0.1时，可以选择高1倍、5倍、10倍或20倍的浓度。另外，当KD值的比为10时，可以选择高100倍、500倍、1000倍或2000倍的浓度。)

在一方面，当一种抗原(例如CD3)被固定时，可以通过现有技术中已知的方法(即ELISA，ECL等)在存在另一种抗原(例如CD137)的情况下确定抗原结合分子与CD3的结合信号的衰减。在另一方面，当CD137被固定时，也可以在CD3存在下确定抗原结合分子与CD137的结合信号的衰减。当进行上述两个方面中的任何一个时，如果结合信号衰减至少50％，优选60％以上，优选70％以上，进一步优选80％以上，进一步优选90％以上，甚至更优选95％以上，则确定本发明的抗原结合分子不同时与CD3和CD137结合。

在一个实施方案中，计算了抗原结合分子的CD3(分析物)结合活性的KD值与抗原结合分子的CD137(固定化)结合活性的KD之比(KD(CD3)/KD(CD137))，CD3(分析物)的浓度是KD值比(KD(CD3)/KD(CD137)高于CD137(固定化)浓度的10倍、50倍、100倍或200倍，可用于上面的测量。(例如，当KD值的比为0.1时，可以选择高1倍、5倍、10倍或20倍的浓度。另外，当KD值的比为10时，可以选择高100倍、500倍、1000倍或2000倍的浓度。)

具体地，在使用例如ECL方法的情况下，制备了待测的生物素标记的抗原结合分子、用磺基标签标记的CD3(Ru复合物)和未标记的CD137。当待测抗原结合分子能够与CD3和CD137结合，但不同时与CD3和CD137结合时，通过将待测抗原结合分子和标记的CD3的混合物添加到固定有链霉亲和素的板上，然后进行光显影，在不存在未标记的CD137的情况下检测到磺基标签的发光信号。相反，在未标记的CD137存在下发光信号降低。发光信号的这种降低可以被量化以确定相对结合活性。可以通过使用标记的CD137和未标记的CD3类似地进行该分析。

在ALPHAScreen的情况下，待测抗原结合分子在不存在竞争CD137的情况下与CD3相互作用，从而产生520至620nm的信号。未标记的CD137与CD3竞争与待测抗原结合分子的相互作用。可以定量由于竞争而导致的荧光减少，从而确定相对结合活性。使用磺基-NHS-生物素等的多肽生物素化是本领域已知的。可以通过适当采用的方法用GST标记CD3，该方法包括例如将编码CD3的多核苷酸与编码GST的多核苷酸在框内融合；使得到的融合基因通过具有能够表达其的载体的细胞等表达，然后使用谷胱甘肽柱进行纯化。优选地，使用例如基于非线性回归分析的适于单位点竞争(one-site competition)模型的软件GRAPHPADPRISM(GraphPad Software，Inc.，San Diego)来分析所获得的信号。可以使用标记的CD137和未标记的CD3类似地进行该分析。

或者，可以采用使用荧光共振能量转移(FRET)的方法。FRET是一种激发能通过电子共振直接在彼此相邻的两个荧光分子之间转移的现象。当发生FRET时，供体(具有激发态的荧光分子)的激发能被转移到受体(位于供体附近的另一个荧光分子)，从而从供体发出的荧光消失(准确地说，荧光的寿命缩短)，反之从受体发出荧光。通过使用这种现象，可以分析是否同时结合CD3和CD137。例如，当带有荧光供体的CD3和带有荧光受体的CD137同时与待测抗原结合分子结合时，供体的荧光消失，而从受体发出荧光。因此，观察到荧光波长的变化。确认这样的抗体同时结合CD3和CD137。另一方面，如果CD3、CD137和待测抗原结合分子的混合不改变与CD3结合的荧光供体的荧光波长，则该待测抗原结合分子可被认为是能够结合CD3和CD137但不同时结合CD3和CD137的抗原结合结构域。

例如，使待测的生物素标记的抗原结合分子与供体珠子上的链霉亲和素结合，而使标记有谷胱甘肽S转移酶(GST)的CD3与受体珠子结合。在不存在竞争性第二抗原的情况下，待测抗原结合分子与CD3相互作用，以产生520至620nm的信号。未标记的第二抗原与CD3竞争与待测抗原结合分子的相互作用。可以定量由于竞争而导致的荧光减少，从而确定相对结合活性。使用磺基-NHS-生物素等的多肽生物素化是本领域已知的。可以通过适当采用的方法用GST标记CD3，该方法包括例如将编码CD3的多核苷酸与编码GST的多核苷酸在框内融合；使得到的融合基因通过具有能够表达其的载体的细胞等表达，然后使用谷胱甘肽柱进行纯化。优选地，使用例如基于非线性回归分析的适于单位点竞争(one-sitecompetition)模型的软件GRAPHPAD PRISM(GraphPad Software，Inc.，San Diego)来分析所获得的信号。

标签不限于GST标签，并且可以利用任何标签来进行，例如但不限于，组氨酸标签、MBP、CBP、Flag标签、HA标签、V5标签或c-myc标签。待测抗原结合分子与供体珠子的结合不限于使用生物素-链霉亲和素反应的结合。特别地，当待测抗原结合分子包含Fc时，可能的方法涉及使待测抗原结合分子通过供体珠子上的Fc识别蛋白例如蛋白A或蛋白G结合。

同样，当CD3和CD137如可溶性蛋白那样不在细胞膜上表达、或者二者均存在于同一细胞上时，可变区能够同时结合CD3和CD137，但不同时结合各自在不同细胞上表达的CD3和CD137，这种情况也可以通过本领域已知的方法进行测定。

具体而言，在检测与CD3和CD137同时结合的ECL-ELISA中，确认了待测抗原结合分子为阳性的，还与表达CD3的细胞和表达CD137的细胞混合。可以证明，除非抗原结合分子和这些细胞彼此同时结合，否则待测抗原结合分子不能同时结合在不同细胞上表达的CD3和CD137。该测定可以通过例如基于细胞的ECL-ELISA进行。将表达CD3的细胞预先固定在板上。在将待测抗原结合分子结合到板上之后，将表达CD137的细胞添加到板上。使用针对该抗原的磺基标签标记的抗体检测仅在表达CD137的细胞上表达的不同抗原。当抗原结合分子同时与分别在两个细胞上表达的两个抗原结合时，观察到信号。当抗原结合分子不同时与这些抗原结合时，没有观察到信号。

或者，该测定可以通过ALPHAScreen方法进行。将待测抗原结合分子与结合于供体珠子的表达CD3的细胞和结合于受体珠子的表达CD137的细胞混合。当抗原结合分子同时与分别在两个细胞上表达的两个抗原结合时，观察到信号。当抗原结合分子不同时与这些抗原结合时，没有观察到信号。

或者，该测定也可以通过Octet相互作用分析方法进行。首先，使用肽标签标记的表达CD3的细胞与识别该肽标签的生物传感器结合。将表达CD137的细胞和待测抗原结合分子置于孔中，并分析其相互作用。当抗原结合分子同时结合分别在两个细胞上表达的两个抗原时，观察到由待测抗原结合分子和表达CD137的细胞与生物传感器的结合而引起的较大波长偏移。当抗原结合分子不同时与这些抗原结合时，观察到仅由待测抗原结合分子与生物传感器的结合而引起的较小波长偏移。

代替这些基于结合活性的方法，可以进行基于生物活性的测定。例如，将表达CD3的细胞和表达CD137的细胞与待测抗原结合分子混合，并进行培养。当抗原结合分子同时与这两个抗原结合时，分别在两个细胞上表达的两个抗原通过待测抗原结合分子相互活化。因此，可以检测到活化信号的改变，例如抗原的相应下游磷酸化水平的增加。或者，由于活化而诱导了细胞因子的产生。因此，可以测量产生的细胞因子的量，从而确认是否同时与两个细胞结合。或者，由于活化而诱导了针对表达CD137的细胞的细胞毒性。或者，报告基因的表达由启动子诱导，该启动子由于活化而在CD137或CD3的信号转导途径的下游被活化。因此，可以测量产生的细胞毒性或报告蛋白的量，从而确认是否同时与两个细胞结合。

Fab分子

“Fab分子”是指由免疫球蛋白的重链(“Fab重链”)的VH和CH1结构域以及轻链(“Fab轻链”)的VL和CL结构域组成的蛋白质。

融合的

“融合的”是指组分(例如Fab分子和Fc结构域亚基)通过肽键直接或通过一个或多个肽接头连接。

“交换”Fab

“交换”Fab分子(也称为“交换fab”)是指Fab分子，其中Fab重链和轻链的可变区或恒定区被交换，即交换Fab分子包含由轻链可变区和重链恒定区组成的肽链，以及由重链可变区和轻链恒定区组成的肽链。为清楚起见，在其中Fab轻链和Fab重链的可变区被交换的交换Fab分子中，包含重链恒定区的肽链在本文中称为交换Fab分子的“重链”。相反，在其中Fab轻链和Fab重链的恒定区被交换的交换Fab分子中，包含重链可变区的肽链在本文中被称为交换Fab分子的“重链”。

“常规”Fab

与此相反，“常规”Fab分子是指天然形式的Fab分子，即包含由重链可变区和恒定区(VH-CH1)组成的重链和由轻链可变区和恒定区(VL-CL)组成的轻链。术语“免疫球蛋白分子”是指具有天然存在的抗体结构的蛋白质。例如，IgG类免疫球蛋白是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由二硫键键合的两条轻链和两条重链组成。从N末端到C末端，每条重链都有可变区(VH)，也称为可变重结构域或重链可变结构域，其后是三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)，也称为重链链恒定区。类似地，从N末端到C末端，每条轻链都有可变区(VL)，也称为可变轻链结构域或轻链可变结构域，其后是恒定轻链(CL)结构域，也称为轻链恒定区。免疫球蛋白的重链可分配到五种类型之一，称为α(IgA)、δ(IgD)、ε(IgE)、γ(IgG)或μ(IgM)，其中一些可进一步分为亚型，例如γ1(IgG1)、γ2(IgG2)、γ3(IgG3)、γ4(IgG4)、α1(IgA1)和α2(IgA2)。基于其恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白的轻链可以被分配到称为κ和λ的两种类型中的一种。免疫球蛋白基本上由两个Fab分子和Fc结构域组成，通过免疫球蛋白铰链区连接。

亲和力

“亲和力”是指分子(例如，抗原结合分子或抗体)的单个结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗原结合分子和抗原，或抗体和抗原)之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其伴侣Y的亲和力通常可以用解离常数(KD)表示，它是解离速率常数和缔合速率常数(分别为koff和kon)的比值。因此，等效亲和力可以包括不同的速率常数，只要速率常数的比率保持相同。亲和力可以通过本领域已知的公认方法测量，包括本文所述的那些。测量亲和力的一种特定方法是表面等离子共振(SPR)。

确定亲和力的方法

在某些实施方案中，本文提供的抗原结合分子或抗体对其抗原的解离常数(KD)为1μM或更小、120nM或更小、100nM或更小、80nM或更小、70nM或更小、50nM或更小、40nM或更小、30nM或更小、20nM或更小、10nM或更小、2nM或更小、1nM或更小、0.1nM或更小、0.01nM或更小、或0.001nM或更小(例如，10^-8M或更小，10^-8M至10^-13M，10^-9M至10^-13M)。在某些实施方案中，抗体/抗原结合分子对CD3、CD137或GPC3的KD值在1-40、1-50、1-70、1-80、30-50、30-70、30-80、40-70、40-80或60-80nM的范围内。

在一个实施方案中，KD通过放射性标记的抗原结合测定法(RIA)测量。在一个实施方案中，使用目的抗体的Fab版本及其抗原进行RIA。例如，Fab对抗原的溶液结合亲和力是通过在存在一系列滴定未标记抗原的情况下用最小浓度的(¹²⁵I)标记的抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的板捕获结合的抗原来测量的(参见，例如，Chen et al.,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了建立测定条件，用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕获抗Fab抗体(Cappel Labs)包被MICROTITER(注册商标)多孔板(Thermo Scientific)过夜，随后在室温(约23摄氏度)下用PBS中的2％(w/v)牛血清白蛋白封闭2至5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[¹²⁵I]-抗原与目的Fab的系列稀释液混合(例如，与在Presta et al.,Cancer Res.57:4593-4599(1997)中，抗VEGF抗体Fab-12的评估一致)。然后将目标Fab孵育过夜；然而，孵育可能会持续更长的时间(例如，约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕获板以在室温下孵育(例如，一小时)。然后除去溶液并用PBS中的0.1％聚山梨醇酯20(TWEEN-20(注册商标))洗涤板八次。当板干燥后，加入150微升/孔闪烁剂(MICROSCINT-20^TM；Packard)，并在TOPCOUNT^TM伽马计数器(Packard)上对板计数10分钟。选择产生小于或等于最大结合的20％的每个Fab的浓度用于竞争性结合测定。

根据另一个实施方案，使用BIACORE(注册商标)表面等离子体共振测定法测量Kd。例如，使用BIACORE(注册商标)-2000或BIACORE(注册商标)-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)在25℃下用固定化抗原CM5芯片以约10个响应单位(RU)进行测定。在一个实施方案中，羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片(CM5，BIACORE，Inc.)根据供应商的说明用N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化。抗原用10mM乙酸钠，pH 4.8稀释至5微克/毫升(～0.2μM)，然后以5微升/分钟的流速注射，以实现约10个响应单位(RU)的偶联蛋白。注射抗原后，注射1M乙醇胺以阻断未反应的基团。对于动力学测量，将Fab的两倍系列稀释液(0.78nM至500nM)在含0.05％聚山梨醇酯20(TWEEN-20^TM)表面活性剂(PBST)的PBS中在25℃下以约25微升/分钟的流速注射。通过同时拟合缔合和解离传感图，使用简单的一对一Langmuir结合模型(BIACORE(注册商标)评估软件版本3.2)计算缔合速率(k_on)和解离速率(k_off)。平衡解离常数(Kd)计算为比率k_off/k_on。参见，例如，Chen et al.,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果上述表面等离子共振测定的缔合速率超过10⁶M^-1s^-1，则可以通过使用荧光猝灭技术来确定缔合速率，荧光猝灭技术在25℃下在PBS中的20nM抗抗原抗体(Fab形式),pH 7.2,在存在增加的抗原浓度的情况下，如在光谱仪中测量的，例如配备停止流的分光光度计(Aviv Instruments)或带有搅拌比色皿的8000系列SLM-AMINCO^TM分光光度计(ThermoSpectronic)中，测量荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm,16nm带通)的增加或减少。

根据上述测定抗原结合分子或抗体的亲和性的方法，本领域技术人员可以对其他抗原结合分子或抗体对各种抗原的亲和性进行测定。

抗体

术语“抗体”在本文中以最广泛的含义使用并且包括各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出期望的抗原-结合活性。

抗体片段

“抗体片段”是指除完整抗体之外的分子，其包含完整抗体的一部分，与完整抗体结合的抗原结合。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')₂、双抗体、线性抗体、单链抗体分子(例如scFv)和单域抗体。对于某些抗体片段的综述，参见Hudsonet al.,Nat Med 9,129-134(2003)。对于scFv片段的综述，请参见例如Pluckthun，在ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.,Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)中；另参见WO 93/16185；以及美国专利号5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基并具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')₂片段的讨论，参见美国专利号5,869,046。双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，可以是二价或双特异性的。参见，例如，EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson etal.,Nat Med 9,129-134(2003)；和Hollinger et al.,Proc Natl Acad Sci USA 90,6444-6448(1993)。Hudson et al.,Nat Med 9,129-134(2003)中也描述了三链抗体和四链抗体。单域抗体是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见，例如，美国专利号6,248,516B1)。如本文所述，抗体片段可通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及由重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)产生。

抗体类别

抗体的“类别”是指其重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。有五类主要的抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。

除非另有说明，本文中轻链恒定区的氨基酸残基按照Kabat等人编号，重链恒定区的氨基酸残基编号按照EU编号系统，也称为EU索引编号，如Kabat et al.,Sequences ofProteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。

框架

“框架”或“FR”是指高变区(HVR)残基以外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。相应地，HVR和FR序列在VH(或VL)中一般按以下顺序出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。

人共有框架

“人共有框架”是代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选择中最常见的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。通常，序列亚组是Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,FifthEdition,NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991),vols.1-3中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，该亚组是上述Kabat等人的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，亚组是上述Kabat等人的亚组III。

嵌合抗体

术语“嵌合”抗体是指其中重链和/或轻链的一部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自不同来源或物种的抗体。类似地，术语“嵌合抗体可变结构域”是指抗体可变区，其中重链和/或轻链可变区的一部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链可变区的其余部分来自不同的来源或物种。

人源化抗体

“人源化”抗体是指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体包括基本上所有的、至少一个且通常为两个可变结构域，其中所有或基本上所有的HVR(例如CDR)对应于非人抗体的那些HVR，并且所有或基本上所有的FR对应于人抗体的那些FR。人源化抗体任选地包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体例如，非人抗体的“人源化形式”是指经过人源化的抗体。“人源化抗体可变区”是指人源化抗体的可变区。

人抗体

“人抗体”是具有与由人或人细胞产生的或源自利用人抗体库或其他人抗体编码序列的非人来源的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的这一定义明确排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。“人抗体可变区”是指人抗体的可变区。

多核苷酸(核酸)

如本文可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物，或可以通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应掺入聚合物的任何底物。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，例如甲基化的核苷酸及其类似物。核苷酸序列可能被非核苷酸成分中断。多核苷酸可包含合成后进行的修饰，例如与标记缀合。其他类型的修饰包括例如“帽”、用类似物取代一个或多个天然存在的核苷酸、核苷酸间修饰例如具有不带电荷的键的那些(例如，甲基膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)和带电荷的键(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)，含有悬垂部分的那些，例如蛋白质(例如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)，带有嵌入剂的那些(例如，吖啶，补骨脂素等)，含有螯合剂的那些(例如，金属，放射性金属，硼，氧化金属等)，含有烷基化剂的那些，带有修饰的键的那些(例如，α异头核酸等)，以及未修饰形式的多核苷酸。

此外，糖中通常存在的任何羟基可以被例如膦酸酯基团、磷酸酯基团替代，被标准保护基团保护，或被激活以制备额外核苷酸的额外键，或可以缀合到固体或半固体支撑物。5'和3'末端OH可以被磷酸化或被胺或1至20个碳原子的有机封端基团部分取代。其他羟基也可以衍生为标准保护基团。多核苷酸还可以包含本领域公知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基-、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-异头糖、差向异构糖如阿拉伯糖、木糖或来苏糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、无环类似物和碱性核苷类似物如甲基核苷。一个或多个磷酸二酯键可以被备选的连接基团替代。这些备选的连接基团包括但不限于其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酸酯”)、P(S)S(“二硫代酸酯”)、(O)NR₂(“酰胺酸酯”)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2(“甲缩醛(formacetal)”)替代的实施方案，其中每个R或R'独立地为H或取代或未取代的烷基(1-20C)，任选地包含醚(-O-)键、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。并非多核苷酸中的所有键都需要相同。前述描述适用于本文提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。

分离的(核酸)

“分离的”核酸分子是已经从其自然环境的组分中分离出来的核酸分子。分离的核酸分子还包括包含在通常含有该核酸分子的细胞中的核酸分子，但该核酸分子存在于染色体外或存在于不同于其天然染色体位置的染色体位置。

载体

如本文所用，术语“载体”是指能够使与其连接的另一种核酸增殖的核酸分子。该术语包括作为自我复制核酸结构的载体，以及并入其已被引入的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够指导与它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。可以使用病毒或电穿孔将载体引入宿主细胞。然而，载体的引入不限于体外方法。例如，也可以直接使用体内方法将载体引入受试者。

宿主细胞

术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括初级转化细胞和由其衍生的后代，不考虑传代次数。后代在核酸含量上可能与亲本细胞不完全相同，但可能包含突变。在最初转化的细胞中筛选或选择的具有相同功能或生物活性的突变后代包括在本文中。

特异性

“特异性”是指特异性结合一个或多个结合配偶体，不显示与配偶体以外的分子的任何显著结合的分子。此外，当抗原结合位点对抗原中包含的多个表位中的特定表位具有特异性时，也使用“特异性”。如果抗原结合分子与抗原特异性结合，则它也被描述为“抗原结合分子具有/显示出对/针对抗原的特异性”。当与抗原结合位点结合的表位包含在多个不同的抗原中时，包含该抗原结合位点的抗原结合分子可以与具有该表位的各种抗原结合。

抗体片段

“抗体片段”是指除完整抗体之外的分子，其包含完整抗体的一部分，与完整抗体结合的抗原结合。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')₂；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。

术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，是指具有与天然抗体结构基本相似的结构或具有包含本文定义的Fc区的重链的抗体。

可变片段(Fv)

在本文中，术语“可变片段(Fv)”是指由抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)对组成的来自抗体的抗原结合位点的最小单位。1988年，Skerra和Pluckthun发现可以通过在细菌信号序列的下游插入抗体基因并在大肠杆菌中诱导该基因的表达来从大肠杆菌周质级分制备均一且具有活性的抗体(Science(1988)240(4855)，1038-1041)。在由周质级分制备的Fv中，VH以与抗原结合的方式与VL缔合。

scFv、单链抗体和sc(Fv)₂

本文中，术语“scFv”、“单链抗体”和“sc(Fv)₂”均指包含衍生自重链和轻链的可变区而非恒定区的单个多肽链的抗体片段。一般而言，单链抗体还在VH和VL结构域之间包含多肽接头，这使得能够形成被认为允许抗原结合的所需结构。Pluckthun在“ThePharmacology of Monoclonal Antibodies，Vol.113，Rosenburg and Moore，eds.，Springer-Verlag，New York，269-315(1994)”中详细讨论了单链抗体。还参见国际专利公开WO1988/001649；美国专利号4,946,778和5,260,203。在特定的实施方案中，单链抗体可以是双特异性的和/或人源化的。

scFv是一种单链低分子量抗体，其中形成Fv的VH和VL通过肽接头连接在一起(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1988)85(16),5879-5883)。VH和VL可以通过肽接头保留在非常接近的位置。

sc(Fv)₂是单链抗体，其中两个VL和两个VH的四个可变区通过接头如肽接头连接以形成单链(J Immunol.Methods(1999)231(1-2),177-189)。两个VH和两个VL可以源自不同的单克隆抗体。此类sc(Fv)₂优选包括例如识别单个抗原中存在的两个表位的双特异性sc(Fv)₂，如Journal of Immunology(1994)152(11),5368-5374中所公开的。sc(Fv)₂可以通过本领域技术人员已知的方法来产生。例如，sc(Fv)₂可以通过经例如肽接头的接头连接scFv来制备。

在本文中，sc(Fv)₂包括两个VH单元和两个VL单元，其从单链多肽的N末端开始，以VH、VL、VH和VL([VH]-接头-[VL]-接头-[VH]-接头-[VL])的顺序排列。两个VH单元和两个VL单元的顺序不限于上述形式，并且它们可以以任何顺序布置。示例的形式为如下所列出的。

[VL]-接头-[VH]-接头-[VH]-接头-[VL]，

[VH]-接头-[VL]-接头-[VL]-接头-[VH]，

[VH]-接头-[VH]-接头-[VL]-接头-[VL]，

[VL]-接头-[VL]-接头-[VH]-接头-[VH]，

[VL]-接头-[VH]-接头-[VL]-接头-[VH]。

sc(Fv)₂的分子形式也在WO2006/132352中详细描述。根据这些描述，本领域技术人员可以适当地制备所需的sc(Fv)₂以产生本文公开的多肽复合物。

此外，本公开的抗原结合分子或抗体可以与载体聚合物例如PEG或有机化合物例如抗癌剂缀合。或者，优选将糖链添加序列插入到抗原结合分子或抗体中，使得糖链产生期望的效果。

用于连接抗体可变区的接头包括可通过基因工程引入的任意肽接头、合成接头和例如Protein Engineering,9(3),299-305,1996中公开的接头。然而，肽接头在本公开中是优选的。肽接头的长度并不是特别有限，并且可以根据目的由本领域技术人员适当地选择。长度优选为5个氨基酸以上(没有特别限制，上限通常为30个氨基酸以下，优选20个氨基酸以下)，特别优选15个氨基酸。当sc(Fv)₂包含三个肽接头时，它们的长度可以相同或不同。

例如，此类肽接头包括：

Ser，

Gly-Ser，

Gly-Gly-Ser，

Ser-Gly-Gly，

Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:91)，

Ser-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:92)，

Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:93)，

Ser-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:94)，

Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:95)，

Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:96)，

Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:97)，

Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:98)，

(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO:93))n，和

(Ser-Gly-Gly-Gly-Gly(SEQ ID NO:94))n，

其中n是1或更大的整数。本领域技术人员可以根据目的相应地选择肽接头的长度或序列。

合成接头(化学交联剂)通常用于交联肽，示例包括：

N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，

辛二酸二琥珀酰亚胺酯(DSS)，

双(磺基琥珀酰亚胺)辛二酸酯(BS3)，

二硫代双(琥珀酰亚胺丙酸酯)(DSP)，

二硫代双(磺基琥珀酰亚胺丙酸酯)(DTSSP)，

乙二醇双(琥珀酰亚胺基琥珀酸酯)(EGS)，

乙二醇双(磺基琥珀酰亚胺基琥珀酸酯)(磺基-EGS)，

酒石酸二琥珀酰亚胺基(DST)、酒石酸二磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-DST)、

双[2-(琥珀酰亚胺氧基羰基氧基)乙基]砜(BSOCOES)，和

双[2-(磺基琥珀酰亚胺氧基羰基氧基)乙基]砜(磺基-BSOCOES)。这些交联剂是可商购的。

通常，需要三个接头将四个抗体可变区连接在一起。要使用的接头可以是相同类型或不同类型的。

Fab、F(ab') ₂ 和Fab'

“Fab”由单条轻链和来自单条重链的CH1结构域和可变区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。

“F(ab')₂”或“Fab”是通过用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶等蛋白酶处理免疫球蛋白(单克隆抗体)而产生的，是指通过在存在于两条H链各自的铰链区之间的二硫键附近消化免疫球蛋白(单克隆抗体)而产生的抗体片段。例如，木瓜蛋白酶剪切在两条H链各自的铰链区之间存在的二硫键上游的IgG，以产生两个同源抗体片段，其中包含VL(L链可变区)和CL(L链恒定区)的L链通过在其C末端区域的二硫键与包含VH(H链可变区)和CHγ1(H链恒定区的γ1区)的H链片段连接。这两个同源抗体片段各自都称为Fab'。

“F(ab′)₂”由两条轻链和两条重链组成，所述两条轻链和两条重链包含CH1结构域的恒定区和CH2结构域的一部分，从而在两条重链之间形成二硫键。在本文公开的F(ab')₂可以优选如下制备。用诸如胃蛋白酶的蛋白酶部分消化完整单克隆抗体或包含所需抗原结合位点的单克隆抗体；Fc片段通过吸附到蛋白A色谱柱上而去除。蛋白酶没有特别限制，只要其可以在合适的设定酶反应条件例如pH下以选择性方式切割整个抗体以产生F(ab')₂即可。这样的蛋白酶包括例如胃蛋白酶和无花果蛋白酶。

单域抗体

在本说明书中，术语“单域抗体”不受其结构的限制，只要该结构域本身可以发挥抗原结合活性即可。已知一般抗体，例如IgG抗体，在可变区由VH和VL配对形成的状态下表现出抗原结合活性，而单域抗体自身的结构域结构可以通过自身发挥抗原结合活性而不与另一个结构域配对。通常，单域抗体的分子量相对较低，以单体形式存在。

单域抗体的实例包括但不限于先天性缺乏轻链的抗原结合分子，例如骆驼科动物的VHH和鲨鱼VNAR，以及包含抗体VH结构域的全部或部分或抗体VL结构域的全部或部分的抗体片段。作为包含抗体VH或VL结构域的全部或部分的抗体片段的单域抗体的实例包括但不限于源自人抗体VH或人抗体VL的人工制备的单域抗体，如在美国专利号6,248,516B1等中所描述的。在本发明的一些实施方案中，一个单域抗体具有三个CDR(CDR1、CDR2和CDR3)。

单域抗体可以从能够产生单域抗体的动物或通过免疫能够产生单域抗体的动物获得。能够产生单域抗体的动物的实例包括但不限于骆驼科动物和携带能够产生单域抗体的基因的转基因动物。骆驼科的动物包括骆驼、驼马(lamas)、羊驼、单峰骆驼和大羊驼(guanacos)等。携带能够产生单域抗体的基因的转基因动物的实例包括但不限于：国际公开号WO2015/143414和美国专利公开号US2011/0123527 A1中描述的转基因动物。可以将从动物获得的单域抗体的框架序列转化为人种系序列或与其相似的序列，以获得人源化单域抗体。人源化单域抗体(例如，人源化VHH)也是本发明的单域抗体的一个实施方案。

或者，可以通过ELISA、淘选等从包含单域抗体的多肽文库中获得单域抗体。包含单域抗体的多肽文库的实例包括但不限于从各种动物或人类获得的幼稚抗体文库(例如，Methods in Molecular Biology 2012 911(65-78)和Biochimica et Biophysica Acta-Proteins and Proteomics 2006 1764：8(1307-1319))，通过免疫各种动物获得的抗体文库(例如，Journal of Applied Microbiology 2014 117：2(528-536))，以及从各种动物或人类的抗体基因制备的合成抗体文库(例如，Journal of Biomolecular Screening 201621：1(35-43)，Journal of Biological Chemistry 2016 291：24(12641-12657)和AIDS2016 30:11(1691-1701))。

Fc区

术语“Fc区”或“Fc结构域”是指包含由铰链或其部分和抗体分子中的CH2和CH3结构域组成的片段的区域。IgG类的Fc区是指但不限于从例如半胱氨酸226(EU编号(在本文中也称为EU索引))到C末端或从脯氨酸230(EU编号)到C末端的区域。Fc区可以优选通过以下方式获得：例如，用蛋白水解酶例如胃蛋白酶部分消化例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4单克隆抗体，然后重新洗脱吸附在蛋白A柱或蛋白G柱上的级分。这种蛋白水解酶没有特别限制，只要该酶在适当设定的酶反应条件(例如pH)下能够消化全长抗体以限制性地形成Fab或F(ab')2即可。其实例可以包括胃蛋白酶和木瓜蛋白酶。

源自例如天然存在的IgG的Fc区可以用作本发明的“Fc区”。在本文中，天然存在的IgG是指含有与天然存在的IgG相同的氨基酸序列的多肽，并且属于基本上由免疫球蛋白γ基因编码的一类抗体。天然存在的人IgG是指例如天然存在的人IgG1，天然存在的人IgG2，天然存在的人IgG3或天然存在的人IgG4。天然存在的IgG还包括由其自发衍生的变体等。NIH出版号91-3242的Sequences of proteins of immunological interest中，将基于基因多态性的多个同种异型序列描述为人IgG1、人IgG2、人IgG3和人IgG4抗体的恒定区，其中任何一个都可以用于本发明中。特别地，人IgG1的序列可以具有作为EU编号位置356至358的氨基酸序列的DEL或EEM。

在一些实施方案中，多特异性抗原结合分子的Fc结构域由一对多肽链组成，所述多肽链包含免疫球蛋白分子的重链结构域。例如，免疫球蛋白G(IgG)分子的Fc结构域是二聚体，其每个亚基都包含CH2和CH3 IgG重链恒定结构域。Fc结构域的两个亚基能够相互稳定缔合。在一个实施方案中，本文所述的多特异性抗原结合分子包含不超过一个Fc结构域。

在本文所述的一个实施方案中，多特异性抗原结合分子的Fc结构域是IgG Fc结构域。在特定实施方案中，Fc结构域是IgG1 Fc结构域。在另一个实施方案中Fc结构域是IgG1Fc结构域。在进一步的特定实施方案中，Fc结构域是人IgG1 Fc区。

Fc受体(Fcγ受体)结合活性降低的Fc区

在某些实施方案中，与天然IgG1 Fc结构域相比，本文所述的多特异性抗原结合分子的Fc结构域表现出对Fc受体的结合亲和力降低。在一个这样的实施方案中，与天然IgG1Fc结构域(或包含天然IgG1 Fc结构域的多特异性抗原结合分子)相比，Fc结构域(或包含所述Fc结构域的多特异性抗原结合分子)表现出小于50％、优选小于20％、更优选小于10％、最优选小于5％的对Fc受体的结合亲和力。在一个实施方案中，Fc结构域(或包含所述Fc结构域的多特异性抗原结合分子)基本上不结合Fc受体。在具体实施方案中，Fc受体是Fcγ受体。在一个实施方案中，Fc受体是人Fc受体。在一个实施方案中，Fc受体是激活的Fc受体。在具体实施方案中，Fc受体是激活的人Fcγ受体，更具体地是人FcγRIIIa、FcγRI或FcγRIIa，最具体地人FcγRIIIa。

在某些实施方案中，多特异性抗原结合分子的Fc结构域包含降低Fc结构域对Fc受体的结合亲和力的一个或多个氨基酸突变。通常，相同的一个或多个氨基酸突变存在于Fc结构域的两个亚基的每一个中。在一个实施方案中，氨基酸突变降低了Fc结构域对Fc受体的结合亲和力。在一个实施方案中，氨基酸突变将Fc结构域对Fc受体的结合亲和力降低至少2倍、至少5倍或至少10倍。在存在降低Fc结构域对Fc受体的结合亲和力的多于一个氨基酸突变实施方案中，这些氨基酸突变的组合可以将Fc结构域对Fc受体的结合亲和力降低至少10倍、至少20倍、或甚至至少50倍。在一个实施方案中，与包含非工程化的Fc结构域的多特异性抗原结合分子相比，包含工程化的Fc结构域的多特异性抗原结合分子表现出小于20％，特别地小于10％，更特别地小于5％的对Fc受体的结合亲和力。在具体实施方案中，Fc受体是Fcγ受体。在一些实施方案中，Fc受体是人Fc受体。在一些实施方案中，Fc受体是激活的Fc受体。在具体实施方案中，Fc受体是激活的人Fcγ受体，更具体地人FcγRIIIa、FcγRI或FcγRIIa，最具体地人FcγRIIIa。优选地，降低与这些受体中的每一个的结合。

在一个实施方案中，降低Fc结构域对Fc受体的结合亲和力的氨基酸突变是氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc结构域包含在选自E233、L234、L235、N297、P331和P329位的组的氨基酸取代。在更具体的实施方案中，Fc结构域包含在选自L234、L235和P329位的组的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc结构域包含氨基酸取代L234A和L235A。在一个这样的实施方案中，Fc结构域是IgG1 Fc结构域，特别地是人IgG1 Fc结构域。在一个实施方案中，Fc结构域包含在P329位的氨基酸取代。在更具体的实施方案中，氨基酸取代是P329A或P329G，特别地是P329G。在一个实施方案中，Fc结构域包含在P329位的氨基酸取代和在选自E233、L234、L235、N297和P331位的另外氨基酸取代。在更具体的实施方案中，另外的氨基酸取代是E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D或P331S。在特定实施方案中，Fc结构域包含在P329、L234和L235位的氨基酸取代。在更具体的实施方案中，Fc结构域包含氨基酸突变L234A、L235A和P329G(“P329GLALA”)。在一个这样的实施方案中，Fc结构域是IgG1 Fc结构域，特别是人IgG1 Fc结构域。如PCT公开号WO2012/130831所描述，氨基酸取代的“P329GLALA”组合几乎完全消除了人IgG1 Fc结构域的Fcγ受体(以及补体)结合。WO2012/130831还描述了制备此类突变Fc结构域的方法和确定其特性如Fc受体结合或效应子功能的方法。

与IgG1抗体相比，IgG4抗体表现出对Fc受体的结合亲和力降低，效应子功能降低。因此，在一些实施方案中，本文所述的T细胞激活双特异性抗原结合分子的Fc结构域是IgG4Fc结构域，特别是人IgG4 Fc结构域。在一个实施方案中，IgG4 Fc结构域包含在S228位的氨基酸取代，特别是氨基酸取代S228P。为了进一步降低其对Fc受体的结合亲和力和/或其效应子功能，在一个实施方案中，IgG4 Fc结构域包含在L235位的氨基酸取代，特别是氨基酸取代L235E。在另一个实施方案中，IgG4 Fc结构域包含在P329位的氨基酸取代，特别是氨基酸取代P329G。在具体实施方案中，IgG4 Fc结构域包含在S228、L235和P329位的氨基酸取代，特别是氨基酸取代S228P、L235E和P329G。在PCT公开号WO2012/130831中描述了此类IgG4 Fc结构域突变和他们的Fcγ受体结合特性。

在某些实施方案中，Fc结构域的N-糖基化已被消除。在一个这样的实施方案中，Fc结构域包含在N297位的氨基酸突变，特别是用丙氨酸替代天冬酰胺的氨基酸取代(N297A)，或天冬氨酸替代天冬酰胺的氨基酸取代(N297D)。

在特别优选的实施方案中，与天然IgG1 Fc结构域相比，表现出对Fc受体的结合亲和力降低的Fc结构域是包含氨基酸取代L234A、L235A和N297A的人IgG1 Fc结构域。

可以使用本领域熟知的遗传或化学方法通过氨基酸缺失、取代、插入或修饰来制备突变Fc结构域。遗传方法可包括编码DNA序列的位点特异性诱变、PCR、基因合成等。正确的核苷酸变化可通过例如测序进行验证。

与Fc受体的结合可以容易地通过例如ELISA或使用标准仪器例如BIAcore仪器(GEHealthcare)通过表面等离子共振(SPR)测定，并且Fc受体例如可以通过重组表达获得。本文描述了合适的此类结合测定。或者，可以使用已知表达特定Fc受体的细胞系，例如表达FcγIIIa受体的人NK细胞来评估Fc结构域或包含Fc结构域的细胞激活双特异性抗原结合分子对Fc受体的结合亲和力。

Fc受体

术语“Fc受体”或“FcR”是指结合抗体Fc区的受体。在一些实施方案中，FcR是天然人FcR。在一些实施方案中，FcR是结合IgG抗体(γ受体)并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和备选的剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，主要在其细胞质结构域中不同。激活受体FcγRIIA在其细胞质结构域中包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其细胞质结构域中包含基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)。(参见，例如，Daeron,Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。例如，Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)；Capel et al.,Immunomethods 4:25-34(1994)；和de Haas et al.,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中综述了FcR。本文中的术语“FcR”涵盖了其他FcR，包括将来要鉴定的那些。

术语“Fc受体”或“FcR”还包括新生儿受体FcRn，其负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer et al.,J.Immunol.117:587(1976)和Kim et al.,J.Immunol.24:249(1994))和免疫球蛋白稳态的调节。测量与FcRn的结合的方法是已知的(参见，例如，Ghetie和Ward.,Immunol.Today 18(12):592-598(1997)；Ghetie et al.,Nature Biotechnology,15(7):637-640(1997)；Hinton et al.,J.Biol.Chem.279(8):6213-6216(2004)；WO 2004/92219(Hinton et al.)。

可以例如在转基因小鼠或表达人FcRn的转染的人细胞系中，或在施用具有变体Fc区的多肽的灵长类动物中测定与人FcRn的体内结合和人FcRn高亲和力结合多肽的血浆半衰期。WO 2000/42072(Presta)描述了与FcR结合增加或减少的抗体变体。另见，例如，Shields et al.J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。

Fcγ受体

Fcγ受体是指能够与单克隆IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的Fc结构域结合的受体，包括属于基本上由Fcγ受体基因编码的蛋白质家族的所有成员。在人类中，该家族包括FcγRI(CD64)，包括同种型FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc；FcγRII(CD32)，包括同种型FcγRIIa(包括同种异型H131和R131)、FcγRIIb(包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)和FcγRIIc；和FcγRIII(CD16)，包括同种型FcγRIIIa(包括同种异型V158和F158)和FcγRIIIb(包括同种异型FcγRIIIb-NA1和FcγRIIIb-NA2)；以及所有未鉴定的人Fcγ受体、Fcγ受体同种型及其同种异型。然而，Fcγ受体不限于这些例子。不限于此，Fcγ受体包括来源于人、小鼠、大鼠、兔和猴的那些。Fcγ受体可以来源于任何生物体。小鼠Fcγ受体包括但不限于FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII(CD16)和FcγRIII-2(CD16-2)，以及所有未鉴定的小鼠Fcγ受体、Fcγ受体同种型及其同种异体。此类优选的Fcγ受体包括例如人FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32)、FcγRIIB(CD32)、FcγRIIIA(CD16)和/或FcγRIIIB(CD16)。FcγRI的多核苷酸序列和氨基酸序列分别如RefSeq登录号NM_000566.3和RefSeq登录号NP_000557.1所示；FcγRIIA的多核苷酸序列和氨基酸序列分别如RefSeq登录号BC020823.1和RefSeq登录号AAH20823.1所示；FcγRIIB的多核苷酸序列和氨基酸序列分别如RefSeq登录号BC146678.1和RefSeq登录号AAI46679.1所示；FcγRIIIA的多核苷酸序列和氨基酸序列分别如RefSeq登录号BC033678.1和RefSeq登录号AAH33678.1所示；和FcγRIIIB的多核苷酸序列和氨基酸序列分别如RefSeq登录号BC128562.1和RefSeq登录号AAI28563.1所示。Fcγ受体是否具有与单克隆IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的Fc结构域的结合活性可以通过ALPHA筛选(放大发光邻近均相测定)、基于表面等离子共振(SPR)的BIACORE方法和除上述FACS和ELISA形式外的其他方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010)测定。

同时，“Fc配体”或“效应配体”是指与抗体Fc结构域结合形成Fc/Fc配体复合物的分子，优选多肽。该分子可以衍生自任何生物体。Fc配体与Fc的结合优选诱导一种或多种效应子功能。此类Fc配体包括但不限于Fc受体、Fcγ受体、Fcα受体、Fcβ受体、FcRn、Clq和C3、甘露聚糖结合凝集素、甘露糖受体、葡萄球菌蛋白A、葡萄球菌蛋白G和病毒Fcγ受体。Fc配体还包括Fc受体同源物(FcRH)(Davis et al.,(2002)Immunological Reviews 190,123-136)，它们是与Fcγ受体同源的Fc受体家族。Fc配体还包括与Fc结合的未鉴定的分子。

Fcγ受体结合活性

Fc结构域与Fcγ受体FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、FcγRIIIA和/或FcγRIIIB中任一种的结合活性受损可以通过使用上述FACS和ELISA形式，以及ALPHA筛选(放大发光邻近均相测定)和基于表面等离子共振(SPR)的BIACORE方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010)来评估。

ALPHA筛选是通过ALPHA技术基于下述原理使用两种类型的珠子进行的：供体珠子和受体珠子。仅当与供体珠子连接的分子与与受体珠子连接的分子发生生物学相互作用并且两个珠子位置非常接近时，才会检测到发光信号。在激光束的激发下，供体珠子中的光敏剂将珠子周围的氧转化为激发的单线态氧。当单线态氧在供体珠子周围扩散并到达附近的受体珠子时，引发在受体珠子内的化学发光反应。该反应最终导致发光。如果连接到供体珠子的分子不与连接到受体珠子的分子相互作用，则供体珠子产生的单线态氧不会到达受体珠子，并且不会发生化学发光反应。

例如，生物素标记的抗原结合分子或抗体固定在供体珠子上，而谷胱甘肽S-转移酶(GST)标记的Fcγ受体固定在受体珠子上。在不存在包含竞争性突变Fc结构域的抗原结合分子或抗体的情况下，Fcγ受体与包含野生型Fc结构域的抗原结合分子或抗体相互作用，结果诱导520至620nm的信号。具有未标记的突变Fc结构域的抗原结合分子或抗体与包含野生型Fc结构域的抗原结合分子或抗体竞争与Fcγ受体的相互作用。可以通过量化竞争导致的荧光减少来确定相对结合亲和力。使用磺基-NHS-生物素等对抗原结合分子或抗体如抗体进行生物素化的方法是已知的。将GST标签添加到Fcγ受体的适当方法包括以下方法：将编码Fcγ受体的多肽和GST框内融合，使用引入了携带基因的载体的细胞表达融合基因，然后使用谷胱甘肽柱纯化。可以优选地分析感应信号，例如，通过使用诸如GRAPHPADPRISM(GraphPad；San Diego)之类的软件基于非线性回归分析拟合至单点竞争模型。

用于观察它们相互作用的物质之一作为配体固定在传感器芯片的金薄层上。当光线照射到传感器芯片的背面，使金薄层和玻璃之间的界面发生全反射时，反射光的强度会在某个位置部分降低(SPR信号)。将用于观察它们相互作用的另一种物质作为分析物注入传感器芯片的表面。当分析物与配体结合时，固定化配体分子的质量会增加。这会改变传感器芯片表面上溶剂的折射率。折射率的变化导致SPR信号的位置偏移(相反，解离将信号移回原始位置)。在Biacore系统中，将上述位移量(即传感器芯片表面的质量变化)绘制在垂直轴上，因此质量随时间的变化显示为测量数据(传感图)。动力学参数(结合速率常数(ka)和解离速率常数(kd))由传感图曲线确定，亲和力(KD)由这两个常数之间的比值确定。BIACORE方法中优选使用抑制测定。该抑制测定法的实例描述在Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010中。

多特异性抗原结合分子的生产和纯化

本文所述的多特异性抗原结合分子包含两种不同的抗原结合部分(例如，“第一抗原结合部分”和“第二抗原结合部分”)，其被融合到Fc域的两个亚基中的一个或另一个，因此Fc结构域的两个亚基通常包含在两条不同的多肽链中。这些多肽的重组共表达和随后的二聚化导致两种多肽的几种可能组合。为了提高重组生产中多特异性抗原结合分子的产率和纯度，因此在多特异性抗原结合分子的Fc结构域中引入促进所需多肽缔合的修饰将是有利的。

因此，在特定实施方案中，本文所述的多特异性抗原结合分子的Fc结构域包含促进Fc结构域的第一和第二亚基缔合的修饰。人IgG Fc结构域的两个亚基之间最广泛的蛋白质-蛋白质相互作用的位点是在Fc结构域的CH3结构域中。因此，在一个实施方案中，所述修饰在Fc结构域的CH3结构域中。

在具体的实施方案中，所述修饰是所谓的“杵臼”修饰，包括在Fc结构域的两个亚基之一中的“杵”修饰和在Fc结构域的两个亚基的另一个中的“臼”修饰。

例如在US 5,731,168；US7,695,936；Ridgway et al.,Prot Eng 9,617-621(1996)和Carter,J Immunol Meth 248,7-15(2001)中描述了杵臼技术。通常，该方法包括在第一多肽的界面处引入突起(“杵”)和在第二多肽的界面中引入相应的空腔(“臼”)，使得突起可以定位在空腔中以便促进异二聚体形成并阻碍同二聚体形成。通过用较大的侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换来自第一多肽界面的小氨基酸侧链来构建突起。通过用较小的氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换大的氨基酸侧链，在第二个多肽的界面中产生与突起大小相同或相似的补偿空腔。

因此，在特定实施方案中，在多特异性抗原结合分子的Fc结构域的第一亚基的CH3结构域中，氨基酸残基被具有更大侧链体积的氨基酸残基取代，从而在第一亚基的CH3结构域内产生突起，所述突起可定位在第二亚基的CH3结构域内的空腔中，并且在Fc结构域的第二亚基的CH3结构域中，氨基酸残基被具有较小侧链体积的氨基酸残基取代，从而在第二亚基的CH3结构域内产生空腔，第一亚基的CH3结构域内的突起可定位在该空腔内。

可以通过改变编码多肽的核酸来形成突起和空腔，例如通过位点特异性诱变或肽合成。

在具体实施方案中，在Fc结构域的第一亚基的CH3结构域中，位置366处的苏氨酸残基被色氨酸残基(T366W)替换，并且在Fc结构域的第二亚基的CH3结构域中，位置407处的酪氨酸残基被缬氨酸残基取代(Y407V)。在一个实施方案中，在Fc结构域的第二亚基中，位置366处的苏氨酸残基另外被丝氨酸残基取代(T366S)并且位置368处的亮氨酸残基被丙氨酸残基取代(L368A)。

在又一个实施方案中，在Fc结构域的第一亚基中，位置354处的丝氨酸残基另外被半胱氨酸残基取代(S354C)，并且在Fc结构域的第二亚基中，位置349的酪氨酸残基另外被半胱氨酸残基取代(Y349C)。这两个半胱氨酸残基的引入导致在Fc结构域的两个亚基之间形成二硫键，进一步稳定二聚体(Carter,J Immunol Methods 248,7-15(2001))。

在其他实施方案中，用于促进H链之间以及L和H链之间具有期望组合的缔合的其他技术可以应用于本发明的多特异性抗原结合分子。

例如，通过在抗体H链(CH2或CH3)的第二恒定区或第三恒定区的界面处引入静电排斥来抑制不希望的H链缔合的技术可应用于多特异性抗体缔合(WO2006/106905)。

在通过在CH2或CH3的界面引入静电排斥来抑制意外H链缔合的技术中，在H链的另一个恒定区的界面接触的氨基酸残基的实例包括对应于CH3区中EU编号的位置356、439、357、370、399和409处的残基。

更具体地，实例包括包含两种类型的H链CH3区的抗体，其中第一H链CH3区中的1至3对氨基酸残基选自如下(1)至(3)中所示的氨基酸残基对，携带相同类型的电荷：(1)包含在H链CH3区中EU编号位置356和439处的氨基酸残基；(2)包含在H链CH3区中EU编号位置357和370处的氨基酸残基；和(3)包含在H链CH3区中EU编号位置399和409处的氨基酸残基。

此外，该抗体可以是其中与上述第一H链CH3区不同的第二H链CH3区中的氨基酸残基对选自上述(1)至(3)的氨基酸残基对的抗体，其中对应于上述在所述第一H链CH3区中携带相同类型的电荷的(1)至(3)的氨基酸残基对的1至3对氨基酸残基，与上面提到的第一H链CH3区的相应氨基酸残基带有相反的电荷。

上述(1)至(3)中所示的每个氨基酸残基在缔合期间彼此接近。本领域技术人员可以使用市售软件通过同源性建模等找出与所需H链CH3区或H链恒定区中的上述(1)至(3)的氨基酸残基相对应的位置，并且这些位置的氨基酸残基可以适当地进行修饰。

在上述抗体中，“带电荷的氨基酸残基”优选地选自例如包括在以下任一组中的氨基酸残基：

(a)谷氨酸(E)和天冬氨酸(D)；和

(b)赖氨酸(K)、精氨酸(R)和组氨酸(H)。

在上述抗体中，“携带相同电荷”是指，例如，2个以上的氨基酸残基全部选自上述组(a)和(b)的任一个中包含的氨基酸残基。术语“带相反电荷”是指，例如，当两个或更多个氨基酸残基中的至少一个氨基酸残基选自上述组(a)和(b)的任一个中所包含的氨基酸残基时，剩余的氨基酸残基选自包含在其他组中的氨基酸残基。

在优选的实施方案中，上述抗体可以是它们的第一H链CH3区和第二H链CH3区通过二硫键交联。

在本发明中，进行修饰的氨基酸残基不限于上述抗体可变区或抗体恒定区的氨基酸残基。本领域技术人员可以使用市售软件通过同源建模等方法鉴定在突变多肽或异源多聚体中形成界面的氨基酸残基；然后可以对这些位置的氨基酸残基进行修饰以调节缔合。

此外，其他已知技术也可用于形成本发明的多特异性抗原结合分子。具有不同序列的多肽的缔合可以通过使用链交换工程化结构域CH3的互补结合来有效诱导，所述链交换工程化结构域CH3是通过将抗体的H链CH3的一部分改变为相应的IgA衍生序列并将相应的IgA衍生序列引入另一个H链CH3的互补部分而产生的(Protein Engineering Design&Selection,23；195-202,2010)。这种已知的技术也可用于有效地形成目标多特异性抗原结合分子。

此外，WO 2011/028952、WO2014/018572和Nat Biotechnol.2014Feb；32(2):191-8中描述了，使用抗体CH1和CL缔合以及VH和VL缔合的抗体生产技术；WO2008/119353和WO2011/131746中描述了，联合使用单独制备的单克隆抗体(Fab臂交换)生产双特异性抗体的技术；WO2012/058768和WO2013/063702中描述了用于调节抗体重链CH3之间的缔合的技术；WO2012/023053中描述了，用于生产由两种类型的轻链和一种类型的重链组成的多特异性抗体的技术；Christoph et al.(Nature Biotechnology Vol.31,p 753-758(2013))描述了，使用两种细菌细胞株生产多特异性抗体的技术，所述细菌细胞株单独表达包含单个H链和单个L链的抗体链之一；并且这些可用于形成多特异性抗体。

或者，即使在不能有效地形成目标多特异性抗体的情况下，也可以通过从产生的抗体中分离纯化目标多特异性抗体来获得本发明的多特异性抗体。例如，已经报道了通过将氨基酸取代引入两种H链的可变区而赋予等电点差异，从而能够通过离子交换色谱法纯化两种类型的同源形式和目标异聚抗体的方法(WO2007114325)。迄今为止，作为纯化异聚抗体的方法，已经报道了使用蛋白A纯化包含与蛋白A结合的小鼠IgG2a H链和不与蛋白A结合的大鼠IgG2b H链的异二聚抗体的方法(WO98050431和WO95033844)。此外，异二聚体抗体可以通过使用包含将作为IgG蛋白A结合位点的EU编号位置435和436的氨基酸残基替换为Tyr、His等的H链而有效地单独纯化异二聚体抗体，产生不同蛋白A亲和力的氨基酸，或使用具有不同蛋白A亲和力的H链来改变每个H链与蛋白A的相互作用，然后使用蛋白A柱纯化。

此外，Fc区C末端异质性得到改善的Fc区可以适当地用作本发明的Fc区。更具体地，本发明提供通过从构成源自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc区的两个多肽的氨基酸序列中缺失如EU编号指定的位置446处的甘氨酸和位置447处的赖氨酸而产生的Fc区。

如本文所述制备的多特异性抗原结合分子可以通过本领域已知的技术例如高效液相色谱、离子交换色谱、凝胶电泳、亲和色谱、尺寸排阻色谱等来纯化。用于纯化特定蛋白质的实际条件将部分取决于诸如净电荷、疏水性、亲水性等因素，并且对于本领域技术人员来说是显而易见的。对于亲和色谱纯化，可以使用与多特异性抗原结合分子结合的抗体、配体、受体或抗原。例如，对于本发明的多特异性抗原结合分子的亲和色谱纯化，可以使用具有蛋白A或蛋白G的基质。顺序蛋白A或G亲和色谱和尺寸排阻色谱可用于分离多特异性抗原结合分子。多特异性抗原结合分子的纯度可以通过多种众所周知的分析方法中的任一种来确定，包括凝胶电泳、高效液相色谱等。

抗体依赖性细胞介导的细胞毒性

“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指一种细胞毒性形式，其中分泌的Ig与某些细胞毒性细胞(例如NK细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)结合，使这些细胞毒性效应细胞与带有抗原的靶细胞特异性结合，随后用细胞毒素杀死靶细胞。介导ADCC的原代细胞、NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)第464页的表3总结了造血细胞上的FcR表达。为了评估目标分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测定，例如美国专利号5,500,362或5,821,337或美国专利号6,737,056(Presta)中描述的那些。用于此类测定的有用的效应细胞包括PBMC和NK细胞。或者或另外地，例如在诸如Clynes et al.PNAS(USA)95:652-656(1998)中公开的动物模型中，在体内评估目标分子的ADCC活性。

补体依赖性细胞毒性

“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指在补体存在下靶细胞的裂解。经典补体途径的激活是通过补体系统的第一组分(C1q)与抗体(适当的亚类)结合而启动的，这些抗体与它们的同源抗原结合。为了评估补体激活，可以进行CDC测定，例如，如Gazzano-Santoro etal.,J.Immunol.Methods 202:163(1996)中所描述的。例如，在美国专利号6,194,551B1和WO 1999/51642中描述了具有改变的Fc区氨基酸序列的多肽变体(具有变体Fc区的多肽)和增加或减少的C1q结合能力。另见，例如，Idusogie et al.J.Immunol.164:4178-4184(2000)。

T细胞依赖性细胞毒性

“T细胞依赖性细胞毒性”或“TDCC”是指一种细胞毒性形式，其中抗原结合分子与靶细胞上表达的抗原和在T细胞上表达的另一种抗原两者结合，从而将T细胞重新定向到靠近靶细胞的位置，因为针对靶细胞的细胞毒性被诱导是由于T细胞。评估T细胞依赖性细胞毒性的方法体外TDCC测定法，也在本说明书的“T细胞依赖性细胞毒性测量”部分中进行了描述。

测量T细胞依赖性细胞毒性

在抗原结合分子与GPC3和CD3/CD137两者结合的实施方案中，优选使用下述方法作为评估或确定由本公开的抗原结合分子与表达GPC3的细胞接触引起的T细胞依赖性细胞毒性(TDCC)的方法，本公开的抗原结合分子中的抗原结合位点结合所述表达GPC3的细胞。用于评估或确定体外细胞毒活性的方法包括用于确定细胞毒T细胞等的活性的方法。本公开的抗原结合分子是否具有诱导T细胞介导的细胞毒性的活性可以通过已知方法确定(参见例如Current protocols in Immunology,Chapter 7.Immunologic studies inhumans,Editor,John E,Coligan et al.,John Wiley&Sons,Inc.,(1993))。在细胞毒性测定中，将能够与GPC3不同且在细胞中不表达的抗原CD3/CD137结合的抗原结合分子作为对照抗原结合分子。以相同方式测定对照抗原结合分子。然后，通过测试本公开的抗原结合分子是否表现出比对照抗原结合分子更强的细胞毒活性来评估活性。

同时，例如通过以下程序评估或确定体内抗肿瘤功效。将表达本公开的抗原结合分子中的抗原结合位点所结合的抗原的细胞皮内或皮下移植至非人动物受试者。然后，从移植当天或之后，每天或每隔几天将测试抗原结合分子施用于静脉或腹腔。随时间测量肿瘤大小。肿瘤大小变化的差异可以定义为细胞毒活性。如在体外测定中，施用对照抗原结合分子。当施用本公开的抗原结合分子的组中的肿瘤大小小于施用对照抗原结合分子的组时，可以判断本公开的抗原结合分子具有细胞毒活性。

MTT方法和同位素标记的摄取到细胞中的胸苷的测量优选用于评估或确定与本公开的抗原结合分子接触以抑制表达抗原的细胞的生长的效果，所述抗原与抗原结合分子中的抗原结合位点结合。同时，可以优选使用与上述用于评估或确定体内细胞毒活性的相同方法来评估或确定抑制细胞体内生长的活性。

本公开的抗体或抗原结合分子的TDCC可以通过本领域已知的任何合适的方法来评估。例如，TDCC可以通过乳酸脱氢酶(LDH)释放测定来测量。在该测定中，靶细胞(例如表达GPC3的细胞)与T细胞(例如PBMC)在存在测试抗体或抗原结合分子的情况下孵育，使用合适的试剂测量已从靶细胞释放的被T细胞杀死的LDH的活性。通常，细胞毒活性计算为与抗体或抗原结合分子孵育产生的LDH活性相对于100％杀死靶细胞(例如通过用Triton-X处理裂解)产生的LDH活性的百分比。如果如上所述计算出的细胞毒活性较高，则确定测试抗体或抗原结合分子具有较高的TDCC。

另外地或备选地，例如，TDCC也可以通过实时细胞生长抑制测定来测量。在该测定中，靶细胞(例如表达GPC3的细胞)与T细胞(例如PBMC)在存在测试抗体或抗原结合分子的情况下在96孔板上孵育，并通过本领域已知的方法监测靶细胞的生长，例如通过使用合适的分析仪器(例如xCELLigence实时细胞分析仪)。根据CGI(％)＝100-(CIAb×100/CINoAb)给出的公式，由细胞指数值确定细胞生长抑制率(CGI：％)。“CIAb”表示在特定实验时间内含有抗体或抗原结合分子的孔的细胞指数值，“CINoAb”表示没有抗体或抗原结合分子的孔的平均细胞指数值。如果抗体或抗原结合分子的CGI率高，即具有显著的阳性值，则可以说该抗体或抗原结合分子具有TDCC活性。

在一个方面，本公开的抗体或抗原结合分子具有T细胞活化活性。T细胞活化可以通过本领域已知的方法来测定，例如使用工程化T细胞系的方法，该工程化T细胞系响应于其活化而表达报告基因(例如荧光素酶)(例如Jurkat/NFAT-RE报告细胞系(T细胞活化生物测定法，Promega))。在该方法中，靶细胞(例如表达GPC3的细胞)与T细胞在测试抗体或抗原结合分子的存在下培养，然后通过适当的方法测量报告基因表达产物的水平或活性作为T细胞活化的指标。当报告基因是荧光素酶基因时，可以测量由荧光素酶与其底物之间的反应引起的发光作为T细胞活化的指数。如果如上所述测量的T细胞活化较高，则确定测试抗体或抗原结合分子具有较高的T细胞活化活性。

药物组合物

在一个方面，本公开提供了一种药物组合物，其包含本公开的抗原结合分子或抗体。在某些实施方案中，本公开的药物组合物诱导T细胞依赖性细胞毒性，换言之，本公开的药物组合物是用于诱导细胞细胞毒性的治疗剂。在某些实施方案中，本公开的药物组合物是用于治疗和/或预防癌症的药物组合物。在某些实施方案中，本公开的药物组合物是用于治疗和/或预防GPC3阳性癌症或表达GPC3的癌症。

如果需要，本公开的药物组合物、用于诱导细胞细胞毒性的治疗剂、细胞生长抑制剂或抗癌剂可以与不同类型的抗原结合分子或抗体一起配制。例如，针对表达抗原的细胞的细胞毒作用可以通过本公开的多种抗原结合分子或抗体的混合物来增强。

本文所述的抗原结合分子或抗体的药物制剂通过将具有所需纯度的这种抗原结合分子或抗体与一种或多种任选的药学上可接受的载体混合以冻干制剂或水溶液的形式来制备(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980))。药学上可接受的载体在所采用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲铵氯化物；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；形成盐的反离子，例如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，例如聚乙二醇(PEG)。本文的示例性的药学上可接受的载体进一步包括间质药物分散剂，例如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，例如rHuPH20(HYLENEX(注册商标)，Baxter International,Inc.)。某些示例性sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20，描述于美国专利公开号2005/0260186和2006/0104968中。在一方面，sHASEGP与一种或多种另外的糖胺聚糖酶例如软骨素酶组合。

示例性冻干抗体制剂描述于美国专利号6,267,958中。水性抗体制剂包括美国专利号6,171,586和WO2006/044908中描述的那些，后者的制剂包括组氨酸-乙酸盐缓冲液。

本文的制剂还可以包含多于一种活性成分，如需要用于治疗特定适应症，优选地那些具有互补活性且不会相互产生不利影响的活性成分。此类活性成分适当地以对预期目的有效的量组合存在。

如有必要，本发明的抗原结合分子或抗体可包封在微胶囊(由羟甲基纤维素、明胶、聚[甲基丙烯酸甲酯]等制成的微胶囊)中，制备到胶体药物递送系统的组分中(脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)(例如，参见"Remington's PharmaceuticalScience 16th edition",Oslo Ed.(1980))。此外，将试剂制备为缓释剂的方法是已知的，并且这些方法可以应用于本公开的抗原结合分子(J.Biomed.Mater.Res.(1981)15,267-277；Chemtech.(1982)12,98-105；美国专利号3773719；欧洲专利申请号EP58481和EP133988；Biopolymers(1983)22,547-556)。

本公开的药物组合物、细胞生长抑制剂或抗癌剂可以口服或肠胃外施用至患者。肠胃外施用是优选的。具体而言，这种施用方法包括注射、经鼻施用、经肺施用和经皮施用。注射包括例如静脉内注射、肌肉内注射、腹膜内注射和皮下注射。例如，本公开的药物组合物、用于诱导细胞细胞毒性的治疗剂、细胞生长抑制剂或抗癌剂可以通过注射局部或全身施用。此外，可以根据患者的年龄和症状选择合适的施用方法。对于每次施用，施用剂量可以选自例如0.0001mg至1,000mg/kg体重的范围。或者，剂量可选自例如0.001mg/身体至100,000mg/身体每名患者。然而，本公开的药物组合物的剂量不限于这些剂量。

优选地，本公开的药物组合物包含如本文所述的抗原结合分子或抗体。一方面，该组合物是用于诱导细胞细胞毒性的药物组合物。在另一个方面，该组合物是用于治疗或预防癌症的药物组合物。优选地，癌症是GPC3阳性癌症。本公开的药物组合物可用于治疗或预防癌症。因此，本公开提供了一种治疗或预防癌症的方法，其中将本文所述的抗原结合分子或抗体施用于有需要的患者。

本公开还提供了通过使表达GPC3的细胞与结合GPC3的本公开的抗原结合分子接触来破坏表达GPC3的细胞或GPC3阳性癌症或抑制细胞生长的方法。本公开的抗原结合分子所结合的细胞没有特别限制，只要它们表达GPC3即可。

在本公开中，“接触”可以例如通过将本公开的抗原结合分子添加到体外培养的表达GPC3的细胞的培养基中来进行。在这种情况下，添加的抗原结合分子可以以适当的形式使用，例如通过冻干等制备的溶液或固体。当本公开的抗原结合分子作为水溶液添加时，该溶液可以是仅含有抗原结合分子的纯水溶液，也可以是含有例如上述表面活性剂、赋形剂、着色剂、调味剂、防腐剂、稳定剂、缓冲剂、悬浮剂、等渗剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、流动性促进剂和矫味剂的溶液。加入浓度没有特别限制；然而，培养基中的最终浓度优选在1pg/ml至1g/ml的范围内，更优选1ng/ml至1mg/ml，还更优选1μg/ml至1mg/ml。

在本公开的另一个实施方案中，“接触”也可以通过向体内移植了表达GPC3的细胞的非人动物或具有内源性表达GPC3的癌细胞的动物施用来进行。施用方法可以是口服或肠胃外。特别优选肠胃外施用。具体而言，肠胃外施用方法包括注射、经鼻施用、经肺施用和经皮施用。注射包括例如静脉内注射、肌肉内注射、腹膜内注射和皮下注射。例如，本公开的药物组合物、用于诱导细胞细胞毒性的治疗剂、细胞生长抑制剂或抗癌剂可以通过注射局部或全身施用。此外，可以根据动物受试者的年龄和症状适当地选择施用方法。

当抗原结合分子作为水溶液施用时，该溶液可以是仅含有抗原结合分子的纯水溶液，也可以是含有例如上述表面活性剂、赋形剂、着色剂、调味剂、防腐剂、稳定剂、缓冲剂、悬浮剂、等渗剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、流动性促进剂和矫味剂的溶液。对于每次施用，施用剂量可以选自例如0.0001mg至1,000mg/kg体重的范围。或者，对于每名患者，剂量可选自例如0.001mg/身体至100,000mg/身体。然而，本公开的抗原结合分子的剂量不限于这些实施例。

本公开还提供了用于本公开的方法中的试剂盒，其包含本公开的抗原结合分子或通过本公开的方法产生的抗原结合分子。试剂盒可以与额外的药学上可接受的载体或介质，或描述如何使用试剂盒的说明书等一起包装。

在本发明的另一个方面，提供了含有用于治疗、预防和/或诊断上述病症的材料的生产制品。生产制品包括容器和容器上的标签或与容器相关的包装插页。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以由多种材料例如玻璃或塑料制成。容器容纳组合物，该组合物本身或与有效治疗、预防和/或诊断病症的另一种组合物组合，并且可以具有无菌入口(例如，容器可以是静脉注射溶液袋或具有可通过皮下注射针刺穿塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性成分是本发明的抗体。

标签或包装插页表明该组合物用于治疗所选择的病症。此外，该生产制品可以包括(a)其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包含本发明的抗体；和(b)其中含有组合物的第二容器，所述组合物含有进一步的细胞毒性或其他治疗剂。本发明的该实施方案中的生产制品可进一步包括包装插页，所述包装插页说明该组合物可用于治疗特定病症。或者或另外地，生产制品可进一步包括第二(或第三)容器，所述容器包含药学上可接受的缓冲剂，例如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。它可以进一步包括从商业和用户角度看需要的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。

包装插页

术语“包装插页”用于指通常包含在治疗产品商业包装中的说明，其中包含有关使用此类治疗产品的适应症、用法、剂量、施用、联合治疗、禁忌症和/或警告的信息。

药物制剂

术语“药物制剂”或“药物组合物”是指这样一种制剂，其形式允许包含在其中的活性成分的生物活性是有效的，并且不包含对将要施用该制剂的受试者具有不可接受的毒性的额外成分。

药学上可接受的载体

“药学上可接受的载体”是指药物制剂中除活性成分外的对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。

治疗

如本文所用，“治疗(treatment")”(及其语法变体，例如“治疗(treat")”或“治疗(treating)”)是指临床干预以试图改变被治疗个体的自然过程，并且可以用于预防或在临床病理学过程期间进行。治疗的理想效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、减轻疾病的任何直接或间接病理后果、预防转移、降低疾病进展速度、改善或缓解疾病状态、缓解或改善预后。在一些实施方案中，本公开的抗原结合分子或抗体用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进展。

癌症

术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物的生理状况，其通常以不受调节的细胞生长/增殖为特征。

在某些实施方案中，癌症是表达GPC3或GPC3阳性的癌症。

肿瘤

术语“肿瘤”是指所有肿瘤细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，以及所有癌前和癌细胞和组织。术语“癌症”、“癌性”、“细胞增殖性病症”、“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中并不相互排斥。

其他试剂和治疗

本文所述的多特异性抗原结合分子可以与治疗中的一种或多种其他试剂组合施用。例如，本文所述的多特异性抗原结合分子可以与至少一种另外的治疗剂共同施用。术语“治疗剂”包括为治疗需要这种治疗的个体的症状或疾病而施用的任何试剂。这种额外的治疗剂可以包含任何适用于被治疗的特定适应症的活性成分，优选具有互补活性且不会相互产生不利影响的那些活性成分。在某些实施方案中，另外的治疗剂是免疫调节剂、细胞生长抑制剂、细胞粘附抑制剂、细胞毒剂、细胞凋亡激活剂或增加细胞对凋亡诱导剂敏感性的试剂。在特定的实施方案中，另外的治疗剂是抗癌剂，例如微管破坏剂、抗代谢物、拓扑异构酶抑制剂、DNA嵌入剂、烷化剂、激素疗法、激酶抑制剂、受体拮抗剂、肿瘤细胞凋亡的激活剂，或抗血管生成剂。

此类其他试剂适当地以对预期目的有效的量组合存在。此类其他试剂的有效量取决于所使用的多特异性抗原结合分子的量、病症或治疗的类型以及上面讨论的其他因素。通常以与本文所述相同的剂量和施用途径使用多特异性抗原结合分子，或以本文所述剂量的约1％至99％，或以通过经验/临床确定为合适的任何剂量和任何途径使用。

上述的此类联合疗法包括联合施用(其中两种或更多种治疗剂包含在相同或单独的组合物中)和单独施用，在这种情况下，本发明的多特异性抗原结合分子的施用可以在另外治疗剂和/佐剂的施用之前、同时和/或随后发生。如本文所述的多特异性抗原结合分子也可以与放射疗法组合使用。

本文引用的所有文献通过引用纳入本文。

以下是本公开的方法和组合物的实施例。应当理解，鉴于上面提供的大体描述，可以实践各种其他实施方案。

实施例

[实施例1]用于改善对肿瘤细胞的体外细胞毒性的亲本双Fab H183L072的亲和力成熟变体的筛选

1.1亲和力成熟变体的序列

在WO2019111871(通过引用并入本文)中公开了提供结合CD3和CD137但不同时结合CD3和CD137的免疫球蛋白可变区(Fab)的概念(双Fab)。为了增加WO2019111871中公开的亲本双Fab H183L072(重链：SEQ ID NO:1；轻链：SEQ ID NO:57)的结合亲和力，使用H183L072作为模板来在可变区上引入单个或多个突变来生成1,000多种双Fab变体。使用Expi293(Invitrogen)表达抗体，并通过蛋白质A纯化和随后的凝胶过滤(如果需要进行凝胶过滤的话)进行纯化。具有多个突变的22种代表性双Fab变体的序列列于表4和表6-1至表6-6中，并在实施例1.2.2(表7-1和7-2)中使用Biacore T200仪器(GE Healthcare)在25摄氏度和/或37摄氏度评估了对CD3和CD137的结合亲和力和动力学，如以下所述。

(表4)

(表6-1)

(表6-2)

(表6-3)

(表6-4)

(表6-5)

(表6-6)

1.2.亲和力成熟变体的结合动力学信息

1.2.1人CD3和CD137的表达和纯化

人CD3复合物的γ和ε亚基(人CD3eg接头)通过29聚体接头连接，并将Flag标签融合到γ亚基的C末端(SEQ ID NO∶102，表3和5)。使用FreeStyle293F细胞系(ThermoFisher)瞬时表达该构建体。使用装有QHP树脂(GE Healthcare)的柱子浓缩表达人CD3eg接头的条件培养基，然后将其施加到FLAG标签亲和色谱。收集含有人CD3eg接头的级分，然后将其置于用1x D-PBS平衡的Superdex 200凝胶过滤柱(GE Healthcare)上。然后合并含有人CD3eg接头的级分。使用FreeStyle293F细胞系(Thermo Fisher)瞬时表达在其C末端带有六组氨酸(His标签)和生物素受体肽(BAP)的人CD137细胞外结构域(ECD)(SEQ ID NO：103，表3和5)。将表达人CD137 ECD的条件培养基施加到HisTrap HP柱(GE Healthcare)，并用含咪唑(Nacalai)的缓冲液洗脱。收集含有人CD137 ECD的级分，然后将其置于用1x D-PBS平衡的Superdex 200凝胶过滤柱(GE Healthcare)上。然后合并含有人CD137 ECD的级分，并储存在-80℃下。

(表3)

抗原名称	SEQ表
		人CD3eg接头	102
人CD137ECD	103

(表5)

1.2.2对人CD3和CD137的亲和力测量

使用Biacore 8K仪器(GE Healthcare)在25摄氏度下评估双Fab抗体(Dual-Ig)对人CD3的结合亲和力。使用胺偶联试剂盒(GE Healthcare)，将抗人Fc(GE Healthcare)固定在CM4传感器芯片的所有流通池上。将抗体捕获到抗Fc传感器表面上，然后将重组人CD3或CD137注射到流通池上。在包含20mM ACES、150mM NaCl、0.05％吐温20、0.005％NaN₃的ACESpH 7.4中制备所有抗体和分析物。每个周期用3M MgCl₂再生传感器表面。通过使用Biacore透视评估软件2.0版(GE Healthcare)处理数据并将其拟合到1:1结合模型来确定结合亲和力。CD137结合亲和力测定在相同条件下进行，除了测定温度设置为37℃。双Fab抗体对重组人CD3和CD137的结合亲和力在表7-1和7-2中示出。如表7-1和7-2所示，与H183/L072相比，双Fab变体对CD3和CD137显示出不同的结合动力学。

(表7-1)

(表7-2)

1.2.3用双FabAE05(H1643L0581)和AE15(H2594L0581)对CD3和CD137的非同时结合

进行Biacore串联阻断测定以表征双IgAb对CD3和CD137的非同时结合。该测定在含有20mM ACES、150mM NaCl、0.05％吐温20、0.005％NaN₃的ACES pH 7.4缓冲液中在25℃在Biacore T200仪器(GE Healthcare)上进行。使用胺偶联试剂盒(GE Healthcare)将抗人Fc(GE Healthcare)固定在CM4传感器芯片的所有流通池上。抗体被捕获到抗Fc传感器表面，然后将8μM CD3注射到流动池上，然后在存在8μM CD3的情况下以相同的方式注射8μMCD137。第二次注射的结合反应增加表明与不同互补位(paratopes)结合，因此是同时结合相互作用；而第二次注射的结合反应没有增强或降低表明与相同或重叠或相邻的互补位结合，因此是非同时结合相互作用。

该测定的结果如图1所示。xGPC3/DuAlaE05-xSG1350k1349hV11和xGPC3DuAlaE15-xSG1350kSG1349hV11均显示第二次注射的结合反应降低，这表明与CD3和CD137的非同时(non-simultaneous)结合。

如与单独的CD3结合相比，两种mAb都观察到从CD3到CD137的结合转换，如通过解离阶段较慢的解离速率所显示的。xGPC3/DuAlaE05-xSG1350k1349hV11和xGPC3DuAlaE15-xSG1350kSG1349hV11均显示CD137结合的缓慢解离速率和CD3结合的快速解离速率。已知与重叠表位结合的抗原可以相互替代(Abdiche YN,Yeung AY,Ni I,Stone D,Miles A,Morishige W,et al.,2017,Antibodies Targeting Closely Adjacent or MinimallyOverlapping Epitopes Can Displace One Another.PLoS ONE 12(1):e0169535.)。

1.3.三特异性抗体的产生和序列

通过利用FAST-Ig(WO2013065708)或CrossMab技术(WO2017055539)产生了一条臂靶向GPC3和另一臂具有对CD3和CD137的双靶向功能的三特异性抗体(抗GPC3/双-Fab三特异性抗体)(图2)。Fc区是FcγR沉默和去糖基化的。三特异性抗体中各Fv区的靶抗原见表8。各结合结构域的命名规则见图2所示，对应的SEQ ID NO如表9和表10所示，且序列如表11-1至11-12所示。所有抗体均通过在Expi293细胞(Invitrogen)中瞬时表达以三特异性形式表达，并根据参考实施例1进行纯化。

(表8)

Ab名称	Fv A	Fv B	形式	Fc(杵)	Fc(臼)
						GPC3/DualAE05-SG1363k1364hV11	GPC3	DualAE05	FAST-Ig	SG1363kV11Fc	SG1364hV11Fc
GPC3KE/DualAE05EK-SG1363k1365hV11	GPC3KE	DualAE05EK	FAST-Ig	SG1363kV11Fc	SG1365hV11Fc
						GPC3/DualAE05-SG1364k1363hV11	GPC3	DualAE05	FAST-Ig	SG1364kV11Fc	SG1363hV11Fc
GPC3EK/DualAE05KE-SG1365k1363hV11	GPC3EK	DualAE05KE	FAST-Ig	SG1365kV11Fc	SG1363hV11Fc
						GPC3/DualAE15-SG1363k1364hV11	GPC3	DualAE15	FAST-Ig	SG1363kV11Fc	SG1364hV11Fc
GPC3KE/DualAE15EK-SG1363k1365hV11	GPC3KE	DualAE15EK	FAST-Ig	SG1363kV11Fc	SG1365hV11Fc
						GPC3/DualAE15-SG1364k1363hV11	GPC3	DualAE15	FAST-Ig	SG1364kV11Fc	SG1363hV11Fc
GPC3EK/DualAE15KE-SG1365k1363hV11	GPC3EK	DualAE15KE	FAST-Ig	SG1365kV11Fc	SG1363hV11Fc
						xGPC3/DualAE05-xSG1350k1349hV11	xGPC3	DualAE05	CrossMab	xSG1350kV11Fc	SG1349hV11Fc
xGPC3/DualAE15-xSG1350k1349hV11	xGPC3	DualAE15	CrossMab	xSG1350kV11Fc	SG1349hV11Fc
						xGPC3/183H072L-xSG1350k1349hV11	xGPC3	183H072L	CrossMab	xSG1350kV11Fc	SG1349hV11Fc
xGPC3/DualAE15-xSG1356k1355hV11	xGPC3	DualAE15	CrossMab	xSG1356kV11Fc	SG1355hV11Fc
						xGPC3/DualAE05-xSG1356k1355hV11	xGPC3	DualAE05	CrossMab	xSG1356kV11Fc	SG1355hV11Fc
xGPC3/DualAE05-xSG1386k1385hV11	xGPC3	DualAE05	CrossMab	xSG1386kV11Fc	SG1385hV11Fc
						xGPC3/DualAE15-xSG1386k1385hV11	xGPC3	DualAE15	CrossMab	xSG1386kV11Fc	SG1385hV11Fc
xCtrl/DualAE05-xSG1350k1349hV11	xlC17	DualAE05	CrossMab	xSG1350kV11Fc	SG1349hV11Fc

(表9)

(表10)

(表11-1)

(表11-2)

(表11-3)

(表11-4)

(表11-5)

(表11-6)

(表11-7)

(表11-8)

(表11-9)

(表11-10)

(表11-11)

(表11-12)

[实施例2]来自亲代双-Fab H183L072的亲和力成熟的双-Fab变体对肿瘤细胞的体外细胞毒性评价

2.1.在体外评估亲和力成熟的双-Fab变体的CD3激动活性

为了评估亲和力成熟(affinity maturation)导致的CD3激动活性，进行了NFAT-luc2 Jurkat荧光素酶测定。简言之，将在细胞膜上表达人GPC3的4×10³细胞/孔SK-pca60细胞(参考实施例2)用作靶细胞并与2.0×10⁴细胞/孔的NFAT-luc2 Jurkat细胞(E:T比率为5)在0.02nM、0.2nM和2nM三特异性抗体存在下共培养24小时。变体分为图3上图中的板1和图3下图中的板2。24小时后，根据制造商的说明用Bio-Glo荧光素酶测定系统(Promega，G7940)检测荧光素酶活性。使用GloMax(注册商标)Explorer System(Promega#GM3500)检测发光(单位)，并使用Graphpad Prism 7绘制捕获值。包括2nM浓度的亲代三特异性抗体GPC3/H183L072和双特异性抗体GPC3/CD3ε。图3显示大多数变体具有相似的CD3激动剂活性。特别是在2nM时，变体具有与亲代H183L072相似的活性。图3上图显示板1中的所有变体具有相似的CD3激动活性。图3下图显示H1610L939具有稍弱的CD3激动剂活性，而H2591L581在板2中的变体中具有最强的CD3激动活性。

2.2.在体外评估亲和力成熟的双-Fab变体的CD137激动活性

为了评估哪种抗体变体由于亲和力成熟可能导致强烈的CD137激动活性，将GloResponseTM NF-kappa B-Luc2/CD137 Jurkat细胞系(Promega#CS196004)作为效应细胞，同时与上述相似，SK-pca60细胞系(参考实施例2)用作靶细胞。将4.0x10³细胞/孔SK-pca60细胞(靶细胞)和2.0x10⁴细胞/孔NF-kappaB-Luc2/CD137 Jurkat(效应细胞)以E:T比为5添加到白底96孔测定板(Costar,3917)的每个孔中。将抗体以0.5nM、2.5nM和5nM浓度添加到每个孔中，在37℃、5％CO₂、37℃孵育5小时。根据制造商的说明，用Bio-Glo萤光素酶测定系统(Promega,G7940)检测表达的萤光素酶。使用GloMax(注册商标)Explorer System(Promega#GM3500)检测发光(单位)，并使用Graphpad Prism 7绘制捕获值。

如图4所示，抗体变体分为板1和板2。与用作阴性对照的GPC3/CD3ε相比，两个板中的所有变体都具有可检测的CD137激动活性。亲和力成熟前的亲代抗体，GPC3/H183L072还被用作两个板的对照。如图4所示，在对CD137结合的亲和力成熟后，所有变体都比亲本抗体GPC3/H183L072显示出更强的CD137激动抗体。因此，板1中的GPC3/H1643L581和GPC3/H868L581以及板2中的GPC3/H2594L581和GPC3/H2591L581是导致更强CD137激动活性的最优(top)变体。而板1中的GPC3/H1550L918和板2中的GPC3/H1610L581和GPC3/H1610L939等变体显示出较弱的CD137活性。总之，图3和图4显示GPC3/H1643L581、GPC3/H2594L581、GPC3/H868L581和GPC3/H2591L581似乎在Jurkat细胞中具有强活性，而GPC3/H1610L939在变体中具有较弱的活性。

如图5所示，抗体变体分为板1和板2，其中GPC3/H0868L581和GPC3/H1643L0581变体作为板间对照。与GPC3/CD3ε相比，两个板中的所有变体都具有可检测的CD137激动活性。因此，GPC3/H1643L581、GPC3/H1571L581和GPC3/H1573L581是导致板1中更强的CD137激动活性的最优变体，而板2中的GPC3/H1572L581、GPC3/H0868L581和GPC3/H1595L0581导致更强的CD137激动活性，而GPC3/H888L581和GPC3/H1673L581等变体显示出较弱的CD137活性。

2.3.亲和力成熟变体的体外细胞毒性评价

为了将CD3和/或CD137激活的观察结果扩展到体外细胞毒性，使用人外周血单核的细胞(mononuclear cells)对先前描述的亲和力成熟变体对SK-pca60细胞的T细胞依赖的细胞毒性(TDCC)活性进行评估。

2.3.1.冷冻人PBMC的制备

将含有商业购买的PBMC(STEMCELL Technologies.)的冷冻管置于37℃的水浴中以解冻细胞。然后将细胞分配到含有9mL培养基(用于培养靶细胞的培养基)的15mL falcon管中。然后将细胞悬浮液在室温以1,200rpm离心5分钟。轻轻吸出上清液，加入新鲜的温热培养基进行再悬浮，用作人PBMC溶液。

2.3.2.由亲和力成熟的抗GPC3/双-Fab三特异性抗体诱导的TDCC活性的测量

在存在PBMC的情况下，通过使用xCELLigence实时细胞分析仪(RocheDiagnostics)观察肿瘤细胞生长抑制率来评估细胞毒活性。图6显示了抗GPC3亲和力成熟的双-Fab三特异性抗体的TDCC活性。SK-pca60细胞系用作靶细胞。将靶细胞从培养皿中分离出来，通过将细胞调整为3.5x10³个细胞/孔，将细胞以100微升/孔的等分试样接种到E-plate96(Roche Diagnostics)中，并使用xCELLigence实时细胞分析仪开始对细胞生长进行测量。24小时后，将板移开，将50微升以每一种浓度(从5nM开始的3倍连续稀释，即0.19nM、0.56nM、1.67nM和5nM)制备的相应抗体添加到板中。在室温反应15分钟后，以效应子(effector)：靶标比率为0.5加入50微升(实施例2.3.1)中制备的新鲜人PBMC溶液(即1.75x10³个细胞/孔)并使用xCELLigence实时细胞分析仪重新开始测量细胞生长。该反应在37℃的5％二氧化碳气体条件进行。由于CD137信号增强T细胞存活并防止激活诱导的细胞死亡，因此以低E:T比率进行了TDCC测定。可能需要较长时间才能观察到由CD137激活产生的较优细胞毒性。因此，在添加PBMC大约120小时后，使用以下等式确定细胞生长抑制(CGI)率(％)。计算中使用的从xCELLigence实时细胞分析仪获得的细胞指数值是一个归一化值，其中将抗体添加前即刻的时间点的细胞指数值定义为1。

细胞生长抑制率(％)＝(A-B)x 100/(A-1)

A代表未添加抗体(仅含有靶细胞和人PBMC)的孔中细胞指数值的平均值，B代表靶孔中细胞指数值的平均值。检测以一式三份进行。

亲和力成熟变体与上述实施例一样分为2个板，其中GPC3/H1643L581作为内部板对照，在图6中用于参考。在变体中的两个板中，尽管大多数变体显示出相似的TDCC活性，但可以观察到H1643L581在0.56nM和1.67nM的较低浓度显示出相对更强的TDCC活性。在0.56nM浓度，图6a显示GPC3/H2591L581相对较弱，而图6b显示GPC3/H1610L939相对较弱。

如图7所示，具有比GPC3/CD3ε更强的细胞毒性的亲和力成熟变体包括5nM和10nM抗体浓度的GPC3/H1643L581、GPC3/H1571L581和GPC3/H1595L581。这表明与GPC3/CD3ε相比，与CD137的结合有助于改善这些变体的细胞毒性。GPC3/H0868L581、GPC3/H1572L581等变体在5nM时表现出比GPC3/CD3ε更弱的细胞毒性。

2.3.3.使用亲和力成熟的抗GPC3/双-Fab三特异性抗体测量细胞因子释放

为了进一步确认抗体的体外效力，还评估了他们的细胞因子释放。收获在实施例2.3.2中在48小时进行类似的TDCC测定的上清液并评估细胞因子的存在。由于大多数抗体显示出与如图3所示的GPC3/CD3ε相似的CD3激动活性，因此将GPC3/CD3ε添加到该测定中以评估由于与CD137的协同活性而导致的细胞因子释放。类似地，GPC3/H1643L581用作内部板对照。使用细胞计数珠阵列(CBA)Human Th1/T2 Cytokine kit II(BD Biosciences#551809)评估总细胞因子释放。评估了IFNγ(图8)、IL-2(图9)和IL-6(图10)。

如图8和图9所示，GPC3/H2591L581和GPC3/H1643L581是最优的2个变体，他们在板1中在5nM和1.67nM时产生高IFNγ和IL-2。在板2中，GPC3/H1610L939、GPC3/H2594L581和GPC3/H1643L581在5nM时表现出相对较强的细胞因子释放。然而，只有GPC3/H1643L581在1.67nM时表现出较强的细胞因子释放。至于图10中所示的IL-6水平，除了GPC3/H2591L581在0.56nM和0.19nM时显示较低水平的IL-6之外，所有变体都显示出与板1中的GPC3/CD3ε相似的水平。同样在板2中，所有变体都显示出与GPC3/H1643L581相似的细胞因子释放水平。总之，与GPC3/CD3ε相比，DualFab变体可以显示出改善的IFNγ和IL-2水平，而不会显著增加IL-6水平。

总之，亲和力成熟的变体显示出更强的CD137激动活性，其可引发与细胞因子释放相对应的TDCC活性。特别是，变体相对于GPC3/CD3ε显示出改善的IFNγ和IL-2水平。

2.3.4.使用AE05和AE15 CrossMab Ab测量TDCC活性

在存在PBMC的情况下，通过使用xCELLigence实时细胞分析仪(RocheDiagnostics)观察肿瘤细胞生长抑制率来评估细胞毒活性。图11显示了实施例1.3中制备的AE05和AE15 CrossMab抗体的TDCC活性。SK-pca60细胞系用作靶细胞。将靶细胞从培养皿中分离出来，通过将细胞调整为3.5x10³个细胞/孔，将细胞以100微升/孔的等分试样接种到E-plate96(Roche Diagnostics)中，并使用xCELLigence实时细胞分析仪开始对细胞生长进行测量。24小时后，将板移开，将50微升以每一种浓度(从5nM开始的5倍连续稀释，即0.008、0.04、0.2、1和5nM)制备的相应抗体添加到板中。在室温反应15分钟后，以效应子：靶标比率为0.5加入50微升(实施例2.3.1)中制备的新鲜人PBMC溶液(即1.75x10³个细胞/孔)并使用xCELLigence实时细胞分析仪重新开始测量细胞生长。该反应在37℃的5％二氧化碳气体条件进行。由于CD137信号增强T细胞存活并防止激活诱导的细胞死亡，因此以低E：T比率进行了TDCC测定。可能需要较长时间才能观察到由CD137激活产生的较优细胞毒性。因此，在添加PBMC大约140小时后，使用以下等式确定细胞生长抑制(CGI)率(％)。计算中使用的从xCELLigence实时细胞分析仪获得的细胞指数值是一个归一化值，其中将抗体添加前即刻的时间点的细胞指数值定义为1。

细胞生长抑制率(％)＝(A-B)x100/(A-1)

A代表未添加抗体(仅含有靶细胞和人PBMC)的孔中细胞指数值的平均值，B代表靶孔中细胞指数值的平均值。检测以一式两份进行。

如图11所示，AE05和AE15 CrossMab抗体显示针对SK-pca60细胞系的剂量依赖性TDCC活性。AE05在0.2nM浓度显示出比AE15稍强的TDCC活性。

[实施例3]GPC3/CD3/人CD137(2+1)三特异性抗体和抗GPC3/双(1+1)三特异性抗体的脱靶细胞毒性评价

3.1.制备抗GPC3/CD137xCD3(2+1)三特异性抗体

为了研究独立于靶点的细胞毒性和细胞因子释放，利用CrossMab和FAE(Fab臂交换)技术生成三特异性抗体(图12和13)。如上所述，用CrossMab生成四价IgG样分子，抗体A(mAb A)，其每个臂具有两个结合结构域，导致一个分子中有四个结合结构域。二价IgG，抗体B(mAb B)与常规IgG的形式相同。mAb A和mAb B的Fc区都是FcγR沉默的，对FCγ受体的亲和力减弱，去糖基化并适用于FAE。构建了六种三特异性抗体。六种三特异性抗体中每个Fv区的靶抗原见表12。mAb A、mAb B和mAb AB各自结合结构域的命名规则如图13所示。以产生各自的三特异性抗体的mAb A和mAb B的配对，mAb AB和他们的SEQ ID NO显示在表13和表14中。WO2005/035584A1中描述的抗体CD3D(2)i121(缩写为AN121)被用作抗CD3抗体。通过上述方法表达和纯化表13和14中描述的三特异性抗体。

(表12)

每个抗体臂的靶标

mAb AB的名称	Fv A1	Fv A2	Fv B
				GPC3/CD137xCD3	抗-CD137	抗-CD3e	抗-GPC3
Ctrl/CD137xCD3	抗-CD137	抗-CD3e	Ctrl

(表13)

表12中描述的抗体的每个可变序列的SEQ ID NO

(表14)

表12和13中描述的抗体可变区的氨基酸序列

3.2.评估GPC3/CD137xCD3(2+1)三特异性抗体的结合

使用BiacoreT200仪器(GE Healthcare)在37℃评估三特异性抗体对人CD3和CD137的结合亲和力。使用胺偶联试剂盒(GE Healthcare)将抗人Fc抗体(GE Healthcare)固定在CM4传感器芯片的所有流通池上。抗体被捕获到抗Fc传感器表面，然后将重组人CD3或CD137注射到流动池上。所有抗体和分析物均在含有20mM ACES、150mM NaCl、0.05％吐温20、0.005％NaN₃的ACES pH 7.4中制备。在每个循环中用3M MgCl₂再生传感器表面。通过使用BiacoreT200评估软件2.0版(GE Healthcare)处理数据并将数据拟合到1:1结合模型来确定结合亲和力。

三特异性抗体对重组人CD3和CD137的结合亲和力显示在表15中。

(表15)

通过Biacore测量的表3.1中描述的三特异性抗体对人CD137或CD3的结合亲和力

3.3.评估GPC3/CD137xCD3三特异性抗体和抗GPC3/双-Fab三特异性抗体对人 CD137表达细胞的脱靶细胞毒性

为了研究相比于三特异性2+1抗体形式(GPC3/CD137xCD3、GPC3/CtrlxCD3)，H183L072的亲和力成熟是否可能导致潜在的脱靶细胞毒性，对亲和力成熟的变体进行相同的评估，其中表达hCD3的Jurkat细胞与表达hCD137的CHO细胞共培养。在0.5nM、5nM和50nM三特异性抗体的存在下，5.0x10³个细胞/孔的表达hCD137的CHO(图15)或亲代CHO(图14)与2.5x10⁴NFAT-luc2 Jurkat细胞共培养24小时。图6a显示当与亲代CHO细胞共培养时，所有三特异性抗体均未对Jurkat细胞进行非特异性激活。然而，观察到三特异性2+1形式抗体GPC3/CD137xCD3和Ctrl/CD137xCD3都可以在表达hCD137的CHO细胞存在的情况下激活Jurkat细胞。当与表达hCD137的CHO细胞共培养时，1+1形式的亲和力成熟变体不会导致Jurkat细胞的激活。总之，这表明三特异性形式的GPC3/CD137xCD3可导致与靶标或肿瘤抗原结合无关的Jurkat细胞激活，即使在CD137结合的亲和力成熟后也会产生与GPC3/双(1+1)形式不同的脱靶细胞毒性。

3.4.评估PBMC中GPC3/CD137xCD3三特异性抗体和GPC3/双-Fab三特异性抗体的脱靶细胞因子释放

还使用人PBMC溶液评估了三特异性形式的脱靶毒性的比较。简而言之，将如实施例2.3.1中所述制备的2.0x10⁵PBMC与80nM、16nM和3.2nM的三特异性抗体在不存在靶细胞的情况下孵育48小时。由于任何抗体均未检测到IL-2，上清液中的IL-6、IFNγ和TNFα水平显示在图16至18中。细胞因子释放的测量以与实施例2.3.3中所述类似地进行。类似于实施例2，将亲和力成熟的变体分成2个平板。如图16至18所示，GPC3/CD137xCD3而不是抗GPC3/双-Fab导致PBMC释放IFNγ(图16)、TNFα(图17)和IL-6(图18)。这些结果表明GPC3/CD137xCD3三特异性形式导致PBMC在没有靶细胞的情况下非特异性激活。最后，数据显示双-Fab三特异性1+1形式可以赋予靶特异性效应细胞激活而没有脱靶毒性。

[实施例4]GPC3/CD3ε双特异性抗体和抗GPC3/双-Fab(1+1)三特异性抗体的体内功效评价

4.1.抗GPC3/双-Fab、GPC3/CD3ε和GPC3/CD137双特异性抗体制备

通过如实施例1.3中所述的crossmab技术或通过根据(Proc Natl Acad SciUSA.2013Mar 26；110(13):5145-5150)中描述的方法的Fab臂交换(FAE)产生用于体内功效研究的抗体。GPC3/CD3ε、GPC3/H1643L0581、GPC3/H1644L0939和GPC3/CD137抗体由FAE产生，且包含对Fcγ受体亲和力减弱的小鼠Fc。GPC3/CD3ε包含一个靶向GPC3的臂，而另一臂靶向人CD3。GPC3/CD137包含一个靶向GPC3的臂，而另一臂靶向人CD137。GPC3/H1643L0581和GPC3/H1644L0939包含一个靶向人GPC3的臂，而另一臂对人CD3和CD137具有双靶向特性。GPC3/H1643L0581-BS11ab由FAE生成，并包含Fcγ受体亲和力减弱的人Fc，具有一个靶向GPC3的臂，和对CD3和CD137具有双靶向特性的另一臂。可变区序列见表10和表4。

4.2.CD137/CD3双人源化小鼠的产生

人CD137敲入(KI)小鼠品系是通过将小鼠内源性Cd137基因组区域替换为人CD137基因组序列使用小鼠胚胎干细胞产生的。人CD3 EDG替换小鼠建立为一种品系，其中CD3复合物的所有三种成分——CD3e、CD3d和CD3g——都被他们的人对应物CD3E、CD3D和CD3G替换(Scientific Rep.2018；8:46960)。通过将人CD137KI小鼠与人CD3 EDG替换小鼠杂交建立CD137/CD3双人源化小鼠品系。

4.3.LLC1/hGPC3细胞系的制备

用pCXND3-hGPC3转染小鼠癌细胞系LL/2(LLC1)(ATCC)，并用500μg/ml G418进行单细胞克隆分离。选择的克隆(LLC1/hGPC3)被证实表达hGPC3。

4.4.用hCD3/hCD137小鼠评估抗GPC3/双-Fab三特异性抗体的体内功效

4.4.1.用hCD3/hCD137小鼠评估抗GPC3/双-Fab三特异性抗体的体内功效

在使用LLC1/hGPC3模型的GPC3/H1644L0939的功效测试中，进行了以下测试。将LLC1/hGPC3(1x10⁶个细胞)移植到hCD3/hCD137小鼠的腹股沟皮下区域。移植日定义为第0天。移植后第9天，根据小鼠的体重和肿瘤大小随机化分组。在随机化当天，GPC3/H1643L0581、GPC3/H1644L0939或GPC3/CD3ε抗体通过尾状静脉以5mg/kg的剂量静脉内施用。抗体仅施用一次。每3-4天测量一次肿瘤体积和体重。对于IL-6分析，小鼠在治疗后2小时取血。根据制造商的方案，用Bio-Plex Pro Mouse Cytokine Th1 Panel分析血浆样品。

结果，GPC3/H1643L0581组和GPC3/H1644L0939组比GPC3/CD3ε组更清楚地观察到抗肿瘤活性(图20)。如图21所示，与GPC3/H1643L0581组和GPC3/CD3ε组相比，GPC3/H1644L0939组显示出较少的IL-6产生。

在另一项体内功效评估中，将LLC/hGPC3细胞移植到hCD3/hCD137小鼠的右侧。在第9天，根据小鼠的肿瘤体积和体重将小鼠随机化分组，并静脉内注射实施例4.1中制备的载体或抗体。每周测量两次肿瘤体积。对于IL-6分析，小鼠在治疗后2小时取血。根据制造商的方案，用Bio-Plex Pro Mouse Cytokine Th1 Panel分析血浆样品。如图22和23所示，与GPC3/CD3ε组相比，GPC3/双组显示出更强的抗肿瘤活性和更少的IL-6产生。

4.4.2.与亲代抗体相比，评估抗GPC3/双-Fab三特异性抗体的体内功效

在LLC1/hGPC3癌症模型中测试实施例4.1中制备的抗GPC3/双-Fab抗体和亲代抗体的抗肿瘤活性。将LLC1/hGPC3(3x10⁶个细胞)移植到hCD3/hCD137小鼠的腹股沟皮下区域。移植日定义为第0天。移植后第13天，根据小鼠体重和肿瘤体积对小鼠随机化分组，并静脉内注射赋形剂(含0.05％吐温的PBS)，5mg/kg xGPC3/Dual183H072L-xSG1350kSG1349hV11、5mg/kg xGPC3/DuAlaE15-xSG1350kSG1349hV11、5mg/kg xGPC3/DuAlaE15-xSG1356kSG1355hV11、5mg/kg xGPC3/DuAlaE05-xSG1350kSG1349hV11或5mg/kgxGPC3/DuAlaE05-xSG1356kSG1355hV11的任一种。

结果，四种抗GPC3/双-Fab抗体比xGPC3/Dual183H072L-xSG1350kSG1349hV11抗体显示出更强的功效(图24)。

4.4.3.评估使用CrossMab或FAE制备的抗GPC3/双-Fab的体内功效

在小鼠肝脏Hepa1-6/hGPC3癌症模型中测试了实施例4.1中使用CrossMab或FAE制备的抗GPC3/双-Fab抗体的抗肿瘤活性。具体地，xGPC3/DuAlaE05-xSG1350kSG1349hV11是以CrossMab形式产生的，而GPC3/H1643L0581-BS11ab是通过FAE技术与人Fc产生的。为了获得Hepa1-6/hGPC3细胞系，通过本领域技术人员熟知的方法将人GPC3基因整合到小鼠肝癌细胞系Hepa1-6(ATCC No.CRL-1830)的染色体中。将Hepa1-6/hGPC3(1x10⁷个细胞)移植到hCD3/hCD137小鼠的腹股沟皮下区域。移植日定义为第0天。移植后第7天，根据小鼠体重和肿瘤体积将小鼠随机化分组，并静脉内注射赋形剂(含0.05％吐温的PBS)，0.2mg/kgxGPC3/DuAlaE05-xSG1350kSG1349hV11或0.2mg/kg GPC3/H1643L0581-BS11ab的任一种。

结果，xGPC3/DuAlaE05-xSG1350kSG1349hV11显示出比GPC3/H1643L0581-BS11ab抗体更强的功效，这表明crossmab形式的抗GPC3/双-Fab比FAE形式的抗GPC3/双-Fab表现出更好的功效(图25)。

4.4.3.1用CrossMab或FAE制备的抗GPC3/双-Fab体内功效评估中的抗体血浆浓度

xGPC3/DuAlaE05-xSG1350kSG1349hV11和GPC3/H1643L0581-BS11ab的循环水平量化如下。在注射后第4天从每组中的七只动物中收集血液。通过在4℃以1,900xg离心10分钟获得肝素化血浆样品。通过电化学发光(ECL)免疫测定法测量小鼠血浆中两种抗GPC3/双-Fab抗体的浓度。所有操作均在室温进行。将人核心磷脂酰肌醇聚糖-3(hGPC3)重组蛋白(内部制备)固定在未包被的MULTI-ARRAY标准板(Meso Scale Discovery)上一小时。之后，将板与含有5％牛血清白蛋白的封闭溶液一起孵育1小时。制备了1.50、0.500、0.167、0.0556、0.0185、0.00617和0.00206微克/毫升的校准曲线样品和稀释100倍或更多的小鼠血浆样品。随后，将样品分配到固定有hGPC3的板中，并静置一小时。然后，将生物素化的抗人IgG特异性抗体(Jackson ImmunoResearch)添加到板中并孵育一小时。随后，加入标记链霉亲和素(Meso Scale Discovery)的SULFO-TAG，在室温反应30分钟。ECL测量由SECTOR S 600(Meso Scale Discovery)进行。使用分析软件SOFTmax PRO(Molecular Devices)计算小鼠血浆中的浓度。

结果，xGPC3/DuAlaE05-xSG1350kSG1349hV11在给药后第4天的平均血浆浓度比GPC3/H1643L0581-BS11ab高1.46倍，这表明crossmab形式比FAE形式显示出更好的PK概况(图26)。

4.5.用HuNOG小鼠评估抗GPC3/双-Fab三特异性抗体的体内功效

实施例4.1制备的抗GPC3/双-Fab抗体、GPC3/CD3ε双特异性抗体和GPC3/CD137双特异性抗体的抗肿瘤活性在人肝sk-pca-13a癌症模型中进行了测试。GPC3/CD3ε双特异性抗体还与GPC3/CD137双特异性抗体的组合进行了测试。将Sk-pca-13a细胞皮下移植到NOG人源化小鼠中。

为了获得sk-pca-13a细胞系，将人GPC3基因通过本领域技术人员熟知的方法整合到人肝癌细胞系SK-HEP-1(ATCC No.HTB-52)的染色体中。

NOG雌性小鼠购自In-Vivo Science。对于人源化，对小鼠进行亚致死照射，然后在1天后注射100,000个人脐带血细胞(ALLCELLS)。16周后，将sk-pca-13a细胞(1x10⁷个细胞)与Matrigel ^TM Basement Membrane Matrix(Corning)混合并移植到人源化NOG小鼠的右侧。移植日定义为第0天。在第19天，根据肿瘤体积和体重对小鼠进行随机化分组，并静脉内注射赋形剂(含有0.05％吐温的PBS)、5mg/kg GPC3/CD3ε，5mg/kg GPC3/H1643L0581，或5mg/kg GPC3/CD3ε和5mg/kg GPC3/CD137的组合的任一种。

结果，抗GPC3/双-Fab(GPC3/H1643L0581)比GPC3/CD3ε显示出更高的抗肿瘤活性(图19)。

[实施例5]抗GPC3/双-Fab(1+1)三特异性抗体的抗体形式和Fc选择

如实施例1.3中所述产生抗-GPC3/双-Fab三特异性抗体。如实施例5.1、5.2和5.3所述评估抗体纯度、结合动力学和表达水平。

为了控制抗体轻链的正确配对，使用如图2、表8和表9所示的CrossMab(WO2017055539)或FAST-Ig(WO2013065708)技术。对于CrossMab Ab，一个臂的VH和VL区被交换，而带电荷突变被引入另一臂的CH1和CL区域，以对错误配对的轻链产生静电排斥。对于FAST-Ig抗体，将突变引入每个臂的Fab区对错误配对的轻链产生静电排斥。

5.1.评估CrossMab和FAST-Ig突变的纯度

每个样品在含有0.4375％甲基纤维素溶液；2.5％Pharmalyte，pH 5-8；2.5％Pharmalyte pH 8-10.5；3.75M尿素；12.5mM精氨酸；12.5mM IDA；0.625％pI标记5.85和0.625％pI标记9.99的主混合物中稀释至0.085mg/mL。然后将样品加载到Maurice C.分析仪(Protein Simple，San Jose，CA)上，并在1,500V聚焦1分钟，然后在3,000V聚焦6分钟。在280nm的UV吸光度和天然荧光(Ex.280nm，Em.320-450nm)检测蛋白质。使用Compass foriCE软件2.1.0版分析所得的电泳图谱。

FAST-Ig和CrossMab的电泳图如图27所示。如箭头所示，清楚地看到了GPC3/DuAlaE05-SG1364k1363hV11(FAST-Ig形式)的错误配对产物的杂质。

5.2.CrossMab和Fast-Ig的结合动力学信息

使用Biacore8K仪器(GE Healthcare)在25℃评估双Ig抗体对人CD3的结合亲和力。使用胺偶联试剂盒(GE Healthcare)将抗人Fc(GE Healthcare)固定在CM4传感器芯片的所有流通池上。抗体被捕获到抗Fc传感器表面，然后将重组人CD3或CD137注射到流动池上。所有抗体和分析物均在含有20mM ACES、150mM NaCl、0.05％吐温20、0.005％NaN₃的ACESpH7.4中制备。在每个循环中传感器表面用3M MgCl₂再生。通过使用Biacore透视评估软件2.0版(GE Healthcare)处理数据并将数据拟合到1:1结合模型来确定结合亲和力。CD137结合亲和力测定在相同条件进行，只是测定温度设置为37℃。

双-Ig抗体对重组人CD3和CD137的结合亲和力显示在表16中。FAST-Ig抗体GPC3/DuAlaE05-SG1363k1364hV11和GPC3/DuAlaE05-SG1364k1363hV11与CrossMab制备的抗体相比显示出对CD137的结合亲和力弱约2倍，这表明FAST-Ig抗体中使用的带电荷突变影响/削弱了CD137结合活性。这是由FAST-Ig构建体中更快的解离速率引起的。FAST-Ig抗体GPC3KE/DuAlaE05EK-SG1363k1365hV11和GPC3EK/DuAlaE05KE-SG1365k1363hV11与CrossMab xSG1350相比显示出对CD3的结合亲和力弱约3倍，这表明FAST-Ig抗体中使用的带电荷突变影响/削弱了CD137结合活性。这是由FAST-Ig构建体中更快的解离速率引起的。

总之，结果表明，选择的CrossMab形式(和突变)在控制抗体轻链的正确配对方面优于FAST-Ig形式，同时对抗原结合活性的影响较小。

(表16)

5.3.FAST-Ig和CrossMab的表达水平

Fast-Ig或CrossMab抗体通过在Expi293F细胞(ThermoFisher Scientific)中的瞬时表达以三特异性形式表达以表达抗体。通过带有蛋白A(PA-W)药盒(Cartridges)(Agilent)的Bravo自动液体处理平台(Agilent)从获得的培养上清液中纯化每种抗体。关于纯化抗体的浓度，使用分光光度计在280nm处测量吸光度，并使用从由PACE(ProteinScience 1995；4：2411-2423)获得的值计算出的消光系数来计算抗体浓度。表达水平由[终浓度]x[洗脱体积]/[培养体积]计算。

每种抗体的表达水平如表17所示。FAST-Ig抗体GPC3KE/DuAlaE05EK-SG1363k1365hV11和GPC3EK/DuAlaE05KE-SG1365k1363hV11比CrossMab形式(xGPC3/DuAlaE05xSG1350kSG1349hV11)显示出低得多的表达水平。

(表17)

抗体名称	表达水平
		GPC3/DualAE05-SG1363k1364hV11	48mg/L
GPC3/DualAE05-SG1364k1363hV11	45mg/L
		GPC3KE/DualAE05EK-SG1363k1365hV11	15mg/L
GPC3EK/DualAE05KE-SG1365k1363hV11	7mg/L
		xGPC3/DualAE05-xSG1350kSG1349hV11	40mg/L

[参考实施例1]抗体表达载体的制备及抗体的表达和纯化

使用PCR或In fusion Advantage PCR克隆试剂盒(Takara Bio Inc.)等通过本领域技术人员通常已知的方法进行氨基酸取代或IgG转化，以构建表达载体。通过本领域技术人员通常已知的方法对获得的表达载体进行测序。将制备的质粒瞬时转移至FreeStyle293细胞(ThermoFisher Scientific)或Expi293F细胞(ThermoFisher Scientific)以表达抗体。使用rProtein ASepharose(TM)Fast Flow(GE Healthcare Japan Corp.)通过本领域技术人员通常已知的方法从获得的培养上清液中纯化每种抗体。关于纯化抗体的浓度，使用分光光度计在280nm处测量吸光度，并使用从由PACE(ProteinScience 1995；4：2411-2423)获得的值计算出的消光系数来计算抗体浓度。

[参考实施例2]实验细胞系

通过本领域技术人员熟知的方法将人GPC3基因整合到小鼠大肠癌细胞系CT-26(ATCC No.CRL-2638)的染色体中，以获得高表达CT26-GPC3细胞系。使用QIFI试剂盒(Dako)通过制造商推荐的方法测定人GPC3的表达水平(2.3x10⁵/细胞)。为了维持人GPC3基因，这些重组细胞系通过添加200微克/毫升CT26-GPC3的遗传素(Geneticin)(GIBCO)在ATCC推荐的培养基中培养。培养后，这些细胞使用2.5g/L胰蛋白酶-1mMEDTA(nacalai tesque)进行分离，然后用于每个实验。转染子(transfectant)细胞系在本文中称为SKpca60a。

通过本领域技术人员熟知的方法将人CD137基因整合到中国仓鼠卵巢细胞系CHO-DG44的染色体中，以获得高表达CHO-hCD137细胞系。根据制造商的说明，使用PE抗人CD137(4-1BB)抗体(BioLegend,Cat.No.309803)通过FACS分析确定人CD137的表达水平。

NCI-H446和Huh7细胞系分别维持在RPMI1640(Gibco)和DMEM(低葡萄糖)中。两种培养基均补充有10％胎牛血清(Bovogen Biologicals)、100单位/mL青霉素和100μg/mL链霉素，细胞在37℃、5％CO₂中培养。

工业适用性

本发明提供能够与CD3和CD137(4-1BB)结合但不能同时与CD3和CD137结合并且能够与GPC3结合的多特异性抗原结合分子。本发明的抗原结合分子通过与CD3/CD37和GPC3结合，表现出GPC3依赖性的增强的T细胞依赖性细胞毒活性。所述抗原结合分子及其药物组合物可被用于靶向表达GPC3的细胞，用于在治疗各种癌症尤其是与GPC3相关的癌症，例如GPC3阳性癌症的免疫疗法中的用途。

序列表

<110> 中外制药株式会社

<120> 免疫激活多特异性抗原结合分子及其用途

<130> C1-A2005P

<150> JP 2020-062357

<151> 2020-03-31

<160> 323

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 1

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Val Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 2

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 2

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 3

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 3

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 4

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 4

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 5

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 5

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Ile Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 6

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 6

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 7

<211> 207

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 7

Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser

1 5 10 15

Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr

20 25 30

Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr

35 40 45

Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys

50 55 60

Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp

65 70 75 80

His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr

85 90 95

Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu

100 105 110

Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met

115 120 125

Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu

130 135 140

Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys

145 150 155 160

Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn

165 170 175

Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg

180 185 190

Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile

195 200 205

<210> 8

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 8

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Thr

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Asp Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 9

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 9

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Glu Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 10

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 10

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 11

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 11

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 12

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 12

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Glu Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Ile Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 13

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 13

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 14

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 14

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 15

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 15

Asn Ala Trp Met His

1 5

<210> 16

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 16

Asn Val Trp Met His

1 5

<210> 17

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 17

Asn Val Trp Met His

1 5

<210> 18

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 18

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 19

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 19

Asn Val Trp Met His

1 5

<210> 20

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 20

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 21

<211> 72

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 21

Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr

1 5 10 15

Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu

20 25 30

Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His

35 40 45

Cys Leu Gly Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly

50 55 60

Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys

65 70

<210> 22

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 22

Asn Thr Trp Phe His

1 5

<210> 23

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 23

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 24

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 24

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 25

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 25

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 26

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 26

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 27

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 27

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 28

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 28

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 29

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 29

Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 30

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 30

Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 31

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 31

Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 32

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 32

Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 33

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 33

Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 34

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 34

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 35

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 35

Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly Ala Gly Cys Ser Met Cys

1 5 10 15

Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys

20 25 30

<210> 36

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 36

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Asp Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 37

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 37

Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Glu

<210> 38

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 38

Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Glu Gly

<210> 39

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 39

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Glu Gly

<210> 40

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 40

Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Asp Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Glu

<210> 41

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 41

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 42

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 42

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 43

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 43

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Val Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 44

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 44

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 45

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 45

Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 46

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 46

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 47

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 47

Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Ile Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 48

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 48

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 49

<211> 63

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 49

Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn

1 5 10 15

Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser

20 25 30

Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val

35 40 45

Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys

50 55 60

<210> 50

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 50

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 51

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 51

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 52

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 52

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 53

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 53

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 54

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 54

Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Ile Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 55

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 55

Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 56

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 56

Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 57

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 57

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gln Glu Leu Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 58

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 58

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 59

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 59

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Asn Val Val Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 60

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 60

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Val Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr His His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 61

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 61

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Glu Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Leu Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr His His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 62

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 62

Gln Ala Ser Gln Glu Leu Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 63

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 63

Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 64

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 64

Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met Asn Asn Val Val Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 65

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 65

Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 66

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 66

Gln Pro Ser Glu Glu Val Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 67

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 67

Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro

1 5

<210> 68

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 68

Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro

1 5

<210> 69

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 69

Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro

1 5

<210> 70

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 70

Lys Val Ser Asn Val Phe Pro

1 5

<210> 71

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 71

Lys Val Ser Asn Leu Phe Pro

1 5

<210> 72

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 72

Ala Gln Gly Thr Ser Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 73

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 73

Ala Gln Gly Thr Ser His Pro Phe Thr

1 5

<210> 74

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 74

Ala Gln Gly Thr Ser His Pro Phe Thr

1 5

<210> 75

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 75

Ala Gln Gly Thr His His Pro Phe Thr

1 5

<210> 76

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 76

Ala Gln Gly Thr His His Pro Phe Thr

1 5

<210> 77

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 77

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Ser Gln Asn Tyr Ala Thr Tyr Val Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Arg Tyr Val His Tyr Ala Ala Gly Tyr Gly Val Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 78

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 78

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 79

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 79

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn His Gly Gly Tyr Val Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Glu

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Tyr Gly Pro Gly Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 80

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 80

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro

85 90 95

Ala Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 81

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 81

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Val Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 82

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 82

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 83

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 83

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 84

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 84

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 85

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 85

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn His Gly Gly Tyr Val Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Glu

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Asp Tyr Gly Pro Gly Asn Tyr Asp Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly

100 105 110

Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 86

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 86

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro

85 90 95

Ala Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 87

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 87

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Arg Ala Asn Ser Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Arg Tyr Val His Tyr Thr Thr Tyr Ala Gly Ser Ser Phe Ser

100 105 110

Tyr Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 88

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 88

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 89

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 89

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 90

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 90

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 91

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 91

Gly Gly Gly Ser

1

<210> 92

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 92

Ser Gly Gly Gly

1

<210> 93

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 93

Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 94

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 94

Ser Gly Gly Gly Gly

1 5

<210> 95

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 95

Gly Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 96

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 96

Ser Gly Gly Gly Gly Gly

1 5

<210> 97

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 97

Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser

1 5

<210> 98

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 98

Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly

1 5

<210> 99

<400> 99

000

<210> 100

<400> 100

000

<210> 101

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 101

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Ile Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 102

<211> 212

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 102

Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys

1 5 10 15

Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Pro Gln Tyr Pro

20 25 30

Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys Asn Ile Gly Gly Asp

35 40 45

Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp His Leu Ser Leu Lys

50 55 60

Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg

65 70 75 80

Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu Tyr Leu Arg Ala Arg

85 90 95

Val Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Asp

100 105 110

Ala Lys Lys Asp Asp Ala Lys Lys Asp Gly Ser Gln Ser Ile Lys Gly

115 120 125

Asn His Leu Val Lys Val Tyr Asp Tyr Gln Glu Asp Gly Ser Val Leu

130 135 140

Leu Thr Cys Asp Ala Glu Ala Lys Asn Ile Thr Trp Phe Lys Asp Gly

145 150 155 160

Lys Met Ile Gly Phe Leu Thr Glu Asp Lys Lys Lys Trp Asn Leu Gly

165 170 175

Ser Asn Ala Lys Asp Pro Arg Gly Met Tyr Gln Cys Lys Gly Ser Gln

180 185 190

Asn Lys Ser Lys Pro Leu Gln Val Tyr Tyr Arg Met Asp Tyr Lys Asp

195 200 205

Asp Asp Asp Lys

210

<210> 103

<211> 189

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 103

Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn

1 5 10 15

Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser

20 25 30

Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val

35 40 45

Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp

50 55 60

Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu

65 70 75 80

Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp

85 90 95

Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro

100 105 110

Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys Ser Val Leu Val Asn Gly Thr

115 120 125

Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro

130 135 140

Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala Pro Ala Arg Glu Pro Gly His

145 150 155 160

Ser Pro Gln His His His His His His Gly Gly Gly Gly Ser Gly Leu

165 170 175

Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu

180 185

<210> 104

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 104

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Thr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 105

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 105

Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn

1 5 10 15

Asn Arg Asn Gln Ile Cys

20

<210> 106

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 106

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 107

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 107

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser His Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 108

<400> 108

000

<210> 109

<400> 109

000

<210> 110

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 110

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 111

<400> 111

000

<210> 112

<400> 112

000

<210> 113

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 113

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Arg Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 114

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 114

Asn Val Trp Met His

1 5

<210> 115

<400> 115

000

<210> 116

<400> 116

000

<210> 117

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 117

Asn Thr Trp Met His

1 5

<210> 118

<400> 118

000

<210> 119

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 119

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 120

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 120

His Val Trp Phe His

1 5

<210> 121

<400> 121

000

<210> 122

<400> 122

000

<210> 123

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 123

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 124

<400> 124

000

<210> 125

<400> 125

000

<210> 126

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 126

Asn Ala Trp Met His

1 5

<210> 127

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 127

Gln Ile Lys Asp Lys Trp Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 128

<400> 128

000

<210> 129

<400> 129

000

<210> 130

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 130

Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 131

<400> 131

000

<210> 132

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 132

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 133

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 133

Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 134

<400> 134

000

<210> 135

<400> 135

000

<210> 136

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 136

Gln Ile Lys Asp Lys Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 137

<400> 137

000

<210> 138

<400> 138

000

<210> 139

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 139

Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 140

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 140

Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Ile Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 141

<400> 141

000

<210> 142

<400> 142

000

<210> 143

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 143

Ile His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 144

<400> 144

000

<210> 145

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 145

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 146

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 146

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 147

<400> 147

000

<210> 148

<400> 148

000

<210> 149

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 149

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 150

<400> 150

000

<210> 151

<400> 151

000

<210> 152

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 152

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 153

<400> 153

000

<210> 154

<400> 154

000

<210> 155

<400> 155

000

<210> 156

<400> 156

000

<210> 157

<400> 157

000

<210> 158

<400> 158

000

<210> 159

<400> 159

000

<210> 160

<400> 160

000

<210> 161

<400> 161

000

<210> 162

<400> 162

000

<210> 163

<400> 163

000

<210> 164

<400> 164

000

<210> 165

<400> 165

000

<210> 166

<400> 166

000

<210> 167

<400> 167

000

<210> 168

<400> 168

000

<210> 169

<400> 169

000

<210> 170

<400> 170

000

<210> 171

<400> 171

000

<210> 172

<400> 172

000

<210> 173

<400> 173

000

<210> 174

<400> 174

000

<210> 175

<400> 175

000

<210> 176

<400> 176

000

<210> 177

<400> 177

000

<210> 178

<400> 178

000

<210> 179

<400> 179

000

<210> 180

<400> 180

000

<210> 181

<400> 181

000

<210> 182

<400> 182

000

<210> 183

<400> 183

000

<210> 184

<400> 184

000

<210> 185

<400> 185

000

<210> 186

<400> 186

000

<210> 187

<400> 187

000

<210> 188

<400> 188

000

<210> 189

<400> 189

000

<210> 190

<400> 190

000

<210> 191

<400> 191

000

<210> 192

<400> 192

000

<210> 193

<400> 193

000

<210> 194

<400> 194

000

<210> 195

<400> 195

000

<210> 196

<400> 196

000

<210> 197

<400> 197

000

<210> 198

<400> 198

000

<210> 199

<400> 199

000

<210> 200

<400> 200

000

<210> 201

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 201

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Lys Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys

340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440

<210> 202

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 202

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Lys Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys

340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440

<210> 203

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 203

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys

340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440

<210> 204

<211> 443

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 204

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Ile Arg Glu Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Glu Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys

340 345 350

Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440

<210> 205

<211> 442

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 205

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser

115 120 125

Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys

130 135 140

Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu

145 150 155 160

Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr

180 185 190

Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val

195 200 205

Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440

<210> 206

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 206

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Glu Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Glu Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 207

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 207

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Glu Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Glu Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Glu Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 208

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 208

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Lys Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Lys Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 209

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 209

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Lys

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Lys Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Lys Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 210

<211> 222

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 210

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro

115 120 125

Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu

130 135 140

Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn

145 150 155 160

Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser

165 170 175

Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala

180 185 190

Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly

195 200 205

Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 211

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 211

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 212

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 212

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 213

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 213

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Lys Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 214

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 214

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Lys Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 215

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 215

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 216

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 216

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 217

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 217

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Lys Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 218

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 218

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Lys Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 219

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 219

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 220

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 220

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 221

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 221

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Lys Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Lys Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 222

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 222

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Lys

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Lys Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Lys Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 223

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 223

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Glu Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Glu Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 224

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 224

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Glu Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Glu Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Glu Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 225

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 225

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg

115 120 125

Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 226

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 226

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 227

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 227

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Ile Arg Lys Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 228

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 228

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Glu Met His Trp Ile Arg Glu Pro Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 229

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 229

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 230

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 230

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 231

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 231

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 232

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 232

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 233

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 233

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 234

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 234

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 235

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 235

Asp Tyr Glu Met His

1 5

<210> 236

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 236

Asp Tyr Glu Met His

1 5

<210> 237

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 237

Asp Tyr Glu Met His

1 5

<210> 238

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 238

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 239

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 239

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 240

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 240

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 241

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 241

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 242

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 242

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 243

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 243

Asn Val Trp Phe His

1 5

<210> 244

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 244

Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 245

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 245

Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 246

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 246

Ala Ile Asp Gly Pro Thr Pro Asp Thr Ala Tyr Ser Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 247

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 247

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 248

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 248

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 249

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 249

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 250

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 250

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 251

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 251

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 252

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 252

Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 253

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 253

Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr

1 5

<210> 254

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 254

Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr

1 5

<210> 255

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 255

Phe Tyr Ser Tyr Thr Tyr

1 5

<210> 256

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 256

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 257

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 257

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 258

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 258

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 259

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 259

Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 260

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 260

Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 261

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 261

Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala Glu Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 262

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 262

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 263

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 263

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 264

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 264

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 265

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 265

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 266

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 266

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 267

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 267

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser His Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 268

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 268

Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 269

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 269

Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 270

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 270

Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 271

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 271

Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 272

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 272

Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 273

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 273

Gln Pro Ser Gln Glu Val Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 274

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 274

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 275

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 275

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 276

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 276

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 277

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 277

Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro

1 5

<210> 278

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 278

Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro

1 5

<210> 279

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 279

Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro

1 5

<210> 280

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 280

Gly Gln Gly Thr Gln Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 281

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 281

Gly Gln Gly Thr Gln Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 282

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 282

Gly Gln Gly Thr Gln Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 283

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 283

Ala Gln Gly Thr Ser His Pro Phe Thr

1 5

<210> 284

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 284

Ala Gln Gly Thr Ser His Pro Phe Thr

1 5

<210> 285

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 285

Ala Gln Gly Thr Ser His Pro Phe Thr

1 5

<210> 286

<211> 442

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 286

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser

115 120 125

Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys

130 135 140

Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu

145 150 155 160

Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr

180 185 190

Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val

195 200 205

Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His

420 425 430

Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro

435 440

<210> 287

<211> 442

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 287

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Pro Leu Val His Ser

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gly Gln Gly

85 90 95

Thr Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser

115 120 125

Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys

130 135 140

Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu

145 150 155 160

Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr

180 185 190

Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val

195 200 205

Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

225 230 235 240

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

245 250 255

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

260 265 270

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

290 295 300

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

305 310 315 320

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440

<210> 288

<211> 437

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 288

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys Ser Ser Ala Ser Thr

100 105 110

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser

115 120 125

Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

130 135 140

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

145 150 155 160

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys

180 185 190

Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

195 200 205

Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

210 215 220

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

225 230 235 240

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

245 250 255

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

260 265 270

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

275 280 285

Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

290 295 300

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

305 310 315 320

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

325 330 335

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys

340 345 350

Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

355 360 365

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

370 375 380

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

385 390 395 400

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

405 410 415

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

420 425 430

Leu Ser Leu Ser Pro

435

<210> 289

<211> 223

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 289

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile Asp Pro Ser Tyr Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Leu Tyr Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro

115 120 125

Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu

130 135 140

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp

145 150 155 160

Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp

165 170 175

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys

180 185 190

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln

195 200 205

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 290

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 290

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Val Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 291

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 291

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr

435 440 445

Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 292

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 292

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr

435 440 445

Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 293

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 293

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 294

<211> 456

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 294

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Asn Val

20 25 30

Trp Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Tyr Tyr Asn Ala Tyr Ala Gly Tyr Tyr His Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ala Ala Ser Gln Leu Leu Pro Ala

100 105 110

Glu Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

130 135 140

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr

145 150 155 160

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

165 170 175

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

180 185 190

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

195 200 205

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu

210 215 220

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

225 230 235 240

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

245 250 255

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

260 265 270

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

275 280 285

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

290 295 300

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

305 310 315 320

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

325 330 335

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

340 345 350

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

355 360 365

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

370 375 380

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

385 390 395 400

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

405 410 415

Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

420 425 430

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

435 440 445

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

450 455

<210> 295

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 295

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gln Glu Leu Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg

115 120 125

Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 296

<211> 128

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 296

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Ile Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys His Tyr Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Val Leu Pro Ala

100 105 110

Phe Gly Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 297

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 297

Asn Ala Trp Met His

1 5

<210> 298

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 298

Gln Ile Lys Asp Lys Gly Asn Ala Tyr Ala Ala Tyr Tyr Ala Pro Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 299

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 299

Val His Tyr Ala Ser Ala Ser Thr Val Leu Pro Ala Phe Gly Val Asp

1 5 10 15

Ala

<210> 300

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 300

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Gln Ala Ser Gln Glu Leu Val His Met

20 25 30

Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly

85 90 95

Thr Ser Val Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 301

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 301

Gln Ala Ser Gln Glu Leu Val His Met Asn Arg Asn Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 302

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 302

Lys Val Ser Asn Arg Phe Pro

1 5

<210> 303

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 303

Ala Gln Gly Thr Ser Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 304

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 304

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Thr Leu Ser Ile Thr Ser Leu Gln Thr

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Val Lys

100 105

<210> 305

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 305

Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg Leu Ala

1 5 10

<210> 306

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 306

Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr

1 5

<210> 307

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 307

Gln Gln Tyr Trp Ser Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 308

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 308

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gln Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Asn Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Met Ile Asp Pro Ser Tyr Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Leu Tyr Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 309

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 309

Ser Tyr Trp Met His

1 5

<210> 310

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 310

Met Ile Asp Pro Ser Tyr Ser Glu Thr Arg Leu Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 311

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 311

Tyr Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 312

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 312

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 313

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 313

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 314

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 314

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 315

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 315

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 316

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 316

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His

195 200 205

Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 317

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 317

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 318

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 318

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 319

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 319

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 320

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 320

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 321

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 321

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 322

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 322

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His

195 200 205

Ala His Tyr Thr Arg Lys Glu Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

<210> 323

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成的序列

<400> 323

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe

1 5 10 15

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

20 25 30

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

35 40 45

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

50 55 60

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

65 70 75 80

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

85 90 95

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

100 105 110

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro

115 120 125

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val

130 135 140

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

145 150 155 160

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

165 170 175

Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

180 185 190

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

195 200 205

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

210 215 220

Claims

1.多特异性抗原结合分子，其包含

(i)第一抗原结合部分，其能够与CD3和CD137结合，但不同时与CD3和CD137结合；和

(ii)第二抗原结合部分，其能够与磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)结合；

(a1)SEQ ID NO:17的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:31的重链CDR2、SEQ ID NO:45的重链CDR3、SEQ ID NO:64的轻链CDR1、SEQ ID NO:69的轻链CDR2和SEQ ID NO:74的轻链CDR3；

(a2)SEQ ID NO:18的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:32的重链CDR2、SEQ ID NO:46的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a3)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR2、SEQ ID NO:47的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a4)SEQ ID NO:19的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:33的重链CDR2、SEQ ID NO:47的重链CDR3、SEQ ID NO:65的轻链CDR1、SEQ ID NO:70的轻链CDR2和SEQ ID NO:75的轻链CDR3；

(a5)SEQ ID NO:20的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:34的重链CDR2、SEQ ID NO:48的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a6)SEQ ID NO:22的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:36的重链CDR2、SEQ ID NO:50的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a7)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR2、SEQ ID NO:51的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a8)SEQ ID NO:23的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:37的重链CDR2、SEQ ID NO:51的重链CDR3、SEQ ID NO:66的轻链CDR1、SEQ ID NO:71的轻链CDR2和SEQ ID NO:76的轻链CDR3；

(a9)SEQ ID NO:24的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:38的重链CDR2、SEQ ID NO:52的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a10)SEQ ID NO:25的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:39的重链CDR2、SEQ ID NO:53的重链CDR3、SEQ ID NO:66的轻链CDR1、SEQ ID NO:71的轻链CDR2和SEQ ID NO:76的轻链CDR3；

(a11)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR2、SEQ ID NO:54的重链CDR3、SEQ ID NO:66的轻链CDR1、SEQ ID NO:71的轻链CDR2和SEQ ID NO:76的轻链CDR3；

(a12)SEQ ID NO:26的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:40的重链CDR2、SEQ ID NO:54的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a13)SEQ ID NO:27的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:41的重链CDR2、SEQ ID NO:55的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；

(a14)SEQ ID NO:28的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:42的重链CDR2、SEQ ID NO:56的重链CDR3、SEQ ID NO:63的轻链CDR1、SEQ ID NO:68的轻链CDR2和SEQ ID NO:73的轻链CDR3；和

(a15)SEQ ID NO:82的重链互补决定区(CDR)1、SEQ ID NO:83的重链CDR2、SEQ ID NO:84的重链CDR3、SEQ ID NO:65的轻链CDR1、SEQ ID NO:70的轻链CDR2和SEQ ID NO:75的轻链CDR3；

以及(iii)还包含由能够稳定缔合的第一Fc区亚基和第二Fc区亚基组成的Fc结构域，并且其中Fc结构域与天然人IgG1 Fc结构域相比表现出对人Fcγ受体的降低的结合亲和力；

其中所述第一Fc区亚基选自由以下组成的组：

(1)包含234位的Ala和235位的Ala的Fc区多肽；

(2)包含234位的Ala、235位的Ala和297位的Ala的Fc区多肽；

(3)包含234位的Ala、235位的Ala、297位的Ala、354位的Cys和366位的Trp的Fc区多肽；和

其中所述第二Fc区多肽选自包含以下的组：

(4)包含234位的Ala和235位的Ala的Fc区多肽；

(5)包含234位的Ala、235位的Ala和297位的Ala的Fc区多肽；和

(6)包含234位的Ala、235位的Ala、297位的Ala、349位的Cys、366位的Ser、368位的Ala和407位的Val的Fc区多肽；和

其中所述氨基酸位置使用EU索引编号进行编号。

2.根据权利要求1所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合部分包含选自以下(a1)至(a15)中的任一项：

3.根据权利要求1或2所述的多特异性抗原结合分子，其中所述能够与磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)结合的第二抗原结合部分包含SEQ ID NO:235的重链互补决定区(CDR)1、SEQID NO:244的重链CDR2、SEQ ID NO:253的重链CDR3、SEQ ID NO:268的轻链CDR1、SEQ IDNO:274的轻链CDR2和SEQ ID NO:280的轻链CDR3。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合部分包含包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:262的氨基酸序列的轻链可变区。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述Fc结构域包含SEQ ID NO:317所示的第一Fc区亚基和SEQ ID NO:323所示的第二Fc区亚基。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合部分和所述第二抗原结合部分各自是Fab分子。

7.根据权利要求6所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第一抗原结合部分在所述Fab重链的C末端与所述Fc结构域的所述第一Fc区亚基或所述第二Fc区亚基中任一个的N末端融合，并且所述第二抗原结合部分在所述Fab重链的C末端与所述Fc结构域的剩余Fc区亚基的N末端融合。

8.根据权利要求6或7所述的多特异性抗原结合分子，其中所述第二抗原结合部分是交叉Fab分子，其中所述Fab轻链和所述Fab重链的可变区进行交换并且所述交叉Fab分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，并且其中所述第一抗原结合部分是常规Fab分子，所述常规Fab分子包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。

9.根据权利要求8所述的多特异性抗原结合分子，其中在所述第一抗原结合部分的所述轻链的所述恒定结构域CL中，123位和124位的氨基酸分别为精氨酸(R)和赖氨酸(K)(按照Kabat进行编号)，并且其中在所述第一抗原结合部分的所述重链的所述恒定结构域CH1中，147位和213位的氨基酸为谷氨酸(E)(根据Kabat EU索引进行编号)。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的多特异性抗原结合分子，其包含选自以下(a1)至(a6)的任一组合的四个多肽：

(a1)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:219的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的多肽链(链4)；

(a2)包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:220的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的多肽链(链4)；

(a3)包含SEQ ID NO:286的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:291的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的多肽链(链4)；

(a4)包含SEQ ID NO:286的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:292的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的多肽链(链4)；

(a5)包含SEQ ID NO:287的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:293的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列的多肽链(链4)；和

(a6)包含SEQ ID NO:287的氨基酸序列的多肽链(链1)和包含SEQ ID NO:210的氨基酸序列的多肽链(链2)，以及包含SEQ ID NO:294的氨基酸序列的多肽链(链3)和包含SEQ IDNO:225的氨基酸序列多肽链(链4)。

11.分离的多核苷酸或多个多核苷酸，其编码权利要求1至10中任一项所述的多特异性抗原结合分子。

12.载体，其编码权利要求11所述的多核苷酸或多个多核苷酸。

13.宿主细胞，其包含权利要求11所述的多核苷酸或多个多核苷酸，或权利要求12所述的载体。

14.制造根据权利要求1至10中任一项所述的多特异性抗原结合分子的方法，其包含以下步骤：

a)在适于抗原结合分子表达的条件下培养权利要求13所述的宿主细胞，和

b)回收所述抗原结合分子。

15.药物组合物，其包含权利要求1至10中任一项所述的多特异性抗原结合分子和药学上可接受的载体。

16.根据权利要求1至10中任一项所述的多特异性抗原结合分子或根据权利要求15所述的药物组合物，其诱导细胞毒性，优选T细胞依赖性细胞毒性。

17.根据权利要求1至10中任一项所述的多特异性抗原结合分子或根据权利要求15所述的药物组合物，其用作药物。

18.根据权利要求1至10中任一项所述的多特异性抗原结合分子或根据权利要求15所述的药物组合物，其用于治疗癌症，优选表达GPC3的癌症或GPC3阳性的癌症。