CN115226673A - 一种银屑病动物模型的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种银屑病动物模型的构建方法，属于动物模型领域。该构建方法包括以下步骤：以高脂饲料喂养SIRT1功能缺陷型突变动物，得到银屑病动物模型。实验结果表明，本发明构建的银屑病动物模型不仅表现出银屑病样皮肤损伤，而且表现出了银屑病组织学变化；此外，该动物模型的免疫系统异常激活，模型皮肤中的NFkB信号通路被激活，展示了银屑病相关的免疫系统变化。本发明构建的银屑病动物模型与银屑病患者具有非常相似的临床症状，能够展示银屑病相关的组织学改变和免疫系统变化，不仅可以用于银屑病治疗药物的筛选，还能够为研究银屑病发生发展机制提供良好的平台。
Description
技术领域
本发明属于动物模型领域，具体涉及一种银屑病动物模型的构建方法。
背景技术
银屑病(Psoriasis)俗称“牛皮癣”，中医学称之为“白疕”，是一种以淋巴细胞异常活化、角质形成细胞异常增殖分化和炎症细胞浸润为特征的常见的慢性炎症性皮肤疾病，主要组织病理特征包括：表皮内细胞角化不全或角化过度、真皮内血管膨大扭曲、多种炎性细胞浸润等。由于其病程长，皮损广泛，常给患者身心健康带来严重影响。
研究人类疾病病因、发病机制、治疗方法的一种重要工具是动物模型，而银屑病罕见于任何非人类动物，且自然出现的病例极其少见，不适于进行科学研究。因此，建立银屑病动物模型显得尤为必要。
Nickoloff(TRENDS in Molecular Medicine，2006，12(3)：102-106)在2006年提出理想的银屑病样动物模型应满足以下标准：①皮损境界清楚，轻微创伤能引起银屑病样皮损；②组织学改变为表皮增厚、角化不全、颗粒层缺失、真皮血管丛明显；③免疫学发现皮损中浸润的免疫细胞主要是表皮内CD8+T淋巴细胞、真皮内CD4+T淋巴细胞、树突状细胞和巨噬细胞；④生化标记示细胞增殖相关核抗原(Ki-67)表达增加、角蛋白异常表达(如Keratinl6，K16)、核磷酸化一信号转导子与转录激活子3(STAT3)显著表达；⑤药物学证明受累皮损和关节对环孢素A、糖皮质激素、TNF-α阻滞剂等抗银屑病药物治疗有效。但是，目前还未见能完全满足上述标准的动物模型。
为了对银屑病发病机制进行深入研究，目前较为常用的银屑病动物模型主要包括生物医学鼠尾模型、银屑病皮损移植模型、自发性或基因突变鼠模型和转基因动物模型。但是，在现有银屑病转基因动物模型中，大部分小鼠模型通过转基因的方式直接激活免疫反应从而引起银屑病，但这类小鼠模型无法完全展示银屑病相关的发病机制与组织学改变，并且给靶标免疫反应的治疗银屑病药物研发带来困难。目前唯一接近该疾病的完整遗传、免疫和表型改变的小鼠模型是将银屑病患者皮肤异种移植到免疫缺陷小鼠上，但是，此类模型局限性在于只是复制银屑病的皮肤局部反应，并不能反映银屑病的整体发病情况，并且存在构建困难的特点。
建立一种构建方法简单，具有与银屑病患者高度相似的临床症状，能够全面的展示银屑病相关的组织学改变和免疫系统变化的银屑病动物模型，对研究银屑病发生发展机制以及银屑病治疗药物的筛选具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种银屑病动物模型的构建方法，以及该方法构建的银屑病动物模型。
本发明提供了一种银屑病动物模型的构建方法，其特征在于：所述构建方法包括以下步骤：以高脂饲料喂养SIRT1功能缺陷型突变动物，得到银屑病动物模型。
进一步地，所述SIRT1功能缺陷型突变动物为SIRT1蛋白的第169位苏氨酸突变为谷氨酸的转基因动物。
进一步地，所述转基因动物编码SIRT1蛋白的基因，其编码第169位苏氨酸的对应碱基由ACT突变为GAA。
进一步地，所述SIRT1功能缺陷型突变动物的构建方法包括以下步骤：利用CRISPR/Cas9基因打靶策略切割并替换动物SIRT1蛋白的第二号外显子，使动物的SIRT1蛋白的第169位苏氨酸突变为谷氨酸，对应基因的碱基由ACT突变为GAA。
进一步地，所述SIRT1功能缺陷型突变动物的构建方法包括以下步骤：
(1)利用Cas9/sgRNA注射受精卵的方法对动物进行基因敲入，得到嵌合体F0代动物；
(2)嵌合体F0代动物与野生型动物经过交配后得到具有稳定基因型的含有突变基因的F1代杂合子动物；
(3)F1代杂合子动物之间经过交配后得到以下三种基因型的F2代动物：野生型动物SIRT1+/+，突变杂合子动物SIRT1mut/+，突变纯合子动物SIRT1mut/mut；其中，突变杂合子动物SIRT1mut/+或突变纯合子动物SIRT1mut/mut为SIRT1功能缺陷型突变动物。
进一步地，所述动物为小鼠。
进一步地，所述小鼠为C57BL/6小鼠。
进一步地，所述喂养时间为4周以上，优选为8周以上。
进一步地，所述喂养时间为8～9周。
本发明中，8周即56天。
进一步地，所述高脂饲料为脂肪供能比≥50％的高脂饲料，优选为脂肪供能比≥60％的高脂饲料；
和/或，所述高脂饲料的喂养采用自由取食方式，喂养期间，SIRT1功能缺陷型突变动物按需自由饮水。
脂肪供能比指饲料能量比(kcal％)中的脂肪成分占比。
进一步地，脂肪供能比为60％的高脂饲料中，脂肪占比为60％，蛋白质占比为20％，碳水化合物占比为20％。
本发明还提供了上述方法构建的银屑病动物模型。
实验结果表明，本发明通过高脂饲料喂养SIRT1功能缺陷型突变动物，成功构建了银屑病动物模型。该银屑病动物模型不仅表现出银屑病样皮肤损伤，而且表现出了银屑病组织学变化，表皮异常增厚，病变部位形成门罗脓肿，角化不全，毛细血管增多；此外，该动物模型的免疫系统异常激活，模型皮肤中的NFkB信号通路被激活，展示了银屑病相关的免疫系统变化。
本发明的建模方法简单便捷，容易操作。本发明构建的银屑病动物模型与银屑病患者具有非常相似的临床症状，能够展示银屑病相关的组织学改变和免疫系统变化，不仅可以用于银屑病治疗药物的筛选，还能够为研究银屑病发生发展机制提供良好的平台。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1：高脂喂养SIRT1mut/+小鼠、SIRT1mut/mut小鼠后的皮毛状态和皮肤损伤情况。
图2：高脂喂养8周后各组小鼠的脾脏组织。
图3：高脂喂养4周后各组小鼠的毛发脱落发生率。
图4：高脂喂养4周后各组小鼠的皮肤损伤发生率。
图5：高脂喂养4周后各组小鼠的搔痒抓挠次数(*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001)。
图6：各组小鼠实验8周后背部、腹部、右侧、左侧的照片。
图7：各组小鼠的皮肤组织学表征：(a)小鼠皮肤组织学H&E染色结果；(b)小鼠皮肤病变H&E染色结果在高倍镜下的细节：门罗脓肿(黑色箭头)，角化不全(角化层有核角化细胞，黑色三角形)，表皮中性粒细胞浸润小巢(红色箭头)，毛细血管(星号)，真皮炎性浸润(白色三角形)。
图8：利用免疫组化染色分析的各组小鼠皮肤组织中CD31阳性细胞和Ki-67的情况；标尺，100μm；***，P＜0.001。
图9：(a)各组小鼠皮肤组织切片的F4/80单抗(红色)/DAPI(蓝色)和CD11b单抗(绿色)/DAPI(蓝色)共聚焦显微镜分析结果(标尺，100μm)；(b)各组小鼠的皮肤组织中IL-4、TNF-α、IL-1β、IL-23、IL-17A的相对mRNA水平(*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001)。
图10：各组小鼠皮肤的免疫组化染色结果，其中棕色表示p-STAT3/P65/IL-6表达，蓝色表示苏木精计数染色。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
高脂饲料(High-Fat Dietary，HFD)购买于北京华阜康生物科技股份有限公司，货号H10060。
实施例1：本发明构建银屑病动物模型的方法
1、实验动物的选择和饲养
实验动物为在C57BL/6遗传背景下的SIRT1功能缺陷型突变小鼠，小鼠8周龄时开始高脂饮食喂养诱导银屑病，此时小鼠体重为：18-25g。
2、构建SIRT1功能缺陷型突变小鼠的方法
利用CRISPR/Cas9基因打靶策略切割并替换小鼠SIRT1第二号外显子，使小鼠SIRT1蛋白的第169位苏氨酸(Thr/T)突变为谷氨酸(Glu/E)，相对应的碱基由ACT突变为GAA。具体操作为：
(1)利用Cas9/sgRNA注射受精卵的方法进行基因敲入，得到嵌合体F0代小鼠；
(2)嵌合体F0代小鼠与野生型小鼠经过交配后获得具有稳定基因型的含有突变基因的F1代杂合子小鼠；
(3)F1代杂合子小鼠经过交配后得到以下三种基因型的F2代小鼠：野生型小鼠(标记为WT或SIRT1+/+)、突变杂合子小鼠(标记为SIRT1mut/+)、突变纯合子小鼠(标记为SIRT1mut /mut)。
其中，SIRT1mut/+小鼠、SIRT1mut/mut小鼠均为SIRT1功能缺陷型突变小鼠。
3、构建银屑病动物模型的方法
利用脂肪供能比60％的高脂饲料喂养8周龄SIRT1mut/mut小鼠，采用自由取食的方式，每周定时添加饲料，连续喂养8周后，银屑病动物模型构建完成。
实施例2：本发明构建银屑病动物模型的方法
按照实施例1步骤2的方法获得以下三种基因型小鼠：野生型小鼠(标记为WT或SIRT1+/+)；突变杂合子小鼠(标记为SIRT1mut/+)；突变纯合子小鼠(标记为SIRT1mut/mut)。
利用脂肪供能比60％的高脂饲料喂养8周龄SIRT1mut/+小鼠，采用自由取食的方式，每周定时添加饲料，连续喂养8周后，银屑病动物模型构建完成。
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1：动物模型的皮肤损伤检测
1、受试动物：
按照实施例1步骤2的方法，构建SIRT1功能缺陷型突变小鼠，通过繁育获得以下三种基因型小鼠：野生型小鼠(标记为WT或SIRT1+/+)；突变杂合子小鼠(标记为SIRT1mut/+)；突变纯合子小鼠(标记为SIRT1mut/mut)。
2、实验方法
(1)分组
3组高脂饲料饲喂组：按照实施例1步骤3的方法，利用脂肪供能比60％的高脂饲料分别喂养8周龄的SIRT1+/+小鼠、SIRT1mut/+小鼠、SIRT1mut/mut小鼠，采用自由取食的方式，每周定时添加饲料。
1组正常饮食饲喂组：以正常饮食(小鼠维持饲料)饲喂8周龄的SIRT1mut/mut小鼠，采用自由取食的方式，每周定时添加饲料。
每组8只小鼠。
(2)皮肤损伤检测
分别于喂养2周、4周、8周后，观察小鼠的皮毛状态和皮肤损伤情况，并观察记录小鼠毛发脱落情况、皮肤损伤面积、搔痒抓挠现象(参见图1)。喂养8周后，处死小鼠，取脾脏组织，比较小鼠脾脏大小。
毛发脱落判断方法：当小鼠表皮发现肉眼可见的皮肤裸露时，判断此时小鼠发生毛发脱落。
皮肤损伤判断方法：拨开小鼠毛发，在皮肤观察到肉眼可见皮肤损伤，用手压之有实质感。
搔痒抓挠次数统计方法：将小鼠放置于一个封闭的平面区域中，待小鼠稳定之后，摄像记录十分钟之内小鼠的行为，并根据摄像统计小鼠抬腿抓挠背部的次数。
3、实验结果
正常饮食饲喂的SIRT1mut/mut小鼠皮肤表现正常，无银屑病表型(图6)。从图1和图6看出，高脂饲料饲喂2周后，SIRT1mut/mut小鼠的皮毛明显油腻；高脂饲料喂养4周后，SIRT1mut /+小鼠出现油性毛发，而SIRT1mut/mut小鼠出现皮肤损伤和脱发；随着高脂饮食饲喂时间的延长，SIRT1mut/mut小鼠出现红斑、硬结、脱皮等银屑病症状。
从图3～5可以看出，高脂饲料饲喂4周后，与野生型小鼠和SIRT1mut/+小鼠相比，SIRT1mut/mut小鼠的毛发脱落发生率明显增多(图3)，皮肤损伤发生率明显增加(图4)，小鼠搔痒抓挠次数明显增加(图5)。从图2可以看出，高脂饲料饲喂8周后，与野生型小鼠和SIRT1mut/+小鼠相比，SIRT1mut/mut小鼠的脾脏明显增大。
上述结果表明，正常饮食饲喂SIRT1mut/mut小鼠无法诱导银屑病样皮肤损伤，高脂饲料饲喂野生型小鼠也无法诱导银屑病样皮肤损伤；高脂饲料饲喂SIRT1mut/+小鼠和SIRT1mut/mut小鼠能够成功诱导银屑病样皮肤损伤，且SIRT1mut/mut小鼠的银屑病样皮肤损伤程度明显高于SIRT1mut/+小鼠。上述实验结果证明本发明利用高脂饮食饲喂SIRT1功能缺陷型突变小鼠建立的动物模型表现出银屑病样皮肤损伤。
实验例2：动物模型的皮肤组织学测试
1、实验方法
(1)组织石蜡切片制备：取实验例1利用高脂饲料喂养8周后的SIRT1mut/+小鼠、SIRT1mut/mut小鼠损伤部位皮肤，以及SIRT1+/+小鼠相同位置的皮肤，于生理盐水中清洗干净，置于PBS配置的4％多聚甲醛溶液中固定2-3天。固定完成后的组织，经过组织脱水、组织透明、组织浸蜡、组织包埋，成为组织石蜡块。最后，将组织石蜡块在石蜡切片机上切成每张厚度5μm组织石蜡切片。
(2)皮肤H&E染色：将石蜡切片于二甲苯中脱蜡10分钟，更换新鲜二甲苯再脱蜡10分钟。再将切片分别置入100％、90％、70％及ddH2O中各浸泡5分钟，使组织复水。之后，将苏木素染色滴加到载玻片上，使染色完全浸没组织，染色3分钟，之后在自来水中缓慢冲洗10分钟去除多余染色剂。最后，将伊红染液滴加到载玻片上，使染色完全浸没组织，染色30～60秒，70％乙醇缓慢冲洗3分钟。分别于70％、90％、100％乙醇中各浸泡10秒进行脱水，再于二甲苯中透明5分钟，更换用新鲜二甲苯，再透明5分钟。用中性树胶封片，显微镜下或扫片机中观察并拍照。
(3)免疫组化(IHC)染色分析
利用免疫组化染色分析方法，检测对各组小鼠皮肤组织中的CD31阳性细胞数目和Ki-67数目。
2、实验结果
结果如图7所示，高脂饲料喂养后的野生型小鼠皮肤H&E染色显示其组织学没有明显变化，而高脂饲料喂养后的SIRT1mut/mut和SIRT1mut/+小鼠表皮异常增厚，上层增厚角质化(角化过度)，指状表皮突出进入真皮；小鼠皮肤高倍镜细节显示：高脂饲料喂养后的SIRT1mut/mut小鼠病变部位形成门罗脓肿，角化不全，毛细血管增多，表皮中性粒细胞浸润小巢以及真皮炎性浸润。
各组小鼠皮肤组织中的CD31阳性细胞和Ki-67的数目如图8所示。可以看出，与高脂饲料喂养后的野生型小鼠相比，高脂饲料喂养后的SIRT1mut/+小鼠和SIRT1mut/mut小鼠皮肤组织中的CD31阳性细胞和Ki-67的数目显著增加。说明高脂饲料喂养后的SIRT1mut/+小鼠和SIRT1mut/mut小鼠皮下血管增加，角质形成层细胞异常增殖。
上述实验结果表明本发明利用高脂饮食饲喂SIRT1功能缺陷型突变小鼠建立的动物模型表现出银屑病组织学变化。
实验例3：动物模型的免疫系统检测
1、实验方法
(1)荧光定量PCR(Q-PCR)检测：取实验例1利用高脂饲料喂养8周后的SIRT1mut/+小鼠、SIRT1mut/mut小鼠损伤部位皮肤，以及相同位置SIRT1+/+小鼠皮肤，分别提取皮肤组织RNA，并反转录为cDNA。对银屑病发生发展中关键的细胞因子进行Q-PCR检测。
(2)皮肤组织免疫荧光染色：取实验例1利用高脂饲料喂养8周后的SIRT1mut/+小鼠SIRT1mut/mut小鼠损伤部位的皮肤，以及SIRT1+/+小鼠相同位置的皮肤，分别制作冰冻切片并放置于-80℃保存。在染色时，用4％多聚甲醛固定皮肤切片20分钟，之后使用PBS冲洗5分钟，重复两次。之后，用0.3％Trixton-100处理切片十分钟，再次使用PBS冲洗5分钟，重复两次。接下来，组织用5％BSA处理一个小时。PBS冲洗之后，用一抗4度孵育过夜。一抗经过PBS冲洗3个5分钟之后，荧光二抗室温孵育1个小时。PBS冲洗二抗之后，DAPI染色15分钟，，并使用PBS冲洗。最后，用Anti-fading封片并使用共聚焦显微镜拍照。
2、实验结果
Q-PCR结果(图9b)显示，与高脂饲料喂养后的野生型小鼠相比，高脂饲料喂养后的SIRT1mut/mut小鼠损伤部位皮肤炎症因子IL-4、TNF-α、IL-1β、IL-23、IL-17A的mRNA表达显著增加。
皮肤组织免疫荧光染色结果(图9a)显示，与高脂饲料喂养后的野生型小鼠相比，高脂饲料喂养后的SIRT1mut/mut小鼠和SIRT1mut/+小鼠真皮层中CD11b+嗜中性粒细胞和F4/80+巨噬细胞明显增加。
上述实验结果表明本发明利用高脂饮食饲喂SIRT1功能缺陷型突变小鼠建立的动物模型的免疫系统异常激活，表现出银屑病的免疫学改变。
实验例4：动物模型皮肤中NFkB信号通路测试
1、实验方法
取实验例1利用高脂饲料喂养8周后的SIRT1mut/+小鼠、SIRT1mut/mut小鼠损伤部位皮肤，以及相同位置SIRT1+/+小鼠皮肤，分别进行免疫组化(IHC)染色分析，具体方法如下：
(1)烤片：将石蜡切片置于65℃烘箱中烘烤，使石蜡融化。
(2)样品处理：将石蜡切片于二甲苯中脱蜡10分钟，更换新鲜二甲苯再脱蜡10分钟。再将切片分别置入100％、90％、80％、70％及ddH2O中各浸泡5分钟，使组织复水。
(3)抗原修复：取柠檬酸钠抗原缓冲液A液9mL，B液41mL，混合并用ddH2O稀释至500mL，并于微波炉中煮沸。将切片置于抗原修复液中浸泡20分钟，低或保持抗原修复液的高温但不剧烈沸腾，避免损坏组织。自然冷却至室温后，取出切片，PBS缓冲液清洗3次，每次5～10分钟。
(4)去除内源过氧化物酶：将切片置入现配3％H2O2中，浸泡20分钟。PBS缓冲液清洗3次，每次5～10分钟。
(5)打孔：滴加0.3％TritonX100到载玻片上，使液体完全浸没组织，打孔10～15分钟。PBS缓冲液清洗3次，每次5～10分钟。
(6)封闭：将5％BSA滴加到载玻片上，使液体完全浸没组织，于湿盒中室温封闭1个小时。
(7)孵育一抗：按照抗体说明书，用3％BSA稀释一抗。将稀释好的一抗(3％BSA作为阴性对照)滴加到载玻片上，使液体完全浸没组织，于湿盒中4℃孵育过夜。PBS缓冲液清洗3次，每次5～10分钟。
(8)孵育二抗：滴加对应二抗到载玻片上，使液体完全浸没组织，于湿盒中室温孵育1个小时。PBS缓冲液清洗3次，每次5～10分钟。
(9)显色：按说明书稀释DAB显色液。滴加稀释后的DAB显色液到载玻片上，使液体完全浸没组织，待组织开始显现出黄棕色时，记录显色时间。同一抗体的显色时间需一样。PBS缓冲液清洗3次，每次5～10分钟。
(10)苏木素染色：将苏木素染色滴加到载玻片上，使染色完全浸没组织，染色3～5分钟，自来水缓慢冲洗10分钟。于1％盐酸乙醇中分化1～3秒，将组织过多的染色剂脱去。再将切片置于1％氨水中10～30秒或浸泡于ddH2O中10分钟进行反蓝。
(11)组织脱水：将切片分别置于70％、80％、90％、100％乙醇中各浸泡10秒进行脱水，再于二甲苯中透明5分钟，更换用新鲜二甲苯，再透明5分钟。
(12)封片：用中性树胶封片，显微镜下或扫片机中观察并拍照。
2、实验结果
结果如图10所示，可以看出，与高脂饲料喂养后的野生型小鼠相比，高脂饲料喂养后的SIRT1mut/mut小鼠皮肤中p-STAT3，p65，IL-6的表达量显著升高(p＜0.05)，说明高脂饲料喂养后的SIRT1mut/mut小鼠皮肤中NFkB信号通路被激活。
上述实验结果表明本发明利用高脂饮食饲喂SIRT1功能缺陷型突变小鼠建立的动物模型皮肤中的NFkB信号通路被激活，出现了银屑病相关的免疫系统变化。
综上，本发明提供了一种银屑病动物模型的构建方法，属于动物模型领域。该构建方法包括以下步骤：以高脂饲料喂养SIRT1功能缺陷型突变动物，得到银屑病动物模型。实验结果表明，本发明构建的银屑病动物模型不仅表现出银屑病样皮肤损伤，而且表现出了银屑病组织学变化；此外，该动物模型的免疫系统异常激活，模型皮肤中的NFkB信号通路被激活，展示了银屑病相关的免疫系统变化。本发明构建的银屑病动物模型与银屑病患者具有非常相似的临床症状，能够展示银屑病相关的组织学改变和免疫系统变化，不仅可以用于银屑病治疗药物的筛选，还能够为研究银屑病发生发展机制提供良好的平台。
Claims (10)
1.一种银屑病动物模型的构建方法，其特征在于：所述构建方法包括以下步骤：以高脂饲料喂养SIRT1功能缺陷型突变动物，得到银屑病动物模型。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述SIRT1功能缺陷型突变动物为SIRT1蛋白的第169位苏氨酸突变为谷氨酸的转基因动物。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：所述转基因动物编码SIRT1蛋白的基因，其编码第169位苏氨酸的对应碱基由ACT突变为GAA。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：所述SIRT1功能缺陷型突变动物的构建方法包括以下步骤：利用CRISPR/Cas9基因打靶策略切割并替换动物SIRT1蛋白的第二号外显子，使动物的SIRT1蛋白的第169位苏氨酸突变为谷氨酸，对应基因的碱基由ACT突变为GAA。
5.根据权利要求1～4任一项所述的构建方法，其特征在于：所述SIRT1功能缺陷型突变动物的构建方法包括以下步骤：
(1)利用Cas9/sgRNA注射受精卵的方法对动物进行基因敲入，得到嵌合体F0代动物；
(2)嵌合体F0代动物与野生型动物经过交配后得到具有稳定基因型的含有突变基因的F1代杂合子动物；
(3)F1代杂合子动物之间经过交配后得到以下三种基因型的F2代动物：野生型动物SIRT1+/+，突变杂合子动物SIRT1mut/+，突变纯合子动物SIRT1mut/mut；其中，突变杂合子动物SIRT1mut/+或突变纯合子动物SIRT1mut/mut为SIRT1功能缺陷型突变动物。
6.根据权利要求1～5任一项所述的构建方法，其特征在于：所述动物为小鼠。
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于：所述小鼠为C57BL/6小鼠。
8.根据权利要求1～7任一项所述的构建方法，其特征在于：所述喂养时间为4周以上，优选为8周以上。
9.根据权利要求1～7任一项所述的构建方法，其特征在于：所述高脂饲料为脂肪供能比≥50％的高脂饲料，优选为脂肪供能比≥60％的高脂饲料；
和/或，所述高脂饲料的喂养采用自由取食方式，喂养期间，SIRT1功能缺陷型突变动物按需自由饮水。
10.权利要求1～9任一项所述方法构建的银屑病动物模型。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102712925A (zh) * | 2009-07-24 | 2012-10-03 | OPKOCuRNA公司 | 通过抑制sirtuin(sirt)的天然反义转录物来治疗sirtuin(sirt)相关性疾病 |
| CN104335970A (zh) * | 2013-08-05 | 2015-02-11 | 应哲康 | 一种构建人银屑病小鼠模型的方法及其应用 |
| CN108107198A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-06-01 | 四川大学 | Sirt1-t177位点磷酸化在衰老相关疾病中作为生物标记物的用途 |
| CN110075278A (zh) * | 2018-06-27 | 2019-08-02 | 中国人民解放军南京军区福州总医院 | 利拉鲁肽在银屑病治疗药物中以及在2型糖尿病合并银屑病治疗药物中的应用 |
| JP2019218296A (ja) * | 2018-06-20 | 2019-12-26 | 日本精化株式会社 | サーチュイン１遺伝子活性化剤 |
-
2021
- 2021-04-23 CN CN202110444432.1A patent/CN115226673B/zh active Active
Patent Citations (5)
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115226673B (zh) | 2023-06-23 |
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