CN115184507A - 一种多肽中n,n-二异丙基碳二亚胺和哌啶的检测方法 - Google Patents
一种多肽中n,n-二异丙基碳二亚胺和哌啶的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种多肽中N,N‑二异丙基碳二亚胺和哌啶的检测方法。采用气相色谱法，通过选择适当的色谱柱和检测器，设计合理的升温程序，建立了一套操作简单、定量准确并且实用的定量分析方法，能够准确快速的同时检测样品中N,N‑二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量，特别是醋酸西曲瑞克产品中N,N‑二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量，克服了现有技术的不足，保证了用药安全，具有较大的积极进步效果和实际应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种多肽中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的检测方法。
背景技术
醋酸西曲瑞克是德国ASTAMEDICA公司研制的一种促性腺激素释放激素(LHRH)拮抗剂，能控制卵巢的刺激作用，预防不成熟卵泡过早排出，帮助受孕。临床上对卵巢癌、前列腺癌、子宫肌瘤等疾病有较好疗效；且对良性前列腺肥大和卵巢过度刺激综合征有预防和改善作用。因此，醋酸西曲瑞克在临床具有不可替代性，具有很高的开发价值。
醋酸西曲瑞克在合成过程中使用到N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶等有机溶剂。N,N-二异丙基碳二亚胺在欧洲药典给出的基因毒性杂质之警示结构一文中明确指出了N,N-二异丙基碳二亚胺具有基因毒性杂质警示结构，是一个潜在的基因毒性杂质，在药品中是要严格控制其残留量。根据“药品注册的国际技术要求(ICH)”和《中国药典》(2020年版四部)关于药品中有机溶剂残留量的规定，哌啶为管制毒性药品，应按药品生产品质量管理规范(GMP)或其他质量要求加以限制使用。
目前，各国药典中均未收载N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的同时测定的有效方法。对于N,N-二异丙基碳二亚胺的检测方法，相关文献如CN106153748A提供了一种测定N,N-二异丙基碳二亚胺的方法，采用液质联用的方式进行测定，该方法需要购买价格高昂的质谱，对于大多数企业而言，成本较高，实用性不强；CN113092646A提供了一种多肽中测定N,N-二异丙基碳二亚胺含量的气相分析方法，该方法主要检测胸腺法新中N，N-二异丙基碳二亚胺的含量，该方法中溶剂含水，而N,N-二异丙基碳二亚胺遇水不稳定，样品需要临用新配，操作繁琐，对于醋酸西曲瑞克中N,N-二异丙基碳二亚胺的测定不实用。对于哌啶的检测方法，相关文献如CN107860828A公开了一种测定原料药中哌啶残留量的高灵敏度的方法，采用液相色谱法，使用紫外检测器测定样品中哌啶的残留量，方法中需进行衍生化反应，方法较复杂，不容易操作；CN104297404A公开了一种用于测定醋酸格拉替雷样品中哌啶含量的方法，所用溶剂为有机碱溶剂，含有一定比例的水，不适用于N,N-二异丙基碳二亚胺的检测；CN113533610A提供了一种测定原料药中哌啶残留的检测方法，该方法样品用量为400mg/ml，样品消耗量较大，成本较高。上述现有技术均无法实现N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的同时测定。
因此，针对上述问题，有必要进行深入研究，建立一套操作简单、定量准确并且实用的定量分析方法，以同时测定多肽产品中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量，特别是醋酸西曲瑞克产品中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量，这有助于提高用药安全性，减少患者用药风险。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多肽中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的检测方法。
本发明分析方法专属性强，灵敏度高，重复性良好，能够准确快速的同时检测样品中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量，特别是用于醋酸西曲瑞克，克服了现有技术的不足，保证了用药安全。
本发明主要是通过如下技术方案实现的：
本发明提供一种多肽中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的检测方法，是采用气相色谱分析法同时检测醋酸西曲瑞克中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量，所述检测方法包括以下步骤：
以DBU-二甲基亚砜为稀释剂溶解醋酸西曲瑞克，得供试品溶液；
以DBU-二甲基亚砜为稀释剂分别溶解N,N-二异丙基碳二亚胺对照品和哌啶对照品，得对照品溶液；
采用非极性固定相色谱柱或性质相同、相似的其他色谱柱，采用柱温梯度升温方法，使用气相色谱仪检测所述供试品溶液中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量；
其中，柱温梯度升温方法：以30～50℃为初始温度，保持5～10分钟，后以1～5℃/min的速率升温至90～120℃，再以30～60℃/min的速率升温至240～260℃，保持5～10分钟。
本发明所述检测方法中，所述稀释剂中DBU和二甲基亚砜体积比例为3：(5～10)；例如可以是3:5、3:6、3:7、3:8、3:9、3:10等；优选地，所述稀释剂中DBU和二甲基亚砜体积比例为3：7。
本发明所述检测方法中，所述供试品溶液中醋酸西曲瑞克的浓度为10～40mg/ml；例如可以是10mg/ml、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml；优选地，所述供试品溶液中醋酸西曲瑞克的浓度为30mg/ml。
本发明所述检测方法中，所述对照品溶液中N,N-二异丙基碳二亚胺浓度为9～60μg/ml，哌啶浓度为1.8～12μg/ml；优选地，所述对照品溶液中N,N-二异丙基碳二亚胺浓度为30μg/ml，哌啶浓度为6μg/ml；
本发明所述检测方法中，所述检测方法使用的色谱柱为Agilent CP-Volamine色谱柱，规格为30m×0.32mm×5μm。
本发明所述检测方法中，所述柱温梯度升温方法：以40℃为初始温度，保持10分钟，后以2℃/min的速率升温至110℃，再以50℃/min的速率升温至250℃，保持5分钟。
本发明所述检测方法中，所述检测器采用氢火焰离子化检测器，进样口温度为100～200℃，检测器温度为200～300℃；优选地，进样口温度为150℃，检测器温度为260℃。
本发明所述检测方法中，所述检测器载气为高纯度氮气或氦气，纯度为99.999％以上；载气流速为2.0ml/min。
本发明所述检测方法中，所述检测器的进样量为1ml～10ml；例如可以是1ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml等；优选地，进样量为1ml；所述检测器为分流进样，其中分流进样的分流比为1:1～1:5；优选地，分流进样的分流比为1:1。
作为本发明优选的技术方案，所述检测方法包括以下步骤：
(1)稀释剂配制：
量取DBU和二甲基亚砜，混合均匀即得。
(2)样品配制：
供试品溶液制备：用稀释剂溶解并稀释醋酸西曲瑞克，得供试品溶液；
对照品溶液制备：用稀释剂分别溶解并稀释N,N-二异丙基碳二亚胺对照品和哌啶对照品，得对照品溶液；
(3)色谱条件设置：
色谱柱：Agilent CP-Volamine色谱柱；
柱温梯度升温方法：以40℃为初始温度，保持10分钟，后以2℃/min的速率升温至110℃，再以50℃/min的速率升温至250℃，保持5分钟；
进样口温度：150℃
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为250～270℃
载气：氮气
载气流速：2.0ml/min
进样体积：1ml
分流比：1：1
(4)检测：
取稀释剂注入气相色谱仪，记录色谱图，色谱图中不得有其他峰干扰N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的测定；
取配制的对照品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图，色谱图中哌啶和N,N-二异丙基碳二亚胺依次出峰，两者之间的分离度应符合要求；
取配制的供试品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图；
(5)结果计算：
按外标法计算哌啶和N,N-二异丙基碳二亚胺含量。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明首次开发了同时测定多肽产品中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶含量的分析方法，能够准确快速的检测样品中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量，特别是用于醋酸西曲瑞克中的N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶含量的定量分析，具有较大的积极进步效果和实际应用价值；
(2)本发明分析方法专属性强，N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶具有良好的相关性，线性良好，经方法学验证，哌啶和N,N-二异丙基碳二亚胺线性相关系数分别达0.9981和0.9982，远高于气相色谱法0.990的线性相关系数要求。
(3)本发明分析方法准确度高，经方法学验证，醋酸西曲瑞克回收率达90％以上，保证了醋酸西曲瑞克的用药的安全，利于全面、准确、客观的评价产品质量。
(4)本发明分析方法重复性良好，经方法学验证，平行测定6次样品中哌啶和N,N-二异丙基碳二亚胺的加样回收率的相对标准偏差(RSD)分别为1.9％、0.9％。
(5)本发明通过大量实验优选出最佳的分析条件和供试品溶液制备方法，采用Agilent CP-Volamine色谱柱，设置合理的程序升温条件，基线平稳，稳定性好，杂质分离效果突出，方法灵敏度高，精密度、耐用性等均良好，且操作简单、省时高效；
附图说明
图1为本发明试验例1中对照品溶液色谱图。
图2为本发明试验例2中空白溶剂色谱图。
图3为本发明试验例2中供试品溶液色谱图。
图4为本发明试验例2中哌啶定位溶液色谱图。
图5为本发明试验例2中N,N-二异丙基碳二亚胺定位溶液色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
其中，电子天平购自METTLER TOLEDO公司，XSR205DU/A型；气相色谱仪购自Agilent公司，8890型；顶空加样器购自Agilent公司，7697A型；DBU购自aladdin公司，含量99.0％；二甲基亚砜购自Honeywell公司，批号F2104168，色谱级；N,N-二异丙基碳二亚胺购自aladdin公司，批号F2103121，含量98.0％；哌啶购自上海凌峰化学试剂有限公司，批号20201026，含量99.0％；色谱柱购自安捷伦公司，CP-Volamine(30m×0.32mm×5μm)；醋酸西曲瑞克来源南京锐志生物医药有限公司。说明书和权利要求书中所使用的缩写的含义列于下表中：
| 缩写及英文 | 含义 |
| DIC | N,N-二异丙基碳二亚胺 |
| DBU | 1,8-二氮杂环[5.4.0]十一碳-7-烯 |
| DMSO | 二甲基亚砜 |
| LOQ | 定量限 |
| LOD | 检测限 |
实施例1：
1.气相色谱条件
色谱柱：Agilent CP-Volamine色谱柱；
升温程序：
| 速率(℃/min) | 温度(℃) | 保持时间(min) |
| / | 40 | 10 |
| 2 | 110 | 0 |
| 50 | 250 | 5 |
进样口温度：150℃
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度260℃
载气：氮气
载气流速：2.0ml/min
进样体积：1ml
分流比：1：1
2.溶液配制
(1)溶剂(DBU：DMSO＝3：7)：量取DBU 300ml，DMSO 700ml，混合均匀即得。
(2)DIC定位溶液：精密称取DIC 750mg，置20ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置于20ml顶空瓶中，加盖，密封，即得。
(3)哌啶定位溶液：精密称取哌啶150mg，置20ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置于20ml顶空瓶中，加盖，密封，即得。
(4)对照品储备液：精密称取哌啶约150mg、DIC约750mg，置同一20ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置于25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)对照品溶液：精密量取对照品储备液1ml，置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置于20ml顶空瓶中，加盖，密封，即得。
(6)供试品溶液：精密称取醋酸西曲瑞克约30mg，置于20ml顶空瓶中，精密量取并加入溶剂1ml，摇匀使溶解，即得。
(7)定量限溶液(线性1溶液)：精密量取对照品储备液0.3ml，置于50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
(8)检测限溶液：精密量取定量限溶液3ml,置于10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
(9)线性2溶液：精密量取对照品储备液0.5ml，置于50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
(10)线性3溶液：精密量取对照品储备液0.8ml，置于50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
(11)线性4溶液：精密量取对照品储备液1.0ml，置于50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
(12)线性5溶液：精密量取对照品储备液1.5ml，置于50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
(13)线性6溶液：精密量取对照品储备液2.0ml，置于50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。
(14)低浓度准确度溶液：精密称取醋酸西曲瑞克约30mg，置于20ml顶空瓶中，精密加入线性1溶液1ml，加盖密封，振摇使溶解，摇匀，即得。平行配制3份。
(15)中浓度准确度溶液：精密称取醋酸西曲瑞克约30mg，置于20ml顶空瓶中，精密加入线性4溶液1ml，加盖密封，振摇使溶解，摇匀，即得。平行配制3份。
(16)高浓度准确度溶液：精密称取醋酸西曲瑞克约30mg，置于20ml顶空瓶中，精密加入线性5溶液1ml，加盖密封，振摇使溶解，摇匀，即得。平行配制3份。
(17)重复性溶液：配制同中浓度准确度溶液，平行配制6份。
3.检测及结果
试验过程中，将溶液样品采用顶空进样的方式，注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。
试验例1：系统适用性
取对照品溶液连续进样6针，DIC和哌啶峰面积的相对标准偏差(RSD)应不高于10％，保留时间的相对标准偏差(RSD)应小于2.0％。色谱图见附图1，结果如表1所示：
表1系统适用性试验结果
结果表明，6针对照品溶液中DIC和哌啶峰面积的相对标准偏差(RSD)均小于3.0％，保留时间的相对标准偏差(RSD)均小于0.1％，系统适用性良好。
试验例2：专属性
取空白溶剂、DIC定位溶液、哌啶定位溶液、供试品溶液各进样1针，空白溶剂和供试品溶液应不干扰DIC峰和哌啶峰的测定。色谱图见附图2～5，结果如表2所示:
表2专属性试验结果
| 溶液名称 | 保留时间(min) | 分离度 |
| 溶剂 | / | / |
| 供试品溶液 | / | / |
| 哌啶定位溶液 | 29.712 | / |
| DIC定位溶液 | 42.538 | / |
结果表明，供试品溶液和溶剂均不干扰DIC峰和哌啶峰的测定，专属性良好。
试验例3：检测限及定量限
取检测限溶液测定，DIC峰和哌啶峰信噪比S/N均应不低于3，取定量限溶液测定，DIC峰和哌啶峰信噪比S/N均应不低于10，结果如表3所示：
表3检测限及定量限试验结果
结果表明，哌啶的定量限浓度为1.830μg/ml，检测限浓度为0.5489μg/ml，定量限信噪比为23～26,检测限信噪比为7，符合要求；DIC的定量限浓度为9.004μg/ml，检测限浓度为2.701μg/ml，定量限信噪比为47～51,检测限信噪比为13，符合要求。
试验例4：线性
取各线性溶液各进样1针，哌啶和DIC相关系数应不低于0.990，y轴截距/100％浓度响应值应不高于25％。结果如表4所示：
表4线性试验结果
结果表明，哌啶在浓度1.830μg/ml～12.20μg/ml范围内，线性良好；DIC在浓度9.004μg/ml～60.03μg/ml范围内，线性良好。
试验例5：回收率
取对照品溶液6份、供试品溶液2份、低中高浓度回收率溶液进样3针，低浓度回收率应在70％～130％范围内，RSD应不高于20％；其他浓度回收率应在80％～120％范围内，RSD应不高于10％。结果如表5所示：
表5回收率试验结果
结果表明，每个浓度下哌啶回收率均在104.7％～110.8％范围内，回收率RSD不高于3.0％，符合要求；每个浓度下DIC回收率均在90.7％～99.2％范围内，回收率RSD不高于3.0％，符合要求。
试验例6：重复性
取对照品溶液6份、重复性溶液6份各进样1针，哌啶和DIC的含量RSD应不高于10％。结果如表6所示：
表6重复性试验结果
结果表明，重复性6份加标供试品溶液中各残留溶剂含量RSD不高于2％，重复性良好。
Claims (10)
1.一种多肽中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的检测方法，其特征在于，采用气相色谱分析法同时检测醋酸西曲瑞克中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量，所述检测方法包括以下步骤：
以DBU-二甲基亚砜为稀释剂溶解醋酸西曲瑞克，得供试品溶液；
以DBU-二甲基亚砜为稀释剂分别溶解N,N-二异丙基碳二亚胺对照品和哌啶对照品，得对照品溶液；
采用非极性固定相色谱柱或性质相同、相似的其他色谱柱，采用柱温梯度升温方法，使用气相色谱仪检测所述供试品溶液中N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的含量；
其中，柱温梯度升温方法：以30~50℃为初始温度，保持5~10分钟，后以1~5℃/min的速率升温至90~120℃，再以30~60℃/min的速率升温至240~260℃，保持5~10分钟。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述稀释剂中DBU和二甲基亚砜体积比例为3：（5~10）；优选地，所述稀释剂中DBU和二甲基亚砜体积比例为3：7。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液中醋酸西曲瑞克的浓度为10~40 mg/ml；优选地，所述供试品溶液中醋酸西曲瑞克的浓度为30 mg/ml。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述对照品溶液中N,N-二异丙基碳二亚胺浓度为9~60μg/ml，哌啶浓度为1.8~12μg/ml；优选地，所述对照品溶液中N,N-二异丙基碳二亚胺浓度为30μg/ml，哌啶浓度为6μg/ml。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法使用的色谱柱为Agilent CP-Volamine色谱柱，规格为30m×0.32mm×5μm。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述柱温梯度升温方法：以40℃为初始温度，保持10分钟，后以2℃/min的速率升温至110℃，再以50℃/min的速率升温至250℃，保持5分钟。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测器采用氢火焰离子化检测器，进样口温度为100~200℃，检测器温度为200~300℃；优选地，进样口温度为150℃，检测器温度为260℃。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测器载气为高纯度氮气或氦气，纯度为99.999％以上；载气流速为2.0ml/min。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测器的进样量为1ml～10ml，优选地，进样量为1ml；所述检测器为分流进样，其中分流进样的分流比为1:1~1:5；优选地，分流进样的分流比为1:1。
10.根据权利要求1~9任一项所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
（1）稀释剂配制：
量取DBU和二甲基亚砜，混合均匀即得；
（2）样品配制：
供试品溶液制备：用稀释剂溶解并稀释醋酸西曲瑞克，得供试品溶液；
对照品溶液制备：用稀释剂分别溶解并稀释N,N-二异丙基碳二亚胺对照品和哌啶对照品，得对照品溶液；
（3）色谱条件设置：
色谱柱：Agilent CP-Volamine色谱柱；
柱温梯度升温方法：以40℃为初始温度，保持10分钟，后以2℃/min的速率升温至110℃，再以50℃/min的速率升温至250℃，保持5分钟；
进样口温度：150℃
检测器：氢火焰离子化检测器（FID），检测器温度为250~270℃
载气：氮气
载气流速：2.0ml/min
进样体积：1ml
分流比：1：1
（4）检测：
取稀释剂注入气相色谱仪，记录色谱图，色谱图中不得有其他峰干扰N,N-二异丙基碳二亚胺和哌啶的测定；
取配制的对照品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图，色谱图中哌啶和N,N-二异丙基碳二亚胺依次出峰，两者之间的分离度应符合要求；
取配制的供试品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图；
（5）结果计算：
按外标法计算哌啶和N,N-二异丙基碳二亚胺含量。
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|---|---|---|---|---|
| US20210121517A1 (en) * | 2019-10-24 | 2021-04-29 | Sun Pharmaceutical Industries Limited | Stable parenteral dosage form of cetrorelix acetate |
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| CN113092646A (zh) * | 2021-04-07 | 2021-07-09 | 海南中和药业股份有限公司 | 一种多肽中测定n,n-二异丙基碳二亚胺含量的气相分析方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JERRY RYAN HOLDER ET AL: "Characterization of aliphatic, cyclic, and aromatic N-terminally ‘‘capped’’ His-D-Phe-Arg-Trp-NH2 tetrapeptides at the melanocortin receptors", EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY, vol. 462, 31 December 2003 (2003-12-31), pages 41 - 52, XP002263329, DOI: 10.1016/S0014-2999(03)01322-0 * |
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