CN115297890A - 用于对患癌的对象处置癌的抗meflin抗体和含有该抗体的药物组合物 - Google Patents

用于对患癌的对象处置癌的抗meflin抗体和含有该抗体的药物组合物 Download PDF

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Abstract

本发明提供用于对患癌的对象处置癌的抗MEFLIN抗体和含有该抗体的药物组合物。根据本发明，提供例如含有与MEFLIN结合的抗体与细胞毒性剂的抗体‑药物偶联物(ADC)的、用于处置癌的药物组合物。

Description

用于对患癌的对象处置癌的抗MEFLIN抗体和含有该抗体的药 物组合物
技术领域
本发明涉及对患癌的对象处置癌的抗MEFLIN抗体和含有该抗体的药物组合物。
背景技术
MEFLIN为含有富含亮氨酸重复序列(LRR)和免疫球蛋白(Ig)样结构域的膜蛋白，由与脑部相比在视网膜中优势表达的从人基因文库得到的ISLR(Immunoglobulinsuperfamily containing leucine-rich repeat，含免疫球蛋白超家族的富含亮氨酸重复序列)基因编码(非专利文献1、2)。也以与基因名相同的ISLR这一名称而为人所知(非专利文献1)。MEFLIN通过GPI(糖基磷脂酰肌醇)锚结合、存在于细胞膜表面，但也有报道指出在细胞膜附近被切断并分泌到细胞外(非专利文献2)。
MEFLIN为在间充质干细胞中特异性表达的蛋白质(非专利文献2)。作为间充质干细胞的标志物，已知有CD105、CD73、CD90、CD146、CD271等多种分子，据报道MEFLIN是这些中对间充质干细胞最特异性的标志物分子(非专利文献2、专利文献1)。
表达MEFLIN的间充质干细胞少量存在于所有器官的血管的周围或结缔组织中，具有分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞、骨骼肌细胞、肌成纤维细胞、神经细胞的能力(非专利文献2)。还有报道指出，间充质干细胞是与周细胞(血管周皮细胞)、血管周围的成纤维细胞大致相同的细胞(非专利文献3)。
已知癌中来自间充质干细胞的成纤维细胞在癌细胞周围增生，被称为癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast；或CAF)(非专利文献4)。已知癌相关成纤维细胞在几乎所有癌种的组织中被观察到，特别是在胰腺癌、胆管癌、乳腺癌、消化道低分化癌等难治性癌中显示出显著的增生(非专利文献4、5)。MEFLIN在癌相关成纤维细胞中为阳性，这可通过检测来自ISLR基因的mRNA的原位杂交法或使用抗体的免疫组织染色来调查(非专利文献5)。原位杂交法和免疫组织染色中，使用来自癌患者的活检材料或手术材料。已知在癌组织中MEFLIN在癌相关成纤维细胞中特异性表达，在癌细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞、血细胞和神经细胞中不表达(非专利文献5)。
据报道，MEFLIN阳性的癌相关成纤维细胞的多寡与癌患者的预后和对治疗的奏效率相关(非专利文献5、专利文献2)。即，MEFLIN阳性癌相关成纤维细胞占全部癌相关成纤维细胞的20％以上的胰腺癌患者组中，与低于20％的患者组相比，显示出良好的预后(非专利文献5)。另外，据报道MEFLIN阳性癌相关成纤维细胞低于全部癌相关成纤维细胞的20％的患者组中，由免疫检查点抑制剂产生的治疗效果(奏效率)低(专利文献2)。
已知MEFLIN阳性间充质干细胞或成纤维细胞是对于多种器官的的组织修复而言也重要的细胞。例如，在小鼠的心肌梗塞模型中，在心肌梗塞后的急性期可观察到MEFLIN阳性细胞的高度聚集(非专利文献6)。这些成纤维细胞中的MEFLIN的表达是心肌修复所必需的，ISLR基因缺损小鼠的情况下观察到心脏破裂(非专利文献6)。另外，还报道了MEFLIN阳性成纤维细胞对组织修复后的纤维化和组织硬化有抑制作用(非专利文献6)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：WO2017/22472
专利文献2：WO2019/159825
非专利文献
非专利文献1：Nagasawa,A.et al.,Genomics,44:273～279,1977
非专利文献2：Maeda K.,et al.,Sci.Rep.,6:22288,2016
非专利文献3：Crisan M.et al.,Cell Stem Cell.,3:301-313,2008
非专利文献4：Kobayashi H.et al.,Nat Rev Gastroenterol Hepatol.,16:282-295,2019
非专利文献5：Mizutani Y.et al.,Cancer Res.,79:5367-5381,2019
非专利文献6：Hara A.et al.,Circ.Res.,125:414-430,2019
非专利文献7：Schaum,N.et al.,Nature,562(7727),367-372,2018
发明内容
本发明提供用于对患癌的对象处置癌的抗MEFLIN抗体和含有该抗体的药物组合物。本发明中，癌可以为肉瘤和MEFLIN阴性癌。
本发明人发现，与MEFLIN蛋白结合的抗体与细胞毒性剂的抗体-药物偶联物对肉瘤发挥抗肿瘤效果。本发明人另外发现，MEFLIN阴性癌的间质中存在MEFLIN阳性细胞、以及与MEFLIN蛋白结合的抗体与细胞毒性剂的抗体-药物偶联物对该癌发挥抗肿瘤效果。本发明基于这些见解。
根据本发明，例如提供以下的发明。
[1]一种用于处置癌的药物组合物，其含有与MEFLIN结合的抗体与细胞毒性剂的抗体-药物偶联物(ADC)。
[2]根据上述[1]所述的药物组合物，其中，前述抗体具有内化活性。
[3]根据上述[1]或[2]所述的药物组合物，其中，ADC为抗体和药物通过接头连接而成的ADC，接头具有在细胞内裂解的切割位点。
[4]一种与MEFLIN结合的抗体，其选自由以下抗体组成的组：
(1A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有具有序列号1所记载的氨基酸序列的重链CDR1、具有序列号2所记载的氨基酸序列的重链CDR2和具有序列号3所记载的氨基酸序列的重链CDR3，所述轻链可变区含有具有序列号4所记载的氨基酸序列的轻链CDR1、具有序列号5所记载的氨基酸序列的轻链CDR2和具有序列号6所记载的氨基酸序列的轻链CDR3；
(1B)含有具有序列号7所记载的氨基酸序列的重链可变区和具有序列号8所记载的氨基酸序列的轻链可变区的抗体；
(1C)与上述(1B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(1D)与MEFLIN蛋白上与上述(1B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(2A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号9所记载的重链CDR1、序列号10所记载的重链CDR2和序列号11所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号12所记载的轻链CDR1、序列号13所记载的轻链CDR2和序列号14所记载的轻链CDR3；
(2B)具有序列号15所记载的重链可变区和序列号16所记载的轻链可变区的抗体；
(2C)与上述(2B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(2D)与MEFLIN蛋白上与上述(2B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(3A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号17所记载的重链CDR1、序列号18所记载的重链CDR2和序列号19所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号20所记载的轻链CDR1、序列号21所记载的轻链CDR2和序列号22所记载的轻链CDR3；
(3B)具有序列号23所记载的重链可变区和序列号24所记载的轻链可变区的抗体；
(3C)与上述(3B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(3D)与MEFLIN蛋白上与上述(3B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(4A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号25所记载的重链CDR1、序列号26所记载的重链CDR2和序列号27所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号28所记载的轻链CDR1、序列号29所记载的轻链CDR2和序列号30所记载的轻链CDR3；
(4B)具有序列号31所记载的重链可变区和序列号32所记载的轻链可变区的抗体；
(4C)与上述(4B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(4D)与MEFLIN蛋白上与上述(4B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(5A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号33所记载的重链CDR1、序列号34所记载的重链CDR2和序列号35所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号36所记载的轻链CDR1、序列号37所记载的轻链CDR2和序列号38所记载的轻链CDR3；
(5B)具有序列号39所记载的重链可变区和序列号40所记载的轻链可变区的抗体；
(5C)与上述(5B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(5D)与MEFLIN蛋白上与上述(5B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(6A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号41所记载的重链CDR1、序列号42所记载的重链CDR2和序列号43所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号44所记载的轻链CDR1、序列号45所记载的轻链CDR2和序列号46所记载的轻链CDR3；
(6B)具有序列号47所记载的重链可变区和序列号48所记载的轻链可变区的抗体；
(6C)与上述(6B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(6D)与MEFLIN蛋白上与上述(6B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(7A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号49所记载的重链CDR1、序列号50所记载的重链CDR2和序列号51所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号52所记载的轻链CDR1、序列号53所记载的轻链CDR2和序列号54所记载的轻链CDR3；
(7B)具有序列号55所记载的重链可变区和序列号56所记载的轻链可变区的抗体；
(7C)与上述(7B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(7D)与MEFLIN蛋白上与上述(7B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(8A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号57所记载的重链CDR1、序列号58所记载的重链CDR2和序列号59所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号60所记载的轻链CDR1、序列号61所记载的轻链CDR2和序列号62所记载的轻链CDR3；
(8B)具有序列号63所记载的重链可变区和序列号64所记载的轻链可变区的抗体；
(8C)与上述(8B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(8D)与MEFLIN蛋白上与上述(8B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(9A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号65所记载的重链CDR1、序列号66所记载的重链CDR2和序列号67所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号68所记载的轻链CDR1、序列号69所记载的轻链CDR2和序列号70所记载的轻链CDR3；
(9B)具有序列号71所记载的重链可变区和序列号72所记载的轻链可变区的抗体；
(9C)与上述(9B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(9D)与MEFLIN蛋白上与上述(9B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(10A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号73所记载的重链CDR1、序列号74所记载的重链CDR2和序列号75所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号76所记载的轻链CDR1、序列号77所记载的轻链CDR2和序列号78所记载的轻链CDR3；
(10B)具有序列号79所记载的重链可变区和序列号80所记载的轻链可变区的抗体；
(10C)与上述(10B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(10D)与MEFLIN蛋白上与上述(10B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(11A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号81所记载的重链CDR1、序列号82所记载的重链CDR2和序列号83所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号84所记载的轻链CDR1、序列号85所记载的轻链CDR2和序列号86所记载的轻链CDR3；
(11B)具有序列号87所记载的重链可变区和序列号88所记载的轻链可变区的抗体；
(11C)与上述(11B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(11D)与MEFLIN蛋白上与上述(11B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(12A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号89所记载的重链CDR1、序列号90所记载的重链CDR2和序列号91所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号92所记载的轻链CDR1、序列号93所记载的轻链CDR2和序列号94所记载的轻链CDR3；
(12B)具有序列号95所记载的重链可变区和序列号96所记载的轻链可变区的抗体；
(12C)与上述(12B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(12D)与MEFLIN蛋白上与上述(12B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(13A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号97所记载的重链CDR1、序列号98所记载的重链CDR2和序列号99所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号100所记载的轻链CDR1、序列号101所记载的轻链CDR2和序列号102所记载的轻链CDR3；
(13B)具有序列号103所记载的重链可变区和序列号104所记载的轻链可变区的抗体；
(13C)与上述(13B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(13D)与MEFLIN蛋白上与上述(13B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(14A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号105所记载的重链CDR1、序列号106所记载的重链CDR2和序列号107所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号108所记载的轻链CDR1、序列号109所记载的轻链CDR2和序列号110所记载的轻链CDR3；
(14B)具有序列号111所记载的重链可变区和序列号112所记载的轻链可变区的抗体；
(14C)与上述(14B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(14D)与MEFLIN蛋白上与上述(14B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(15A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号113所记载的重链CDR1、序列号114所记载的重链CDR2和序列号115所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号116所记载的轻链CDR1、序列号117所记载的轻链CDR2和序列号118所记载的轻链CDR3；
(15B)具有序列号119所记载的重链可变区和序列号120所记载的轻链可变区的抗体；
(15C)与上述(15B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(15D)与MEFLIN蛋白上与上述(15B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(16A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号121所记载的重链CDR1、序列号122所记载的重链CDR2和序列号123记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号124所记载的轻链CDR1、序列号125所记载的轻链CDR2和序列号126所记载的轻链CDR3；
(16B)具有序列号127所记载的重链可变区和序列号128所记载的轻链可变区的抗体；
(16C)与上述(16B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(16D)与MEFLIN蛋白上与上述(16B)的抗体重叠的表位结合的抗体；以及
(17A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号129所记载的重链CDR1、序列号130所记载的重链CDR2和序列号131记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号132所记载的轻链CDR1、序列号133所记载的轻链CDR2和序列号134所记载的轻链CDR3；
(17B)具有序列号135所记载的重链可变区和序列号136所记载的轻链可变区的抗体；
(17C)与上述(17B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(17D)与MEFLIN蛋白上与上述(17B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
[5]一种药物组合物，其含有上述[4]所述的抗体与细胞毒性剂的抗体-药物偶联物(ADC)。
[6]根据上述[5]所述的药物组合物，其用于处置癌。
[7]根据上述[1]～[3]和[6]中任一项所述的药物组合物，其中，癌为肉瘤。
[8]根据上述[7]所述的药物组合物，其中，癌为MEFLIN阳性肉瘤。
[9]根据上述[7]或[8]所述的药物组合物，其中，肉瘤为选自由黏液纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、恶性外周神经鞘瘤、尤文肉瘤、上皮样肉瘤、透明细胞肉瘤、滑膜肉瘤和骨肉瘤组成的组中的肉瘤。
[10]根据上述[1]～[3]和[6]中任一项所述的药物组合物，其中，癌为恶性上皮肿瘤。
[11]根据上述[10]所述的药物组合物，其中，癌为选自由乳腺癌、胰腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌、胆管癌、卵巢癌、膀胱癌和食道癌组成的组中的癌。
[12]根据上述[1]～[3]、[6]、[10]和[11]中任一项所述的药物组合物，其中，癌为MEFLIN阴性，该癌周围的间质含有MEFLIN阳性的细胞。
[13]根据上述[10]～[12]中任一项所述的药物组合物，其中，抗体不具有内化活性。
[14]根据上述[7]～[9]中任一项所述的药物组合物，其中，抗体具有内化活性。
[15]根据上述[13]所述的药物组合物，其中，ADC为抗体和药物通过接头连接而成的ADC，接头为裂解性接头。
[16]根据上述[15]所述的药物组合物，其中，接头为利用组织蛋白酶K裂解的裂解性接头。
[17]根据上述[16]所述的药物组合物，其中，接头含有缬氨酸-瓜氨酸二肽，在组织蛋白酶K存在下被切断。
[18]根据上述中任一项所述的药物组合物，其中，接头为非裂解性接头。
附图说明
图1为示出人MEFLIN蛋白与由各种克隆得到的单克隆抗体的结合性的蛋白质印迹的结果。图1中，示出克隆名和MEFLIN的片段的信息(用氨基酸编号表示片段的区域)。
图2为示出人MEFLIN蛋白与由各种克隆得到的单克隆抗体的结合性的蛋白质印迹的结果。图2中，示出克隆名和MEFLIN的片段的信息(用氨基酸编号表示片段的区域)。
图3为示出由各种克隆得到的单克隆抗体的向细胞内的摄入(内化)活性的荧光显微镜图像。细胞核用DAPI染色，抗体用Alexa488标记抗体来检测。
图4为示出由各种克隆得到的单克隆抗体的向细胞内的摄入(内化)活性的荧光显微镜图像。细胞核用DAPI染色，抗体用Alexa488标记抗体来检测。
图5为示出由各种克隆得到的单克隆抗体的向细胞内的摄入(内化)活性的荧光显微镜图像。细胞核用DAPI染色，抗体用Alexa488标记抗体来检测。
图6示出所制作的抗体-药物偶联物(ADC)在体外对人MEFLIN蛋白过表达细胞(HEK293细胞)的细胞增殖抑制活性。图6另外对于人MEFLIN蛋白过表达细胞(HEK293细胞)示出抗MEFLIN单克隆抗体处理组和未处理组(阴性对照)的FACS分析结果。横轴表示MEFLIN蛋白的表达量，纵轴表示细胞的频率。
图7示出ADC在体外对人横纹肌肉瘤细胞株(KYM-1细胞)的细胞增殖抑制活性。图7另外对于所使用的人横纹肌肉瘤细胞株(KYM-1细胞)示出抗MEFLIN单克隆抗体处理组和未处理组(阴性对照)的FACS分析结果。横轴表示MEFLIN蛋白的表达量，纵轴表示细胞的频率。
图8示出ADC在体内对皮下移植了横纹肌肉瘤细胞株(KYM-1)的荷瘤模型小鼠的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图8另外示出所移植的横纹肌肉瘤的组织中的人MEFLIN的表达。
图9示出ADC在体内对皮下移植了骨肉瘤细胞株(HsOs1)的荷瘤模型小鼠的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图9另外示出所移植的骨肉瘤的组织中的人MEFLIN的表达。
图10示出ADC在体内对皮下移植了胰腺癌细胞株(BxPC-3)的荷瘤模型小鼠的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图10另外示出所移植的胰腺癌的组织和间质中的小鼠MEFLIN的表达。
图11示出ADC在体内对皮下移植了肺癌细胞株(A549)的荷瘤模型小鼠的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图11另外示出所移植的肺癌的组织和间质中的小鼠MEFLIN的表达。
图12示出ADC在体内对皮下移植了神经母细胞瘤细胞株(NB-1)的荷瘤模型小鼠的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图12另外示出所移植的神经母细胞瘤的组织中的人MEFLIN的表达。
图13示出ADC在体内对皮下移植了大肠癌细胞株(DLD-1)的荷瘤模型小鼠的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图13另外示出所移植的大肠癌的组织和间质中的小鼠MEFLIN的表达。
图14示出ADC在体内对皮下移植了胃癌细胞株(MKN45)的荷瘤模型小鼠的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图14另外示出所移植的胃癌的组织和间质中的小鼠MEFLIN的表达。
图15示出对存储于互联网上的使用小鼠胰腺的单细胞RNA测序数据(TabulaMuris)进行分析的结果。显示小鼠胰腺中的MEFLIN阳性细胞群与组织蛋白酶K阳性细胞群是一致的(箭头)。
图16示出对存储于互联网上的使用小鼠肺的单细胞RNA测序数据(Tabula Muris)进行分析的结果。显示小鼠肺中的MEFLIN阳性细胞群与组织蛋白酶K阳性细胞群是一致的(箭头)。
图17示出表达外源性小鼠MEFLIN的CHO细胞株中的组织蛋白酶K的表达。
图18示出对皮下移植了骨肉瘤细胞株(HsOs1)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织进行使用抗MEFLIN单克隆抗体和抗组织蛋白酶K抗体的免疫荧光双重染色法的结果。显示在MEFLIN阳性细胞(绿色)的周围分泌有组织蛋白酶K(红色)(箭头)。
图19示出对皮下移植了胰腺癌细胞株(BxPC-3)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织进行使用抗MEFLIN单克隆抗体和抗组织蛋白酶K抗体的免疫荧光双重染色法的结果。显示在MEFLIN阳性细胞(绿色)的周围分泌有组织蛋白酶K(红色)(箭头)。
图20示出ADC在体内对皮下移植了胆管癌细胞株(HuCCT1)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图20另外示出所移植的胆管癌的组织和间质中的小鼠MEFLIN的表达。
图21示出ADC在体内对皮下移植了膀胱癌细胞株(T24)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图21另外示出所移植的膀胱癌的组织和间质中的小鼠MEFLIN的表达。
图22示出ADC在体内对皮下移植了卵巢癌细胞株(OV-90)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图22另外示出所移植的卵巢癌的组织和间质中的小鼠MEFLIN的表达。
图23示出ADC在体内对皮下移植了食道癌细胞株(KYSE)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图23另外示出所移植的食道癌的组织和间质中的小鼠MEFLIN的表达。
图24示出ADC在体内对皮下移植了骨肉瘤细胞株(HsOs1)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。
图25示出ADC在体内对皮下移植了乳腺癌细胞株(MCF7)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织的抗肿瘤效果。图中的箭头表示给药时机。图25另外示出所移植的乳腺癌的组织和间质中的小鼠MEFLIN的表达。
图26示出将人胰腺癌手术样本的组织切片供于使用抗MEFLIN抗体的免疫组织学(IHC)染色的结果、和利用原位杂交(ISH)染色的结果。图中的箭头表示在上图和下图中为同一部位。
具体实施方式
本发明中，“对象”是指哺乳动物，特别是可以为人。
本说明书中，“处置”以包括治疗(治疗性处置)和预防(预防性处置)的含义来使用。本说明书中，“治疗”是指疾病或障碍的治疗、治愈、防止或缓解性改善、或者疾病或障碍的进展速度的降低。本说明书中，“预防”是指降低疾病或病情发生的可能性、或延迟疾病或病情发生。
本说明书中，“疾病”是指因治疗受益的症状。本说明书中，“癌”是指恶性肿瘤。
本说明书中，“抗体”是指免疫球蛋白，包括多克隆抗体和单克隆抗体。优选的抗体为单克隆抗体。抗体的来源没有特别限定，可列举例如非人动物的抗体、非人哺乳动物的抗体和人抗体。另外，抗体可以为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。另外，抗体可以为双特异性抗体。作为药物使用的抗体优选为嵌合抗体，更优选为人源化抗体，进一步可优选为人抗体。双特异性抗体为单克隆抗体，优选为嵌合抗体，更优选为人源化抗体，进一步可优选为人抗体。
本说明书中，“治疗上有效量”是指对于处置(预防或治疗)疾病、状态而言有效的药剂量。治疗上有效量的药剂能够降低疾病或状态的症状恶化速度、阻止前述症状的恶化、改善前述症状、治愈前述症状、或者抑制前述症状的发病或发展。
本说明书中，“竞争”是指：对于与抗原的结合而言，与其它结合抗体争夺结合。在2种抗体对某抗原的结合部位重叠的情况下，可能发生竞争。这样的抗体如上所述可通过使用表位的免疫来得到，和/或，也可以通过利用竞争分析确认一种抗体对抗原的结合是否因另一种抗体减少来得到。
本说明书中，“抗体-药物偶联物”(以下也称为“ADC”)是指抗体与细胞毒性剂连接而成的物质。ADC中，抗体与细胞毒性剂可以通过合适的接头连接。作为细胞毒性剂，可使用化学疗法剂、放射性同位素和毒素。ADC也包括抗体的抗原结合性片段与药物的偶联物。
本说明书中，“抗原结合性片段”是指维持了对抗原的结合性的抗体的一部分。抗原结合性片段可含有本发明的抗体的重链可变区或轻链可变区或这两者。抗原结合性片段可以经嵌合化或人源化。作为抗原结合性片段，可列举例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv(单链Fv)、双链抗体、sc(Fv)2(单链(Fv)2)。这样的抗体的片段没有特别限定，例如，可以用酶处理抗体而得到。例如，将抗体用木瓜蛋白酶消化则可以得到Fab。或者，将抗体用胃蛋白酶消化则可以得到F(ab’)2，再将其还原则可以得到Fab’。本发明中，可以使用这样的抗体的抗原结合性片段。
本说明书中，“MEFLIN”或“Meflin”是也被称为含有富含亮氨酸重复序列的免疫球蛋白超家族(ISLR)的蛋白质。人MEFLIN可具有GenBank登录号BAA85970.1下所登录的氨基酸序列。MEFLIN可以为具有与GenBank登录号BAA85970.1下所登录的氨基酸序列对应的氨基酸序列的MEFLIN(例如人MEFLIN)。在想要明确所来源的动物种时，记作人MEFLIN(或hMEFLIN)和小鼠MEFLIN(mMEFLIN)等。
本发明中，在抗体-药物偶联物(ADC)中，抗体和细胞毒性剂通过接头连接。作为细胞毒性剂，可列举化学疗法剂(例如市售的抗癌剂等抗癌剂，例如澳瑞他汀(澳瑞他汀E、澳瑞他汀F苯二胺(AFP)、单甲基澳瑞他汀E、单甲基澳瑞他汀F、以及它们的衍生物)；美登素DM1和DM4、以及它们的衍生物)、喜树碱(SN-38、伊立替康、勒托替康、DB67、BMP1350、ST1481、CKD602、拓扑替康和依沙替康、以及它们的衍生物)、DNA小沟结合剂(烯二炔、莱克西菌素(lexitropsin)、倍癌霉素、以及它们的衍生物)、紫衫烷(紫杉醇和多西紫杉醇、以及它们的衍生物)、聚酮类(圆皮海绵内酯和其衍生物)、蒽醌系(米托蒽醌和其衍生物)、苯二氮
Figure BDA0003777337580000151
(吡咯并苯二氮
Figure BDA0003777337580000152
吲哚啉并苯二氮
Figure BDA0003777337580000153
和
Figure BDA0003777337580000154
唑啉并苯二氮
Figure BDA0003777337580000155
以及它们的衍生物)、长春花生物碱(长春新碱、长春花碱、长春地辛和长春瑞滨、以及它们的衍生物)、阿霉素类(阿霉素、吗啉代阿霉素和氰基吗啉代阿霉素、以及它们的衍生物)、强心苷(洋地黄毒苷和其衍生物)、卡利奇霉素、埃博霉素、念珠藻素、西马多丁、西马多丁、根瘤菌素、纺锤霉素、考布他汀、软珊瑚醇、依托泊苷、T67(チュラリク)和诺考达唑)、放射性同位素(例如32P、60C、90Y、111In、131I、125I、153Sm、186Re、188Re和212Bi)以及毒素(例如白喉毒素A、假单胞菌内毒素、蓖麻毒素、肥皂草毒素等)，可以作为本发明的ADC中的细胞毒性剂使用。作为本发明的ADC中的细胞毒性剂，可以优选使用喜树碱、特别是SN-38或依沙替康。关于细胞毒性剂，用于治疗癌的细胞毒性剂均可以使用。作为细胞毒性剂，可以使用上述细胞毒性剂的药学上可允许的盐、溶剂化物(例如水合物)、酯或前药。
本发明中，ADC的接头可以为非裂解性接头或裂解性接头。这样的接头可以在ADC的制作中由本领域技术人员适宜地选择、合成。作为裂解性接头，另外可列举具有酯键等分解性键的接头。作为裂解性接头，可列举具有由缬氨酸-瓜氨酸或缬氨酸-丙氨酸构成的肽等裂解性部分等蛋白酶切断部位的接头。由缬氨酸-瓜氨酸构成的肽区域可被组织蛋白酶B等蛋白酶切断。一个方式中，接头例如可以在抗体与裂解性部分之间导入有第一间隔基，例如，可以使用聚乙二醇(PEG)、例如每1分子中重复单元为5～40左右的PEG作为第一间隔基。在裂解性部分与细胞毒性剂之间可以导入有第二间隔基，例如，可以使用对氨基苄氧羰基(PABC)作为第二间隔基。裂解性接头除了在癌组织中裂解的部位以外在生理学上稳定(特别是在到达癌组织之前在生理学上稳定)。
一个方式中，接头含有第一间隔基和裂解性部分。一个方式中，接头含有第一间隔基、裂解性部分和第二间隔基。某一特定的对象中，接头含有PEG、裂解性部分和PABC。
抗体与接头的结合中，例如可以通过马来酰亚胺基与抗体的巯基连接。
一个方式中，抗体通过其巯基利用具有马来酰亚胺-PEG-裂解性部分的接头与抗癌剂连接。一个方式中，抗体通过其巯基利用具有马来酰亚胺-PEG-裂解性部分-PABC的接头与抗癌剂连接。
一个方式中，ADC可具有以下的式(II)所示的结构。
认为本发明的ADC作为癌的治疗药有用。
根据本发明，可提供具有由选自以下中的克隆产生的抗体的重链CDR1～3和轻链CDR1～3的氨基酸序列的抗体。该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。在该方式中，根据本发明，可提供具有由选自以下中的克隆产生的抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列的抗体。该抗体可优选为人嵌合抗体。
[表1]
表1：大鼠杂交瘤克隆所产生的抗体的重链可变区(VH)的CDR1～CDR3的氨基酸序 列
Figure BDA0003777337580000171
[表2]
表2：大鼠杂交瘤克隆所产生的抗体的轻链可变区(VL)的CDR1～CDR3的氨基酸序 列
Figure BDA0003777337580000181
[表3]
表3：大鼠杂交瘤克隆所产生的抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列
Figure BDA0003777337580000191
[表4]
表4：大鼠杂交瘤克隆所产生的抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列
Figure BDA0003777337580000201
[表5]
表5：小鼠杂交瘤克隆所产生的抗体的重链可变区(VH)的CDR1～CDR3的氨基酸序 列
Figure BDA0003777337580000211
[表6]
表6：小鼠杂交瘤克隆所产生的抗体的轻链可变区(VL)的CDR1～CDR3的氨基酸序 列
Figure BDA0003777337580000221
[表7]
表7：小鼠杂交瘤克隆所产生的抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列
Figure BDA0003777337580000231
[表8]
表8：小鼠杂交瘤克隆所产生的抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列
Figure BDA0003777337580000241
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(1A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号1所记载的重链CDR1、序列号2所记载的重链CDR2和序列号3所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号4所记载的轻链CDR1、序列号5所记载的轻链CDR2和序列号4所记载的轻链CDR3；
(1B)具有序列号7所记载的重链可变区和序列号8所记载的轻链可变区的抗体；
(1C)与上述(1B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(1D)与MEFLIN蛋白上与上述(1B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(2A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号9所记载的重链CDR1、序列号10所记载的重链CDR2和序列号11所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号12所记载的轻链CDR1、序列号13所记载的轻链CDR2和序列号14所记载的轻链CDR3；
(2B)具有序列号15所记载的重链可变区和序列号16所记载的轻链可变区的抗体；
(2C)与上述(2B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(2D)与MEFLIN蛋白上与上述(2B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(3A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号17所记载的重链CDR1、序列号18所记载的重链CDR2和序列号19所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号20所记载的轻链CDR1、序列号21所记载的轻链CDR2和序列号22所记载的轻链CDR3；
(3B)具有序列号23所记载的重链可变区和序列号24所记载的轻链可变区的抗体；
(3C)与上述(3B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(3D)与MEFLIN蛋白上与上述(3B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(4A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号25所记载的重链CDR1、序列号26所记载的重链CDR2和序列号27所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号28所记载的轻链CDR1、序列号29所记载的轻链CDR2和序列号30所记载的轻链CDR3；
(4B)具有序列号31所记载的重链可变区和序列号32所记载的轻链可变区的抗体；
(4C)与上述(4B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(4D)与MEFLIN蛋白上与上述(4B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(5A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号33所记载的重链CDR1、序列号34所记载的重链CDR2和序列号35所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号36所记载的轻链CDR1、序列号37所记载的轻链CDR2和序列号38所记载的轻链CDR3；
(5B)具有序列号39所记载的重链可变区和序列号40所记载的轻链可变区的抗体；
(5C)与上述(5B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(5D)与MEFLIN蛋白上与上述(5B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(6A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号41所记载的重链CDR1、序列号42所记载的重链CDR2和序列号43所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号44所记载的轻链CDR1、序列号45所记载的轻链CDR2和序列号46所记载的轻链CDR3；
(6B)具有序列号47所记载的重链可变区和序列号48所记载的轻链可变区的抗体；
(6C)与上述(6B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(6D)与MEFLIN蛋白上与上述(6B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(7A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号49所记载的重链CDR1、序列号50所记载的重链CDR2和序列号51所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号52所记载的轻链CDR1、序列号53所记载的轻链CDR2和序列号54所记载的轻链CDR3；
(7B)具有序列号55所记载的重链可变区和序列号56所记载的轻链可变区的抗体；
(7C)与上述(7B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(7D)与MEFLIN蛋白上与上述(7B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(8A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号57所记载的重链CDR1、序列号58所记载的重链CDR2和序列号59所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号60所记载的轻链CDR1、序列号61所记载的轻链CDR2和序列号62所记载的轻链CDR3；
(8B)具有序列号63所记载的重链可变区和序列号64所记载的轻链可变区的抗体；
(8C)与上述(8B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(8D)与MEFLIN蛋白上与上述(8B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(9A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号65所记载的重链CDR1、序列号66所记载的重链CDR2和序列号67所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号68所记载的轻链CDR1、序列号69所记载的轻链CDR2和序列号70所记载的轻链CDR3；
(9B)具有序列号71所记载的重链可变区和序列号72所记载的轻链可变区的抗体；
(9C)与上述(9B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(9D)与MEFLIN蛋白上与上述(9B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(10A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号73所记载的重链CDR1、序列号74所记载的重链CDR2和序列号75所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号76所记载的轻链CDR1、序列号77所记载的轻链CDR2和序列号78所记载的轻链CDR3；
(10B)具有序列号79所记载的重链可变区和序列号80所记载的轻链可变区的抗体；
(10C)与上述(10B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(10D)与MEFLIN蛋白上与上述(10B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(11A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号81所记载的重链CDR1、序列号82所记载的重链CDR2和序列号83所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号84所记载的轻链CDR1、序列号85所记载的轻链CDR2和序列号86所记载的轻链CDR3；
(11B)具有序列号87所记载的重链可变区和序列号88所记载的轻链可变区的抗体；
(11C)与上述(11B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(11D)与MEFLIN蛋白上与上述(11B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(12A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号89所记载的重链CDR1、序列号90所记载的重链CDR2和序列号91所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号92所记载的轻链CDR1、序列号93所记载的轻链CDR2和序列号94所记载的轻链CDR3；
(12B)具有序列号95所记载的重链可变区和序列号96所记载的轻链可变区的抗体；
(12C)与上述(12B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(12D)与MEFLIN蛋白上与上述(12B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(13A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号97所记载的重链CDR1、序列号98所记载的重链CDR2和序列号99所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号100所记载的轻链CDR1、序列号101所记载的轻链CDR2和序列号102所记载的轻链CDR3；
(13B)具有序列号103所记载的重链可变区和序列号104所记载的轻链可变区的抗体；
(13C)与上述(13B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(13D)与MEFLIN蛋白上与上述(13B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(14A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号105所记载的重链CDR1、序列号106所记载的重链CDR2和序列号107所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号108所记载的轻链CDR1、序列号109所记载的轻链CDR2和序列号110所记载的轻链CDR3；
(14B)具有序列号111所记载的重链可变区和序列号112所记载的轻链可变区的抗体；
(14C)与上述(14B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(14D)与MEFLIN蛋白上与上述(14B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(15A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号113所记载的重链CDR1、序列号114所记载的重链CDR2和序列号115所记载的重链CDR，所述轻链可变区含有序列号116所记载的轻链CDR1、序列号117所记载的轻链CDR2和序列号118所记载的轻链CDR3；
(15B)具有序列号119所记载的重链可变区和序列号120所记载的轻链可变区的抗体；
(15C)与上述(15B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(15D)与MEFLIN蛋白上与上述(15B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(16A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号121所记载的重链CDR1、序列号122所记载的重链CDR2和序列号123记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号124所记载的轻链CDR1、序列号125所记载的轻链CDR2和序列号126所记载的轻链CDR3；
(16B)具有序列号127所记载的重链可变区和序列号128所记载的轻链可变区的抗体；
(16C)与上述(16B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(16D)与MEFLIN蛋白上与上述(16B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
根据本发明，提供与MEFLIN蛋白结合的抗体：
(17A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号129所记载的重链CDR1、序列号130所记载的重链CDR2和序列号131记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号132所记载的轻链CDR1、序列号133所记载的轻链CDR2和序列号134所记载的轻链CDR3；
(17B)具有序列号135所记载的重链可变区和序列号136所记载的轻链可变区的抗体；
(17C)与上述(17B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(17D)与MEFLIN蛋白上与上述(17B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
该抗体优选为人嵌合抗体，可优选为人源化抗体。
本发明的一个方式中，与MEFLIN蛋白结合的抗体与人MEFLIN蛋白结合。本发明的一个方式中，与MEFLIN蛋白结合的抗体与人MEFLIN蛋白特异性结合。“特异性结合”是指：相较于与其它至少1种蛋白质结合，以强亲和性与MEFLIN蛋白结合。“特异性结合”还包括下述情况：相较于与小鼠MEFLIN蛋白结合，以强亲和性与人MEFLIN蛋白结合。
抗体彼此是否进行竞争可通过体外竞争分析来确认。在竞争分析中，如果能够阻断例如至少20％、优选至少20～50％、进一步优选至少50％的期望抗体的结合，则可以作为在与同一抗原的结合中进行竞争的抗体。进行竞争的抗体可以通过交叉阻断分析、优选竞争ELISA分析来确认。交叉阻断分析中，将抗原涂布在例如微滴定板上，向其上添加成为候选抗体的竞争抗体存在并孵育，形成抗原与候选抗体的结合。然后，标记期望抗体后添加到孔中并进行孵育，洗涤，对期望抗体的结合量进行定量，由此能够判断抗体是否进行了竞争。进行竞争的情况下，孔中残存的标记量应该会变少。
抗体彼此是否与作为结合伙伴的蛋白质上重叠的表位结合这一点，可以通过相互作用面彼此是否重叠来确认。例如，已知氢-氘交换质谱法(HDX-MS)为确定表位的方法。HDX-MS中，在重水存在下对蛋白复合体的酰胺质子的氢向氘的交换进行检测。在重水存在下，蛋白复合体的相互作用面上的酰胺质子难以交换为氘(或交换速度慢)，露出到表面的区域的酰胺质子容易被交换为氘(或交换速度快)。因此，利用该现象，可以将观察到氢向氘交换的速度下降的区域确认为与抗体结合的区域，由此，可以确定抗体在结合伙伴上的相互作用面(表位区域)。若通过上述方法确定2种抗体各自的表位区域，则可以确定表位区域是否重叠。由氢向氘的交换可以由本领域技术人员通过质谱法来检测。
本发明的一个方式中，与MEFLIN蛋白结合的抗体为具有进入细胞内的内化活性的抗体。本发明的一个方式中，与MEFLIN蛋白结合的抗体为不具有进入细胞内的内化活性的抗体。本发明的一个方式中，癌细胞为MEFLIN蛋白阳性，与MEFLIN蛋白结合的抗体为具有进入细胞内的内化活性的抗体。本发明的一个方式中，癌细胞为MEFLIN蛋白阳性，与MEFLIN蛋白结合的抗体为不具有进入细胞内的内化活性的抗体。本发明的一个方式中，癌间质的细胞为MEFLIN蛋白阳性，与MEFLIN蛋白结合的抗体为具有进入细胞内的内化活性的抗体。本发明的一个方式中，癌间质的细胞为MEFLIN蛋白阳性，与MEFLIN蛋白结合的抗体为不具有进入细胞内的内化活性的抗体。这些方式中，ADC可以具有裂解性接头。这些方式中，ADC可以具有非裂解性接头。以ADC的有效载荷在接头切断后才发挥细胞毒性的方式前药化时，接头优选为裂解性接头。一个方式中，本发明的ADC具有内化活性，具有在细胞内裂解的裂解性接头。一个方式中，本发明的ADC不具有内化活性，具有在细胞外裂解的裂解性接头。
抗体是否具有内化活性这一点可通过体外试验来确认。例如，对于在细胞表面具有MEFLIN蛋白的细胞，可如下确认：使其接触与MEFLIN蛋白结合的抗体，孵育足以使抗体内化的时间(例如15分钟左右)后，将培养液中和结合于细胞表面的抗体通过洗涤(例如含有0.5M NaCl和3体积％醋酸的水溶液)除去，然后对内化到细胞内的抗体进行染色。内化到细胞内的抗体的染色可以与细胞内蛋白的染色同样地实施。内化到细胞内的抗体的染色例如可以使用经标记的二抗基于标记来检测。
癌组织包括癌细胞(即，恶性肿瘤细胞)和癌的间质细胞。MEFLIN也在来自间充质干细胞或其类似细胞的恶性肿瘤(肉瘤)和良性肿瘤中表达。具体而言，在骨肉瘤、软骨肉瘤、脂肪肉瘤、横纹肌肉瘤、未分化多形性肉瘤、硬纤维瘤、脑膜瘤等几乎所有的非上皮性肿瘤病例中，均在癌细胞上确认到表达。因此，本发明的ADC可用于处置来自间充质干细胞或其类似细胞的恶性肿瘤(肉瘤)。本发明的ADC另外也可以用于处置良性肿瘤。另外，由上皮细胞产生的癌(恶性上皮肿瘤)中，即使是在癌细胞本身为MEFLIN蛋白阴性的情况下，在几乎所有的癌中，间质的细胞(例如CAF)中也表达MEFLIN蛋白。因此，本发明的ADC可以用于以恶性上皮肿瘤的间质的细胞为靶来处置恶性上皮肿瘤。MEFLIN的表达例如可以通过原位杂交法或使用抗体的免疫组织染色等来调查，也可以通过其它方法、例如RT-PCR法、蛋白质印迹法、DNA微阵列法、RNA测序分析法等来进行。
作为成为本发明的ADC或药物组合物的治疗对象的癌，没有特别限定，可列举癌，例如由上皮细胞产生的癌(恶性上皮肿瘤)，例如肺癌、胰腺癌、头颈癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、食道癌、胃癌、大肠癌、子宫癌、卵巢癌、皮肤癌、甲状腺癌、胸腺癌、肾癌、睾丸癌、阴茎癌、肝癌、胆管癌、胆道癌和这些的转移癌(或癌细胞)。作为成为本发明的ADC或药物组合物的治疗对象的癌，另外可列举后腹膜肿瘤、血管/淋巴管肉瘤和这些的转移癌(或癌细胞)。作为成为本发明的ADC或药物组合物的治疗对象的癌，另外可列举脑肿瘤和骨软组织肿瘤。这些癌中，癌细胞为MEFLIN蛋白阳性，或者癌细胞为MEFLIN蛋白阴性但癌间质含有MEFLIN蛋白阳性细胞。根据本发明，MEFLIN蛋白阳性细胞逐渐被募集到上述癌的间质中。因此，根据本发明，成为本发明的ADC或药物组合物的治疗对象的癌(或癌细胞)可以为MEFLIN阴性。MEFLIN蛋白阳性的细胞被募集到MEFLIN蛋白阴性的癌的间质中，本发明的ADC以被募集到该间质的MEFLIN蛋白阳性细胞为靶，不论癌(或癌细胞)本身是MEFLIN蛋白阳性还是MEFLIN蛋白阴性，都能够对该癌发挥抗肿瘤活性。这可以通过旁观者效应来说明。癌间质中是否存在MEFLIN蛋白阳性细胞这一点可通过检查组织样本中的MEFLIN蛋白的表达来确认。本发明的一个方式中，成为治疗对象的癌为MEFLIN蛋白阴性且癌间质中存在MEFLIN蛋白阳性细胞的癌。根据本发明，成为本发明的ADC或药物组合物的治疗对象的癌可以为MEFLIN蛋白阳性的癌(例如肉瘤，例如黏液纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性外周神经鞘瘤、尤文肉瘤、上皮样肉瘤、透明细胞肉瘤、滑膜肉瘤和骨肉瘤)。本发明的一个方式中，成为治疗对象的癌为MEFLIN蛋白阳性且癌间质中存在MEFLIN蛋白阳性细胞的癌。本发明的一个方式中，成为治疗对象的癌为MEFLIN蛋白阳性且癌间质中检测不到MEFLIN蛋白阳性细胞的癌。一个方式中，成为治疗对象的癌可以是评价或推测为MEFLIN阳性的癌、或者是癌细胞本身为MEFLIN阴性但评价或推测在间质中存在MEFLIN阳性细胞的癌。
双特异性抗体可以是例如与癌细胞和免疫细胞分别具有结合亲和性的抗体。双特异性抗体可以是例如与MEFLIN蛋白和CD3蛋白等T细胞的表面抗原结合的抗体。双特异性抗体可以是IgG型和双链抗体型。该方式例如可以对MEFLIN蛋白阳性癌细胞有效。
本发明的一个方式中，药物组合物含有本发明的ADC和赋形剂。本发明的药物组合物可通过静脉内给药、皮下给药、肿瘤内给药、腹腔内给药、脑室内给药、肌肉内给药等给药方法给药。用量可考虑患者的年龄、性别、体重、疾病的重症度等由医生适宜决定。
根据本发明，提供本发明的ADC在制造用于治疗癌的药物中的应用。
根据本发明，提供一种对有此需要的对象治疗癌的方法，其包括向前述对象给药治疗上有效量的本发明的ADC的步骤。该方式中，成为治疗对象的癌为MEFLIN蛋白阴性且癌间质中存在MEFLIN蛋白阳性细胞的癌(例如恶性上皮肿瘤)。另外，一个方式中，癌可以为MEFLIN蛋白阳性的癌(例如肉瘤)。这样的对象可以通过由该对象得到的组织样本或其组织切片的、利用使用抗MEFLIN抗体的免疫组织学染色或原位杂交进行的MEFLIN mRNA的检测来确定或选择。
根据本发明，提供本发明的ADC在治疗癌的方法中的应用。根据本发明，可提供用于在治疗癌的方法中使用的本发明的ADC。
实施例
实施例1：抗体的制备和得到的单克隆抗体的特性分析
本实施例中，制备识别人MEFLIN蛋白的单克隆抗体，通过各种分析来确认该抗体的结合特性。
[细胞的制备]
利用Flp-InTM系统(Thermo Fisher)建立了稳定表达小鼠Meflin的人胎肾(HEK293)细胞株(以下：mMeflin HEK293细胞株)和稳定表达小鼠Meflin的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株(以下称为“mMeflin CHO细胞株”)。同样地建立了稳定表达人MEFLIN的人胎肾(HEK293)细胞株(以下：hMeflin HEK293细胞株)和稳定表达人MEFLIN的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株(以下称为“hMEFLIN CHO细胞株”)。
[大鼠抗人MEFLIN单克隆抗体的制作]
在用于制作人MEFLIN抗体的动物免疫中，使用人MEFLIN重组蛋白作为抗原。人MEFLIN重组蛋白由哺乳类细胞表达系统获得。例如，向在悬浮培养中驯化后的人胎肾源细胞株(Expi293F细胞、Thermo Fisher)中，通过脂质体转染法(lipofectamine2000，invitrogen)导入人MEFLIN基因。为了能够在之后进行纯化，将MEFLIN基因的羧基末端部的GPI锚序列除去，向此处导入组氨酸标签。回收基因导入5～8天后的细胞培养液，在过滤器(0.22微米)处理后，供于填充了特异性结合带组氨酸标签的蛋白质的载体(Ni Excel，GEHealthcare)的柱中，由此结合培养液中的MEFLIN蛋白。柱洗涤后，利用含有咪唑(500mM)的缓冲液竞争性地洗脱所结合的MEFLIN蛋白。通过超滤(使用磷酸缓冲液的透析)从含有MEFLIN蛋白的洗脱液中除去咪唑，由此得到最终的人MEFLIN重组蛋白。经纯化的人MEFLIN重组蛋白的纯度通过将蛋白质在SDS-PAGE电泳后供于考马斯亮蓝染色法来测定。
向WKY大鼠后肢的足底免疫1次重组人MEFLIN蛋白(纯化度95％)100μg。2周后，对髂淋巴结中存在的浆细胞和骨髓瘤(SP2/0)细胞株进行电融合，制作杂交瘤。关于培养液，向高糖DMEM(ナカライ)中添加HAT培养基(MPB)和BM condimed H1(Roche)，进行杂交瘤的筛选。
[小鼠抗人MEFLIN单克隆抗体的制作]
向C57BL/6小鼠尾根部肌肉免疫1次重组人MEFLIN蛋白(纯化度95％)50μg，除此以外通过与大鼠抗人MEFLIN单克隆抗体的制作相同的方法制作单克隆抗体。
[杂交瘤的筛选]
利用使用重组人MEFLIN蛋白的ELISA、使用hMEFLIN CHO细胞株的免疫荧光染色(IF)、使用hMEFLIN CHO细胞株的流式细胞术、使用由hMeflin HEK293细胞株制作的细胞溶解液的免疫沉淀、和蛋白质印迹，在各方法中筛选产生识别抗原的单克隆抗体的杂交瘤。
[蛋白质印迹]
利用脂质体转染法使人胎肾(HEK293)细胞株瞬时性表达插入有编码人MEFLIN蛋白或其片段的DNA的pRP-CMV载体，制作细胞溶解液。片段为图1或2所示的片段，在C末端具有G196标签和His标签。使用该细胞溶解液进行SDS-PAGE，将电泳后的蛋白质转印到PVDF膜上。对于该PVDF膜，使用5％脱脂乳/PBS在常温下反应1小时。作为一抗，使用将各杂交瘤克隆的培养上清用PBS稀释50倍而成的溶液。阳性对象中，使用抗G196抗体作为一抗。在一抗存在下与该PVDF膜一起在4℃下反应一晚。之后将PVDF膜用0.05％吐温/PBS洗涤。作为二抗，使用抗大鼠或抗小鼠抗体-辣根过氧化物酶(HRP)偶联物。二抗用PBS稀释1000倍并与该PVDF膜在常温下反应45分钟。用0.05％吐温/PBS洗涤后，用ECL(GE医疗)使标记抗体的HRP发光，用CCD成像仪(Las4000、GE医疗)将图像导入到计算机中。
[单克隆抗体的内化活性的分析]
在向F-12Glutamax培养液(Gibco)中添加20mM HEPS和0.1％BSA而成的分析溶液中，将hMeflin CHO细胞株或mMeflin CHO细胞株在37℃、5％CO2下培养3小时。将各杂交瘤上清用分析溶液稀释10倍，添加到上述CHO细胞株中培养15分钟。用PBS(4℃)洗涤上述CHO细胞株，用洗涤溶液(含有0.5M NaCl、3％醋酸的MilliQ-H2O)进行洗涤，除去结合在细胞膜上的抗体。将上述CHO细胞株在4％多聚甲醛(PFA)中反应10分钟而固定，接着在0.1％TiritonX-100中反应5分钟，进行细胞膜透过化处理。将作为二抗的、使用抗大鼠或抗小鼠抗体-Alexa488偶联物的二抗用PBS稀释400倍，与细胞膜透过化处理后的细胞在常温下反应30分钟。用PBS洗涤后，与DAPI在常温下反应5分钟，用PBS洗涤，用共聚焦显微镜(LSM700、ZEISS)获得图像。
[原位杂交法]
从由肉瘤患者或恶性上皮肿瘤患者得到的病理组织样本中，在镜检下选择肿瘤成分最多的区域，通过原位杂交法(以下称为“ISH染色法”)调查MEFLIN(也称为“ISLR”)的表达(参照WO2017/22472)。在调查的组织内，以中倍率视场(20倍物镜)观察组织，对于肉瘤组织，将具有肿瘤细胞形态的细胞的20％以上为ISLR阳性的组织作为ISLR阳性肿瘤组织，将少于20％的组织作为阴性肿瘤组织，由此进行分组。同样地，在恶性上皮肿瘤中，将浸润到癌间质的具有成纤维细胞样形态的细胞的20％以上为ISLR阳性的组织作为ISLR阳性肿瘤组织，将少于20％的组织作为阴性肿瘤组织，由此进行分组。在细胞质的至少一部分观察到信号时，作为ISLR阳性。
[组织免疫荧光双重染色法]
对皮下移植了骨肉瘤细胞株(HsOs1)、胰腺癌细胞株(BxPC-3)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织进行取样，用10％福尔马林固定后用石蜡包埋。薄切成2μm厚度，将石蜡包埋组织静置在载玻片上，利用二甲苯和乙醇进行脱石蜡，利用pH6.0的抗原激活液(Leica)进行抗原的激活。然后，在进行封闭后，使用抗MEFLIN单克隆抗体和抗组织蛋白酶K抗体(ab37259、abcam)作为一抗，使用抗大鼠抗体-Alexa488偶联物和抗小鼠抗体-Alexa594偶联物作为二抗(Invitrogen)，进行免疫荧光双重染色法。细胞内的核进行了DAPI染色。MEFLIN(绿色)、组织蛋白酶K(红色)、核(蓝色)。用共聚焦显微镜(LSM700、ZEISS)获得图像。
[免疫组织染色法]
从由恶性上皮肿瘤患者得到的病理组织样本中，在镜检下选择肿瘤成分最多的区域，用免疫组织染色法(以下称为“IHC染色法”)调查MEFLIN(也称为“ISLR”)的表达。在所调查的组织内，以中倍率视场(20倍物镜)观察组织，将浸润到癌间质的具有成纤维细胞样形态的细胞的20％以上为ISLR阳性的组织作为ISLR阳性肿瘤组织，将少于20％的组织作为阴性肿瘤组织，由此进行分组。当在细胞质的至少一部分观察到信号时，作为ISLR阳性。使用抗大鼠或抗小鼠抗体-辣根过氧化物酶(HRP)偶联物作为二抗(ImmPRESS，VECTORSLABORATORIES)。
[结果]
利用蛋白质印迹确认各单克隆抗体与各人MEFLIN蛋白片段的结合而得的结果如图1所示。如图1所示，由克隆27-7产生的大鼠或小鼠源单克隆抗体(以下简称为“27-7抗体”)不与人MEFLIN的第1～343位的氨基酸区域结合，而是与第1～399位的氨基酸区域结合。由此暗示了，27-7抗体与人MEFLIN的第344～399位的氨基酸区域结合。同样地，图1暗示了：34-4抗体与第232～343位的氨基酸区域结合；35-9抗体与第1～146位的氨基酸区域结合；27-8抗体、41-10抗体和46-3抗体与人MEFLIN的第344～399位的氨基酸区域结合。另外，如图2所示，暗示了：3-2抗体、11-8抗体、12-2抗体、19-7抗体和23-1抗体与人MEFLIN的第344～399位的氨基酸区域结合；13-1抗体与第147～231位的氨基酸区域结合；16-5抗体、22-3抗体和32-1抗体与第1～146位的氨基酸区域结合。
对各抗体克隆的内化活性进行了确认。结果如图3～5所示。如图3～5所示，21-3抗体、25-1抗体、8-2抗体、27-7抗体、27-8抗体、34-4抗体、35-9抗体、46-3抗体、3-2抗体、11-8抗体、12-2抗体、16-5抗体、19-7抗体、22-3抗体、23-1抗体和32-1抗体的情况下，在细胞内观察到来自抗体的强烈信号。
结果如表9所示。
[表9]
表9：各单克隆抗体的特性的一览表
Figure BDA0003777337580000401
表9中，符号“S”表示确认到强的内化活性，符号“M”表示确认到中等程度的内化活性，符号“N”表示未检测到内化活性。表中的“？”表示未确定。另外，表9中，“宿主”表示抗体所来源的物种为大鼠或小鼠。表9中，21-3抗体、25-1抗体和8-2抗体与小鼠MEFLIN蛋白结合，除此以外的抗体为与人MEFLIN蛋白结合的抗体。
各种癌组织中的MEFLIN蛋白的表达如表10所示。表10中示出了所确认的组织样品数、以及其中的阳性样品数和阳性率(％)。
[表10]
表10：肿瘤细胞中的人MEFLIN(ISLR)的表达
Figure BDA0003777337580000411
肿瘤间质中的人MEFLIN(ISLR)的表达如表11所示。表11中示出所确认的组织样品数、以及其中的阳性样品数和阳性率(％)。另外，7例胃癌病例中，2例为阳性。
[表11]
表11：肿瘤间质中的人MEFLIN(ISLR)的表达
Figure BDA0003777337580000412
需要说明的是，胰腺癌、肺癌、乳腺癌、大肠癌、胃癌、胆管癌、卵巢癌、膀胱癌和食道癌的肿瘤细胞中，人MEFLIN的表达为阴性。
实施例2：抗体-药物偶联物(ADC)的制作和其体内药效试验
本实施例中，制作实施例1中制得的抗体与细胞毒性剂的偶联物。另外，对于所制作的偶联物，给药于荷瘤小鼠模型并确认抗肿瘤效果。
[ADC的制备]
从通过杂交瘤的高密度培养浓缩后的含抗体杂交瘤上清中，使用Mono Spin(商标)L ProG(GL Sciense)纯化抗体。在25℃下利用1.0mM DTT进行30分钟还原处理，由此切断抗体的二硫键，在常温下在露出的巯基上附加VcMMAE(mc-vc-PAB-MMAE、MedChemExpress)或mc-PEG12-vc-PABC-MMAE，通过超滤进行纯化。VcMMAE为CAS号646502-53-6下登录的化合物。VcMMAE为单甲基澳瑞他汀E(MMAE)通过对氨基苯甲酰氧基羰基(PBAC)与缬氨酸-瓜氨酸接头结合，其机制为当缬氨酸-瓜氨酸被组织蛋白酶B等蛋白酶切断时释放出MMAE。缬氨酸-瓜氨酸接头被马来酰亚胺己酰基修饰，可通过马来酰亚胺基与抗体的半胱氨酸所具有的巯基反应。mc-PEG12-vc-PABC-MMAE除了夹设PEG以外与VcMMAE相同，MMAE释放的机制也与VcMMAE相同。药物抗体比率(相对于1分子抗体偶联的细胞毒性剂的个数，DAR)通过计算还原处理后的抗体的巯基个数与在抗体上附加VcMMAE后的巯基个数的差来确定。具体而言，使5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(同仁化学研究所)与露出的巯基反应，生成稳定的5-巯基-2-硝基苯甲酸。由该生成的硫醇的吸光度(λmax＝412nm、ε＝1.55×104)来定量巯基。
mc-vc-PAB-MMAE具有以下的式(I)的结构。
Figure BDA0003777337580000421
所得到的ADC可具有以下的式(II)的结构。
Figure BDA0003777337580000431
{式中，n为1～8的任意一个自然数。}
mc-PEG12-vc-PABC-MMAE具有以下的式(III)的结构。
Figure BDA0003777337580000432
使用所制备的ADC，试验对各种细胞的细胞毒性。
ADC对表达人MEFLIN的HEK293细胞的细胞毒性
首先，试验ADC对表达人MEFLIN的HEK293细胞的细胞毒性。具体而言，将hMeflinHEK293细胞株以1.0×104/孔播种于平板，在37℃、5％CO2下培养1天。然后，添加各浓度的ADC并培养2天，通过MTT试验评价细胞增殖能力。细胞增殖能力通过在MMT试验中用吸光度计(POWERSCAN4、DS PHARMA BIOMEDICAL)测定样品在波长590nm下的吸光度来进行评价。另外，通过FACS分析评价了hMeflin HEK293细胞株的Meflin表达量。下文中在图中简单记载克隆号时表示使用了单克隆抗体本身，在ADC紧前方或紧后方记载克隆号时，表示使用了抗体为该克隆的ADC，CTL ADC或同种型对照IgG ADC表示使用了抗体为同种型对照IgG抗体的ADC。作为同种型对照抗体，使用了大鼠IgG2a(BioLegend)。
结果如图6所示。如图6所示，由FACS分析可知，表达人MEFLIN的HEK293细胞强烈表达人MEFLIN蛋白。另外，ADC27-7(药物抗体比率(DAR)＝2.4)使表达人MEFLIN蛋白的HEK293细胞的增殖显著下降。ADC27-7的EC50为0.72nM。对hMEFLIN CHO细胞具有中等程度的内化活性的ADC34-4(DAR＝3.4)具有弱的细胞增殖的抑制活性。
ADC对人横纹肌肉瘤细胞株的细胞毒性
与上述同样地，试验了ADC对横纹肌肉瘤(KYM-1)细胞株的细胞毒性。结果如图7所示。如图7所示，由FACS分析可知，横纹肌肉瘤细胞株强烈表达人MEFLIN蛋白。另外，ADC27-7和ADC34-4使KYM-1细胞株的增殖显著下降。
ADC在横纹肌肉瘤细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
然后，使用荷瘤小鼠模型在体外试验了ADC所产生的细胞毒性。将1.0×107个KYM-1细胞株皮下移植到雌性NOD SCID小鼠的背部(各组n＝5)。对于具有约100mm3左右的肿瘤体积的小鼠，腹腔内给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植KYM细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图8所示。如图8所示，可知27-7ADC和34-4ADC对横纹肌肉瘤发挥了强力的抗肿瘤活性。由组织图像可知，肿瘤强烈表达人MEFLIN。
ADC在骨肉瘤细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
进而，将1.0×107个内源性Meflin阳性骨肉瘤(HsOs1)细胞株皮下移植到雌性NODSCID小鼠的背部(各组n＝5)。对于具有约75mm3左右的肿瘤体积的小鼠，腹腔内给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植HsOs1细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图9所示。如图9所示，可知27-7ADC和34-4ADC对骨肉瘤发挥了强力的抗肿瘤活性。由组织图像可知，肿瘤以中等程度表达人MEFLIN。
ADC在胰腺癌细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
将1.0×107个内源性Meflin阴性人胰腺癌(BxPC-3)细胞株皮下移植到雌性裸小鼠(BALB/cSlc nu/nu)的背部(各组n＝5)。对于具有约150mm3左右的肿瘤体积的小鼠，腹腔内给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植BxPC-3细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图10所示。如图10的组织图像所示，胰腺癌细胞本身为MEFLIN阴性，但是在肿瘤间质细胞中确认到小鼠MEFLIN阳性细胞。另外，可知21-3ADC和25-1ADC对胰腺癌发挥了强力的抗肿瘤活性。由于原来的组织为MEFLIN阴性，因此可知，MEFLIN阳性细胞被募集到肿瘤的附近。另外暗示了，ADC对肿瘤发挥抗肿瘤活性。
ADC在肺癌细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
将1.0×107个内源性Meflin阴性人肺癌(A549)细胞株皮下移植到雌性裸小鼠(BALB/cSlc nu/nu)的背部(各组n＝5)。对于具有约100mm3左右的肿瘤体积的小鼠，腹腔内给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植A549细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图11所示。如图11所示，可知25-1ADC对肺癌发挥了强烈的抗肿瘤活性，21-3ADC发挥了弱的抗肿瘤活性。另外，由组织图像可知，肺癌细胞本身为人MEFLIN阴性，但是在肿瘤间质细胞中确认到了小鼠MEFLIN阳性细胞。由于原来的组织为MEFLIN阴性，因此可知，MEFLIN阳性细胞被募集到肿瘤的附近。另外暗示了，ADC对肿瘤发挥抗肿瘤活性。
ADC在神经母细胞瘤细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
进而，将1.0×107个内源性Meflin阳性神经母细胞瘤(NB-1)细胞株皮下移植到雌性NOD SCID小鼠的背部(各组n＝5)。对于具有约250mm3左右的肿瘤体积的小鼠，腹腔内给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植NB-1细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图12所示。如图12所示，可知27-7ADC、34-4ADC对神经母细胞瘤发挥弱的抗肿瘤活性。由组织图像可知，肿瘤以中等程度表达人MEFLIN。
ADC在大肠癌细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
将1.0×107个内源性Meflin阴性人大肠癌(DLD-1)细胞株皮下移植到雌性裸小鼠(BALB/cSlc nu/nu)的背部(各组n＝5)。对于具有约200mm3左右的肿瘤体积的小鼠，腹腔内给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植DLD-1细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图13所示。如图13所示，可知25-1ADC对大肠癌发挥了弱的抗肿瘤活性，21-3ADC不显示抗肿瘤活性。另外，由组织图像可知，大肠癌细胞本身为人MEFLIN阴性，但是在肿瘤间质细胞中确认到小鼠MEFLIN阳性细胞。由于原来的组织为MEFLIN阴性，因此可知，MEFLIN阳性细胞被募集到肿瘤的附近。另外暗示了，ADC对肿瘤发挥抗肿瘤活性。
ADC在胃癌细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
将1.0×107个内源性Meflin阴性人胃癌(MKN45)细胞株皮下移植到雌性裸小鼠(BALB/cSlc nu/nu)的背部(各组n＝5)。对于具有约200mm3左右的肿瘤体积的小鼠，腹腔内给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植MKN45细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图14所示。如图14所示，可知21-3ADC和25-1ADC对胃癌发挥了强的抗肿瘤活性。另外，由组织图像可知，胃癌细胞本身为人MEFLIN阴性，但是在肿瘤间质细胞中确认到小鼠MEFLIN阳性细胞。由于原来的组织为MEFLIN阴性，因此可知，MEFLIN阳性细胞被募集到肿瘤的附近。另外暗示了，ADC对肿瘤发挥抗肿瘤活性。
小鼠胰腺的单细胞分析
图15中，分析了互联网上公开的来自小鼠胰腺的细胞群的单细胞RNA测序数据(Tabula Muris)(参照非专利文献7)。纵轴、横轴分别所示的tSNE(t-distributedStochastic Neighbor Embedding；t分布随机邻域嵌入)表示将由大量的RNA表达量数据构成的多维数据通过非线性变换压缩成一维而示出的数值。即，图15中，通过将在各个细胞中表达的大量的RNA表达量数据展开为由tSNE1和tSNE2形成的二维平面，从而可以基于基因表达谱对细胞进行聚类。该方法例如可以理解为：圆形符号所示的各个细胞形成了何种细胞簇。由此，通过该聚类方法能够确认表达特定因子的细胞群和表达其它特定因子的细胞群是否一致，在此基础上，还能够确定该细胞群对应于哪个细胞种。图15示出小鼠胰腺星状细胞(Pancreatic stellate cell)表达MEFLIN和组织蛋白酶K这两者，表明在小鼠胰腺中MEFLIN阳性细胞群与组织蛋白酶K阳性细胞群一致(参照图中的箭头)。
小鼠肺的单细胞分析
图16中，分析了互联网上公开的来自小鼠肺的细胞群的单细胞RNA测序数据(Tabula Muris)(参照非专利文献7)。显示出小鼠肺的间质细胞(Stromal cell)表达MEFLIN和组织蛋白酶K这两者，表明在小鼠肺中MEFLIN阳性细胞群与组织蛋白酶K阳性细胞群一致(参照图中的箭头)。(参照图中的箭头)。
使CHO细胞表达全长的小鼠MEFLIN蛋白，尝试对其细胞溶解液进行蛋白质印迹。结果如图17所示。如图17所示，通过使CHO细胞表达全长的小鼠MEFLIN蛋白，内源性组织蛋白酶K的表达增强。
骨肉瘤组织的免疫荧光双重染色法
图18示出对皮下移植了骨肉瘤细胞株(HsOs1)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织进行使用抗MEFLIN单克隆抗体和抗组织蛋白酶K抗体的免疫荧光双重染色法的结果。显示出在MEFLIN阳性细胞(绿色)的周围分泌有组织蛋白酶K(红色)(箭头)。
结果如图18所示。如图18所示，能够确认在MEFLIN阳性细胞(绿色)的周围存在组织蛋白酶K(红色)(放大图的箭头)。
胰腺癌组织的免疫荧光双重染色法
图19示出对皮下移植了胰腺癌细胞株(BxPC-3)的荷瘤模型小鼠的肿瘤组织进行使用抗MEFLIN单克隆抗体和抗组织蛋白酶K抗体的免疫荧光双重染色法的结果。显示出在MEFLIN阳性细胞(绿色)的周围分泌有组织蛋白酶K(红色)(箭头)。
结果如图19所示。如图19所示，可确认在MEFLIN阳性细胞(绿色)的周围存在组织蛋白酶K(红色)(放大图的箭头)。
由此可知，在将人MEFLIN阴性癌细胞移植给小鼠时，会将MEFLIN阳性细胞募集到含有该癌细胞的组织中，另外可知，利用以被募集的MEFLIN阳性细胞为靶的ADC处置癌是有益的。还获知，对于以人MEFLIN蛋白为靶的ADC而言，内化活性并非必需。另外认为，在含有MEFLIN蛋白阳性细胞的间质中，存在组织蛋白酶等切断缬氨酸-瓜氨酸接头的酶，由此，未被摄入到细胞内的ADC显示出细胞毒性。
ADC在胆管癌细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
将1.0×107个内源性Meflin阴性人胆管癌(HuCCT1)细胞株皮下移植到雌性NODSCID小鼠的背部(各组n＝5)。对于具有约250mm3左右的肿瘤体积的小鼠，尾静脉给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药3次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植HuCCT1细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图20所示。如图20的组织图像所示，胆管癌细胞本身为MEFLIN阴性，但是在肿瘤间质细胞中确认到小鼠MEFLIN阳性细胞。另外可知，21-3ADC和25-1ADC对胆管癌发挥了强力的抗肿瘤活性。由于原来的组织为MEFLIN阴性，因此可知，MEFLIN阳性细胞被募集到肿瘤的附近。另外暗示了，ADC对肿瘤发挥抗肿瘤活性。
ADC在膀胱癌细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
将1.0×107个内源性Meflin阴性人膀胱癌(T24)细胞株皮下移植到雌性NOD SCID小鼠的背部(各组n＝4)。对于具有约300mm3左右的肿瘤体积的小鼠，尾静脉给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植T24细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图21所示。如图21的组织图像所示，膀胱癌细胞本身为MEFLIN阴性，但是在肿瘤间质细胞中确认到小鼠MEFLIN阳性细胞。另外可知，21-3ADC和25-1ADC对膀胱癌发挥弱的抗肿瘤活性。由于原来的组织为MEFLIN阴性，因此可知，MEFLIN阳性细胞被募集到肿瘤的附近。另外暗示了，ADC对肿瘤发挥抗肿瘤活性。
ADC在卵巢癌细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
将1.0×107个内源性Meflin阴性人卵巢癌(OV-90)细胞株皮下移植到雌性NODSCID小鼠的背部(各组n＝5)。对于具有约100mm3左右的肿瘤体积的小鼠，腹腔内给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植OV-90细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图22所示。如图22的组织图像所示，卵巢癌细胞本身为MEFLIN阴性，但是在肿瘤间质细胞中确认到小鼠MEFLIN阳性细胞。另外可知，21-3ADC和25-1ADC对卵巢癌发挥了强力的抗肿瘤活性。由于原来的组织为MEFLIN阴性，因此可知，MEFLIN阳性细胞被募集到肿瘤的附近。另外暗示了，ADC对肿瘤发挥抗肿瘤活性。
ADC在食道癌细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
将1.0×107个内源性Meflin阴性人食道癌(KYSE)细胞株皮下移植到雌性NODSCID小鼠的背部(各组n＝5)。对于具有约200mm3左右的肿瘤体积的小鼠，腹腔内给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植KYSE细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图23所示。如图23的组织图像所示，食道癌细胞本身为MEFLIN阴性，但是在肿瘤间质细胞中确认到小鼠MEFLIN阳性细胞。另外可知，21-3ADC和25-1ADC对食道癌发挥了强力的抗肿瘤活性。由于原来的组织为MEFLIN阴性，因此可知，MEFLIN阳性细胞被募集到肿瘤的附近。另外暗示了，ADC对肿瘤发挥抗肿瘤活性。
ADC在骨肉瘤细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
将1.0×107个内源性Meflin阳性骨肉瘤(HsOs1)细胞株皮下移植到雌性NOD SCID小鼠的背部(各组n＝4)。对于具有约250mm3左右的肿瘤体积的小鼠，尾静脉给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植HsOs1细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图24所示。如图24所示，可知46-3ADC对骨肉瘤发挥了强力的抗肿瘤活性。另外，肿瘤以中等程度表达人MEFLIN(参考：图9)。
ADC在乳腺癌细胞株的皮下移植模型中的细胞毒性
将1.0×107个内源性Meflin阴性人乳腺癌(MCF-7)细胞株皮下移植到雌性裸小鼠(BALB/cSlc nu/nu)的背部(各组n＝5)。对于具有约300mm3左右的肿瘤体积的小鼠，尾静脉给药ADC(5mg/kg体重、以4天的间隔总计给药5次)。测定肿瘤的长度(L)和宽度(W)时，使用电子游标卡尺进行测定，按照V＝L×W2×0.52来计算体积。另外，对于通过移植MCF-7细胞株而形成的肿瘤进行了ISH染色。
结果如图25所示。如图25的组织图像所示，乳腺癌细胞本身为MEFLIN阴性，但是在肿瘤间质细胞中确认到小鼠MEFLIN阳性细胞。另外可知，21-3ADC和25-1ADC对乳腺癌发挥弱的抗肿瘤活性。由于原来的组织为MEFLIN阴性，因此可知，MEFLIN阳性细胞被募集到肿瘤的附近。另外暗示了，ADC对肿瘤发挥抗肿瘤活性。
人胰腺癌组织的免疫组织染色的妥当性评价
作为对象样品，使用人胰腺癌手术样本的连续切片。对于人胰腺癌手术样本的连续切片，实施使用抗MEFLIN抗体的免疫组织染色，通过对人组织使用抗MEFLIN抗体来确认MEFLIN的表达。另外，对该连续切片，利用原位杂交确认人MEFLIN的mRNA的表达。
结果如图26所示。在人胰腺癌组织的免疫组织染色中变为MEFLIN阳性的细胞与在原位杂交中变为MEFLIN阳性的细胞相同，通过对人组织实施使用抗MEFLIN抗体的免疫组织染色，可确认MEFLIN的表达。箭头分别表示人胰腺癌组织中通过免疫组织染色确认到的MEFLIN(图26的上图)、和通过原位杂交确认到的MEFLIN(图26的下图)。图26的上图和下图的箭头位置分别一致，指向相同细胞。
序列表
<110> 国立大学法人东海国立大学机构
医疗法人创和会
<120> 用于对患癌的对象处置癌的抗MEFLIN抗体和含有该抗体的药物组合物
<130> PT86-9009WO
<150> JP 2020-016535
<151> 2020-02-03
<160> 136
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-7 HCDR1
<400> 1
Lys Tyr Trp Met Asp
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-7 HCDR2
<400> 2
Glu Ile Asn Thr Asp Gly Ser Lys Thr Asn Tyr Ala Pro Ser Ile Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 3
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-7 HCDR3
<400> 3
Trp Glu Asp Tyr
1
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-7 LCDR1
<400> 4
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-7 LCDR2
<400> 5
Gln Val Ser Asn Leu Asp Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-7 LCDR3
<400> 6
Ala Gln Thr Thr His Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 7
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-7 重链可变区
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ser Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Trp Met Asp Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Thr Asp Gly Ser Lys Thr Asn Tyr Ala Pro Ser Ile
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Asn Val Lys Ser Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Asn Trp Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 8
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-7 轻链可变区
<400> 8
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Val Ala Ile Gly
1 5 10 15
Gln Ser Val Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu His Trp Leu Leu Gln Ser Ser Gly Arg Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Gln Val Ser Asn Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Thr Gly Ser Gln Lys Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Lys Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Thr
85 90 95
Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 34-4 HCDR1
<400> 9
Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Asp
1 5
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 34-4 HCDR2
<400> 10
Ile Trp Gly Asn Gly Asn Thr
1 5
<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 34-4 HCDR3
<400> 11
Thr Gly Gly Tyr Phe Tyr
1 5
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 34-4 LCDR1
<400> 12
Gln Ser Leu Val Gly Thr Gly Gly Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 34-4 LCDR2
<400> 13
Leu Val Ser
1
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 34-4 LCDR3
<400> 14
Leu Gln Gly Thr His Phe Pro Phe Thr
1 5
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 34-4 重链可变区
<400> 15
Gln Val Gln Leu Met Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Asn Gly Asn Thr His Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asn Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Gly Gly Tyr Phe Tyr Trp Gly Gln Gly Val Thr Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 16
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 34-4 轻链可变区
<400> 16
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Val Ser Leu Ser Val Ala Ile Gly
1 5 10 15
His Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Thr
20 25 30
Gly Gly Lys Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Ile Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Gln Leu Glu Met Lys
100 105 110
<210> 17
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-8 HCDR1
<400> 17
Gly Tyr Thr Ile Thr Ser Gly Tyr
1 5
<210> 18
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-8 HCDR2
<400> 18
Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-8 HCDR3
<400> 19
Ser Arg Asp Ile Ala Ala Ile Ser Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 20
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-8 LCDR1
<400> 20
Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 21
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-8 LCDR2
<400> 21
Lys Val Ser
1
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-8 LCDR3
<400> 22
Phe Gln Ala Thr His Val Pro Leu Thr
1 5
<210> 23
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-8 重链可变区
<400> 23
Val Gln Leu Thr Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Ser
1 5 10 15
Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Thr Ile Thr Ser Gly Tyr
20 25 30
Asp Trp Ser Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Met Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Arg Asp Ile Ala Ala Ile Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 27-8 轻链可变区
<400> 24
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Val Ala Gln Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 25
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 46-3 HCDR1
<400> 25
Gly Tyr Thr Ile Thr Ser Gly Tyr
1 5
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 46-3 HCDR2
<400> 26
Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 46-3 HCDR3
<400> 27
Ala Arg Asp Phe Ser Gly Ile Ser Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 46-3 LCDR1
<400> 28
Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 29
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 46-3 LCDR2
<400> 29
Lys Val Ser
1
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 46-3 LCDR3
<400> 30
Phe Gln Ala Thr His Asp Pro Leu Thr
1 5
<210> 31
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 46-3 重链可变区
<400> 31
Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Ser
1 5 10 15
Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Thr Ile Thr Ser Gly Tyr
20 25 30
Asp Trp Ser Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Met Glu Trp Met
35 40 45
Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Ser Thr His His Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe Phe Leu
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Phe Ser Gly Ile Ser Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Ser Val Ser Ser
115
<210> 32
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 46-3 轻链可变区
<400> 32
Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Val Ala Gln Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Thr His Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-3 HCDR1
<400> 33
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly
1 5
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-3 HCDR2
<400> 34
Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Ser Thr
1 5
<210> 35
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-3 HCDR3
<400> 35
Ala Arg Val Glu Tyr Arg Phe Ser Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 36
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-3 LCDR1
<400> 36
Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
1 5
<210> 37
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-3 LCDR2
<400> 37
Asn Thr Asn
1
<210> 38
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-3 LCDR3
<400> 38
Leu Gln Arg Asn Ser Trp Leu Thr
1 5
<210> 39
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-3 重链可变区
<400> 39
Val Gln Leu Met Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser
1 5 10 15
Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Gly
20 25 30
Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
35 40 45
Thr Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Glu Tyr Arg Phe Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val
100 105 110
Thr Ala Thr Val Ser Ser
115
<210> 40
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-3 轻链可变区
<400> 40
Asp Val Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asn Asn Leu His Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln Arg Asn Ser Trp Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 41
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 25-1 HCDR1
<400> 41
Gly Phe Asp Phe Lys Thr Tyr Ala
1 5
<210> 42
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 25-1 HCDR2
<400> 42
Ile Ser Ile Lys Thr Gln Asn Tyr Pro Thr
1 5 10
<210> 43
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 25-1 HCDR3
<400> 43
Thr Val Gly Ala Arg Tyr
1 5
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 25-1 LCDR1
<400> 44
Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 45
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 25-1 LCDR2
<400> 45
Leu Val Ser
1
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 25-1 LCDR3
<400> 46
Val Gln Ser Thr His Ala Pro Leu Thr
1 5
<210> 47
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 25-1 重链可变区
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Lys Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ile Lys Thr Gln Asn Tyr Pro Thr Leu Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Glu Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Met
65 70 75 80
Val Tyr Leu His Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Val Gly Ala Arg Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Thr Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 48
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 25-1 轻链可变区
<400> 48
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Thr Leu Ser Ala Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Gln Val Leu Ile Tyr Leu Val Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asn Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Gly Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Val Gln Ser
85 90 95
Thr His Ala Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 49
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 41-10 HCDR1
<400> 49
Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Asp
1 5
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 41-10 HCDR2
<400> 50
Ile Trp Gly Asn Gly Asn Thr
1 5
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 41-10 HCDR3
<400> 51
Thr Arg Ser Leu Gly Val Gly
1 5
<210> 52
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 41-10 LCDR1
<400> 52
Gln Asp Ile Gly Asp Tyr
1 5
<210> 53
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 41-10 LCDR2
<400> 53
Gly Ala Thr
1
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 41-10 LCDR3
<400> 54
Leu Gln Ser Lys Glu Ser Pro Cys Ser Arg
1 5 10
<210> 55
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 41-10 重链可变区
<400> 55
Gln Val Gln Leu Thr Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Asn Gly Asn Thr His Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Arg Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Arg Ser Leu Gly Val Gly Trp Gly Gln Gly Val Met Ile Ile Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 56
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 41-10 轻链可变区
<400> 56
Val Gln Met Thr Gln Ala Pro Ser Ser Leu Pro Ala Ser Leu Gly Asp
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asp Tyr Leu
20 25 30
Arg Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Arg Leu Met Ile Tyr
35 40 45
Gly Ala Thr Asn Leu Ala Ala Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Glu
65 70 75 80
Asp Met Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Lys Glu Ser Pro Cys Ser
85 90 95
Arg Ser Val Leu Gly Pro Asn Trp Arg Ser Asn
100 105
<210> 57
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 35-9 HCDR1
<400> 57
Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 58
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 35-9 HCDR2
<400> 58
Ile Trp Gly Asn Gly Asn Thr
1 5
<210> 59
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 35-9 HCDR3
<400> 59
Ala Arg Trp Glu Ser Gly Asp Tyr
1 5
<210> 60
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 35-9 LCDR1
<400> 60
Gln Ser Leu Val Gly Ser Gly Gly Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 61
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 35-9 LCDR2
<400> 61
Leu Val Ser
1
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 35-9 LCDR3
<400> 62
Leu Gln Gly Thr His Phe Pro Trp Thr
1 5
<210> 63
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 35-9 重链可变区
<400> 63
Gln Val Gln Leu Thr Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ile Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Thr Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ile Leu Gln Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Trp Glu Ser Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Thr Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 64
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 35-9 轻链可变区
<400> 64
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Val Ser Leu Ser Val Ala Val Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Thr Ser Ser Gln Ser Leu Val Gly Ser
20 25 30
Gly Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Ser Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Ile Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Gln Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 65
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2 HCDR1
<400> 65
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly
1 5
<210> 66
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2 HCDR2
<400> 66
Ile Ser Ser Leu Ala Tyr Thr Val
1 5
<210> 67
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2 HCDR3
<400> 67
Ala Arg Phe Pro Val Glu Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2 LCDR1
<400> 68
Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Ile Ser Phe
1 5 10
<210> 69
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2 LCDR2
<400> 69
Ala Ala Ser
1
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2 LCDR3
<400> 70
Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Pro Thr
1 5
<210> 71
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2 重链可变区
<400> 71
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly
20 25 30
Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Ala
35 40 45
Phe Ile Ser Ser Leu Ala Tyr Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Thr
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Pro Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 72
<211> 97
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2 轻链可变区
<400> 72
Ile Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp
1 5 10 15
Asn Tyr Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln
20 25 30
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val
35 40 45
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn
50 55 60
Ile His Pro Met Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln
65 70 75 80
Ser Lys Glu Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
85 90 95
Lys
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 11-8 HCDR1
<400> 73
Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Ile
1 5
<210> 74
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 11-8 HCDR2
<400> 74
Ile Asn Pro Tyr Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 75
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 11-8 HCDR3
<400> 75
Ala Arg Asp Gly Asp Asp Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 11-8 LCDR1
<400> 76
Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 77
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 11-8 LCDR2
<400> 77
Lys Val Ser
1
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 11-8 LCDR3
<400> 78
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 79
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 11-8 重链可变区
<400> 79
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Ile
20 25 30
Ile Leu Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Asn Ile Asn Pro Tyr Ser Gly Asn Thr Arg Tyr Asn Leu Lys Phe Lys
50 55 60
Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Asp Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 80
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 11-8 轻链可变区
<400> 80
Asp Ile Val Ile Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Thr Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 81
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16-5 HCDR1
<400> 81
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly
1 5
<210> 82
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16-5 HCDR2
<400> 82
Ile Ser Ser Leu Ala Tyr Thr Val
1 5
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16-5 HCDR3
<400> 83
Ala Arg Phe Pro Val Glu Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16-5 LCDR1
<400> 84
Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 85
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16-5 LCDR2
<400> 85
Lys Val Ser
1
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16-5 LCDR3
<400> 86
Ser Gln Ser Thr His Phe Leu Thr
1 5
<210> 87
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16-5 重链可变区
<400> 87
Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly
20 25 30
Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Ala
35 40 45
Phe Ile Ser Ser Leu Ala Tyr Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Thr
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Pro Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 88
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 16-5 轻链可变区
<400> 88
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Phe Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 89
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19-7 HCDR1
<400> 89
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 90
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19-7 HCDR2
<400> 90
Ile Tyr Pro Cys Asn Gly Arg Thr
1 5
<210> 91
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19-7 HCDR3
<400> 91
Ala Arg Trp Asp Trp Val Phe Asp Tyr
1 5
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19-7 LCDR1
<400> 92
Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr
1 5 10
<210> 93
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19-7 LCDR2
<400> 93
Leu Val Ser
1
<210> 94
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19-7 LCDR3
<400> 94
Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg
1 5
<210> 95
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19-7 重链可变区
<400> 95
Gln Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Asp Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Tyr Pro Cys Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asp Trp Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 96
<211> 85
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 19-7 轻链可变区
<400> 96
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp
1 5 10 15
Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val
20 25 30
Ser Asn Pro Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
35 40 45
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala
50 55 60
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg Ser Glu Gly
65 70 75 80
Gly Pro Ser Trp Lys
85
<210> 97
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-3 HCDR1
<400> 97
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly
1 5
<210> 98
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-3 HCDR2
<400> 98
Ile Ser Ser Leu Ala Tyr Thr Val
1 5
<210> 99
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-3 HCDR3
<400> 99
Ala Arg Phe Pro Val Glu Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 100
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-3 LCDR1
<400> 100
Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr
1 5 10
<210> 101
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-3 LCDR2
<400> 101
Leu Val Ser
1
<210> 102
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-3 LCDR3
<400> 102
Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg
1 5
<210> 103
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-3 重链可变区
<400> 103
Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Gly
20 25 30
Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Ala
35 40 45
Phe Ile Ser Ser Leu Ala Tyr Thr Val Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Thr
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe Leu
65 70 75 80
Glu Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Phe Pro Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 104
<211> 85
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-3 轻链可变区
<400> 104
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp
1 5 10 15
Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val
20 25 30
Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
35 40 45
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala
50 55 60
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg Ser Glu Gly
65 70 75 80
Gly Pro Ser Trp Lys
85
<210> 105
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 23-1 HCDR1
<400> 105
Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Ile
1 5
<210> 106
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 23-1 HCDR2
<400> 106
Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr
1 5
<210> 107
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 23-1 HCDR3
<400> 107
Ala Arg Asp Gly Thr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 108
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 23-1 LCDR1
<400> 108
Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr
1 5 10
<210> 109
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 23-1 LCDR2
<400> 109
Leu Val Ser
1
<210> 110
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 23-1 LCDR3
<400> 110
Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg
1 5
<210> 111
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 23-1 重链可变区
<400> 111
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr Ile
20 25 30
Met Leu Trp Leu Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Asn Ile Asn Pro Tyr Tyr Gly Ser Thr Arg Tyr Asn Leu Lys Phe Lys
50 55 60
Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met
65 70 75 80
Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Thr Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 112
<211> 85
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 23-1 轻链可变区
<400> 112
Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp
1 5 10 15
Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val
20 25 30
Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
35 40 45
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala
50 55 60
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg Ser Glu Gly
65 70 75 80
Gly Pro Ser Trp Lys
85
<210> 113
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 8-2 HCDR1
<400> 113
Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 114
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 8-2 HCDR2
<400> 114
Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr
1 5
<210> 115
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 8-2 HCDR3
<400> 115
Ala Arg Ser Arg Thr Gly Gly Asn Gly Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 116
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 8-2 LCDR1
<400> 116
Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr
1 5 10
<210> 117
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 8-2 LCDR2
<400> 117
Leu Val Ser
1
<210> 118
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 8-2 LCDR3
<400> 118
Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg
1 5
<210> 119
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 8-2 重链可变区
<400> 119
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Ile Thr Asp Tyr Tyr
20 25 30
Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
50 55 60
Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met
65 70 75 80
Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Arg Thr Gly Gly Asn Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 120
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 8-2 轻链可变区
<400> 120
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Tyr Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg
85 90 95
Glu Leu Thr Arg Ser Glu Gly Gly Pro Ser Trp Lys
100 105
<210> 121
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13-1 HCDR1
<400> 121
Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe
1 5
<210> 122
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13-1 HCDR2
<400> 122
Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr
1 5
<210> 123
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13-1 HCDR3
<400> 123
Ala Lys Trp Asp Leu Tyr Asp Gly Tyr Phe Arg Asp Tyr
1 5 10
<210> 124
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13-1 LCDR1
<400> 124
Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr
1 5 10
<210> 125
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13-1 LCDR2
<400> 125
Leu Val Ser
1
<210> 126
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13-1 LCDR3
<400> 126
Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg
1 5
<210> 127
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13-1 重链可变区
<400> 127
Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe
20 25 30
Met Asn Trp Val Met Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Arg Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
50 55 60
Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala His Met
65 70 75 80
Glu Leu Arg Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Trp Asp Leu Tyr Asp Gly Tyr Phe Arg Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 128
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13-1 轻链可变区
<400> 128
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Tyr Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg
85 90 95
Glu Leu Thr Arg Ser Glu Gly Gly Pro Ser Trp Lys
100 105
<210> 129
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 32-1 HCDR1
<400> 129
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 130
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 32-1 HCDR2
<400> 130
Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr
1 5
<210> 131
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 32-1 HCDR3
<400> 131
Val Ile Asp Tyr Asp Val Met Asp Tyr
1 5
<210> 132
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 32-1 LCDR1
<400> 132
Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 133
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 32-1 LCDR2
<400> 133
Trp Ala Ser
1
<210> 134
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 32-1 LCDR3
<400> 134
Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Arg Thr
1 5
<210> 135
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 32-1 重链可变区
<400> 135
Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala
35 40 45
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Val
85 90 95
Ile Asp Tyr Asp Val Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 136
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 32-1 轻链可变区
<400> 136
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Tyr Asn Leu Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110

Claims (18)

1.一种用于处置癌的药物组合物，其含有与MEFLIN结合的抗体与细胞毒性剂的抗体-药物偶联物(ADC)。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述抗体具有内化活性。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中，ADC为抗体和药物通过接头连接而成的ADC，接头具有在细胞内裂解的切割位点。
4.一种与MEFLIN结合的抗体，其选自由以下抗体组成的组：
(1A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有具有序列号1所记载的氨基酸序列的重链CDR1、具有序列号2所记载的氨基酸序列的重链CDR2和具有序列号3所记载的氨基酸序列的重链CDR3，所述轻链可变区含有具有序列号4所记载的氨基酸序列的轻链CDR1、具有序列号5所记载的氨基酸序列的轻链CDR2和具有序列号6所记载的氨基酸序列的轻链CDR3；
(1B)含有具有序列号7所记载的氨基酸序列的重链可变区和具有序列号8所记载的氨基酸序列的轻链可变区的抗体；
(1C)与所述(1B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(1D)与MEFLIN蛋白上与所述(1B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(2A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号9所记载的重链CDR1、序列号10所记载的重链CDR2和序列号11所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号12所记载的轻链CDR1、序列号13所记载的轻链CDR2和序列号14所记载的轻链CDR3；
(2B)具有序列号15所记载的重链可变区和序列号16所记载的轻链可变区的抗体；
(2C)与所述(2B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(2D)与MEFLIN蛋白上与所述(2B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(3A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号17所记载的重链CDR1、序列号18所记载的重链CDR2和序列号19所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号20所记载的轻链CDR1、序列号21所记载的轻链CDR2和序列号22所记载的轻链CDR3；
(3B)具有序列号23所记载的重链可变区和序列号24所记载的轻链可变区的抗体；
(3C)与所述(3B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(3D)与MEFLIN蛋白上与所述(3B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(4A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号25所记载的重链CDR1、序列号26所记载的重链CDR2和序列号27所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号28所记载的轻链CDR1、序列号29所记载的轻链CDR2和序列号30所记载的轻链CDR3；
(4B)具有序列号31所记载的重链可变区和序列号32所记载的轻链可变区的抗体；
(4C)与所述(4B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(4D)与MEFLIN蛋白上与所述(4B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(5A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号33所记载的重链CDR1、序列号34所记载的重链CDR2和序列号35所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号36所记载的轻链CDR1、序列号37所记载的轻链CDR2和序列号38所记载的轻链CDR3；
(5B)具有序列号39所记载的重链可变区和序列号40所记载的轻链可变区的抗体；
(5C)与所述(5B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(5D)与MEFLIN蛋白上与所述(5B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(6A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号41所记载的重链CDR1、序列号42所记载的重链CDR2和序列号43所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号44所记载的轻链CDR1、序列号45所记载的轻链CDR2和序列号46所记载的轻链CDR3；
(6B)具有序列号47所记载的重链可变区和序列号48所记载的轻链可变区的抗体；
(6C)与所述(6B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(6D)与MEFLIN蛋白上与所述(6B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(7A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号49所记载的重链CDR1、序列号50所记载的重链CDR2和序列号51所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号52所记载的轻链CDR1、序列号53所记载的轻链CDR2和序列号54所记载的轻链CDR3；
(7B)具有序列号55所记载的重链可变区和序列号56所记载的轻链可变区的抗体；
(7C)与所述(7B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(7D)与MEFLIN蛋白上与所述(7B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(8A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号57所记载的重链CDR1、序列号58所记载的重链CDR2和序列号59所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号60所记载的轻链CDR1、序列号61所记载的轻链CDR2和序列号62所记载的轻链CDR3；
(8B)具有序列号63所记载的重链可变区和序列号64所记载的轻链可变区的抗体；
(8C)与所述(8B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(8D)与MEFLIN蛋白上与所述(8B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(9A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号65所记载的重链CDR1、序列号66所记载的重链CDR2和序列号67所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号68所记载的轻链CDR1、序列号69所记载的轻链CDR2和序列号70所记载的轻链CDR3；
(9B)具有序列号71所记载的重链可变区和序列号72所记载的轻链可变区的抗体；
(9C)与所述(9B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(9D)与MEFLIN蛋白上与所述(9B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(10A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号73所记载的重链CDR1、序列号74所记载的重链CDR2和序列号75所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号76所记载的轻链CDR1、序列号77所记载的轻链CDR2和序列号78所记载的轻链CDR3；
(10B)具有序列号79所记载的重链可变区和序列号80所记载的轻链可变区的抗体；
(10C)与所述(10B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(10D)与MEFLIN蛋白上与所述(10B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(11A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号81所记载的重链CDR1、序列号82所记载的重链CDR2和序列号83所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号84所记载的轻链CDR1、序列号85所记载的轻链CDR2和序列号86所记载的轻链CDR3；
(11B)具有序列号87所记载的重链可变区和序列号88所记载的轻链可变区的抗体；
(11C)与所述(11B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(11D)与MEFLIN蛋白上与所述(11B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(12A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号89所记载的重链CDR1、序列号90所记载的重链CDR2和序列号91所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号92所记载的轻链CDR1、序列号93所记载的轻链CDR2和序列号94所记载的轻链CDR3；
(12B)具有序列号95所记载的重链可变区和序列号96所记载的轻链可变区的抗体；
(12C)与所述(12B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(12D)与MEFLIN蛋白上与所述(12B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(13A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号97所记载的重链CDR1、序列号98所记载的重链CDR2和序列号99所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号100所记载的轻链CDR1、序列号101所记载的轻链CDR2和序列号102所记载的轻链CDR3；
(13B)具有序列号103所记载的重链可变区和序列号104所记载的轻链可变区的抗体；
(13C)与所述(13B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(13D)与MEFLIN蛋白上与所述(13B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(14A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号105所记载的重链CDR1、序列号106所记载的重链CDR2和序列号107所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号108所记载的轻链CDR1、序列号109所记载的轻链CDR2和序列号110所记载的轻链CDR3；
(14B)具有序列号111所记载的重链可变区和序列号112所记载的轻链可变区的抗体；
(14C)与所述(14B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(14D)与MEFLIN蛋白上与所述(14B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(15A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号113所记载的重链CDR1、序列号114所记载的重链CDR2和序列号115所记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号116所记载的轻链CDR1、序列号117所记载的轻链CDR2和序列号118所记载的轻链CDR3；
(15B)具有序列号119所记载的重链可变区和序列号120所记载的轻链可变区的抗体；
(15C)与所述(15B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(15D)与MEFLIN蛋白上与所述(15B)的抗体重叠的表位结合的抗体；
(16A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号121所记载的重链CDR1、序列号122所记载的重链CDR2和序列号123记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号124所记载的轻链CDR1、序列号125所记载的轻链CDR2和序列号126所记载的轻链CDR3；
(16B)具有序列号127所记载的重链可变区和序列号128所记载的轻链可变区的抗体；
(16C)与所述(16B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(16D)与MEFLIN蛋白上与所述(16B)的抗体重叠的表位结合的抗体；以及
(17A)具有重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区含有序列号129所记载的重链CDR1、序列号130所记载的重链CDR2和序列号131记载的重链CDR3，所述轻链可变区含有序列号132所记载的轻链CDR1、序列号133所记载的轻链CDR2和序列号134所记载的轻链CDR3；
(17B)具有序列号135所记载的重链可变区和序列号136所记载的轻链可变区的抗体；
(17C)与所述(17B)的抗体竞争与MEFLIN蛋白的结合的抗体；以及
(17D)与MEFLIN蛋白上与所述(17B)的抗体重叠的表位结合的抗体。
5.一种药物组合物，其含有权利要求4所述的抗体与细胞毒性剂的抗体-药物偶联物(ADC)。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其用于处置癌。
7.根据权利要求1～3和6中任一项所述的药物组合物，其中，癌为肉瘤。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中，癌为MEFLIN阳性肉瘤。
9.根据权利要求7或8所述的药物组合物，其中，肉瘤为选自由黏液纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、恶性外周神经鞘瘤、尤文肉瘤、上皮样肉瘤、透明细胞肉瘤、滑膜肉瘤和骨肉瘤组成的组中的肉瘤。
10.根据权利要求1～3和6中任一项所述的药物组合物，其中，癌为恶性上皮肿瘤。
11.根据权利要求1～3和6中任一项所述的药物组合物，其中，癌为选自由乳腺癌、胰腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌、胆管癌、卵巢癌、膀胱癌和食道癌组成的组中的癌。
12.根据权利要求1～3、6、10和11中任一项所述的药物组合物，其中，癌为MEFLIN阴性，该癌周围的间质含有MEFLIN阳性的细胞。
13.根据权利要求10～12中任一项所述的药物组合物，其中，抗体不具有内化活性。
14.根据权利要求7～9中任一项所述的药物组合物，其中，抗体具有内化活性。
15.根据权利要求13所述的药物组合物，其中，ADC为抗体和药物通过接头连接而成的ADC，接头为裂解性接头。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中，接头为利用组织蛋白酶K裂解的裂解性接头。
17.根据权利要求16所述的药物组合物，其中，接头含有缬氨酸-瓜氨酸二肽，在组织蛋白酶K存在下被切断。
18.根据上述中任一项所述的药物组合物，其中，接头为非裂解性接头。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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EP3383909B1 (en) * 2015-11-30 2020-06-17 AbbVie Inc. Anti-human lrrc15 antibody drug conjugates and methods for their use
CA3006610A1 (en) * 2015-11-30 2017-06-08 Abbvie Inc. Anti-hulrrc15 antibody drug conjugates and methods for their use
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116693682A (zh) * 2023-06-02 2023-09-05 涌源合生科技(深圳)有限公司 抗Tau蛋白抗体及其制备方法和用途
CN116693682B (zh) * 2023-06-02 2024-04-19 涌源合生科技(深圳)有限公司 抗Tau蛋白抗体及其制备方法和用途

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