CN115252693A - 一种植物型抑制性传播病毒hiv-1和hsv-2的药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种植物型抑制性传播病毒HIV‑1和HSV‑2的药物,其特征在于,所述的药物是植物降解重构提取液,所述植物降解重构提取液是采用化学降解重构法使生物质降解重构为植物降解重构提取液;所述生物质为沙柳和/或柠条。本发明公开的药物是植物降解重构提取液;其制备方法是采用温和化学降解重构法,是一种新工艺新技术,其优点是:流程简单,过程环保,转化率高,产品质量高,整个工艺过程不消耗水,不排放废气、废液和废渣。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域,具体涉及一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2 的药物及其制备方法。
背景技术
艾滋病病毒HIV和单纯疱疹病毒HSV都属于性传播病毒。人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency virus,HIV),即艾滋病(AIDS,获得性免疫缺陷综合征)病毒,是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。艾滋病病毒(HIV)主要存在于人体的血液、精液、阴道分泌物、乳汁和伤口渗出液中。现已证实HIV分为两型:HIV-1型和HIV-2。HIV-1型就是感染HIV病毒以后,感染者在几年之后就发展成为艾滋病。HIV-2型感染者往往发病比HIV-1型感染者缓慢,所以HIV-2 型感染基本是缓慢进展的一种状态,可以长时间不发展到艾滋病的阶段。HIV-1 和HIV-2都侵犯CD4T淋巴细胞,但HIV-2的毒力较弱。另外HIV-2发病潜伏期较长,HIV-2也不易于发生围生期传播。艾滋病主要通过性接触、血液和母婴三种径径传播。艾滋病是一种病死率极高的严重传染病目前还没有治愈的药物和方法。由于HIV的变异极其迅速,难以生产特异性疫苗,至今无有效治疗方法,对人类健康造成极大威胁。
单纯疱疹是一种传染性皮肤病,由单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)感染所致。单纯疱疹的临床特征为皮肤黏膜成簇出现单房性的小水疱,主要发生于面部或生殖器等局部,易于复发;全身症状一般轻微;但若发生疱疹性脑炎或全身播散性疱疹,则病情可相当严重,甚至危及生命。HSV可导致宫内感染,胎儿出生时可呈各种形式的先天畸形或发育障碍。HSV有二个血清型,即HSV-1 和HSV-2,两型病毒核苷酸序列有50%同源性,型间有共同抗原,也有特异性抗原,可用型特异性单克隆抗体作ELISA,DNA限制性酶切图谱分析及DNA杂交试验等方法区分型别。单纯疱疹病毒在全球广泛分布,人群中感染极为普遍,潜伏和复发感染者较多。患者和带毒者是该病的传染源。病毒可通过皮肤、粘膜的直接接触或性接触途径进入机体。
HSV-2病毒是生殖器疱疹的主要病原,一旦感染,患者将终身携带这种病毒并周期性地出现生殖器疱疹性损伤,HSV-2感染还会增加HIV-1传播的风险, HSV-2患者感染HIV-1的机率增加,且目前没有针对HSV-2的有效疫苗问世。生殖道黏膜部位不易建立针对HSV-2长期有效的记忆性免疫保护,这成为疱疹病毒疫苗研制的主要瓶颈。目前,对疱疹病毒感染的控制尚无特异性有效措施。寄希望于疫苗,特别是新型疫苗,如亚单位疫苗、重组活疫苗、DNA疫苗的研究。
发明内容
针对现有技术中存在的问题,本发明的目的是提供一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物及其制备方法。
本发明的目的采用以下技术方案来实现:
第一方面,本发明提供一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物,所述的药物是植物降解重构提取液,所述植物降解重构提取液是采用化学降解重构法使生物质降解重构为植物降解重构提取液;所述生物质为沙柳和/或柠条。
优选地,所述化学降解重构法的条件为:温度低于350℃、压力为常压条件。
优选地,所述植物降解重构提取液稀释到浓度为1.25%(v/v)时,对Vero 和TZM-b1无明显细胞毒性。
第二方面,本发明提供一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物的制备方法,包括以下步骤:
步骤1,将生物质用粉碎机进行粉碎;
步骤2,将粉碎后的生物质经计量后往反应釜内加料;
步骤3,接着将专用制剂经计量泵后往反应釜加料;
步骤4,将生物质与专用制剂在反应釜中进行降解重构化学反应;
步骤5,冷凝后形成植物降解重构提取液,反应釜中余下的固体为生物炭。
优选地,所述步骤1中,生物质包括沙柳和柠条,生物质经过晾晒处理后再粉碎。
优选地,所述步骤1中,粉碎机将生物质粉碎成粉末,粒径为10-15亳米。
优选地,所述步骤2中,反应釜为可封闭式反应釜,釜体为金属材料。
优选地,所述步骤3中,专用制剂为Fenton试剂(芬顿试剂),配置过程为:向去离子水中加入先酒石酸,充分搅拌混合,再加入硫酸亚铁,再次充分搅拌,然后再滴加过氧化氢,继续充分搅拌均匀后,即可。
优选地,所述酒石酸、硫酸亚铁、过氧化氢与去离子水的摩尔量为 0.2-0.6:1.2-1.8:10-14:50。
优选地,所述过氧化氢是以过氧化氢水溶液的方式滴加,过氧化氢水溶液的质量分数是30%。
优选地,所述步骤4中,在反应釜内反应的温度是100-350℃,压力是常压条件,反应的时间为1-10h。
优选地,所述步骤5中,提取液的溶剂在高温下会逐渐汽化成蒸汽,在反应结束后,将蒸汽引导至冷凝器中冷却,即得到植物降解重构提取液,而在反应釜内剩余的无法形成蒸汽的部分为生物炭。
第三方面,本发明还公开了一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物的制备系统,包括沙枊等生物质破碎设备、料仓、称量装置、化学制剂罐、化学制剂计量泵、反应釜、炭粉储仓、冷凝器、冷凝液罐、反应釜加热系统和冷凝器冷却系统;
优选地,生物质破碎设备、料仓与称量装置依次连接,化学制剂罐与化学制剂计量泵连接,称量装置与化学制剂计量泵均连通至反应釜,反应釜上还连接有冷凝器,冷凝器的一侧连接有冷凝器冷却系统,冷凝器的下方连接有冷凝液罐,反应釜上还设置有反应釜加热系统,反应釜的下方连接有炭粉储仓。
其中,沙枊等生物质通过沙枊等生物质破碎设备、料仓、称量装置后进入反应釜中进行反应;化学制剂通过化学制剂罐、化学制剂计量泵后进入反应釜中进行反应;反应釜反应生成的汽体通过冷凝器进行冷凝,经冷凝器冷凝后的液体储存在冷凝液罐中待用;反应釜反应生成的炭粉储存在炭粉储仓中待用。加热系统对反应釜进行加热,冷却系统对冷凝器进行冷却。
优选地,所述反应釜包括釜盖、釜体、加热装置以及搅拌装置;所述釜盖设置在所述釜体顶部,所述搅拌装置设置在所述釜体内部,所述加热装置设置在所述釜体下部外表面。
优选地,所述冷凝器包括壳体、管束、管板以及封头。所述管板以及所述管束均设置在所述壳体内,且所述管板设置在所述管束上端,所述封头设置在所述壳体底部。
本发明的有益效果为:
本发明公开了一种植物型的可抑制性传播病毒HIV-1(艾滋病病毒)和 HSV-2(单纯疱疹病毒)的药物,其最大的优点是具有安全性、有效性、广谱性、无毒性、无刺激性、无腐蚀性。
本发明公开的药物是植物降解重构提取液;其制备方法是采用温和化学降解重构法,是一种新工艺新技术,其优点是:流程简单,过程环保,转化率高,产品质量高,整个工艺过程不消耗水,不排放废气、废液和废渣。
植物降解重构提取液的制备方法是采用温和化学降解重构法,在专用工艺装置中,将沙柳、柠条等生物质资源,加上专用制剂,在温度低于350℃、压力为常压条件下,使生物质降解重构为植物降解重构提取液。
植物降解重构提取液是利用我国西北地区,尤其是内蒙古鄂尔多斯地区首选的治沙固沙植物------沙柳和柠条等生物质资源制备的。沙柳和柠条等是抗旱性、抗涝性、抗热性、抗寒性、耐贫瘠性、耐盐碱性、可再生性都很强的灌丛植物,是具有极强生命力的神奇沙生植物。
本发明的药物可以在细胞内有效抑制性传播病毒HIV-1(艾滋病病毒)和 HSV-2(单纯疱疹病毒)而不会导致细胞的损伤,可以在细胞内抑制病毒的核酸逆转录酶的活性,使病毒失去逆转录的能力,使病毒无法复制、无法增殖和扩大病毒的数量。本发明的药物是在细胞内的源头上抑制性传播病毒HIV-1(艾滋病病毒) 和HSV-2(单纯疱疹病毒)的植物型药物,并成为在临床上预防和治疗性传播病毒 HIV-1(艾滋病病毒)和HSV-2(单纯疱疹病毒)的植物型药物。
附图说明
利用附图对本发明作进一步说明,但附图中的实施例不构成对本发明的任何限制,对于本领域的普通技术人员,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据以下附图获得其它的附图。
图1是本发明实施例1的一种植物降解重构提取液制备方法的流程示意图;
图2是本发明实施例1的一种植物降解重构提取液制备系统的结构示意图;
图3是图1中反应釜的结构示意图;
图4是图1中冷凝器的结构示意图;
图5是稀释后浓度为1.25%(v/v)的植物降解重构提取液对Vero细胞的毒性测试;
图6是稀释后浓度为1.25%(v/v)的植物降解重构提取液对TZM-bl细胞的毒性测试;
图7是植物降解重构提取液对HSV-2病毒的活性抑制效率;
图8是植物降解重构提取液对TCID50的HIV-1病毒的活性抑制效率;
附图标记:破碎设备101、料仓102、称量装置103、化学制剂罐201、化学制剂计量泵202、反应釜301、炭粉储仓303、冷凝器401、冷凝液罐402、反应釜加热系统302、冷凝器冷却系统501、釜盖301-1、釜体301-2、加热装置301-3、搅拌装置301-4、壳体401-1、管束401-2、管板401-3、封头401-4。
具体实施方式
为了更清楚的说明本发明,对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解,现对本发明的技术方案进行以下详细说明,但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。
植物降解重构提取液抑制性传播病毒HIV-1(艾滋病病毒)和HSV-2(单纯疱疹病毒)的机理:
通常把病毒分成两种类型,一种叫做DNA病毒,一种叫RNA病毒。DNA病毒具有的DNA结构是双螺旋遗传物质,叫脱氧核糖核酸。RNA病毒是单链核糖核酸,叫做核糖核酸。这两种病毒的共同特点是需要寄生在细胞内才能够进行病毒的复制和增殖。
对于离体病毒,通常采用的方法是杀死病毒,如用含氯消毒液(如84消毒液)、醇类消毒剂(如一定浓度的酒精)、酚类消毒剂(如对氯间二甲苯酚)、含碘消毒剂 (如碘伏)和过氧化物类消毒剂(如过氧乙酸及臭氧)就可以把离体病毒直接杀死。
病毒是一类只能在活细胞内寄生的非细胞型微生物。因为病毒寄生在宿主的活细胞内,所以,如果要杀死在细胞内的病毒,就有可能连同细胞也被杀死。因此在病毒治疗方面非常棘手。
对于活细胞内的病毒,最好的做法是在活细胞内抑制病毒,抑制病毒的核酸逆转录酶的活性,病毒会失去逆转录的能力,抑制病毒在细胞内复制和增殖,这个时候的病毒虽然没有灭活,但是没有办法继续进行复制,无法复制就无法繁殖和扩大病毒的数量,从而不致有离体病毒传染开来。
植物降解重构提取液就是在宿主的活细胞内抑制病毒,抑制病毒的核酸逆转录酶的活性,抑制病毒在细胞内复制和增殖,这是在宿主的活细胞内抑制病毒的复制和增殖,这是在病毒产生的源头上抑制病毒、治疗病毒。
以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明,均可从常规商业途径得到,或者可以通过现有已知方法得到。
结合以下实施例对本发明作进一步描述。
实施例1
一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物,所述的药物是植物降解重构提取液,所述植物降解重构提取液是采用化学降解重构法使生物质降解重构为植物降解重构提取液;所述生物质为沙柳和/或柠条。
所述化学降解重构法的条件为:温度低于350℃、压力为常压条件。
经过测试,所述植物降解重构提取液稀释到浓度为1.25%(v/v)时,对Vero 和TZM-b1无明显细胞毒性。
上述植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物的制备方法,流程如图1 所示,包括以下步骤:
步骤1,将生物质用粉碎机进行粉碎;生物质包括沙柳和柠条,生物质经过晾晒处理后再粉碎;粉碎机将生物质粉碎成粉末,粒径为10-15亳米。
步骤2,将粉碎后的生物质经计量后往反应釜内加料;反应釜为可封闭式反应釜,釜体为金属材料。
步骤3,接着将专用制剂经计量泵后往反应釜加料;专用制剂为Fenton试剂 (芬顿试剂),配置过程为:向去离子水中加入先酒石酸,充分搅拌混合,再加入硫酸亚铁,再次充分搅拌,然后再滴加过氧化氢,继续充分搅拌均匀后,即可。所述酒石酸、硫酸亚铁、过氧化氢与去离子水的摩尔量为0.4:1.5:12:50。所述过氧化氢是以过氧化氢水溶液的方式滴加,过氧化氢水溶液的质量分数是30%。
步骤4,将生物质与专用制剂在反应釜中进行降解重构化学反应;在反应釜内反应的温度是180℃,压力是常压条件,反应的时间为3h。
步骤5,冷凝后形成植物降解重构提取液,反应釜中余下的固体为生物炭;提取液的溶剂在高温下会逐渐汽化成蒸汽,在反应结束后,将蒸汽引导至冷凝器中冷却,即得到植物降解重构提取液,而在反应釜内剩余的无法形成蒸汽的部分为生物炭。
如图2所示:本发明实施例的一种植物降解重构提取液制备系统,包括沙枊等生物质破碎设备101、料仓102、称量装置103、化学制剂罐201、化学制剂计量泵202、反应釜301、炭粉储仓303、冷凝器401、冷凝液罐402,以及反应釜加热系统302和冷凝器冷却系统501。其中,沙枊等生物质通过沙枊等生物质破碎设备101、料仓102、称量装置103后进入反应釜301中进行反应;化学制剂通过化学制剂罐201、化学制剂计量泵202后进入反应釜301中进行反应;反应釜301反应温度低于350℃,反应压力为常压。反应釜301反应生成的汽体通过冷凝器401进行冷凝,经冷凝器401冷凝后的液体储存在冷凝液罐402中待用;反应釜301反应生成的炭粉储存在炭粉储仓303中待用。加热系统302对反应釜 301进行加热,冷却系统501对冷凝器401进行冷却。本发明是将沙枊等生物质在温度低于350℃、压力为常压的温和条件下进行化学降解得到植物降解重构提取液,剩余固体得到炭产品。
如图3所示为图2中反应釜301的结构示意图,本发明实施例的一种植物降解重构提取液制备系统,包括所述反应釜301,其中:
所述反应釜301包括釜盖301-1、釜体301-2、加热装置301-3以及搅拌装置 301-4。所述釜盖301-1设置在所述釜体301-2顶部,所述搅拌装置301-3设置在所述釜体301-2内部,所述加热装置301-4设置在所述釜体301-2下部外表面。
如图4所示为图2中冷凝器401的结构示意图,本发明实施例的一种植物降解重构提取液制备系统,包括所述冷凝器401,其中:
所述冷凝器401包括壳体401-1、管束401-2、管板401-3以及封头401-4。所述管板401-3以及所述管束401-2均设置在所述壳体401-1内,且所述管板 401-3设置在所述管束401-2上端,所述封头401-4设置在所述壳体401-1底部。
实施例2
一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物,其制备方法与实施例1 相同,区别为:(1)专用制剂配置中,所述酒石酸、硫酸亚铁、过氧化氢与去离子水的摩尔量为0.2:1.2:10:50。
(2)反应釜内反应的温度是100℃,压力是常压条件,反应的时间为1h。
实施例3
一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物,其制备方法与实施例1 相同,区别为:(1)专用制剂配置中,所述酒石酸、硫酸亚铁、过氧化氢与去离子水的摩尔量为0.2:1.2:10:50。
(2)反应釜内反应的温度是350℃,压力是常压条件,反应的时间为10h。
实施例4
一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物,其制备方法与实施例1 相同,区别为:(1)专用制剂配置中,所述酒石酸、硫酸亚铁、过氧化氢与去离子水的摩尔量为0.3:1.4:13:50。
(2)反应釜内反应的温度是200℃,压力是常压条件,反应的时间为5h。
实施例5
一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物,其制备方法与实施例1 相同,区别为:(1)专用制剂配置中,所述酒石酸、硫酸亚铁、过氧化氢与去离子水的摩尔量为0.5:1.6:11:50。
(2)反应釜内反应的温度是320℃,压力是常压条件,反应的时间为8h。
为了更清楚地说明本发明,本发明还做了如下检测:
Ⅰ、本发明将实施例1制备的植物降解重构提取液送至中国科学院武汉病毒研究所进行了应用评价检测,检测过程以及结果如下:
一、测试目的:
检测植物降解重构提取液对性传播病毒HIV-1和HSV-2的体外抑制效率。
二、测试原理:
用细胞感染法测定植物降解重构提取液对HSV-2作用后(对照组与实验组);
样本中具有感染性HSV-2病毒的量,以细胞病变作为判断指标,观察并计算植物降解重构提取液对性传播病毒HSV-2的抑制效率。植物降解重构提取液对HIV-1作用后(对照组与实验组)测定样本中HIV-1病毒蛋白P24的量,以 p24标准品作为参照,计算植物降解重构提取液对性传播病毒HIV-1的抑制效率。
三、测试材料和方法:
1.实验材料
a.病毒株:人类免疫缺限病毒1型(艾滋病病毒;HIV-1)和人类单纯疱疹病毒2型(HSV-2),由乙方实验室提供。
b.细胞模型:TZM-b1细胞和Vero细胞,由乙方实验室提供。培养条件:37℃, 5%CO2。
c.测试样品:植物降解重构提取液,由甲方提供。
d.去离子水(无菌)、磷酸盐缓冲液(PBS,0.03M,pH7.2),裂解液等。
e.细胞生长用培养基:DMEM+10%胎牛血清+青链霉素;感染病毒后的维持培养基:DMEM+2%胎牛血清);空斑试验用培养基:DMEM+2%胎牛血清+1%甲基纤维素。
f.MTT溶液(5mg/mL)。
2.实验内容
植物降解重构提取液对HIV-1和HSV-2的抑制效果评价。
3,研究方法:
(1)细胞毒性实验:
表1 细胞毒性试验
a)将植物降解重构提取液按照梯度比例稀释后加入到分别铺好TZM-b1, Vero的96孔板中,于37C在含5%CO2细胞培养箱中孵育1h。
b)将培养基替换成100LDMEM细胞培养基(含2%胎牛血清),于37C在含5%CO2细胞培养箱中培养48h。
c)每孔加入4uL MTT溶液(5mg/mL),继续培养4h后加入30L DMSO,震荡10min。
d)检测吸光值,绘制细胞生长曲线,评价植物降解重构提取液的细胞毒性。
(2)HIV-1抑制实验:
a)从-80C冰箱取出HIV-1病毒,置于37℃水浴锅中解冻。
b)将植物降解重构提取液原液先按1:5比例稀释成最高浓度,再按2倍梯度进行梯度稀释。
c)将HIV-1病毒液与不同稀释度的植物降解重构提取液(病毒量:100 TCIDs0/孔)按1:1(v/v)的比例混合,37C孵育30min,每个稀释度3个重复。
d)将孵育好的混合液加入提前一天铺好TZM-bl细胞的96孔板中,37C感染1小时。
e)吸走培养液,再用PBS洗3次,加入200ul DMEM培养基(含2%胎牛血清),37C培养48小时。
f)吸走培养基,加入100ul含0.5%NP-40的裂解液,37℃裂解30分钟,随后用p24试剂盒检测样品中的P24含量,计算病毒抑制率。
(3)HSV-2抑制实验
a)从-80C冰箱取出HSV-2病毒,置于37C水浴锅中解冻。
b)将植物降解重构提取液原液先按1:5比例稀释成最高浓度,再按3倍梯度进行梯度稀释。
c)将HSV-2病毒液与不同稀释度的植物降解重构提取液(病毒量:100PFU/ 孔)按1:1(v/v)的比例混合,37C孵育30min,每个稀释度3个重复。
d)将孵育好的混合液加入提前一天铺好Vero细胞的12孔板中,37C感染1 小时。
e)吸走培养液,再用PBS洗3次,加入2ml DMEM培养基(含2%胎牛血清+1%甲基纤维素),37C培养48小时。
f)吸走培养基,加0.1%结晶紫(1mL/孔)室温染色5分钟,随后吸走结晶紫加PBS润洗细胞,数空斑数量,计算病毒抑制率。
四、检测结果:
1.细胞毒性测试:实验结果表明,植物降解重构提取液对细胞具有一定的毒性,稀释后浓度为1.25%(v/v)的植物降解重构提取液对Vero细胞(图5)和 TZM-bl细胞没有明显的细胞毒性(图6);
2.病毒抑制效率:
1)植物降解重构提取液浓度大于2.5%时,处理1×105PFU的HSV-2病毒 30分钟,即可抑制90%以上病毒的活性;浓度降低到0.31%,处理1×105PFU 病毒30分钟,依然能抑制60%以上病毒的活性。(图7)
2)植物降解重构提取液浓度大于2.5%时,处理1×105PFU的TCID50的HIV-1 病毒30分钟,即可抑制90%以上病毒的活性:浓度降低到0.31%,处理1×105 TCID50病毒30分钟,依然能抑制60%以上病毒的活性(图8)。
五、结论:
植物降解重构提取液稀释到浓度1.25%(v/v)对Vero和TZM-b1无明显细胞毒性。处理浓度为2.5%以上,处理30分钟,对性传播病毒HIV-1和HSV-2 的抑制效率均大于90%:处理浓度为0.5%以上,处理30分钟,对性传播病毒 HIV-1和HSV-2的抑制效率大于60%。
Ⅱ、本发明还将实施例1制备的植物降解重构提取液送至上海市预防医学研究院进行了相应的毒性检测,检测结果如下:
检验结果与评价:
1.急性经口毒性试验(小鼠):样品对雌雄小鼠的急性经口LDso均大于5000 mg/kg,属实际无毒,符合产品毒理学指标要求。
2.急性皮肤刺激试验:样品皮肤刺激试验分值为0,属无刺激性,符合产品毒理学指标要求。
3.急性眼刺激试验:试验在24h不冲洗条件下,受试物对家兔眼刺激积分指数为0,眼刺激平均指数48h后为0,属无刺激性,符合产品毒理学指标要求。
具体检测方法如下:
急性经口毒性试验(小鼠)
一、试验目的:观察受试样品一次经口给予动物引起的不良反应和死亡情况。
二、检测依据:《日用工业产品安全卫生质量通用技术要求》DB31/T 121-1993;
三、材料和动物:
1.样品名称:植物降解重构液
2.样品性状:棕色液体
3.受试样品制备:称取样品1.004g、2.004g、3.001g、4.002、5.002g,分别加蒸馆水至20mL,充分混匀后制成1000mg/kg、2000mg/kg、3000mg/kg、 4000mg/kg、5000mg/kg剂量组供试液。
4.实验动物:昆明种小鼠,SPF级,动物数50只,雌雄各半,体重(19-22) g,由上海杰思捷实验动物有限公司提供。生产许可证号:SCXK(沪)2018-0004。动物饲养于屏障环境中,饲养室温度(21-22)℃,相对湿度(41-64)%。实验动物使用许可证号:SYXK(沪)2018-0031。动物饲料由上海舟虞生物科技有限公司提供,登记证号:沪饲证(2021)04027。
5.仪器设备:电子秤ACS-3A 90401582,电子天平BS310S 91006909
四、实验方法:
1.动物禁食(不禁水)16小时后,按体重随机分为5组,每组雌雄各5只。
2.采用24h内一次经口灌胃方式给予各组实验动物相应剂量的供试液,灌胃容量按20mL/kg体重计。
3.染毒后,观察动物的一般状态、体重变化、中毒体征和死亡情况等。观察期为两周。
4.每周对动物称重一次。对死亡动物及到期处死的动物进行尸体解剖,肉眼观察大体病理改变情况。
5,实验全过程及观察内容均做详细记录。
四、结果:
表小鼠急性经口毒性试验结果
1.主要体征表现:试验期间各组动物活动正常,毛色光泽度好,未见任何中毒症状及死亡现象;到期处死动物,大体解剖肉眼观察各脏器情况,未见异常。
2.雌性小鼠:LDso>5000mg/kg雄性小鼠:LDso>5000mg/kg。
六、结论:样品对雌雄小鼠的急性经口LDso均大于5000mg/kg,属实际无毒,符合产品毒理学指标要求。
急性皮肤刺激试验
一.试验目的:确定和评价受试物对家兔局部皮肤一次接触后是否有刺激作用及其程度。
二.技术依据:DB31/T 121-1993《日用工业产品安全卫生质量通用技术要求》
三.材料和动物:
1.样品名称:植物降解重构液
2.样品性状:棕色液体
3.受试物配制:用原液直接测试
4.受试动物:普通级白色新西兰种家兔4只,体重(2.1-2.3)kg,由上海市松江区车墩实验动物良种场有限公司提供,生产许可证号:SCXK(沪)2017-0003。受试动物饲养于普通环境,实验动物饲养室温度(19-20)℃,相对湿度(42-48)%,实验动物使用许可证号:SYXK(沪)2018-0031。家免饲料由上海舟虞生物科技有限公司提供,合格证号:沪饲证(2021)04027。
四.试验方法:
1.试验前24h,将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉,不可损伤表皮,去毛范围左、右各约3cmx6cm.
2.取受试样品0.1mL涂于动物左侧试验区皮肤上并用纱布和油纸覆盖,再用无刺激性胶布固定,右侧以蒸馆水作对照。
3.4h后除去受试样品,用温水清洗后分别于除去样品后1、24、48h观察涂抹部位皮肤反应,按DB31/T 121-1993《日用工业产品安全卫生质量通用技术要求》中有关皮肤反应积分和刺激强度进行评价。
五.结果:
表家兔急性皮肤刺激试验结果
未见其它毒性作用。
六.结论:
样品皮肤刺激试验分值为0,属无刺激性,符合产品毒理学指标要求。
急性眼刺激试验
一.试验目的:
确定和评价受试物对家兔眼睛一次接触后,是否有刺激作用及其程度。
二.技术依据:
DB31/T 121-1993《日用工业产品安全卫生质量通用技术要求》
三.材料和动物:
1.样品名称:植物降解重构液;
2.样品性状:棕色液体;
3,受试物配制:用原液直接测试。
4.受试动物:普通级白色新西兰种家兔4只,健康无眼部异常,体重(2.1-2.3) kg,由上海杰思捷实验动物有限公司提供,生产许可证号:SCXK(沪)2018-0004。受试动物饲养于普通环境,实验动物饲养室温度(19-20)℃,相对湿度(42-48)%,实验动物使用许可证号:SYXK(沪)2018-0031。家兔饲料由上海舟虞生物科技有限公司提供,合格证号:沪饲证(2021)04027;
四.试验方法:
1.将动物左侧眼脸轻轻拉开,将受试样品0.1mL滴入左侧眼结膜囊中,将上下眼脸闭合10s,右侧眼空白作对照。
2.给药后24h不冲洗,分别于滴眼后6h、24h、48h、72h和4d、7d对动物眼进行检察,如72h未出现刺激反应,即可终止试验。
3.按DB31/T 121-1993《日用工业产品安全卫生质量通用技术要求》中有关眼刺激强度进行评价。
五.结果:
样品对不同动物眼损害程度见《表1眼损害程度观察记录》和《表2眼刺激试验结果》。
表1眼损害程度观察记录
注:*每只动物总分=A×B×5+虹膜积分×5+(C+D+E)×2
A表示角膜混浊程度,B表示角膜受损范围,C表示结膜充血程度,D表示结膜水肿程度,E表示结膜分泌物程度。
表2眼刺激试验结果
未见其它毒性作用。
六.结论:
试验在24h不冲洗条件下,受试物对家兔眼刺激积分指数为0,眼刺激平均指数48h后为0,属无刺激性,符合产品毒理学指标要求。
最后应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物,其特征在于,所述的药物是植物降解重构提取液,所述植物降解重构提取液是采用化学降解重构法使生物质降解重构为植物降解重构提取液;所述生物质为沙柳和/或柠条。
2.根据权利要求1所述的一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物,其特征在于,所述化学降解重构法的条件为:温度低于350℃、压力为常压条件。
3.根据权利要求1所述的一种植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物,其特征在于,所述植物降解重构提取液稀释到浓度为1.25%(v/v)时,对Vero和TZM-b1无明显细胞毒性。
4.一种权利要求1-3任意之一所述的植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1,将生物质用粉碎机进行粉碎;
步骤2,将粉碎后的生物质经计量后往反应釜内加料;
步骤3,接着将专用制剂经计量泵后往反应釜加料;
步骤4,将生物质与专用制剂在反应釜中进行降解重构化学反应;
步骤5,冷凝后形成植物降解重构提取液,反应釜中余下的固体为生物炭。
5.根据权利要求4所述的植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物的制备方法,其特征在于,所述步骤1中,生物质包括沙柳和柠条,生物质经过晾晒处理后再粉碎;粉碎机将生物质粉碎成粉末,粒径为10-15亳米。
6.根据权利要求4所述的植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物的制备方法,其特征在于,所述步骤2中,反应釜为可封闭式反应釜,釜体为金属材料。
7.根据权利要求4所述的植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物的制备方法,其特征在于,所述步骤3中,专用制剂为Fenton试剂(芬顿试剂),配置过程为:向去离子水中加入先酒石酸,充分搅拌混合,再加入硫酸亚铁,再次充分搅拌,然后再滴加过氧化氢,继续充分搅拌均匀后,即可;所述酒石酸、硫酸亚铁、过氧化氢与去离子水的摩尔量为0.2-0.6:1.2-1.8:10-14:50;所述过氧化氢是以过氧化氢水溶液的方式滴加,过氧化氢水溶液的质量分数是30%。
8.根据权利要求4所述的植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物的制备方法,其特征在于,所述步骤4中,在反应釜内反应的温度是100-350℃,压力是常压条件,反应的时间为1-10h。
9.根据权利要求4所述的植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物的制备方法,其特征在于,所述步骤5中,提取液的溶剂在高温下会逐渐汽化成蒸汽,在反应结束后,将蒸汽引导至冷凝器中冷却,即得到植物降解重构提取液,而在反应釜内剩余的无法形成蒸汽的部分为生物炭。
10.一种权利要求1所述的植物型抑制性传播病毒HIV-1和HSV-2的药物的制备系统,包括沙枊等生物质破碎设备、料仓、称量装置、化学制剂罐、化学制剂计量泵、反应釜、炭粉储仓、冷凝器、冷凝液罐、反应釜加热系统和冷凝器冷却系统;
其中,生物质破碎设备、料仓与称量装置依次连接,化学制剂罐与化学制剂计量泵连接,称量装置与化学制剂计量泵均连通至反应釜,反应釜上还连接有冷凝器,冷凝器的一侧连接有冷凝器冷却系统,冷凝器的下方连接有冷凝液罐,反应釜上还设置有反应釜加热系统,反应釜的下方连接有炭粉储仓。
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