CN115201161A - 试剂、血液细胞分析方法及分析仪 - Google Patents
试剂、血液细胞分析方法及分析仪 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115201161A CN115201161A CN202110379515.7A CN202110379515A CN115201161A CN 115201161 A CN115201161 A CN 115201161A CN 202110379515 A CN202110379515 A CN 202110379515A CN 115201161 A CN115201161 A CN 115201161A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reagent
- intensity information
- platelets
- detection
- processor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 137
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 29
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 claims abstract description 106
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 67
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 67
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 56
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims abstract description 28
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 12
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 107
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 49
- -1 organic acid salt Chemical class 0.000 claims description 42
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 39
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 20
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 15
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 12
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 12
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 claims description 11
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 claims description 10
- 238000004883 computer application Methods 0.000 claims description 9
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 claims description 8
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 claims description 7
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 claims description 7
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 claims description 7
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 claims description 7
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 claims description 7
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 claims description 7
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 claims description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 6
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 6
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000004891 communication Methods 0.000 claims description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 abstract description 31
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 14
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 9
- 239000003219 hemolytic agent Substances 0.000 description 28
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 19
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 16
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 12
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 10
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 8
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 8
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 8
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 6
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 6
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 6
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 5
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- FDCJDKXCCYFOCV-UHFFFAOYSA-N 1-hexadecoxyhexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCCCCCC FDCJDKXCCYFOCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 4
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 229930002600 steroidal saponin Natural products 0.000 description 2
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182493 triterpene saponin Natural products 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- VUWCWMOCWKCZTA-UHFFFAOYSA-N 1,2-thiazol-4-one Chemical class O=C1CSN=C1 VUWCWMOCWKCZTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- IGFHQQFPSIBGKE-UHFFFAOYSA-N Nonylphenol Natural products CCCCCCCCCC1=CC=C(O)C=C1 IGFHQQFPSIBGKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCO LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLEBIOOXCVAHBD-QKMCSOCLSA-N dodecyl beta-D-maltoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OCCCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NLEBIOOXCVAHBD-QKMCSOCLSA-N 0.000 description 1
- DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M dodecyl(trimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- LRMHFDNWKCSEQU-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;phenol Chemical compound CCOCC.OC1=CC=CC=C1 LRMHFDNWKCSEQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N imidurea Chemical compound O=C1NC(=O)N(CO)C1NC(=O)NCNC(=O)NC1C(=O)NC(=O)N1CO ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1 PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N nonylphenol Chemical compound CCCCCCCCCC1=CC=CC=C1O SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000001194 polyoxyethylene (40) stearate Substances 0.000 description 1
- 235000011185 polyoxyethylene (40) stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940051841 polyoxyethylene ether Drugs 0.000 description 1
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 description 1
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000011546 protein dye Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010339 sodium tetraborate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N trisodium borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]B([O-])[O-] BSVBQGMMJUBVOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008130 triterpenoid saponins Chemical class 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N15/1434—Optical arrangements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/47—Scattering, i.e. diffuse reflection
- G01N21/49—Scattering, i.e. diffuse reflection within a body or fluid
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
- G01N2015/1486—Counting the particles
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本申请公开了一种试剂、血液细胞分析方法及分析仪。本申请的试剂包括作为溶血试剂的第一试剂，和第二试剂；第二试剂为糖蛋白特异性染料。利用本申请的试剂体系，在溶血情况下进行血小板检测，能够根据荧光强度信息有效区分溶血后的红细胞碎片与血小板，从而提高了血小板检测的准确性。并且，在溶血情况下，在同一通道的一次测试中，还能够同时实现白细胞的区分和检测，从而简化了血液检测、降低了检测成本。
Description
技术领域
本申请涉及血液细胞检测技术领域，特别是涉及一种试剂、血液细胞分析方法及分析仪。
背景技术
人血液中含有红细胞、白细胞、血小板等各种细胞。其中血小板是直径为2-3微米的无核细胞，正常人的血液中每微升含有15万-35万个血小板。
众所周知，血小板的常用测定方法之一是电阻抗法。该方法是测定待测血液样本从两个电极间通过时的电阻脉冲，将其绘制成直方图进行分析。原则上，电阻脉冲的强度与待测血液样本中细胞的体积相关；因此可以通过分析电阻脉冲的直方图判断待测血液样本中是否含有血小板，从而实现血小板检测。然而，电阻抗法在测试某些特殊样本时会影响血小板的测试准确性和精确度；例如，含大血小板和小红细胞的样本，这种样本中大血小板的体积与小红细胞体积类似，因此难以通过电阻抗法进行区分。
针对电阻抗法无法进行区分的情况，有研究提出用对血小板的表面抗原有特异性的标记抗体对血小板进行计数的方法，例如美国临床病理学杂志(2001):115,p460-464。但是，这种方法在测试过程中需要使用抗原抗体反应，一般需要花很长时间才能得到结果；因此，该方法不能满足临床上需要紧急检测血小板进行判断的使用需求，例如判断是否需要输血等需紧急情况。
流式细胞技术可以迅速测定血液中的细胞，已广泛用于血液细胞的检测，比如美国专利6114173号、4882284号及5891731号都公开了在非溶血条件下，利用染料对血细胞进行染色区分，然后采用流式细胞技术进行血小板或其它血细胞检测。但是，在血液中有时会出现破碎红细胞和脂质等，其大小与血小板类似，因此会在测定时作为杂质影响血小板测定，特别是在测定需要输血的血小板低的样本，这些杂质的影响会更大。
针对以上问题，SYSMEX公司的专利CN 101173921公开了一种能够有效的从血细胞和脂质颗粒等血液中的杂质中区分出血小板加以测定的技术，其中记述了一类对血小板具有较好特异性的染料，能够在荧光方向有效的区分血小板和血细胞中的杂质。但这种方法需要在单独的测试通道中进行，并且其对红细胞碎片和血小板不能够有效的区分，在临床上检验一些红细胞易碎样本就会产生较大的干扰。因此在检验血小板时，有效的区分血小板和红细胞碎片及其它可能的杂质就显得尤为重要。
综上所述，开发一种便捷、快速、准确的血小板检测技术，仍然是临床检验的迫切需要。
发明内容
本申请的目的是提供一种新的试剂，基于该试剂的血液细胞分析方法以及血液细胞分析仪。
为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：
本申请的第一方面公开了一种试剂，该试剂包括作为溶血试剂的第一试剂，和第二试剂；第二试剂为糖蛋白特异性染料。
需要说明的是，本申请的试剂用于血液细胞检测，在溶血情况下，由于采用糖蛋白特异性染料进行染色，能够通过染色后的荧光强度信息区分红细胞碎片和血小板。本申请的试剂只需要采用一种光学信号即荧光信号，就能实现血小板的准确检测；采用本申请的试剂进行血小板检测具有便捷、快速、准确等优点；能够很好的满足临床使用需求。
还需要说明的是，本申请的试剂在溶血情况下对血小板进行检测，能够通过荧光强度信息有效的将血小板、红细胞碎片和白细胞三者区分开来。因此，本申请的试剂能够在一个通道内通过一次测试、且采用一种光学信号同时区分并检测血小板和白细胞。可以理解，本申请发明人发现利用本申请的试剂采用一种荧光信号就能实现血小板、白细胞的区分和计数；如果需要进一步的对白细胞进行分类，例如三分类、四分类，则还需要结合散射光强度信息，根据至少两种光学信号进行白细胞分类和分类后的各类白细胞的计数。
本申请的一种实现方式中，糖蛋白特异性染料包括麦胚芽素荧光标记染料。
本申请的一种实现方式中，麦胚芽素荧光标记染料选自FITC-wheat germagglutinin、RB-wheat germ agglutinin、CY3-wheat germ agglutinin和CY5-wheat germagglutinin中的至少一种。
需要说明的是，本申请发现采用糖蛋白特异性染料对血细胞进行染色，能够通过荧光强度区分血小板和红细胞碎片，从而实现血小板的准确检测；可以理解，麦胚芽素荧光标记染料属于糖蛋白特异性染料中的一类，理论上来说，其它类似功能的糖蛋白特异性染料同样可以用于本申请。同样的，FITC-wheat germ agglutinin、RB-wheat germagglutinin、CY3-wheat germ agglutinin和CY5-wheat germ agglutinin也都属于麦胚芽素荧光标记染料，理论上来说，其它类似功能的麦胚芽素荧光标记染料也可以用于本申请。
本申请的一种实现方式中，第一试剂包括阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂中的至少一种。
本申请的一种实现方式中，阳离子表面活性剂可选自十二烷基三甲基氯化铵和氯化铵等中的一种或多种。两性离子表面活性剂例如可以是氨基酸型两性离子表面活性剂和/或甜菜碱型两性离子表面活性剂。
本申请的一种实现方式中，第一试剂包括非离子表面活性剂，非离子表面活性剂任选地为烷基糖苷、三萜皂苷和甾族皂苷中的至少一种。
本申请的一种实现方式中，烷基糖苷为通式I的糖苷类化合物；
R-(CH2)n-CH3 (I)
其中，R为单糖、去氧单糖和多糖中的至少一种，n为5～17的整数。
本申请的一种实现方式中，第一试剂还包括通式II所示结构中的至少一种非离子表面活性剂。
R1-R2-(CH2CH2O)m-H (II)
其中，R1为C8-C23的烷基，R2为-O-、
或-COO-，m为10～50的整数。
本申请的一种实现方式中，非离子表面活性剂(如脂肪酸甘油酯类、多元醇类、聚氧乙烯型)具体可选自由脂肪酸单甘油酯、脂肪酸二甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、山梨醇脂肪酸酯、聚山梨酯、聚氧乙烯脂肪酸脂、聚氧乙烯(40)硬脂酸脂、聚氧乙烯(20)油酸脂、聚氧乙烯(23)十二烷基醇醚、聚氧乙烯(20)十六烷基醇醚、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯酚醚、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、壬基酚聚氧乙烯醚、普朗尼克68、司盘类(Spans)、吐温类(Tweens)、Triton类(如Triton X-100)、卖泽类(Myri)、苄泽类(Brij)和皂素组成的组中的一种或多种。
本申请的一种实现方式中，第一试剂还包括至少一种有机酸和/或至少一种有机酸盐，有机酸为具有至少一个羧基或磺酸基的有机酸，有机酸盐为具有至少一个羧基或磺酸基的有机酸的碱金属的盐。
需要说明的是，本申请的关键在于创造性的采用糖蛋白特异性染料，在溶血情况下进行血小板准确区分检测；至于具体的溶血剂可以参考现有使用的溶血剂，例如，阳离子表面活性剂溶血剂、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂溶血剂、两性离子表面活性剂溶血剂等，只要能够溶解红细胞的溶血剂都可以用于本申请。
本申请的第二方面公开了本申请的试剂在分析血液样本中血小板和/或白细胞的用途。
本申请的第三方面公开了一种血液细胞分析方法，其包括采用本申请的试剂处理待测血液样本，获取经处理后的待测血液样本的荧光强度信息，根据荧光强度信息区分血小板和/或对血小板进行计数。
本申请的一种实现方式中，本申请的血液细胞分析方法还包括，根据荧光强度信息区分白细胞和/或对白细胞进行计数。
需要说明的是，本申请在血小板检测的研究过程中发现，本申请的试剂在溶血情况下，能够通过荧光强度信息有效的将血小板、红细胞碎片和白细胞三者区分开来。因此，本申请的血液细胞分析方法，可以根据需求同时检测血小板和白细胞；当然，也可以单独进行血小板或白细胞的检测。
本申请的一种实现方式中，本申请的血液细胞分析方法还包括在单次测试中，除了获取经处理后的待测血液样本的荧光强度信息外，还能同时获取其散射光强度信息，根据散射光强度信息和荧光强度信息对白细胞进行分类，并对分类的白细胞分别进行计数。
需要说明的是，本申请的关键在于仅采用一种光学信号，即荧光强度信息，就能实现血小板和白细胞的区分和计数。当然，采用散射光强度信息和荧光强度信息，两种光学信号同样也可以实现以上功能；此外，更进一步的，结合两种光学信号，还可以实现白细胞的分类，以及分类后的白细胞的计数。
本申请的第四方面公开了一种血液细胞分析仪，其包括采样模块、反应模块、检测模块和分析模块；采样模块包括用于吸取并转移待测血液样本的采样器；反应模块包括反应室和试剂供应部，反应室与采样器和试剂供应部流体连接，反应室用于将待测血液样本与第一试剂和第二试剂混合反应，以获得经溶血和染色处理后的血液样本，试剂供应部用于将第一试剂和第二试剂提供至反应室，其中，第一试剂为溶血试剂，第二试剂为糖蛋白特异性染料；检测模块包括光源、检测室和荧光检测器，光源用于将光束对准与反应室流体连通的检测室，检测室被配置为使经溶血和染色处理后的血液样本中的粒子逐个通过，荧光检测器用于采集检测室中粒子的荧光强度信息；分析模块，包括处理器和编程有计算机应用程序的非暂时性计算机可读存储介质，其中，处理器与荧光检测器可操作地连接，当计算机应用程序被所述处理器执行时，使处理器根据荧光强度信息区分血小板和/或对血小板进行计数。
本申请的一种实现方式中，当计算机应用程序被处理器执行时，进一步使得处理器根据荧光强度信息区分白细胞和/或对白细胞进行计数。
本申请的一种实现方式中，检测模块还包括散射光检测器，散射光检测器用于采集通过检测室的经溶血和染色处理后的血液样本中粒子的散射光强度信息，处理器与散射光检测器可操作地连接，当计算机应用程序被处理器执行时，进一步使得处理器根据散射光强度信息和荧光强度信息对白细胞进行分类，并对分类的白细胞分别进行计数。
由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：
利用本申请的试剂体系，在溶血情况下进行血小板检测，能够根据荧光强度信息有效区分溶血后的红细胞碎片与血小板，从而提高了血小板检测的准确性。并且，在溶血情况下，在同一通道的一次测试中，还能够同时实现白细胞的区分和检测，从而简化了血液检测、降低了检测成本。
附图说明
图1是本申请实施例一中待测血液样本的粒子荧光信号分布图；
图2是本申请实施例一中待测血液样本的白细胞分类的散点图；
图3是本申请实施例二中待测血液样本的粒子荧光信号分布图；
图4是本申请实施例二中待测血液样本的白细胞分类的散点图；
图5是本申请实施例三中待测血液样本的粒子荧光信号分布图；
图6是本申请实施例三中待测血液样本的白细胞分类的散点图；
图7是本申请实施例四中待测血液样本的粒子荧光信号分布图；
图8是本申请实施例四中待测血液样本的白细胞分类的散点图；
图9是本申请实施例五中血小板浓度检测结果相关性分析结果图。
具体实施方式
本领域技术人员熟知，目前常规使用的血小板检测方法是电阻抗法，虽然也有研究显示可以采用血小板特异性的染料进行血小板检测；但是，这些检测都是在非溶血的情况下进行，并且，对于红细胞易碎样本，难以有效区分红细胞碎片和血小板；从而影响血小板检测的准确性。
本申请发明人创造性的发现采用一种特殊的膜蛋白染料可以在溶血情况下通过荧光强度信息这一个光学信号，就能有效的区分红细胞碎片和血小板，实现血小板的准确区分和计数；并且，同时还能够实现白细胞的区分和计数。进一步的，结合散射光强度信息，根据两种光学信号可以实现白细胞的分类，并对分类后的各种白细胞进行计数。
根据以上研究和发现，本申请研发了一种新的试剂，该试剂包括作为溶血试剂的第一试剂，和第二试剂；其中，第二试剂为糖蛋白特异性染料。
本申请的试剂能够用光学检测方法，在同一个溶血通道单次测试中使用一种染料，检测一种光学信号就完成血小板与试样中的其他粒子区分，从而获得准确的血小板的参数。
进一步地，利用本申请的试剂用光学检测方法对血样进行分析时，不仅能够在溶血条件下将血小板与细胞碎片等杂质区分，而且还能很好地对白细胞进行染色区分，从而能对白细胞进行计数和分类，从而实现在一个通道内进行血小板区分和白细胞分类计数，节约了检测时间、简化了操作流程、降低了仪器的复杂程度。经验证，本发明的方法获得的血小板计数与现有的血液分析仪以其他方法检测得到的结果具有高度的一致性。
更进一步，利用本申请的试剂用光学检测方法对血样进行分析时，在常规的白细胞计数通道或白细胞分类通道中，对白细胞的计数和/或分类不产生影响。本申请的方法也不会产生白细胞干扰大尺寸血小板和血小板聚集体的情况。本发明的方法能够同时对白细胞进行分类，获得三分类或四分类等的白细胞检测结果。
本申请中，糖蛋白特异性染料是指能够对细胞膜上的糖蛋白进行特异性染色的荧光染料，这类染料能够对血小板、红细胞和白细胞的细胞膜进行染色；本申请创造性的发现，这类染料在对血小板和红细胞碎片进行染色时，两者的荧光强度存在区分，从而实现血小板的准确准确检测。同样的，染色后白细胞的荧光强度也与血小板和红细胞碎片有所不同，因此，也能够实现白细胞的区分和计数。其中，糖蛋白特异性染料，例如可为麦胚芽素荧光标记染料，可选自FITC-wheat germ agglutinin、RB-wheat germ agglutinin、CY3-wheat germ agglutinin和CY5-wheat germ agglutinin中的一种或多种的组合，可以商业化购买获得的，都可以用于本申请，实现血小板和白细胞的区分和计数。
本申请的试剂中，第一试剂和第二试剂可以存在于同一包装中，也可以分别单独包装；但是，在使用时，为了使用方便本申请是将第一试剂和第二试剂混合，制成溶血染色反应液，然后再一起与待测血液样本混合，进行溶血和染色处理。第一试剂和第二试剂单独包装时，第一试剂可以配制为水溶液形式，第二试剂可配制为非水溶液形式。本申请中，作为第二试剂的糖蛋白特异性染料，在溶血染色反应液中的浓度为50-500mg/L，例如100mg/L、200mg/L等。
可以理解，虽然本申请的实现方式中具体采用的是四种商业化的麦胚芽素荧光标记染料；但是，理论上，只要是以麦胚芽素为母体或者类似的糖蛋白特异性结合的分子为母体进行荧光标记，又或者与母体近似性质、能实现与母体相似效果的其它分子的荧光标记物，都能够用于本申请，属于本申请发明构思的保护范围。
也就是说，本申请染料的变形结构包括商业化的变形结构或非商业化的变形结构，根据染料的名称、结构等，本领域技术人员能够从现有技术中确认出已知染料为母体的变形结构或衍生结构；同时，能够根据母体结构和/或已知的变形结构来得到非商业化的变形结构或衍生结构，并可以合理预期这些变形结构都能够实现与其母体类似的染色效果。这些变形结构都属于本申请保护范围。
本申请第一试剂中采用的溶血剂是指用来破坏红细胞膜，便于进行血小板和白细胞区分的试剂。对于溶血剂，本申请没有特别限制，原则上，任何本领域已知的溶血剂，只要能够达到常规的溶血效果都可以用于本申请。
本申请的一种实现方式中，第一试剂包括烷基糖苷、三萜皂苷和甾族皂苷中的至少一种；还可以包括通式II的非离子型表面活性剂、有机酸和/或有机酸盐等。
其中，烷基糖苷作为溶血剂时，在溶血染色反应液中的浓度通常为0.025-10g/L；通式II的非离子表面活性剂的浓度没有特别限定，可为0.03-1.5g/L；有机酸或有机酸盐的浓度通常为0.05-2g/L。
本申请的有机酸及其盐具体可以为甲酸、乙酸、苯甲酸、柠檬酸、苹果酸、苯二甲酸、苯磺酸、α-萘磺酸、牛磺酸等及它们的碱金属盐，例如钠盐、钾盐等。
此外，本申请的第一试剂还可以根据需求添加各种常规的添加剂，例如缓冲剂、金属螯合剂、渗透压调节剂、防腐剂等。这些试剂均为本领域常用的试剂，只要不妨碍本申请的溶血剂和糖蛋白特异性染料发挥各自的作用即可。缓冲剂，例如可以采用磷酸及其盐、柠檬酸及其盐、TRIS等。金属螯合剂，用作抗凝剂，例如EDTA。渗透压调节剂，通常为无机盐，例如氯化钠、硫酸钠、硫酸钾、硼酸钠等。防腐剂，例如异噻唑啉酮、叠氮钠、咪唑烷基脲。
基于本申请的试剂，本申请研发并提供了一种血液细胞分析方法，包括采用本申请的试剂处理待测血液样本，获取经处理后的待测血液样本的荧光强度信息，根据荧光强度信息区分血小板和/或对血小板进行计数。
在本申请的一种实现方式中，本申请的方法还能够根据荧光强度信息区分白细胞和/或对白细胞进行计数。
本申请的方法中，待测血液样本是指采集自人的血液样本，优选全血样本。实际上，本申请的方法不仅限于人血液样本检测，也可以是其它哺乳纲动物，尤其是灵长目动物的血液样本检测。
本申请的方法中，第一试剂和第二试剂可以同时或者依序使用来处理待测血液样本，为了使用方便，本申请的一种是方式中，具体是将第一试剂和第二试剂混合后，一起与血液样本混合，进行溶血染色处理；这个过程可以通过恒温孵育实现。对于孵育的具体条件，本申请没有特别限制，本领域技术人员可以根据使用的试剂种类，依据常规参数进行调整获得，只要能够实现红细胞破碎，并对血小板进行染色即可。例如，本申请的一种实现方式中，待测血液样本与溶血染色反应液的体积比为1:40至1:60，在诸如40℃-60℃的温度下，反应15-100秒，优选为40-80s。本申请中的混合操作主要是使试剂与血液样本混合均匀，可以是现有的任何方式，例如，振荡、搅拌等。
本申请中，对白细胞进行分类是指白细胞三分类、四分类等。
基于本申请的试剂和本申请的血液细胞分析方法，本申请研发并提供了一种血液细胞分析仪，包括采样模块、反应模块、检测模块和分析模块；采样模块，包括用于吸取并转移待测血液样本的采样器；反应模块，包括反应室和试剂供应部，反应室与采样器和试剂供应部流体连接，反应室用于将待测血液样本与第一试剂和第二试剂混合反应，以获得经溶血和染色处理后的血液样本，试剂供应部用于将第一试剂和第二试剂提供至反应室，其中，第一试剂为溶血试剂，第二试剂为糖蛋白特异性染料；检测模块，包括光源、检测室和荧光检测器，光源用于将光束对准与反应室流体连通的检测室，检测室被配置为使经溶血和染色处理后的血液样本中的粒子逐个通过，荧光检测器用于采集检测室中粒子的荧光强度信息；分析模块，包括处理器和编程有计算机应用程序的非暂时性计算机可读存储介质，其中，处理器与荧光检测器可操作地连接，当计算机应用程序被处理器执行时，使处理器根据荧光强度信息区分血小板和/或对血小板进行计数。进一步的，当计算机应用程序被处理器执行时，使得处理器根据荧光强度信息区分白细胞和/或对白细胞进行计数。
更进一步的，本申请的血液细胞分析仪，其检测模块还包括散射光检测器，散射光检测器用于采集通过检测室的经溶血和染色处理后的血液样本中粒子的散射光强度信息，处理器与散射光检测器可操作地连接，当计算机应用程序被处理器执行时，进一步使得处理器根据散射光强度信息和荧光强度信息对白细胞进行分类，并对分类的白细胞分别进行计数。此外，本申请的血液细胞分析仪还可以包括输出模块，用于输出分析模块得到的结果，并展现给使用者。
下面通过具体实施例结合附图对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。
本申请中，除非另有特别说明，所有使用的技术和科学术语都应理解为本领域技术人员一般理解的含义；若存在不一致，以本申请说明为准。除非另有特别说明，所有试剂和设备都可以通过常规途径购买获得。
实施例一
本例的试剂包括第一试剂和第二试剂，其中，第一试剂为溶血试剂，包括溶血剂、通式II所示结构的非离子型表面活性剂和有机酸盐，采用TRIS缓冲液；第二试剂为糖蛋白特异性染料，本例采用的是麦胚芽素荧光标记染料，具体为FITC-Wheat germ agglutinin。
本例的溶血剂可以是常规的具有溶血功能的试剂，例如常规的阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂。其中，作为溶血剂的非离子表面活性剂是指除通式II所示结构的非离子型表面活性剂以外的其它非离子表面活性剂。本例具体采用的溶血剂是三萜皂苷。
本例采用的通式II所示结构的非离子型表面活性剂，其通式结构如下：
R1-R2-(CH2CH2O)m-H (II)
其中，R1为C8-C23的烷基，R2为-O-、
或-COO-，m为10～50的整数。
本例具体采用的通式II所示结构的非离子型表面活性剂为聚氧乙烯(23)十六烷基醚。本例具体采用的有机酸盐为柠檬酸钠。
本例将第一试剂和第二试剂混合制成溶血染色反应液，直接用于待测血液样本处理。
本例的溶血染色反应液中，各组分浓度如下：
将新鲜血20微升加入到上述溶血染色反应液1mL中，在45℃条件下孵育60秒后用流式细胞仪(迈瑞BriCyte E6)收集数据(激发波长633nm)设置增益为500，采集90度侧向荧光信号收集荧光染色信息，根据荧光强度信息区分血小板和白细胞。进一步的，还可同时采集90度的侧向散射光强度信息，结合荧光强度信息，获得散点图，从散点图中划分血小板区域和白细胞区域，并对白细胞进行分类和各类白细胞的计数。
作为对比，本例采用常规的人工镜检计数统计血小板浓度。
结果如图1和图2所示，其中，图1为粒子荧光信号分布图，图2为白细胞分类的散点图。从图表1可以看出，红细胞碎片、血小板(PLT)及白细胞的区分度较大，结合流式细胞仪的进样量，可以计算出该样本的PLT的浓度分别为166×109/L；而利用参考方法，通过人工镜检计数得出其PLT的浓度为171×109/L，与流式细胞仪中的计算数值具有较好的一致性。同时结合散射光信号，可以实现对白细胞(WBC)的分类与计数，如图2所示，结合流式细胞仪的进样量，可以计算出该样本的WBC的浓度分别为4.3×109/L，淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞及嗜酸性细胞的比例分别为30.1％、6.5％、46.5％、16.9％；而利用参考方法，通过人工镜检计数得出其WBC的浓度为4.1×109/L，淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞及嗜酸性细胞的比例分别为29％、7％、46.2％、17.8％。
由此可见，本例的试剂能够在溶血情况下可以仅仅通过荧光强度信息有效的区分红细胞碎片、血小板和白细胞，实现血小板和白细胞的区分和计数。此外，结合散射光强度信息还能够实现白细胞的分类和分类后的各种白细胞的计数。
实施例二
本例的试剂包括第一试剂和第二试剂，其中，第一试剂为溶血试剂，包括溶血剂、通式II所示结构的非离子型表面活性剂和有机酸盐，采用TRIS缓冲液；第二试剂为糖蛋白特异性染料，本例采用的是麦胚芽素荧光标记染料，具体为RB-Wheat germ agglutinin。
本例的溶血剂可以是常规的具有溶血功能的试剂，例如常规的阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂。其中，作为溶血剂的非离子表面活性剂是指除通式II所示结构的非离子型表面活性剂以外的其它非离子表面活性剂。本例具体采用的溶血剂是烷基糖苷(APG0810)。
本例采用的通式II所示结构的非离子型表面活性剂，其通式结构如下：
R1-R2-(CH2CH2O)m-H (II)
其中，R1为C8-C23的烷基，R2为-O-、
或-COO-，m为10～50的整数。
本例具体采用的通式II所示结构的非离子型表面活性剂为聚氧乙烯(23)十六烷基醚。本例具体采用的有机酸盐为柠檬酸钠。
本例将第一试剂和第二试剂混合制成溶血染色反应液，直接用于待测血液样本处理。
本例的溶血染色反应液中，各组分浓度如下：
将新鲜血20微升加入到上述配制的溶血染色反应液1mL中，在45℃条件下孵育60秒后用流式细胞仪(迈瑞BriCyte E6)收集数据(激发波长633nm)设置增益为500，采集90度侧向荧光信号收集荧光染色信息，根据荧光强度信息区分血小板和白细胞。进一步的，还可同时采集90度的侧向散射光强度信息，结合荧光强度信息，获得散点图，从散点图中划分血小板区域和白细胞区域，并对白细胞进行分类和各类白细胞的计数。
作为对比，本例采用常规的人工镜检计数统计血小板浓度。
结果如图3和图4所示，其中，图3为粒子荧光信号分布图，图4为白细胞分类的散点图。从图表3可以看出，红细胞碎片、血小板(PLT)及白细胞的区分度较大，结合流式细胞仪的进样量，可以计算出该样本的PLT的浓度分别为231×109/L；而利用参考方法，通过人工镜检计数得出其PLT的浓度为228×109/L，与流式细胞仪中的计算数值具有较好的一致性。同时结合散射光信号，可以实现对白细胞(WBC)的分类与计数，如图4所示，结合流式细胞仪的进样量，可以计算出该样本的WBC的浓度分别为7.1×109/L，淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞及嗜酸性细胞的比例分别为35％、6％、46％、13％；而利用参考方法，通过人工镜检计数得出其WBC的浓度为7×109/L，淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞及嗜酸性细胞的比例分别为36％、7％、46％、11％。
由此可见，本例的试剂能够在溶血情况下可以仅仅通过荧光强度信息有效的区分红细胞碎片、血小板和白细胞，实现血小板和白细胞的区分和计数。此外，结合散射光强度信息还能够实现白细胞的分类和分类后的各种白细胞的计数。
实施例三
本例的试剂包括第一试剂和第二试剂，其中，第一试剂为溶血试剂，包括溶血剂、通式II所示结构的非离子型表面活性剂和有机酸盐，采用TRIS缓冲液；第二试剂为糖蛋白特异性染料，本例采用的是麦胚芽素荧光标记染料，具体为CY3-Wheat germ agglutinin。
本例的溶血剂可以是常规的具有溶血功能的试剂，例如常规的阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂。其中，作为溶血剂的非离子表面活性剂是指除通式II所示结构的非离子型表面活性剂以外的其它非离子表面活性剂。本例具体采用的溶血剂是十二烷基麦芽糖苷。
本例采用的通式II所示结构的非离子型表面活性剂，其通式结构如下：
R1-R2-(CH2CH2O)m-H (II)
其中，R1为C8-C23的烷基，R2为-O-、
或-COO-，m为10～50的整数。
本例具体采用的通式II所示结构的非离子型表面活性剂为聚氧乙烯(23)十六烷基醚。本例具体采用的有机酸盐为柠檬酸钠。
本例将第一试剂和第二试剂混合制成溶血染色反应液，直接用于待测血液样本处理。
本例的溶血染色反应液中，各组分浓度如下：
将新鲜血20微升加入到上述配制的溶血染色反应液1mL中，在45℃条件下孵育60秒后用流式细胞仪(迈瑞BriCyte E6)收集数据(激发波长633nm)设置增益为500，采集90度侧向荧光信号收集荧光染色信息，根据荧光强度信息区分血小板和白细胞。进一步的，还可同时采集90度的侧向散射光强度信息，结合荧光强度信息，获得散点图，从散点图中划分血小板区域和白细胞区域，并对白细胞进行分类和各类白细胞的计数。
作为对比，本例采用常规的人工镜检计数统计血小板浓度。
结果如图5和图6所示，其中，图5为粒子荧光信号分布图，图6为白细胞分类的散点图。从图表5和图6可以看出，红细胞碎片、血小板(PLT)及白细胞的区分度较大，结合流式细胞仪的进样量，可以计算出该样本的PLT的浓度分别为154×109/L；而利用参考方法，通过人工镜检计数得出其PLT的浓度为161×109/L，与流式细胞仪中的计算数值具有较好的一致性。同时结合散射光信号，可以实现对白细胞(WBC)的分类与计数，如图6所示，结合流式细胞仪的进样量，可以计算出该样本的WBC的浓度分别为4.1×109/L，淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞及嗜酸性细胞的比例分别为41％、6.6％、44％、8.4％；而利用参考方法，通过人工镜检计数得出其WBC的浓度为4.5×109/L，淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞及嗜酸性细胞的比例分别为43％、7％、43％、7％。
由此可见，本例的试剂能够在溶血情况下可以仅仅通过荧光强度信息有效的区分红细胞碎片、血小板和白细胞，实现血小板和白细胞的区分和计数。此外，结合散射光强度信息还能够实现白细胞的分类和分类后的各种白细胞的计数。
实施例四
本例的试剂包括第一试剂和第二试剂，其中，第一试剂为溶血试剂，包括溶血剂、通式II所示结构的非离子型表面活性剂和有机酸盐，采用TRIS缓冲液；第二试剂为糖蛋白特异性染料，本例采用的是麦胚芽素荧光标记染料，具体为CY5-Wheat germ agglutinin。
本例的溶血剂可以是常规的具有溶血功能的试剂，例如常规的阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂。其中，作为溶血剂的非离子表面活性剂是指除通式II所示结构的非离子型表面活性剂以外的其它非离子表面活性剂。本例具体采用的溶血剂是八烷基麦芽糖苷。
本例采用的通式II所示结构的非离子型表面活性剂，其通式结构如下：
R1-R2-(CH2CH2O)m-H (II)
其中，R1为C8-C23的烷基，R2为-O-、
或-COO-，m为10～50的整数。
本例具体采用的通式II所示结构的非离子型表面活性剂为聚氧乙烯(23)十六烷基醚。本例具体采用的有机酸盐为柠檬酸钠。
本例将第一试剂和第二试剂混合制成溶血染色反应液，直接用于待测血液样本处理。
本例的溶血染色反应液中，各组分浓度如下：
将新鲜血20微升加入到上述配制的溶血染色反应液1mL中，在45℃条件下孵育60秒后用流式细胞仪(迈瑞BriCyte E6)收集数据(激发波长633nm)设置增益为500，采集90度侧向荧光信号收集荧光染色信息，根据荧光强度信息区分血小板和白细胞。进一步的，还可同时采集90度的侧向散射光强度信息，结合荧光强度信息，获得散点图，从散点图中划分血小板区域和白细胞区域，并对白细胞进行分类和各类白细胞的计数。
作为对比，本例采用常规的人工镜检计数统计血小板浓度。
结果如图7至图8所示，其中，图7为粒子荧光信号分布图，图8为白细胞分类的散点图。从图表7可以看出，红细胞碎片、血小板(PLT)及白细胞的区分度较大，结合流式细胞仪的进样量，可以计算出该样本的PLT的浓度分别为132×109/L；而利用参考方法，通过人工镜检计数得出其PLT的浓度为128×109/L，与流式细胞仪中的计算数值具有较好的一致性。同时结合散射光信号，可以实现对白细胞(WBC)的分类与计数，如图8所示，结合流式细胞仪的进样量，可以计算出该样本的WBC的浓度分别为5.3×109/L，淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞及嗜酸性细胞的比例分别为35％、7.6％、42.5％、14.9％；而利用参考方法，通过人工镜检计数得出其WBC的浓度为5.2×109/L，淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞及嗜酸性细胞的比例分别为34％、8.1％、43％、14.9％。
由此可见，本例的试剂能够在溶血情况下可以仅仅通过荧光强度信息有效的区分红细胞碎片、血小板和白细胞，实现血小板和白细胞的区分和计数。此外，结合散射光强度信息还能够实现白细胞的分类和分类后的各种白细胞的计数。
实施例五
本例采用实施例四的试剂和检测方法，对15支新鲜血样本进行检测；将相同的样本放置于迈瑞6800仪器中测试(使用6800仪器配套的试剂)，记录仪器给出的PLT浓度；计算实施例四的检测方法获得的PLT浓度与迈瑞6800仪器给出的PLT浓度的相关性。
具体的，选取15支新鲜血样本，每支血样分别取20微升加入到上述实施例四配制的溶血染色反应液1mL中，在45℃条件下孵育60秒后用流式细胞仪收集数据(迈瑞BriCyteE6，激发波长633nm)设置增益为500，采集90度侧向荧光信号收集荧光染色信息，根据荧光强度信息区分血小板和白细胞。通过手动划分PLT的比例，以及流式细胞仪的进样量，计算出各样本的PLT浓度的浓度。将相同的样本放置于迈瑞6800仪器中测试，记录仪器给出的PLT浓度，分别作出PLT的相关性图。结果如图9所示。
图9的结果显示，与6800仪器测试结果相比，染料在溶血状态下，能够对PLT进行区分染色，并能够对相关粒子进行计数，其计数结果与6800的测试结果具有很好的相关性。
以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明，不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换。
Claims (10)
1.一种试剂，其特征在于：包括作为溶血试剂的第一试剂，和第二试剂；
所述第二试剂为糖蛋白特异性染料。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述糖蛋白特异性染料包括麦胚芽素荧光标记染料；
任选地，所述麦胚芽素荧光标记染料选自FITC-wheat germ agglutinin、RB-wheatgerm agglutinin、CY3-wheat germ agglutinin和CY5-wheat germ agglutinin中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于：所述第一试剂包括阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂中的至少一种；
任选地，所述第一试剂还包括至少一种有机酸和/或至少一种有机酸盐，所述有机酸为具有至少一个羧基或磺酸基的有机酸，所述有机酸盐为具有至少一个羧基或磺酸基的有机酸的碱金属的盐。
4.权利要求1-3任一项所述的试剂在分析血液样本中血小板和/或白细胞的用途。
5.一种血液细胞分析方法，其特征在于：包括采用权利要求1-3任一项所述的试剂处理待测血液样本，获取经处理后的待测血液样本的荧光强度信息，根据所述荧光强度信息区分血小板和/或对血小板进行计数。
6.根据权利要求5所述的血液细胞分析方法，其特征在于：还包括根据所述荧光强度信息区分白细胞和/或对白细胞进行计数。
7.根据权利要求5或6所述的血液细胞分析方法，其特征在于：还包括获取经处理后的待测血液样本的散射光强度信息，根据所述散射光强度信息和所述荧光强度信息对白细胞进行分类，并对分类的白细胞分别进行计数。
8.一种血液细胞分析仪，其特征在于：包括采样模块、反应模块、检测模块和分析模块；
所述采样模块，包括用于吸取并转移待测血液样本的采样器；
所述反应模块，包括反应室和试剂供应部，所述反应室与采样器和试剂供应部流体连接，所述反应室用于将待测血液样本与第一试剂和第二试剂混合反应，以获得经溶血和染色处理后的血液样本，所述试剂供应部用于将第一试剂和第二试剂提供至反应室，其中，第一试剂为溶血试剂，第二试剂为糖蛋白特异性染料；
所述检测模块，包括光源、检测室和荧光检测器，所述光源用于将光束对准与所述反应室流体连通的所述检测室，所述检测室被配置为使所述经溶血和染色处理后的血液样本中的粒子逐个通过，所述荧光检测器用于采集所述检测室中粒子的荧光强度信息；
所述分析模块，包括处理器和编程有计算机应用程序的非暂时性计算机可读存储介质，其中，所述处理器与所述荧光检测器可操作地连接，当所述计算机应用程序被所述处理器执行时，使所述处理器根据所述荧光强度信息区分血小板和/或对血小板进行计数。
9.根据权利要求8所述的血液细胞分析仪，其特征在于：当所述计算机应用程序被所述处理器执行时，进一步使得处理器根据所述荧光强度信息区分白细胞和/或对白细胞进行计数。
10.根据权利要求8或9所述的血液细胞分析仪，其特征在于：所述检测模块还包括散射光检测器，所述散射光检测器用于采集通过检测室的所述经溶血和染色处理后的血液样本中粒子的散射光强度信息，所述处理器与所述散射光检测器可操作地连接，当所述计算机应用程序被所述处理器执行时，进一步使得处理器根据所述散射光强度信息和所述荧光强度信息对白细胞进行分类，并对分类的白细胞分别进行计数。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110379515.7A CN115201161A (zh) | 2021-04-08 | 2021-04-08 | 试剂、血液细胞分析方法及分析仪 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110379515.7A CN115201161A (zh) | 2021-04-08 | 2021-04-08 | 试剂、血液细胞分析方法及分析仪 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115201161A true CN115201161A (zh) | 2022-10-18 |
Family
ID=83571630
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110379515.7A Pending CN115201161A (zh) | 2021-04-08 | 2021-04-08 | 试剂、血液细胞分析方法及分析仪 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115201161A (zh) |
-
2021
- 2021-04-08 CN CN202110379515.7A patent/CN115201161A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2207396C (en) | Method for rapid and simultaneous analysis of nucleated red blood cells | |
| AU775260B2 (en) | Single channel, single dilution detection method | |
| US7625712B2 (en) | Method for a fully automated monoclonal antibody-based extended differential | |
| JP4366478B2 (ja) | 赤芽球の識別方法 | |
| JP4433611B2 (ja) | 有核の赤血球の識別方法 | |
| US8148101B2 (en) | Method for classifying and counting bacteria in body fluids | |
| CN111602052B (zh) | 一种血液检测方法及血液分析系统 | |
| JP6232046B2 (ja) | 尿検体分析装置及び尿検体分析方法 | |
| US9797824B2 (en) | Method for hematology analysis | |
| CN111656188B (zh) | 试剂、分析血小板的方法及血液细胞分析仪 | |
| JP2005506525A (ja) | 有核赤血球の計測法の方法 | |
| JP4087560B2 (ja) | 赤芽球の識別方法 | |
| US20230296591A1 (en) | Sample analysis method, sample analyzer, and computer-readable storage medium | |
| Rico et al. | Flow-cytometry-based protocols for human blood/marrow immunophenotyping with minimal sample perturbation | |
| JPH0599919A (ja) | 白血球分析方法 | |
| Longanbach et al. | Automated blood cell analysis | |
| CN111602046A (zh) | 一种血液分析仪及分析方法 | |
| EP0259833B1 (en) | Reagent and method for classifying leukocytes by flow cytometry | |
| Ronot et al. | Assessment of cell viability in mammalian cell lines | |
| EP0866960A1 (en) | Method for simultaneous analysis of cell viability, nucleated red blood cells and white blood cell differential | |
| CN115201161A (zh) | 试剂、血液细胞分析方法及分析仪 | |
| Nakayama et al. | Outline and features of UF-5000, fully automated urine particle analyzer | |
| CN115201160A (zh) | 一种血液细胞检测方法及分析系统 | |
| Sakata | Reagent characteristics in the XE-2100 NRBC channel | |
| CN116429668A (zh) | 检测原始细胞的样本分析方法、分析仪、试剂及其用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |