CN115125144A - 一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法及其应用,本发明方法先配制混合电子供体培养基,混合均匀后,过滤;制备微纳米气泡水;将微纳米气泡水与培养基进行混合得到混合培养液;再向混合培养液中加入非光合固碳微生物,并培养得到非光合固碳微生物菌液;或向混合培养液中加入含有非光合固碳微生物的土样或水样,培养后得到非光合固碳微生物菌液。对比不同方法培养的非光合固碳微生物的固碳效率,筛选所需的非光合固碳微生物。本发明利用微纳米气泡,通过提高溶液中传质效率、调节氧化还原电位、增加溶液中无机碳含量或溶氧浓度,配合混合电子供体培养基提高非光合微生物固碳效率,并将其应用于筛选高效固碳微生物菌种。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法及其在筛选高效固碳微生物中的应用,属于微生物固定CO2领域。
背景技术
二氧化碳所引发的温室效应造成的气候变暖是当前全球面临的重大环境问题。2019年12 月,联合国世界气象组织发表年度评估报告,称气候变迁已超出人类适应能力,2019年以来全球气温较工业革命前,均温高出1.1摄氏度。IPCC在其《全球升温1.5℃》报告中提到将全球升温限制在1.5℃将减少对生态系统、人类健康和福祉的挑战性影响,从而更容易实现联合国可持续发展目标。而要实现这一目标,全球需在2050年实现二氧化碳净零排放和其他温室气体的深度减排。
生物法固定二氧化碳主要靠植物和自养微生物,而相比植物,微生物的特点在于环境适应性较强。尤其在一些不适合植物生长的特殊环境条件下,例如干旱贫瘠的沙质土壤和无光的土壤环境中,非光合自养微生物固碳的优势便显现出来了。因此,自养微生物固定二氧化碳对于整个生物圈的物质流和能量流都有着重要意义。
微纳米气泡,因其尺度小、水中存续时间长、界面Zeta电位高、自身增压溶解、破裂瞬间释放自由基量大的特性,近年来在环境修复领域受到广泛关注。根据文献报道,微纳米气泡在水中可以存续15天,且随着微纳米气泡尺度或者是直径越小,其越稳定,存续时间越长。目前微纳米气泡已被尝试应用于促进微生物生长,但主要是利用其增加液体中传质效率的特性,而有关微纳米气泡(特别是不同气源)促进非光合自养微生物的报道还未见。
考虑到微纳米气泡在液体中的特殊理化特性,配合相应培养条件,多种气源的微纳米气泡均可有效促进非光合自养微生物的生长。并且可以将这一方法应用于筛选高效的固碳微生物上,进而有利于增强非光合固碳微生物在实际应用中潜在的经济效益和社会效益。
发明内容
为了解决现有技术问题,本发明的目的在于克服已有技术存在的不足,提供一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法及其应用,利用微纳米气泡,通过提高溶液中传质效率、调节氧化还原电位、增加溶液中无机碳含量或溶氧浓度等,配合混合电子供体培养基提高非光合微生物固碳效率。并将其应用于筛选高效固碳微生物菌种。
为达到上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,包括如下步骤:
(1)混合电子供体培养基的制备:
配制混合电子供体培养基,混合均匀后,过220nm滤膜,进行灭菌和去除颗粒物杂质;按照组分在培养基中的含量进行计算,培养基配方为:4.6g/LNaNO2、5.0g/LNa2S2O3、12.5 g/LNa2S、5.0g/L(NH4)2SO4、1.0g/LKH2PO4、2.0g/L K2HPO4、0.2g/L MgSO4·7H2O、20g/LNaCl、0.01g/L CaCl2、0.01.g/LFeSO4·7H2O、3.4μg/L Na2MoO4·2H2O、0.8μg/L H3BO3、2.0μg/L ZnSO4·7H2O、2.0μg/L MnSO4·5H2O、14.0μg/L CuSO4·5H2O、2.0μg/L CoCl2·6H2O、2.0μg/L NiSO4·7H2O;
(2)制备微纳米气泡水,使微纳米气泡水中的气泡中值粒径尺寸为140-181nm;
(3)将在所述步骤(2)中得到的微纳米气泡水与在所述步骤(1)中得到的培养基进行混合得到混合培养液,使混合培养液中微纳米气泡数量为1×109个/L-3.6×1010个/L;
(4)利用如下任意一种方法培养非光合固碳微生物:
第一种方法:向在所述步骤(3)中得到的混合培养液中加入非光合固碳微生物,并培养,得到非光合固碳微生物菌液;
第二种方法:向在所述步骤(3)中得到的混合培养液中加入含有非光合固碳微生物的土样或水样,进行培养,得到非光合固碳微生物菌液。
优选地,在所述步骤(2)中,制备微纳米气泡水所采用的气源为空气、氧气、氮气及二氧化碳中至少一种。
优选地,在所述步骤(3)中,将微纳米气泡水与培养基按照体积比为1:4-19的比例进行混合,得到混合培养液。
优选地,在所述步骤(4)中,采用第一种方法,向混合培养液中接种非光合固碳微生物,在密封的血清瓶中培养至少96小时,得到非光合固碳微生物菌液。
优选地,在所述步骤(4)中,采用第二种方法,按照每1L混合培养液加至少25mL 土壤稀释液或至少25mL水样的比例,向混合培养液中加入土样或水样,然后继续培养至少 96小时,得到非光合固碳微生物。
优选地,土壤稀释液为土壤与无菌水制得的土壤含量不低于0.1g/L的稀释液。
优选地,在所述步骤(4)中,采用第二种方法时,水样为海水或包括海洋沉积物的水样。
一种本发明所述利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法的应用,用于筛选固碳微生物。
优选地,本发明利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法的应用,对比采用不同的方法培养的非光合固碳微生物的固碳效率,从而根据微生物的生物量筛选所需的非光合固碳微生物。
本发明与现有技术相比较,具有如下显而易见的突出实质性特点和显著优点:
1.本发明利用微纳米气泡可以提高溶液中的传质效率,而通过不同气源制备的微纳米可以分别达到提高(通过空气或氧气气泡)或降低(通过氮气或二氧化碳气泡)溶液中氧化还原电位;增加溶液中无机碳含量(通过空气或二氧化碳气泡);增加溶液中溶氧浓度等;
2.本发明经实验表明,使用微纳米气泡可有效提高微生物固碳效率,增效最高可达55%,可有效应用于微生物固定CO2的过程中,从而实现对CO2的资源化;
3.本发明经实验表明,通过微纳米气泡筛选得到的固碳微生物其固碳效率要比对照样高 22%-55%。表明该方法可在短时间内筛选获得高效的非光合固碳微生物,本发明还具有工艺简单、可操作性强和具有一定经济效益的优点。
具体实施方式
以下结合具体的实施例子对上述方案做进一步说明,本发明的优选实施例详述如下:
实施例一:
在本实施例中,一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,包括如下步骤:
(1)混合电子供体培养基的制备:
配制混合电子供体培养基,混合均匀后,过220nm滤膜,进行灭菌和去除颗粒物杂质;按照组分在培养基中的含量进行计算,培养基配方为:4.6g/LNaNO2、5.0g/LNa2S2O3、12.5 g/LNa2S、5.0g/L(NH4)2SO4、1.0g/LKH2PO4、2.0g/L K2HPO4、0.2g/L MgSO4·7H2O、20g/LNaCl、0.01g/L CaCl2、0.01.g/LFeSO4·7H2O、3.4μg/L Na2MoO4·2H2O、0.8μg/L H3BO3、2.0μg/L ZnSO4·7H2O、2.0μg/L MnSO4·5H2O、14.0μg/L CuSO4·5H2O、2.0μg/L CoCl2·6H2O、2.0μg/L NiSO4·7H2O;
(2)以空气作为气源制备微纳米气泡水,使微纳米气泡水中的气泡中值粒径尺寸为140 nm;
(3)将在所述步骤(2)中得到的微纳米气泡水与在所述步骤(1)中得到的培养基按照质量比为1:4的比例进行混合得到混合培养液,使混合培养液中微纳米气泡数量为3.6×1010个/L;
(4)向在所述步骤(3)中得到的混合培养液中接种非光合固碳微生物,在密封的血清瓶中培养96小时,瓶中气体组成为空气:二氧化碳的体积比为80:20,整个培养环境中唯一的碳源为二氧化碳,故微生物生长过程中,需固定CO2作为其碳源。
试验测试分析:
设置空白样,其制备方法基本与本实施例相同,特别之处在于,其它条件完全相同,仅没有加微纳米气泡。
以OD600的值来表征本实施例制备的微生物的生物量,培养后样品OD600值为0.376,而空白样OD600值为0.243。加了空气微纳米气泡后,微生物的生长量提高了55%。
实施例二:
本实施例与实施例一基本相同,特别之处在于:
在本实施例中,一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,包括如下步骤:
(1)混合电子供体培养基的制备:
配制混合电子供体培养基,混合均匀后,过220nm滤膜,进行灭菌和去除颗粒物杂质;按照组分在培养基中的含量进行计算,培养基配方为:4.6g/LNaNO2、5.0g/LNa2S2O3、12.5 g/LNa2S、5.0g/L(NH4)2SO4、1.0g/LKH2PO4、2.0g/L K2HPO4、0.2g/L MgSO4·7H2O、20g/LNaCl、0.01g/L CaCl2、0.01.g/LFeSO4·7H2O、3.4μg/L Na2MoO4·2H2O、0.8μg/L H3BO3、2.0μg/L ZnSO4·7H2O、2.0μg/L MnSO4·5H2O、14.0μg/L CuSO4·5H2O、2.0μg/L CoCl2·6H2O、2.0μg/L NiSO4·7H2O;
(2)以氮气作为气源制备微纳米气泡水,使微纳米气泡水中的气泡中值粒径尺寸为152 nm;
(3)将在所述步骤(2)中得到的微纳米气泡水与在所述步骤(1)中得到的培养基按照质量比为1:19的比例进行混合得到混合培养液,使混合培养液中微纳米气泡数量为1.0× 109个/L;
(4)向在所述步骤(3)中得到的混合培养液中接种非光合固碳微生物,在密封的血清瓶中培养96小时,瓶中气体组成为空气:二氧化碳的体积比为80:20,整个培养环境中唯一的碳源为二氧化碳,故微生物生长过程中,需固定CO2作为其碳源。
试验测试分析:
设置空白样,其制备方法基本与本实施例相同,特别之处在于,其它条件完全相同,仅没有加微纳米气泡。
以OD600的值来表征本实施例制备的微生物的生物量,培养后样品OD600值为0.238,而空白样OD600值为0.195。加了氮气微纳米气泡后,微生物的生长量提高了22%。
实施例三:
本实施例与上述实施例基本相同,特别之处在于:
在本实施例中,一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,包括如下步骤:
(1)混合电子供体培养基的制备:
配制混合电子供体培养基,混合均匀后,过220nm滤膜,进行灭菌和去除颗粒物杂质;按照组分在培养基中的含量进行计算,培养基配方为:4.6g/LNaNO2、5.0g/LNa2S2O3、12.5 g/LNa2S、5.0g/L(NH4)2SO4、1.0g/LKH2PO4、2.0g/L K2HPO4、0.2g/L MgSO4·7H2O、20g/LNaCl、0.01g/L CaCl2、0.01.g/LFeSO4·7H2O、3.4μg/L Na2MoO4·2H2O、0.8μg/L H3BO3、2.0μg/L ZnSO4·7H2O、2.0μg/L MnSO4·5H2O、14.0μg/L CuSO4·5H2O、2.0μg/L CoCl2·6H2O、2.0μg/L NiSO4·7H2O;
(2)以氧气作为气源制备微纳米气泡水,使微纳米气泡水中的气泡中值粒径尺寸为181 nm;
(3)将在所述步骤(2)中得到的微纳米气泡水与在所述步骤(1)中得到的培养基按照质量比为1:9的比例进行混合得到混合培养液,使混合培养液中微纳米气泡数量为2.7×1010个/L;
(4)向在所述步骤(3)中得到的混合培养液中接种非光合固碳微生物,在密封的血清瓶中培养96小时,瓶中气体组成为空气:二氧化碳的体积比为80:20,整个培养环境中唯一的碳源为二氧化碳,故微生物生长过程中,需固定CO2作为其碳源。
试验测试分析:
设置空白样,其制备方法基本与本实施例相同,特别之处在于,其它条件完全相同,仅没有加微纳米气泡。
以OD600的值来表征本实施例制备的微生物的生物量,培养后样品OD600值为0.332,而空白样OD600值为0.234。加了氧气微纳米气泡后,微生物的生长量提高了37%。
实施例四:
本实施例与上述实施例基本相同,特别之处在于:
在本实施例中,一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,包括如下步骤:
(1)混合电子供体培养基的制备:
配制混合电子供体培养基,混合均匀后,过220nm滤膜,进行灭菌和去除颗粒物杂质;按照组分在培养基中的含量进行计算,培养基配方为:4.6g/LNaNO2、5.0g/LNa2S2O3、12.5 g/LNa2S、5.0g/L(NH4)2SO4、1.0g/LKH2PO4、2.0g/L K2HPO4、0.2g/L MgSO4·7H2O、20g/LNaCl、0.01g/L CaCl2、0.01.g/LFeSO4·7H2O、3.4μg/L Na2MoO4·2H2O、0.8μg/L H3BO3、2.0μg/L ZnSO4·7H2O、2.0μg/L MnSO4·5H2O、14.0μg/L CuSO4·5H2O、2.0μg/L CoCl2·6H2O、2.0μg/L NiSO4·7H2O;
(2)以二氧化碳作为气源制备微纳米气泡水,使微纳米气泡水中的气泡中值粒径尺寸为161nm;
(3)将在所述步骤(2)中得到的微纳米气泡水与在所述步骤(1)中得到的培养基按照质量比为1:9的比例进行混合得到混合培养液,使混合培养液中微纳米气泡数量为2.7×1010个/L;
(4)按照每1L混合培养液加25mL土壤稀释液或25mL水样的比例,向混合培养液中加入土样或水样,然后继续培养96小时,得到非光合固碳微生物。
在所述步骤(4)中,加入量为:对于土样,每1L混合培养液加25mL土壤稀释液,土壤稀释液土壤与无菌水制得的0.1g/L的稀释液;对于水样,每1L混合培养液加25mL水样。在密封的血清瓶中培养96小时,瓶中气体组成为空气:二氧化碳的体积比为80:20,整个培养环境中唯一的碳源为二氧化碳,故微生物生长过程中,需固定CO2作为其碳源。水样为海水或包括海洋沉积物的水样,其中含有非光合固碳微生物。
试验测试分析:
设置空白样,其制备方法基本与本实施例相同,特别之处在于,其它条件完全相同,仅没有加微纳米气泡。
以OD600的值来表征本实施例制备的微生物的生物量,(1)经筛选培养后样品OD600值为0.176,而空白样OD600值为0.119。加了二氧化碳微纳米气泡后,微生物的生长量提高了48%。
实施例五:
在本实施例中,利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法的应用,对比上述实施例采用不同的方法培养的非光合固碳微生物的固碳效率,从而根据微生物的生物量筛选所需的非光合固碳微生物。其中实施例一加了微纳米气泡后,微生物的生长量提高了55%。实施例三加了微纳米气泡后,微生物的生长量提高了37%。实施例四加了空气微纳米气泡后,微生物的生长量提高了48%。实施例一、实施例三和实施例四加入微纳米气泡后,微生物的生长量更为明显。
以OD600的值来表征上述各实施例制备的微生物的生物量,实施例一培养后样品OD600值为0.376,实施例三培养后样品OD600值为0.332。可知实施例一和实施例三的非光合固碳微生物的密度更高。
对比采用不同的方法培养的非光合固碳微生物的固碳效率,从而根据微生物的生物量筛选所需的非光合固碳微生物,进而筛选高效固碳微生物,有利于增强非光合固碳微生物在实际应用中潜在的经济效益和社会效益。本实施例利用微纳米气泡,通过提高溶液中传质效率、调节氧化还原电位、增加溶液中无机碳含量或溶氧浓度等,配合混合电子供体培养基提高非光合微生物固碳效率。并将其应用于筛选高效固碳微生物菌种。
总之,本发明上述实施例利用微纳米气泡,通过提高溶液中传质效率、调节氧化还原电位、增加溶液中无机碳含量或溶氧浓度,配合混合电子供体培养基提高非光合微生物固碳效率,并将其应用于筛选高效固碳微生物菌种。
上面对本发明实施例进行了说明,但本发明不限于上述实施例,还可以根据本发明的发明创造的目的做出多种变化,凡依据本发明技术方案的精神实质和原理下做的改变、修饰、替代、组合或简化,均应为等效的置换方式,只要符合本发明的发明目的,只要不背离本发明的技术原理和发明构思,都属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)混合电子供体培养基的制备:
配制混合电子供体培养基,混合均匀后,过220nm滤膜,进行灭菌和去除颗粒物杂质;按照组分在培养基中的含量进行计算,培养基配方为:4.6g/LNaNO2、5.0g/LNa2S2O3、12.5g/LNa2S、5.0g/L(NH4)2SO4、1.0g/LKH2PO4、2.0g/L K2HPO4、0.2g/L MgSO4·7H2O、20g/LNaCl、0.01g/L CaCl2、0.01.g/LFeSO4·7H2O、3.4μg/L Na2MoO4·2H2O、0.8μg/L H3BO3、2.0μg/LZnSO4·7H2O、2.0μg/L MnSO4·5H2O、14.0μg/L CuSO4·5H2O、2.0μg/L CoCl2·6H2O、2.0μg/LNiSO4·7H2O;
(2)制备微纳米气泡水,使微纳米气泡水中的气泡中值粒径尺寸为140-181nm;
(3)将在所述步骤(2)中得到的微纳米气泡水与在所述步骤(1)中得到的培养基进行混合得到混合培养液,使混合培养液中微纳米气泡数量为1×109个/L-3.6×1010个/L;
(4)利用如下任意一种方法培养非光合固碳微生物:
第一种方法:向在所述步骤(3)中得到的混合培养液中加入非光合固碳微生物菌种,并培养,得到非光合固碳微生物菌液;
第二种方法:向在所述步骤(3)中得到的混合培养液中加入含有非光合固碳微生物的土样或水样,进行培养,得到非光合固碳微生物菌液。
2.根据权利要求1所述利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,其特征在于:在所述步骤(2)中,制备微纳米气泡水所采用的气源为空气、氧气、氮气及二氧化碳中至少一种。
3.根据权利要求1所述利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,其特征在于:在所述步骤(3)中,将微纳米气泡水与培养基按照体积比为1:4-19的比例进行混合,得到混合培养液。
4.根据权利要求1所述利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,其特征在于:在所述步骤(4)中,采用第一种方法,向混合培养液中接种非光合固碳微生物,在密封的血清瓶中培养至少96小时,得到非光合固碳微生物菌液。
5.根据权利要求1所述利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,其特征在于:在所述步骤(4)中,采用第二种方法,按照每1L混合培养液加至少25mL土壤稀释液或至少25mL水样的比例,向混合培养液中加入土样或水样,然后继续培养至少96小时,得到非光合固碳微生物。
6.根据权利要求5所述利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,其特征在于:土壤稀释液为土壤与无菌水制得的土壤含量不低于0.1g/L的稀释液。
7.根据权利要求5所述利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法,其特征在于:在所述步骤(4)中,采用第二种方法时,水样为海水或包括海洋沉积物的水样。
8.一种权利要求1所述利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法的应用,其特征在于:用于筛选固碳微生物菌种。
9.根据权利要求8所述利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法的应用,其特征在于:对比采用不同的方法培养的非光合固碳微生物的固碳效率,从而根据微生物的生物量筛选所需的非光合固碳微生物。
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CN202210910386.4A Pending CN115125144A (zh) | 2022-07-29 | 2022-07-29 | 一种利用微纳米气泡促进非光合固碳微生物生长的方法及其应用 |
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2022
- 2022-07-29 CN CN202210910386.4A patent/CN115125144A/zh active Pending
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