CN115304606A - 一种同时靶向btk和gspt1蛋白的降解剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N‑氧化物：X‑L‑Y (I)其中，X为BTK结合基团，L为连接基团，Y为泛素连接酶结合基团。本发明化合物为既具有PROTAC分子的特点，同时能够以分子胶的方式发挥作用的降解剂，在多种肿瘤细胞中都可以同时降解BTK和GSPT1，并且高效地抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞凋亡。

Description

一种同时靶向BTK和GSPT1蛋白的降解剂
技术领域
本发明涉及药物化学领域，特别涉及一种同时靶向BTK和GSPT1蛋白的降解剂及其制备方法和应用。
背景技术
PROTAC(蛋白降解靶向嵌合体)技术中所应用的降解剂分子量一般较大，导致其成药性差，并且目前PROTAC技术主要针对激酶靶点，而在某些恶性肿瘤中，单一激酶蛋白的降解对肿瘤细胞的增殖抑制并无法达到预期效果。
分子胶作为另外一种靶向蛋白降解技术，其在药物发展上的前景更为广阔，因为分子胶的分子量一般较小，成药性高，利于成药，作为靶蛋白与E3泛素连接酶之间的胶水分子，分子胶诱导形成三元复合物并介导两个蛋白之间相互作用这一过程相当重要，因此，在设计分子胶时，首先需要有靶蛋白和E3泛素连接酶之间相互作用的详细信息，而这增加了分子胶设计的难度。
BTK是多种恶性淋巴瘤治疗的重要靶点，而对于DLBCL(弥漫大B细胞淋巴瘤)以及AML(急性髓系白血病)等淋巴瘤，只降解或者抑制BTK的PROTAC分子和抑制剂对肿瘤细胞的抑制效果并不明显。GSPT1作为分子胶的一个靶点，在蛋白翻译过程中发挥重要作用，它的降解可导致蛋白合成异常，进而影响肿瘤细胞的增殖和生存，同时GSPT1作为一种GTP酶，很难靶向，因为细胞内的GTP浓度很高，而且GTP结合口袋与GTP酶结合强烈，因此很难开发出化合物来与GTP竞争。
目前现有技术很难同时降解靶蛋白和GSPT1，难以兼顾PROTAC和分子胶两种机制，往往只能实现单一降解。该两个靶点的同时降解是目前亟待解决的技术问题。
发明内容
为解决PROTAC分子量大以及分子胶难以设计的问题，本发明将二者结合起来，设计成既具有PROTAC分子特点又能以分子胶的方式发挥作用的降解剂，不仅降低了设计上的难度，也为恶性肿瘤的治疗提供了新的方向。本发明创造性地对靶向BTK的PROTAC分子进行了优化，使其同时具有分子胶的特性，其中多个分子都具有较高的降解活性。本发明通过竞争实验验证了这一双靶向降解剂作为PROTAC分子降解BTK和作为分子胶降解GSPT1是两个独立的过程，即本发明的双靶降解剂同时融合了PROTAC技术和分子胶技术。另外，本发明化合物在DLBCL、AML、肺癌、肝癌及乳腺癌细胞等肿瘤细胞中都可以同时降解BTK和GSPT1，并且高效地抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞凋亡，这也解决了靶向BTK的PROTAC分子对DLBCL等恶性淋巴瘤增殖抑制效果差的问题。
本发明提供了一种式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物：
X-L-Y (I)
其中：
X为BTK结合基团；
L为连接基团；
Y为泛素连接酶结合基团。
本发明中，X基团具有如下式(IIa)、(IIb)、(III)、(IVa)、(IVb)、(V)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)、(X)或(XI)所示的结构：
Figure BDA0003703453490000011
Figure BDA0003703453490000021
其中，
A环选自5-6元芳香环或9-12元双环杂环，所述5-6元芳香环任选地被一个或多个R取代，所述9-12元双环杂环任选地被一个或多个＝O或一个或多个R取代。
优选地，L部分与X基团中的R1、R14、R15或哌啶上的N原子相连。
优选地，A环选自苯环、含有1-2个氮原子的5-6元杂芳环或含有1-4个氮原子的9-10元双环杂环，所述5-6元杂芳环任选地被一个或多个R取代，所述9-10元双环杂环任选地被一个或多个＝O或一个或多个R取代。
优选地，A环选自吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、
Figure BDA0003703453490000022
Figure BDA0003703453490000023
所述吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪任选地被一个或多个R取代，所述
Figure BDA0003703453490000024
Figure BDA0003703453490000025
任选地被一个或多个＝O或一个或多个R取代。
优选地，A环选自吡啶、吡嗪、嘧啶、
Figure BDA0003703453490000026
所述吡啶、吡嗪、嘧啶任选地被一个或多个R取代，所述
Figure BDA0003703453490000027
任选地被一个或多个＝O或一个或多个R取代。B环选自苯环、5-6元含氮杂芳环或4-6元含氮饱和环，所述B环任选地被一个或多个R8取代。
优选地，B环选自苯环、吡咯、吡唑、咪唑、噁唑、噻唑、吡啶、嘧啶、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶或哌嗪，所述B环任选地被一个或多个R8取代。
优选地，B环选自苯环、噻唑、
Figure BDA0003703453490000031
所述B环任选地被一个R8取代。
优选地，B环选自苯环、噻唑-5-基
Figure BDA0003703453490000032
所述B环任选地被R8取代；
C环选自5-6元芳香环，所述C环任选地被一个或多个R11取代。
优选地，C环选自苯环、吡咯、吡啶、嘧啶，所述C环任选地被一个或多个R11取代。
优选地，C环选自苯环，所述C环任选地被一个R11取代。
E选自C或N原子。
R选自NH2或-C(O)NH2。
R1选自单键、-NH2、5-6元含氮饱和环、-NH-(5-6元含氮饱和环)、-NH-CH2-(5-6元含氮饱和环)、-C(O)-NH-(5-6元含氮饱和环)或-(5-6元含氮饱和环)-NH2。在一实施方案中，R1选自-NH2、5-6元含氮饱和环、-NH-(5-6元含氮饱和环)、-NH-CH2-(5-6元含氮饱和环)、-C(O)-NH-(5-6元含氮饱和环)或-(5-6元含氮饱和环)-NH2。
在一实施方案中，R1选自单键、-NH2、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、-NH-(哌啶)、-NH-(哌嗪)、-NH-(吡咯烷)、-NH-CH2-(哌啶)、-NH-CH2-(哌嗪)、-NH-CH2-(吡咯烷)、-C(O)-NH-(哌啶)、-C(O)-NH-(哌嗪)、-C(O)-NH-(吡咯烷)、-(哌啶)-NH2、-(哌嗪)-NH2或-(吡咯烷)-NH2。在一实施方案中，R1选自-NH2、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、-NH-(哌啶)、-NH-(哌嗪)、-NH-(吡咯烷)、-NH-CH2-(哌啶)、-NH-CH2-(哌嗪)、-NH-CH2-(吡咯烷)、-C(O)-NH-(哌啶)、-C(O)-NH-(哌嗪)、-C(O)-NH-(吡咯烷)、-(哌啶)-NH2、-(哌嗪)-NH2或-(吡咯烷)-NH2。
在一实施方案中，R1选自单键、-NH2、哌啶-3-基、哌啶-4-基、哌嗪-3-基、哌嗪-4-基、吡咯烷-2-基、
Figure BDA0003703453490000033
在一实施方案中，R1选自-NH2、哌啶-3-基、哌啶-4-基、哌嗪-3-基、哌嗪-4-基、吡咯烷-2-基、
Figure BDA0003703453490000034
Figure BDA0003703453490000035
R2、R3、R4、R5、R6、R7、R9、R10、R16、R17、R18分别独立地选自H、D、C1-C3烷基或卤素。
优选地，R2、R3、R9、R10、R16、R17选自H、D、F、Cl、Br或I。
优选地，R4、R5、R6、R7选自H、D或甲基。
优选地，R18选自异丙基。
R8选自C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
优选地，R8选自D、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基或叔丁氧基。
优选地，R8选自叔丁基或异丙氧基。
R11选自C1-C6烷基，所述C1-C6烷基任选地被卤素取代。
优选地，R11选自D、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、三氟甲基、二氟甲基、氟甲基。
优选地，R11选自三氟甲基。
R14、R15分别独立地选自H、含有仲胺或叔胺的基团。
优选地，R14、R15分别独立地选自H、-(C1-C3烷基)NH2、哌啶-4-基、哌啶-3-基或吡咯烷-2-基。
优选地，R14、R15分别独立地选自H、-(CH2)2-NH2或哌啶-4-基。
R19选自任选地被一个或多个卤素取代的5-6元芳香环。
优选地，R19选自任选地被一个或多个卤素取代的苯基。
优选地，R19选自任选地被一个或多个F、Cl、Br或I取代的苯基。
优选地，R19选自任选地被一个或多个F或Cl取代的苯基。
优选地，R19选自任选地被一个F和一个Cl取代的苯基。
n选自0、1、2、3。
优选地，n选自1、2。在一实施方案中，X基团具有如下式(IIa)或(IIb)所示的结构：
Figure BDA0003703453490000041
式中，
A环、R1、R定义同前；
优选地，式(IIa)或(IIb)中，A环选自吡啶、嘧啶、
Figure BDA0003703453490000042
所述吡啶、嘧啶任选地被一个或多个R取代，所述
Figure BDA0003703453490000043
任选地被一个或多个＝O或一个或多个R取代。
优选地，式(IIa)或(Ⅱb)中，R1选自单键、-NH2、哌啶-3-基、哌啶-4-基、哌嗪-4-基、
Figure BDA0003703453490000044
Figure BDA0003703453490000045
在一头施方案中，X基团具有如下式(III)所示的结构：
Figure BDA0003703453490000046
式中，
R1、R、R2、R3、R4、R5分别定义同前。
优选地，式(III)中，R1选自
Figure BDA0003703453490000047
优选地，式(III)中，R为-C(O)NH2。
优选地，式(III)中，R2、R3选自H或F。
优选地，式(III)中，R4、R5为甲基。
在一实施方案中，x基团具有如下式(IVa)所示的结构：
Figure BDA0003703453490000051
式中，R1、B环、R6、R7、R8定义同前。
优选地，式(IVa)中，R1选自
Figure BDA0003703453490000052
优选地，式(IVa)中，R6、R7分别独立地选自H或甲基。
优选地，式(IVa)中，B环选自
Figure BDA0003703453490000053
所述B环任选地被R8取代。
优选地，式(IVa)中，R8为叔丁基。
在一实施方案中，X基团具有如下式(V)所示的结构：
Figure BDA0003703453490000054
式中，R1、C环、R9、R10定义同前。
优选地，式(V)中，R1选自
Figure BDA0003703453490000055
优选地，C环选自苯环，所述C环任选地被一个三氟甲基取代。
优选地，式(V)中，R9、R10选自H或F。
Figure BDA0003703453490000056
式中，R1、R16、R17、R18定义同前。
优选地，式(VII)中，R1选自
Figure BDA0003703453490000057
优选地，式(VII)中，R18选自异丙基。
优选地，式(VII)中，R16、R17选自H或Cl。
在一实施方案中，X基团具有如下式(VIII)所示的结构：
Figure BDA0003703453490000061
式中，R1、R定义同前。
优选地，式(VIII)中，R为-C(O)NH2。
优选地，式(VIII)中，R1为-NH2、
Figure BDA0003703453490000062
在一实施方案中，X基团具有如下式(IX)所示的结构：
Figure BDA0003703453490000063
式中，R14、R15、R19定义同前。
优选地，式(IX)中，R14、R15为H。
优选地，式(IX)中，R19为
Figure BDA0003703453490000064
在一实施方案中，X基团具有如下式(X)所示的结构：
Figure BDA0003703453490000065
式中，
R19定义同前。
优选地，式(x)中，R19为
Figure BDA0003703453490000066
在一实施方案中，X基团具有如下式(XI)所示的结构：
Figure BDA0003703453490000067
式中，R1、R、R19、E定义同前。
优选地，式(XI)中，E为N原子。
优选地，式(XI)中，R为-NH2。
式(XI)中，R1选自
Figure BDA0003703453490000071
优选地，X基团可来自于以下结构的化合物：
Figure BDA0003703453490000072
优选地，本发明X基团选自：
Figure BDA0003703453490000081
Figure BDA0003703453490000091
在一优选的实施方案中，本发明X基团选自：
Figure BDA0003703453490000092
Figure BDA0003703453490000101
在一优选的实施方案中，本发明X基团选自：
Figure BDA0003703453490000111
Y基团如下式(XII)所示：
Figure BDA0003703453490000112
其中，
R20选自H或C＝O。
Y1、Y2分别独立地选自H、卤素或-L1-Q1-L2，并且，Y1、Y2中有且只有一个-L1-Q1-L2。
Q1选自单键、C4-C6饱和环或C4-C6芳香环或立方烷的二价连接基，任选地，Q1中的一个或多个H可以被卤素取代。
优选地，Y1或Y2与L部分相连；
优选地，Q1选自单键、环丁烷、环戊烷、环己烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、苯环或吡啶的二价连接基，任选地，Q1中的一个或多个H可以被卤素取代。
优选地，Q1选自单键、
Figure BDA0003703453490000121
Figure BDA0003703453490000122
任选地，Q1中的一个或多个H可以被卤素取代。
L1为单键、-(CH2)m1-NH-(CH2)m2-、-(CH2)m1-O-(CH2)m2-、--(CH2)m1-C＝C-(CH2)m2-、-(CH2)m1-NH-C(O)-NH-(CH2)m2-，其中m1、m2、m3分别独立地选自0、1、2、3，优选地，m1、m2、m3分别独立地选自0、1。
L2为单键、-(CH2)q1-COO-、-(NH)q2-C(O)q3-Q2-或-NH-。
Q2选自单键或C4-C6饱和环的二价连接基。
优选地，Q2选自单键、环丁烷、环戊烷、环己烷、氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶。
优选地，Q2选自单键、
Figure BDA0003703453490000123
q1选自0、1、2或3，q2选自0或1，q3选自0或1。
优选地，q1选自0、1。
优选地，Y基团可来自于以下结构的化合物：
Figure BDA0003703453490000124
Figure BDA0003703453490000131
优选地，本发明Y基团选自：
Figure BDA0003703453490000141
Figure BDA0003703453490000151
在一优选的实施方案中，本发明Y基团选自：
Figure BDA0003703453490000152
Figure BDA0003703453490000161
在一优选的实施方案中，本发明Y基团选自：
Figure BDA0003703453490000171
Figure BDA0003703453490000181
L基团为单键、-C(O)-(CH2)p1-、-C(O)-(CH2CH2O)p2-(CH2)p3-或-L3-Q3-L4-。
其中，L3与X部分相连、L4与Y部分相连。
p1选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12。
优选地，p1选自5、6、7、8。
p2选自0、1、2、3、4、5、6。
优选地，p2选自2、3。
p3选自0、1、2、3、4、5。
优选地，p3选自0、1、2；
L3为单键、-(CH2)p4-或-C(O)-，其中p4选自1、2。
优选地，p4选自1。
L4为单键、-(CH2)p5-C(O)-、-NH-C(O)-或-NH-，其中p5选自0、1、2。
优选地，p5选自0、1；
Q3选自单键、5-6元饱和环或5-6元芳香环的二价连接基。
优选地，Q3选自单键、
Figure BDA0003703453490000182
优选地，L基团选自单键。
优选地，L基团选自：
Figure BDA0003703453490000183
其中，上述L基团中，位置①与X基团或Y基团相连；位置②与X基团或Y基团相连；
优选地，位置①与Y基团相连，位置②与X基团相连。
在一实施方案中，位置①与X基团相连，位置②与Y基团相连。
在一实施方案中，式(I)化合物选自表1中所列化合物。
本发明还涉及下列化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物：
Figure BDA0003703453490000191
Figure BDA0003703453490000201
Figure BDA0003703453490000211
Figure BDA0003703453490000221
Figure BDA0003703453490000231
Figure BDA0003703453490000241
Figure BDA0003703453490000251
Figure BDA0003703453490000261
Figure BDA0003703453490000271
Figure BDA0003703453490000281
Figure BDA0003703453490000291
Figure BDA0003703453490000301
Figure BDA0003703453490000311
Figure BDA0003703453490000321
Figure BDA0003703453490000331
本发明还提供一种中间体化合物，其具有式(Ia)的结构，
-L-Y (Ia)；
其中，L、Y如本发明所定义。本发明的另一方面，提供一种式(I)化合物的制备方法，其包括：
X+L-Y→X-L-Y。
具体地，X基团中的氨基与-L-Y中间体中的羧基缩合反应得到X-L-Y。
其中，X、L、Y定义同前，所述X基团中的氨基为伯胺或仲胺。
本公开还提供前述任一种化合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
方案A：
Figure BDA0003703453490000341
将化合物1和2，6-二氧哌啶-3-氯化铵溶于醋酸，在室温条件下加入醋酸钾，反应后将反应液过滤、干燥、纯化得到化合物2。
Figure BDA0003703453490000342
在室温条件下，将化合物2加入到含有相应长度氨基酸和DIPEA的二甲亚砜溶液中，将反应得到的混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经纯化得到化合物3a-3g。
方案B：
Figure BDA0003703453490000343
将化合物1’和2，6-二氧哌啶-3-氯化铵溶于醋酸，在室温条件下加入醋酸钾，反应后将反应液过滤、干燥、纯化得到化合物2’；
Figure BDA0003703453490000344
在室温条件下，将化合物2加入到含有相应长度氨基酸和DIPEA的二甲亚砜溶液中，将反应得到的混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经纯化得到化合物3a’-3g’。
方案C：
Figure BDA0003703453490000345
向化合物5’在N，N-二甲基甲酰胺中的混合物中加入冰乙酸。混合物在室温搅拌加入化合物4’，搅拌反应。在0℃下加入三乙酰氧基硼氢化钠，混合物搅拌过夜。反应液旋干并纯化，得化合物中间体19。
方案D：
Figure BDA0003703453490000351
将化合物6’溶于N，N-二甲基甲酰胺中，再加入醋酸、化合物4’，并在室温下将混合物搅拌。0℃加入氰基硼氢化钠，室温下将混合物搅拌。用水稀释混合物，并用乙酸乙酯萃取。用饱和氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，干燥、过滤、真空浓缩后，剩余物经纯化得到化合物ZXA-022-1。
将化合物中间体15-1溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸。将混合物在搅拌过夜。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离，得到化合物中间体15。
方案E：
Figure BDA0003703453490000352
向化合物5’在DMF中的混合物中加入冰乙酸，室温搅拌一定时间后加入化合物7’，混合物在室温搅拌，在0℃下加入DMF和三乙酰氧基硼氢化钠，混合物在室温搅拌，反应液旋干并纯化，得到中间体44。
方案F：
Figure BDA0003703453490000353
室温下化合物8’溶于N，N-二甲基甲酰胺中，再加入N，N′-羰基二咪唑，将混合物室温搅拌一定时间。向反应混合物中添加化合物9’，加热混合物，减压浓缩反应混合物，残余物纯化得中间体8。
方案G：
Figure BDA0003703453490000354
将依鲁替尼母核、化合物3a-3g、HOBt、EDCI、Et3N和DMAP溶于DMF中，反应后向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经纯化得到化合物GBD-2、GBD-4、GBD-6、GBD-8、GBD-10、GBD-12、GBD-14。
方案H：
Figure BDA0003703453490000361
将依鲁替尼母核、化合物3a’-3g’、HOBt、EDCI、Et3N和DMAP溶于DMF中，反应后向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经纯化得到化合物GBD-3、GBD-5、GBD-7、GBD-9、GBD-11、GBD-13、GBD-15。
本公开本发明前述任一种化合物，能够降解BTK蛋白和/或GSPT1蛋白。
本发明前述任一种化合物，能够同时降解BTK蛋白和GSPT1蛋白。
本发明还提供一种药物组合物，所述组合物包含前述任一种化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物。
优选地，所述药物组合物包括前述任一种化合物以及药学上可接受的辅料。
本发明还提供前述任一种化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物、中间体化合物或前述任一种药物组合物在制备治疗患者由BTK蛋白和/或GSPT1蛋白累积引起的病症的药物中的应用。
优选地，所述由BTK蛋白累积引起的病症选自非霍奇金淋巴瘤、B细胞性慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤和/或急性淋巴细胞白血病。
优选地，所述非霍奇金淋巴瘤选自弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤和黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的一种或多种。
优选地，所述由GSPT1蛋白累积引起的病症选自非霍奇金淋巴瘤、白血病和/或实体瘤。
优选地，所述非霍奇金淋巴瘤选自弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和T细胞淋巴瘤的一种或多。
优选地，所述白血病包括慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病中的一种或多种。
优选地，所述实体瘤包括肺癌、肝癌、乳腺癌、脑胶质瘤中、结直肠癌的一种或多种。
前述任一种化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物、中间体化合物或前述任一种药物组合物在制备BTK和/或GSPT1同步降解剂中的应用。
前述任一种化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物、中间体化合物或前述任一种药物组合物在制备BTK和GSPT1同步降解剂中的应用。
一种同时降解有需要的患者中的BTK和/或GSPT1蛋白的方法，其包含向所述患者施用前述任一种化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物，或前述任一种药物组合物。
一种同时降解生物样品中的BTK和/或GSPT1蛋白的方法，其包含使所述生物样品与前述任一种化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物，或前述任一种药物组合物接触。
一种用于治疗有需要的患者由BTK和/或GSPT1蛋白累积引起的病症的方法，其包含向所述患者施用前述任一种化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物，或前述任一种药物组合物。
附图说明
图1A示出了本发明化合物GBD-9对于不同肿瘤细胞中BTK、GSPT1靶点的降解(Western blot法)；
图1B示出了本发明化合物对于DOHH2细胞中BTK、GSPT1靶点的降解(Western blot法)；
图1C示出了本发明化合物GBD-9与CC90009、Poma相比对肿瘤细胞中BTK、GSPT1靶点的降解(Western blot法)；
图2示出了本发明化合物对于DOHH2肿瘤细胞的增殖抑制活性；
图3示出了本发明化合物抑制肿瘤细胞的细胞周期并诱导细胞凋亡的作用。
具体实施方式
根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
I.定义
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
本发明化合物可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如对映异构体和非对映异构体。本发明的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。外消旋体、非对映异构体、对映异构体都包括在本发明的范围之内。
本发明化合物还包括互变异构体形式。互变异构体形式来源于一个单键与相邻的双键交换并一起伴随一个质子的迁移。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。
本文中的数字范围，是指给定范围中的各个整数。例如，“C1-C6”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子；“C3-C6”是指该基团可具有3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子。
术语“被取代的”是指特定原子或基团上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子或基团的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为酮基(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代。除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如Rn)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被1-5个R所取代，则所述基团可以任选地至多被5个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
术语“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括直链的或支链的饱和烃基，所述烃基具有所示出的碳原子数。如术语“C1-C6烷基”包括C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基、C6烷基，实例包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、正己基、2-己基、3-己基等。其可以是二价的，例如亚甲基、亚乙基。
术语“卤代”、“卤素取代”指被一个或多个卤素原子取代，卤素原子的实例包括氟原子、氯原子、溴原子、碘原子。
术语“环烷基”指单环饱和烃体系，无杂原子，无双键。术语“C3-C6环烷基”的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
术语“芳基”、“芳香族”是指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环的芳香环基团，其通过从母体芳香环体系的单一碳原子上除去一个氢原子而得到。例如，芳基可以具有6-20个碳原子、6-14个碳原子或6-10个碳原子。包括包含与饱和、部分不饱和的环，或芳香碳环稠合的芳环的双环基团。实例包括，但不限于，苯基、萘基、蒽基、茚、茚满、1，2-二氢萘、1，2，3，4-四氢萘。
术语“杂芳基”指包含至少一个独立地选自氮、氧和硫杂原子的5、6、7元环的一价芳基，并且包括5-10个原子的稠环体系(其中至少一个是芳香性的)。芳杂基的实例包括，但不限于，吡啶基、噻吩基、咪唑基、嘧啶基、吡啶基、呋喃基、吡嗪基、噻唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、咪唑并吡啶基、苯并呋喃基、哒嗪基、异吲哚基。
术语“元”是指组成环的骨架原子的数目。例如，“5-10元”是指组成环的骨架原子的数目为5个、6个、7个、8个、9个或10个。因此，举例而言，吡啶、哌啶、哌嗪和苯为六元环，而噻吩、吡咯为五元环。
术语“杂环”是指具有环碳原子和1至2个环杂原子的5-12元饱和非芳香体系，其中杂原子独立地选自氮、硫或氧原子。在含有一或多个氮原子的杂环基团中，连接点可为碳或氮原子，只要原子价容许。杂环可为单环或多环体系，例如二环，其中两个或两个以上的环以并环、桥环或螺环形式存在，其中至少一个环含有一个或多个杂原子。
取代基Rn可以与环上的任意原子相键合，只要原子价容许。取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。本领域技术人员可以理解，对于包含一个或多个Rn取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
Figure BDA0003703453490000381
是指化学键连接处。
如本文所用，术语“保护基是指当多功能基有机化合物进行反应时，为使反应只发生在所希望的基团处，而避免其他基团遭受影响，此反应前将其他基团先加以保护，当反应完成后再恢复。能保护某种基团的试剂称为该基团的保护基，常见羟基保护剂、氨基保护剂等。羟基的保护基团包括但不限于：乙酰基(Ac)、2-甲氧基乙氧甲基醚(MEM)、甲氧甲基醚(MOM)、对甲氧基苄基醚(PMB)、甲硫甲基醚(MTM)、特戊酰基(Piv)、四氢吡喃(THP)、硅醚保护基、甲基醚等；氨基保护基团包括但不限于：苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(Boc)、9-芴甲氧羰基(FMOC)、苄基(Bn)、对甲氧苯基(PMP)、三苯甲基衍生物保护基等。
药物或药物组合物
术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断的范围内适合用于与人类和动物的组织接触而没有，与合理利益/风险比相称的，过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
术语“药学上可接受的盐”是指保留了特定化合物的游离酸和碱的生物学效力而没有生物学不良作用的盐。例如酸(包括有机酸和无机酸)加成盐或碱加成盐(包括有机碱和无机碱)。
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
本发明的药物或药物组合物可以经口地、局部地、肠胃外地或粘膜地(例如，含服地、通过吸入或直肠地)以包含常规的非-毒性药学可接受的载体的剂量单位配制剂施用。通常希望使用口服途径。所述活性试剂可以经口地以胶囊、片剂等形式(参见Remington：The Science and Practice of Pharmacy，20th Edition)施用。
对于以片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物组分可以与非-毒性的、药学可接受的辅料如粘结剂(例如，预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填料(例如，乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇和其它还原性和非-还原性糖类、微晶纤维素、硫酸钙或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石粉或硅土、硬脂酸、硬脂基富马酸酯钠、甘油二十二烷酸酯、硬脂酸钙等)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如，月桂基硫酸钠)、着色剂和调味剂、明胶、甜味剂、天然和合成的胶(如阿拉伯胶、黄蓍胶或藻朊酸盐)、缓冲盐、羧甲纤维素、聚乙二醇、蜡、等。对于以液体形式的口服给药，所述药物组分可以与非-毒性、药学可接受的惰性载体(例如，乙醇、甘油、水)、防沉降剂(例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化的可食用脂肪)、乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)、非-水性载体(例如，扁桃油、油酯类、乙醇或经分馏的植物油)、保藏剂(例如，p-羟基苯甲酸甲酯或p-羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)等组合。还可以加入稳定剂如抗氧化剂(BHA、BHT、桔酸丙酯、抗坏血酸钠、柠檬酸)以稳定所述剂型。
包含作为活性化合物的片剂可以通过本领域熟知的方法包衣。包含作为活性化合物的式I化合物的本发明的所述组合物还可以引入小珠、微球或微胶囊，例如由聚乙醇酸/乳酸(PGLA)构建的。用于口服给药的液体的制剂可以采取例如溶液，糖浆剂，乳液或混悬液的形式或者它们可以呈现为在使用前用水或其它适宜的辅料重构的干产品。用于口服给药的制剂可以适宜地配制以使活性化合物受控或延迟地释放。
本发明的药物或药物组合物可以经肠胃外递送，即，通过静脉内(i.v.)、脑室内(i.c.v.)、皮下(s.c.)、腹膜内(i.p.)、肌内(i.m.)、皮下(s.d.)或皮内(i.d.)施用，通过直接注射，经例如快速浓注或连续输液。用于注射的配制剂可以单位剂型呈现，例如在具有添加的保藏剂的安瓿瓶或多-剂量容器中。所述组合物可以采用赋形剂(excipient)的形状，在油或水性载体中的混悬液、溶液或乳液的形式，并可以包含配制试剂如防沉降剂、稳定剂和/或分散剂。备选地，所述活性成分可以以粉末形式在使用前用适宜的载体(例如无菌无热原水)重构。
本发明的药物或药物组合物还可以配制用于直肠给药，例如呈栓剂或保留灌肠(例如，包含常规栓剂基质如可可油或其它甘油酯)。
术语“治疗”包括抑制、缓解、预防或消除与所治疗的疾病、病症或失调相关的一种或多种症状或副作用。
术语“减少”、“抑制”、“减轻”或“减小”的使用是相对于对照的。本领域技术人员将容易地确定用于每个实验的适当对照。例如，将用化合物处理的受试者或细胞中的降低了的反应与未用化合物处理的受试者或细胞中的反应进行比较。
如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以治疗、抑制或减轻被治疗的疾病状态的一种或多种症状或以其它方式提供期望的药理学和/或生理学作用的剂量。精确的剂量将根据多种因素而变化，如受试者依赖的变量(例如，年龄、免疫系统健康等)、疾病或病，以及所施用的治疗。有效量的效果可以相对于对照。这些对照在本领域中是已知的并且在本文中讨论，并且可以是例如在药物或药物组合施用之前或没有施用时的受试者的状况，或在药物组合的情况下，可以将组合效果与仅施用一种药物的效果进行比较。
术语“赋形剂”在本文中用于包括可以包含在微粒中或其上的不是治疗或生物活性化合物的任何其它化合物。因此，赋形剂应当是药学上或生物学上可接受的或相关的，例如赋形剂通常对受试者无毒性。“赋形剂”包括单一的这种化合物，并且还旨在包括多种化合物。
术语“药物组合物”意指包含本发明所述化合物或其药学上可接受的盐，以及依施用方式和剂型的性质而定的至少一种选自以下药学上可接受的成分的组合物，包括但不限于：载体、稀释剂、佐剂、赋形剂、防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、矫味剂、香味剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂、分散剂、温敏材料、温度调节剂、黏附剂、稳定剂、助悬剂等。
用途和治疗方法
术语“患者”、“对象”、“个体”等等在本文中可交换使用，并指的是服从本文描述方法的任何动物或其细胞，不论是体外或原位。在一些非限制性实施方式中，患者、对象或个体为人。
根据本发明的方法，化合物或组合物可使用有效治疗与BTK和/或GSPT1蛋白累积相关的疾病或减轻其严重程度的任何量和任何施用途径施用。
本发明涉及一种减少生物样品中的BTK和/或GSPT1蛋白的方法，其包含使所述生物样品与本发明的化合物或包含所述化合物的组合物接触的步骤。
术语“生物样品”包括(但不限于)细胞培养物或其提取物；从哺乳动物获得的活检材料或其提取物；以及血液、唾液、尿液、粪便、精液、泪液或其它体液或其提取物。生物样品中的酶的抑制可用于达成本领域的技术人员已知的多种目的。此类目的的实例包括(但不限于)生物分析、基因表达研究和生物目标鉴别。
本发明的抑制患者中的相关蛋白的方法，例如BTK和/或GSPT1，其包含向所述患者施用本发明的化合物或包含所述化合物的组合物的步骤。
所提供的化合物为BTK和/或GSPT1蛋白降解剂，因此可用于治疗一或多种与BTK和/或GSPT1蛋白活性相关的病症。因此，在某些实施例中，本发明提供了一种用于治疗BTK和/或GSPT1蛋白介导的病症的方法，其包含向有需要的患者施用本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
如本文所用，术语“BTK和/或GSPT1蛋白介导”的病症、疾病和/或病状如本文所用意指已知BTK和/或GSPT1蛋白或其突变体起作用的任何疾病或其它有害病状。
所述由BTK蛋白累积引起的病症选自非霍奇金淋巴瘤和/或自身免疫疾病.
所述由BTK蛋白累积引起的病症选自自身免疫疾病，所述自身免疫疾病选自关节炎、肺出血、系统性红斑狼疮、天胞疮、慢性淋巴性甲状腺炎、甲状腺功能亢进、胰岛素依赖型糖尿病、重症肌无力、慢性溃疡性结肠炎、恶性贫血伴慢性萎缩性胃炎、原发性胆汁性肝硬变、多发性脑脊髓硬化症或急性特发性多神经炎中的一种或多种；
所述由BTK蛋白累积引起的病症选自非霍奇金淋巴瘤，所述非霍奇金淋巴瘤选自弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤和黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的一种或多种。
所述由GSPT1蛋白累积引起的病症选自非霍奇金淋巴瘤、白血病和/或实体瘤。
所述由GSPT1蛋白累积引起的病症选自非霍奇金淋巴瘤，所述非霍奇金淋巴瘤选自弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和T细胞淋巴瘤的一种或多种。
所述由GSPT1蛋白累积引起的病症选自白血病，所述白血病包括慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病中的一种或多种。
所述由GSPT1蛋白累积引起的病症选自白实体瘤，所述实体瘤包括肺癌、肝癌、乳腺癌、脑胶质瘤中的一种或多种。
如本文所用，术语“蛋白降解靶向嵌合体”即PROTAC(proteolysis targetingchimeras)，是一个两端含有不同配体的化学分子，一端是结合E3连接酶的配体(例如本发明所述ULM部分)，另一头是结合细胞内蛋白质的配体(例如本发明所述结合BTK结合部分)，这两个配体再由一段linker连接起来(例如本发明所述L)。这样的化学分子既可以结合E3泛素连接酶，又可以结合胞内蛋白质，通过把靶向的蛋白质招募到E3泛素连接酶附近来实现靶向蛋白质的多泛素化，最后被蛋白酶体降解，PROTAC可以循环使用，不被蛋白酶体降解。
如本文所用，术语“泛素连接酶”指促进泛素至特定底物蛋白质的转移的蛋白质家族，靶向底物蛋白质用于降解。例如，cereblon是E3泛素连接酶蛋白，其单独或与E2泛素缀合酶组合引起泛素与靶蛋白上的赖氨酸的附接，并且随后靶向特定蛋白质底物用于被蛋白酶体降解。因此，单独或与E2泛素缀合酶复合的E3泛素连接酶负责泛素至靶蛋白的转移。一般而言，泛素连接酶涉及多泛素化，使得第二泛素附接于第一泛素；第三泛素附接于第二泛素，如此等等。多泛素化将蛋白质标记用于被蛋白酶体降解。然而，存在一些泛素化事件，其限于单泛素化，其中仅单个泛素通过泛素连接酶加入底物分子。单泛素化蛋白质不被靶向蛋白酶体用于降解，而是可以在其细胞位置或功能中改变，例如，经由结合具有能够结合泛素的结构域的其它蛋白质。更复杂的是，泛素的不同赖氨酸可被E3靶向以制备链。最常见的赖氨酸是泛素链上的Lys48。这是用于制备被蛋白酶体识别的聚泛素的赖氨酸。
联合治疗方法
本发明提供了使用如本发明所述的化合物与其他治疗药物的联合疗法。本发明所用的“联合疗法”一词包括以顺序方式施用这些药剂，即其中每种治疗剂在不同时间施用，以及施用这些治疗剂，或至少二种药剂，基本上同时进行。每种试剂的顺序，或基本上同时给药，可受任何适当途径的影响，包括，但不限于，口服途径、静脉内途径、肌肉内、皮下途径，以及通过黏膜组织的直接吸收。药剂可以通过相同的途径或不同的途径来施用。例如，可以口服给予第一药剂，而以静脉内施用第二药剂。此外，选择的组合剂可通过静脉内注射施用，而组合的其它药剂可以口服给药。或者，例如，可以通过静脉内或皮下注射施用二种或更多种药剂。
如本文所用，术语“DIPEA”指的是二异丙基乙胺。
如本文所用，术语“EDCI”指的是1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。
如本文所用，术语“HATU”指的是2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐。
II.实施例
下面参照实施例进一步阐释本发明。对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据本申请说明书的教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
制备例
制备例1：中间体化合物3a-3g的合成
Figure BDA0003703453490000411
将化合物I3-1(24.0mmol)和2，6-二氧哌啶-3-氯化铵(3.39g，26.6mmol，2.2equiv.)溶于醋酸，在室温条件下加入醋酸钾(7.3g，74.4mmol，3.1equiv.)。反应混合物在100℃下搅拌4h。然后将反应液倒入冰水中并过滤，干燥后用硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝30∶1)进一步纯化得到化合物I3-2，产率为89％。
Figure BDA0003703453490000412
在室温条件下，将化合物I3-2(1.0mmol)加入到含有相应长度氨基酸(1.5mmol，1.5equiv.)和DIPEA(33.0μl，2.0mmol，2.0equiv.)的二甲亚砜溶液中，反应在85℃的条件下搅拌7h。将反应得到的混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝50∶1)进一步纯化得到化合物3a-3g，产率51％。
制备例2：中间体化合物3a’-3g’的合成
Figure BDA0003703453490000413
将化合物I3-1’(24.0mmol)和2，6-二氧哌啶-3-氯化铵(3.39g，26.6mmol，2.2equiv.)溶于醋酸，在室温条件下加入醋酸钾(7.3g，74.4mmol，3.1equiv.)。反应混合物在100℃下搅拌4h。然后将反应液倒入冰水中并过滤，干燥后用硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝20∶1)进一步纯化得到化合物I3-2’，产率为91％；
Figure BDA0003703453490000414
在室温条件下，将化合物I3-2’(1.0mmol)加入到含有相应长度氨基酸(1.5mmol，1.5equiv.)和DIPEA(33.0μl，2.0mmol，2.0equiv.)的二甲亚砜溶液中，反应在85℃的条件下搅拌7h。将反应得到的混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝50∶1)进一步纯化得到化合物3a’-3g’，产率43％。
制备例3：中间体1的合成
Figure BDA0003703453490000415
步骤1：3-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)甲基)环丁烷-1-羧酸(中间体1)的制备
2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-氟异二氢吲哚-1，3-二酮(100mg，0.362mmol)，3-(氨基甲基)环丁烷-1-羧酸盐酸盐(90.0mg，0.543mmol)，氟化钾(84.0mg，1.45mmol)，二甲基亚砜(5mL)的混合溶液在120℃下搅拌1.5小时。反应液过滤，得到的滤液用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：15％-25％)，得到17.2mg黄色固体状标题化合物，收率12.1％。MS，[M+H]+＝385.8
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.09(s，1H)，11.07(s，1H)，7.57-7.53(m，1H)，7.13(s，1H)，6.95(dd，J＝8.4，1.8Hz，1H)，6.89-6.82(m，1H)，5.03(dd，J＝12.8，5.2Hz，1H)，3.33-3.06(m，3H)，2.99-2.82(m，2H)，2.59-2.43(m，2H)，2.36-2.19(m，2H)，2.05-1.83(m，3H).
制备例4：中间体2的合成
Figure BDA0003703453490000421
步骤1：4-(2-(叔丁氧基)-2-氧亚乙基)环己烷-1-甲酸乙酯(中间体2-1)的制备
向2-(二乙氧基磷酰基)乙酸叔丁酯(1.79g，0.708mmol)溶于四氢呋喃(20mL)，在冰浴条件下加入氢化钠(0.280g，0.708mmol)。反应液在氮气保护下室温搅拌1小时，然后在0℃下加入4-氧代环己烷-1-甲酸乙酯(1.00g，5.90mmol)，混合液在室温搅拌过夜。待反应完成后，将反应液在冰浴下加入少量冰水淬灭，然后浓缩，接着加入50mL水，用二氯甲烷萃取(20mL*3)。将有机相合并后用饱和食盐水洗两次(30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤旋干并由快速色谱法分离纯化(石油醚～二氯甲烷＝0-10％)，得到1.30g无色油状标题产物，收率78.0％。MS，[M+Na]+＝291.0
步骤2：4-(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)环己烷-1-甲酸乙酯(中间体2-2)的制备
将4-(2-(叔丁氧基)-2-氧亚乙基)环己烷-1-甲酸乙酯(1.300g，4.80mmol)，钯碳(0.130g，10％Wt)，甲醇(20mL)的混合液在氢气氛围下室温搅拌16小时。待反应完成后将反应液过滤旋干得到1.20g无色油状标题产物，收率87.5％。
MS，[M+Na]+＝293.0
步骤3：4-(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)环己烷-1-甲酸(中间体2-3)的制备。
将4-(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)环己烷-1-甲酸乙酯(500mg，1.85mmol)溶于甲醇/水/四氢呋喃(9mL，1∶1∶1)的混合液中，然后加入氢氧化锂一水合物(194mg，4.62mmol)，室温搅拌16小时。待反应完成后将反应液过滤旋干，得到450mg无色油状标题产物，收率80.3％。
MS，[M+Na]+＝265.0
步骤4：2-(4-(羟甲基)环己基)乙酸叔丁酯(中间体2-4)的制备
往4-(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)环己烷-1-甲酸(450mg，1.86mmol)在四氢呋喃(8mL)的混合液中加入硼烷二甲硫醚络合物(2.8mL，5.57mmol，2M)，室温搅拌16小时。待反应完成后将反应液过滤旋干，并由快速色谱法分离纯化(石油醚～乙酸乙酯＝0-30％)，得到400mg无色油状标题产物，收率89.6％。MS，[M+Na]+＝251.0
步骤5：2-(4-甲酰基环己基)乙酸叔丁酯(中间体2-5)的制备
向2-(4-(羟甲基)环己基)乙酸叔丁酯(350mg，1.53mmol)在二氯甲烷(10mL)的混合液中加入氯铬酸吡啶盐(660mg，3.06mmol)，室温搅拌16小时。待反应完成后将反应液过滤旋干，并由快速色谱法分离纯化(石油醚～乙酸乙酯＝0-5％)，得到170mg无色油状标题产物，收率46.5％
步骤6：叔丁基2-(4-((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1，3-二氧异吲哚-5-基)氨基)甲基)环己基)乙酸酯(中间体2-7)的制备。
向2-(4-甲酰基环己基)乙酸叔丁酯(170mg，0.751mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中的混合物中加入冰乙酸(1mL)。混合物在室温搅拌10分钟后加入5-氨基-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(205mg，0.751mmol)，混合物在室温搅拌1小时。在0℃下加入氰基硼氢化钠(94.0mg，1.50mmol)，混合物在室温搅拌过夜。待反应完成后将反应液过滤旋干，并由快速色谱法分离纯化(二氯甲烷～甲醇＝0-3％)，得到310mg无色油状标题产物，收率59.7％。
MS，[M+Na]+＝506.0
步骤7∶2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-5-硝基异吲哚-1，3-二酮(中间体2-8)的制备
将5-硝基-2-苯并呋喃-1，3-二酮(2.00g，10.4mmol)，3-氨基哌啶-2，6-二酮盐酸盐(1.33g，10.4mmol)，醋酸钾(1.02g，10.4mmol)，醋酸(15mL)的混合物在115℃下搅拌16小时。将反应液旋干，用水打浆，然后抽滤，滤饼用乙酸乙酯和石油醚的混合液(1：3)洗涤得到1.90g紫色固体状标题产物，收率57.7％。MS，[M+H]+＝303.9
步骤8：5-氨基-2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1，3-二酮(中间体2-6)的制备
将2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-5-硝基异吲哚-1，3-二酮(1.50g，4.90mmol)，钯碳(500mg，33％Wt)，甲醇/四氢呋喃(15mL/15mL)的混合液在氢气氛围下室温搅拌16小时。待反应完成后将反应液过滤旋干得到1.30g无色油状标题产物，收率91.8％。MS，[M+H]+＝274.0
步骤9：2-(4-(((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1，3-二氧异吲哚-5-基)氨基)甲基)环己基)乙酸(中间体2)的制备
将叔丁基2-(4-((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1，3-二氧异吲哚-5-基)氨基)甲基)环己基)乙酸酯(270mg，0.558mmol)溶于三氟乙酸/二氯甲烷(1mL/4mL)的混合液中，然后室温搅拌16小时。待反应完成后将反应液过滤旋干，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相∶乙腈/水，0.1％FA，梯度：25％-50％)，得到34.1mg黄色固体状标题化合物，收率14.2％。MS，[M+H]+＝428.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.01(s，1H)，11.06(s，1H)，7.55(d，J＝8.4Hz，1H)，7.20-7.11(m，1H)，7.00-6.93(m，1H)，6.90-6.82(m，1H)，5.04-5.00(m，1H)，3.15-2.99(m，2H)，2.93-2.81(m，1H)，2.63-2.51(m，2H)，2.22-2.07(m，2H)，2.02-1.95(m，1H)，1.93-1.58(m，4H)，1.54-1.34(m，4H)，1.01-0.95(m，2H).
制备例5：中间体3的合成
Figure BDA0003703453490000431
步骤1：叔丁基2-(2-氯-4-硝基苯基)乙酸酯(中间体3-1)的制备
将锌粉(1570mg，24.0mmol)置于100mL氮气保护的三口烧瓶中，然后将溶解于6mL无水四氢呋喃中的三甲基氯硅烷(217mg，2.00mmol)注入烧瓶中。将悬浮混合物在室温下搅拌20分钟，然后将溶于24mL无水四氢呋喃中的叔丁基2-溴乙酸酯(1.951g，10.0mmol)在25-40℃下滴入烧瓶中，约10分钟添加完成后，在40℃搅拌反应混合物30分钟。向悬浮液中添加三(二亚苄基丙酮)二钯(92.0mg，0.100mmol)、三(邻甲基苯基)磷(61.0mg，0.200mmol)和1-溴-2-氯-4-硝基苯(473mg，2.00mmol)，反应液在80℃搅拌16小时。加入乙酸乙酯(30mL)和饱和氯化铵水溶液(30mL)，垫硅藻土过滤，滤液用水(30mL)、饱和氯化钠水溶液(30mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。残余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶10)纯化，得到350mg黄色固体状标题化合物，纯度约60％，收率约38.6％。
步骤2：叔丁基2-(4-氨基-2-氯苯基)乙酸酯(中间体3-2)的制备
将叔丁基2-(2-氯-4-硝基苯基)乙酸酯(350mg，1.29mmol)、氯化铵(276mg，5.15mmol)和还原铁粉(360mg，6.44mmol)加入乙醇(7mL)和水(7mL)中，悬浮液在85℃下搅拌2小时。降至室温，反应混合物用乙酸乙酯和水稀释，分层。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。残余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4)纯化，得到150mg黄色油状标题化合物，收率约43.4％。MS，[M-55]+＝186.0.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.95(d，J＝8.2Hz，1H)，6.60(d，J＝2.2Hz，1H)，6.44(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，5.29(s，2H)，3.45(s，2H)，1.38(s，9H).
步骤3：叔丁基2-(2-氯-4-(3-((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-基)甲基)脲基)苯基)乙酸酯(中间体3)的制备
室温下3-(5-(氨基甲基)-1-羰基异二氢吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮盐酸盐(144mg，0.465mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，再加入N，N′-羰基二咪唑(90.5mg，0.558mmol)，将混合物搅拌1小时。向反应混合物中添加叔丁基2-(4-氨基-2-氯苯基)乙酸酯(112.5mg，0.465mmol)，在80℃下加热混合物16小时。减压浓缩反应混合物，残余物通过硅胶柱层析(甲醇∶二氯甲烷＝1∶10)纯化，得到150mg无色油状标题化合物，收率约53.7％。MS，[M+Na]+＝562.7
步骤4：2-(2-氯-4-(3-((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-基)甲基)脲基)苯基)乙酸(中间体3)的制备
将叔丁基2-(2-氯-4-(3-((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-基)甲基)脲基)苯基)乙酸酯(150mg，0.277mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(316mg，2.77mmol)。将混合物在25℃搅拌过夜。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：15％-40％)，得到63.4mg白色固体状标题化合物，收率约43.6％。MS，[M+H]+＝484.6.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.39(s，1H)，10.99(s，1H)，8.87(s，1H)，7.73-7.65(m，2H)，7.52(s，1H)，7.44(d，J＝7.8Hz，1H)，7.19(dt，J＝8.4，5.2Hz，2H)，6.88(s，1H)，5.11(dd，J＝13.2，5.0Hz，1H)，4.43(t，J＝12.8Hz，3H)，4.31(d，J＝17.2Hz，1H)，3.59(s，2H)，2.96-2.86(m，1H)，2.59(d，J＝17.4Hz，1H)，2.38(dd，J＝13.2，4.2Hz，1H)，2.03-1.96(m，1H).
制备例6：中间体4的合成
Figure BDA0003703453490000441
步骤1：4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-4-基)氨基)甲基)苯甲酸(中间体4)的制备
向4-甲酰基苯甲酸(173 mg，1.15mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2 mL)中的混合物中加入冰乙酸(0.96mL)。混合物在室温搅拌10分钟后加入3-(4-氨基-1-氧代-3H-异吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮(150mg，0.579mmol)。混合物在室温搅拌1小时。在0℃下加入DMF(2mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(736mg，3.47mmol)，混合物在室温搅拌过夜。反应液旋干，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：25％-50％)，得到107.9mg白色固体状化合物，收率35.1％。MS，[M+H]+＝394.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.87(s，1H)，11.04(s，1H)，7.89(d，J＝8.3Hz，2H)，7.49(d，J＝8.2Hz，2H)，7.19(t，J＝7.7Hz，1H)，6.93(d，J＝7.2Hz，1H)，6.59(d，J＝8.0Hz，1H)，6.49(t，J＝5.9Hz，1H)，5.13(dd，J＝13.2，5.0Hz，1H)，4.48(d，J＝5.8Hz，2H)，4.33(d，J＝17.2Hz，1H)，4.21(d，J＝17.2Hz，1H)，2.97-2.87(m，1H)，2.67-2.61(m，1H)，2.38-2.27(m，1H)，2.09-2.02(m，1H).
制备例7：中间体5的合成
Figure BDA0003703453490000451
步骤1∶1-(叔丁基)4-甲基环己烷-1，4-二甲酸酯(中间体5-1)的制备
将4-(甲氧羰基)环己烷-1-羧酸(2.88g，15.5mmol)溶于叔丁醇(30mL)中，添加Boc2O(8.77g，40.2mmol)，然后缓慢添加4-二甲氨基吡啶(755mg，6.19mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取。用饱和氯化钠水溶液(30mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。残余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶20)纯化，得到4.00g无色油状化合物，收率96.1％。MS，[M+Na]+＝265.0
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.68(s，3H)，2.45(dt，J＝11.8，3.9Hz，1H)，2.39-2.33(m，1H)，1.94-1.80(m，4H)，1.70-1.59(m，4H)，1.44(s，9H).
步骤2：4-(叔丁氧羰基)环己烷-1-羧酸(中间体5-2)的制备
将1-(叔丁基)4-甲基环己烷-1，4-二甲酸酯(4.00g，16.5mmol)溶于甲醇(50mL)和H2O(10mL)中，添加LiOH·H2O(2.77g，66.0mmol)。混合物在25℃搅拌过夜。旋蒸除去溶剂，剩余物加入水(20mL)，用1N盐酸调节至pH＝3，并用乙酸乙酯(30mL*2)萃取。用饱和氯化钠水溶液(30mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩得到3.40g白色固体状化合物，收率85.5％。MS，[M+Na]+＝250.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.10(s，1H)，2.42-2.07(m，2H)，1.88(dd，J＝13.4，9.6Hz，1H)，1.69(tt，J＝11.2，9.5Hz，3H)，1.57(ddd，J＝9.4，6.6，2.4Hz，3H)，1.39(d，J＝2.5Hz，9H)，1.34-1.26(m，1H).
步骤3：4-(羟甲基)环己烷-1-羧酸叔丁酯(中间体5-3)的制备
在氩气环境下，将BH3·THF(18.0mL，18.0mmol)滴入4-(叔丁氧羰基)环己烷-1-羧酸(3.40g，15.0mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液中，混合物在0℃搅拌1小时。用0.5N盐酸(30mL)稀释混合物，用乙酸乙酯(30mL*2)萃取，饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩得到3.00g无色油状标题化合物，收率84.0％。MS，[M+Na]+＝237.0
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.66-3.53(m，1H)，3.49(d，J＝4.4Hz，1H)，2.45(dt，J＝9.8，4.9Hz，1H)，1.96(ddd，J＝16.0，9.4，4.0Hz，2H)，1.62-1.47(m，4H)，1.42(dd，J＝4.6，1.0Hz，9H)，1.32-1.21(m，2H)，1.02-0.81(m，1H).
步骤4：4-甲酰基环己烷-1-羧酸叔丁酯(中间体5-4)的制备
将4-(羟甲基)环己烷-1-羧酸叔丁酯(1.00g，4.67mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入氯铬酸吡啶盐(2.01g，9.33mmol)，将混合物在25℃搅拌16小时。反应液真空旋蒸，剩余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝0-20％)纯化，得到750mg无色油状标题化合物，收率68.1％。MS，[M+Na]+＝235.0
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.66-9.61(m，1H)，2.32(ddd，J＝8.4，4.0，2.4Hz，1H)，2.25-2.09(m，1H)，2.07-2.02(m，1H)，2.00-1.82(m，2H)，1.73-1.66(m，4H)，1.43-1.41(m，9H)，1.29-1.23(m，1H).
步骤5：4-(((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚-4-基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸叔丁酯(中间体5-5)的制备
将4-甲酰基环己烷-1-羧酸叔丁酯(164mg，0.771mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中，再加入冰醋酸(0.32mL)，3-(4-氨基-1-氧异吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮(100mg，0.386mol)，并在室温下将混合物搅拌1小时。冰浴至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(491mg，2.31mmol)，然后在室温下将混合物搅拌16小时。用水(20mL)稀释混合物，并用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩得到300mg绿色油状粗品标题化合物。MS，[M+H]+＝455.9
步骤6：4-(((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚-4-基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸(中间体5)的制备
将4-(((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚-4-基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸叔丁酯(300mg，粗品)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(375mg，3.29mmol)。将混合物在25℃搅拌过夜。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：20％-60％)，得到101.4mg白色固体状标题化合物，收率约65.0％。MS，[M+H]+＝400.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.00(s，1H)，10.98(s，1H)，7.23(t，J＝7.7Hz，1H)，6.94-6.80(m，1H)，6.70(d，J＝8.1Hz，1H)，5.59(dd，J＝7.8，3.4Hz，1H)，5.08(dd，J＝13.2，5.0Hz，1H)，4.14(ddd，J＝44.4，17.2，3.4Hz，2H)，3.01-2.83(m，3H)，2.61-2.54(m，1H)，2.44-2.39(m，0.7H)，2.32-2.19(m，1H)，2.15-2.07(m，0.3H)，2.04-1.95(m，1H)，1.91-1.79(m，3H)，1.72-1.38(m，4H)，1.30-1.15(m，2H)，1.00-0.88(m，1H).
制备例8：中间体6的合成
Figure BDA0003703453490000461
步骤1：2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸甲酯(中间体6-1)的制备
2-甲基-4-硝基苯甲酸甲酯(5.00g，0.0256mol)，N-溴琥珀酰亚胺(4.78g，0.0268mol)，偶氮二异丁腈(0.250g，0.00153mol)，四氯化碳(30mL)的混合溶液在70℃下搅拌16小时。将反应液过滤，得到的滤液旋干并由快速色谱法分离纯化(乙酸乙酯～石油醚＝0-5％)，得到6.50g淡黄色固体状产物，收率74％。
步骤2：3-(5-硝基-1-氧代-3H-异吲哚-2-基1哌啶-2，6-二酮(中间体6-2)的制备
2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸甲酯(6.50g，0.0237mol)，3-氨基哌啶-2，6-二酮盐酸盐(5.82g，0.0355mol)，N，N-二异丙基乙胺(9.19g，0.0711mol)，乙腈(40mL)的混合物在80℃下搅拌16小时。将反应液过滤，滤饼经乙腈洗涤得到4.00g黑色固体状标题产物，收率50％。MS，[M+H]+＝290.9
步骤3：3-(5-氨基-1-氧代-3H-异吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮(中间体6-3)的制备
3-(5-硝基-1-氧代-3H-异吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮(4.00g，13.8mmol)，钯碳(0.730g，6.90mmol)，甲醇(20mL)的混合物在氢气氛围下常温搅拌16小时。将反应液过滤，滤饼经甲醇洗涤得到1.60g蓝黑色固体状标题产物，收率36％。MS，[M+H]+＝259.9
步骤4：4-(((2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代-3H-异吲哚-5-基)氨基)甲基)苯甲酸(中间体6)的制备
向4-甲酰基苯甲酸(232mg，1.54mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中加入冰乙酸(1.28mL)。混合物在室温搅拌10分钟后加入3-(5-氨基-1-氧代-3H-异吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮(200mg，0.770mmol)，混合物在室温搅拌1小时。在0℃下加入N，N-二甲基甲酰胺(2mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(980mg，4.63mmol)，混合物在室温搅拌过夜。反应液旋干，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：25％-30％)，得到103.3mg白色固体状标题化合物，收率16.0％。MS，[M+H]+＝393.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.49(s，1H)，10.62(s，1H)，7.87(d，J＝8.2Hz，2H)，7.44(d，J＝8.2Hz，2H)，7.36(d，J＝8.2Hz，1H)，6.81-6.77(m，1H)，6.68(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，6.64-6.63(m，1H)，4.92(dd，J＝13.0，5.2Hz，1H)，4.41(d，J＝6.0Hz，2H)，4.22(d，J＝16.6Hz，1H)，4.12(d，J＝16.6Hz，1H)，2.87-2.78(m，1H)，2.60-2.52(m，1H)，2.34-2.24(m，1H)，1.97-1.89(m，1H).
制备例9：中间体7的合成
Figure BDA0003703453490000471
步骤1：4-(((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚-5-基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸叔丁酯(中间体7-1)的制备
将4-甲酰基环己烷-1-羧酸叔丁酯(328mg，1.543mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中，再加入醋酸(0.62mL)，3-(5-氨基-1-氧异吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮(200mg，0.771mol)，并在室温下将混合物搅拌1小时。冰浴至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(981mg，4.63mmol)，然后在室温下将混合物搅拌16小时。用水(20mL)稀释混合物，并用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。剩余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝0-100％)纯化，得到220mg无色油状化合物，收率59.5％。MS，[M+H]+＝456.0
步骤2：4-(((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚-5-基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸(中间体7)的制备
将4-(((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1-氧异吲哚-5-基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸叔丁酯(220mg，0.483mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(551mg，4.83mmol)。将混合物在25℃搅拌过夜。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：20％-50％)，得到56.8mg白色固体状标题化合物，收率约29.5％。MS，[M+H]+＝400.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.05(s，1H)，10.90(d，J＝8.6Hz，1H)，7.34(t，J＝5.8Hz，1H)，6.68-6.50(m，2H)，6.38(q，J＝5.4Hz，1H)，4.97(dd，J＝13.2，5.0Hz，1H)，4.22(d，J＝16.8Hz，1H)，4.09(d，J＝16.8Hz，1H)，2.96-2.80(m，3H)，2.65-2.50(m，2H)，2.35-2.06(m，1H)，1.87(dddd，J＝13.8，12.8，4.2，1.8Hz，4H)，1.71-1.37(m，3H)，1.30-1.17(m，2H)，1.02-0.87(m，1H).
制备例10：中间体8的合成
Figure BDA0003703453490000472
步骤1：叔丁基4-(3-((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-基)甲基)脲基)苯酸酯(中间体8-1)的制备
室温下3-(5-(氨基甲基)-1-羰基异二氢吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮盐酸盐(230mg，0.743mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(8mL)中，再加入N，N-羰基二咪唑(145mg，0.891mmol)，将混合物室温搅拌16小时。向反应混合物中添加叔丁基4-氨基苯酸酯(172mg，0.891mmol)，在80℃下加热混合物16小时。减压浓缩反应混合物，残余物通过硅胶柱层析(甲醇∶二氯甲烷＝1∶10)纯化，得到300mg白色固体状化合物，收率约73.8％。MS，[M+Na]+＝514.9
步骤2：4-(3-((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-基)甲基)脲基)苯甲酸(中间体8)的制备
将叔丁基4-(3-((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-基)甲基)脲基)苯酸酯(300mg，0.609mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(694mg，6.09mmol)。将混合物在室温搅拌16小时。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：15％-40％)，得到103.0mg白色固体状化合物，收率约38.1％。MS，[M+H]+＝437.0
制备例11：中间体9的合成
Figure BDA0003703453490000481
步骤1：叔丁基2-(4-(3-((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-基)甲基)脲基)苯基)乙酸酯(中间体9-1)的制备
室温下3-(5-(氨基甲基)-1-羰基异二氢吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮盐酸盐(150mg，0.484mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，再加入N，N′-羰基二咪唑(94.2mg，0.581mmol)，将混合物室温搅拌1小时。向反应混合物中添加叔丁基2-(4-氨基苯基)乙酸酯(111mg，0.533mmol)，在80℃下搅拌16小时。合并ENB210333-050，减压浓缩反应混合物，残余物通过硅胶柱层析(甲醇∶二氯甲烷＝1∶10)纯化，得到300mg无色油状化合物，收率约74.3％。MS，[M+Na]+＝528.8
步骤2：2-(4-(3-((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-基)甲基)脲基)苯基)乙酸(中间体9)的制备
将叔丁基2-(4-(3-((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-基)甲基)脲基)苯基)乙酸酯(300mg，0.592mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(675mg，5.92mmol)。将混合物在室温搅拌16小时。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：10％-40％)，得到119.9mg白色固体状化合物，收率约44.6％。MS，[M+H]+＝451.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.26(s，1H)，10.99(s，1H)，8.63(s，1H)，7.69(d，J＝7.8Hz，1H)，7.52(s，1H)，7.44(d，J＝7.8Hz，1H)，7.34(d，J＝8.4Hz，2H)，7.10(d，J＝8.4Hz，2H)，6.75(t，J＝6.0Hz，1H)，5.11(dd，J＝13.2，5.0Hz，1H)，4.43(dd，J＝13.8，12.0Hz，3H)，4.31(d，J＝17.4Hz，1H)，3.45(s，2H)，2.96-2.85(m，1H)，2.59(d，J＝17.0Hz，1H)，2.44-2.34(m，1H)，2.00(dd，J＝9.0，3.6Hz，1H).
制备例12：中间体10的合成
Figure BDA0003703453490000482
步骤1：4-溴-2-(溴甲基)苯甲酸甲酯(中间体10-1)的制备
将4-溴-2-甲基苯甲酸甲酯(15.0g，65.5mmol)溶于四氯化碳(90mL)中，再加入N-溴代丁二酰亚胺(12.8g，72.1mmol)和偶氮二异丁腈(0.540g，3.28mmol)。将混合物在80℃下搅拌16小时。反应液真空旋蒸，剩余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶20)纯化，得到21.0g白色固体状标题化合物，收率83.4％。MS，[M+H]+＝306.7，308.6，310.7
步骤2：3-(5-溴-1-氧异吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮(中间体10-2)的制备
将4-溴-2-(溴甲基)苯甲酸甲酯(21.0g，68.2mmol)、3-氨基哌啶-2，6-二酮盐酸盐(16.8g，102mmol)和N，N-二异丙基乙胺(26.4g，205mmol)加入乙腈(180mL)中，混合物在80℃下搅拌16小时。将反应液冷却至室温，过滤并在真空下干燥滤饼得到12.6g深蓝色固体状标题化合物，收率54.3％。MS，[M+H]+＝322.8，324.8
步骤3：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-甲腈(中间体10-3)的制备
将3-(5-溴-1-氧异吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮(6.46g，20.0mmol)、1，1′-双(二苯基膦)二茂铁(1.66g，3.00mmol)、氰化锌(3.52g，30.0mmol)和乙酸锌(3.67g，20.0mmol)加入无水的N，N-二甲基甲酰胺(90mL)中，抽换氩气，然后添加三(二亚苄基丙酮)二钯(0.920g，1.00mmol)，抽空并用氩气置换3次，然后在120℃搅拌20小时。将混合物冷却至室温，在真空下除去溶剂并通过硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝0-5％)纯化。将含有产物的流动相合并，并在减压下除去溶剂。残渣在甲醇(20ml)中搅拌10分钟，过滤，滤饼在高真空下进一步干燥，得到3.93g类白色固体状化合物，收率65.5％。MS，[M+H]+＝270.0
步骤4：叔丁基((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-5-基)甲基)氨基甲酸酯(中间体10-4)的制备
将2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1-羰基异二氢吲哚-5-甲腈(3.93g，14.6mmol)溶于无水的N，N-二甲基甲酰胺(120mL)中，冰浴降温至0℃，再加入二碳酸二叔丁酯(6.37g，29.2mmol)、硼氢化钠(1.66g，43.8mmol)及六水合氯化镍(13.9g，58.4mmol)。反应液在室温下搅拌16小时。用水(500mL)稀释反应混合物，乙酸乙酯(200mL*3)萃取。用水、饱和氯化钠水溶液冲洗合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。剩余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯做流动相)纯化。得到4.30g无色油状化合物，收率70.6％。MS，[M+H]+＝373.9
步骤5∶3-(5-(氨基甲基)-1-羰基异二氢吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮盐酸盐(中间体10)的制备
将叔丁基((2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚-5-基)甲基)氨基甲酸酯(4.30g，11.5mmol)溶于二氯甲烷(100mL)中，加入盐酸二氧六环溶液(4M，34.5mL，137mmol)。将混合物在25℃搅拌过夜。反应液真空浓缩得到2.30g类白色固体状标题化合物，收率约62.8％。MS，[M+H]+＝274.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.01(s，1H)，8.53(s，3H)，7.78(d，J＝7.8Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.64(d，J＝7.8Hz，1H)，5.13(dd，J＝13.2，5.0Hz，1H)，4.49(d，J＝17.6Hz，1H)，4.34(d，J＝17.4Hz，1H)，4.15(d，J＝5.4Hz，2H)，2.93(ddd，J＝17.2，13.6，5.4Hz，1H)，2.66-2.56(m，1H)，2.41(tt，J＝13.5，6.5Hz，1H)，2.02(dtd，J＝12.4，5.2，2.0Hz，1H).
制备例13：中间体11的合成
Figure BDA0003703453490000491
步骤1：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-羟基异二氢吲哚-1，3-二酮(中间体11-1)的制备
将5-羟基异苯并呋喃-1，3-二酮(1500mg，9.14mmol)，3-氨基哌啶-2，6-二酮盐酸盐(1504mg，9.14mmol)和乙酸钾(2691mg，27.4mmol)加入乙酸(20mL)中，混合物在90℃下搅拌16小时。将混合物倒入冰水(100mL)中，获得固体，然后过滤，用水(3*20mL)洗涤残余物。在真空中干燥以得到2200mg灰色固体状标题化合物，收率83.4％。MS，[M+H]+＝274.9
步骤2：叔丁基4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氧代)甲基)苯酸酯(中间体11-2)的制备
将2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-羟基异二氢吲哚-1，3-二酮(200mg，0.729mmol)、叔丁基4-(溴甲基)苯酸酯(198mg，0.729mmol)、碳酸氢钠(201mg，1.46mmol)和碘化钾(121mg，0.729mmol)加入N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，混合物在100℃下搅拌16小时。反应液真空浓缩除去溶剂，剩余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯∶石油醚＝0-50％)纯化，得到200mg白色固体状标题化合物，收率56.1％。MS，[M+Na]+＝486.8
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.12(s，1H)，7.94(d，J＝8.2Hz，2H)，7.86(d，J＝8.2Hz，1H)，7.59(d，J＝8.2Hz，2H)，7.53(d，J＝2.2Hz，1H)，7.45(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，5.44(s，2H)，5.12(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，2.94-2.84(m，1H)，2.56(dd，J＝22.2，11.0Hz，2H)，2.10-2.00(m，1H)，1.55(s，9H).
步骤3∶4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氧代)甲基)苯甲酸(中间体11)的制备将叔丁基4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氧代)甲基)苯酸酯(250mg，0.538mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(614mg，5.38mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：20％-50％)，得到101.8mg白色固体状化合物，收率约46.3％。MS，[M+H]+＝408.8
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.05(s，1H)，11.13(s，1H)，7.98(d，J＝8.2Hz，2H)，7.87(d，J＝8.2Hz，1H)，7.59(d，J＝8.2Hz，2H)，7.54(d，J＝2.2Hz，1H)，7.46(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，5.44(s，2H)，5.12(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，2.89(ddd，J＝17.0，13.8，5.2Hz，1H)，2.57(dd，J＝22.0，11.0Hz，2H)，2.07-1.99(m，1H).
制备例14：中间体12的合成
Figure BDA0003703453490000501
步骤1：叔丁基4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氧代)甲基)环己烷-1-羧酸酯(中间体12-1)的制备
将2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-羟基异二氢吲哚-1，3-二酮(400mg，1，46mmol)，叔丁基4-(羟甲基)环己烷-1-羧酸酯(500mg，2.33mmol)和三苯基膦(459mg，1.75mmol)溶于THF(30mL)中。氮气保护下冷却至0℃，然后将偶氮二甲酸二异丙酯(885mg，4.38mmol)逐滴加入上述混合物中。将反应混合物在室温搅拌16小时。混合物在真空中浓缩，残留物经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2/1～1/1)纯化。得到500mg黄色固体状化合物，收率68.5％。MS，[M+Na]+＝492.8
步骤2：(1s，4s)-4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氧代)甲基)环己烷-1-羧酸(中间体12-P1)和(1r，4r)-4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氧代)甲基)环己烷-1-羧酸(中间体12-P2)的制备
将叔丁基4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氧代)甲基)环己烷-1-羧酸酯(300mg，0.638mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(727mg，6.38mmol)。将混合物在室温下搅拌16小时。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：35％-45％)，分别得到12.4mg白色固体状标题化合物(中间体12-P1)，收率4.52％。99.0mg白色固体状化合物(中间体12-P2)，收率约37.2％。
中间体12-P1 MS，[M+H]+＝414.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.08(s，1H)，11.12(s，1H)，7.83(d，J＝8.2Hz，1H)，7.43(d，J＝2.2Hz，1H)，7.35(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，5.12(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，4.00(d，J＝6.4Hz，2H)，2.94-2.84(m，1H)，2.65-2.52(m，2H)，2.17(t，J＝12.0Hz，1H)，2.05(dd，J＝11.6，6.4Hz，1H)，1.92(dd，J＝18.0，15.2Hz，4H)，1.76(s，1H)，1.34(dd，J＝24.0，11.4Hz，2H)，1.10(dd，J＝23.6，10.8Hz，2H).
中间体12-P2 MS，[M+H]+＝414.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.10(s，1H)，11.12(s，1H)，7.82(d，J＝8.2Hz，1H)，7.44(d，J＝2.2Hz，1H)，7.35(dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，5.12(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，4.03(d，J＝6.8Hz，2H)，2.89(ddd，J＝17.0，14.0，5.4Hz，1H)，2.64-2.52(m，2H)，2.08-2.01(m，1H)，1.90(d，J＝3.6Hz，4H)，1.66(dd，J＝8.8，4.4Hz，2H)，1.53(td，J＝10.0，5.0Hz，2H)，1.35(dd，J＝19.4，9.4Hz，2H).
制备例15：中间体13的合成
Figure BDA0003703453490000511
步骤1：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-甲基异二氢吲哚-1，3-二酮(中间体13-1)的制备
将5-甲基-2-苯并呋喃-1，3-二酮(3.00g，18.5mmol)，3-氨基哌啶-2，6-二酮盐酸盐(3.04g，18.5mmol)，醋酸钾(1.82g，18.5mmol)，醋酸(15mL)的混合物在115℃下搅拌16小时。将反应液旋干，用水打浆，然后抽滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤得到4.00g紫色固体状产物，收率78.3％。MS，[M+H]+＝272.9
步骤2：5-(二溴甲基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异吲哚-1，3-二酮(中间体13-2)的制备
将2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-甲基异二氢吲哚-1，3-二酮(1.00g，3.70mmol)，N-溴琥珀酰亚胺(1.45g，8.10mmol)，偶氮二异丁腈(0.120mg，0.740mmol)，四氯化碳(100mL)的混合液在80℃搅拌16小时。待反应完成后将反应液过滤旋干得到800mg黄色油状产物，收率15.1％。MS，[M+Na]+＝542.5
步骤3：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-甲醛(中间体13-3)的制备
将5-(二溴甲基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异吲哚-1，3-二酮(800mg，1.86mmol)溶于二氧六环/水(10mL，1：1)的混合液中，然后在100℃搅拌24小时。待反应完成后将反应液过滤旋干，并由快速色谱法分离纯化(二氯甲烷～甲醇＝0-5％)，得到300mg黄色油状产物，收率16.9％。MS，[M+Na]+＝286.7
步骤4：3-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)甲基)氨基)苯甲酸(中间体14)的制备
向3-氨基苯甲酸(115mg，0.838mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(8mL)中的混合物中加入冰乙酸(2mL)。混合物在室温搅拌10分钟后加入2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-甲醛(300mg，1.05mmol)，混合物在室温搅拌1小时。在0℃下加入三乙酰基硼氢化钠(1.33g，6.29mmol)，混合物在室温搅拌16小时。待反应完成后将反应液过滤旋干，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：30％-50％)，得到25.5mg黄色固体状化合物，收率5.71％。MS，[M+H]+＝407.8
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ12.68(s，1H)，11.12(s，1H)，7.94-7.81(m，3H)，7.21-7.06(m，3H)，6.83-6.70(m，2H)，5.13(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，4.52(d，J＝6.2Hz，2H)，2.92-2.83(m，1H)，2.68-2.51(m，2H)，2.08-2.00(m，1H).
制备例16：中间体14的合成
Figure BDA0003703453490000512
步骤1：(E)-1-(呋喃-2-基)-N-(哌啶-1-基)甲亚胺(中间体14-1)的制备
将呋喃-2-甲醛(1.00g，10.4mmol)，哌啶-1-胺(1.04g，10.4mmol)，硫酸镁(2.51g，20.8mmol)，二氯甲烷(25mL)的混合物在室温下搅拌16小时。待反应完成后将反应液过滤旋干，并由快速色谱法分离纯化(二氯甲烷～甲醇＝0-2％)，得到1.90g黄色油状产物，收率97.1％。MS，[M+H]+＝179.1
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.46-7.26(m，2H)，6.45-6.36(m，2H)，3.18-3.08(m，2H)，1.79-1.66(m，2H)，1.57-1.47(m，1H).
步骤2：(E)-4-((哌啶-1-基亚氨基)甲基)异苯并呋喃-1，3-二酮(中间体14-2)的制备
将(E)-1-(呋喃-2-基)-N-(哌啶-1-基)甲亚胺(1.50g，8.40mmol)，呋喃-2，5-二酮(0.99g，10.0mmol)，三氟乙酸(2mL)，乙酸乙酯(15mL)的混合液在90℃搅拌16小时。待反应完成后将反应液旋干，并由快速色谱法分离纯化(石油醚～乙酸乙酯＝0-20％)，得到370mg黄色油状标题产物，收率16.2％。MS，[M+H]+＝258.9
步骤3：(E)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-4-((哌啶-1-基亚氨基)甲基)异二氢吲哚-1，3-二酮(中间体14-3)的制备
将4-[N-(哌啶-1-基)碳杂氧杂亚胺酰基]-2-苯并呋喃-1，3-二酮(370mg，1.43mmol)，氨基哌啶-2，6-二酮盐酸盐(235mg，1.43mmol)溶于吡啶(8mL)的混合液中，然后在120℃搅拌3小时。待反应完成后将反应液旋干，并由快速色谱法分离纯化(石油醚～乙酸乙酯＝0-70％)，得到110mg黄色固体产物，收率19.8％。MS，[M+H]+＝369.0
步骤4：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-4-甲醛(中间体14-4)的制备
将(E)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-4-((哌啶-1-基亚氨基)甲基)异二氢吲哚-1，3-二酮(80.0mg，0.217mmol)，羰基乙酸(160mg，2.17mmol)溶于乙腈(2.5mL)，水(10mL)的混合液中，然后在室温下搅拌3天。待反应完成后加入20mL水，接着用乙酸乙酯萃取(10mL*3)，将有机相合并干燥，旋干以后由快速色谱法分离纯化(二氯甲烷～乙酸乙酯＝0-30％)，得到110mg黄色固体产物，收率88.4％。MS，[M+H]+＝286.8
步骤5：3-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-4-基)甲基)氨基)苯甲酸(中间体14)的制备
向3-氨基苯甲酸(34.4mg，0.250mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中加入冰乙酸(0.5mL)。混合物在室温搅拌10分钟后加入2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-4-甲醛(90.0mg，0.314mmol)，混合物在室温搅拌1小时。在0℃下加入三乙酰基硼氢化钠(400mg，1.88mmol)，混合物在室温搅拌16小时。待反应完成后将反应液过滤旋干，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：20％-60％)，得到50.7mg黄色固体状化合物，收率39.6％。MS，[M+H]+＝407.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.69(s，1H)，11.16(s，1H)，7.84-7.73(m，3H)，7.18-7.13(m，3H)，6.77(d，J＝7.0Hz，1H)，6.68-6.65(m，1H)，5.18(dd，J＝12.8，5.2Hz，1H)，4.77(d，J＝5.8Hz，2H)，2.97-2.84(m，1H)，2.64-2.50(m，2H)，2.11-2.02(m，1H).
制备例15：中间体15的合成
Figure BDA0003703453490000521
步骤1：叔丁基4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸酯(中间体15-1)的制备
将叔丁基4-甲酰基环己烷-1-羧酸酯(311mg，1.46mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，再加入醋酸(0.9mL)，5-氨基-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(200mg，0.732mol)，并在室温下将混合物搅拌1小时。冰浴至0℃，加入氰基硼氢化钠(931mg，4.39mmol)，然后在室温下将混合物搅拌16小时。用水(20mL)稀释混合物，并用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。剩余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0-100％)纯化，得到300mg黄色油状化合物，收率82.9％。MS，[M+H]+＝414.0
步骤2∶4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸(中间体15)的制备
将叔丁基4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸酯(300mg，0.639mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(728mg，6.39mmol)。将混合物在25℃搅拌过夜。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：20％-50％)，得到101.8mg白色固体状化合物，收率约38.4％。MS，[M+H]+＝413.9
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.06(s，1H)，11.06(s，1H)，7.55(dd，J＝8.4，1.2Hz，1H)，7.16(dd，J＝9.2，5.4Hz，1H)，6.95(d，J＝1.6Hz，1H)，6.86(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，5.03(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，3.04(dt，J＝12.1，6.2Hz，2H)，2.87(ddd，J＝17.4，14.2，5.4Hz，1H)，2.57(dd，J＝17.0，3.2Hz，1H)，2.48-2.45(m，0.6H)，2.15(tt，J＝12.1，3.4Hz，0.4H)，2.02-1.82(m，4H)，1.66-1.44(m，3H)，1.32-1.21(m，2H)，1.08-0.94(m，1H).
制备例18：中间体16的合成
Figure BDA0003703453490000531
步骤1：叔丁基2-(4-氰基亚环己基)乙酸酯(中间体16-1)的制备
在0℃下向叔丁基2-(二乙氧基磷基)乙酸酯(2.45g，9.70mmol)，四氢呋喃(20mL)的溶液加入氢化钠(0.390g，60％，9.70mmol)，混合物在氮气氛围下常温搅拌1小时，然后0℃下加入4-羰基环己烷-1-甲腈(2.45g，8.10mmol)，室温搅拌过夜。反应液用二氯甲烷(20mL*3)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，得到的滤液旋干并由快速色谱法分离纯化(二氯甲烷～石油醚＝0-10％)，得到1.60g无色油状产物，收率80％。MS，[M+H]+＝221.9
步骤2：叔丁基2-(4-氰基环己基)乙酸酯(中间体16-2)的制备
叔丁基2-(4-氰基亚环己基)乙酸酯(1.30g，5.90mmol)，钯碳(0.190g，10％)，乙酸乙酯(20mL)的混合物在氢气氛围下常温搅拌20小时。将反应液过滤，滤液旋干得到1.20g无色油状标题产物，收率73％。MS，[M+H]+＝224.0
步骤3：叔丁基2-(4-(氨基甲基)环己基)乙酸酯(中间体16-3)的制备
叔丁基2-(4-氰基环己基)乙酸酯(1.20g，5.40mmol)，雷尼镍(0.230g)，甲醇(20mL)的混合物在氢气氛围下常温搅拌30小时。将反应液过滤，滤液旋干得到0.95g无色油状产物，收率61％。MS，[M+H]+＝228.0
步骤4：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5，6-二氟异二氢吲哚-1，3-二酮(中间体16-4)的制备
5，6-二氟异苯并呋喃-1，3-二酮(3.00g，16.3mmol)，3-氨基哌啶-2，6-二酮盐酸盐(2.68g，16.3mmol)，醋酸钾(1.60g，16.3mmol)，冰醋酸(15mL)的混合溶液在90℃下搅拌16小时。将反应液旋干后过滤，滤饼经水，乙醇，乙酸乙酯/石油醚＝1/3洗涤得到4.30g深紫色固体状产物，收率81％。MS，[M+H]+＝294.8
步骤5：叔丁基2-(4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-6-氟-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)甲基)环己基)乙酸酯(中间体16-5)的制备
2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5，6-二氟异二氢吲哚-1，3-二酮(200mg，0.680mmol)，叔丁基2-(4-(氨基甲基)环己基)乙酸酯(186mg，0.820mmol)，N，N-二异丙基乙胺(440mg，3.40mmol)，二甲基亚砜(3mL)的混合物在130℃下搅拌2小时。反应液用乙酸乙酯(20mL*3)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，得到的滤液旋干并由快速色谱法分离纯化(甲醇～二氯甲烷＝0-2％)，得到290mg黄色油状产物，收率68％。MS，[M+H]+＝445.8
步骤6：2-(4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-6-氟-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)甲基)环己基)乙酸(中间体16)的制备
向叔丁基2-(4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-6-氟-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)甲基)环己基)乙酸酯(150mg，0.299mmol)，二氯甲烷(4mL)的混合物中缓慢加入三氟乙酸(1.50mL)。混合物在室温搅拌过夜。反应液旋干，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：37％-50％)，得到53.7mg黄色固体状化合物，收率40.0％。MS，[M+H]+＝445.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.96(s，1H)，11.04(s，1H)，7.52(d，J＝10.4Hz，1H)，7.11-7.05(m，1H)，6.94-6.90(m，1H)，5.01(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，3.20-3.07(m，2H)，2.85-2.80(m，1H)，2.58-2.47(m，2H)，2.18(d，J＝7.3Hz，1H)，2.06-1.49(m，5H)，1.49-1.28(m，6H)，0.99-0.82(m，1H).
制备例19：中间体17的合成
Figure BDA0003703453490000541
步骤1：4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-4-基)氨基)甲基)苯甲酸(中间体17)的制备
2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚-1，3-二酮(200mg，0.724mmol)，4-(氨基甲基)苯甲酸(132mg，0.869mmol)，N，N-二异丙基乙胺(468mg，3.62mmol)，二甲基亚砜(2mL)的混合物在130℃下搅拌2小时。反应液用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：30％-50％)，得到68.6mg黄色固体状化合物，收率23.1％。
MS，[M+H]+＝407.8
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.90(s，1H)，11.12(s，1H)，7.91(d，J＝8.2Hz，2H)，7.52-7.44(m，3H)，7.36(t，J＝6.3Hz，1H)，7.03(d，J＝7.0Hz，1H)，6.90(d，J＝8.6Hz，1H)，5.08(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，4.65(d，J＝6.2Hz，2H)，2.95-2.85(m，1H)，2.68-2.53(m，2H)，2.08-2.02(m，1H).
制备例20：中间体18的合成
Figure BDA0003703453490000542
步骤1：4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-4-基)氨基)甲基)环己烷-1-羧酸(中间体18)的制备
2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-4-氟异二氢吲哚-1，3-二酮(200mg，0.724mmol)，4-(氨基甲基)环己烷-1-羧酸(136mg，0.868mmol)，N，N-二异丙基乙胺(467mg，3.62mmol)，二甲基亚砜(3mL)的混合溶液在120℃下搅拌2小时。将反应液过滤，得到的滤液用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18150x 21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：35％-60％)，得到85.7mg黄色固体状化合物，收率28.6％。MS，[M+H]+＝413.8
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.00(s，1H)，11.10(s，1H)，7.57(dd，J＝8.4，7.2Hz，1H)，7.12(d，J＝8.6Hz，1H)，7.02(d，J＝7.0Hz，1H)，6.60(t，J＝6.0Hz，1H)，5.05(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，3.19-3.15(m，2H)，2.95-2.81(m，1H)，2.60-2.47(m，2H)，2.18-2.07(m，1H)，2.07-1.99(m，1H)，1.95-1.89(m，2H)，1.81-1.74(m，2H)，1.57-1.53(m，1H)，1.35-1.21(m，2H)，1.07-0.94(m，2H).
制备例21：中间体19的合成
Figure BDA0003703453490000551
步骤1：4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)甲基)苯甲酸(中间体19)的制备
向4-甲酰基苯甲酸(164mg，1.10mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中加入冰乙酸(1mL)。混合物在室温搅拌10分钟后加入5-氨基-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(150mg，0.549mmol)。混合物在室温搅拌1小时。在0℃下加入三乙酰氧基硼氢化钠(698mg，3.29mmol)，混合物在室温搅拌过夜。反应液旋干并由制备部门纯化(Gemini-C18 150x21.2mm，5um，ACN--H2O(0.1％FA 30-50)得到125.2mg黄色固体状化合物，收率55.1％。MS，[M+H]+＝407.9.
1HNMR(400MHz，DMSO)δ12.90(s，1H)，11.06(s，1H)，7.93-7.90(m，2H)，7.78(t，J＝6.0Hz，1H)，7.57(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.45(m，2H)，6.96(s，1H)，6.89(d，J＝8.4Hz，1H)，5.02(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，4.55(d，J＝5.8Hz，2H)，2.93-2.80(m，1H)，2.69-2.32(m，2H)，2.02-1.93(m，1H).
制备例22：中间体20的合成
Figure BDA0003703453490000552
步骤1：1-(2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-4-基)哌啶-3-羧酸(中间体20)的制备
2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-4-氟异二氢吲哚-1，3-二酮(200mg，0.724mmol)，哌啶-3-羧酸(112mg，0.868mmol)，N，N-二异丙基乙胺(467mg，3.62mmol)，二甲基亚砜(3mL)的混合溶液在120℃下搅拌2小时。将反应液过滤，得到的滤液用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：15％-50％)，得到121.3mg黄色固体状化合物，收率43.4％。MS，[M+H]+＝385.9
1H NMR(400MHz，DMSO-J6)δ12.32(s，1H)，11.09(s，1H)，7.69(dd，J＝8.4，7.2Hz，1H)，7.37-7.33(m，2H)，5.11(dd，J＝12.6，4.4Hz，1H)，3.80-3.77(m，1H)，3.56-3.53(m，1H)，3.04-2.82(m，3H)，2.74-2.51(m，3H).
制备例23：中间体21的合成
Figure BDA0003703453490000561
步骤1：1-(2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-4-基)吡咯烷-3-羧酸(中间体21)的制备
2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-4-氟异二氢吲哚-1，3-二酮(200mg，0.724mmol)，吡咯烷-3-羧酸(100mg，0.868mmol)，N，N-二异丙基乙胺(467mg，3.62mmol)，二甲基亚砜(3mL)的混合溶液在120℃下搅拌2小时。将反应液过滤，得到的滤液用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：15％-50％)，得到114.4mg黄色固体状化合物，收率42.4％。MS，[M+H]+＝371.8
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.07(s，1H)，7.58(dd，J＝8.4，7.0Hz，1H)，7.16-7.10(m，2H)，5.07(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，3.79-3.70(m，2H)，3.62-3.52(m，2H)，3.19-3.11(m，1H)，2..92-2.83(m，1H)，2.64-2.51(m，2H)，2.26-2.09(m，2H)，2.06-1.95(m，1H).
制备例24：中间体22的合成
Figure BDA0003703453490000562
步骤1：5-溴-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(中间体22-1)的制备
5-溴异苯并呋喃-1，3-二酮(1.00g，4.40mmol)，3-氨基哌啶-2，6-二酮盐酸盐(0.720g，4.40mmol)，醋酸钾(0.430g，4.40mmol)，冰醋酸(15mL)的混合溶液在90℃下搅拌16小时。将反应液旋干后过滤，滤饼经水，乙醇，乙酸乙酯/石油醚＝1/3洗涤得到1.30g紫色固体状产物，收率80％。MS，[M+H]+＝336.6
步骤2：4-((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)乙炔基)苯甲酸(中间体22)的制备
5-溴-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(150mg，0.445mmol)，4-乙炔基苯甲酸(78.0mg，0.534mmol)，二三苯基膦二氯化钯(32.0mg，0.0444mmol)，碘化亚铜(9.00mg，0.0444mmol)，N，N-二异丙基乙胺(575mg，4.450mmol)，四氢呋喃(5mL)中的混合物70℃搅拌16小时。反应液旋干，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％TFA，梯度：30％-50％)，得到53.3mg黄色固体状化合物，收率18.0％。MS，[M+H]+＝402.7
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.24(s，1H)，11.17(s，1H)，8.13(s，1H)，8.08(dd，J＝7.8，1.3Hz，1H)，8.01(t，J＝7.5Hz，3H)，7.77(d，J＝8.2Hz，2H)，5.19(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，2.96-2.84(m，1H)，2.68-2.54(m，2H)，2.10-2.04(m，1H).
制备例25：中间体23的合成
Figure BDA0003703453490000571
步骤1：N、N-二苄基-6-氯-5-硝基嘧啶-4-胺(中间体23-1)的制备
0℃下，将二苄胺(1.00g，0.518mmol)的二氯甲烷(3.00mL)溶液滴加到4，6-二氯-5-硝基嘧啶(1.02g，5.18mmol)和三乙胺(1.04g，10.3mmol的二氯甲烷(7mL)的溶液中，反应搅拌4小时。向反应液中加入二氯甲烷(50mL)和水(20mL)，有机相用饱和的氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到2.00g黄色固体化合物，收率100％。
步骤2：(R)-3-((6-(二苄基氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(中间体23-2)的制备
N、N-二苄基-6-氯-5-硝基嘧啶-4-胺(15.0g，42.3mol)和(R)-3-氨基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(8.27g，44.4mmol)溶于1，4-二氧六环(250mL)中，将三乙胺(4.71g，46.51mmol)滴加到反应液中，反应液在50℃下搅拌5小时、LCMS监测反应。冷却至室温，浓缩得到粗品。粗品用溶于乙酸乙酯(500mL)，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝4∶1)，得到15.0g白色固体化合物，收率70.3％。
步骤3：(R)-3-((5-氨基-6-(二苄基氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(中间体23-3)的制备
将氯化铵(6.36g，118mmol)的饱和溶液加入(R)-3-((6-(二苄基氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(15.0g，29.7mmol)的乙酸乙酯(150mL)和甲醇(150mL)的混合溶液中，然后将Zn粉(13.0g，198mmol)加入反应液中，反应在80℃下搅拌2小时。过滤，滤液用乙酸乙酯(1L)和水(0.5L)稀释。分层，有机相用饱和食盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到黄色固体化合物，收率92.1％。
步骤4：(R)-3-(6-(二苄基氨基)-8-氧代-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(中间体23-4)的制备
将1，1′-羰基二咪唑(8.75g，54.0mmol)加入(R)-3-((5-氨基-6-(二苄基氨基)嘧啶-4-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(12.5g，26.3mmol)的四氢呋喃(180mL)溶液中，反应在60℃下搅拌15小时，LCMS监测反应。用乙酸乙酯(800mL)和水(800mL)稀释反应液。分层，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)，得到白色固体化合物，收率83.4％。
步骤5：(R)-3-(6-氨基-8-氧代-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(中间体23-5)的制备
在N2保护下，将20％氢氧化钯(6.00g)加入(R)-3-(6-(二苄基氨基)-8-氧代-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(6.00g，12.0mmol)的甲醇(180mL)和乙酸乙酯(36mL)的混合溶液中，反应在氢气球，60℃搅拌24小时，LCMS监测反应。过滤，滤液浓缩得到粗品，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得到白色固体化合物，收率57.3％。
步骤6：(R)-3-(6-氨基-8-氧代-7-(4-苯氧基苯基)-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(中间体23-6)的制备
将乙酸铜(0.88g，7.21mmol)，分子筛4A(2.20g)和吡啶(0.71g，8.93mmol)加入(R)-3-(6-氨基-8-氧代-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.20g，6.87mmol)的二氯甲烷(160mL)溶液中，并将反应在室温下搅拌48小时。过滤，滤液浓缩得到粗品。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到白色固体化合物，收率41.73％。
步骤7：(R)-6-氨基-7-(4-苯氧基苯基)-9-(吡咯烷-3-基)-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(中间体23)的制备
将盐酸的1，4-二氧六环(7mL，4M)滴加到(R)-3-(6-氨基-8-氧代-7-(4-苯氧基苯基)-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(700mg，1.43mmol)的甲醇(7mL)溶液中，反应在室温下搅拌1小时，LCMS监测反应。向反应物中加入乙醚(100mL)，搅拌，过滤。将滤饼干燥，得到淡黄色的固体化合物，收率62.9％。MS，[M+H]+＝389.3
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.91(s，1H)，9.35(s，1H)，8.36(s，1H)，7.85(br，2H)，7.43-7.46(m，4H)，7.14-7.22(m，5H)，6.57(br，2H)，5.19-5.22(m，2H)，3.678-3.69(m，1H)，3.54-3.58(m，2H)，3.33-3.36(m，1H)，2.38-2.45(m，2H).
制备例26：中间体24的合成
Figure BDA0003703453490000581
步骤1：叔丁基4-((6-(二苯甲基氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(中间体24-1)的制备
N、N-二苄基-6-氯-5-硝基嘧啶-4-胺(15.0g，42.3mol)和4-氨基哌啶烷-1-羧酸叔丁酯(8.89g，44.4mmol)溶于1，4-二氧六环(75mL)中，加入三乙胺(4.71g，46.5mmol)，并将混合物在50℃下搅拌5小时，LCMS监测反应。反应液恢复至室温，浓缩，加入水(200mL)，用乙酸乙酯(500mL)萃取。有机层用饱用氯化钠水溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3∶7)，得到15g白色固体化合物，收率68.5％。MS，[M+H]+＝519.3
步骤2：叔丁基4-((5-氨基-6-(二苯甲基氨基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(中间体24-2)的制备
向叔丁基4-((6-(二苯甲基氨基)-5-硝基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(15.0g，28.9mmol)的乙酸乙酯(150mL)溶液中加入甲醇(150mL)和水(45mL)氯化铵(6.19g，115mmol)，Zn(12.5g，190mmol)，并将反应在80℃下搅拌2小时，LCMS监测反应。用乙酸乙酯(1L)和水(0.5L)稀释反应物。分层，有机层用饱和食盐水盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1∶1)，得到13.0黄色固体化合物，91.2％。MS，[M+H]+＝489.3
步骤3：叔丁基4-(6-(二苯甲基氨基)-8-羰基-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体24-3)的制备
向叔丁基4-((5-氨基-6-(二苯甲基氨基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(13.0g，26.6mmol)的四氢呋喃(200mL)溶液中加入1，1′-羰基二咪唑(8.84g，54.5mmol)，反应在60℃下搅拌15小时，LCMS监测反应。用乙酸乙酯(800mL)和水(400mL)稀释反应液。分层，有机层，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2∶1)，得到12.0g白色固体化合物，收率87.6％。MS，[M+H]+＝515.2
步骤4：叔丁基4-(6-氨基-8-羰基-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体23-4)的制备
在氢气氛围下，向叔丁基4-(6-(二苯甲基氨基)-8-羰基-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-羧酸酯(6.00g，11.7mmol)的甲醇(180mL)和乙酸乙酯(36mL)溶液中加入20％氢氧化钯(6.00g，100％wt)，反应在60℃下搅拌24小时，LCMS监测反应。过滤，滤液浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1∶1)，得到1.5g白色固体化合物，收率38.5％。MS，[M+H]+＝335.1
步骤5：叔丁基4-(6-氨基-8-羰基-7-(4-苯氧基苯基)-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体24-5)的制备
在氧气氛围下，向叔丁基4-(6-氨基-8-羰基-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-羧酸酯(1.50g，4.49mmol)的二氯甲烷(160mL)溶液中加入4-苯氧基苯基硼酸(1.01g，4.71mmol)，乙酸铜(II)(0.715g，5.83mmol)，分子筛4A(1.50g)和吡啶(0.461g，5.83mmol)，反应在室温下搅拌48小时，LCMS监测反应。过滤，滤液浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1∶1)，得到1.7g淡灰色固体化合物，收率75.4％。MS，[M+H]+＝503.2
步骤6：6-氨基-7-(4-苯氧基苯基)-9-(哌啶-4-基)-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(中间体24)的制备
向叔丁基4-(6-氨基-8-羰基-7-(4-苯氧基苯基)-7，8-二氢-9H-嘌呤-9-基)哌啶-1-羧酸酯(1.7g，3.383mmol)的甲醇(7mL)溶液中加入盐酸(4M，在1，4-二氧六环)(7mL)中，反应在室温下搅拌1小时。浓缩，粗品用甲醇(10mL)重结晶，过滤并收集固体，干燥，得到760mg淡黄色的固体化合物，收率55.8％。MS，[M+H]+＝403.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.29(d，J＝10.4Hz，1H)，8.62(d，J＝10.8Hz，1H)，8.28(s，1H)，7.43-7.45(m，4H)，7.14-7.17(m，5H)，6.19(br，2H)，4.605-4.65(m，1H)，3.34-4.41(m，2H)，3.17-2.09(m，2H)，2.689-2.69(m，2H)，1.96-1.99(m，2H).
制备例27：中间体25的合成
Figure BDA0003703453490000591
步骤1：5-(4-苯氧基苯基)嘧啶-2-胺(中间体25)的制备
在氮气保护下，将四三苯基膦钯(56.4mg，0.503mmol)加入5-溴嘧啶-2-胺(870mg，5.03mmol)，(4-苯氧基苯基)硼酸(1.29g，6.04mmol)，和碳酸钠(1.56g，15.1mmol)的甲苯(30.0mL)，乙醇(10.0mL)和水(5.00mL)的混合溶液中，反应在90℃下搅拌4小时，LCMS监测反应。浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)，得到390mg白色固体化合物，收率30.0％。MS，[M+H]+＝264.2
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.55(s，1H)，7.64-7.62(m，2H)，7.43-7.39(m，2H)，7.18-7.14(m，1H)，7.07-7.03(m，4H)，6.740(br，2H).
制备例28：中间体26的合成
Figure BDA0003703453490000592
步骤1：2，6-二氯尼克酰胺(中间体26-1)的制备
在室温下，将2，6-二氯烟腈(7.10g，40.0mmol)加入浓硫酸(7mL)和水(70mL)的混合溶液中，升温至90℃，反应搅拌1小时，LCMS监测反应。反应液冷却到室温，缓慢倒入水(200mL)中，用40％氨水中和至pH＝8，过滤，滤饼用水(50mLx3)洗，真空干燥得到6.3g白色固体化合物，收率80.36％。MS，[M+H]+＝191.1
步骤2：6-氯-2-(4-苯氧基苯氧基)尼克酰胺(中间体26-2)的制备
室温下，将2，6-二氯尼克酰胺(6.3g，33.0mmol)，4-苯氧基苯酚(6.10g(33.0mmol)和碳酸铯(21.5g，66.0mmol)加入DMF(80mL)溶液中，反应在室温搅拌3小时，LCMS监测反应。将反应液缓慢倒入水(800mL)中，过滤，滤饼用水(50mLx3)洗，干燥得到6.5g白色固体化合物，产率57.83％。MS，[M+H]+＝341.2
步骤3：叔丁基4-(5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸酯(中间体26-3)的制备
在氮气保护下，将碘化亚铜(112mg，0.586mmol)和L-脯氨酸(67.4mg，0.586mmol)加入6-氯-2-(4-苯氧基苯氧基)尼克酰胺(2.00g，5.86mmol)，1-叔丁氧羰基哌嗪(1.31g，7.03mmol)和碳酸钾(2.43g，17.6mmol)的二甲亚砜(50mL)溶液中，反应在120℃下搅拌16小时，LCMS监测反应。将水和乙酸乙酯加入反应液中，分层，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用C18反相柱纯化(流动相：乙腈/水，0.1％TFA，梯度：30％-70％)，得到1.2g白色固体化合物，收率41.8％。MS，[M+H]+＝491.2
步骤4：2-(4-苯氧基苯氧基)-6-(哌嗪-1-基)尼克酰胺(中间体26)的制备
将三氟乙酸(5.00mL)滴加到4-(5-氨甲酰基-6-(4-苯氧基苯氧基)吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(ZXB-015-3)(1.10g，2.25mmol)的二氯甲烷(25.0mL)溶液中，反应在室温下搅拌4小时，LCMS监测反应。浓缩得到粗品，把粗品溶于乙腈和水中，冻干得到1.03g白色固体化合物，收率100％。MS，[M+H]+＝391.0
1H-NMR(400MHz，Methanol-d4)：δ7.50(d，J＝8.4Hz，1H)，6.565-6.59(m，2H)，6.39-6.41(m，2H)，6.31-6.35(m，1H)，6.26-6.28(m，2H)，6.20-6.21(m，2H)，5.85(d，J＝8.4Hz，1H)，2.90-2.92(m，4H)，2.40-2.42(m，4H).
制备例29：中间体27的合成
Figure BDA0003703453490000601
步骤1：叔丁基(1-(5-氨甲酰基-6-(4-苯氧基苯氧基)吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸酯(中间体27-1)的制备
在氮气保护下，将碘化亚铜(44.6mg，0.235mmol)和L-脯氨酸(54.1mg，0.470mmol)加入6-氯-2-(4-苯氧基苯氧基)烟酰胺(0.800g，2.35mmol)和3-叔丁氧基酰氨基吡咯(0.655g，3.53mmol)和碳酸钾(973mg，7.05mmol)的二甲亚砜(30mL)溶液中，反应在110℃下搅拌16小时，LCMS监测反应。将水和乙酸乙酯加入反应液中，分层，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗品。粗品用C18反相柱纯化(流动相：乙腈/水，0.1％TFA，梯度：30％-70％)，得到0.3g白色固体化合物，收率17.3％。MS，[M+H]+＝491.2
步骤2：6-(3-氨基吡咯烷-1-基)-2-(4-苯氧基苯氧基)尼克酰胺(中间体27)的制备
将三氟乙酸(5.00mL)滴加到叔丁基3-(5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯氧基)吡啶-2-基)吡咯烷-1-羧酸酯(ZXB-016-1)(450mg，0.918mmol)的二氯甲烷(20.0mL)溶液中，反应在室温下搅拌2小时，LCMS监测反应。浓缩得到粗品，粗品用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000602
Prep C18 19x250mm column，10μm，流动相：乙腈/水/0.05％三氟乙酸，梯度27-37％)，得到290mg白色固体化合物，收率84.1％。MS，[M+H]+＝391.1
1H-NMR(400MHz，Methanol-d4)：δ8.22(d，J＝8.4Hz，1H)，7.34-7.31(m，2H)，7.17-7.20(m，2H)，7.10-7.13(m，1H)，6.99-7.06(m，4H)，6.29(d，J＝8.4Hz，1H)，3.93-3.955(m，1H)，3.41-3.65(m，4H)，2.38-2.44(m，1H)，2.09-2.14(m，1H).
制备例30：中间体28的合成
Figure BDA0003703453490000611
步骤1：4-溴-5-氟-2-硝基苯甲酸(中间体28-1)的制备
将KNO3(11.1g，110mmol)分批加入4-溴-3-氟苯甲酸(21.9g，100mmol)的浓硫酸的悬浊液中，反应在室温下反应4h，TLC监测反应。将反应液倒入冰水中，过滤，滤饼真空干燥得到22.4g化合物，收率85％。MS，[M+H]+＝263.9
步骤2：2-氨基-4-溴-5-氟苯甲酸盐酸盐(中间体28-2)的制备
将SnCl2(28.5g，150mmol)分批加入4-溴-5-氟-2-硝基苯甲酸(ZXB-007-1)(13.2g，50mmol)的浓HCl的悬浊液中，反应在100℃反应3h.LCMS监测反应。冷却，过滤，滤饼用水洗涤，真空干燥得到9.5g化合物，收率81％。MS，[M+H]+＝233.9
步骤3：4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸盐酸盐(中间体28-3)的制备
在0℃下，将饱和NaNO2(11.1g，160mmol)滴加到2-氨基-4-溴-5-氟苯甲酸盐酸盐(15g，64.1mmol)浓HCl的悬浊液中，反应搅拌3h。在0℃下，将重氮盐悬浊液慢慢滴加到SnCl2(36.5g192mm0l)的浓盐酸溶液，搅拌1h，LCMS监测反应。过滤，滤饼用水洗涤，滤饼真空干燥得到12g化合物，收率75.8％。MS，[M+H]+＝249.0
步骤4：4-溴-2-(2-(丁烷-2-亚基)肼基)-5-氟苯甲酸(中间体28-4)的制备
将2-丁酮(8.74g，121.4mmol)加入4-溴-5-氟-2-肼基苯甲酸(ZXB-007-3)(15g，60.7mmol)的乙酸悬浊液中，反应在40℃反应3h，LCMS监测反应。浓缩得到粗品，粗品用柱层析纯化(洗脱剂：PE∶EA＝10∶3)得到9.3g黄色固体，收率50.7％。MS，[M+H]+＝303.0
步骤5：4-溴-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-7-羧酸(中间体28-5)的制备
在氮气保护下，将TFA(30mL)加入4-溴-2-(2-(丁烷-2-亚基)肼基)-5-氟苯甲酸(9.3g，30.8mmol)的甲苯(150mL)溶液中，反应在90℃搅拌24h。LCMS监测反应。浓缩的到粗品，粗品用柱层析纯化(洗脱剂：PE∶EA＝1∶1)得到2.3g黄色固体化合物，收率26.1％)。MS，[M+H]+＝286.0
步骤6：4-溴-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(中间体28-6)的制备
将EDCI(2.42g，12.6mmol)，HOBt(1.70g，12.6mmol)和DIEA(5.85g，42.1mmol)加入4-溴-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-7-羧酸(ZXB-007-4)(2.40g，8.42mmol)的THF(100mL)和DMF(5mL)的混合溶液中，反应在室温反应1h.NH4Cl(4.50g，84.2mmol)加入反应液中，在室温下反应16h.LCMS监测反应。往反应液加入EA和H2O，分层，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，粗品用柱层析纯化(洗脱剂：PE∶EA＝1∶1)得到2.0g白色固体，收率83.6％)。MS，[M+H]+＝285.0
步骤7：4-溴-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-7-甲腈(中间体28-7)的制备
在氮气保护下，将伯吉斯试剂(3.77g，15.8mmol)加入4-溴-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(ZXB-007-5)(1.50g，5.28mmol)的二氯甲烷(100mL)的溶液中，反应在室温下反应16h.TLC监测反应。浓缩得到粗品，粗品用柱层析纯化(洗脱剂：PE∶EA＝3∶1)得到1.1g白色固体，81.4％。MS，[M+H]+＝267.1
步骤8：叔丁基(1-(7-氰基-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-4-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(中间体28-8)的制备
氮气保护下，将三(二亚苄基丙酮)二钯(193mg，0.211mmol)，加入4-溴-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-7-甲腈(600mg，2.11mmol)，4-叔丁氧羰基氨基哌啶(549mg，2.75mmol)，1，1′-联萘-2，2′-双二苯膦(220mg，0.422mmol)和碳酸铯(2.00g，6.33mmol)的1，4-二氧六环的悬浊液中，反应在105℃中搅拌16h，LCMS监测反应。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩的粗品，粗品用柱层析纯化(洗脱剂：PE∶EA＝5∶1)得到600mg白色固体混合物，73.5％。MS，[M+H]+＝387.1
步骤9：4-(3-氨基哌啶-1-基)-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(中间体28)的制备
叔丁基(1-(7-氰基-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-4-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(600mg，1.55mmol)在浓硫酸(2mL)，在60℃下搅拌2h，LCMS监测反应。把反应液倒入冰水中，用NaHCO3溶液把pH调至8，再用DCM/MeOH＝10∶1，萃取，有机相用无水Na2SO4干燥，浓缩得到粗品，粗品用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000622
Prep C18 19x250mm column，10μm，流动相：乙腈/水/0.05％TFA，梯度10-20％)，得到198mg白色固体混合物，收率30.5％。MS，[M+H]+＝305.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.68(s，1H)，7.97(br，4H)，7.43(d，J＝14Hz，1H)，7.37(br，1H)，3.31(m，2H)，3.01(m，3H)，2.34(s，3H)，2.32(s，3H)，2.08(m，2H)，1.77(m，2H)，1.38(m，1H).
制备例31：中间体29a和中间体29b的合成
Figure BDA0003703453490000621
步骤1∶叔丁基(1-(7-氰基-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-4-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(中间体29a)的制备
在氮气保护下，将三(二亚苄基丙酮)二钯(193mg，0.211mmol)，加入4-溴-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-7-甲腈(600mg，2.11mmol)，4-叔丁氧羰基氨基哌啶(506mg，2.53mmol)，1，1′-联萘-2，2′-双二苯膦(220mg，0.422mmol)和碳酸铯(2.0g，6.33mmol)的1，4-二氧六环(25mL)的悬浊液中，反应在105℃中反应16h，LCMS监测反应。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩的粗品，粗品用柱层析纯化(洗脱剂：PE∶EA＝5∶1)得到600mg白色固体中间体29-1，收率73％。MS，[M+H]+＝387.1
步骤2：中间体29-1在4M HCl的二氧六环溶液中脱去Boc保护基团得到中间体29b。
步骤3：4-(4-氨基哌啶-1-基)-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-7-甲酰胺(中间体29b)的制备
叔丁基(1-(7-氰基-5-氟-2，3-二甲基-1H-吲哚-4-基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯(600mg，1.55mmol)在浓硫酸(2mL)，在60℃下搅拌2h，LCMS监测反应。把反应液倒入冰水中，用NaHCO3溶液把pH调至8，再用DCM/MeOH＝10∶1，萃取，有机相用Na2SO4干燥，浓缩得到粗品，粗品用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000623
Prep C18 19x250mm column，10μm，流动相：乙腈/水/0.05％TFA，梯度10-20％)，得到135mg白色固体，收率20％。MS，[M+H]+＝305.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.65(s，1H)，7.93(br，4H)，7.41(d，J＝14Hz，1H)，7.34(br，1H)，3.15(m，5H)，2.38(s，3H)，2.32(s，3H)，1.95(m，2H)，1.78(m，2H).
制备例32：中间体30的合成
Figure BDA0003703453490000631
步骤1：(4-溴-2-甲基苯基)甲胺(中间体30-1)的制备
在0℃下，将硼烷的四氢呋喃(180mL，180mmol)滴加到4-溴-2-甲基苯甲腈(12.0g，60.0mmol)的四氢呋喃(80.0mL)的溶液中，慢慢加热至80℃，并搅拌16小时，LCMS监测反应。反应液用甲醇淬灭，浓缩，加入盐酸的乙酸乙酯溶液(200ml，1M)，过滤。用乙醚(80.0mL×3)洗涤滤饼，在真空下干燥，得到12.2g白色固体，收率99.6％。
步骤2：叔丁基(4-溴-2-甲基苯甲基)氨基甲酸酯(中间体30-2)的制备
将二碳酸二叔丁酯(13.1g，60.0mmol)缓慢加入到(4-溴-2-甲基苯基)甲胺(11.0g，55.0mmol)和三乙胺(16.7g，165mmol)的二氯甲烷(280mL)溶液中，反应在室温下搅拌1h，LCMS监测反应。反应液用水(200mL)稀释并用二氯甲烷(200mL x 2)萃取，分层，有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到15.5g白色固体，收率93.9％。
步骤3：叔丁基(2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼戊环-2-基)苯甲基)氨基甲酸酯(中间体30-3)的制备
在N2保护下，将叔丁基(4-溴-2-甲基苯甲基)氨基甲酸酯(15.5g，51.5mmol)，1，3，2-二氧硼烷(15.7g，62.0mmol)，乙酸钾(18.2g，185mmol)溶于DMF(62.0ml)中，然后加入Pd(dppf)Cl2(4.20g，5.20mmol)，在100℃搅拌2小时，冷却至室温，用水(200mL)稀释，并用EtOAc(300mL x 3)萃取，分层，有机层用盐水洗涤，干燥，浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)，得到13.7g白色固体的化合物，收率76.4％。
步骤4：叔丁基(2-甲基-4-(7-甲苯磺酰-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苯甲基)氨基甲酸酯)苄基氨基甲酸酯(中间体30-4)的制备。
将叔丁基(2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼戊环-2-基)苯甲基)氨基甲酸酯(13.7g，39.5mmol)溶于dioxane/H2O(4∶1)(121mL)，然后向溶液中添加4-氯-7-甲苯磺酰-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(12.1g，39.5mmol)和碳酸钾(16.1g，117mmol)，然后添加二氯[1，1′-二(二苯基膦)二茂铁]钯·二氯甲烷络合物(3.68g，5.00mmol)，氮气保护。将混合物在90℃搅拌6h。冷却至室温后，用水稀释混合物并用EtOAc(100mL x 2)萃取。用盐水(80.0ml)洗涤有机层，并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品用层析柱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)，得到1.80g橙色油状物，产率9.30％。MS，[M+H]+＝493.2
步骤5：叔丁基(2-甲基-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苯甲基)氨基甲酸酯(中间体30-5)的制备
将叔丁基(2-甲基-4-(7-甲苯磺酰-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苯甲基)氨基甲酸酯)苄基氨基甲酸酯(2.34g，4.75mmol)溶于甲醇(285mL)中，然后添加碳酸钾(1.96g，3.90mmol)。混合物在50℃搅拌3h，监测显示反应完全。然后浓缩，并通过柱层析(二氯甲烷/甲醇＝20∶1)纯化，得到1.04g黄色固体，收率62.2％。MS，[M+H]+＝339.2
步骤6∶(2-甲基-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苯基)甲胺(中间体30-6)的制备。
将叔丁基(2-甲基-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苯甲基)氨基甲酸酯(1.04g，2.95mmol)溶于盐酸的1，4-二氧六环溶液(20.0mL)。混合物在室温下搅拌1h，LCMS监测反应。然后用乙酸乙酯萃取溶剂，然后浓缩得到918mg呈黄色固体，收率100％。MS，[M+H]+＝239.0
步骤7：2，2-二甲基丙硫酰胺(中间体30-7)的制备
向圆底烧瓶(250mL)中添加三甲胺(10.0g，98.9mol)和劳森试剂(16.1g，39.6mol)溶解于四氢呋喃(200mL)，氮气保护，80℃油浴加热4小时，监测反应过程，反应完成后，用旋转蒸发法除去溶剂，用硅胶柱色谱法(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)纯化残渣，得到6.00g白色固体收率51.7％。MS，[M+H]+＝118.1
步骤8：2-(叔丁基)噻唑-5-甲醛(中间体30-8)的制备
将中间体2-溴-丙二醛(5.44g，35.4mmol)溶解于四氢呋喃(16.5mL)中，中间体2，2-二甲基丙硫酰胺(4.20g，35.4mmol)溶于无水二氯甲烷(82.5mL)溶液中，混合，冷却到-15℃；然后逐层添加N，N-二异丙基乙胺(6.30mL，35.4mmol)。产生的黄色溶液在室温下搅拌4天。旋干，棕色残留物溶解在乙酸乙酯(150mL)中，用碳酸氢钠饱和溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。采用正相柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝9∶1)纯化，得到2.85g棕色化合物，产率53.3％。MS，[M+H]+＝170.1
步骤9：2-(叔丁基)噻唑-5-羧酸(中间体30-9)的制备
将2-(叔丁基)噻唑-5-甲醛(2.80g，16.7mmol)溶于四氢呋喃/叔丁醇(1∶1，250mL)，磷酸二氢钠(10.4g，86.7mmol)和亚氯酸钠(3.00g，33.2mmol)溶解于水(40.0mL)中，混合两溶液。在室温下搅拌3h后，用水稀释混合物然后用盐酸将PH调节至2并用乙酸乙酯(150mL x 2)萃取。用盐水(200mL)洗涤有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到2.06g白色固体，产率66.5％。MS，[M+H]+＝186.1
步骤10：2-(叔丁基)-N-(2-甲基-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苯甲基)噻唑-5-甲酰胺(中间体30)的制备
(2-甲基-4-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苯基)甲胺(918mg，2.95mmol)，2-(叔丁基)噻唑-5-羧酸(606mg，2.95mmol)，1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺(1.20g，2.0mmol)和1-羟基苯并三唑(444mg，1.42mmol)，溶于N，N-二甲基甲酰胺(20.0ml)，然后滴加N，N-二异丙基乙胺(1.58ml，8.81mmol)。反应混合物在室温下搅拌5小时，然后缓慢倒入水中。用乙酸乙酯萃取，饱和碳酸钠溶液和盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，旋干，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％HCl，梯度：25％-50％)，得到923mg产物，收率77.1％。MS，[M+H]+＝406.1
1H NMR(400MHz，MeOD-d4)δ8.75(s，1H)，8.24(s，1H)，7.87-7.91(m，2H)，7.49-7.53(m，2H)，6.84-6.85(d，J＝8.0Hz，1H)，4.64(s，2H)，2.51(s，3H)，1.45(s，9H).
制备例33：中间体31的合成
Figure BDA0003703453490000641
步骤1：(4-溴-2-甲基苯基)甲胺(中间体31-1)的制备
在0℃下，将硼烷的四氢呋喃(180mL，180mmol)滴加到4-溴-2-甲基苯甲腈(12.0g，60.0mmol)的四氢呋喃(80.0mL)溶液中，慢慢加热至80℃，并搅拌16小时，LCMS监测反应。反应液用甲醇淬灭，浓缩，加入盐酸的乙酸乙酯溶液(200ml，1M)，过滤。用乙醚(80.0mL×3)洗涤滤饼，在真空下干燥，得到12.2g白色固体，99.6％。MS，[M+H]+＝200.1
步骤2：N-(4-溴-2-甲基苯甲基)-2-(叔丁基)噻唑-5-甲酰胺(31-2)的制备
将(4-溴-2-甲基苯基)甲胺(2.68g，13.4mmol)、2-(叔丁基)噻唑-5-羧酸(2.30g，12.4mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(4.58g，23.8mmol)和1-羟基苯并三唑(1.69g，13.4mmol)溶于二氯甲烷(280mL)中，然后在氮气保护下，缓慢滴加N，N-二异丙基乙胺(4.53g，35.0mmol)，反应在室温下搅拌5h，TLC监测反应。反应液用冰水稀释并用二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到4.50g白色固体，91.6％。MS，[M+H]+＝367.0，369.0
步骤3：2-(叔丁基)-N-(2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼戊环-2-基)苯甲基)噻唑-5-甲酰胺(中间体31-3)的制备
在氮气保护下，将N-(4-溴-2-甲基苯甲基)-2-(叔丁基)噻唑-5-甲酰胺(4.50g，12.3mmol)，双联频哪醇硼酸酯(3.72g，14.7mmol)，乙酸钾(3.62g，36.9mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(50ml)中，然后加入[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷的络合物(1.80g，2.46mmol)，反应在100℃搅拌2小时，LCMS监测反应。冷却至室温，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取，分层，有机层用盐水洗涤，干燥，浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝4∶6)，得到2.60g白色固体，收率51.1％。MS，[M+H]+＝415.2
步骤4：叔丁基4-(4-(4-((2-(叔丁基)噻唑-5-碳杂草酰氨基＜乙二酰氨基＞)甲基)-3-甲基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体31-4)的制备
在氮气保护下，将2-(叔丁基)-N-(2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼戊环-2-基)苯甲基)噻唑-5-甲酰胺(2.60g，6.28mmol)，叔丁基4-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(3.72g，14.7mmol)，碳酸钾(3.62g，36.9mmol)溶于1，4-二氧六环(50ml)中，然后加入[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷的络合物(1.80g，2.46mmol)，反应在90℃搅拌16小时，LCMS监测反应。冷却至室温，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取，分层，有机层用盐水洗涤，干燥，浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝4∶6)，得到2.00g白色固体，收率54.1％。MS，[M+H]+＝589.3
步骤5：2-(叔丁基)-N-(2-甲基-4-(7-(哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苯甲基)噻唑-5-甲酰胺(中间体31)的制备
在室温下，将叔丁基4-(4-(4-((2-(叔丁基)噻唑-5-碳杂草酰氨基＜乙二酰氨基＞)甲基)-3-甲基苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸酯(ZXB-010-3)(1.40g，2.38mmol)溶于二氯甲烷(10m1)，然后滴加盐酸的二氧六环溶液(10ml)搅拌1h，TLC监测反应完，溶液浓缩并用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000651
Prep C18OBDTM10um 19.0*250mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：23％-30％)，得到1.00g白色固体，收率85.7％。MS，[M+H]+＝489.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.50-9.52(m，1H)，9.41-9.42(m，2H)，9-12(s，1H)，8.46(s，1H)，8.03-8.04(d，J＝4.0Hz，1H)，7.97-7.98(m，2H)，7.54-7.56(d，J＝8.0Hz，2H)，7.23-7.24(d，J＝4.0Hz，2H)，5.16-5.20(m，1H)，4.55-4.56(d，J＝5.6Hz，2H)，3.44-3.47(m，2H)，3.19-3.25(m，2H)，2.43-2.52(m，5H)，2.17-2.20(d，J＝12.0Hz，2H)，1.40(s，9H)
制备例34：中间体32的合成
Figure BDA0003703453490000661
步骤1∶N-(4-溴苯甲酰基)苯甲酰胺(中间体32-1)的制备
0℃下，将苯甲酰氯(0.624mL，5.38mmol)滴加到对溴苄胺(1.00g，5.38mmol)和三乙胺(1.63g，16.1mmol)二氯甲烷(40.0mL)的溶液中，滴加完，反应在室温下搅拌1小时，LCMS监测反应。向反应液加入二氯甲烷(100mL)和水(30.0mL)，分液，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)，得到1.40g白色固体，收率89.8％。MS，[M+H]+＝290.0，292.0
步骤2：N-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基))苯甲酰胺(中间体32-2)的制备
在氮气保护下，将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(1.26g，1.72mmol)加到双联频哪醇基二硼(4.46g，17.2mmol)，N-(4-溴苯甲酰基)苯甲酰胺(5.00g，17.2mmol)和乙酸钾(5.07g，51.7mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(50.0mL)溶液中，反应在100℃下搅拌2小时，LCMS检测反应。向反应液中加入乙酸乙酯(300mL)和水(100mL)。分层，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)，得到5.00g白色固体，收率86.0％。MS，[M+H]+＝338.2
步骤3∶4-(4-(4-(苯甲酰胺甲基)苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体32-3)的制备
在氮气保护下，将1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)二氯甲烷络合物(121mg，0.015mmol)加到N-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基))苯甲酰胺(3.00g，8.90mmol)，4-(4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.50g，4.45mmol)，碳酸钾(2.46g，17.8mmol)的1，4-二氧六环(16.0mL)和水(4.00mL)溶液中，反应在90℃下搅拌6小时，LCMS监测反应。向反应液中加入乙酸乙酯(200mL)和水(50.0mL)。分层，有机相用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)得到1.60g白色固体，收率70.3％。MS，[M+H]+＝512.2
步骤4：N-(4-(7-(哌啶-4-基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)苄基)苯甲酰胺(中间体32)的制备
将4M的盐酸1，4-二氧六环溶液(5.00mL)滴加到4-(4-(4-(苯甲酰胺甲基)苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-7-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(700mg，1.37mmol)的甲醇(5.00mL)溶液中，反应在室温下搅拌3小时，LCMS监测反应。浓缩，粗品用Prep-HPLC纯化(C18Agilent，乙腈/10mmol碳酸氢铵水溶液，梯度：乙腈/水：40-45％)纯化，冻干，得到396mg白色固体，收率70.3％。MS，[M+H]+＝412.2
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.16(t，J＝6.0Hz，1H)，8.85(s，1H)，8.14-8.16(m，2H)，7.95-7.92(m，2H)，7.81(d，J＝3.6Hz，1H)，7.58-7.47(m，5H)，6.95(d，J＝3.6Hz，1H)，4.81-4.87(m，1H)，4.59(d，J＝6.0Hz，2H)，3.12-3.20(m，2H)，2.78-2.84(m，2H)，1.93-2.09(m，4H).
制备例35：中间体33的合成
Figure BDA0003703453490000671
步骤1：N-(4-溴-2-甲基苄基)-3-异丙氧基氮杂环丁烷-1-甲酰胺(33-1)的制备
在0℃下，将N，N′-羰基二咪唑(1.65g，10.2mmol)加入(4-溴-2-甲基苯基)甲胺盐酸盐(2.00g，8.51mmol)和三乙胺(4.30g，42.6mmol)的二氯甲烷溶液中，反应搅拌1h。将3-异丙氧基氮杂环丁烷盐酸盐(1.41g，9.36mmol)加入反应液中，室温下搅拌1h。LCMS监测反应。向反应液中加入水，分层，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)，得到1.80g白色固体，收率62.2％。MS，[M+H]+＝341.2
步骤2∶3-异丙氧基-N-(2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(33-2)的制备
在氮气保护下，将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯的二氯甲烷络合物(168mg，0.206mmol)加入N-(4-溴-2-甲基苄基)-3-异丙氧基氮杂环丁烷-1-甲酰胺(1.02g，3.00mmol)联频哪醇硼酸酯(1.14g，4.50mmol)和醋酸钾(882mg，9.00mmol)的1，4-二氧六环(30.0mL)溶液中，反应在90℃下搅拌4小时，LCMS监测反应。反应液用乙酸乙酯萃取，分层，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)，得到830mg褐色固体，收率71.3％。MS，[M+H]+＝389.3.
步骤3：N-(4-(2-氨基嘧啶-4-基)-2-甲基苄基)-3-异丙氧基氮杂环丁烷-1-甲酰胺(33)的制备
在氮气保护下，将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯的二氯甲烷络合物(168mg，0.206mmol)加入3-异丙氧基-N-(2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)氮杂环丁烷-1-甲酰胺(800mg，2.06mmol)和碳酸钠(655mg，6.18mmol)的1，4-二氧六环(30.0mL)和水(3.0mL)的溶液中，反应在90℃下搅拌4小时，LCMS监测反应。反应液用乙酸乙酯萃取，分层，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷∶甲醇＝95∶5)，得到416mg褐色固体，收率56.8％。MS，[M+H]+＝356.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.28(d，J＝5.2Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.84(d，J＝8.0Hz，1H)，7.83(d，J＝8.0Hz，1H)，7.30(d，J＝8.0Hz，1H)，7.09(d，J＝5.2Hz，1H)，6.83(d，J＝5.6Hz，1H)，6.62(s，2H)，4.30-4.33(m，1H)，4.20-4.22(d，J＝2.0Hz，2H)，4.01-4.05(m，2H)，3.56-3.63(m，3H)，2.33(s，3H)，1.08(d，J＝6.0Hz，6H).
制备例36：中间体34a和中间体34b的合成
Figure BDA0003703453490000681
步骤1：3-溴-6-碘-2-甲基苯甲酸(中间体34-1)的制备
在氮气保护下，将醋酸钯(0.448g，2.00mmol)加到3-溴-2-甲基苯甲酸(8.60g，40.2mmol)，醋酸碘苯(15.6g，48.4mmol)和碘(12.2g，48.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(200mL)溶液中，反应在100℃下搅拌16小时，TLC监测反应。浓缩，粗品溶于二氯甲烷中，向溶液中加入饱和硫代硫酸钠溶液，pH用盐酸调到2，分层，有机相有水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到10.0g粗产品黑色油状物，收率58.6％，直接用于下一步反应。MS，[M+H]+＝341.0
步骤2：3-溴-6-碘-2-甲基苯甲酸甲酯(中间体34-2)的制备
0℃下，将碘甲烷(1.89g，133mmol)缓慢滴加到3-溴-6-碘-2-甲基苯甲酸(3.00g，88.5mmol)和碳酸钾(3.66g，266mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(50.0mL)悬浊液中，反应在室温下搅拌3小时，TLC监测反应。向反应液中加入乙酸乙酯和水，分层，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品用层析柱分离纯化(石油醚＝100％)，得到3.00g无色油状物，收率96.0％。MS，[M+H]+＝355.0
步骤3：3-溴-6-碘-2-甲基苯甲酸甲酯(中间体34-3)的制备
在氮气保护下，将N-溴代丁二酰亚胺(5.99g，33.8mmol)加入3-溴-6-碘-2-甲基苯甲酸甲酯(10.0g，28.2mmol)和过氧化二苯甲酰(1.36g，5.64mmol)的四氯化碳(200mL)悬浊液中，反应在80℃下搅拌18小时，TLC监测反应。浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1)，得到9.00g白色固体，收率74.0％。MS，[M+H]+＝432.9，434.9，436.9
步骤4：7-溴-4-碘异吲哚-1-酮(中间体34-4)的制备
0℃下，将7N甲胺的甲醇溶液缓慢加入3-溴-6-碘-2-甲基苯甲酸甲酯(2.00g，4.86mmol)的甲醇的悬浊液中，反应在室温搅拌3h，LCMS监测反应。浓缩得到粗品，将粗品溶于二氯甲烷和甲醇混合溶剂中，有机相用饱和的氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到白色固体，收率65.0％。MS，[M+H]+＝337.9
步骤∶5：4-(4-氨基-2-氟苯基)-7-溴异吲哚-1-酮(中间体34-5)的制备
在氮气保护下，将四三苯基膦钯(0.310g，0.270mmol)加到7-溴-4-碘异吲哚-1-酮(0.910g，2.70mmol)和4-氨基-2-氟苯硼酸频那醇酯(0.639g，2.70mmol)，碳酸钠(0.429g，0.405mmol)，氯化锂(0.230g，5.40mmol)的乙醇和水的混合溶液，反应在90℃下搅拌16小时，LCMS监测反应。浓缩得到粗品，将粗品溶于二氯甲烷∶甲醇(体积比为10∶1)中，有机相用饱和的氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶4)，得到300mg白色固体，收率34.7％。MS，[M+H]+＝321.0
步骤：6：1-(4-(7-溴-1-氧异吲哚-4-基)-3-氟苯基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(中间体34-6)的制备
将3-(三氟甲基)异氰酸苯酯(1.70g，9.00mmol)滴加到4-(4-氨基-2-氟苯基)-7-溴异吲哚-1-酮(2.40g，7.50mmol)和三乙胺(2.27g，22.5mmol)的四氢呋喃溶液中，反应在室温下搅拌2小时，LCMS监测反应。浓缩得到粗品，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷∶甲醇＝95∶5)，得到2.30g白色固体，收率60.5％。MS，[M+H]+＝508.3
步骤：7：7-(2-氟-4-(3-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧异吲哚-4-羧酸甲酯(中间体34-7)的制备
在CO的氛围下，将[1，1′-5双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯的二氯甲烷络合物(187mg，0.256mmol)加入1-(4-(7-溴-1-氧异吲哚-4-基)-3-氟苯基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(1.30g，2.56mmol)和三乙胺(776mg，7.68mmol)的甲醇溶液中，反应在85℃下搅拌8小时，LCMS监测反应。浓缩得到粗品，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷∶甲醇＝90∶10)，得到500mg白色固体，收率40.1％。MS，[M+H]+＝488.1
步骤：8：7-(2-氟-4-(3-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧异吲哚-4-羧酸(中间体34-8)的制备
将氢氧化锂(64.3mg，3.06mmol)加入7-(2-氟-4-(3-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧异吲哚-4-羧酸甲酯(500mg，1.02mmol)的甲醇(5mL)，四氢呋喃(20mL)和水(2mL)的混合溶液中，反应在室温下搅拌2小时，LCMS监测反应。减压下将有机溶剂旋干。用1NHCl将pH调至2，过滤，滤饼用水洗涤，干燥，得到430mg灰色固体，收率88.9％。MS，[M+H]+＝474.1
步骤9：4-(7-(2-氟-4-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧异吲哚-4-甲酰胺基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体34-9)的合成
将1-叔丁氧羰基-4-氨基哌啶(252mg，1.26mmol)加到7-(2-氟-4-(3-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧异吲哚-4-羧酸(400mg，0.849mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯(483mg，1.27mmol)和三乙胺(258mg，255mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(10mL)的溶液中，反应在室温下搅拌4小时，LCMS监测反应。粗品用C18反相柱纯化(流动相：乙腈/水，0.1％TFA，梯度：30％-80％)，得到350mg淡黄色固体，收率62.9％。MS，[M+H]+＝656.2
步骤10：7-(2-氟-4-(3-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧代-N-(哌啶-4-基)异吲哚-4-甲酰胺(中间体34a)的合成
将三氟乙酸(2mL)滴加到4-(7-(2-氟-4-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧异吲哚-4-甲酰胺基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(350mg，0.530mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中，反应在室温下搅拌3小时。LCMS监测反应。浓缩。粗品用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000691
C18 19x250mm column，10μm，流动相：乙腈/水/0.05％三氟乙酸，梯度30-40％)，得到175mg白色固体，收率59.0％。MS，[M+H]+＝556.3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：9.23-9.30(m，2H)，8.60-8.63(m，2H)，8.53-8.55(m，1H)，8.28-8.31(m，1H)，8.02-8.03(m，2H)，7.62(d，J＝8.8Hz，1H)，7.49-7.54(m，2H)，7.45(d，J＝8.0Hz，1H)，7.34(d，J＝8.2Hz，m，1H)，7.29(d，J＝7.6Hz，1H)，7.24(dd，J＝8.4，2.0Hz)，4.57(s，2H)，3.08-4.11(m，1H)，3.03-3.09(m，2H)，2.00-2.02(m，2H)，1.69-1.7(m，2H).
步骤11：4-(7-(2-氟-4-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧异吲哚-4-基)-3，6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(中间体34-10)的制备
在氮气保护下，将[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯的二氯甲烷络合物(15.0mg，0.020mmol)加到1-(4-(7-溴-1-氧异吲哚-4-基)-3-氟苯基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(102mg，0.201mmol)，N-Boc-1，2，5，6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(93.3mg，0.302mmol)，碳酸钾(83.2mg，0.603mmol)的1，4-二氧六环(4mL)和水(1mL)的混合溶液中，反应在85℃下搅拌3小时，LCMS监测反应。浓缩，粗品用C18反相柱纯化(流动相：乙腈/水，0.1％TFA，梯度：30％-80％)得到100mg白色固体，收率82.0％。MS，[M+H]+＝611.2
步骤12：4-(7-(2-氟-4-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧异吲哚-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(中间体34-11)的制备
在氢气氛围下，4-(7-(2-氟-4-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧异吲哚-4-基)-3，6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(400mg，0.655mmol)和钯碳(5％)(138mg，0.0655mmol)的甲醇(30mL)的悬浊液在室温下搅拌16小时，LCMS监测反应。过滤，滤液浓缩得到360mg白色固体，收率72.0％。MS，[M+H]+＝613.2
步骤13：1-(3-氟-4-(1-氧代-7-(哌啶-4-基)异吲哚-4-基)苯基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)脲(中间体34b)的合成
0℃下，将三氟乙酸(2mL)滴加到4-(7-(2-氟-4-(3-(三氟甲基)苯基)脲基)苯基)-3-氧异吲哚-4-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(350mg，0.572mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中，反应在室温下搅拌3小时。LCMS监测反应完全，浓缩，粗品用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000702
Prep C18 19x250mmcolumn，10μm，流动相：乙腈/水/0.05％三氟乙酸，梯度31-41％)，得到225mg白色固体，收率76.9％。MS，[M+H]+＝513.2
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.38(s，1H)，8.29(s，1H)，8.61-8.63(m，1H)，8.54(s，1H)，8.38-8.34(m，1H)，8.04(s，1H)，7.61-7.63(d，J＝7.2Hz，1H)，7.45-7.55(m，3H)，7.34-7.35(m，2H)，7.20-7.27(m，2H)，4.48(s，2H)，4.33-4.41(m，2H)，3.01-3.07(m，3H)，1.87-1.98(m，4H).
制备例37：中间体35的合成
Figure BDA0003703453490000701
步骤1∶2-氯-6-(环己基氨基)尼古丁腈(中间体35-1)的制备
室温条件下，将2，6-二氯尼古丁腈(6.00g，34.7mmol)，三乙胺(14.4mL，104mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(60mL)中，然后滴加环己胺(3.44g，34.7mmol)，反应液在室温下搅拌过夜，LCMS监测反应。加适量水和乙酸乙酯萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10∶1)得到4.60g白色固体，56.4％。MS，[M+H]+＝236.1
步骤2：叔丁基4-(4-((3-氰基-6-(环己基氨基)吡啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯(中间体35-2)的制备
在氮气保护下，2-氯-6-(环己基氨基)尼古丁腈(4.00g，17.0mmol)，叔丁基4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸酯(5.65g，20.4mmol)，醋酸钯(190mg，0.85mmol)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(982mg，17.0mmol)的1，4-二氧六环(100mL)，在120℃搅拌5h。LCMS监测反应。加入乙酸乙酯和水，分层，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝4∶1)，得到6.0g白色固体，收率74％。MS，[M+H]+＝477.3
步骤3：叔丁基4-(4-((3-氨基甲酰-6-(环己基氨基)吡啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯(中间体35-3)的制备
室温条件下，将双氧水(30％)(20mL)缓慢的滴加到叔丁基4-(4-((3-氰基-6-(环己基氨基)吡啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯(3.50g，7.35mmol)、碳酸钾(3.05g，22.1mmol)溶于二甲基亚砜(100mL)中，搅拌1小时后，LCMS监测反应。加适量水和乙酸乙酯萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)得到3.00g白色固体，收率68％。MS，[M+H]+＝495.3
步骤4：6-(环己基氨基)-2-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)尼克酰胺(中间体35)的制备
在氮气保护下，将盐酸1，4二氧六环(30mL，4M)滴加到叔丁基4-(4-((3-氨基甲酰-6-(环己基氨基)吡啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸酯(3g，6.1mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中，反应搅拌3小时，LCMS检测，旋干，用水(8mL)溶解后，用反相层析柱分离得到2.65g白色固体，收率100％。MS，[M+H]+＝395.2
1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.20-8.22(d，J＝8.8Hz，1H)，7.31-7.33(d，J＝8.8Hz，2H)，7.22-7.24(d，J＝8.8Hz，2H)，6.18-7.20(d，J＝9.2Hz，1H)，3.55-3.59(m，4H)，3.41-3.44(m，4H)，1.93-1.96(m，2H)，1.73-1.76(m，2H)，1.61-1.64(m，1H)，1.40-1.46(m，2H)，1.27-1.36(m，3H).
制备例38：中间体36的合成
Figure BDA0003703453490000711
步骤1：叔丁基(4-((3-氰基-6-(环己基氨基)吡啶-2-基)氨基)苯基)氨基甲酸酯(中间体36-1)的制备。
在0℃下，将2-氯-6-(环己基氨基)尼古丁腈(2.00g，8.51mmol)，叔丁基(4-氨基苯基)氨基甲酸酯(2.13g，10.2mmol)，醋酸钯(190mg，0.850mmol)，4，5-双(二苯基膦基)-9，9-二甲基氧杂蒽(590mg，1.02mmol)，碳酸钾(3.52g，25.5mmol)溶于二氧六环(60.0mL)中，慢慢加热至150℃，并搅拌1.5小时，LCMS监测反应。反应液浓缩，加水50ml，并用乙酸乙酯(80ml x 2)萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3∶1)得到1.54g白色固体，收率44.6％。MS，[M+H]+＝408.2
步骤2：叔丁基(4-((3-氰基-6-(环己基氨基)吡啶-2-基)氨基)苯基)氨基甲酸酯(中间体36-2)的制备
在室温下，将叔丁基(4-((3-氰基-6-(环己基氨基)吡啶-2-基)氨基)苯基)氨基甲酸酯(1.20g，2.81mmol)和碳酸钾(1.94g，8.43mmol)溶于二甲基亚砜(30.0mL)，滴加双氧水(20.0ml)搅拌1h，LCMS监测反应。反应液过滤，并用石油醚冲洗，得到720mg白色固体，收率57.6％。MS，[M+H]+＝426.2
步骤3：2-((4-氨基苯基)氨基)-6-(环己基氨基)尼克酰胺(中间体36)的制备
在室温下，将叔丁基(4-((3-氰基-6-(环己基氨基)吡啶-2-基)氨基)苯基)氨基甲酸酯(700mg，1.64mmol)溶于二氯甲烷(7.00ml)中，然后滴加盐酸的二氧六环溶液(3ml)，搅拌1小时，LCMS监测反应。浓缩，粗品用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Shim-packScepter C18-120 5um 20.0*250mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％TFA，梯度：21％-32％)，得到450mg白色固体，收率83.9％。MS，[M+H]+＝326.5
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.87-7.90(d，J＝8.8Hz，2H)，7.80-7.82(d，J＝8.0Hz，1H)，7.28-7.32(m，2H)，6.00-6.02(d，J＝8.8Hz，1H)，3.80-3.84(m，1H)，3.32-3.36(m，5H)，2.09-2.12(m，2H)，1.85-1.90(m，2H)，1.73-1.76(m，1H)，1.43-1.53(m，2H)，1.288-1.37(m，3H).
制备例39：中间体37的合成
Figure BDA0003703453490000712
步骤1：N-((2-氯-6-氟苄基)氨甲酰)-3-硝基苯甲酰胺(中间体37-1)的制备
在0℃下，将硫氰酸钾(2.30g，23.8mmol)分批加到间硝基苯甲酰氯(4.00g，21.6mmo)乙腈的悬浊液中，在室温下搅拌30分钟。冷却至0℃，将2-氯-6-氟苄胺(3.40g，21.6mmol)的乙腈(100mL)溶液缓慢滴加到悬浊液中，滴加完，慢慢回到室温，在室温下搅拌3小时，LCMS监测反应。过滤，滤饼用乙腈，水洗，干燥的得到3.95g白色固体，收率50.0％，直接用于下一步。MS，[M+H]+＝368.0
步骤2：N-((2-氯-6-氟苄基)氨基)甲硫基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺(中间体37-2)的制备
N-((2-氯-6-氟苄基)氨甲酰)-3-硝基苯甲酰胺(3.00g，8.20mmol)，碘甲烷(2.32g，16.4mmol)和碳酸钠(2.61g，24.6mmol)的乙腈悬浊液在80℃下搅拌2小时，LCMS监测反应。浓缩，将粗品溶于二氯甲烷和水，分层，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到3.05g白色固体，收率96.0％，直接用于下一步。MS，[M+H]+＝384.1
步骤3∶N-(2-氯-6-氟苄基)-3-(3-硝基苯基)-1H-1，2，4-三唑-5-胺(中间体37-3)的制备
N-((2-氯-6-氟苄基)氨基)(甲硫基)甲基)-3-硝基苯甲酰胺(2.8g，7.32mmol)和水合肼(730mg，14.6mmol)的乙醇(40mL)溶液在80℃下搅拌16小时，LCMS监测反应。浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1)，得到1.00g白色固体，收率39.9％。MS，[M+H]+＝348.1
步骤4：3-(3-氨基苯基)-N-(2-氯-6-氟苄基)-1H-1，2，4-三唑-5-胺(中间体37)的制备
在氮气保护下，将铁粉(806mg，14.4mmol)加到N-(2-氯-6-氟苄基)-3-(3-硝基苯基)-1H-1，2，4-三唑-5-胺(500mg，1.44mmol)和氯化铵(768mg，14.4mmol)的水和乙醇溶液中，反应在80℃下搅拌2小时，LCMS监测反应。过滤，滤饼用甲醇洗涤，滤液浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝7∶3)，得到295mg白色固体，收率65.0％。MS，[M+H]+＝318.0
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.0-11.89(m，1H)，7.37-7.39(m，2H)，6.99-7.32(m，4H)，6.58-5.81(m，2H)，5.08-4.96(m，2H)，4.56(br，2H).
制备例40：中间体38的合成
Figure BDA0003703453490000721
步骤1：甲基6-((1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-羧酸酯(中间体38-1)的制备
在室温下，将2，6-二氯嘧啶-4-羧酸甲酯(3.00g，14.9mmol)、三乙胺(15.0mL)溶于N，N-二甲基甲酰胺(30.0mL)然后将叔丁基4-氨基哌啶-1-羧酸酯(2.98g，14.9mmol)加入反应液，搅拌16h；TLC监测反应完成，加水(30.0ml)，用乙酸乙酯(120mLx 2)萃取，合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩；粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝9∶1)得到3.40g产物，收率62.9％。MS，[M+H]+＝371.1
步骤2：甲基6-((1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-羧酸酯(中间体38-2)的制备
将甲基6-((1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-4-羧酸酯(3.00g，8.10mmol)，碳酸钠(2.69g，24.3mmol)，钯碳(1.72g，0.81mmol)溶于四氢呋喃(120mL)，在氢气球压下，在室温下搅拌16h。LCMS监测反应，过滤，浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1∶4)得到1.8g产物，收率66.7％。MS，[M+H]+＝337.2
步骤3∶叔丁基4-((6-甲酰基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(中间体38-3)的制备
在氮气保护下，在-50℃下，将甲基6-((1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-羧酸酯(1.30g，3.85mmol)溶于四氢呋喃(15.0ml)，然后缓慢滴加二异丁基氢化铝(2.07ml，11.5mmol)，反应液在-50℃下搅拌3h。TLC监测反应。用十水硫酸钠淬灭，并用乙酸乙酯(50.0mL x2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩；粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝4∶6)得到500mg产物，收率42.3％。MS，[M+H]+＝307.2
步骤4：叔丁基4-((6-(((2-氯-6-氟苯基)氨基)甲基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(中间体38-4)的制备
将叔丁基4-((6-甲酰基嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(400mg，1.30mmol)，2-氯-6-氟苯胺(381mg，2.60mmol)溶于1，2-二氯乙烷(8.00mL)，滴加乙酸(1滴)，室温下搅拌1h。然后加入氰基硼氢化钠(245mg，3.90mmol)，继续搅拌16h。LCMS监测反应。用氯化铵溶液淬灭，并用二氯甲烷(20.0mL x2)萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1∶1)得到140mg产物，收率24.7％。MS，[M+H]+＝436.2
步骤5：6-(((2-氯-6-氟苯基)氨基)甲基)-N-(哌啶-4-基)嘧啶-4-胺(中间体38)的制备
将叔丁基4-((6-(((2-氯-6-氟苯基)氨基)甲基)嘧啶-4-基)氨基)哌啶-1-羧酸酯(150mg，0.34mmol)溶于二氯甲烷(2.00ml)，然后缓慢滴加TFA(0.40ml)，在室温下搅拌1h。LCMS监测反应。溶液浓缩并用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000732
Prep C18OBDTM10um 19.0*250mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：25％-35％)，得到70.3mg白色固体，收率60.8％。MS，[M+H]+＝336.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.65(s，1H)，7.15-7.17(d，J＝8.0Hz，1H)，6.95-7.01(m，1H)，6.75-6.80(m，2H)，4.57(s，2H)，4.41(m，1H)，3.44-3.48(m，2H)，3.12-3.19(m，2H)，2.22-2.24(m，2H)，1.77-1.87(m，2H).
制备例41：中间体39的合成
Figure BDA0003703453490000731
步骤1：叔丁基4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体39-1)的制备
在0℃下，将3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(5.00g，19.2mmol)，叔丁基-4-羟基哌啶-1-羧酸酯(11.6g，57.6mmol)，三苯基膦(10.0g，38.4mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，然后在氮气保护下，缓慢滴加偶氮二甲酸二乙酯(6.68g，38.4mmol)。自然升温至25℃，并搅拌3h。TLC监测反应。反应液浓缩后用水(50mL)稀释，然后用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20∶1)得到4.9g产物，收率58.8％。MS，[M+H]+＝445.1
步骤2：叔丁基4-(4-氨基-3-((2-氯-6-氟苯甲基)氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体39-2)的制备
将叔丁基4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(ZXB-019-1)(1.00g，2.25mmol)、(2-氯-6-氟苯基)甲胺(1.82g，11.4mmol)、碘化亚铜(180mg，0.95mmol)L-脯氨酸(220mg，1.91mmol)和碳酸钾(640mg，4.64mmol)溶于二甲基亚砜(40mL)中，反应在加热至100℃，搅拌12h，TLC监测反应。反应完后用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(100mL x2)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20∶1)得到570mg白色固体，收率53.3％。MS，[M+H]+＝476.2
步骤3：N3-(2-氯-6-氟苯甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3，4-二胺(中间体39)的制备
在室温下，将叔丁基4-(4-氨基-3-((2-氯-6-氟苯甲基)氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(450mg，0.96mmol)溶于二氯甲烷(4mL)，然后滴加盐酸的二氧六环溶液(1mL)搅拌1h。TLC监测反应完，溶液浓缩并用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000733
Prep C18 OBDTM10um 19.0*250mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：15％-23％)，得到147mg白色固体，收率41.4％。MS，[M+H]+＝376.2
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.98(s，1H)，7.34-7.41(m，2H)，7.22-7.27(m，3H)，6.28(s，1H)，4.47-4.48(m，3H)，3.03-3.06(d，2H)，2.49-2.59(m，2H)，1.96-1.93(m，2H)，1.64-1.67(d，2H).
制备例42：中间体40的合成
Figure BDA0003703453490000741
步骤1：叔丁基3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体40-1)的制备。
在0℃下，将3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2.50g，9.6mmol)、叔丁基3-羟基哌啶-1-羧酸酯(5.8g，28.8mmol)、三苯基膦(5.00g，19.2mmol)溶于四氢呋喃(50.0ml)中，然后在氮气保护下，缓慢滴加偶氮二甲酸二乙酯(3.34g，19.2mmol)。自然升温至25℃，并搅拌3h，TLC监测反应。反应液浓缩后用水(25.0mL)稀释，然后用乙酸乙酯(50mL x2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20∶1)得到2.60g产物，收率61.8％。MS，[M+H]+＝445.1
步骤2：叔丁基3-(4-氨基-3-((2-氯-6-氟苯甲基)氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体40-2)的制备
将叔丁基3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(ZXB-020-1)(2.00g，4.50mmol)、(2-氯-6-氟苯基)甲胺(3.64g，22.8mmol)、碘化亚铜(360mg，1.90mmol)L-脯氨酸(440mg，3.82mmol)和碳酸钾(1.28g，9.28mmol)溶于二甲基亚砜(80mL)中，反应在加热至100℃，搅拌12h，TLC监测反应。反应完后用水(60ml)稀释并用乙酸乙酯(120ml x 2)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20∶1)得到1.40g白色固体，收率65.4％。MS，[M+H]+＝476.2
步骤3：N3-(2-氯-6-氟苯甲基)-1-(哌啶-3-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3，4-二胺(中间体40)的制备
在室温下，将叔丁基3-(4-氨基-3-((2-氯-6-氟苯甲基)氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(ZXB-020-2)(1.00g，2.10mmol)溶于二氯甲烷(8ml)，然后滴加盐酸的二氧六环溶液(2ml)搅拌1h，LCMS监测反应完，溶液浓缩并用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000743
Prep C18 OBDTM10um 19.0*250mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％TFA，梯度：15％-25％)，得到660mg白色固体，收率76.0％。MS，[M+H]+＝376.2.
1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.22(s，1H)，7.30-7.36(m，2H)，7.12-7.17(m，1H)，5.02-5.06(m，1H)，4.71(s，2H)，3.54-3.64(m，2H)，3.36-3.41(m，1H)，3.22-3.29(m，1H)，2.22-2.24(m，1H)，2.14-2.08(m，2H)，1.91-1.90(m，1H).
制备例43：中间体41的合成
Figure BDA0003703453490000742
步骤1：叔丁基4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体41-1)的制备
在0℃下，将3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(5.00g，19.2mmol)、叔丁基-4-羟基哌啶-1-羧酸酯(11.6g，57.6mmol)、三苯基膦(10.0g，38.4mmol)溶于四氢呋喃(100ml)中，然后在氮气保护下，缓慢滴加偶氮二甲酸二乙酯(6.68g，38.4mmol)。自然升温至25℃，并搅拌3h，TLC监测反应。反应液浓缩后用水(50ml)稀释，然后用乙酸乙酯(100ml x2)萃取，合并有机相并用无水硫酸钠干燥，浓缩。粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20∶1)得到4.9g产物，收率58.8％。MS，[M+H]+＝445.1
步骤2：叔丁基4-(4-氨基-3-((6-氟苯甲基)氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体41-2)的制备
将叔丁基4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(ZXB-019-1)(1.5g，3.36mmol)、(6-氟苯基)甲胺(2.10g，16.89mmol)、碘化亚铜(260mg，1.35mmol)L-脯氨酸(312mg，2.7mmol)和碳酸钾(936mg，6.78mmol)溶于二甲基亚砜(60mL)中，反应在加热至100℃，搅拌12h，TLC监测反应。反应完后用水(100ml)稀释并用乙酸乙酯(200ml x 2)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用层析柱分离纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20∶1)得到950mg白色固体，收率63.8％。MS，[M+H]+＝442.2.
步骤3：N3-(6-氟苯甲基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3，4-二胺(中间体41)的制备
在室温下，将叔丁基4-(4-氨基-3-((6-氟苯甲基)氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(ZXB-021-1)(950mg，2.15mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，然后滴加盐酸的二氧六环溶液(3.5ml)搅拌1h，TLC监测反应完，溶液浓缩并用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000752
Prep C18 OBDTM10um 19.0*250mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：10％-23％)，得到343mg白色固体，收率46.7％。MS，[M+H]+＝342.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.98(s，1H)，7.34-7.42(m，2H)，7.23-7.27(m，3H)，6.27-6.29(m，1H)，4.47-4.48(d，3H)，3.03-3.06(d，2H)，2.56-2.62(m，2H)，1.99-1.96(m，2H)，1.67-1.64(d，2H).
制备例44：中间体42的合成
Figure BDA0003703453490000751
步骤1：6-氯-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺(中间体42-1)的制备
在氮气保护下，2，6-二氯尼克酰胺(2.00g，10.5mmol)，4-苯氧基苯基硼酸(2.70g，12.6mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(480mg，0.525mmol)和碳酸铯(6.83g，21.0mmol)的1，4-二氧六环(100mL)和水(10mL)的混合溶液中，在90℃加热18h。LCMS监测反应。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品用柱层析纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)得到2.4g，白色固体，收率70.5％。MS，[M+H]+＝325.1
步骤2∶叔丁基5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)-5′，6′-二氢-[2，3′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸酯(中间体42-2)的制备
在氮气保护下，6-氯-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺(1.6g，4.93mmol)，环己基膦(138mg，0.493mmol)三(二亚苄基丙酮)二钯(225mg，0.246mmol)，叔丁基5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼戊环-2-基)-3，6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(1.68g，5.42mmol)的1，4-二氧六环和水的混合溶液，在120℃搅拌2h。LCMS监测反应。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品用柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)得到1.4g白色固体，收率60.3％。MS，[M+H]+＝472.2
步骤3：叔丁基3-(5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体42-3)的制备
在氢气氛围下，叔丁基5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)-5′，6′-二氢-[2，3′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸酯(1.30g，2.76mmol)和二氧化铂(62.65mg，0.276mmol)的甲醇(30mL)溶液，在50℃搅拌18小时，LCMS监测反应。过滤，滤液浓缩得到1.2g粗品，直接用于下一步。MS，[M+H]+＝474.2
步骤4：2-(4-苯氧基苯基)-6-(哌啶-3-基)尼克酰胺(中间体42)的制备
将4M HCl(5mL)的二氧六环溶液滴加到叔丁基3-(5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯(1.10g，2.32mmol)的甲醇溶液中，反应在室温下搅拌1h。LCMS监测反应。浓缩得到粗品。粗品用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：
Figure BDA0003703453490000763
Prep C18OBDTM10um 19.0*250mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.05％FA，梯度：5％-15％)，得到780mg白色固体，收率80％。MS，M+H]+＝374.2
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.89-7.91(d，J＝7.6Hz，1H)，7.71-7.42(m，2H)，7-37-7-40(m，3H)，7.14-7.17(m，1H)，7.01-7.06(m，4H)，3.60-3.58(m，1H)，3.48-3.38(m，2H)，3.28-3.33(m，1H)，3.07-3.13(m，1H)，2，17-2.20(m，1H)，1.87-2.04(m，3H).
制备例45：中间体43的合成
Figure BDA0003703453490000761
步骤1：3-(4-苯氧基苯基)-1-(哌啶-4-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(中间体43)的制备
将3-(4-苯氧基苯基)-4-氨基-1H-吡唑并[3，4-D]嘧啶(500mg)加入3mL四氢呋喃中，然后加入三苯基膦(2.0equiv.)、DEAD(2.0equiv.)和N-Boc-4-羟基哌啶(2.0equiv.)，反应液室温搅拌12小时后，猝灭反应，后处理后得到中间体43-1，然后加入三氟乙酸/二氯甲烷(2∶1)，室温搅拌4小时，猝灭反应，后处理经硅胶柱纯化后得到中间体43(340mg，收率为53％)。
MS，M+H]+＝387.2
1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.22(s)，7.66(d，J＝8.84Hz，2H)，7.46-7.42(m，2H)，7.21-7.12(m，5H)，4.76-4.71(m，1H)，3.09-3.06(m，2H)，2.67-2.61(m，2H)，2.09-2.02(m，2H)，1.99-1.82(m，2H).
制备例46：中间体44的合成
Figure BDA0003703453490000762
步骤1：6-氯-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺(中间体44-1)的制备
在氮气保护下，2，6-二氯尼克酰胺(1.00g，5.23mmol)，4-苯氧基苯基硼酸(1.12g，5.23mmol)，Pd(dppf)Cl2(427mg，0.523mmol)和碳酸铯(3.4g，10.46mmol)的1，4-二氧六环(30mL)和水(5mL)的混合溶液中，在110℃加热18h。LCMS监测反应。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品用柱层析纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得到1.04g白色固体，收率37％。MS，[M+H]+＝325.1
步骤2：叔丁基5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)-3′，6′-二氢-[2，3′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸酯(中间体44-2)的制备
在氮气保护下，6-氯-2-(4-苯氧基苯基)尼克酰胺(500mg，1.54mmol)，四三苯基膦钯(356mg，0.308mmol)，叔丁基4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁硼戊环-2-基)-3，6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸酯(714mg，2.31mmol)的1，4-二氧六环和水的混合溶液，在90℃搅拌16h。LCMS监测反应。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品用柱层析纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得到260mg白色固体，收率36％。MS，[M+H]+＝472.2
步骤3：叔丁基4-(5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯(中间体44-3)的制备
在氢气氛围下，叔丁基5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)-3′，6′-二氢-[2，3′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸酯(260mg，0.55mmol)和10％钯碳(62.65mg，0.276mmol)的甲醇(10mL)溶液，室温搅拌16小时，LCMS监测反应。过滤，滤液浓缩得到245m粗品，直接用于下一步。MS，[M+H]+＝474.2
步骤4：2-(4-苯氧基苯基)-6-(哌啶-4-基)尼克酰胺(中间体44)的制备
将三氟乙酸(1mL)滴加到叔丁基4-(5-氨基甲酰-6-(4-苯氧基苯基)吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯(245mg，0.52mmol)的二氯甲烷溶液中，反应在室温下搅拌2h。LCMS监测反应。浓缩得到粗品。粗品用柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷∶甲醇＝30∶1)，得到200mg白色固体，收率79％。MS，M+H]+＝374.2
制备例47：中间体45的合成
Figure BDA0003703453490000771
步骤1：4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间体45-1)的制备
4-氟硝基苯(1.0g，7.08mmol)，哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.32g，7.08mmol)和碳酸钾(1.96g，14.16mmol)的DMF(10mL)溶液，在100℃搅拌8h。LCMS监测反应。反应液用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品用柱层析纯化(洗脱剂：石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得到2g白色固体，收率92％。MS，[M+H]+＝308.2
步骤2∶4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(中间体45-2)的制备
在氢气氛围下，4-(4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2g，6.50mmol)和10％钯碳(200mg)的甲醇(50mL)溶液，室温搅拌16小时，LCMS监测反应。过滤，滤液浓缩得到1.6g粗品，直接用于下一步。MS，[M+H]+＝278.2
步骤3：4-(4-((5-氯-4-((2-(异丙基磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(中间体45-3)的制备
4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.0g，3.6mmol)，2，5-二氯-N-(2-(异丙基磺酰基)苯基)嘧啶-4-胺(1.25g，3.6mmol)，Pd(dppf)Cl2(294mg，0.36mmol)和碳酸铯(2.34g，7.2mmol)的1，4-二氧六环(30mL)在90℃搅拌16h。浓缩得到粗品。粗品用柱层析纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝1∶1)得到1.01g白色固体，收率48.2％。MS，[M+H]+＝587.2
步骤4：5-氯-N4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)-N2-(4-(哌嗪-1-基)苯基)嘧啶-2，4-二胺(中间体45)的制备
将三氟乙酸(1mL)滴加到4-(4-((5-氯-4-((2-(异丙基磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.85mmol)的二氯甲烷溶液中，反应在室温下搅拌2h。LCMS监测反应。浓缩得到粗品。粗品用柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷∶甲醇＝50∶1)，得到210mg白色固体，收率50.7％。MS，[M+H]+＝487.1.
制备例48：中间体46的合成
Figure BDA0003703453490000781
步骤1：叔丁基4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)乙基)苯基-1-羧酸酯(中间体46-1)的制备
将叔丁基3-(4-甲酰基苯基)丙酸(311mg，1.46mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(6mL)中，再加入醋酸(0.9mL)，5-氨基-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(200mg，0.732mol)，并在室温下将混合物搅拌1小时。冰浴至0℃，加入氰基硼氢化钠(931mg，4.39mmol)，然后在室温下将混合物搅拌16小时。用水(20mL)稀释混合物，并用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。剩余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝0-100％)纯化，得到300mg黄色油状化合物，收率82.9％。MS，[M+H]+＝422.1.
步骤2∶4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)乙基)苯基-1-羧酸(中间体46)的制备
将叔丁基4-(((2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)氨基)乙基)苯基-1-羧酸酯(300mg，0.639mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(728mg，6.39mmol)。将混合物在25℃搅拌过夜。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：20％-50％)，得到101.8mg白色固体状化合物，收率约38.4％。MS，[M+H]+＝422.1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.23(s，1H)，11.06(s，1H)，7.93-7.90(m，2H)，7.78(t，J＝6.0Hz，1H)，7.57(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.45(m，2H)，6.96(s，1H)，6.89(d，J＝8.4Hz，1H)，5.03(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，4.55(d，J＝5.8Hz，2H)，3.69(s，2H)，2.98-2.84(m，1H)，2.69-2.32(m，2H)，2.02-1.93(m，1H).，
制备例49：中间体47的合成
Figure BDA0003703453490000782
步骤1：1-(2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-1，3-二羰基异二氢吲哚-5-基)吡咯烷-3-羧酸(中间体47)的制备
2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-氟异二氢吲哚-1，3-二酮(200mg，0.724mmol)，吡咯烷-3-羧酸(100mg，0.868mmol)，N，N-二异丙基乙胺(467mg，3.62mmol)，二甲基亚砜(3mL)的混合溶液在120℃下搅拌2小时。将反应液过滤，得到的滤液用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm，5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：15％-50％)，得到114.4mg黄色固体状标题化合物，收率42.4％。MS，[M+H]+＝371.2.
化合物GBD-2、GBD-4、GBD-6、GBD-8、GBD-10、GBD-12、GBD-14的合成步骤
Figure BDA0003703453490000783
将依鲁替尼母核、化合物3a-3g、HOBt、EDCI、Et3N和DMAP溶于DMF中，反应后向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经步纯化得到化合物GBD-2、GBD-4、GBD-6、GBD-8、GBD-10、GBD-12、GBD-14。
化合物GBD-3、GBD-5、GBD-7、GBD-9、GBD-11、GBD-13、GBD-15的合成步骤
Figure BDA0003703453490000791
将依鲁替尼母核(0.04mmol)、化合物3a’-3g’(0.046mmol，1.2equiv.)、HOBt(8mg，0.058mmol，1.5equiv.)、EDCI(11mg，0.058mmol，1.5equiv.)、Et3N(10μl，0.078mmol，2.0equiv.)和DMAP(1mg，0.1equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌过夜。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝40∶1到DCM：MeOH＝15∶1)进一步纯化得到化合物GBD-3、GBD-5、GBD-7、GBD-9、GBD-11、GBD-13、GBD-15，产率58％。
实施例1：4-((6-((R)-3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-6-羰基已基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-2).
Figure BDA0003703453490000792
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.44-8.37(m，1H)，7.62(d，J＝7.92，2H)，7.50-7.44(m，1H)，7.38(t，J＝7.52Hz，2H)，7.18-7.12(m，3H)，7.07(d，J＝7.96Hz，3H)，6.89-6.82(m，1H)，6.24(s，1H)，5.79(s，1H)，4.90-4.54(m，3H)，4.07-3.86(m，1H)，3.64-3.49(m，1H)，3.28-3.09(m，3H)，2.89-2.68(m，3H)，2.41-1.94(m，6H)，1.70-1.43(m，10H)；LC-MS：以C41H41N9O6计算，[M+H]+，756.10.
实施例2：4-((7-((R)-3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-羰基庚基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-4).
Figure BDA0003703453490000793
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.43-8.37(m，1H)，7.62(d，J＝8.24，2H)，7.50-7.43(m，1H)，7.38(t，J＝7.00Hz，2H)，7.18-7.12(m，3H)，7.07(d，J＝7.40Hz，3H)，6.86(dd，J1＝15.8Hz，J2＝8.6Hz，1H)，6.24-6.18(m，1H)，5.81(s，1H)，4.93-4.57(m，3H)，4.06-3.86(m，1H)，3.66-3.56(m，1H)，3.28-3.09(m，3H)，2.90-2.66(m，3H)，2.39-1.93(m，6H)，1.66-1.36(m，12H)；LC-MS：以C42H43N9O6计算，[M+H]+，769.97.
实施例3：4-((8-(R)-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-羰基辛基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-6).
Figure BDA0003703453490000794
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.45-8.38(m，1H)，7.63(d，J＝8.16，2H)，7.50-7.44(m，1H)，7.41-7.36(m，2H)，7.18-7.12(m，3H)，7.06(m，3H)，6.86(dd，J1＝12.4Hz，J2＝8.6Hz，1H)，6.24-6.19(m，1H)，5.65(s，1H)，4.93-4.52(m，3H)，4.06-3.86(m，1H)，3.64-3.45(m，1H)，3.28-3.09(m，3H)，2.90-2.67(m，4H)，2.50-2.24(m，3H)，2.14-2.10(m，1H)，1.97-1.95(m，1H)，1.66-1.36(m，14H)；LC-MS：以C43H45N9O6计算，[M+H]+，784.33.：
实施例4：((9-(R)-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-9-羰基壬基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-8).
Figure BDA0003703453490000801
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.48-8.37(m，1H)，7.65-7.62(m，2H)，7.47(q，J＝7.24Hz，1H)，7.41-7.36(m，2H)，7.19-7.13(m，3H)，7.10-7.06(m，3H)，6.86(dd，J1＝11.64Hz，J2＝8.6Hz，1H)，6.23-6.16(m，1H)，5.75-5.57(m，1H)，4.95-4.79(m，3H)，4.62(dd，J1＝31.46Hz，J2＝13.18Hz，1H)，4.07-3.92(m，1H)，3.65-3.43(m，1H)，3.31-3.09(m，3H)，2.90-2.63(m，3H)，2.46-2.20(m，4H)，2.17-2.11(m，1H)，1.98-1.94(m，1H)，1.66-1.24(m，16H)；LC-MS：以C44H47N9O6计算，[M+H]+，799.15.、
实施例5：4-((10-(R)-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-10-羰基癸基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-10).
Figure BDA0003703453490000802
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.41-8.27(m，1H)，7.63-7.60(m，2H)，7.54-7.46(m，1H)，7.40(t，J＝7.44Hz，2H)，7.19-7.13(m，3H)，7.08-7.06(d，J＝8Hz，3H)，6.89-6.81(m，1H)，6.23-6.21(m，1H)，4.93-4.57(m，3H)，4.07-3.87(m，1H)，3.70-3.46(m，1H)，3.33-3.11(m，3H)，2.89-2.61(m，3H)，2.38-2.25(m，4H)，2.15-2.11(m，1H)，2.00-1.96(m，1H)，1.63-1.24(m，18H)；LC-MS：以C45H49N9O6计算，[M+H]+，812.37.
实施例6：4-((11-(R)-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-11-羰基十一烷基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-12).
Figure BDA0003703453490000803
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.70-8.48(m，1H)，7.64-7.62(m，2H)，7.50-7.46(m，1H)，7.39(t，J＝7.2Hz，2H)，7.20-7.14(m，3H)，7.08(d，J＝7Hz，3H)，6.87(d，J＝8.44Hz，1H)，6.22-6.19(m，1H)，4.92-4.53(m，3H)，4.07-3.88(m，1H)，3.60-3.42(m，1H)，3.26-3.11(m，3H)，2.90-2.62(m，3H)，2.46-2.25(m，4H)，2.14-2.12(m，1H)，1.96(t，J＝14Hz，1H)，1.63-1.22(m，20H)；LC-MS：以C46H51N9O6计算，[M+H]+，826.53.
实施例7：4-((12-(R)-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-12-羰基十二基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-14).
Figure BDA0003703453490000804
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.43-8.35(m，1H)，7.64-7.62(m，2H)，7.48(t，J＝7.72Hz，1H)，7.39(t，J＝7.6Hz，2H)，7.20-7.14(m，3H)，7.08(d，J＝7.44Hz，3H)，6.88(d，J＝8.52Hz，1H)，6.22-6.21(m，1H)，4.95-4.57(m，3H)，4.04-3.87(m，1H)，3.65-3.53(m，1H)，3.30-3.10(m，3H)，2.90-2.62(m，3H)，2.36-2.22(m，4H)，2.14-2.12(m，1H)，2.00-1.96(m，1H)，1.63-1.25(m，22H)；LC-MS：以C46H51N9O6计算，[M+H]+，840.40.
实施例8：5-((6-((R)-3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-6-羰基己基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-3).
Figure BDA0003703453490000811
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.45-8.37(m，1H)，7.64-7.60(m，2H)，7.51-7.35(m，3H)，7.19-7.11(m，3H)，7.07(d，J＝8.24Hz，2H)，6.85-6.65(m，1H)，6.55-6.53(m，1H)，5.84(s，1H)，5.43-5.09(m，1H)，4.99-4.90(m，1H)，4.86-4.79(m，1H)，4.76-4.55(m，1H)，4.04-3.84(m，1H)，3.58-3.47(m，1H)，3.39-3.04(m，3H)，2.88-2.74(m，3H)，2.48-2.23(m，4H)，2.11-2.10(m，1H)，1.98-1.95(d，J＝13.6Hz，1H)，1.67-1.36(m，10H)；LC-MS：以C41H41N9O6，[M+H]+，756.10.
实施例9∶5-((7-((R)-3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-7-羰基庚基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-5).
Figure BDA0003703453490000812
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.46-8.36(m，1H)，7.63(d，J＝7.84Hz，2H)，7.54-7.37(m，3H)，7.19-7.13(m，3H)，7.07(d，J＝8.04Hz，2H)，6.90-6.61(m，2H)，5.73(s，1H)，5.13-4.56(m，4H)，4.05-3.87(m，1H)，3.58-3.50(m，1H)，3.34-3.11(m，3H)，2.89-2.73(m，3H)，2.45-2.38(m，2H)，2.30-2.25(m，2H)，2.15-2.09(m，1H)，1.99-1.95(m，1H)，1.71-1.40(m，12H)；LC-MS：以C42H43N9O6计算，[M+H]+，769.33.
实施例10：5-((8-(R)-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-8-羰基辛基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-7).
Figure BDA0003703453490000813
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.42-8.36(m，1H)，7.63(d，J＝8.36Hz，2H)，7.56-7.47(m，1H)，7.40-7.37(t，J＝7.4Hz，3H)，7.19-7.13(m，3H)，7.07(d，J＝7.48Hz，2H)，6.90-6.62(m，2H)，5.77(s，1H)，4.95-4.58(m，4H)，4.07-3.87(m，1H)，3.59-3.50(m，1H)，3.33-3.11(m，3H)，2.89-2.68(m，3H)，2.45-2.37(m，2H)，2.26-2.24(m，2H)，2.14-2.09(m，1H)，1.97-1.95(m，1H)，1.65-1.36(m，14H)；LC-MS：以C43H45N9O6计算，[M+H]+，784.35.
实施例11：5-((9-(R)-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-9-羰基壬基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-9).
Figure BDA0003703453490000814
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.43-8.36(m，1H)，7.63(d，J＝8.32Hz，2H)，7.54-7.37(m，3H)，7.19-7.14(m，3H)，7.08(d，J＝7.76Hz，2H)，6.89-6.56(m，2H)，5.77(s，1H)，5.24-4.56(m，4H)，4.03(m，1H)，3.32-3.05(m，3H)，2.90-2.70(m，3H)，2.47-2.37(m，2H)，2.25(m，2H)，2.14-2.09(m，1H)，1.99-1.95(m，1H)，1.84-1.24(m，16H)；13C-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：LC-MS：以C44H47N9O6计算，[M+H]+，799.44.
实施例12：5-((9-((R)-3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-9-羰基壬基)氨基)-2-(1-乙基-2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-9-neg).
Figure BDA0003703453490000821
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.36-8.33(d，J＝10.68Hz，1H)，7.63(dd，J1＝8.6Hz，J2＝2.24Hz，2H)，7.59-7.56(m，1H)，7.38(t，J＝7.2Hz，2H)，7.19-7.13(m，3H)，7.08(d，J＝7.96Hz，2H)，6.94(d，J＝8Hz，1H)，6.72(dd，J1＝8.28Hz，J2＝1.84Hz，1H)，5.65(s，1H)，4.91-4.62(m，4H)，4.07-3.80(m，3H)，3.68-3.62(m，1H)，3.32-3.10(m，3H)，2.98-2.70(m，3H)，2.44-2.21(m，4H)，2.09-2.1.94(m，2H)，1.65-1.24(m，16H)，1.14(t，J＝7.00Hz，3H)；LC-MS：以C46H51N9O6计算，[M+H]+，826.34.
实施例13：5-((10-(R)-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-10-羰基癸基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-11).
Figure BDA0003703453490000822
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.42-8.35(m，1H)，7.63(d，J＝7.92Hz，2H)，7.58-7.52(m，1H)，7.39(t，J＝7.52Hz，2H)，7.19-7.14(m，3H)，7.08(d，J＝7.96Hz，2H)，6.92-6.66(m，2H)，5.96(s，1H)，4.94-4.60(m，4H)，4.04-3.84(m，1H)，3.71-3.51(m，1H)，3.31-3.14(m，3H)，2.90-2.67(m，3H)，2.37-2.21(m，4H)，2.15-2.11(m，1H)，1.99-1.93(m，1H)，1.63-1.24(m，18H)；LC-MS：以C45H49N9O6计算，[M+H]+，812.38.
实施例14：5-((11-(R)-(3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-11-羰基十一烷基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-13).
Figure BDA0003703453490000823
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.40-8.35(m，1H)，7.63(d，J＝8Hz，2H)，7.57(d，J＝8.36Hz，1H)，7.38(t，J＝7.52Hz，2H)，7.19-7.13(m，3H)，7.08(d，J＝8Hz，2H)，6.92(s，1H)，6.71(d，J＝8.10Hz，1H)，5.88(s，1H)，4.94-4.61(m，4H)，4.08-3.88(m，1H)，3.70-3.48(m，1H)，3.31-3.10(m，3H)，2.95-2.67(m，3H)，2.41-2.20(m，4H)，2.13-2.11(m，1H)，1.99-1.93(m，1H)，1.85-1.25(m，20H)；LC-MS：以C46H51N9O6计算，[M+H]+，826.40.
实施例15：5-((12-((R)-3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-12-羰基十二基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-15).
Figure BDA0003703453490000824
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：8.43-8.36(m，1H)，7.63(d，J＝7.28Hz，2H)，7.61-7.55(m，1H)，7.39(t，J＝7.44Hz，2H)，7.19-7.14(m，3H)，7.08(d，J＝7.92Hz，2H)，6.93(s，1H)，6.72-6.70(d，J＝8.20Hz，2H)，6.02(s，1H)，4.94-4.62(m，4H)，4.06-3.88(m，1H)，3.63-3.48(m，1H)，3.28-3.09(m，3H)，2.89-2.63(m，3H)，2.42-2.21(m，4H)，2.14-2.10(m，1H)，1.99-1.93(m，1H)，1.86-1.21(m，22H)；LC-MS：以C47H53N9O6计算，[M+H]+，840.21.
实施例16：5-((2-(2-(3-((R)-3-(4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)-3-羰基丙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(GBD-16).
Figure BDA0003703453490000831
将依鲁替尼母核(6.3mgl)、化合物3a’-3g’(7mg)、HOBt(3.5mg)、EDCI(4.9mg，1.5equiv.)、Et3N(4.8μl，2.0equiv.)和DMAP(1mg)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌过夜。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝40∶1到DCM∶MeOH＝15∶1)进一步纯化得到化合物GBD-16，产率61％。
1H-NMR(400MHz，CDCl3，ppm)：1H-NMR(400MHz，CDCl3/CD3OD＝4∶1，ppm)：8.28(d，J＝11.6Hz，1H)，7.65-7.63(m，2H)，7.55(t，J＝8.1Hz，1H)，7.42-7.38(m，1H)，7.21-7.08(m，6H)，6.98(s，1H)，6.81(t，J＝9.8Hz，1H)，5.39-5.31(m，2H)，4.91-4.51(m，3H)，3.82-3.65(m，10H)，2.85-2.73(m，5H)，2.23-1.99(m，6H)；LR-MS：以C42H43N9O8计算，[M+H]+，802.33；found，802.39.
实施例17：化合物1的合成
Figure BDA0003703453490000832
将中间体15(0.0339mmol)、中间体43(0.0407mmol，1.2equiv.)、DIPEA(22mg，0.1695mmol，5equiv.)、HATU(20mg，0.0508mmol，1.5equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌3小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝20∶1)进一步纯化得到化合物1，产率19％。
实施例18：化合物3的合成
Figure BDA0003703453490000833
将中间体19(0.03mmol)、中间体43(0.03mmol，1.0equiv.)、DIPEA(20mg，0.15mmol，5equiv.)、HATU(17mg，0.045mmol，1.5equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌3小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经薄层色谱硅胶制备板(DCM∶MeOH＝30∶1)进一步纯化得到化合物ZX-3，产率22％。
实施例19：化合物5的合成
Figure BDA0003703453490000834
将中间体9(0.0344mmol)、中间体44(0.0344mmol，1.0equiv.)、DIPEA(18mg，0.14mmol，4equiv.)、HATU(20mg，0.0516mmol，1.5equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌3小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经薄层色谱硅胶制备板(DCM∶MeOH＝30∶1)进一步纯化得到化合物5，产率18％。
实施例20：化合物111的合成
Figure BDA0003703453490000841
将伊布替尼中间体(参考CN113929686[0030]段制备方法合成)(10mg，0.026mmol，1equiv.)、中间体3(13.1mg，0.027mmol，1.05equiv.)、DIPEA(16.5mg，0.13mmol，5equiv.)、HATU(13.1mg，0.034mmol，1.3equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌一段时间。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经薄层色谱硅胶制备板(DCM∶MeOH＝20∶1)进一步纯化得到8.7mg化合物111，产率39.2％。
实施例21：化合物2、4、6-110，112-215的合成
化合物2、4、6-215的合成：采用化合物1、3、5的类似合成步骤，将相应的羧酸中间体(1equiv.)，相应的仲脂肪胺中间体(1.05equiv.)，DIPEA(5equiv.)，HATU(1.3equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝20∶1)进一步纯化得到化合物2、4、6-215。化合物1-215的结构式，以及MS和1H NMR表征数据见表1。
化合物216-244的合成
化合物216的合成：将中间体7(1equiv.)，中间体27(1.05equiv.)，DIPEA(5equiv.)，HATU(1.3equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝20∶1)进一步纯化得到以上化合物216。
实施例217-244的合成：采用制备实施例216的类似合成步骤，用相应的羧酸中间体和相应的伯脂肪胺中间体通过缩合反应得到。化合物216-244的结构式，以及MS和1H NMR表征数据见表1。
化合物245-247的合成
化合物245的合成：将中间体19(1equiv.)，中间体30(1.05equiv.)，DIPEA(5equiv.)，HATU(1.3equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝20∶1)进一步纯化得到以上化合物245。
246-247的合成：采用制备实施例245的类似合成步骤，用相应的羧酸中间体和相应的嘌呤中间体通过缩合反应得到。化合物245-247的结构式，以及MS和1H NMR表征数据见表1。
化合物248-259的合成
化合物248的合成：将中间体19(1equiv.)，中间体36(1.05equiv.)，DIPEA(5equiv.)，HATU(1.3equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝20∶1)进一步纯化得到以上化合物248。
化合物249-259的合成：采用制备实施例248的类似合成步骤，用相应的羧酸中间体和相应的芳胺中间体通过缩合反应得到。化合物248-259的结构式，以及MS和1H NMR表征数据见表1。
化合物260的合成
0℃下将三光气(4equiv.)加入到中间体43(1equiv.)的四氢呋喃溶液中，然后加入三乙胺(7equiv.)，搅拌2.5小时。减压浓缩，残余物加入二氯甲烷，降温至0℃再加入中间体10(4equiv.)和三乙胺(7equiv.)，反应混合物在室温条件下搅拌1.5小时。减压浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝20∶1)进一步纯化得到以上化合物260。化合物260的结构式，以及MS和1H NMR表征数据见表1。
表1
Figure BDA0003703453490000851
Figure BDA0003703453490000861
Figure BDA0003703453490000871
Figure BDA0003703453490000881
Figure BDA0003703453490000891
Figure BDA0003703453490000901
Figure BDA0003703453490000911
Figure BDA0003703453490000921
Figure BDA0003703453490000931
Figure BDA0003703453490000941
Figure BDA0003703453490000951
Figure BDA0003703453490000961
Figure BDA0003703453490000971
Figure BDA0003703453490000981
Figure BDA0003703453490000991
Figure BDA0003703453490001001
Figure BDA0003703453490001011
Figure BDA0003703453490001021
Figure BDA0003703453490001031
Figure BDA0003703453490001041
Figure BDA0003703453490001051
Figure BDA0003703453490001061
Figure BDA0003703453490001071
Figure BDA0003703453490001081
Figure BDA0003703453490001091
Figure BDA0003703453490001101
Figure BDA0003703453490001111
Figure BDA0003703453490001121
Figure BDA0003703453490001131
Figure BDA0003703453490001141
Figure BDA0003703453490001151
Figure BDA0003703453490001161
Figure BDA0003703453490001171
Figure BDA0003703453490001181
Figure BDA0003703453490001191
Figure BDA0003703453490001201
Figure BDA0003703453490001211
Figure BDA0003703453490001221
Figure BDA0003703453490001231
Figure BDA0003703453490001241
Figure BDA0003703453490001251
Figure BDA0003703453490001261
Figure BDA0003703453490001271
“——”表示未测试。
效果例1：对BTK、GSPT1靶点的降解(Westernblot法)
将THP-1(人单核细胞白血病细胞)、HL-60(人早幼粒急性白血病细胞)、MV4-11(人髓性单核细胞白血病细胞)、WSU-NHL(人B细胞淋巴瘤细胞)、U2932(人弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞)、DOHH2(人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞)细胞分别悬浮于1.5mL培养基中，置于12孔细胞培养板(5x105～1x106个/孔)中，用不同浓度的本申请化合物、阳性对照CC90009、泊马度胺(pomalidomide，Poma)或空白对照(DMSO)处理。孵育指定时间后，收集细胞，离心去除上层培养基，然后用PBS洗两遍。细胞样品于冰上经RIPA裂解20分钟，加入2x蛋白上样缓冲液(50mM Tris-HCl(pH 6.8)，2％(W/V)十二烷基硫酸钠，0.1％(W/V)溴酚蓝，10％(V/V)丙三醇，10％(V/V)β-巯基乙醇的超纯水溶液)，于100℃金属浴加热20分钟后冷却即得蛋白样品。然后取10μL蛋白样品，用10％SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白样品。电泳结束后，在4℃下，湿转至PVDF膜上(100V电压，1.5h)。转膜结束后，5％牛奶封闭一小时。封闭结束后，用PBST洗三次，每次5分钟，然后与一抗4℃孵育过夜。孵育完毕后，回收抗体，再用PBST洗三次，每次5分钟。之后室温孵育相应的兔/小鼠二抗1小时。回收二抗，PBST洗膜三次，每次10分钟。利用化学发光液在天能显影仪器显影。显影结果用Image J进行灰度分析，通过归一化得到降解比例，其中，本申请部分化合物50nM浓度下的降解比例见表2，部分化合物对DOHH2和THP-1中BTK和GSPT1的降解作用见表3。对于IC50值，其中“+++++”表示IC50＜50nM；“++++”表示IC50介于50nM-200nM之间；“+++”表示IC50介于200-1000nM之间；“++”表示IC50介于1-5μM之间；“+”表示IC50介于5-10μM之间；“-”表示IC50＞10μM。
化合物CBD-9对不同肿瘤细胞中BTK、GSPT1靶点的降解结果见图1A。化合物111、化合物3对DOHH2细胞中BTK、GSPT1靶点的降解显影见图1B。化合物GBD-9与CC90009、Poma对DOHH-2细胞中BTK、GSPT1靶点的降解结果对比见图1C。
表2本发明化合物对于DOHH-2细胞中BTK和GSPT1的降解作用
Figure BDA0003703453490001272
Figure BDA0003703453490001281
表3本发明化合物对于BTK和GSPT1的降解作用
Figure BDA0003703453490001282
效果例2：本发明化合物对于肿瘤细胞的增殖抑制活性
本发明中的化合物对多种DLBLC和AML细胞的增殖抑制效果优于靶向BTK的抑制剂和降解剂(表2、图2)。
在细胞增殖抑制实验中，将DOHH2、HL-60、A549、THP-1、Z138细胞悬浮于50μL培养液中，置于96孔细胞培养板中(5000个细胞/孔)。将本发明化合物的DMSO储液用50μL培养基稀释后加入96孔细胞培养板中培养。细胞在37℃、5％CO2培养箱中培养。72h后，向96孔细胞培养板每孔加入10μL CCK-8试剂。孵育1-4小时后，使用多功能酶标仪在450nm波长下读取吸光值。用DMSO处理后的细胞为100％的存活率，用GraphPad Prism 8软件，通过非线性回归分析计算IC50。细胞存活率计算公式为：
存活率＝[(剂量-空白)/(对照-空白)]×100％。对于IC50值，其中“+++++”表示IC50＜50nM；“++++”表示IC50介于50nM-200nM之间；“+++”表示IC50介于200-1000nM之间；“++”表示IC50介于1-5μM之间；“+”表示IC50介于5-10μM之间；“-”表示IC50＞10μM。
表4对于DOHH2、HL-60、A549肿瘤细胞的增殖抑制作用
Figure BDA0003703453490001291
“——”表示未测试。
表5对DOHH2细胞的增殖抑制作用
Figure BDA0003703453490001292
Figure BDA0003703453490001301
表6对THP-1细胞的增殖抑制作用
Figure BDA0003703453490001302
Figure BDA0003703453490001311
表7对HL-60细胞的增殖抑制作用
Figure BDA0003703453490001312
表8对Z138细胞的增殖抑制作用
Figure BDA0003703453490001313
Figure BDA0003703453490001321
效果例3：本发明化合物抑制肿瘤细胞的细胞周期并诱导细胞凋亡的作用
将DOHH2细胞悬浮于2.5mL培养基中，置于12孔细胞培养板(5x105～1x106个/孔)中，用不同浓度的本申请化合物以及阳性对照L18I、依鲁替尼(Ibrutinib)处理。孵育24小时后，收集细胞，离心去除上层培养基，然后用预冷的PBS洗两遍，然后加入1ml 4℃预冷的70％乙醇，用移液枪轻轻吹打混匀，在-20℃下固定24小时。测量前将固定的细胞取出，500g离心10min，弃上清，用PBS洗涤两遍后，用0.5mL PBS混悬，加入1μl RNaseA，37℃孵育15min。每个样品加入10μL PI(1mg/ml)，避光染色30分钟，然后转移至流式管中用BDCalibur流式细胞仪(BD，FACSCalibur)分析标记细胞。
细胞凋亡：利用上述收集的蛋白样品，经Western Blot验证相关凋亡蛋白的情况(图3)。

Claims (10)

1.式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物：
X-L-Y (I)
其中：
X为BTK结合基团；
L为连接基团；
Y为泛素连接酶结合基团。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，X基团具有如下式(IIa)、(IIb)、(III)、(IVa)、(V)、(VII)、(VIII)、(IX)、(X)或(XI)所示的结构：
Figure FDA0003703453480000011
其中，
A环选自5-6元芳香环或9-12元双环杂环，所述5-6元芳香环任选地被一个或多个R取代，所述9-12元双环杂环任选地被一个或多个＝O或一个或多个R取代；
优选地，L部分与X基团中的R1、R14、R15或哌啶上的N原子相连；
优选地，A环选自苯环、含有1-2个氮原子的5-6元杂芳环或含有1-4个氮原子的9-10元双环杂环，所述5-6元杂芳环任选地被一个或多个R取代，所述9-10元双环杂环任选地被一个或多个＝O或一个或多个R取代；
优选地，A环选自吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、
Figure FDA0003703453480000021
Figure FDA0003703453480000022
所述吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪任选地被一个或多个R取代，所述
Figure FDA0003703453480000023
Figure FDA0003703453480000024
任选地被一个或多个＝O或一个或多个R取代；
优选地，A环选自吡啶、吡嗪、嘧啶、
Figure FDA0003703453480000025
所述吡啶、吡嗪或嘧啶任选地被一个或多个R取代，所述
Figure FDA0003703453480000026
任选地被一个或多个＝O或一个或多个R取代；
优选地，A环选自吡啶、嘧啶、
Figure FDA0003703453480000027
所述吡啶、嘧啶任选地被一个或多个R取代，所述
Figure FDA0003703453480000028
任选地被一个或多个＝O或一个或多个R取代；B环选自苯环、5-6元含氮杂芳环或4-6元含氮饱和环，所述B环任选地被一个或多个R8取代；
优选地，B环选自苯环、吡咯、吡唑、咪唑、噁唑、噻唑、吡啶、嘧啶、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶或哌嗪，所述B环任选地被一个或多个R8取代；
优选地，B环选自苯环、噻唑、
Figure FDA0003703453480000029
所述B环任选地被一个R8取代；
优选地，B环选自苯环、噻唑-5-基或
Figure FDA00037034534800000210
所述B环任选地被R8取代；
优选地，B环选自苯环或噻唑-5-基，所述B环任选地被R8取代；C环选自5-6元芳香环，所述C环任选地被一个或多个R11取代；
优选地，C环选自苯环、吡咯、吡啶或嘧啶，所述C环任选地被一个或多个R11取代；
优选地，C环选自苯环，所述C环任选地被一个R11取代；
E选自C或N原子；
优选地，E为N原子；
R选自-NH2或-C(O)NH2；
R1选自单键、-NH2、5-6元含氮饱和环、-NH-(5-6元含氮饱和环)、-NH-CH2-(5-6元含氮饱和环)、-C(O)-NH-(5-6元含氮饱和环)或-(5-6元含氮饱和环)-NH2；
优选地，R1选自单键、-NH2、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、-NH-(哌啶)、-NH-(哌嗪)、-NH-(吡咯烷)、-NH-CH2-(哌啶)、-NH-CH2-(哌嗪)、-NH-CH2-(吡咯烷)、-C(O)-NH-(哌啶)、-C(O)-NH-(哌嗪)、-C(O)-NH-(吡咯烷)、-(哌啶)-NH2、-(哌嗪)-NH2或-(吡咯烷)-NH2；
优选地，R1选自单键、-NH2、哌啶-3-基、哌啶-4-基、哌嗪-3-基、哌嗪-4-基、吡咯烷-2-基、
Figure FDA0003703453480000031
Figure FDA0003703453480000032
优选地，R1选自单键、-NH2、哌啶-3-基、哌啶-4-基、哌嗪-4-基、
Figure FDA0003703453480000033
Figure FDA0003703453480000034
R2、R3、R4、R5、R6、R7、R9、R10、R16、R17、R18分别独立地选自H、D、C1-C3烷基或卤素；
优选地，R2、R3、R9、R10、R16、R17选自H、D、F、Cl、Br或I；
优选地，R4、R5、R6、R7选自H、D或甲基；
优选地，R18选自异丙基；
R8选自C1-C6烷基或C1-C6烷氧基；
优选地，R8选自D、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基或叔丁氧基；
优选地，R8选自叔丁基或异丙氧基；
优选地，R8选自叔丁基；
R11选自C1-C6烷基，所述C1-C6烷基任选地被卤素取代；
优选地，R11选自D、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、三氟甲基、二氟甲基或氟甲基；
优选地，R11选自三氟甲基；
R14、R15分别独立地选自H、含有仲胺或叔胺的基团；
优选地，R14、R15分别独立地选自H、-(C1-C3烷基)NH2、哌啶-4-基、哌啶-3-基或吡咯烷-2-基；
优选地，R14、R15分别独立地选自H、-(CH2)2-NH2或哌啶-4-基；
优选地，R14、R15为H；
R19选自任选地被一个或多个卤素取代的5-6元芳香环；
优选地，R19选自任选地被一个或多个卤素取代的苯基；
优选地，R19选自任选地被一个或多个F、Cl、Br或I取代的苯基；
优选地，R19选自任选地被一个或多个F或Cl取代的苯基；
优选地，R19选自任选地被一个F和一个Cl取代的苯基；
n选自0、1、2、3；
优选地，n选自1、2。
3.根据权利要求1或2的化合物，所述X基团选自：
Figure FDA0003703453480000041
Figure FDA0003703453480000051
优选地，X基团选自：
Figure FDA0003703453480000052
Figure FDA0003703453480000061
4.根据权利要求1-3任一项的化合物，其中，Y基团如下式(VIII)所示：
Figure FDA0003703453480000062
其中，
R20选自H或C＝O；
Y1、Y2分别独立地选自H、卤素或-L1-Q1-L2，并且，Y1、Y2中有且只有一个-L1-Q1-L2；
Q1选自单键、C4-C6饱和环或C4-C6芳香环或立方烷的二价连接基，任选地，Q1中的一个或多个H可以被卤素取代：
优选地，Y1或Y2与L部分相连；
优选地，Q1选自单键、环丁烷、环戊烷、环己烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、哌啶、苯环或吡啶的二价连接基，任选地，Q1中的一个或多个H可以被卤素取代；
优选地，Q1选自单键、
Figure FDA0003703453480000063
Figure FDA0003703453480000064
任选地，Q1中的一个或多个H可以被卤素取代：
L1为单键、-(CH2)m1-NH-(CH2)m2-、-(CH2)m1-O-(CH2)m2-、-(CH2)m1-C≡C-(CH2)m2-、-(CH2)m1-NH-C(O)-NH-(CH2)m2-，其中m1、m2、m3分别独立地选自0、1、2、3，优选地，m1、m2、m3分别独立地选自0、1；
L2为单键、-(CH2)q1-COO-、-(NH)q2-C(O)q3-Q2-或-NH-；
Q2选自单键或C4-C6饱和环的二价连接基；
优选地，Q2选自单键、环丁烷、环戊烷、环己烷、氮杂环丁烷、吡咯烷或哌啶的二价连接基；
优选地，Q2选自单键、
Figure FDA0003703453480000065
q1选自0、1、2或3，q2选自0或1，q3选自0或1；
优选地，q1选自0、1；
优选地，Y选自：
Figure FDA0003703453480000071
Figure FDA0003703453480000081
优选地，Y基团选自：
Figure FDA0003703453480000082
Figure FDA0003703453480000091
优选地，L基团为单键、-C(O)-(CH2)p1-、-C(O)-(CH2CH2O)p2-(CH2)p3-、-L3-Q3-L4-，L3与X部分相连、L4与Y部分相连，p1选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12，优选地，p1选自5、6、7、8；p2选自0、1、2、3、4、5、6，优选地，p2选自2、3；p3选自0、1、2、3、4、5，优选地，p3选自0、1、2；
L3为单键、-(CH2)p4-或-C(O)-，其中p4选自1、2，优选地，p4选自1；
L4为单键、-(CH2)p5-C(O)-、-NH-C(O)-或-NH-，其中p5选自0、1、2，优选地，p5选自0、1；
Q3选自单键、5-6元饱和环或5-6元芳香环的二价连接基；
优选地，Q3选自单键或
Figure FDA0003703453480000092
优选地，L基团选自单键；
优选地，L基团选自：
Figure FDA0003703453480000101
其中，位置①与X基团或Y基团相连；位置②与X基团或Y基团相连；
优选地，位置①与Y基团相连，位置②与X基团相连；
优选地，式(I)化合物选自
Figure FDA0003703453480000102
Figure FDA0003703453480000103
或表1化合物。
5.一种中间体化合物，其具有式(Ia)的结构，
-L-Y (Ia)；
其中，L、Y的定义如权利要求1-4任一项所述。
6.根据权利要求1-4任一项的化合物，其中，所述化合物能够降解BTK蛋白和/或GsPT1蛋白，优选地，所述化合物能够同时降解BTK和GSPT1蛋白。
7.药物组合物，其特征在于，所述组合物包含根据权利要求1-4任一项的化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物；优选地，所述药物组合物包括权利要求1-4任一项的化合物以及药学上可接受的辅料。
8.权利要求1-4任一项的化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物，权利要求5的中间体化合物或权利要求7的药物组合物在制备治疗患者由BTK蛋白和/或GSPT1蛋白累积引起的病症的药物中的应用；
优选地，所述由BTK蛋白累积引起的病症选自非霍奇金淋巴瘤、B细胞性慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤和/或急性淋巴细胞白血病，优选地，所述非霍奇金淋巴瘤选自弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤和黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的一种或多种；
优选地，所述由GSPT1蛋白累积引起的病症选自非霍奇金淋巴瘤、白血病和/或实体瘤；优选地，所述非霍奇金淋巴瘤选自弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和T细胞淋巴瘤的一种或多种；优选地，所述白血病包括慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病和急性髓性白血病中的一种或多种；优选地，所述实体瘤包括肺癌、肝癌、乳腺癌、脑胶质瘤和结直肠癌中的一种或多种。
9.权利要求1-4任一项的化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物，权利要求5的中间体化合物或权利要求7的药物组合物在制备BTK和/或GSPT1降解剂中的应用；优选地，所述降解剂为BTK和GSPT1同步降解剂。
10.一种同时降解生物样品中的BTK和/或GSPT1蛋白的方法，其包含使所述生物样品与权利要求1-4任一项的化合物、其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或N-氧化物，或权利要求7的药物组合物接触。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023072270A1 (zh) * 2021-10-29 2023-05-04 百极弘烨(南通)医药科技有限公司 Protac化合物、含其的药物组合物及其制备方法和应用
WO2023088385A1 (zh) * 2021-11-17 2023-05-25 浙江同源康医药股份有限公司 用于egfr蛋白降解的化合物及其用途
WO2024037527A1 (en) * 2022-08-16 2024-02-22 Beijing Neox Biotech Limited Btk degrading compounds

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109422752A (zh) * 2017-09-03 2019-03-05 上海美志医药科技有限公司 一类具有抑制并降解布鲁顿酪氨酸蛋白激酶Btk活性的化合物
WO2019127008A1 (zh) * 2017-12-26 2019-07-04 清华大学 一种靶向降解btk的化合物及其应用
CN110724143A (zh) * 2019-10-09 2020-01-24 清华大学 一种靶向btk蛋白降解化合物的制备及其在治疗自身免疫系统疾病与肿瘤中的应用
CN110845500A (zh) * 2019-10-09 2020-02-28 清华大学 靶向btk降解化合物在治疗自身免疫系统疾病中的应用
WO2020252397A1 (en) * 2019-06-12 2020-12-17 Baylor College Of Medicine Small molecule proteolysis-targeting chimeras and methods of use thereof
US20210030832A1 (en) * 2018-01-29 2021-02-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Degradation of bruton's tyrosine kinase (btk) by conjugation of btk inhibitors with e3 ligase ligand and methods of use

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109422752A (zh) * 2017-09-03 2019-03-05 上海美志医药科技有限公司 一类具有抑制并降解布鲁顿酪氨酸蛋白激酶Btk活性的化合物
WO2019127008A1 (zh) * 2017-12-26 2019-07-04 清华大学 一种靶向降解btk的化合物及其应用
US20210030832A1 (en) * 2018-01-29 2021-02-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Degradation of bruton's tyrosine kinase (btk) by conjugation of btk inhibitors with e3 ligase ligand and methods of use
WO2020252397A1 (en) * 2019-06-12 2020-12-17 Baylor College Of Medicine Small molecule proteolysis-targeting chimeras and methods of use thereof
CN110724143A (zh) * 2019-10-09 2020-01-24 清华大学 一种靶向btk蛋白降解化合物的制备及其在治疗自身免疫系统疾病与肿瘤中的应用
CN110845500A (zh) * 2019-10-09 2020-02-28 清华大学 靶向btk降解化合物在治疗自身免疫系统疾病中的应用
WO2021068380A1 (zh) * 2019-10-09 2021-04-15 清华大学 一种靶向btk蛋白降解化合物的制备及其在治疗自身免疫系统疾病与肿瘤中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALEXANDRU D. BUHIMSCHI ET AL.: "Targeting the C481S Ibrutinib-Resistance Mutation in Bruton’s Tyrosine Kinase Using PROTAC-Mediated Degradation", 《BIOCHEMISTRY》, vol. 57, no. 26, pages 3564 - 3575, XP055580937, DOI: 10.1021/acs.biochem.8b00391 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023072270A1 (zh) * 2021-10-29 2023-05-04 百极弘烨(南通)医药科技有限公司 Protac化合物、含其的药物组合物及其制备方法和应用
WO2023088385A1 (zh) * 2021-11-17 2023-05-25 浙江同源康医药股份有限公司 用于egfr蛋白降解的化合物及其用途
WO2024037527A1 (en) * 2022-08-16 2024-02-22 Beijing Neox Biotech Limited Btk degrading compounds

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