CN115308406A - 一种双样品垫胶体金免疫层析试纸条 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种双层样品垫胶体金免疫层析试纸条。所述试纸条包括样品垫，底板，硝酸纤维素膜,金标垫和吸水纸五部分.本发明还公开了双层样品垫试纸条结构。所述双层样品垫试纸条是由两种不同的处理液处理，对样本的处理效率提高，同时对pH或浓度波动较大的样本缓冲过滤更完全，与金标垫中的胶体金复合物混合更均匀，并更好提供胶体金反应环境的能力。本发明解决胶体金试纸条跑板后条带断点，断线等不均匀情况，不同的样品垫处理工艺可以解决背景红，鬼线，并提高试纸条的灵敏度。本发明试纸条稳定性好，灵敏度高，不受基质干扰，能够实现对样本的快速定性或定量检测，且操作步骤简便，可控性强，具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及胶体金免疫层析技术，具体涉及一种体外诊断试纸条，应用于体外诊断等领域。
背景技术
免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。新型冠状病毒抗原检测试剂盒推动胶体金技术大范围运用
免疫胶体金技术，采用的是胶体金颗粒与抗原抗体静电物理吸附，容易受外界影响导致胶体体系平衡失效，胶体金颗粒聚集，表现出检测线控制线线条断点，不均匀，甚至跑板失败。
免疫层析试纸由五个部分组成，分别是样品垫，PVC底板，硝酸纤维素膜,金标垫和吸水纸，其中样品垫过滤样本、消除杂质，并调节样品的PH值，使样品通过样品垫后能较好的与金标垫上的胶体金复合物混匀，待测物与胶体金复合物反应结合。同时要起到提供胶体金与硝酸纤维素膜膜上的CT线上的抗体特性结合的环境。所以样品垫起到层析的关键作用，充分满足处理样品的要求，提供待测物与胶体金的反应和胶体金与硝酸纤维素膜膜反应的环境。单层样品垫在线条断点，不均匀，反白或鬼线时采用添加盐，大分子和动物血清去调节，这些物质的添加存在相互干扰或因量大破坏因物理吸附而不稳定的胶体金复合物，导致胶体金复合物聚集，表现出跑板不完全或灵敏度降低。为提高产品灵敏度会加大胶体金复合物的使用量，导致背景红，出现鬼线等情况。
发明内容
本发明的目的是提供一种双样品垫胶体金免疫层析试纸条，能够充分满足处理样品的要求，并避免出现背景技术中出现的问题。为此，本发明采用以下技术方案：
一种双样品垫胶体金免疫层析试纸条，包括样品垫、底板、硝酸纤维素膜、金标垫和吸水纸；金标垫搭接在硝酸纤维素膜的一端，吸水纸搭接到硝酸纤维素膜的另一端；其特征在于所述样品垫采用双层样品垫，搭接在金标垫，双层样品垫由上下配置的第一层样品垫和第二层样品垫组成。其中，第一层样品垫在上，第二层样品垫在下，两层样品垫可以一样大，也可以一大一小，只要样品经过两层样品垫后再到达金标垫。
双层样品垫的第一层样品垫和第二层样品垫采用两种不同的处理工艺处理。第一层样品垫和第二层样品垫组成的处理工艺中处理液不同，采用两种完全不同的溶液体系；第一层样品垫的处理液包括50mM Tis-HCl,1-10g/L Casein或者BSA，1-20g/L S-9，0.1-15％twen-20，溶液pH6.0-10.0；第二层样品垫的处理液包括1-10g/L EDTA-NA,10-30g/LNa2B4O7·10H2O，1-10g/L PVP-10，1-20g/L S-9.溶液pH7.0-9.0。
用两层样品垫，上层用于过滤样本，消除杂质，并调节样品的pH值。下层用于提供胶体金复合物的最佳反应条件。处理完全的样品在最佳的反应环境中与胶体金复合物相遇，待测物与胶体金复合物充分反应并进入硝酸纤维素膜，溶液呈分散状，均匀的通过硝酸纤维素膜，从而在CT线显示出均匀的条带，即使胶体金复合物使用浓度高，背景清晰，反应条件佳，提高产品的灵敏度。本发明创新的使用双层样品垫，解决胶体金试纸条跑板后条带断点，断线等不均匀情况，不同的样品垫处理工艺可以解决背景红，鬼线，并提高试纸条的灵敏度。本发明试纸条稳定性好，灵敏度高，不受基质干扰，能够实现对样本的快速定性或定量检测，且操作步骤简便，可控性强，具有良好的应用前景。
本发明中，硝酸纤维素膜烘干温度37-45℃，优选为37℃，烘干时间为12-24小时，优选18-24为小时。
本发明中，金标垫烘干温度37-45℃，优选为37℃；烘干时间为12-24小时，优选为12-20小时。
PVC底板，硝酸纤维素膜,金标垫和吸水纸可以均采用为常规工艺制备。
以下结合具体实施方式和附图，对本发明作进一步详细说明。
附图说明
图1为双层样品垫结构图。
图2实施例灵敏度和线条状态测试结果。各实施例分别使用相同测试样本，样本分别为弱阳性样本，强阳性样本，阴性样本。图2跑板结果为：
(1)实施例1：C、T线饱满，有鬼线，干扰线条；
(2)实施例2：C、T线不饱满，有断点现象，色度偏弱；
(3)实施例3：C线饱满，但色度明显偏弱，T线色度弱，弱阳样本阴性；
(4)实施例4：C线饱满，色度强，灵敏度高，背景清晰。
具体实施方式
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种双样品垫胶体金免疫层析试纸条及其应用进行具体描述，但本发明并不限于这些实施例，该领域技术人员在本发明核心指导思想下做出的非本质改进和调整，仍然属于本发明的保护范围。以下实施例中使用的金标垫c，硝酸纤维素膜膜h，PVC底板f，吸水纸e相同。试纸条的结构为：样品垫、硝酸纤维素膜h、金标垫c和吸水纸均e设置在PVC底板f上；金标垫c搭接在硝酸纤维素膜h的一端，吸水纸e搭接到硝酸纤维素膜h的另一端，所述样品垫采用双层样品垫，搭接在金标垫c，双层样品垫由上层样品垫a和下层样品垫b组成。附图标号g为检测线T，附图标号d为质控线C。
(一)一种双样品垫胶体金免疫层析试纸条及其应用
实施例1
样品垫垫处理液包含50mMTis-HCl，5g/L Casein,2g/L S-9，0.3％twen-20，溶液pH9.0。充分溶解后，浸泡玻璃纤维30分钟后，使用45℃鼓风干燥箱干燥20小时，取出。依据样品垫搭接在金标垫，金标垫搭接在硝酸纤维素膜，吸水纸搭接到硝酸纤维素膜组成，搭接的部分重叠1-2毫米，组装成试纸条。
实施例2
样品垫垫处理液包含3g/LEDTA-NA，10g/LPVP-10，20g/L Na2B4O7·10H2O,20g/LS-9，溶液pH9.0。充分溶解后，浸泡玻璃纤维30分钟后，使用45℃鼓风干燥箱干燥20小时，取出。依据样品垫搭接在金标垫，金标垫搭接在硝酸纤维素膜，吸水纸搭接到硝酸纤维素膜组成，搭接的部分重叠1-2毫米，组装成试纸条。
实施例3
样品垫垫处理液包含Tis-HCl，5g/L Casein,2g/L S-9，0.3％twen-20，3g/LEDTA-NA，10g/L PVP-10，20g/L Na2B4O7·10H2O,20g/L S-9，溶液PH9.0。充分溶解后，浸泡玻璃纤维30分钟后，使用45℃鼓风干燥箱干燥20小时，取出。依据样品垫搭接在金标垫，金标垫搭接在硝酸纤维素膜，吸水纸搭接到硝酸纤维素膜组成，搭接的部分重叠1-2毫米，组装成试纸条。
实施例4
样品垫使用实施例1和实施例2。依据实施例1样品垫搭接实施例2样品垫上，实施例2样品垫搭接在金标垫，金标垫搭接在硝酸纤维素膜，吸水纸搭接到硝酸纤维素膜组成，搭接的部分重叠1-2毫米，组装成试纸条。
(二)、结果
使用阴性样本，弱阳样本和强阳样本测试实施例1、实施例2、实施例3和实施例4试纸条灵敏度和均一性，跑板15分钟结果如表1所示。
表1灵敏度和线条状态测试结果，结果照片见附件图2
注：-表示无线条。+数越多表示颜色越深，表明样本待测物浓度越高。
由结果可知，实施例1、实施例2、实施例3线条存在不饱满或色度弱的情况，而实施例4双层样品垫的使用能够消除基质影响，解决胶体金试纸条跑板后条带断点，断线等不均匀情况，提高线条的饱满度提高试纸条的灵敏度，解决胶体金试纸条跑板后条带断点，断线等不均匀情况。
双层样品垫能够更好的过滤样品，消除杂质，能够提供较好的反应条件，使胶体金复合物分散均匀的进入到硝酸纤维素膜膜，从而在CT线位置显示出均匀的条带，背景清晰，产品的灵敏度高。本发明创新的使用双层样品垫，本发明试纸条不受基质干扰，灵敏度高,能够实现对样本的快速定性或定量检测,，且操作步骤简便，可控性强，具有良好的应用前景。
上述实施例仅为说明本发明的原理，而非限制本发明。在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，但都将在本发明的保护之中。
Claims (4)
1.一种双样品垫胶体金免疫层析试纸条，包括样品垫、底板、硝酸纤维素膜、金标垫和吸水纸；金标垫搭接在硝酸纤维素膜的一端，吸水纸搭接到硝酸纤维素膜的另一端；其特征在于所述样品垫采用双层样品垫，搭接在金标垫，双层样品垫由上下配置的第一层样品垫和第二层样品垫组成。
2.根据权利要求1所述的一种双样品垫胶体金免疫层析试纸条，其特征在于双层样品垫的第一层样品垫和第二层样品垫采用两种不同的处理工艺处理；
第一层样品垫和第二层样品垫组成的处理工艺中处理液不同，采用两种完全不同的溶液体系；第一层样品垫的处理液包括50mM Tis-HCl,1-10g/L Casein或者BSA，1-20g/L S-9，0.1-15％twen-20，溶液pH6.0-10.0；第二层样品垫的处理液包括1-10g/L EDTA-NA,10-30g/L Na2B4O7·10H2O，1-10g/L PVP-10，1-20g/L S-9.溶液pH7.0-9.0。
3.根据权利要求1所述的一种双样品垫胶体金免疫层析试纸条，其特征在于硝酸纤维素膜烘干温度37-45℃，优选为37℃，烘干时间为12-24小时，优选18-24为小时。
4.根据权利要求1所述的一种双样品垫胶体金免疫层析试纸条，其特征在于金标垫烘干温度37-45℃，优选为37℃；烘干时间为12-24小时，优选为12-20小时。
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