CN115197331A - 新冠病毒三聚体嵌合疫苗及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种新型冠状病毒异源三聚体化嵌合抗原肽，编码其的多核苷酸或与该多核苷酸相关的核酸产品，基于前述抗原肽或多核苷酸的疫苗或免疫原性组合物，以及前述各项产品在新冠病毒疫苗中的应用。基于该嵌合抗原肽或其编码核酸的重组蛋白疫苗或各类核酸疫苗(特别是后者)能够高效地激发针对新冠病毒原始毒株和多种变异株(特别是Omicron变异株各亚型)的强烈免疫反应，具有广谱且较强的免疫原性。

Description

新冠病毒三聚体嵌合疫苗及其用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种新型冠状病毒异源三聚体化嵌合抗原肽、其编码核酸及其在新冠病毒疫苗制备中的应用。

背景技术

新型冠状病毒肺炎是由新型冠状病毒(也称新冠病毒，SARS-CoV-2)感染导致的一种急性呼吸道传染病。新冠病毒属于冠状病毒科β-冠状病毒属，具有囊膜，是单股正链RNA病毒。新冠病毒表面的刺突蛋白(又称S蛋白)负责病毒与宿主细胞膜受体的结合和膜融合，S蛋白上存在受体结合结构域(RBD)，其是一个重要的疫苗靶点，能激发中和抗体的产生，具有免疫聚焦的优势。

目前，新冠肺炎疫情在全球范围内仍很严峻，新冠病毒变异株不断出现和流行；特别是，新冠病毒Omicron变异株还存在多种亚型(例如，BA.1，BA.2，BA.1.1，BA.3亚型等)，具有超过Delta的传播速度，已经成为全球的主导毒株；其中，BA.2亚型毒株的传播速度高于其他的Omicron亚型，现在已经占据了最大的比例。Omicron变异株的S蛋白上具有超过50个氨基酸突变，相比先前的Delta变异株的氨基酸突变大大增多。

由于这些新出现的新冠病毒变异株中S蛋白或RBD序列存在很多突变，导致现有的基于新冠病毒原型株(Prototype)设计和开发的疫苗所激发的免疫反应在面对变异株(如Omicron变异株)时的效力大大下降，这种变异株突破疫苗、抗体保护的现象称为免疫逃逸。免疫逃逸的现象在Omicron变异株多种亚型上表现得尤为明显。为了解决新冠病毒变异株的免疫逃逸问题，需要开发新型疫苗以使其适应新出现的变异株，使其对当前的流行株具有较强保护效果；同时，由于目前存在多种变异株(特别是Omicron变异株的多种亚型)同时流行的现象，新开发的新冠疫苗需要能够诱导广谱的免疫反应，以尽可能地同时防范多种新冠病毒毒株，这对于新冠疫情的防控具有至关重要的意义。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

为克服上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种新型冠状病毒异源三聚体化嵌合抗原肽，编码其的多核苷酸，与该多核苷酸相关的核酸产品，基于前述抗原肽或多核苷酸的疫苗或免疫原性组合物，以及前述各项产品在新冠病毒疫苗制备中的应用。基于该嵌合抗原肽或其编码核酸的重组蛋白疫苗或各类核酸疫苗(特别是后者)能够高效地激发针对新冠病毒原始毒株和多种变异株的强烈免疫反应，具有广谱且较强的免疫原性。

具体地，本发明提供了以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种新型冠状病毒的重组嵌合抗原肽，其特征在于，所述重组嵌合抗原具有如式(I)所示结构的氨基酸序列：

(A-B)-C₁-(A-B’)-C₂-(A-B”)

(I)

式(I)中：

A-B表示新型冠状病毒Delta变异株S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

A-B’表示新型冠状病毒Omicron变异株BA.2亚型S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

A-B”表示新型冠状病毒Omicron变异株BA.4/BA.5亚型S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

C₁和C₂相同或不同，各自独立地表示连接子(GGS)_n；其中，n＝0,1,2,3,4或5。

对于上述重组嵌合抗原肽，优选地，所述新型冠状病毒Delta变异株S蛋白RBD结构域的一部分为其全部氨基酸序列的至少70％、80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％；

和/或，所述新型冠状病毒Omicron变异株BA.2亚型S蛋白RBD结构域的一部分为其全部氨基酸序列的至少70％、80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％；

和/或，所述新型冠状病毒Omicron变异株BA.4/BA.5亚型S蛋白RBD结构域的一部分为其全部氨基酸序列的至少70％、80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％；

和/或，n＝0,1,2或3。

在一些优选的具体实施方案中，所述新型冠状病毒Delta变异株S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，或者如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的、与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

和/或，所述新型冠状病毒Omicron变异株BA.2亚型S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，或者如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的、与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

和/或，所述新型冠状病毒Omicron变异株BA.4/BA.5亚型S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，或者如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的、与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

和/或，n＝0,1或2。

在进一步优选的具体实施方案中，A-B表示如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，A-B’表示如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，A-B”表示如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；

进一步优选地，所述重组嵌合抗原肽具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

第二方面，本发明提供了一种多核苷酸，其编码如上述第一方面所述的重组嵌合抗原。

所述多核苷酸为经人源密码子优化的核苷酸序列，可以为DNA或mRNA；

在一些实施方案中，所述多核苷酸为DNA分子，优选地，所述DNA分子具有如SEQ IDNO:5所示的DNA序列。

在另一些实施方案中，所述多核苷酸为mRNA分子，优选地，所述mRNA分子具有如SEQ ID NO:6所示的mRNA序列。

第三方面，本发明提供了一种核酸构建体，其包含如上述第二方面所述的多核苷酸，以及任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。

第四方面，本发明提供了一种表达载体，其包含如上述第三方面所述的核酸构建体。

第五方面，本发明提供了一种宿主细胞，其中转化或转染有如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体或如上述第四方面所述的表达载体。

第六方面，本发明提供了如上述第一方面所述的重组嵌合抗原肽、如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的表达载体或如上述第五方面所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗新型冠状病毒感染的疫苗中的应用。

优选地，所述新型冠状病毒为选自以下的一种或多种：SARS-CoV-2原始毒株，SARS-CoV-2变异毒株Alpha(B.1.1.7)、Beta(B.1.351)、Gamma(P.1)、Kappa(B.1.617.1)、Delta(B.1.617.2)、Omicron亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4、BA.5。

优选地，所述疫苗用于单独免疫或者与其他类型的新型冠状病毒疫苗进行序贯免疫；进一步优选地，所述其他类型的新型冠状病毒疫苗为灭活疫苗。

第七方面，本发明提供了一种疫苗或免疫原性组合物，其包含如上述第一方面所述的重组嵌合抗原肽、如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的表达载体或如上述第五方面所述的宿主细胞，以及生理学可接受的媒介物、佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂。

在一个优选的具体实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物为新型冠状病毒重组蛋白疫苗，其包括如上述第一方面所述的重组嵌合抗原肽和佐剂；

可选地，所述佐剂为选自以下佐剂中的一种或多种：铝佐剂、MF59佐剂和类MF59佐剂。

在另一个优选的具体实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物为新型冠状病毒DNA疫苗，其包括：

(1)真核表达载体；和

(2)构建入所述真核表达载体中的、编码如上述第一方面所述的重组嵌合抗原肽的DNA序列，优选为如SEQ ID NO:5所示的DNA序列；

可选地，所述真核表达载体选自pGX0001、pVAX1、pCAGGS和pcDNA系列载体。

在另一个优选的具体实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物为新型冠状病毒mRNA疫苗，所述mRNA疫苗包括：

(I)编码如上述第一方面所述的重组嵌合抗原肽的mRNA序列，优选为如SEQ IDNO:6所示的mRNA序列；和

(II)脂质纳米颗粒。

在另一个优选的具体实施方案中，所述疫苗或免疫原性组合物为新型冠状病毒-病毒载体疫苗，其包括：

(1)病毒骨架载体；和

(2)构建入所述病毒骨架载体中的、编码如上述第一方面所述的重组嵌合抗原肽的DNA序列，优选为如SEQ ID NO:5所示的DNA序列；

可选地，所述病毒骨架载体选自以下病毒载体中的一种或几种：腺病毒载体、痘病毒载体、流感病毒载体、腺相关病毒载体。

在可行的实现方式中，所述疫苗或免疫原性组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式；

优选地，所述鼻喷剂选自气雾剂、喷雾剂和粉雾剂；

优选地，所述口服制剂选自片剂、粉末剂、丸剂、散剂、颗粒剂、细粒剂、软/硬胶囊剂、薄膜包衣剂、小丸剂、舌下片和膏剂；

优选地，所述胃肠外制剂为经皮剂、软膏剂、硬膏剂、外用液剂、可注射或可推注制剂。

第八方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括如上述第七方面所述的疫苗或免疫原性组合物，以及任选地其他类型的新型冠状病毒疫苗，所述疫苗或免疫原性组合物与所述其他类型的新型冠状病毒疫苗单独包装；

优选地，所述其他类型的新型冠状病毒疫苗为新型冠状病毒灭活疫苗。

有益效果

本发明提供了一种新型冠状病毒Delta变异株、Omicron变异株BA.2亚型和Omicron变异株BA.4/BA.5亚型受体结合结构域的重组嵌合抗原肽、编码其的多核苷酸以及基于该嵌合抗原肽或其多核苷酸的各类型疫苗产品；基于该嵌合抗原肽或其编码核酸的重组蛋白疫苗或各类核酸疫苗(特别是后者)能够高效地激发针对新冠病毒原始毒株和多种变异株的强烈免疫反应，具有广谱且较强的免疫原性。

特别是，基于该嵌合抗原肽的编码核酸的各类核酸疫苗(包括DNA疫苗、mRNA疫苗、病毒载体疫苗)针对多种新冠病毒毒株特别是当前流行的Omicron变异株一系列亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4、BA.5均可提供较强的免疫保护效力，并且，在与其他类型疫苗(如灭活疫苗)进行序贯免疫时可诱导针对新冠病毒各型毒株的(即，广谱的)、显著增高的免疫反应水平，非常适用于当前复杂的疫情防控，具有潜在的临床应用价值和前景。

附图说明

一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。

图1是本发明实施例1中构建的新冠病毒原型株RBD三聚体mRNA疫苗(简称PPPmRNA疫苗，作为对照疫苗)，由新冠病毒Delta变异株RBD、Omicron变异株BA.2亚型RBD和Omicron变异株BA.4/BA.5亚型RBD串联连接形成的嵌合RBD三聚体mRNA疫苗(简称DOO mRNA疫苗，代表本发明疫苗)的结构示意图；图上标注了mRNA疫苗的各个区段，其中，5’UTR表示5’端非翻译区，3’UTR表示3’端非翻译区，SP表示信号肽序列，Poly(A)表示多聚腺苷酸尾，Protype RBD表示原型株的RBD序列，Delta RBD表示Delta变异株的RBD序列，Omicron(BA.2)RBD表示Omicron变异株BA.2亚型的RBD序列，Omicron(BA.4/5)RBD表示Omicron变异株BA.4/BA.5亚型的RBD序列。

图2是显示本发明实施例3中记载的，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测PPP或DOO mRNA疫苗免疫小鼠后第14天采集的血清分别针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.4/5的RBD抗原的结合抗体滴度水平的柱形图。

图3显示了在用mRNA疫苗免疫小鼠后第14天所采集的血清在假病毒中和实验中中和新冠病毒原型株、Delta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4/5的假病毒的NT₅₀值，如实施例4中所记载的；其中，上图为柱形图，横坐标显示的是疫苗类型，分别为PPP疫苗、DOO疫苗以及阴性对照LNP，纵坐标显示的是pVNT₅₀滴度的log₁₀值；下图为基于该柱形图中各实验组的GMT值(即，几何平均滴度)制作的雷达图。

图4显示了本发明实施例5中记载的，通过酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测PPP或DOO mRNA疫苗免疫小鼠后第21天采集的小鼠脾脏细胞在分别被新冠病毒原型株、Delta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4/5RBD构建的肽库刺激后所产生的IFNγ+细胞数量的柱形图(上图)以及雷达图(下图)；其中，柱形图中，横坐标显示的是疫苗类型，纵坐标显示的是每3×10⁵个脾脏细胞的SFU(Spot-forming Unit，其代表IFNγ+细胞数量)的log₁₀值；下面的雷达图是基于该柱形图中各实验组的SFU的平均值制作的。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

另外，为了更好的说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在一些实施例中，对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。

除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。

实施例1：新冠病毒原型株RBD三聚体mRNA疫苗(简称PPP mRNA疫苗，作为对照)以及Delta变异株、Omicron变异株BA.2亚型和Omicron变异株BA.4/BA.5亚型的嵌合RBD三聚体mRNA疫苗(简称DOO mRNA疫苗，代表本发明的mRNA疫苗)的构建、体外制备与包装

按照图1所示的DOO、PPP mRNA疫苗的结构示意图，根据下述程序进行mRNA疫苗的构建、体外制备与包装：

1)mRNA疫苗的体外转录和加帽

本实施例中，用于体外转录mRNA疫苗的基础质粒为pUC57，由南京金斯瑞生物科技有限公司提供。

在基础质粒pUC57上，通过常规分子生物学手段引入mRNA疫苗的DNA表达元件，包括：(1)T7启动子，(2)mRNA疫苗的DNA编码区(DOO mRNA疫苗的DNA编码序列如SEQ ID NO:5所示，作为对照的PPP mRNA疫苗的DNA编码序列如SEQ ID NO:7所示)，(3)在编码区上游的5’端UTR序列(两种mRNA疫苗的5’端UTR序列相同，均为如SEQ ID NO:8所示序列)，(4)信号肽编码序列(即SP，PPP疫苗和DOO疫苗的信号肽编码序列分别如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示)，和(5)下游的3’端UTR序列(两种mRNA疫苗的3’端UTR序列相同，均为如SEQ ID NO:11所示序列)，和多聚腺苷酸尾(Poly-A-tail)。

首先，使用限制性内切酶BamHI对上述体外转录质粒进行酶切，将其线性化；使用常规DNA纯化方法进行纯化，获得体外转录的模板；然后，基于该模板，使用T7RNA体外转录试剂盒(E131-01A，苏州近岸蛋白质科技股份有限公司)进行体外转录，获得体外转录的mRNA；最后，使用氯化锂回收试剂盒(S125，苏州近岸蛋白质科技股份有限公司)，通过氯化锂沉淀法对mRNA进行纯化，获得提纯的体外转录mRNA。

然后，使用加帽酶试剂盒Cap1加帽酶试剂盒(M082-01B，苏州近岸蛋白质科技股份有限公司)，对上述提纯的体外转录mRNA进行5’端Cap1加帽，使其满足在真核细胞内被翻译的条件；其后，使用与上述相同的氯化锂沉淀法对mRNA进行再次纯化，获得纯化的经5’端加帽修饰的mRNA。

2)脂质纳米颗粒(Lipid nanoparticle,LNP)包装mRNA

将阳离子脂质、磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG脂质按照50：10：38.5：1.5的比例进行混合，然后使用Precision Nano Systems公司生产的Nanoassemblr Benchtop纳米脂质体包装仪，将其与上述5’端加帽修饰的mRNA进行混合、包装。包装完成后，使用离心或透析的方法更换缓冲溶液为PBS。完成包装后，使用Thermo Fisher公司的Quan-iT Ribogreen RNAreagent试剂盒，对mRNA包装效率进行鉴定，包装效率符合mRNA疫苗的标准。

实施例2：实验动物免疫和样品采集

本实施例中，使用6-8周龄的BALB/c品系的雌性小鼠(购自维通利华)进行动物实验；实验组分为mRNA疫苗免疫组和阴性对照组，其中，mRNA疫苗免疫组包括PPP mRNA疫苗免疫组和DOO mRNA疫苗免疫组，所述阴性对照组为LNP免疫组。mRNA疫苗免疫组的所有小鼠在第0天和第14天分别免疫接种同一种设计的mRNA疫苗(即，PPP或DOO mRNA疫苗)，阴性对照组的小鼠在同样的时间、注射相同量的空的LNP。接种方法均为肌肉注射，接种剂量为每只小鼠每次10μg mRNA疫苗或空LNP；在第14天采集小鼠血清样本，用于检验免疫血清的结合抗体滴度和假病毒中和抗体滴度；在第21天采集小鼠脾脏样本，用于检验T细胞免疫。

实施例3：小鼠血清抗体滴度的检验

本实施例中，通过酶联免疫吸附试验(ELISA)，检测上述实施例2中的各实验组小鼠在免疫程序的第14天所采集的血清分别针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.4/5的RBD抗原的特异性结合抗体滴度水平。

具体地，分别用新冠病毒原型株(SEQ ID NO:12)、Delta变异株(SEQ ID NO:13)、Omicron变异株亚型BA.1(SEQ ID NO:14)、BA.1.1(SEQ ID NO:15)、BA.2(SEQ ID NO:16)、BA.2.12.1(SEQ ID NO:17)、BA.4/5(SEQ ID NO:18)的RBD抗原蛋白(0.2μg/ml)包被ELISA板，将包被好的ELISA板在5％脱脂牛奶中封闭1小时；然后，将实施例2中的、由各实验组小鼠在免疫程序第14天采集的血清在56℃孵育30分钟，进行灭活；将经过灭活的血清样本从1:200或1:1000开始进行三倍梯度稀释，然后将稀释液加入每个孔，随后将ELISA板在37℃下孵育1小时；将山羊抗小鼠IgG-HRP抗体(购自柏奥易杰(EASYBio))添加到板中作为二抗，并在37℃下再次孵育1小时；最后，用3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)底物进行显色，显色完成后用2M盐酸终止反应，使用酶标仪(PerkinElmer)测量450nm和630nm处的吸光度。通过从同一孔的450nm处的吸光度减去630nm处的吸光度，来计算吸光度值。终点滴度定义为：血清产生的吸光度(如上所述，450nm的吸光度减去630nm的吸光度)大于背景值2.1倍时对应的血清稀释倍数。低于检测限的抗体滴度定义为检测限的三分之一。

各实验组小鼠在免疫程序的第14天所采集的血清针对新冠病毒原型株、Delta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.4/5的RBD抗原的结合抗体滴度水平如图2所示。

由图2可以看出：本发明的DOO mRNA疫苗免疫组的小鼠血清针对新冠病毒Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.4/5的RBD抗原蛋白所产生的特异性抗体滴度水平均较PPP mRNA疫苗明显提高，而对新冠病毒原型株、Delta变异株的RBD抗原蛋白所产生的特异性抗体滴度水平则与PPP mRNA疫苗相当，均在较高的水平。

这些结果表明：整体上，本发明的DOO mRNA疫苗较PPP mRNA疫苗可诱导更高的体液免疫水平，特别是，其针对新冠病毒Omicron变异株各亚型均产生比PPP mRNA疫苗明显更高的体液免疫水平。

实施例4：新冠病毒毒株假病毒的包装和血清中和

本实施例中，分别检测上述实施例2中的、于免疫程序第14天所采集的免疫小鼠血清对新冠病毒原型株、Delta变异株、Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4/5的假病毒的50％假病毒中和滴度(pVNT₅₀)；具体检测方法如下：

一、制备截短的新冠病毒S蛋白的表达质粒

分别将编码新冠病毒原型株、Delta变异株和Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4/5的S蛋白的后18位氨基酸的核苷酸去掉，所得核苷酸分别命名为WT-S-del18、Delta-S-del18、BA.1-S-del18、BA.1.1-S-del18、BA.2-S-del18、BA.2.12.1-S-del18、BA.3-S-del18、BA.4/5-S-del18，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:19～26所示，由苏州金唯智公司进行合成；然后，将这些核苷酸序列各自克隆到pCAGGS表达载体上，分别得到表达质粒pCAGGS-WT-S-del18、pCAGGS-Delta-S-del18、pCAGGS-BA.1-S-del18、pCAGGS-BA.1.1-S-del18、pCAGGS-BA.2-S-del18、pCAGGS-BA.2.12.1-S-del18、pCAGGS-BA.3-S-del18、pCAGGS-BA.4/5-S-del18。

二、新冠病毒原型株和各型变异株的假病毒的包装

1)在10cm细胞培养皿中铺HEK293T细胞，使第二天细胞密度至80％左右。培养液为含10％FBS的DMEM培养基。

2)将上文所制备的截短的、新冠病毒各型株的S蛋白的表达质粒，用PEI转染培养皿中的细胞(30μg/10cm细胞培养皿)。目的质粒与PEI按1:3比例混匀后转染，4-6h换培养液(含10％FBS的DMEM培养基)，37℃培养24h。

3)将假病毒包装骨架病毒G*VSV-delG(武汉枢密脑科学技术有限公司)加入上述转染后的HEK293T细胞，37℃孵育2h，换培养液(含10％FBS的DMEM培养基)，并加入VSV-G抗体(表达该抗体杂交瘤细胞购自ATCC细胞库)，在培养箱中继续培养30h。

4)收上清，3000rpm离心10min，在超净工作台中经0.45μm无菌滤器过滤，去除细胞碎片，分装，-80℃冰箱冻存。

通过上述步骤，分别得到新冠病毒原型株、Delta变异株和Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4/5的假病毒。

三、免疫小鼠血清对假病毒抑制效果的评价

将实施例2中的、于第14天采集的各实验组小鼠血清在56℃孵育30分钟，进行灭活；将灭活后的血清样本进行稀释，从1:80开始进行2倍梯度稀释。然后，将每种假病毒与等体积的稀释后血清混合，在37℃下孵育1小时。取100μl病毒-血清混合物加入到96孔板中预铺板的Vero细胞上。孵育15小时后，使用CQ1共聚焦图像细胞仪，检测转导单位(TU)数，从而计算免疫小鼠血清对上述新冠病毒原型株、Delta变异株和Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4/5的假病毒的中和能力。

结果如图3所示；如图3的附图说明中所述，图3的上面的柱形图显示了各免疫组血清中和新冠病毒原型株、Delta变异株和Omicron变异株亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4/5的假病毒的pVNT₅₀(即，50％假病毒中和滴度)水平(以其log10表示)，每个柱上方的数字代表该实验组所有样品的几何平均滴度(GMT)，下面的雷达图为基于上面的柱形图中各实验组的GMT值所制作。

由图3可以看出：本发明的DOO mRNA疫苗针对Omicron变异株的各亚型所诱导的血清中和抗体滴度水平均远远高于PPP mRNA疫苗；具体地，针对BA.1亚型所诱导的中和抗体滴度水平，DOO mRNA疫苗比PPP mRNA疫苗高达75倍；针对BA.1.1亚型所诱导的中和抗体滴度水平，DOO mRNA疫苗比PPP mRNA疫苗高达72倍以上；针对BA.2亚型所诱导的中和抗体滴度水平，DOO mRNA疫苗比PPP mRNA疫苗高达66.7倍；针对BA.2.12.1亚型所诱导的中和抗体滴度水平，DOO mRNA疫苗比PPP mRNA疫苗高达56.5倍；针对BA.3亚型所诱导的中和抗体滴度水平，DOO mRNA疫苗比PPP mRNA疫苗高达43.8倍；针对BA.4/5亚型所诱导的中和抗体滴度水平，DOO mRNA疫苗比PPP mRNA疫苗高达33.5倍；而针对Delta变异株所诱导的中和抗体滴度水平，DOO mRNA疫苗比PPP mRNA疫苗高达将近2倍。这些结果表明：本发明的DOO mRNA疫苗针对新冠病毒各型毒株(特别是针对Delta变异株、Omicron变异株各亚型)均可诱导出明显更高的中和抗体滴度水平，说明其针对新冠病毒各型毒株(特别是针对Delta变异株、Omicron变异株各亚型)都将具有明显更高的免疫保护效力，即，本发明的DOO mRNA疫苗具有广谱的、明显增强的免疫原性。

实施例5：mRNA疫苗诱导细胞免疫水平的评价

本实施例中，采用实施例2中的、于第21天采集的各实验组小鼠的脾脏样本，检测mRNA疫苗诱导的细胞免疫水平。具体方法如下：

1)小鼠脾脏样品处理

用细胞匀浆器在1ml无血清DMEM中将小鼠脾脏细胞制备成单细胞匀浆，用40μm细胞过滤器过滤，用红细胞裂解缓冲液(北京索莱宝科技有限公司，R1010)裂解红细胞；然后，细胞经过清洗液(PBS+0.5％FBS)清洗后，用0.4％台盼蓝溶液(Gibco，15250061)染色，使用Cell drop FL自动细胞计数器进行计数。

2)ELISpot检验

将10μg/ml anti-mouse IFN-γ抗体(购自BD公司)在平底96孔板中在4℃过夜孵育，以包被该平底96孔板，第二天，在室温下封闭2小时。将新鲜的小鼠脾脏单细胞悬液(4×10⁵/孔)加入上述抗体包被的96孔板，并分别用新冠病毒原型株、Delta变异株、Omicron变异株BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4/5亚型的RBD构建的肽库(每条多肽2μg/ml)刺激20小时；所述肽库采用网站https://www.hiv.lanl.gov/content/sequence/PEPTGEN/peptgen.html上的软件PeptGen Peptide Generator进行设计，设计的关键参数包括：短肽的长度在18-20个氨基酸，重叠氨基酸片段在10个氨基酸作用等；设计好的肽库由中科亚光生物科技有限公司合成。阳性对照孔用植物血凝素(PMA)刺激以产生非特异细胞免疫反应，阴性对照孔不用肽库刺激。然后，丢弃细胞，并用生物素化的IFNγ抗体、链霉亲和素-HRP抗体和显色底物先后孵育96孔板。当板底显现斑点后，用去离子水彻底冲洗样品，停止显色。最后，使用Immuno Capture 6.5.0拍照并对斑点数量进行计数。

结果如图4所示；图4中，上面的柱形图显示了各免疫组小鼠每3×10⁵个脾脏细胞的SFU(Spot-forming Unit，其代表IFNγ+细胞数量)的log₁₀值；下面的雷达图是基于该柱形图中各实验组的SFU的平均值制作的。

由图4可知，在分别使用上述八种新冠病毒RBD肽库刺激后，DOO mRNA疫苗免疫组小鼠的脾脏细胞所产生的IFN-γ+细胞的数量均高于PPP mRNA疫苗免疫组，这表明：DOOmRNA疫苗不仅能有效激发细胞免疫应答，并且其所激发的细胞免疫水平要高于PP mRNA疫苗。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明技术方案的精神和范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国科学院微生物研究所

<120> 新冠病毒三聚体嵌合疫苗及其用途

<130> 1087-220197F

<160> 26

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 216

<212> PRT

<213> Beta冠状病毒/SARS-CoV-2 Delta变异株

<400> 1

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val

210 215

<210> 2

<211> 215

<212> PRT

<213> Beta冠状病毒/SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.2亚型

<400> 2

Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu

1 5 10 15

Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr

20 25 30

Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val

35 40 45

Leu Tyr Asn Phe Ala Pro Phe Phe Ala Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser

50 55 60

Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser

65 70 75 80

Phe Val Ile Arg Gly Asn Glu Val Ser Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr

85 90 95

Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly

100 105 110

Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly

115 120 125

Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro

130 135 140

Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys Pro

145 150 155 160

Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser Tyr

165 170 175

Gly Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val Val

180 185 190

Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro

195 200 205

Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val

210 215

<210> 3

<211> 218

<212> PRT

<213> Beta冠状病毒/SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.4/5亚型

<400> 3

Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu

1 5 10 15

Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr

20 25 30

Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val

35 40 45

Leu Tyr Asn Phe Ala Pro Phe Phe Ala Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser

50 55 60

Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser

65 70 75 80

Phe Val Ile Arg Gly Asn Glu Val Ser Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr

85 90 95

Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly

100 105 110

Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly

115 120 125

Asn Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro

130 135 140

Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys Pro

145 150 155 160

Cys Asn Gly Val Ala Gly Val Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr

165 170 175

Gly Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val Val

180 185 190

Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro

195 200 205

Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys

210 215

<210> 4

<211> 649

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 重组蛋白

<400> 4

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val

210 215 220

Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn

225 230 235 240

Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser

245 250 255

Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Phe Ala Pro Phe Phe

260 265 270

Ala Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys

275 280 285

Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asn Glu Val

290 295 300

Ser Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr

305 310 315 320

Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn

325 330 335

Lys Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu

340 345 350

Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu

355 360 365

Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn

370 375 380

Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser Tyr Gly Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val

385 390 395 400

Gly His Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His

405 410 415

Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Val

420 425 430

Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys

435 440 445

Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala

450 455 460

Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu

465 470 475 480

Tyr Asn Phe Ala Pro Phe Phe Ala Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro

485 490 495

Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe

500 505 510

Val Ile Arg Gly Asn Glu Val Ser Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly

515 520 525

Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys

530 535 540

Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn

545 550 555 560

Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe

565 570 575

Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys Pro Cys

580 585 590

Asn Gly Val Ala Gly Val Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly

595 600 605

Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val Val Val

610 615 620

Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys

625 630 635 640

Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys

645

<210> 5

<211> 1947

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 5

cgcgtccagc ctaccgagag catcgtgcgc ttccccaaca ttaccaatct gtgccccttc 60

ggggaggtct tcaatgctac ccgcttcgcc agcgtgtatg cctggaaccg gaagcggatt 120

tccaactgcg tggctgatta ttccgtcctc tacaactccg cttccttctc caccttcaag 180

tgctatggcg tgtcccccac caagctcaac gatctctgct tcaccaatgt gtacgccgac 240

tccttcgtca tccgcggcga tgaggtgcgc cagatcgccc ccggccagac cggcaagatc 300

gctgactata actataagct ccctgatgac ttcaccggct gcgtcatcgc ttggaatagc 360

aacaacctgg attccaaggt cgggggcaac tataactatc ggtaccggct cttccggaag 420

tccaatctga agcccttcga gcgggacatc agcaccgaga tctatcaagc tggcagcaag 480

ccttgcaatg gcgtcgaggg gttcaactgc tacttccctc tccaaagcta cggcttccaa 540

cccaccaatg gcgtggggta ccagccctac cgggtcgtcg tgctctcctt cgagctcctg 600

catgcccccg ccaccgtgtg cggccctaag aagtccacca acctcgtggt gcagcctacc 660

gagagcattg tccggttccc caatattacc aacctctgcc ccttcgacga ggtcttcaac 720

gctacccgct tcgccagcgt ctacgcctgg aatcggaagc gcatcagcaa ttgcgtcgct 780

gactactccg tgctgtataa tttcgctccc ttcttcgcct tcaagtgcta cggcgtcagc 840

cctaccaagc tcaatgacct gtgcttcacc aatgtgtatg ctgacagctt cgtgattcgc 900

gggaatgagg tcagccagat cgctcctggg caaaccggga acatcgccga ctacaactac 960

aagctccccg atgatttcac cgggtgcgtc atcgcttgga attccaacaa gctcgacagc 1020

aaggtgggcg ggaattataa ttacctctat cggctgttcc gcaagagcaa tctgaagccc 1080

ttcgagcgcg acattagcac cgagatttac caagctggca acaagccctg caatggcgtc 1140

gccggcttca attgctactt ccccctgcgg agctatggct tccggcctac ctacggggtc 1200

ggccaccagc cctaccgcgt cgtcgtgctg agcttcgagc tcctccatgc ccctgctacc 1260

gtctgcgggc ccaagaagtc caccaatctg gtcgtgcagc ctaccgagag cattgtccgg 1320

ttccccaata ttaccaacct ctgccccttc gacgaggtct tcaacgctac ccgcttcgcc 1380

agcgtctacg cctggaatcg gaagcgcatc agcaattgcg tcgctgacta ctccgtgctg 1440

tataatttcg ctcccttctt cgccttcaag tgctacggcg tcagccctac caagctcaat 1500

gacctgtgct tcaccaatgt gtatgctgac agcttcgtga ttcgcgggaa tgaggtcagc 1560

cagatcgctc ctgggcaaac cgggaacatc gccgactaca actacaagct ccccgatgat 1620

ttcaccgggt gcgtcatcgc ttggaattcc aacaagctcg acagcaaggt gggcgggaat 1680

tataattacc ggtatcggct gttccgcaag agcaatctga agcccttcga gcgcgacatt 1740

agcaccgaga tttaccaagc tggcaacaag ccctgcaatg gcgtcgccgg cgtcaattgc 1800

tacttccccc tgcagagcta tggcttccgg cctacctacg gggtcggcca ccagccctac 1860

cgcgtcgtcg tgctgagctt cgagctcctc catgcccctg ctaccgtctg cgggcccaag 1920

aagtccacca atctggtcaa gaataag 1947

<210> 6

<211> 1947

<212> RNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 6

cgcguccagc cuaccgagag caucgugcgc uuccccaaca uuaccaaucu gugccccuuc 60

ggggaggucu ucaaugcuac ccgcuucgcc agcguguaug ccuggaaccg gaagcggauu 120

uccaacugcg uggcugauua uuccguccuc uacaacuccg cuuccuucuc caccuucaag 180

ugcuauggcg ugucccccac caagcucaac gaucucugcu ucaccaaugu guacgccgac 240

uccuucguca uccgcggcga ugaggugcgc cagaucgccc ccggccagac cggcaagauc 300

gcugacuaua acuauaagcu cccugaugac uucaccggcu gcgucaucgc uuggaauagc 360

aacaaccugg auuccaaggu cgggggcaac uauaacuauc gguaccggcu cuuccggaag 420

uccaaucuga agcccuucga gcgggacauc agcaccgaga ucuaucaagc uggcagcaag 480

ccuugcaaug gcgucgaggg guucaacugc uacuucccuc uccaaagcua cggcuuccaa 540

cccaccaaug gcguggggua ccagcccuac cgggucgucg ugcucuccuu cgagcuccug 600

caugcccccg ccaccgugug cggcccuaag aaguccacca accucguggu gcagccuacc 660

gagagcauug uccgguuccc caauauuacc aaccucugcc ccuucgacga ggucuucaac 720

gcuacccgcu ucgccagcgu cuacgccugg aaucggaagc gcaucagcaa uugcgucgcu 780

gacuacuccg ugcuguauaa uuucgcuccc uucuucgccu ucaagugcua cggcgucagc 840

ccuaccaagc ucaaugaccu gugcuucacc aauguguaug cugacagcuu cgugauucgc 900

gggaaugagg ucagccagau cgcuccuggg caaaccggga acaucgccga cuacaacuac 960

aagcuccccg augauuucac cgggugcguc aucgcuugga auuccaacaa gcucgacagc 1020

aaggugggcg ggaauuauaa uuaccucuau cggcuguucc gcaagagcaa ucugaagccc 1080

uucgagcgcg acauuagcac cgagauuuac caagcuggca acaagcccug caauggcguc 1140

gccggcuuca auugcuacuu cccccugcgg agcuauggcu uccggccuac cuacgggguc 1200

ggccaccagc ccuaccgcgu cgucgugcug agcuucgagc uccuccaugc cccugcuacc 1260

gucugcgggc ccaagaaguc caccaaucug gucgugcagc cuaccgagag cauuguccgg 1320

uuccccaaua uuaccaaccu cugccccuuc gacgaggucu ucaacgcuac ccgcuucgcc 1380

agcgucuacg ccuggaaucg gaagcgcauc agcaauugcg ucgcugacua cuccgugcug 1440

uauaauuucg cucccuucuu cgccuucaag ugcuacggcg ucagcccuac caagcucaau 1500

gaccugugcu ucaccaaugu guaugcugac agcuucguga uucgcgggaa ugaggucagc 1560

cagaucgcuc cugggcaaac cgggaacauc gccgacuaca acuacaagcu ccccgaugau 1620

uucaccgggu gcgucaucgc uuggaauucc aacaagcucg acagcaaggu gggcgggaau 1680

uauaauuacc gguaucggcu guuccgcaag agcaaucuga agcccuucga gcgcgacauu 1740

agcaccgaga uuuaccaagc uggcaacaag cccugcaaug gcgucgccgg cgucaauugc 1800

uacuuccccc ugcagagcua uggcuuccgg ccuaccuacg gggucggcca ccagcccuac 1860

cgcgucgucg ugcugagcuu cgagcuccuc caugccccug cuaccgucug cgggcccaag 1920

aaguccacca aucuggucaa gaauaag 1947

<210> 7

<211> 1971

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 7

cgtgttcagc caaccgagtc gatcgtaagg ttccctaaca ttaccaactt atgccccttc 60

ggtgaggttt tcaacgccac gagattcgca tccgtgtatg cctggaatcg taagcgtatc 120

tcaaactgcg ttgcggacta ctccgtgctc tacaatagtg ccagctttag caccttcaaa 180

tgctacggtg tcagccccac gaagctgaac gatttatgtt ttacaaatgt ctatgccgat 240

agctttgtta ttcgcggcga tgaggttaga caaatagcgc caggacaaac tggaaagata 300

gccgactaca attacaaact tcccgatgac tttacgggtt gcgtcatagc ctggaacagc 360

aataacttgg actccaaggt tgggggaaat tacaattatc tctaccggct attcagaaag 420

tcaaatctga agccgtttga gagagacatc agtacagaaa tataccaggc cggtagcact 480

ccatgtaacg gggtggaagg gttcaattgt tacttccccc tccagagtta tggtttccaa 540

cccacgaacg gagtgggcta ccaaccttac agagtagtag tactgagctt cgagttattg 600

catgctccgg cgacagtctg tggcccaaag aagagcacaa acctggtaaa gaacaaaaga 660

gttcaaccca ctgagagtat tgtaagattc cccaatatta ccaacttgtg tcctttcggg 720

gaggtattta atgccaccag atttgcctct gtgtacgcat ggaatcgcaa aagaatcagc 780

aattgtgtgg ccgactatag cgtcctgtat aacagcgcct ctttctcaac cttcaagtgt 840

tacggggtaa gccccactaa gctcaacgat ctatgcttca ccaatgtcta cgccgattct 900

tttgtgatcc gcggcgatga agttagacag atcgcccctg ggcaaaccgg aaagatcgcc 960

gactataact acaaactgcc ggacgacttc actggctgcg ttatcgcctg gaactcgaac 1020

aatcttgaca gcaaggtggg aggcaactac aattatctgt atcggctgtt caggaaatct 1080

aacctcaagc ccttcgaaag agatatctct accgaaatct atcaagcggg tagcacgccg 1140

tgcaatggcg tcgagggttt taactgctat tttcccctgc agagctacgg gtttcaaccc 1200

actaatggtg tgggatatca gccctaccgc gttgtggtgt tgagcttcga actgctgcac 1260

gcgccagcga cagtatgcgg tcccaagaag tccacgaatt tggttaaaaa caagagagta 1320

cagcccacag agagcatagt gcggttcccc aacattacga acctgtgtcc gttcggcgag 1380

gtgttcaacg ccactagatt tgcaagtgta tatgcttgga accgcaagag aatctcgaac 1440

tgcgttgctg actacagcgt actctataac tcggcctcat tttcgacatt caagtgctac 1500

ggcgtgagcc ccaccaagct gaacgacctg tgtttcacca acgtctacgc tgactcgttt 1560

gtgattagag gcgatgaagt gcggcagatc gcacccgggc aaacaggcaa aatcgcagac 1620

tacaactaca agttgccaga cgacttcacg ggctgcgtga tcgcttggaa ctctaacaac 1680

ctggattcaa aggtgggggg caactataat tacctgtacc gactgttccg taagagcaac 1740

ttgaagccct ttgagaggga cattagcacc gaaatctacc aggccggcag cacaccctgt 1800

aatggcgtcg aaggtttcaa ttgctacttt cctctccaaa gctacggctt tcagcccacc 1860

aacggggtgg gctaccagcc ttaccgcgtg gtggtgctat cgttcgagct gctgcatgcc 1920

cccgctaccg tgtgtgggcc caagaagagc actaatctgg tgaagaacaa a 1971

<210> 8

<211> 47

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 8

gggaaataag agagaaaaga agagtaagaa gaaatataag agccacc 47

<210> 9

<211> 51

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 9

atgatccaca gcgtgtttct actgatgttc ctgcttaccc caaccgaaag c 51

<210> 10

<211> 45

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 10

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgc 45

<210> 11

<211> 110

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 11

tgataatagg ctggagcctc ggtggccatg cttcttgccc cttgggcctc cccccagccc 60

ctcctcccct tcctgcaccc gtacccccgt ggtctttgaa taaagtctga 110

<210> 12

<211> 223

<212> PRT

<213> Beta冠状病毒/SARS-CoV-2 原型株

<400> 12

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 13

<211> 223

<212> PRT

<213> Beta冠状病毒/SARS-CoV-2 Delta变异株

<400> 13

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 14

<211> 223

<212> PRT

<213> Beta冠状病毒/SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.1亚型

<400> 14

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Leu Ala Pro Phe Phe Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Ser

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser

165 170 175

Tyr Ser Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 15

<211> 223

<212> PRT

<213> Beta冠状病毒/SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.1.1亚型

<400> 15

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Leu Ala Pro Phe Phe Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Ser

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser

165 170 175

Tyr Ser Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 16

<211> 223

<212> PRT

<213> Beta冠状病毒/SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.2亚型

<400> 16

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Phe Ala Pro Phe Phe Ala Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asn Glu Val Ser Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 17

<211> 223

<212> PRT

<213> Beta冠状病毒/SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.2.12.1亚型

<400> 17

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Phe Ala Pro Phe Phe Ala Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asn Glu Val Ser Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Gln Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Arg Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 18

<211> 223

<212> PRT

<213> Beta冠状病毒/SARS-CoV-2 Omicron变异株BA.4/5亚型

<400> 18

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Asp Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Phe Ala Pro Phe Phe Ala Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asn Glu Val Ser Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Lys Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Arg Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Asn Lys

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Ala Gly Val Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Arg Pro Thr Tyr Gly Val Gly His Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 19

<211> 3765

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 19

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgaccaca 60

cggacccagc tccctcccgc ctacacaaac tctttcaccc ggggcgtgta ctaccccgac 120

aaggtgttcc ggtctagcgt gctccactct acacaggacc tgttcctccc tttcttcagc 180

aacgtgacat ggttccacgc catccacgtg tctggcacaa acggcacaaa gcggttcgac 240

aaccccgtgc tccctttcaa cgacggcgtg tacttcgcca gcaccgagaa gtctaacatt 300

atccggggct ggattttcgg caccacactc gactctaaga cacagtccct cctgattgtg 360

aacaacgcca caaacgtggt gattaaggtg tgcgagttcc agttctgcaa cgaccctttc 420

ctgggcgtgt actaccacaa gaacaacaag tcttggatgg agtctgagtt cagagtgtac 480

tctagcgcca acaactgcac cttcgagtac gtgtcccagc ctttcctcat ggacctggag 540

ggcaagcagg gcaacttcaa gaacctgaga gagttcgtgt tcaagaacat tgacggctac 600

ttcaagattt actctaagca caccccaatt aacctcgtga gggacctccc tcagggcttc 660

tccgccttag aaccactggt ggacctccct attggcatta acatcacacg cttccagaca 720

ctgctcgccc tccaccggtc ttacctgacc ccaggcgact ctagctctgg ctggacagcc 780

ggcgccgccg cctactacgt gggctacctg cagcctagga ccttcctcct gaagtacaac 840

gagaacggca caattaccga cgccgtggac tgcgccctgg acccactgtc cgagacaaag 900

tgcacactga agtccttcac agtggagaag ggcatttacc agacatctaa cttccgggtg 960

cagcctacag agtctattgt gcggttccca aacatcacaa acctgtgccc tttcggcgag 1020

gtgttcaacg ccacccggtt cgcctctgtg tacgcctgga accggaagcg gatctctaac 1080

tgcgtggccg actactccgt gctgtacaac tccgcctctt tctctacatt caagtgctac 1140

ggcgtgtccc ctacaaagct gaacgacctg tgcttcacca acgtgtacgc cgactctttc 1200

gtgattagag gcgacgaggt gaggcagatt gcccccggcc agacaggcaa gatcgccgac 1260

tacaactaca agctgcccga cgacttcaca ggctgcgtga tcgcctggaa ctctaacaac 1320

ctggactcta aggtgggcgg caactacaac tacctgtaca gactgttccg gaagtctaac 1380

ctgaagccat tcgagaggga cattagcacc gagatttacc aggccggctc taccccatgc 1440

aacggcgtgg agggcttcaa ctgctacttc ccactgcagt cctacggctt ccagcctaca 1500

aacggcgtgg gctaccagcc ttaccgggtg gtggtgctgt ctttcgagct gctccacgcc 1560

cccgccacag tgtgcggccc aaagaagagc acaaacctcg tgaagaacaa gtgcgtgaac 1620

ttcaacttca acggcctcac aggcacaggc gtgctcaccg agtctaacaa gaagttcctc 1680

cctttccagc agttcggccg cgacattgcc gacaccaccg acgccgtgcg ggaccctcag 1740

acactggaaa ttctcgacat caccccttgc agcttcggcg gcgtgtccgt gatcacccca 1800

ggcacaaaca catctaacca ggtggccgtg ctgtaccagg acgtgaactg caccgaggtg 1860

ccagtggcca tccacgccga ccagctcacc ccaacatgga gggtgtacag cacaggctct 1920

aacgtgttcc agacccgggc cggctgcctc attggcgccg agcacgtgaa caactcttac 1980

gagtgcgaca tccctattgg cgccggcatt tgcgcctctt accagaccca gacaaactct 2040

ccacggagag cccggtctgt ggcctctcag agcattattg cctacaccat gtctctgggc 2100

gccgagaact ctgtggccta ctctaacaac tctattgcca tccctacaaa cttcacaatt 2160

tctgtgacca ccgagattct cccagtgtct atgaccaaga catctgtgga ctgcaccatg 2220

tacatttgcg gcgactccac cgagtgctct aacctcctgc tccagtacgg ctctttctgc 2280

acccagctca accgcgccct gacaggcatc gccgtggagc aggacaagaa cacccaggag 2340

gtgttcgccc aggtgaagca gatttacaag acccccccaa ttaaggactt cggcggcttc 2400

aacttctctc agattctccc cgacccatcc aagcctagca agcggtcctt cattgaggac 2460

ctcctgttca acaaggtgac actggccgac gccggcttca ttaagcagta cggcgactgc 2520

ctgggcgaca ttgccgcccg ggacctgatt tgcgcccaga agttcaacgg cctcacagtg 2580

ctccccccac tgctcaccga cgagatgatt gcccagtaca catctgccct cctggccggc 2640

acaattacat ctggctggac cttcggcgcc ggcgccgccc tgcagatccc tttcgccatg 2700

cagatggcct accgcttcaa cggcatcggc gtgacacaga acgtgctgta cgagaaccag 2760

aagctgatcg ccaaccagtt caacagcgcc attggcaaga ttcaggactc tctgagcagc 2820

acagccagcg ccctgggcaa gctgcaggac gtggtgaacc agaacgccca ggccctgaac 2880

acactggtga agcagctgtc ttctaacttc ggcgccattt ctagcgtgct gaacgacatt 2940

ctgtcgcggc tggacaaggt ggaggccgag gtgcagattg acaggctcat cacaggcaga 3000

ctgcagtctc tgcagacata cgtgacccag cagctgatta gagccgccga gattagagcc 3060

tccgccaacc tggccgccac caagatgagc gagtgcgtgc tcggccagtc taagcgggtg 3120

gacttctgcg gcaagggcta ccacctcatg tctttccctc agtccgcccc tcacggcgtg 3180

gtgttcctcc acgtgacata cgtgcccgcc caggagaaga acttcaccac agcccccgcc 3240

atttgccacg acggcaaggc ccacttccct agggagggcg tgttcgtgtc taacggcacc 3300

cactggttcg tgacccagcg gaacttctac gagcctcaga ttattaccac agacaacaca 3360

ttcgtgagcg gcaactgcga cgtggtgatt ggcattgtga acaacacagt gtacgaccca 3420

ctgcagcctg agttggactc tttcaaggag gaactcgaca agtacttcaa gaaccacaca 3480

tctcctgacg tggacctggg cgacattagc ggcattaacg cctctgtggt gaacattcag 3540

aaggagattg acagactgaa cgaggtggcc aagaacctga acgagtctct cattgacctg 3600

caggagctgg gcaagtacga gcagtacatt aagtggcctt ggtacatttg gctgggcttc 3660

attgccggcc tgatcgccat tgtgatggtg accatcatgc tgtgctgcat gacatcttgc 3720

tgcagctgcc tgaagggctg ctgctcttgc ggctcttgct gcaag 3765

<210> 20

<211> 3759

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 20

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgagaaca 60

cggacccagc tccctcccgc ctacacaaac tctttcaccc ggggcgtgta ctaccccgac 120

aaggtgttcc ggtctagcgt gctccactct acacaggacc tgttcctccc tttcttcagc 180

aacgtgacat ggttccacgc catccacgtg tctggcacaa acggcacaaa gcggttcgac 240

aaccccgtgc tccctttcaa cgacggcgtg tacttcgcca gcaccgagaa gtctaacatt 300

atccggggct ggattttcgg caccacactc gactctaaga cacagtccct cctgattgtg 360

aacaacgcca caaacgtggt gattaaggtg tgcgagttcc agttctgcaa cgaccctttc 420

ctggacgtgt actaccacaa gaacaacaag tcttggatgg agtctggcgt gtactctagc 480

gccaacaact gcaccttcga gtacgtgtcc cagcctttcc tcatggacct ggagggcaag 540

cagggcaact tcaagaacct gagagagttc gtgttcaaga acattgacgg ctacttcaag 600

atttactcta agcacacccc aattaacctc gtgagggacc tccctcaggg cttctccgtg 660

ttagaaccac tggtggacct ccctattggc attaacatca cacgcttcca gacactgctc 720

gccctccacc ggtcttacct gaccccaggc gactctagct ctggctggac agccggcgcc 780

gccgcctact acgtgggcta cctgcagcct aggaccttcc tcctgaagta caacgagaac 840

ggcacaatta ccgacgccgt ggactgcgcc ctggacccac tgtccgagac aaagtgcaca 900

ctgaagtcct tcacagtgga gaagggcatt taccagacat ctaacttccg ggtgcagcct 960

acagagtcta ttgtgcggtt cccaaacatc acaaacctgt gccctttcgg cgaggtgttc 1020

aacgccaccc ggttcgcctc tgtgtacgcc tggaaccgga agcggatctc taactgcgtg 1080

gccgactact ccgtgctgta caactccgcc tctttctcta cattcaagtg ctacggcgtg 1140

tcccctacaa agctgaacga cctgtgcttc accaacgtgt acgccgactc tttcgtgatt 1200

agaggcgacg aggtgaggca gattgccccc ggccagacag gcaagatcgc cgactacaac 1260

tacaagctgc ccgacgactt cacaggctgc gtgatcgcct ggaactctaa caacctggac 1320

tctaaggtgg gcggcaacta caactacaga tacagactgt tccggaagtc taacctgaag 1380

ccattcgaga gggacattag caccgagatt taccaggccg gctctaagcc atgcaacggc 1440

gtggagggct tcaactgcta cttcccactg cagtcctacg gcttccagcc tacaaacggc 1500

gtgggctacc agccttaccg ggtggtggtg ctgtctttcg agctgctcca cgcccccgcc 1560

acagtgtgcg gcccaaagaa gagcacaaac ctcgtgaaga acaagtgcgt gaacttcaac 1620

ttcaacggcc tcacaggcac aggcgtgctc accgagtcta acaagaagtt cctccctttc 1680

cagcagttcg gccgcgacat tgccgacacc accgacgccg tgcgggaccc tcagacactg 1740

gaaattctcg acatcacccc ttgcagcttc ggcggcgtgt ccgtgatcac cccaggcaca 1800

aacacatcta accaggtggc cgtgctgtac cagggcgtga actgcaccga ggtgccagtg 1860

gccatccacg ccgaccagct caccccaaca tggagggtgt acagcacagg ctctaacgtg 1920

ttccagaccc gggccggctg cctcattggc gccgagcacg tgaacaactc ttacgagtgc 1980

gacatcccta ttggcgccgg catttgcgcc tcttaccaga cccagacaaa ctctagacgg 2040

agagcccggt ctgtggcctc tcagagcatt attgcctaca ccatgtctct gggcgccgag 2100

aactctgtgg cctactctaa caactctatt gccatcccta caaacttcac aatttctgtg 2160

accaccgaga ttctcccagt gtctatgacc aagacatctg tggactgcac catgtacatt 2220

tgcggcgact ccaccgagtg ctctaacctc ctgctccagt acggctcttt ctgcacccag 2280

ctcaaccgcg ccctgacagg catcgccgtg gagcaggaca agaacaccca ggaggtgttc 2340

gcccaggtga agcagattta caagaccccc ccaattaagg acttcggcgg cttcaacttc 2400

tctcagattc tccccgaccc atccaagcct agcaagcggt ccttcattga ggacctcctg 2460

ttcaacaagg tgacactggc cgacgccggc ttcattaagc agtacggcga ctgcctgggc 2520

gacattgccg cccgggacct gatttgcgcc cagaagttca acggcctcac agtgctcccc 2580

ccactgctca ccgacgagat gattgcccag tacacatctg ccctcctggc cggcacaatt 2640

acatctggct ggaccttcgg cgccggcgcc gccctgcaga tccctttcgc catgcagatg 2700

gcctaccgct tcaacggcat cggcgtgaca cagaacgtgc tgtacgagaa ccagaagctg 2760

atcgccaacc agttcaacag cgccattggc aagattcagg actctctgag cagcacagcc 2820

agcgccctgg gcaagctgca gaacgtggtg aaccagaacg cccaggccct gaacacactg 2880

gtgaagcagc tgtcttctaa cttcggcgcc atttctagcg tgctgaacga cattctgtcg 2940

cggctggaca aggtggaggc cgaggtgcag attgacaggc tcatcacagg cagactgcag 3000

tctctgcaga catacgtgac ccagcagctg attagagccg ccgagattag agcctccgcc 3060

aacctggccg ccaccaagat gagcgagtgc gtgctcggcc agtctaagcg ggtggacttc 3120

tgcggcaagg gctaccacct catgtctttc cctcagtccg cccctcacgg cgtggtgttc 3180

ctccacgtga catacgtgcc cgcccaggag aagaacttca ccacagcccc cgccatttgc 3240

cacgacggca aggcccactt ccctagggag ggcgtgttcg tgtctaacgg cacccactgg 3300

ttcgtgaccc agcggaactt ctacgagcct cagattatta ccacagacaa cacattcgtg 3360

agcggcaact gcgacgtggt gattggcatt gtgaacaaca cagtgtacga cccactgcag 3420

cctgagttgg actctttcaa ggaggaactc gacaagtact tcaagaacca cacatctcct 3480

gacgtggacc tgggcgacat tagcggcatt aacgcctctg tggtgaacat tcagaaggag 3540

attgacagac tgaacgaggt ggccaagaac ctgaacgagt ctctcattga cctgcaggag 3600

ctgggcaagt acgagcagta cattaagtgg ccttggtaca tttggctggg cttcattgcc 3660

ggcctgatcg ccattgtgat ggtgaccatc atgctgtgct gcatgacatc ttgctgcagc 3720

tgcctgaagg gctgctgctc ttgcggctct tgctgcaag 3759

<210> 21

<211> 3756

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 21

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgaccaca 60

cggacccagc tccctcccgc ctacacaaac tctttcaccc ggggcgtgta ctaccccgac 120

aaggtgttcc ggtctagcgt gctccactct acacaggacc tgttcctccc tttcttcagc 180

aacgtgacat ggttccacgt gatctctggc acaaacggca caaagcggtt cgacaacccc 240

gtgctccctt tcaacgacgg cgtgtacttc gccagcattg agaagtctaa cattatccgg 300

ggctggattt tcggcaccac actcgactct aagacacagt ccctcctgat tgtgaacaac 360

gccacaaacg tggtgattaa ggtgtgcgag ttccagttct gcaacgaccc tttcctggac 420

cacaagaaca acaagtcttg gatggagtct gagttcagag tgtactctag cgccaacaac 480

tgcaccttcg agtacgtgtc ccagcctttc ctcatggacc tggagggcaa gcagggcaac 540

ttcaagaacc tgagagagtt cgtgttcaag aacattgacg gctacttcaa gatttactct 600

aagcacaccc caattattgt gagggaacca gaagacctcc ctcagggctt ctccgcctta 660

gaaccactgg tggacctccc tattggcatt aacatcacac gcttccagac actgctcgcc 720

ctccaccggt cttacctgac cccaggcgac tctagctctg gctggacagc cggcgccgcc 780

gcctactacg tgggctacct gcagcctagg accttcctcc tgaagtacaa cgagaacggc 840

acaattaccg acgccgtgga ctgcgccctg gacccactgt ccgagacaaa gtgcacactg 900

aagtccttca cagtggagaa gggcatttac cagacatcta acttccgggt gcagcctaca 960

gagtctattg tgcggttccc aaacatcaca aacctgtgcc ctttcgacga ggtgttcaac 1020

gccacccggt tcgcctctgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatctctaa ctgcgtggcc 1080

gactactccg tgctgtacaa cctggcccct ttcttcacat tcaagtgcta cggcgtgtcc 1140

cctacaaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgactcttt cgtgattaga 1200

ggcgacgagg tgaggcagat tgcccccggc cagacaggca acatcgccga ctacaactac 1260

aagctgcccg acgacttcac aggctgcgtg atcgcctgga actctaacaa gctggactct 1320

aaggtgtctg gcaactacaa ctacctgtac agactgttcc ggaagtctaa cctgaagcca 1380

ttcgagaggg acattagcac cgagatttac caggccggca acaagccatg caacggcgtg 1440

gccggcttca actgctactt cccactgcgc tcctactcct tccggcctac atacggcgtg 1500

ggccaccagc cttaccgggt ggtggtgctg tctttcgagc tgctccacgc ccccgccaca 1560

gtgtgcggcc caaagaagag cacaaacctc gtgaagaaca agtgcgtgaa cttcaacttc 1620

aacggcctca agggcacagg cgtgctcacc gagtctaaca agaagttcct ccctttccag 1680

cagttcggcc gcgacattgc cgacaccacc gacgccgtgc gggaccctca gacactggaa 1740

attctcgaca tcaccccttg cagcttcggc ggcgtgtccg tgatcacccc aggcacaaac 1800

acatctaacc aggtggccgt gctgtaccag ggcgtgaact gcaccgaggt gccagtggcc 1860

atccacgccg accagctcac cccaacatgg agggtgtaca gcacaggctc taacgtgttc 1920

caaacccggg ccggctgcct cattggcgcc gagtacgtga acaactctta cgagtgcgac 1980

atccctattg gcgccggcat ttgcgcctct taccagaccc agacaaagtc tcaccggaga 2040

gcccggtctg tggcctctca gagcattatt gcctacacca tgtctctggg cgccgagaac 2100

tctgtggcct actctaacaa ctctattgcc atccctacaa acttcacaat ttctgtgacc 2160

accgagattc tcccagtgtc tatgaccaag acatctgtgg actgcaccat gtacatttgc 2220

ggcgactcca ccgagtgctc taacctcctg ctccagtacg gctctttctg cacccagctc 2280

aagcgcgccc tgacaggcat cgccgtggag caggacaaga acacccagga ggtgttcgcc 2340

caggtgaagc agatttacaa gaccccccca attaagtact tcggcggctt caacttctct 2400

cagattctcc ccgacccatc caagcctagc aagcggtcct tcattgagga cctcctgttc 2460

aacaaggtga cactggccga cgccggcttc attaagcagt acggcgactg cctgggcgac 2520

attgccgccc gggacctgat ttgcgcccag aagttcaagg gcctcacagt gctcccccca 2580

ctgctcaccg acgagatgat tgcccagtac acatctgccc tcctggccgg cacaattaca 2640

tctggctgga ccttcggcgc cggcgccgcc ctgcagatcc ctttcgccat gcagatggcc 2700

taccgcttca acggcatcgg cgtgacacag aacgtgctgt acgagaacca gaagctgatc 2760

gccaaccagt tcaacagcgc cattggcaag attcaggact ctctgagcag cacagccagc 2820

gccctgggca agctgcagga cgtggtgaac cacaacgccc aggccctgaa cacactggtg 2880

aagcagctgt cttctaagtt cggcgccatt tctagcgtgc tgaacgacat tttctcgcgg 2940

ctggacaagg tggaggccga ggtgcagatt gacaggctca tcacaggcag actgcagtct 3000

ctgcagacat acgtgaccca gcagctgatt agagccgccg agattagagc ctccgccaac 3060

ctggccgcca ccaagatgag cgagtgcgtg ctcggccagt ctaagcgggt ggacttctgc 3120

ggcaagggct accacctcat gtctttccct cagtccgccc ctcacggcgt ggtgttcctc 3180

cacgtgacat acgtgcccgc ccaggagaag aacttcacca cagcccccgc catttgccac 3240

gacggcaagg cccacttccc tagggagggc gtgttcgtgt ctaacggcac ccactggttc 3300

gtgacccagc ggaacttcta cgagcctcag attattacca cagacaacac attcgtgagc 3360

ggcaactgcg acgtggtgat tggcattgtg aacaacacag tgtacgaccc actgcagcct 3420

gagttggact ctttcaagga ggaactcgac aagtacttca agaaccacac atctcctgac 3480

gtggacctgg gcgacattag cggcattaac gcctctgtgg tgaacattca gaaggagatt 3540

gacagactga acgaggtggc caagaacctg aacgagtctc tcattgacct gcaggagctg 3600

ggcaagtacg agcagtacat taagtggcct tggtacattt ggctgggctt cattgccggc 3660

ctgatcgcca ttgtgatggt gaccatcatg ctgtgctgca tgacatcttg ctgcagctgc 3720

ctgaagggct gctgctcttg cggctcttgc tgcaag 3756

<210> 22

<211> 3756

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 22

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgaccaca 60

cggacccagc tccctcccgc ctacacaaac tctttcaccc ggggcgtgta ctaccccgac 120

aaggtgttcc ggtctagcgt gctccactct acacaggacc tgttcctccc tttcttcagc 180

aacgtgacat ggttccacgt gatctctggc acaaacggca caaagcggtt cgacaacccc 240

gtgctccctt tcaacgacgg cgtgtacttc gccagcattg agaagtctaa cattatccgg 300

ggctggattt tcggcaccac actcgactct aagacacagt ccctcctgat tgtgaacaac 360

gccacaaacg tggtgattaa ggtgtgcgag ttccagttct gcaacgaccc tttcctggac 420

cacaagaaca acaagtcttg gatggagtct gagttcagag tgtactctag cgccaacaac 480

tgcaccttcg agtacgtgtc ccagcctttc ctcatggacc tggagggcaa gcagggcaac 540

ttcaagaacc tgagagagtt cgtgttcaag aacattgacg gctacttcaa gatttactct 600

aagcacaccc caattattgt ggaaccagaa agggacctcc ctcagggctt ctccgcctta 660

gaaccactgg tggacctccc tattggcatt aacatcacac gcttccagac actgctcgcc 720

ctccaccggt cttacctgac cccaggcgac tctagctctg gctggacagc cggcgccgcc 780

gcctactacg tgggctacct gcagcctagg accttcctcc tgaagtacaa cgagaacggc 840

acaattaccg acgccgtgga ctgcgccctg gacccactgt ccgagacaaa gtgcacactg 900

aagtccttca cagtggagaa gggcatttac cagacatcta acttccgggt gcagcctaca 960

gagtctattg tgcggttccc aaacatcaca aacctgtgcc ctttcgacga ggtgttcaac 1020

gccaccaagt tcgcctctgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatctctaa ctgcgtggcc 1080

gactactccg tgctgtacaa cctggcccct ttcttcacat tcaagtgcta cggcgtgtcc 1140

cctacaaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgactcttt cgtgattaga 1200

ggcgacgagg tgaggcagat tgcccccggc cagacaggca acatcgccga ctacaactac 1260

aagctgcccg acgacttcac aggctgcgtg atcgcctgga actctaacaa gctggactct 1320

aaggtgtctg gcaactacaa ctacctgtac agactgttcc ggaagtctaa cctgaagcca 1380

ttcgagaggg acattagcac cgagatttac caggccggca acaagccatg caacggcgtg 1440

gccggcttca actgctactt cccactgcgc tcctactcct tccggcctac atacggcgtg 1500

ggccaccagc cttaccgggt ggtggtgctg tctttcgagc tgctccacgc ccccgccaca 1560

gtgtgcggcc caaagaagag cacaaacctc gtgaagaaca agtgcgtgaa cttcaacttc 1620

aacggcctca agggcacagg cgtgctcacc gagtctaaca agaagttcct ccctttccag 1680

cagttcggcc gcgacattgc cgacaccacc gacgccgtgc gggaccctca gacactggaa 1740

attctcgaca tcaccccttg cagcttcggc ggcgtgtccg tgatcacccc aggcacaaac 1800

acatctaacc aggtggccgt gctgtaccag ggcgtgaact gcaccgaggt gccagtggcc 1860

atccacgccg accagctcac cccaacatgg agggtgtaca gcacaggctc taacgtgttc 1920

caaacccggg ccggctgcct cattggcgcc gagtacgtga acaactctta cgagtgcgac 1980

atccctattg gcgccggcat ttgcgcctct taccagaccc agacaaagtc tcaccggaga 2040

gcccggtctg tggcctctca gagcattatt gcctacacca tgtctctggg cgccgagaac 2100

tctgtggcct actctaacaa ctctattgcc atccctacaa acttcacaat ttctgtgacc 2160

accgagattc tcccagtgtc tatgaccaag acatctgtgg actgcaccat gtacatttgc 2220

ggcgactcca ccgagtgctc taacctcctg ctccagtacg gctctttctg cacccagctc 2280

aagcgcgccc tgacaggcat cgccgtggag caggacaaga acacccagga ggtgttcgcc 2340

caggtgaagc agatttacaa gaccccccca attaagtact tcggcggctt caacttctct 2400

cagattctcc ccgacccatc caagcctagc aagcggtcct tcattgagga cctcctgttc 2460

aacaaggtga cactggccga cgccggcttc attaagcagt acggcgactg cctgggcgac 2520

attgccgccc gggacctgat ttgcgcccag aagttcaagg gcctcacagt gctcccccca 2580

ctgctcaccg acgagatgat tgcccagtac acatctgccc tcctggccgg cacaattaca 2640

tctggctgga ccttcggcgc cggcgccgcc ctgcagatcc ctttcgccat gcagatggcc 2700

taccgcttca acggcatcgg cgtgacacag aacgtgctgt acgagaacca gaagctgatc 2760

gccaaccagt tcaacagcgc cattggcaag attcaggact ctctgagcag cacagccagc 2820

gccctgggca agctgcagga cgtggtgaac cacaacgccc aggccctgaa cacactggtg 2880

aagcagctgt cttctaagtt cggcgccatt tctagcgtgc tgaacgacat tttctcgcgg 2940

ctggacaagg tggaggccga ggtgcagatt gacaggctca tcacaggcag actgcagtct 3000

ctgcagacat acgtgaccca gcagctgatt agagccgccg agattagagc ctccgccaac 3060

ctggccgcca ccaagatgag cgagtgcgtg ctcggccagt ctaagcgggt ggacttctgc 3120

ggcaagggct accacctcat gtctttccct cagtccgccc ctcacggcgt ggtgttcctc 3180

cacgtgacat acgtgcccgc ccaggagaag aacttcacca cagcccccgc catttgccac 3240

gacggcaagg cccacttccc tagggagggc gtgttcgtgt ctaacggcac ccactggttc 3300

gtgacccagc ggaacttcta cgagcctcag attattacca cagacaacac attcgtgagc 3360

ggcaactgcg acgtggtgat tggcattgtg aacaacacag tgtacgaccc actgcagcct 3420

gagttggact ctttcaagga ggaactcgac aagtacttca agaaccacac atctcctgac 3480

gtggacctgg gcgacattag cggcattaac gcctctgtgg tgaacattca gaaggagatt 3540

gacagactga acgaggtggc caagaacctg aacgagtctc tcattgacct gcaggagctg 3600

ggcaagtacg agcagtacat taagtggcct tggtacattt ggctgggctt cattgccggc 3660

ctgatcgcca ttgtgatggt gaccatcatg ctgtgctgca tgacatcttg ctgcagctgc 3720

ctgaagggct gctgctcttg cggctcttgc tgcaag 3756

<210> 23

<211> 3756

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 23

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgatcaca 60

cggacccaga gctacacaaa ctctttcacc cggggcgtgt actaccccga caaggtgttc 120

cggtctagcg tgctccactc tacacaggac ctgttcctcc ctttcttcag caacgtgaca 180

tggttccacg ccatccacgt gtctggcaca aacggcacaa agcggttcga caaccccgtg 240

ctccctttca acgacggcgt gtacttcgcc agcaccgaga agtctaacat tatccggggc 300

tggattttcg gcaccacact cgactctaag acacagtccc tcctgattgt gaacaacgcc 360

acaaacgtgg tgattaaggt gtgcgagttc cagttctgca acgacccttt cctggacgtg 420

tactaccaca agaacaacaa gtcttggatg gagtctgagt tcagagtgta ctctagcgcc 480

aacaactgca ccttcgagta cgtgtcccag cctttcctca tggacctgga gggcaagcag 540

ggcaacttca agaacctgag agagttcgtg ttcaagaaca ttgacggcta cttcaagatt 600

tactctaagc acaccccaat taacctcggc agggacctcc ctcagggctt ctccgcctta 660

gaaccactgg tggacctccc tattggcatt aacatcacac gcttccagac actgctcgcc 720

ctccaccggt cttacctgac cccaggcgac tctagctctg gctggacagc cggcgccgcc 780

gcctactacg tgggctacct gcagcctagg accttcctcc tgaagtacaa cgagaacggc 840

acaattaccg acgccgtgga ctgcgccctg gacccactgt ccgagacaaa gtgcacactg 900

aagtccttca cagtggagaa gggcatttac cagacatcta acttccgggt gcagcctaca 960

gagtctattg tgcggttccc aaacatcaca aacctgtgcc ctttcgacga ggtgttcaac 1020

gccacccggt tcgcctctgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatctctaa ctgcgtggcc 1080

gactactccg tgctgtacaa cttcgccccc ttcttcgcct tcaagtgcta cggcgtgtcc 1140

cctacaaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgactcttt cgtgattaga 1200

ggcaacgagg tgagccagat tgcccccggc cagacaggca acatcgccga ctacaactac 1260

aagctgcccg acgacttcac aggctgcgtg atcgcctgga actctaacaa gctggactct 1320

aaggtgggcg gcaactacaa ctacctgtac agactgttcc ggaagtctaa cctgaagcca 1380

ttcgagaggg acattagcac cgagatttac caggccggca acaagccatg caacggcgtg 1440

gccggcttca actgctactt cccactgcgg tcctacggct tccggcctac atacggcgtg 1500

ggccaccagc cttaccgggt ggtggtgctg tctttcgagc tgctccacgc ccccgccaca 1560

gtgtgcggcc caaagaagag cacaaacctc gtgaagaaca agtgcgtgaa cttcaacttc 1620

aacggcctca caggcacagg cgtgctcacc gagtctaaca agaagttcct ccctttccag 1680

cagttcggcc gcgacattgc cgacaccacc gacgccgtgc gggaccctca gacactggaa 1740

attctcgaca tcaccccttg cagcttcggc ggcgtgtccg tgatcacccc aggcacaaac 1800

acatctaacc aggtggccgt gctgtaccag ggcgtgaact gcaccgaggt gccagtggcc 1860

atccacgccg accagctcac cccaacatgg agggtgtaca gcacaggctc taacgtgttc 1920

cagacccggg ccggctgcct cattggcgcc gagtacgtga acaactctta cgagtgcgac 1980

atccctattg gcgccggcat ttgcgcctct taccagaccc agacaaagtc tcaccggaga 2040

gcccggtctg tggcctctca gagcattatt gcctacacca tgtctctggg cgccgagaac 2100

tctgtggcct actctaacaa ctctattgcc atccctacaa acttcacaat ttctgtgacc 2160

accgagattc tcccagtgtc tatgaccaag acatctgtgg actgcaccat gtacatttgc 2220

ggcgactcca ccgagtgctc taacctcctg ctccagtacg gctctttctg cacccagctc 2280

aagcgcgccc tgacaggcat cgccgtggag caggacaaga acacccagga ggtgttcgcc 2340

caggtgaagc agatttacaa gaccccccca attaagtact tcggcggctt caacttctct 2400

cagattctcc ccgacccatc caagcctagc aagcggtcct tcattgagga cctcctgttc 2460

aacaaggtga cactggccga cgccggcttc attaagcagt acggcgactg cctgggcgac 2520

attgccgccc gggacctgat ttgcgcccag aagttcaacg gcctcacagt gctcccccca 2580

ctgctcaccg acgagatgat tgcccagtac acatctgccc tcctggccgg cacaattaca 2640

tctggctgga ccttcggcgc cggcgccgcc ctgcagatcc ctttcgccat gcagatggcc 2700

taccgcttca acggcatcgg cgtgacacag aacgtgctgt acgagaacca gaagctgatc 2760

gccaaccagt tcaacagcgc cattggcaag attcaggact ctctgagcag cacagccagc 2820

gccctgggca agctgcagga cgtggtgaac cacaacgccc aggccctgaa cacactggtg 2880

aagcagctgt cttctaagtt cggcgccatt agcagcgtgc tgaacgacat tctgtcgcgg 2940

ctggacaagg tggaggccga ggtgcagatt gacaggctca tcacaggcag actgcagtct 3000

ctgcagacat acgtgaccca gcagctgatt agagccgccg agattagagc ctccgccaac 3060

ctggccgcca ccaagatgag cgagtgcgtg ctcggccagt ctaagcgggt ggacttctgc 3120

ggcaagggct accacctcat gtctttccct cagtccgccc ctcacggcgt ggtgttcctc 3180

cacgtgacat acgtgcccgc ccaggagaag aacttcacca cagcccccgc catttgccac 3240

gacggcaagg cccacttccc tagggagggc gtgttcgtgt ctaacggcac ccactggttc 3300

gtgacccagc ggaacttcta cgagcctcag attattacca cagacaacac attcgtgagc 3360

ggcaactgcg acgtggtgat tggcattgtg aacaacacag tgtacgaccc actgcagcct 3420

gagttggact ctttcaagga ggaactcgac aagtacttca agaaccacac atctcctgac 3480

gtggacctgg gcgacattag cggcattaac gcctctgtgg tgaacattca gaaggagatt 3540

gacagactga acgaggtggc caagaacctg aacgagtctc tcattgacct gcaggagctg 3600

ggcaagtacg agcagtacat taagtggcct tggtacattt ggctgggctt cattgccggc 3660

ctgatcgcca ttgtgatggt gaccatcatg ctgtgctgca tgacatcttg ctgcagctgc 3720

ctgaagggct gctgctcttg cggctcttgc tgcaag 3756

<210> 24

<211> 3756

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 24

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgatcaca 60

cggacccaga gctacacaaa ctctttcacc cggggcgtgt actaccccga caaggtgttc 120

cggtctagcg tgctccactc tacacaggac ctgttcctcc ctttcttcag caacgtgaca 180

tggttccacg ccatccacgt gtctggcaca aacggcacaa agcggttcga caaccccgtg 240

ctccctttca acgacggcgt gtacttcgcc agcaccgaga agtctaacat tatccggggc 300

tggattttcg gcaccacact cgactctaag acacagtccc tcctgattgt gaacaacgcc 360

acaaacgtgg tgattaaggt gtgcgagttc cagttctgca acgacccttt cctggacgtg 420

tactaccaca agaacaacaa gtcttggatg gagtctgagt tcagagtgta ctctagcgcc 480

aacaactgca ccttcgagta cgtgtcccag cctttcctca tggacctgga gggcaagcag 540

ggcaacttca agaacctgag agagttcgtg ttcaagaaca ttgacggcta cttcaagatt 600

tactctaagc acaccccaat taacctcggc agggacctcc ctcagggctt ctccgcctta 660

gaaccactgg tggacctccc tattggcatt aacatcacac gcttccagac actgctcgcc 720

ctccaccggt cttacctgac cccaggcgac tctagctctg gctggacagc cggcgccgcc 780

gcctactacg tgggctacct gcagcctagg accttcctcc tgaagtacaa cgagaacggc 840

acaattaccg acgccgtgga ctgcgccctg gacccactgt ccgagacaaa gtgcacactg 900

aagtccttca cagtggagaa gggcatttac cagacatcta acttccgggt gcagcctaca 960

gagtctattg tgcggttccc aaacatcaca aacctgtgcc ctttcgacga ggtgttcaac 1020

gccacccggt tcgcctctgt gtacgcctgg aaccggaagc ggatctctaa ctgcgtggcc 1080

gactactccg tgctgtacaa cttcgccccc ttcttcgcct tcaagtgcta cggcgtgtcc 1140

cctacaaagc tgaacgacct gtgcttcacc aacgtgtacg ccgactcttt cgtgattaga 1200

ggcaacgagg tgagccagat tgcccccggc cagacaggca acatcgccga ctacaactac 1260

aagctgcccg acgacttcac aggctgcgtg atcgcctgga actctaacaa gctggactct 1320

aaggtgggcg gcaactacaa ctaccagtac agactgttcc ggaagtctaa cctgaagcca 1380

ttcgagaggg acattagcac cgagatttac caggccggca acaagccatg caacggcgtg 1440

gccggcttca actgctactt cccactgcgg tcctacggct tccggcctac atacggcgtg 1500

ggccaccagc cttaccgggt ggtggtgctg tctttcgagc tgctccacgc ccccgccaca 1560

gtgtgcggcc caaagaagag cacaaacctc gtgaagaaca agtgcgtgaa cttcaacttc 1620

aacggcctca caggcacagg cgtgctcacc gagtctaaca agaagttcct ccctttccag 1680

cagttcggcc gcgacattgc cgacaccacc gacgccgtgc gggaccctca gacactggaa 1740

attctcgaca tcaccccttg cagcttcggc ggcgtgtccg tgatcacccc aggcacaaac 1800

acatctaacc aggtggccgt gctgtaccag ggcgtgaact gcaccgaggt gccagtggcc 1860

atccacgccg accagctcac cccaacatgg agggtgtaca gcacaggctc taacgtgttc 1920

cagacccggg ccggctgcct cattggcgcc gagtacgtga acaactctta cgagtgcgac 1980

atccctattg gcgccggcat ttgcgcctct taccagaccc agacaaagtc tcaccggaga 2040

gcccggtctg tggcctctca gagcattatt gcctacacca tgtctctggg cgccgagaac 2100

ctcgtggcct actctaacaa ctctattgcc atccctacaa acttcacaat ttctgtgacc 2160

accgagattc tcccagtgtc tatgaccaag acatctgtgg actgcaccat gtacatttgc 2220

ggcgactcca ccgagtgctc taacctcctg ctccagtacg gctctttctg cacccagctc 2280

aagcgcgccc tgacaggcat cgccgtggag caggacaaga acacccagga ggtgttcgcc 2340

caggtgaagc agatttacaa gaccccccca attaagtact tcggcggctt caacttctct 2400

cagattctcc ccgacccatc caagcctagc aagcggtcct tcattgagga cctcctgttc 2460

aacaaggtga cactggccga cgccggcttc attaagcagt acggcgactg cctgggcgac 2520

attgccgccc gggacctgat ttgcgcccag aagttcaacg gcctcacagt gctcccccca 2580

ctgctcaccg acgagatgat tgcccagtac acatctgccc tcctggccgg cacaattaca 2640

tctggctgga ccttcggcgc cggcgccgcc ctgcagatcc ctttcgccat gcagatggcc 2700

taccgcttca acggcatcgg cgtgacacag aacgtgctgt acgagaacca gaagctgatc 2760

gccaaccagt tcaacagcgc cattggcaag attcaggact ctctgagcag cacagccagc 2820

gccctgggca agctgcagga cgtggtgaac cacaacgccc aggccctgaa cacactggtg 2880

aagcagctgt cttctaagtt cggcgccatt agcagcgtgc tgaacgacat tctgtcgcgg 2940

ctggacaagg tggaggccga ggtgcagatt gacaggctca tcacaggcag actgcagtct 3000

ctgcagacat acgtgaccca gcagctgatt agagccgccg agattagagc ctccgccaac 3060

ctggccgcca ccaagatgag cgagtgcgtg ctcggccagt ctaagcgggt ggacttctgc 3120

ggcaagggct accacctcat gtctttccct cagtccgccc ctcacggcgt ggtgttcctc 3180

cacgtgacat acgtgcccgc ccaggagaag aacttcacca cagcccccgc catttgccac 3240

gacggcaagg cccacttccc tagggagggc gtgttcgtgt ctaacggcac ccactggttc 3300

gtgacccagc ggaacttcta cgagcctcag attattacca cagacaacac attcgtgagc 3360

ggcaactgcg acgtggtgat tggcattgtg aacaacacag tgtacgaccc actgcagcct 3420

gagttggact ctttcaagga ggaactcgac aagtacttca agaaccacac atctcctgac 3480

gtggacctgg gcgacattag cggcattaac gcctctgtgg tgaacattca gaaggagatt 3540

gacagactga acgaggtggc caagaacctg aacgagtctc tcattgacct gcaggagctg 3600

ggcaagtacg agcagtacat taagtggcct tggtacattt ggctgggctt cattgccggc 3660

ctgatcgcca ttgtgatggt gaccatcatg ctgtgctgca tgacatcttg ctgcagctgc 3720

ctgaagggct gctgctcttg cggctcttgc tgcaag 3756

<210> 25

<211> 3747

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 25

atgttcgtgt tcctggtgct cctgcccctc gtgagctctc agtgcgtgaa cctgaccacc 60

cggacacagc tgccacctgc ctacaccaac tctttcacaa gaggcgtgta ctaccccgac 120

aaggtgttcc ggagcagcgt gctgcacagc acacaggatc tgttcctgcc cttcttcagc 180

aacgtgacct ggttccacgt gatcagcggc accaacggaa caaaaagatt tgacaacccc 240

gtgctgcctt ttaacgatgg cgtctacttc gcctccaccg agaagagcaa catcatccgc 300

ggctggatct tcggtacaac cctggattcc aagacccaga gcctgctgat cgtgaacaat 360

gccacaaacg tggtgatcaa ggtgtgtgag ttccagttct gtaacgaccc ttttctggga 420

cacaagaata acaagagctg gatggaaagc gagttccgag tgtactccag cgccaacaac 480

tgcactttcg agtacgtgag ccagcctttc ctgatggacc tggaaggcaa gcagggaaat 540

ttcaagaacc tgcgggagtt cgtgtttaag aacattgatg gctactttaa gatctacagc 600

aagcacaccc caatcatcgt gcgggacctg cctcaaggct tcagcgccct cgaacctctg 660

gtggacctgc ccatcggaat caacatcaca cggtttcaga ccctgctggc cctgcatagg 720

agctacctga cacctggcga cagcagctcc ggctggacag ccggagctgc cgcttattac 780

gttggctacc tgcagcctcg tacattcctg cttaagtata atgagaatgg cacaatcacc 840

gacgccgtgg actgcgccct ggaccccctg tctgagacaa aatgcaccct gaagtctttc 900

accgtggaaa agggcatcta ccagacctct aacttccgcg tccagcctac cgagtccatc 960

gtccggttcc ctaacataac caacctgtgc cctttcgacg aggtgtttaa cgccaccaga 1020

ttcgcttctg tgtacgcctg gaacagaaag agaatcagca attgtgtggc tgactacagc 1080

gtgctctaca actttgcccc ttttttcaca ttcaagtgct acggagtgag ccctacaaag 1140

ctgaacgacc tgtgcttcac caacgtgtac gccgacagct ttgttatccg gggcaatgag 1200

gtgagacaga tcgcccctgg acagaccgga aacatcgccg attacaacta caaactgcca 1260

gatgacttca ccggctgcgt gatcgcctgg aactccaaca agctggactc taaggtgagc 1320

ggcaattaca actacctgta cagactgttt cggaagagca acctgaagcc tttcgagaga 1380

gatataagca ccgagatcta ccaggctggc aataaacctt gcaacggcgt tgccggcttc 1440

aactgctact tccctctgag aagctacggc tttaggccca cctacggcgt gggccaccag 1500

ccctaccggg tggtggtgct gagcttcgag ctgctgcacg cccccgcaac cgtgtgcggc 1560

cctaagaaat ctacaaatct cgtgaaaaat aagtgcgtca acttcaactt caatggcctg 1620

accggcacgg gtgtactgac cgagtctaac aagaaattcc tgcccttcca acagttcggc 1680

agagacatcg ccgacaccac cgatgccgtg cgggacccac aaacccttga gatcctggat 1740

atcacacctt gtagttttgg cggcgtgtct gtcatcaccc ctggcaccaa cacctctaac 1800

caagtggccg tcctctacca gggcgttaat tgcaccgagg tccctgtggc aatccacgcc 1860

gaccagctga cccccacatg gagagtgtac agcacaggca gcaacgtgtt ccaaacaaga 1920

gccggctgcc tgatcggcgc tgaatacgtg aataacagct acgagtgcga catccccatc 1980

ggggctggga tctgcgccag ctaccagacc cagaccaaaa gccacagaag agcccggagc 2040

gttgccagcc agtcaatcat cgcctacacc atgagcctcg gcgctgagaa cagcgtggcc 2100

tattccaaca atagtatcgc catccctacc aatttcacca tctcggtgac caccgaaatc 2160

ctgcctgtga gtatgaccaa aacatcagtg gactgcacca tgtacatctg cggcgatagc 2220

accgagtgca gcaacctgct gctgcagtac gggagcttct gcacccaact gaagcgcgct 2280

ctgaccggca tcgctgtgga acaggataag aacacacagg aggtgttcgc ccaggtgaag 2340

cagatctaca agacgcctcc tatcaagtac ttcggcggct tcaacttttc tcagatcctg 2400

cctgacccct caaagcccag caagcggtcc ttcatcgagg acctgctctt taacaaggtg 2460

acgctggccg acgctggctt catcaaacag tatggggatt gcctgggcga catcgccgcc 2520

agagacctga tttgtgccca gaagttcaac ggcctgaccg tcctccctcc tctgctgaca 2580

gacgaaatga tcgcccagta cacaagcgct ctgctggccg gcacaatcac tagcggctgg 2640

accttcggcg ccggagccgc tctgcaaatc cctttcgcca tgcagatggc ctacagattc 2700

aacggcattg gtgttaccca gaacgtgctg tatgagaacc agaagctgat cgccaaccag 2760

tttaatagcg ccatcggaaa gatccaagac tctctgagca gcaccgccag cgccttagga 2820

aagctgcagg acgtggtgaa ccacaacgcc caggccctga atacactggt gaagcagctg 2880

agctccaagt tcggcgccat ctcatctgtc cttaacgaca ttctgagtag actggacaag 2940

gtggaagccg aagtgcagat cgacagactg atcaccggca gactgcaaag cctgcagaca 3000

tatgtgaccc agcagctgat cagagcggcc gagatcagag ccagcgctaa tctggctgcc 3060

acaaagatgt ccgaatgcgt gctcggccag tccaagagag tggatttctg cggcaaaggc 3120

taccacctga tgagcttccc ccagagcgcc cctcacggcg tggtgtttct gcatgtgacc 3180

tacgtgcctg ctcaggaaaa gaacttcaca acagctcctg ccatctgtca cgacggcaag 3240

gcccacttcc ccagagaggg cgtattcgtg tctaacggca cccactggtt cgtgacccag 3300

agaaacttct acgagcctca gatcatcaca accgacaaca ccttcgtgag cggcaactgt 3360

gatgtggtga tcggcatcgt gaacaacacc gtttacgacc ccttacagcc tgagctggat 3420

tctttcaagg aagaactgga taaatacttc aagaatcaca caagtcccga cgtggaccta 3480

ggggacatct ctggcataaa cgcctccgtc gtgaacatcc agaaagaaat cgatagactg 3540

aacgaagtgg ccaagaacct gaacgagagc ctgatcgacc tgcaggagct gggcaaatac 3600

gagcagtaca tcaagtggcc ttggtacatc tggctgggct tcatcgccgg actgatcgcc 3660

atcgtgatgg tgaccatcat gctgtgttgc atgaccagct gctgcagctg cctgaaggga 3720

tgttgctctt gtggctcatg ctgtaaa 3747

<210> 26

<211> 3750

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 合成的

<400> 26

atgttcgtgt tcctcgtgct cctgcctctg gtgtctagcc agtgcgtgaa cctgatcaca 60

cggacccaga gctacacaaa ctctttcacc cggggcgtgt actaccccga caaggtgttc 120

cggtctagcg tgctccactc tacacaggac ctgttcctcc ctttcttcag caacgtgaca 180

tggttccacg ccatctctgg cacaaacggc acaaagcggt tcgacaaccc cgtgctccct 240

ttcaacgacg gcgtgtactt cgccagcacc gagaagtcta acattatccg gggctggatt 300

ttcggcacca cactcgactc taagacacag tccctcctga ttgtgaacaa cgccacaaac 360

gtggtgatta aggtgtgcga gttccagttc tgcaacgacc ctttcctgga cgtgtactac 420

cacaagaaca acaagtcttg gatggagtct gagttcagag tgtactctag cgccaacaac 480

tgcaccttcg agtacgtgtc ccagcctttc ctcatggacc tggagggcaa gcagggcaac 540

ttcaagaacc tgagagagtt cgtgttcaag aacattgacg gctacttcaa gatttactct 600

aagcacaccc caattaacct cggcagggac ctccctcagg gcttctccgc cttagaacca 660

ctggtggacc tccctattgg cattaacatc acacgcttcc agacactgct cgccctccac 720

cggtcttacc tgaccccagg cgactctagc tctggctgga cagccggcgc cgccgcctac 780

tacgtgggct acctgcagcc taggaccttc ctcctgaagt acaacgagaa cggcacaatt 840

accgacgccg tggactgcgc cctggaccca ctgtccgaga caaagtgcac actgaagtcc 900

ttcacagtgg agaagggcat ttaccagaca tctaacttcc gggtgcagcc tacagagtct 960

attgtgcggt tcccaaacat cacaaacctg tgccctttcg acgaggtgtt caacgccacc 1020

cggttcgcct ctgtgtacgc ctggaaccgg aagcggatct ctaactgcgt ggccgactac 1080

tccgtgctgt acaacttcgc ccccttcttc gccttcaagt gctacggcgt gtcccctaca 1140

aagctgaacg acctgtgctt caccaacgtg tacgccgact ctttcgtgat tagaggcaac 1200

gaggtgagcc agattgcccc cggccagaca ggcaacatcg ccgactacaa ctacaagctg 1260

cccgacgact tcacaggctg cgtgatcgcc tggaactcta acaagctgga ctctaaggtg 1320

ggcggcaact acaactaccg gtacagactg ttccggaagt ctaacctgaa gccattcgag 1380

agggacatta gcaccgagat ttaccaggcc ggcaacaagc catgcaacgg cgtggccggc 1440

gtgaactgct acttcccact gcagtcctac ggcttccggc ctacatacgg cgtgggccac 1500

cagccttacc gggtggtggt gctgtctttc gagctgctcc acgcccccgc cacagtgtgc 1560

ggcccaaaga agagcacaaa cctcgtgaag aacaagtgcg tgaacttcaa cttcaacggc 1620

ctcacaggca caggcgtgct caccgagtct aacaagaagt tcctcccttt ccagcagttc 1680

ggccgcgaca ttgccgacac caccgacgcc gtgcgggacc ctcagacact ggaaattctc 1740

gacatcaccc cttgcagctt cggcggcgtg tccgtgatca ccccaggcac aaacacatct 1800

aaccaggtgg ccgtgctgta ccagggcgtg aactgcaccg aggtgccagt ggccatccac 1860

gccgaccagc tcaccccaac atggagggtg tacagcacag gctctaacgt gttccagacc 1920

cgggccggct gcctcattgg cgccgagtac gtgaacaact cttacgagtg cgacatccct 1980

attggcgccg gcatttgcgc ctcttaccag acccagacaa agtctcaccg gagagcccgg 2040

tctgtggcct ctcagagcat tattgcctac accatgtctc tgggcgccga gaactctgtg 2100

gcctactcta acaactctat tgccatccct acaaacttca caatttctgt gaccaccgag 2160

attctcccag tgtctatgac caagacatct gtggactgca ccatgtacat ttgcggcgac 2220

tccaccgagt gctctaacct cctgctccag tacggctctt tctgcaccca gctcaagcgc 2280

gccctgacag gcatcgccgt ggagcaggac aagaacaccc aggaggtgtt cgcccaggtg 2340

aagcagattt acaagacccc cccaattaag tacttcggcg gcttcaactt ctctcagatt 2400

ctccccgacc catccaagcc tagcaagcgg tccttcattg aggacctcct gttcaacaag 2460

gtgacactgg ccgacgccgg cttcattaag cagtacggcg actgcctggg cgacattgcc 2520

gcccgggacc tgatttgcgc ccagaagttc aacggcctca cagtgctccc cccactgctc 2580

accgacgaga tgattgccca gtacacatct gccctcctgg ccggcacaat tacatctggc 2640

tggaccttcg gcgccggcgc cgccctgcag atccctttcg ccatgcagat ggcctaccgc 2700

ttcaacggca tcggcgtgac acagaacgtg ctgtacgaga accagaagct gatcgccaac 2760

cagttcaaca gcgccattgg caagattcag gactctctga gcagcacagc cagcgccctg 2820

ggcaagctgc aggacgtggt gaaccacaac gcccaggccc tgaacacact ggtgaagcag 2880

ctgtcttcta agttcggcgc cattagcagc gtgctgaacg acattctgtc gcggctggac 2940

aaggtggagg ccgaggtgca gattgacagg ctcatcacag gcagactgca gtctctgcag 3000

acatacgtga cccagcagct gattagagcc gccgagatta gagcctccgc caacctggcc 3060

gccaccaaga tgagcgagtg cgtgctcggc cagtctaagc gggtggactt ctgcggcaag 3120

ggctaccacc tcatgtcttt ccctcagtcc gcccctcacg gcgtggtgtt cctccacgtg 3180

acatacgtgc ccgcccagga gaagaacttc accacagccc ccgccatttg ccacgacggc 3240

aaggcccact tccctaggga gggcgtgttc gtgtctaacg gcacccactg gttcgtgacc 3300

cagcggaact tctacgagcc tcagattatt accacagaca acacattcgt gagcggcaac 3360

tgcgacgtgg tgattggcat tgtgaacaac acagtgtacg acccactgca gcctgagttg 3420

gactctttca aggaggaact cgacaagtac ttcaagaacc acacatctcc tgacgtggac 3480

ctgggcgaca ttagcggcat taacgcctct gtggtgaaca ttcagaagga gattgacaga 3540

ctgaacgagg tggccaagaa cctgaacgag tctctcattg acctgcagga gctgggcaag 3600

tacgagcagt acattaagtg gccttggtac atttggctgg gcttcattgc cggcctgatc 3660

gccattgtga tggtgaccat catgctgtgc tgcatgacat cttgctgcag ctgcctgaag 3720

ggctgctgct cttgcggctc ttgctgcaag 3750

Claims (18)

1.一种新型冠状病毒的重组嵌合抗原肽，其特征在于，所述重组嵌合抗原具有如式(I)所示结构的氨基酸序列：

(A-B)-C₁-(A-B’)-C₂-(A-B”)

(I)

式(I)中：

A-B表示新型冠状病毒Delta变异株S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

A-B’表示新型冠状病毒Omicron变异株BA.2亚型S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

A-B”表示新型冠状病毒Omicron变异株BA.4/BA.5亚型S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列，或与其具有至少90％，92％，95％，96％，97％，98％或99％同一性且与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

C₁和C₂相同或不同，各自独立地表示连接子(GGS)_n；其中，n＝0,1,2,3,4或5。

2.根据权利要求1所述的重组嵌合抗原肽，其特征在于，所述新型冠状病毒Delta变异株S蛋白RBD结构域的一部分为其全部氨基酸序列的至少70％、80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％；

和/或，所述新型冠状病毒Omicron变异株BA.2亚型S蛋白RBD结构域的一部分为其全部氨基酸序列的至少70％、80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％；

和/或，所述新型冠状病毒Omicron变异株BA.4/BA.5亚型S蛋白RBD结构域的一部分为其全部氨基酸序列的至少70％、80％、85％、90％、92％、95％、96％、97％、98％或99％；

和/或，n＝0,1,2或3。

3.根据权利要求1或2所述的重组嵌合抗原肽，其特征在于，所述新型冠状病毒Delta变异株S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，或者如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的、与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

和/或，所述新型冠状病毒Omicron变异株BA.2亚型S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，或者如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的、与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

和/或，所述新型冠状病毒Omicron变异株BA.4/BA.5亚型S蛋白RBD结构域或其一部分的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，或者如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的、与其具有相同或基本相同的免疫原性的氨基酸序列；

和/或，n＝0,1或2。

4.根据权利要求1-3任一项所述的重组嵌合抗原肽，其特征在于，A-B表示如SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列，A-B’表示如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，A-B”表示如SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列；

优选地，所述重组嵌合抗原肽具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

5.一种多核苷酸，其编码如权利要求1-4任一项所述的重组嵌合抗原肽。

6.根据权利要求5所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为DNA分子；

优选地，所述DNA分子具有如SEQ ID NO:5所示的DNA序列。

7.根据权利要求5所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为mRNA分子；

优选地，所述mRNA分子具有如SEQ ID NO:6所示的mRNA序列。

8.一种核酸构建体，其包含如权利要求5-7任一项所述的多核苷酸，以及任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。

9.一种表达载体，其包含如权利要求8所述的核酸构建体。

10.一种宿主细胞，其中转化或转染有如权利要求5-7任一项所述的多核苷酸、如权利要求8所述的核酸构建体或如权利要求9所述的表达载体。

11.如权利要求1-4任一项所述的重组嵌合抗原肽、如权利要求5-7任一项所述的多核苷酸、如权利要求8所述的核酸构建体、如权利要求9所述的表达载体或如权利要求10所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗新型冠状病毒感染的疫苗中的应用；

优选地，所述新型冠状病毒为选自以下的一种或多种：SARS-CoV-2原始毒株，SARS-CoV-2变异毒株Alpha(B.1.1.7)、Beta(B.1.351)、Gamma(P.1)、Kappa(B.1.617.1)、Delta(B.1.617.2)、Omicron亚型BA.1、BA.1.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4、BA.5；

优选地，所述疫苗用于单独免疫或者与其他类型的新型冠状病毒疫苗进行序贯免疫；进一步优选地，所述其他类型的新型冠状病毒疫苗为灭活疫苗。

12.一种疫苗或免疫原性组合物，其包含如权利要求1-4任一项所述的重组嵌合抗原肽、如权利要求5-7任一项所述的多核苷酸、如权利要求8所述的核酸构建体、如权利要求9所述的表达载体或如权利要求10所述的宿主细胞，以及生理学可接受的媒介物、佐剂、赋形剂、载体和/或稀释剂。

13.根据权利要求12所述的疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒重组蛋白疫苗，其包括如权利要求1-4任一项所述的重组嵌合抗原肽和佐剂；

可选地，所述佐剂为选自以下佐剂中的一种或多种：铝佐剂、MF59佐剂和类MF59佐剂。

14.根据权利要求12所述的疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒DNA疫苗，所述DNA疫苗包括：

(i)真核表达载体；和

(ii)构建入所述真核表达载体中的、编码如式(I)所示结构的重组嵌合抗原肽的DNA序列，优选为如SEQ ID NO:5所示的DNA序列；

优选地，所述真核表达载体选自pGX0001、pVAX1、pCAGGS和pcDNA系列载体。

15.根据权利要求12所述的疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒mRNA疫苗，所述mRNA疫苗包括：

(I)编码如式(I)所示结构的重组嵌合抗原肽的mRNA序列，优选为如SEQ ID NO:6所示的mRNA序列；和

(II)脂质纳米颗粒。

16.根据权利要求12所述的疫苗或免疫原性组合物，其为新型冠状病毒-病毒载体疫苗，其包括：

(1)病毒骨架载体；和

(2)构建入所述病毒骨架载体中的、编码如式(I)所示结构的重组嵌合抗原肽的DNA序列，优选为如SEQ ID NO:5所示的DNA序列；

可选地，所述病毒骨架载体选自以下病毒载体中的一种或几种：腺病毒载体、痘病毒载体、流感病毒载体、腺相关病毒载体。

17.根据权利要求12-16任一项所述的疫苗或免疫原性组合物，其特征在于，所述疫苗或免疫原性组合物为鼻喷剂、口服制剂、栓剂或胃肠外制剂的形式；

优选地，所述鼻喷剂选自气雾剂、喷雾剂和粉雾剂；

优选地，所述口服制剂选自片剂、粉末剂、丸剂、散剂、颗粒剂、细粒剂、软/硬胶囊剂、薄膜包衣剂、小丸剂、舌下片和膏剂；

优选地，所述胃肠外制剂为经皮剂、软膏剂、硬膏剂、外用液剂、可注射或可推注制剂。

18.一种试剂盒，其包括如权利要求12-17任一项所述的疫苗或免疫原性组合物，以及任选地其他类型的新型冠状病毒疫苗，所述疫苗或免疫原性组合物与所述其他类型的新型冠状病毒疫苗单独包装；

优选地，所述其他类型的新型冠状病毒疫苗为新型冠状病毒灭活疫苗。

Images