CN115260237A - Egfr降解剂和相关使用方法 - Google Patents

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Abstract

本文提供了一种用于制备新型双功能化合物的方法，所述化合物通过将EGFR抑制剂部分与E3连接酶配体部分缀合而形成，所述化合物的功能是将靶向蛋白募集到E3泛素连接酶以进行降解。本公开还提供了药学上可接受的组合物，包括用于治疗EGFR突变相关癌症的化合物和方法。

Description

EGFR降解剂和相关使用方法
技术领域
本文提供了一种用于制备新型双功能化合物的方法，所述化合物通过将EGFR抑制剂部分与E3连接酶配体部分缀合而形成，所述化合物的功能是将靶向蛋白募集到E3泛素连接酶以进行降解。本公开还提供了包含化合物的药学上可接受的组合物和用于治疗EGFR突变体相关癌症的方法。
背景技术
蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)由两种共价连接的蛋白结合分子组成：一种分子能够接合E3泛素连接酶，而另一种分子结合目标蛋白(POI)，即旨在降解的靶标(Sakamoto KM等人，Proc.Natl.Acad.Sci.2001，98：8554-9.；Sakamoto K.M.等人，MethodsEnzymol.2005；399：833-847.)。相比于抑制靶蛋白的酶促活性，将E3连接酶募集到特定的不想要的蛋白上，可导致靶蛋白的泛素化以及后续蛋白酶体对靶蛋白的降解。泛素化和蛋白酶体降解的整个过程被称为泛素-蛋白酶体途径(UPP)(Ardley H.等人，EssaysBiochem.2005，41，15-30；Komander D.等人，Biochem.2012，81，203-229；Grice G.L.等人，Cell Rep.2015，12，545-553；Swatek K.N.等人，Cell Res.2016，26，399-422)。蛋白酶体是将不需要的、错误折叠的或异常的蛋白质降解成小肽以维持细胞的健康和生产力的蛋白质复合物。泛素连接酶(也称为E3泛素连接酶)直接催化泛素从E2转移到靶蛋白以进行降解。尽管人类基因组编码超过600种推定的E3连接酶，但只有有限数量的E3泛素连接酶被小分子PROTAC技术广泛应用：cereblon(CRBN)、Von Hippel-Lindau(VHL)、小鼠双微体2同源物(MDM2)和细胞凋亡抑制蛋白(cIAP)(Philipp O.等人，Chem.Biol.2017，12，2570-2578)、重组人环指蛋白114(RNF114)(Spradlin，J.N.等人，Nat.Chem.Biol.2019，15，747-755)以及DDB1和CUL4相关因子16(DCAF16)(Zhang，X.等人，Nat.Chem.Biol.2019，15，737-746)。例如，cereblon(CRBN)与受损的DNA结合蛋白1(DDB1)和Cullin-4A(CUL4A)形成E3泛素连接酶复合物以使许多其它蛋白质泛素化，然后经由蛋白酶体降解。(Yi-An Chen等人，Scientific Reports 2015，5，1-13)。免疫调节药物(IMiD)，包括沙利度胺(thalidomide)、来那度胺(lenalidomide)和泊马度胺(pomalidomide)，通过与CRL4ACRBN E3连接酶复合物的cereblon(CRBN)亚单位结合并募集新底物蛋白而充当PPI的单价促进剂。(Matyskiela，M.E.等人，Nat Chem Biol 2018，14，981-987)。因此，沙利度胺及其衍生物募集CRBN的能力已被广泛应用于蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)相关研究(Christopher T.等人，ACSChem.Biol.2019，14，342-347.；Honorine L.等人，ACS Cent.Sci.2016，2，927-934)。PROTAC具有消除传统抑制剂“不可药化(undruggable)”或作为非酶蛋白质的蛋白质靶标的巨大潜力。(Chu TT.等人，Cell Chem Biol.2016；23：453-461.Qin C.等人，J Med Chem2018；61：6685-6704.Winter GE.等人，Science2015；348：1376-1381)。近年来，PROTAC作为有用的调节剂促进多种靶蛋白的选择性降解已在抗肿瘤研究中报道(Lu J.等人，ChemBiol.2015；22(6)：755-763；Ottis P.等人，Chem Biol.2017；12(4)：892-898.；Crews C.M.等人，J Med Chem.2018；61(2)：403-404；Neklesa T.K.等人，Pharmacol Ther.2017，174：138-144.；Cermakova K.等人，Molecules，2018.23(8).；An S.等人，EBioMedicine，2018.；Lebraud H.等人，Essays Biochem.2017；61(5)：517-527.；Sun Y.H.等人，Cell Res.2018；28：779-81；Toure M.等人，Angew Chem Iht Ed Engl.2016；55(6)：1966-1973；YonghuiSun等人，Leukemia，第33卷，第2105-2110页(2019)；Shaodong Liu等人，MedicinalChemistryResearch，第29卷，第802-808页(2020))；并且已经在专利公布，例如US20160045607、US20170008904、US20180050021、US20180072711、WO2002020740、WO2014108452、WO2016146985、WO2016149668、WO2016197032、WO2016197114、WO2017011590、WO2017030814、WO2017079267、WO2017182418、WO2017197036、WO2017197046、WO2017197051、WO2017197056、WO2017201449和WO2018071606中公开或讨论。
属于ErbB家族的表皮生长因子受体(EGFR)是跨膜受体酪氨酸激酶(RTK)，其在细胞增殖、分化和运动中起着根本性的关键作用(Y.Yarden等人，Nat.Rev.Mol.CellBiol.2001；2：127-137.)。EGFR和其它ErbB家族成员的同二聚化或异二聚化激活细胞质酪氨酸激酶结构域以启动细胞内信号传导。EGFR的过表达或激活突变与许多类型的癌症，诸如胰腺癌、乳腺癌、多形性成胶质细胞瘤、头颈癌和非小细胞肺癌的发展有关(Yewale C.等人，Biomaterials.2013，34(34)：8690-8707.)。EGFR酪氨酸激酶结构域中的激活突变(L858R突变和外显子19缺失)已被确定为NSCLC的致癌驱动因素(Konduri，K.等人，CancerDiscovery 2016，6(6)，601-611.)。第一代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼(gefitinib)和厄洛替尼(erlotinib)已被批准用于具有EGFR激活突变的NSCLC患者(M.Maemondo，N.Engl.J.Med.362(2010)2380-2388.)。虽然大多数患有EGFR突变型NSCLC的患者对这些治疗有应答，但患者通常在平均一年的治疗后产生耐药性。对吉非替尼和厄洛替尼产生获得性耐药性的机制有若干种，包括二级苏氨酸790至甲硫氨酸790突变(T790M)，也称为“守门员”T790M突变(Xu Y.等人，Cancer Biol Ther.2010，9(8)：572-582.)。因此，第二代EGFR-TKI阿法替尼(afatinib)和第三代EGFR-TKI奥希替尼(osimertinib)(AZD9291)被开发为与Cys797结合的不可逆EGFR抑制剂，用于治疗T790M突变患者。特别地，在具有EGFR T790M突变的NSCLC患者中，基本上不靶向WT EGFR的奥希替尼已经实现了更高的临床应答率。然而，最近的几项研究报道了伴随奥希替尼临床治疗的三级Cys797至Ser797(C797S)点突变(Thress KS等人，Nat.Med.2015，21(6)：560-562.)。需要能够克服非小细胞肺癌(NSCLC)中EGFR(C797S)耐药性障碍的药物。EGFR靶向PROTAC用作克服由这些突变体介导的耐药性的潜在策略，其已经在专利公布，例如WO2018119441、WO2019149922、WO2019183523、WO2019121562、US20190106417和WO202173498中公开或讨论。
尽管如此，已经公开了许多设计用于降解EGFR突变蛋白的EGFR靶向PROTAC(ZhangX.等人，Eur.J.Med.Chem.2020，192，112199.；Zhang H等人，Eur.J.Med.Chem.2020，189，112061.；Lu X，Med.Res.Rev.2018，38(5)：1550-1581.He K.等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.2020，15，127167.)。大多数公开的分子是基于第一代、第二代和第三代EGFR抑制剂。然而，没有数据表明那些EGFR靶向PROTAC降解所有主要的EGFR突变，诸如Del19、L858R、Del19/T790M、L858R/T790M、Del19/T790M/C797S、L858R/T790M/C797S。
本申请提供了用于治疗严重疾病的新型双功能化合物和组合物。
发明内容
方面1.一种合成EGFR蛋白水解靶向嵌合体化合物中间体(I)的方法，
Figure BDA0003624608760000041
Cy1是4-7元饱和或部分不饱和环，所述环除P＝O之外还包含0-3个独立地选自氮、氧或硫的另外的杂原子；所述环任选地被至少一个取代基R1c取代；
R1c选自氢、卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、-CN、-OR1d、-COR1d、-CO2R1d、-CONR1dR1e、-NR1dR1e、-NR1dCOR1e或-NR1dCO2R1e，其中-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基中的每一个任选地被至少一个取代基R1f取代；
R1d、R1e和R1f各自独立地选自氢、羟基、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基；
每次出现时，R2各自独立地选自氢、卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、-CN、-OR2a、-SO2R2a、-SO2NR2aR2b、-COR2a、-CO2R2a、-CONR2aR2b、-NR2aR2b、-NR2aCOR2b、-NR2aCO2R2b或-NR2aSO2R2b，其中-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基中的每一个任选地被至少一个取代基R2d取代；或者
当两个相邻R2与它们所连接的碳原子一起形成5-6元饱和或者部分或完全不饱和(优选完全不饱和，即芳族)环时，所述环包含0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；所述环任选地被至少一个取代基R2e取代；
R2e在每次出现时独立地是氢、卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C1-8烷氧基、-C3-C8环烷基、氧代基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、-CN、-SO2R2a、-SO2NR2aR2b、-COR2a、-CO2R2a、-CONR2aR2b、-NR2aR2b、-NR2aCOR2b、-NR2aCO2R2b或-NR2aSO2R2b，其中-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C1-8烷氧基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基中的每一个任选地被至少一个取代基R2d取代；
R2a和R2b各自独立地选自氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基；
R2d在每次出现时独立地是卤素、-OH、-C1-8烷基、-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、-C6-C12芳基或5元至12元杂芳基；
R3和R4各自独立地选自氢、卤素、-C1-8烷基、-C1-8烷氧基、-C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、-C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、-CN、-COR3a、-CO2R3a、-CONR3aR3b、-NR3aR3b、-NR3aCOR3b、-NR3aCO2R3b，其中-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C1-8烷氧基、-C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、-C6-C12芳基或5元至12元杂芳基中的每一个任选地被卤素、-C1-8烷氧基、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、氧代基、-CN、-OR3c、-COR3c、-CO2R3c、-CONR3cR3d、-NR3cR3d、-NR3cCOR3d或-NR3cCO2R3d取代；
R3a、R3b、R3c和R3d各自独立地是氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、-C6-C12芳基或5元至12元杂芳基；或者
R5选自卤素；
n1是1、2、3或4；
其中所述方法包括步骤(1)、(2)、(3)和(4)：
(1)
Figure BDA0003624608760000061
其中每次出现时R6独立地选自-C1-8烷基；格氏试剂(Grignard reagent)是R7MgBr，其中R7是任选地被至少一个取代基R1c取代的-C2-8烯基；
(2)
Figure BDA0003624608760000062
PG是H或保护基；
(3)
Figure BDA0003624608760000071
其中Cy2是4-7元部分不饱和环，所述环除P＝O之外还包含0-3个独立地选自氮、氧或硫的另外的杂原子；所述环任选地被至少一个取代基R1c取代；
(3a)当PG是非氢保护基时，
Figure BDA0003624608760000072
(4)
Figure BDA0003624608760000073
其中R8是卤素。
方面2.如方面1所述的方法，其中所述方法包括步骤(3b)：
(3b)：
Figure BDA0003624608760000074
其中Cy3是4-7元饱和环，所述环除P＝O之外还包含0-3个独立地选自氮、氧或硫的另外的杂原子；所述环任选地被至少一个取代基R1c取代。
方面3.如方面1所述的方法，其中所述
Figure BDA0003624608760000075
部分选自
Figure BDA0003624608760000076
其中
Figure BDA0003624608760000077
是单键或双键；
每次出现时，R1c具有与方面1中相同的定义；
优选地，所述
Figure BDA0003624608760000081
部分选自
Figure BDA0003624608760000082
Figure BDA0003624608760000083
方面4.如方面1所述的方法，其中R2各自独立地选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、-CN、-OR2a、-SO2R2a、-SO2NR2aR2b、-COR2a、-CO2R2a、-CONR2aR2b、-NR2aR2b、-NR2aCOR2b、-NR2aCO2R2b或-NR2aSO2R2b，其中甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基中的每一个任选地被至少一个取代基R2d取代，
R2a和R2b各自独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、3元至8元杂环基、苯基或5元至12元杂芳基；
R2d在每次出现时独立地是卤素、-OH、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、3元至8元杂环基、苯基或5元至12元杂芳基；
优选地，其中R2各自独立地选自氢、卤素、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基或辛基，优选选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH3、-CH2CH(CH3)2、-C(CH3)3。
方面5.如方面1所述的方法，其中所述
Figure BDA0003624608760000091
部分是
Figure BDA0003624608760000092
Figure BDA0003624608760000093
其中R2e如方面1中所定义。
方面6.如方面5所述的方法，其中R2e在每次出现时独立地是氢、-F、-Cl、-Br、-I、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基或氧代基，其中甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基中的每一个任选地被至少一个取代基R2d取代；
R2d在每次出现时独立地是-F、-Cl、-Br、-I、-OH、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基或苯基；
优选地，R2e在每次出现时独立地是氢、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH3、-CH2CH(CH3)2、-C(CH3)3、
Figure BDA0003624608760000101
Figure BDA0003624608760000102
方面7.如方面1所述的方法，其中所述
Figure BDA0003624608760000103
部分是
Figure BDA0003624608760000104
Figure BDA0003624608760000111
方面8.如方面1所述的方法，其中R3和R4各自独立地选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、-C2H5、-C3H7、-C4H9、-C5H11、-OCH3、-OC2H5、-OC3H7、-OC4H9、-OC5H11、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、苯基或-CN，其中-CH3、-C2H5、-C3H7、-C4H9、-C5H11、-OCH3、-OC2H5、-OC3H7、-OC4H9、-OC5H11、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基或苯基中的每一个任选地被-F、-Cl、-Br、-I、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、氧代基、-CN、-OR3c、-COR3c、-CO2R3c、-CONR3cR3d、-NR3cR3d、-NR3cCOR3d或-NR3cCO2R3d取代；
R3c和R3d各自独立地是氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基。
方面9.如方面1所述的方法，其中R3和R4各自独立地选自H、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、-CF3、-CH2F或-CHF2。
方面10.如方面1所述的方法，其中R5选自-F、-Cl、-Br或-I。
方面11.如方面1所述的方法，其中步骤(1)的溶剂选自醚(优选四氢呋喃、乙醚、异丙醚)、腈(优选乙腈、丙腈)、DMF、DMSO或HMPA；以及/或者R7选自乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基、己烯基，所述乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基、己烯基中的每一个任选地被至少一个取代基R1c取代。
方面12.如方面1所述的方法，其中步骤(2)的催化剂组合物是Pd催化剂和膦配体，优选地，Pd催化剂选自[(肉桂基)PdCl]2、[PdCl(C3H5)]2、Pd(MeCN)2Cl2、Pd(OAc)2、Pd(TFA)2或Pd2(dba)3，以及/或者膦配体选自(n-Bu)3P HBF4、(o-tol)3P、(R)-BINAP、Ad2nBuP、AdBrettPhos、AmgenPHOS、BrettPHOS、CH2CH2-(2-Pyr)、Cy3P-HBF4、dippf、DPEPhos、dppb、dppf、dppp、dtbpf、J-009、Mes3P、Ph2P-、Ph3P、RuPHOS、S-PHOS、tBu XPHOS、tBu3P-HBF4、XantPhos、X-PHOS。
方面13.如方面1所述的方法，其中步骤(3)的催化剂是格拉布催化剂(Grubb′scatalyst)；优选地，所述催化剂是第1代格拉布催化剂、第2代格拉布催化剂、霍维达-格拉布催化剂(Hoveyda-Grubb′s catalyst)。
方面14.如方面1所述的方法，其中步骤(3a)的所述保护基是Cbz、Boc或Fmoc。
方面15.如方面1所述的方法，其中所述步骤(4)在碱性条件下进行，优选地，所述碱是DIEA、三乙胺、K2CO3、Na2CO3、NaOH、KOH、乙醇钠或甲醇钠。
方面16.如方面2所述的方法，其中所述步骤(3a)在H2气氛下进行，优选地，H2的压力为1-15atm。
方面17.如方面2所述的方法，其中步骤(3a)的催化剂是Pd/C、Pd(OH)2、雷尼镍(Raney Ni)或Pd。
具体实施方式
以下术语在整个说明书中具有所指示的含义：
除非本文件中其它地方有明确定义，否则本文所用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义。
以下术语在整个说明书中具有所指示的含义：
如本文(包括所附权利要求)所用，除非上下文另有明确说明，否则诸如“-(a、an)”和“所述”的词的单数形式包括它们相应的复数指代物。
除非上下文另有明确规定，否则术语“或”用于意指术语“和/或”，并且可与术语“和/或”互换使用。
术语“烷基”包括选自包含1至18个(诸如1至12个，进一步诸如1至10个，更进一步诸如1至8个、或1至6个、或1至4个)碳原子的直链和支链饱和烃基的烃基。包含1至6个碳原子的烷基(即，C1-6烷基)的实例包括但不限于甲基、乙基、1-丙基或正丙基(“n-Pr”)、2-丙基或异丙基(“i-Pr”)、1-丁基或正丁基(“n-Bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基(“i-Bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-Bu”)、1，1-二甲基乙基或叔丁基(“t-Bu”)、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2，3-二甲基-2-丁基和3，3-二甲基-2-丁基。
术语“丙基”包括1-丙基或正丙基(“n-Pr”)、2-丙基或异丙基(“i-Pr”)。
术语“丁基”包括1-丁基或正丁基(“n-Bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基(“i-Bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-Bu”)、1，1-二甲基乙基或叔丁基(“t-Bu”)。
术语“戊基”包括1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基。
术语“己基”包括1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2，3-二甲基-2-丁基和3，3-二甲基-2-丁基。
术语“亚烷基”是指通过从烷烃中去除两个氢而产生的二价烷基。亚烷基包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基等。
术语“卤素”包括氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)和碘(I)。
术语“烯基”包括选自包含至少一个C＝C双键和2至18个(诸如2至8个，进一步诸如2至6个)碳原子的直链和支链烃基的烃基。烯基(例如，C2-6烯基)的实例包括但不限于乙烯基(ethenyl或vinyl)、丙-1-烯基、丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1，3-二烯基、2-甲基丁-1，3-二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基和已-1，3-二烯基。
术语“亚烯基”是指通过从烯烃中去除两个氢而产生的二价烯基。亚烯基包括但不限于亚乙烯基、亚丁烯基等。
术语“炔基”包括选自包含至少一个C≡C三键和2至18个(诸如2至8个，进一步诸如2至6个)碳原子的直链和支链烃基的烃基。炔基(例如，C2-6炔基)的实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。
术语“亚炔基”是指通过从炔烃中去除两个氢而产生的二价炔基。亚炔基包括但不限于亚乙炔基等。
术语“环烷基”包括选自饱和环状烃基的烃基，其包括单环和多环(例如，二环和三环)基团，包括稠合、桥接或螺接的环烷基。
例如，环烷基可包含3至12个(诸如3至10个，进一步诸如3至8个，进一步诸如3至6个、3至5个或3至4个)碳原子。甚至进一步例如，环烷基可选自包含3至12个(诸如3至10个，进一步诸如3至8个、3至6个)碳原子的单环基团。单环环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基和环十二烷基。特别地，饱和单环环烷基(例如，C3-8环烷基)的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。在优选实施方案中，环烷基为包含3至6个碳原子的单环(缩写为C3-6环烷基)，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。二环环烷基的实例包括具有7至12个环原子的那些，其排列为选自[4，4]、[4，5]、[5，5]、[5，6]和[6，6]环系的稠合二环，或排列为选自二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷和二环[3.2.2]壬烷的桥接二环。二环环烷基的其它实例包括排列为选自[5，6]和[6，6]环系的二环的那些。
术语“螺环烷基”包括含有碳原子的环状结构，并且由至少两个共用一个原子的环形成。
术语“稠合环烷基”包括如本文所定义的二环环烷基，其为饱和的并且通过两个或更多个共享两个相邻原子的环形成。
术语“桥接环烷基”包括含有碳原子并且通过两个环形成的环状结构，所述两个环共享两个彼此不相邻的原子。术语“7至10元桥接环烷基”包括含有7至12个碳原子并且通过两个环形成的环状结构，所述两个环共享两个彼此不相邻的原子。
稠合环烷基、稠合环烯基或稠合环炔基的实例包括但不限于二环[1.1.0]丁基、二环[2.1.0]戊基、二环[3.1.0]己基、二环[4.1.0]庚基、二环[3.3.0]辛基、二环[4.2.0]辛基、萘烷，以及苯并3至8元环烷基、苯并C4-6环烯基、2，3-二氢-1H-茚基、1H-茚基、1，2，3，4-四氢萘基、1，4-二氢萘基等。优选的实施方案为8至9元稠合环，在以上实例内，其是指含有8至9个环原子的环状结构。
单独或与其它术语组合使用的术语“芳基”包括选自以下的基团：
5元和6元碳环芳环，例如，苯基；
二环环系，诸如7至12元二环环系，其中至少一个环为碳环和芳族，例如，萘基和茚满基；以及
三环环系，诸如10至15元三环环系，其中至少一个环为碳环和芳族，例如，芴基。
术语“芳族烃环”和“芳基”在本文的整个公开内容中可互换使用。在一些实施方案中，单环或二环芳族烃环具有5至10个成环碳原子(即，C5-10芳基)。单环或二环芳族烃环的实例包括但不限于苯基、萘-1-基、萘-2-基、蒽基、菲基等。在一些实施方案中，芳族烃环为萘环(萘-1-基或萘-2-基)或苯基环。在一些实施方案中，芳族烃环为苯基环。
具体地，术语“二环稠合芳基”包括如本文所定义的二环芳基环。典型的二环稠合芳基是萘。
术语“杂芳基”包括选自以下的基团：
5元、6元或7元芳族单环，其包含至少一个选自氮(N)、硫(S)和氧(O)的杂原子，例如，1至4个(或在一些实施方案中，1至3个，在一些实施方案中，1至2个)杂原子，其余环原子为碳；
7元至12元二环，其包含至少一个选自N、O和S的杂原子，例如1至4个(或在一些实施方案中，1至3个，或在其它实施方案中，1或2个)杂原子，其余环原子为碳，并且其中至少一个环为芳族并且至少一个杂原子存在于芳环中；以及
11元至14元三环，其包含至少一个选自N、O和S的杂原子，例如1至4个(或在一些实施方案中，1至3个，或在其它实施方案中，1或2个)杂原子，其余环原子为碳，并且其中至少一个环为芳族并且至少一个杂原子存在于芳环中。
当杂芳基中S和O原子的总数超过1时，那些杂原子彼此不相邻。在一些实施方案中，杂芳基中S和O原子的总数不超过2。在一些实施方案中，芳族杂环中S和O原子的总数不超过1。当杂芳基含有超过一个杂原子环成员时，杂原子可以是相同或不同的。杂芳基的一个或多个环中的氮原子可经氧化以形成N-氧化物。
具体地，术语“二环稠合杂芳基”包括如本文所定义的7至12元、优选7至10元、更优选9元或10元稠合二环杂芳基环。通常，二环稠合杂芳基为5元/5元、5元/6元、6元/6元或6元/7元二环。所述基团可通过任一环连接到分子的其余部分。
“杂环基”、“杂环”或“杂环状”是可互换的，并且包括非芳族杂环基，其包含一个或多个选自氮、氧或任选地氧化的硫的杂原子作为环成员，其余环成员为碳，包括单环、稠合环、桥接环和螺环，即含有单环杂环基、桥接杂环基、螺杂环基和稠合杂环基。
本文所公开的术语“至少一个取代基”包括例如1至4个(诸如1至3个，进一步诸如1或2个)取代基，条件是符合化合价理论。例如，本文所公开的“至少一个取代基F”包括1至4个(诸如1至3个，进一步诸如1或2个)取代基F。
术语“二价”是指能够与两个其它部分形成共价键的连接基团。例如，“二价环烷基”是指通过从相应的环烷烃中去除两个氢以形成连接基团而获得的环烷基。术语“二价芳基”、“二价杂环基”或“二价杂芳基”应以类似的方式理解。
本文所公开的化合物可含有不对称中心，因此可作为对映异构体存在。“对映异构体”是指化合物的两种立体异构体，它们是彼此不可叠加的镜像。在本文所公开的化合物具有两个或更多个不对称中心的情况下，它们可另外作为非对映异构体存在。对映异构体和非对映异构体属于更广泛的立体异构体类别。旨在包括呈基本上纯的拆分的对映异构体、其外消旋混合物以及非对映异构体的混合物形式的所有此类可能的立体异构体。旨在包括本文所公开的化合物和/或其药学上可接受的盐的所有立体异构体。除非另外特别指出，否则提及一种异构体适用于任何可能的异构体。只要未指定异构体组成，则包括所有可能的异构体。
除非另有说明，否则当本文所公开的化合物含有烯属双键时，此类双键意在包括E和Z几何异构体两者。
当本文所公开的化合物含有二取代的环状环系时，在此类环系上的取代基可采用顺式和反式形式。顺式形式意指两个取代基都位于碳上2个取代基位置的上侧，而反式意指它们位于相对侧。例如，二取代的环状环系可以是环己基环或环丁基环。
将反应产物彼此分离和/或与起始材料分离可能是有利的。通过本领域常用的技术将每个步骤或一系列步骤的期望产物分离和/或纯化(下文中分离)至期望的均匀性程度。通常，此类分离涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱。色谱可涉及多种方法，包括例如：反相和正相色谱；尺寸排阻色谱；离子交换色谱；高压、中压和低压液相色谱方法和装置；小规模分析型色谱；模拟移动床(“SMB”)色谱和制备型薄层或厚层色谱，以及小规模薄层和快速色谱技术。本领域技术人员可选择并应用最有可能实现期望分离的技术。
“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心但彼此不是镜像的化合物的立体异构体。非对映异构体混合物可基于其物理化学差异，通过本领域技术人员熟知的方法，诸如通过色谱和/或分级结晶来分离成其单个非对映异构体。可通过与适当的旋光活性化合物(例如，手性助剂，诸如手性醇或莫舍氏酰氯(Mosher’s acid chloride))反应将对映异构体混合物转化成非对映异构体混合物，分离非对映异构体并将单个非对映异构体转化(例如，水解)成相应的纯对映异构体，而分离对映异构体。还可通过使用手性HPLC柱分离对映异构体。
单一立体异构体(例如，基本上纯的对映异构体)可通过使用一种方法(诸如使用旋光活性拆分剂形成非对映异构体)拆分外消旋混合物来获得(Eliel，E.和Wilen，S.Stereochemistry of Organic Compounds.New York：John Wiley&Sons，Inc.，1994；Lochmuller，C.H.等人，″Chromatographic resolution of enantiomers：Selectivereview.″J.Chromatogr.，113(3)(1975)：第283-302页)。本发明的手性化合物的外消旋混合物可通过任何适合的方法分离和离析，所述方法包括：(1)用手性化合物形成离子型非对映异构体盐并通过分级结晶或其它方法加以分离，(2)用手性衍生化试剂形成非对映异构体化合物，分离非对映异构体并转化为纯立体异构体，以及(3)直接在手性条件下分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见：Wainer，Irving W.编，Drug Stereochemistry：Analytical Methods and Pharmacology.New York：Marcel Dekker，Inc.，1993。
本文所公开的一些化合物可存在有不同的氢连接点，称为互变异构体。例如，包括羰基-CH2C(O)-基团(酮式)的化合物可经历互变异构，形成羟基-CH＝C(OH)-基团(烯醇式)。在适用时，还旨在包括单个的酮式和烯醇式两者以及它们的混合物。
“前药”是指需要在体内转化以释放活性剂的活性剂衍生物。在一些实施方案中，转化是酶促转化。前药在转化为活性剂之前通常(但不一定)在药理学上是无活性的。
“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适用于与人和低等动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的益处/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐可在本文所公开的化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱官能团与适合的有机酸反应或通过使酸性基团与适合的碱反应来单独制备。该术语还包括本发明化合物的立体异构体(诸如对映异构体和/或非对映异构体)、互变异构体和前药的盐。
另外，如果本文所公开的化合物是作为酸加成盐获得，则可通过使酸式盐的溶液碱化来获得游离碱。相反，如果产物为游离碱，则可根据由碱化合物制备酸加成盐的常规方法，通过将游离碱溶解于适合的有机溶剂中并用酸处理该溶液，来制备加成盐，诸如药学上可接受的加成盐。本领域技术人员将认识到可在没有过度实验的情况下用于制备无毒的药学上可接受的加成盐的各种合成方法。
当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，本文的术语“施用(administration)”、“施用(administering)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”意指外源性药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体的接触。细胞的处理涵盖试剂与细胞的接触，以及试剂与流体的接触，其中该流体与该细胞接触。术语“施用”和“治疗”还意指例如通过试剂、诊断剂、结合化合物或通过另一细胞对细胞的体外和离体处理。本文中的术语“受试者”包括任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如，大鼠、小鼠、狗、猫和兔)，且最优选人。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指活性成分(诸如化合物)当施用于受试者以治疗疾病、或疾病或病症的至少一种临床症状时，足以影响针对该疾病、病症或症状的治疗的量。术语“治疗有效量”可随化合物，疾病，病症，和/或疾病或病症的症状，疾病、病症和/或疾病或病症的症状的严重性，待治疗受试者的年龄和/或待治疗受试者的体重而变化。在任何给定情况下，适当量对于本领域技术人员来说可以是显而易见的，或者可通过常规实验来确定。在一些实施方案中，“治疗有效量”是本文所公开的至少一种化合物和/或其至少一种立体异构体、互变异构体或前药和/或其至少一种药学上可接受的盐如本文所定义有效“治疗”受试者的疾病或病症的量。在组合疗法的情况下，术语“治疗有效量”是指用于有效治疗疾病、病症或疾患的组合对象的总量。
术语“疾病”是指任何疾病、不适、病痛、症状或适应症，并且可与术语“病症”或“疾患”互换。
在整个说明书和所附权利要求中，除非上下文另有要求，否则术语“包含(comprise)”以及诸如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”的变化形式旨在指定此后的特征的存在，但不排除一个或多个其它特征的存在或增加。当在本文中使用时，术语“包含”可用术语“含有”、“包括”或有时“具有”替代。
在整个说明书和所附权利要求中，术语“Cn-m”指示包括端点的范围，其中n和m为整数并且指示碳的数目。实例包括C1-8、C1-6等。
除非本文件中其它地方有明确定义，否则本文所用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义。
实施例
以下实施例仅仅意图是示例性的，并且不应视为以任何方式进行限制。已经努力确保关于所用数字(例如量、温度等)的准确性，但应考虑一些实验误差和偏差。除非另外指示，否则温度以摄氏度为单位。试剂从例如Sigma-Aldrich、Alfa Aesar或TCI的商业供应商购买，并且除非另外指示，否则未经进一步纯化即使用。除非另外指示，否则以下阐述的反应是在正压氮气或氩气下或用干燥管在无水溶剂中进行；反应烧瓶装有橡胶隔片，用于经由注射器引入底物和试剂；并且玻璃器皿是烘干和/或加热干燥的。
1H NMR谱是在400MHz下操作的Agilent仪器上记录的。1H NMR谱是使用CDCl3、CD2Cl2、CD3OD、D2O、d6-DMSO、d6-丙酮或(CD3)2CO作为溶剂以及四甲基硅烷(0.00ppm)或残余溶剂(CDCl3：7.25ppm；CD3OD：3.31ppm；D2O：4.79ppm；d6-DMSO：2.50ppm；d6-丙酮：2.05；(CD3)3CO：2.05)作为参考标准来获得的。当报告峰多重性时，使用以下缩写：s(单峰)，d(双峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，qn(五重峰)，sx(六重峰)，m(多重峰)，br(宽峰)，dd(双二重峰)，dt(双三重峰)。耦合常数在给出时是以赫兹(Hz)报告。
LCMS-1：LC-MS谱仪(Agilent 1260Infinity)，检测器：MWD(190-400nm)，质量检测器：6120SQ，流动相：A：含0.1％甲酸的水，B：含0.1％甲酸的乙腈，柱：Poroshell 120EC-C18，4.6×50mm，2.7pm，梯度方法：流量：1.8mL/min，时间(min)A(％)B(％)
时间(min) A(％) B(％)
0.00 95 5
1.5 5 95
2.0 5 95
2.1 95 5
3.0 95 5
LCMS，LCMS-3：LC-MS谱仪(Agilent 1260Infinity II)，检测器：MWD(190-400nm)，质量检测器：G6125C SQ，流动相：A：含0.1％甲酸的水，B：含0.1％甲酸的乙腈，柱：Poroshell 120EC-C18，4.6×50mm，2.7pm，梯度方法：流量：1.8mL/min，时间(min)A(％)B(％)
时间(min) A(％) B(％)
0.00 95 5
1.5 5 95
2.0 5 95
2.1 95 5
3.0 95 5
LCMS-2：LC-MS谱仪(Agilent 1290Infinity II)，检测器：MWD(190-400nm)，质量检测器：G6125C SQ，流动相：A：含0.1％甲酸的水，B：含0.1％甲酸的乙腈，柱：Poroshell120EC-C18，4.6×50mm，2.7pm，梯度方法：流量：1.2mL/min，时间(min)A(％)B(％)
时间(min) A(％) B(％)
0.00 90 10
1.5 5 95
2.0 5 95
2.1 90 10
3.0 90 10
在柱(150×21.2mmID，5pm，Gemini NXC 18)上进行制备型HPLC，流量为20ml/min，注射体积为2ml，在室温下进行且在214nm和254nm进行UV检测。
在以下实施例中，使用以下缩写：
Figure BDA0003624608760000221
Figure BDA0003624608760000231
Figure BDA0003624608760000241
Figure BDA0003624608760000251
实施例1：1-(2-氨基苯基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物
步骤1：二烯丙基氧化膦
Figure BDA0003624608760000252
在-20℃下，在30min内向烯丙基溴化镁(310mL，1M于Et2O中，0.35mol)于Et2O(200mL)中的溶液中逐滴添加膦酸二乙酯(12g溶解在Et2O中，87mmol)，将反应溶液在该温度下搅拌30min，然后使温度自然升至室温。
然后将混合物在100℃下搅拌14小时。将反应物通过添加饱和NH4Cl淬灭，用Et2O(100mL×2)萃取，合并有机层并用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤后，将滤液减压浓缩，得到二烯丙基氧化膦(3.1g，27.2％)。m/z[M+H]+＝131.1。
步骤2：二烯丙基(2-氨基苯基)氧化膦
Figure BDA0003624608760000253
向2-碘苯胺(2g，9.1mmol)和二烯丙基氧化膦(2.4g，18.3mmol)于二噁烷(50mL)中的溶液中添加K3PO4(4.8g，22.7mmol)，然后将Pd(OAc)2(205mg，0.91mmol)和Xantphos(528mg，0.91mmol)在20℃下添加到混合物中。将悬浮液在真空下脱气并用N2吹扫三次。然后将混合物在100℃下搅拌4小时。将混合物过滤并真空浓缩。将残余物通过柱色谱(DCM/MeOH＝20/1至10/1)纯化，得到二烯丙基(2-氨基苯基)氧化膦(1.2g，60％)。[M+H]+＝222.1。
步骤3：1-(2-氨基苯基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物
Figure BDA0003624608760000261
向二烯丙基(2-氨基苯基)氧化膦(1.2g，5.4mmol)于DCM(200mL)中的溶液中添加第2代格拉布催化剂(918mg，1.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h。将混合物真空浓缩。将残余物通过柱色谱(DCM/MeOH＝20/1至10/1)纯化，得到1-(2-氨基苯基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物(750mg，71.4％)。m/z[M+H]+＝194.1。
实施例2：1-(2-氨基苯基)磷杂环戊烷1-氧化物
Figure BDA0003624608760000262
向1-(2-氨基苯基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物(750mg，3.9mmol)于MeOH(20mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，湿的，100mg)。将所得溶液在室温下在H2气氛(1-2atm)下搅拌12h。滤出Pd/C，将滤液蒸发至干。获得1-(2-氨基苯基)磷杂环戊烷1-氧化物(720mg，95％)，并且未经进一步纯化即用于下一步骤。m/z[M+H]+＝196.1。
实施例3：3-(4-(2-(4-(1-(4-((5-溴-4-((2-(1-氧代磷杂环戊烷-1-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-乙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)-2，6-二氟苯基)哌啶-2，6-二酮
步骤1：1-(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)磷杂环戊烷1-氧化物
Figure BDA0003624608760000271
在0℃下，向1-(2-氨基苯基)磷杂环戊烷1-氧化物(720mg，3.7mmol)于THF(15mL)中的溶液中添加5-溴-2，4-二氯嘧啶(2.1g，9.2mmol)。然后在0℃下将LiHMDS(1M，7.4mL，7.4mmol)添加到反应混合物中。将混合物在20℃下搅拌3小时。将水(10mL)倒入混合物中，将其用DCM(20mL×3)进一步萃取。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过柱色谱(DCM/MeOH＝10/1至5/1)纯化，得到1-(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)磷杂环戊烷1-氧化物(620mg，43％)。[M+H]+＝386.0。
步骤2：1-(2-((5-溴-2-((5-乙基-2-甲氧基-4-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基) 氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)磷杂环戊烷1-氧化物
Figure BDA0003624608760000272
在20℃下，向1-(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)磷杂环戊烷1-氧化物(620mg，1.6mmol)于n-BuOH(20mL)中的溶液中添加4-(1-(4-氨基-2-乙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(671mg，1.6mmol)。在20℃下将4-甲基苯磺酸(826mg，4.8mmol)添加到反应混合物中。然后将混合物在90℃下搅拌15小时。将反应混合物蒸发至干，将水(20mL)倒入混合物中。然后将混合物用饱和NaHCO3水溶液调节至pH＝8，并用DCM(20mL×3)萃取。将有机相用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过柱色谱(DCM/MeOH＝10/1至5/1)纯化，得到1-(2-((5-溴-2-((5-乙基-2-甲氧基-4-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)磷杂环戊烷1-氧化物(510mg，47.7％)。[M+H]+＝668.2。
步骤3：2-(3，5-二氟-4-硝基苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0003624608760000281
在N2气氛下，将1，3-二氟-2-硝基苯(50.0g，314.4mmol)于NMP(300mL)中的溶液冷却至-20℃。然后在-10℃至-20℃下在2h内缓慢添加2-氯乙酸乙酯(65.5g，534.7mmol)和t-BuOK(121.0g，1.08mol)于NMP(50mL)中的混合物。搅拌2h后，通过倒入1M HCl(200mL)和冰水中来淬灭反应。将混合物用EA(300mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。将溶液真空浓缩，并且将残余物通过硅胶柱色谱(PE/EA＝200/1至100/1)纯化，得到产物(13.7g，18％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δH 7.06(d，J＝8.4Hz，2H)，4.20(q，J＝7.2Hz，2H)，3.65(s，2H)，1.28(t，J＝7.2Hz，3H)。
步骤4：2-(4-氨基-3，5-二氟苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0003624608760000282
在室温下，向2-(3，5-二氟-4-硝基苯基)乙酸乙酯(13.7g，56mmol)于MeOH(150mL)中的溶液中添加10％Pd/C(1.5g)。将混合物在室温下在H2气氛下搅拌5h。真空过滤以除去Pd/C，并真空浓缩以得到产物(12.2g)，该产物未经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(400MHz，DMSO_d6)δH6.82(d，J＝8.0Hz，2H)，5.69(s，2H)，4.06(q，J＝7.2Hz，2H)，3.52(s，2H)，1.17(t，J＝7.2Hz，3H)。[M+H]+＝216.4。
步骤5：2-(3，5-二氟-4-碘苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0003624608760000283
在N2气氛下，将2-(4-氨基-3，5-二氟苯基)乙酸乙酯(12.2g，56mmol)于MeCN(150mL)中的溶液冷却至0℃，并添加CuI(21.2g，112mmol)。搅拌10min后，在30min内逐滴添加亚硝酸叔丁酯(11.5g，112mmol)。然后将混合物在室温下搅拌过夜。通过倒入水中淬灭反应并用EA(300mL×3)萃取。将所有有机层合并，并用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。将溶液真空浓缩，并且将残余物通过硅胶柱色谱(PE/EA＝500/1至100/1)纯化，得到产物(8.8g，48％)。[M+H]+＝326.5。
步骤6：2-(4-(2，6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-3，5-二氟苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0003624608760000291
在N2气氛下，向2-(3，5-二氟-4-碘苯基)乙酸乙酯(8.8g，27.0mmol)于1，4-二噁烷/H2O(100mL/20mL)的混合溶剂中的溶液中添加K2CO3(9.3g，67.4mmol)、2，6-双(苄氧基)-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(14.6g，35.0mol)和Pd(dppf)Cl2(2.9g，4.0mmol)。将所得溶液在100℃下搅拌6h。将混合物用水(300mL)稀释，并用EA(300mL×3)萃取。将所有有机层合并，并用盐水(300mL)洗涤，经Na2SO4干燥。将溶液真空浓缩，并且将残余物通过硅胶柱色谱(PE/EA＝200/1)纯化，得到产物(8.2g，62％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δH 7.49(d，J＝8.0Hz，1H)，7.40-7.24(m，10H)，6.90(d，J＝8.0Hz，2H)，6.47(d，J＝8.0Hz，1H)，5.38(s，2H)，5.33(s，2H)，4.19(q，J＝7.2Hz，2H)，3.61(s，2H)，1.28(t，J＝7.2Hz，3H)。
步骤7：2-(4-(2，6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-3，5-二氟苯基)乙醇
Figure BDA0003624608760000292
在N2气氛下，将2-(4-(2，6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-3，5-二氟苯基)乙酸乙酯(8.2g，16.7mol)于THF(100mL)中的溶液冷却至0℃，并且在30min内逐滴添加含1.5MDIBAL-H(45mL，67.5mol)的THF。然后将混合物在室温下搅拌2h。通过倒入水中淬灭反应并用EA(300mL×3)萃取。将所有有机层合并，并用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。将溶液真空浓缩，并且将残余物通过柱色谱(PE/EA＝10/1至3/1)纯化，得到产物(6.6g，88％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δH 7.49(d，J＝8.0Hz，1H)，7.42-7.25(m，9H)，6.84(d，J＝8.0Hz，2H)，6.47(d，J＝8.0Hz，1H)，5.38(s，2H)，5.33(s，2H)，3.90(m，2H)，2.87(t，J＝6.4Hz，2H)。[M+H]+＝448.3。
步骤8：3-(2，6-二氟-4-(2-羟乙基)苯基)哌啶-2，6-二酮
Figure BDA0003624608760000301
向2-(4-(2，6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-3，5-二氟苯基)乙醇(6.6g，14.7mmol)于DCM(150mL)中的溶液中添加TFA(50mL)。搅拌过夜后，将混合物真空浓缩。将残余物溶解在MeOH(200mL)中，并添加10％Pd/C(1.0g)。将所得混合物在室温下在H2气氛下搅拌2天。将混合物过滤，并将滤液浓缩，得到残余物，将该残余物通过反相快速C18色谱(ACN/水＝0％至30％)纯化，得到标题化合物(2.1g，53％)。[M+H]+＝270.1。
步骤9：2-(4-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-3，5-二氟苯基)乙醛
Figure BDA0003624608760000302
将3-(2，6-二氟-4-(2-羟乙基)苯基)哌啶-2，6-二酮(86.4mg，0.32mmol)和IBX(132mg，0.47mmol)于DMSO(10mL)中的混合物在烧瓶中在室温下搅拌过夜。将反应用水淬灭，并且将混合物用EtOAc萃取，用饱和NaCl水溶液洗涤三次，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤两次。将有机层经无水Na2SO4干燥，并真空蒸发，得到产物(61mg，71％)。[M+H]+＝268.1。
步骤10：3-(4-(2-(4-(1-(4-((5-溴-4-((2-(1-氧代磷杂环戊烷-1-基)苯基)氨 基)嘧啶-2-基)氨基)-2-乙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)-2，6-二氟苯 基)哌啶-2，6-二酮
Figure BDA0003624608760000311
在20℃下，向1-(2-((5-溴-2-((5-乙基-2-甲氧基-4-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)磷杂环戊烷1-氧化物(50mg，0.075mmol)于DCM(3mL)中的溶液中添加2-(4-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-3，5-二氟苯基)乙醛(40mg，0.15mmol)。将混合物在20℃下搅拌1小时，并添加STAB(32mg，0.15mmol)。然后将混合物在20℃下搅拌2小时。将水(10mL)倒入混合物中。然后将混合物用DCM(20mL)萃取。将有机相用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(C-18柱色谱(0.1％FA/水∶乙腈＝90∶10～60∶40梯度洗脱))纯化，得到产物(17.7mg，17.6％)。1H NMR(500MHz，DMSO)δ10.88(s，1H)，10.50(s，1H)，8.15(d，J＝27.9Hz，2H)，7.98(s，1H)，7.42(dd，J＝13.4，7.7Hz，1H)，7.36(s，1H)，7.30(t，J＝7.6Hz，1H)，7.10(t，J＝7.4Hz，1H)，6.96(d，J＝10.2Hz，2H)，6.69(s，1H)，4.13(dd，J＝12.6，5.0Hz，1H)，3.69(s，3H)，2.92(d，J＝10.8Hz，2H)，2.65-2.80(m，6H)，2.46-2.60(m，6H)，2.21-2.41(m，6H)，1.73-2.10(m，13H)，1.39-1.60(m，2H)，0.85-1.02(m，3H)。[M+H]+＝919.3。
实施例4：1-(6-氨基-2-甲基喹啉-5-基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物
步骤1：5-碘-2-甲基喹啉-6-胺
Figure BDA0003624608760000312
在20℃下，向2-甲基喹啉-6-胺(5.3g，33.5mmol)于HOAc(60mL)中的溶液中添加IC1(6.5g，40.3mmol)。然后将混合物在20℃下搅拌1小时。将反应溶液在真空下浓缩。然后将混合物用饱和NaHCO3水溶液调节至pH＝8，并用DCM(150mL)萃取。将有机相用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。获得5-碘-2-甲基喹啉-6-胺(8g，83.7％)。[M+H]+＝285.0。
步骤2：二烯丙基(6-氨基-2-甲基喹啉-5-基)氧化膦
Figure BDA0003624608760000321
向5-碘-2-甲基喹啉-6-胺(4g，14mmol)和二烯丙基氧化膦(3.6g，28mmol)于二噁烷(80mL)中的溶液中添加K3PO4(7.4g，35mmol)，然后将Pd(OAc)2(316mg，1.4mmol)和Xantphos(813mg，1.4mmol)在20℃下添加到混合物中。将悬浮液在真空下脱气并用N2吹扫三次。然后将混合物在100℃下搅拌15小时。将混合物过滤并真空浓缩。将残余物通过柱色谱(DCM/MeOH＝20/1至10/1)纯化，得到呈棕色固体状的二烯丙基(6-氨基-2-甲基喹啉-5-基)氧化膦(2.1g，52.2％)。[M+H]+＝287.1。
步骤3：N-(5-(二烯丙基磷酰基)-2-甲基喹啉-6-基)特戊酰胺
Figure BDA0003624608760000322
向二烯丙基(6-氨基-2-甲基喹啉-5-基)氧化膦(2.1g，7.3mmol)于DCM(50mL)中的溶液中添加TEA(1.85g，18.3mmol)，然后在5min内逐滴添加特戊酰氯(1.06g，8.8mmol)。将所得溶液在室温下搅拌3h。将反应混合物用DCM稀释，用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥。将有机相蒸发至干，得到N-(5-(二烯丙基磷酰基)-2-甲基喹啉-6-基)特戊酰胺(2.6g，95.9％)。[M+H]+＝371.2。
步骤4：N-(2-甲基-5-(1-氧代-2，5-二氢磷杂环戊烯-1-基)喹啉-6-基)特戊酰胺
Figure BDA0003624608760000331
向N-(5-(二烯丙基磷酰基)-2-甲基喹啉-6-基)特戊酰胺(2.6g，7.0mmol)于DCM(200mL)中的溶液中添加霍维达-格拉布催化剂(878mg，1.4mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16h。将混合物真空浓缩。将残余物通过柱色谱(DCM/MeOH＝20/1至10/1)纯化，得到呈深棕色固体状的N-(2-甲基-5-(1-氧代-2，5-二氢磷杂环戊烯-1-基)喹啉-6-基)特戊酰胺(2g，83.3％)。[M+H]+＝343.2。
步骤5：1-(6-氨基-2-甲基喹啉-5-基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物
Figure BDA0003624608760000332
将N-(2-甲基-5-(1-氧代-2，5-二氢磷杂环戊烯-1-基)喹啉-6-基)特戊酰胺(2g，5.8mmol)溶解在二噁烷(15mL)中。将HCl(2M，15mL)添加到反应混合物中。将所得溶液在100℃下搅拌15h。将反应溶液蒸发至干，将残余物溶解在水中，用NaOH(1M)将pH值调节至8-9，用DCM萃取，然后将有机相在真空下浓缩，得到1-(6-氨基-2-甲基喹啉-5-基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物(1.3g，86.1％)，并且未经进一步纯化即直接用于下一步骤。[M+H]+＝259.1。
实施例5：3-(4-((R)-3-(4-(1-(4-((5-溴-4-((2-甲基-5-(1-氧代-2，5-二氢磷杂环戊烯-1-基)喹啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-乙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羰基)吡咯烷-1-基)-2，6-二氟苯基)哌啶-2，6-二酮
步骤1：2，6-双(苄氧基)-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡 啶
Figure BDA0003624608760000341
将2，6-双(苄氧基)-3-溴吡啶(15g，40.65mmol)和4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-联(1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷)(12.6g，49.61mmol)、Pd(dppf)Cl2(3.32g，4.07mmol)、KOAc(12g，122.45mmol)于二噁烷(200mL)中的混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌16h。将所得混合物过滤，将滤饼用MeOH和DCM洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到残余物，将该残余物通过硅胶柱色谱纯化，用PE/EtOAc(8∶1)洗脱，得到产物(9.00g，53％)。[M+H]+＝418.2。
步骤2：2，6-双(苄氧基)-3-(4-溴-2，6-二氟苯基)吡啶
Figure BDA0003624608760000342
将2，6-双(苄氧基)-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(9.00g，21.56mmol)和5-溴-1，3-二氟-2-碘苯(6.88g，21.57mmol)、K2CO3(10.43g，75.48mmol)、Pd(dppf)Cl2(789mg，1.078mmol)于二噁烷(90mL)和H2O(30mL)中的混合物在100℃下在氮气气氛下搅拌过夜。将所得混合物用EtOAc萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化，用PE/EtOAc(5∶1)洗脱，得到产物(4g，38％)。[M+H]+＝482.2，484.3。
步骤3：(R)-1-(4-(2，6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-3，5-二氟苯基)吡咯烷-3-甲酸甲 酯
Figure BDA0003624608760000351
在N2气氛下，向2，6-双(苄氧基)-3-(4-溴-2，6-二氟苯基)吡啶(1g，2.07mmol)、(R)-吡咯烷-3-甲酸甲酯盐酸盐(495mg，3mmol)和Cs2CO3(1.95g，6mmol)于10mL DMSO中的溶液中添加Pd2(dba)3(183mg，0.2mmol)和Xantphos(231mg，0.4mmol)。将混合物在90℃下在N2气氛下搅拌16小时。LCMS表明反应完成后。将混合物用EtOAc(100mL)稀释，并用盐水(100mL×2)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱(PE∶EA＝10∶1)纯化，得到产物(740mg，67.4％产率)。[M+H]+＝530.8。
步骤4：(R)-1-(4-(2，6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-3，5-二氟苯基)吡咯烷-3-甲酸
Figure BDA0003624608760000352
向(R)-1-(4-(2，6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-3，5-二氟苯基)吡咯烷-3-甲酸甲酯(740mg，1.4mmol)于10mL THF中的溶液中添加含LiOH·H2O(84mg，2mmol)的2mL水。将混合物在25℃下搅拌2小时。LCMS表明反应完成后。将混合物真空浓缩。将残余物用1N HC1调节至pH＜5，并用50mL EtOAc萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到产物(700mg，96.9％产率)。[M+H]+＝516.8。
步骤5：(3R)-1-(4-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-3，5-二氟苯基)吡咯烷-3-甲酸
Figure BDA0003624608760000361
向(R)-1-(4-(2，6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-3，5-二氟苯基)吡咯烷-3-甲酸(700mg，1.35mmol)于5mL DCM和30mL MeOH中的溶液中添加350mg Pd/C。将混合物在30℃下在H2气氛下搅拌16小时。LCMS表明反应完成后，过滤混合物。将有机相真空浓缩，得到产物(350mg，76.7％产率)。[M+H]+＝338.8。
步骤6：1-(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基喹啉-5-基)-2，5-二氢磷杂环 戊烯1-氧化物
Figure BDA0003624608760000362
在0℃下，向1-(6-氨基-2-甲基喹啉-5-基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物(500mg，1.9mmol)于THF(15mL)中的溶液中添加5-溴-2，4-二氯嘧啶(1.1g，4.8mmol)。然后在0℃下将LiHMDS(1M，3.8mL，3.8mmol)添加到反应混合物中。将混合物在20℃下搅拌3小时。将水(10mL)倒入混合物中，将其用DCM(20mL×3)进一步萃取。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过柱色谱(DCM/MeOH＝10/1至5/1)纯化，得到1-(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基喹啉-5-基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物(505mg，58.2％)。[M+H]+＝449.0。
步骤7：1-(6-((5-溴-2-((5-乙基-2-甲氧基-4-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基) 氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基喹啉-5-基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物
Figure BDA0003624608760000371
在20℃下，向1-(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基喹啉-5-基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物(505mg，1.1mmol)于n-BuOH(20mL)中的溶液中添加4-(1-(4-氨基-2-乙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(472mg，1.1mmol)。在20℃下将4-甲基苯磺酸(568mg，3.3mmol)添加到反应混合物中。然后将混合物在90℃下搅拌15小时。将反应混合物蒸发至干，将水(20mL)倒入混合物中。然后将混合物用饱和NaHCO3水溶液调节至pH＝8，并用DCM(20mL×3)萃取。将有机相用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过柱色谱(DCM/MeOH＝10/1至5/1)纯化，得到1-(6-((5-溴-2-((5-乙基-2-甲氧基-4-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基喹啉-5-基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物(485mg，58.9％)。[M+H]+＝731.3。
步骤8：3-(4-((R)-3-(4-(1-(4-((5-溴-4-((2-甲基-5-(1-氧代-2，5-二氢磷杂环 戊烯-1-基)喹啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-乙基-5-甲氧基苯基)哌啶-4-基)哌嗪- 1-羰基)吡咯烷-1-基)-2，6-二氟苯基)哌啶-2，6-二酮
Figure BDA0003624608760000372
向1-(6-((5-溴-2-((5-乙基-2-甲氧基-4-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基喹啉-5-基)-2，5-二氢磷杂环戊烯1-氧化物(50mg，0.07mmol)、(R)-1-(4-((R)-2，6-二氧代哌啶-3-基)-3，5-二氟苯基)吡咯烷-3-甲酸(35mg，0.1mmol)和DIEA(26mg，0.2mmol)于10mL DCM中的溶液中添加含50重量％T3P的EtOAc溶液(64mg，0.1mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。LCMS表明反应完成后。将混合物用水(10mL)淬灭。将有机相真空浓缩并通过制备型HPLC，用C-18柱色谱(0.1％FA/水∶乙腈＝90∶10～50∶50梯度洗脱)纯化，得到产物(20.5mg，27.8％产率)。1H NMR(500MHz，DMSO)δ11.31(s，1H)，10.84(s，1H)，8.32(s，1H)，8.22(s，1H)，8.03(s，1H)，7.94(dd，J＝13.9，9.3Hz，2H)，7.29-7.47(m，2H)，6.75(s，1H)，6.11-6.24(m，4H)，4.02(dd，J＝12.5，4.9Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.43-3.56(m，7H)，3.23-3.42(m，5H)，2.94-3.04(m，4H)，2.73-2.88(m，3H)，2.53-2.71(m，7H)，2.23-2.43(m，3H)，2.02-2.21(m，3H)，1.89-2.00(m，1H)，1.83(d，J＝10.4Hz，2H)，1.49-1.63(m，2H)，0.78(s，3H)。[M+H]+＝1051.4。
细胞降解
细胞处理
1a).将BaF3-LTC(L858R/T790M/C797S)细胞以100000个细胞/孔接种在Corning96孔板(目录号3799)中的细胞培养基[RPMI1640(Gibco，不含酚红，目录号11835-030)，10％热失活FBS，1％PS(Gibco，目录号10378)]中。
1b).在第1天，将H1975-克隆#28(Del19/T790M/C797S，纯合)细胞以20000个细胞/孔和30000个细胞/孔相应地接种在Coming 96孔板(目录号3599)中的细胞培养基[RPMI1640(Gibco，目录号72400-047)，10％热失活FBS，1％PS(Gibco，目录号10378)]中。
将BaF3-LTC(L858R/T790M/C797S)细胞用在0.2％DMSO细胞培养基中稀释的化合物处理，并在37℃、5％CO2下温育16h，在第2天将H1975-#28细胞用在0.2％DMSO细胞培养基中稀释的化合物处理，在37℃、5％CO2下温育16h。所有测定中化合物的最终浓度均以10μM开始，4倍稀释，总共包括8个剂量。
HTRF测定
16h处理后，向每个孔中添加HTRF裂解缓冲液；将板密封，并在室温下在板振荡器上温育1小时；一旦细胞裂解，将16μL细胞裂解物转移至PE 384孔HTRF检测板；向每个孔中添加4μL预混合的HTRF抗体；将板用板密封器覆盖，以1000rpm旋转1min，在室温下温育过夜；用HTRF方案(337nm-665nm-620nm)在BMG PheraStar上读数。
通过以下等式计算化合物的抑制(降解)百分比：化合物的抑制百分比＝100-100×(信号-低对照)/(高对照-低对照)，其中信号＝每个测试化合物组
低对照＝仅裂解缓冲液，无细胞，指示EGFR完全降解；
高对照＝添加DMSO且没有化合物的细胞组，指示无EGFR降解的微孔板读数；
Dmax是最大抑制(降解)百分比。
化合物的IC50(DC50)值可通过拟合以下等式获得：
Y＝底值+(顶值-底值)/(1+((IC50/X)^希尔斜率))
其中，X和Y为已知值，IC50、希尔斜率(Hillslope)、顶值和底值为通过用软件拟合获得的参数。Y是抑制百分比(由等式计算)，X是化合物的浓度；IC50是达到50％抑制时化合物的浓度。IC50值越小，化合物的抑制能力越强。反之，IC50值越高，化合物的抑制能力越弱；希尔斜率表示拟合曲线的斜率，通常为约1*；底值表示通过数据拟合获得的曲线的最小值，通常为0％±20％；顶值表示通过数据拟合获得的曲线的最大值，通常为100％±20％。通过用Dotmatics数据分析软件计算和分析来对实验数据进行拟合。
表1.实施例3的降解(BaF3和H1975#28)结果
Figure BDA0003624608760000401
前述实施例和某些实施方案的描述应该被认为是说明性的，而不是限制由权利要求所限定的本发明。容易理解的是，在不脱离如权利要求中所阐述的本发明的情况下，可利用上述特征的多种变化和组合。所有此类变化都旨在包括在本发明的范围内。所有引用的参考文献均通过引入整体并入本文。
应当理解，如果在本文提及任何现有技术的出版物，则此类提及并不构成承认该出版物形成任何国家的本领域公知常识的一部分。

Claims (17)

1.一种合成EGFR蛋白水解靶向嵌合体化合物中间体(I)的方法，
Figure FDA0003624608750000011
Cy1是4-7元饱和或部分不饱和环，所述环除P＝O之外还包含0-3个独立地选自氮、氧或硫的另外的杂原子；所述环任选地被至少一个取代基R1c取代；
R1c选自氢、卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、-CN、-OR1d、-CORid、-CO2R1d、-CONR1dR1e、-NR1dR1e、-NR1dCOR1e或-NR1dCO2R1e，其中-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基中的每一个任选地被至少一个取代基R1f取代；
R1d、R1e和R1f各自独立地选自氢、羟基、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基；
每次出现时，R2各自独立地选自氢、卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、-CN、-OR2a、-SO2R2a、-SO2NR2aR2b、-COR2a、-CO2R2a、-CONR2aR2b、-NR2aR2b、-NR2aCOR2b、-NR2aCO2R2b或-NR2aSO2R2b，其中-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基中的每一个任选地被至少一个取代基R2d取代；或者
当两个相邻R2与它们所连接的碳原子一起形成5-6元饱和或者部分或完全不饱和(优选完全不饱和，即芳族)环时，所述环包含0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；所述环任选地被至少一个取代基R2e取代；
R2e在每次出现时独立地是氢、卤素、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C1-8烷氧基、-C3-C8环烷基、氧代基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、-CN、-SO2R2a、-SO2NR2aR2b、-COR2a、-CO2R2a、-CONR2aR2b、-NR2aR2b、-NR2aCOR2b、-NR2aCO2R2b或-NR2aSO2R2b，其中-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C1-8烷氧基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基中的每一个任选地被至少一个取代基R2d取代；
R2a和R2b各自独立地选自氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基；
R2d在每次出现时独立地是卤素、-OH、-C1-8烷基、-C1-8烷氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、-C6-C12芳基或5元至12元杂芳基；
R3和R4各自独立地选自氢、卤素、-C1-8烷基、-C1-8烷氧基、-C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、-C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、-CN、-COR3a、-CO2R3a、-CONR3aR3b、-NR3aR3b、-NR3aCOR3b、-NR3aCO2R3b，其中-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C1-8烷氧基、-C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、-C6-C12芳基或5元至12元杂芳基中的每一个任选地被卤素、-C1-8烷氧基、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、氧代基、-CN、-OR3c、-COR3c、-CO2R3c、-CONR3cR3d、-NR3cR3d、-NR3cCOR3d或-NR3cCO2R3d取代；
R3a、R3b、R3c和R3d各自独立地是氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、-C6-C12芳基或5元至12元杂芳基；或者
R5选自卤素；
n1是1、2、3或4；
其中所述方法包括步骤(1)、(2)、(3)和(4)：
(1)
Figure FDA0003624608750000031
其中每次出现时R6独立地选自-C1-8烷基；格氏试剂是R7MgBr，其中R7是任选地被至少一个取代基R1c取代的-C2-8烯基；
(2)
Figure FDA0003624608750000032
PG是H或保护基；
(3)
Figure FDA0003624608750000033
其中Cy2是4-7元部分不饱和环，所述环除P＝O之外还包含0-3个独立地选自氮、氧或硫的另外的杂原子；所述环任选地被至少一个取代基R1c取代；
(3a)当PG是非氢保护基时，
Figure FDA0003624608750000034
(4)
Figure FDA0003624608750000035
其中R8是卤素。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括步骤(3b)：
(3b)：
Figure FDA0003624608750000041
其中Cy3是4-7元饱和环，所述环除P＝O之外还包含0-3个独立地选自氮、氧或硫的另外的杂原子；所述环任选地被至少一个取代基R1c取代。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述
Figure FDA0003624608750000042
部分选自
Figure FDA0003624608750000043
其中
Figure FDA0003624608750000044
是单键或双键；
每次出现时，R1c具有与权利要求1相同的定义；
优选地，所述
Figure FDA0003624608750000045
部分选自
Figure FDA0003624608750000046
Figure FDA0003624608750000047
4.如权利要求1所述的方法，其中R2各自独立地选自氢、-F、-Cl、-Br、-I、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、-CN、-OR2a、-SO2R2a、-SO2NR2aR2b、-COR2a、-CO2R2a、-CONR2aR2b、-NR2aR2b、-NR2aCOR2b、-NR2aCO2R2b或-NR2aSO2R2b，其中甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基中的每一个任选地被至少一个取代基R2d取代，
R2a和R2b各自独立地选自氢、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、C1-8烷氧基-C1-8烷基-、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、3元至8元杂环基、苯基或5元至12元杂芳基；
R2d在每次出现时独立地是卤素、-OH、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、3元至8元杂环基、苯基或5元至12元杂芳基；
优选地，其中R2各自独立地选自氢、卤素、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基或辛基，优选选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH3、-CH2CH(CH3)2、-C(CH3)3。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述
Figure FDA0003624608750000051
部分是
Figure FDA0003624608750000052
Figure FDA0003624608750000053
Figure FDA0003624608750000061
其中R2e如权利要求1中所定义。
6.如权利要求5所述的方法，其中R2e在每次出现时独立地是氢、-F、-Cl、-Br、-I、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基或氧代基，其中甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基中的每一个任选地被至少一个取代基R2d取代；
R2d在每次出现时独立地是-F、-Cl、-Br、-I、-OH、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基或苯基；
优选地，R2e在每次出现时独立地是氢、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)CH2CH3、-CH2CH(CH3)2、-C(CH3)3、
Figure FDA0003624608750000062
Figure FDA0003624608750000071
7.如权利要求1所述的方法，其中所述
Figure FDA0003624608750000072
部分是
Figure FDA0003624608750000073
Figure FDA0003624608750000081
8.如权利要求1所述的方法，其中R3和R4各自独立地选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、-C2H5、-C3H7、-C4H9、-C5H11、-OCH3、-OC2H5、-OC3H7、-OC4H9、-OC5H11、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、苯基或-CN，其中-CH3、-C2H5、-C3H7、-C4H9、-C5H11、-OCH3、-OC2H5、-OC3H7、-OC4H9、-OC5H11、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基或苯基中的每一个任选地被-F、-Cl、-Br、-I、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、-C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基、5元至12元杂芳基、氧代基、-CN、-OR3c、-COR3c、-CO2R3c、-CONR3cR3d、-NR3cR3d、-NR3cCOR3d或-NR3cCO2R3d取代；
R3c和R3d各自独立地是氢、-C1-8烷基、-C2-8烯基、-C2-8炔基、C3-C8环烷基、3元至8元杂环基、C6-C12芳基或5元至12元杂芳基。
9.如权利要求1所述的方法，其中R3和R4各自独立地选自H、-F、-Cl、-Br、-I、-CH3、-CF3、-CH2F或-CHF2。
10.如权利要求1所述的方法，其中R5选自-F、-Cl、-Br或-I。
11.如权利要求1所述的方法，其中步骤(1)的溶剂选自醚(优选四氢呋喃、乙醚、异丙醚)、腈(优选乙腈、丙腈)、DMF、DMSO或HMPA；以及/或者R7选自乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基、己烯基，所述乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基、己烯基中的每一个任选地被至少一个取代基R1c取代。
12.如权利要求1所述的方法，其中步骤(2)的催化剂组合物是Pd催化剂和膦配体，优选地，Pd催化剂选自[(肉桂基)PdCl]2、[PdCl(C3H5)]2、Pd(MeCN)2Cl2、Pd(OAc)2、Pd(TFA)2或Pd2(dba)3，以及/或者所述膦配体选自(n-Bu)3P HBF4、(o-tol)3P、(R)-BINAP、Ad2nBuP、AdBrettPhos、AmgenPHOS、BrettPHOS、CH2CH2-(2-Pyr)、Cy3P-HBF4、dippf、DPEPhos、dppb、dppf、dppp、dtbpf、J-009、Mes3P、Ph2P-、Ph3P、RuPHOS、S-PHOS、tBu XPHOS、tBu3P-HBF4、XantPhos、X-PHOS。
13.如权利要求1所述的方法，其中步骤(3)的催化剂是格拉布催化剂；优选地，所述催化剂是第1代格拉布催化剂、第2代格拉布催化剂、霍维达-格拉布催化剂。
14.如权利要求1所述的方法，其中步骤(3a)的所述保护基是Cbz、Boc或Fmoc。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述步骤(4)在碱性条件下进行，优选地，所述碱是DIEA、三乙胺、K2CO3、Na2CO3、NaOH、KOH、乙醇钠或甲醇钠。
16.如权利要求2所述的方法，其中所述步骤(3a)在H2气氛下进行，优选地，H2的压力为1-15atm。
17.如权利要求2所述的方法，其中步骤(3a)的催化剂是Pd/C、Pd(OH)2、雷尼镍或Pd。
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