CN115109055A - 一种用于egfr降解的双功能化合物及其应用 - Google Patents

一种用于egfr降解的双功能化合物及其应用 Download PDF

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CN115109055A CN202210589326.7A CN202210589326A CN115109055A CN 115109055 A CN115109055 A CN 115109055A CN 202210589326 A CN202210589326 A CN 202210589326A CN 115109055 A CN115109055 A CN 115109055A
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Abstract

本申请提供一种用于EGFR降解的双功能化合物及其应用，双功能化合物或双功能化合物的对映异构体、非对映异构体、药学上可接受的盐、前药、同位素衍生物、溶剂化物，双功能化合物包括具有式I所示结构的化合物：其中，CRBN配体为与E3泛素连接酶非共价结合的基团，接头为与上式I中相邻苯环和CRBN配体通过共价键连接的基团；每个R1独立地选自卤素、羟基、C1‑C3烷氧基或氰基；n选自0、1、2或3。本申请提供的用于EGFR降解的双功能化合物及其应用，利用蛋白质靶向嵌合体(PROTACs)技术，将靶蛋白EGFR募集到E3泛素连接酶上，进而促进靶蛋白的降解，提高双功能化合物的降解活性。

Description

一种用于EGFR降解的双功能化合物及其应用
技术领域
本申请属于医药技术领域，特别是涉及一种双功能化合物及其应用，所述双功能化合物能够诱导突变型上皮生长因子受体(EGFR)的降解，降低其在细胞内的含量。本申请的化合物可以用于EGFR突变引起的相关肿瘤疾病的治疗。
背景技术
肺癌是全球发病率、死亡率最高的恶性肿瘤，根据世界癌症报告2018年的数据统计，全球每年新增肺癌患者约182.5万，死亡数约159.0万，均位列不同癌种的首位。东亚国家尤其是中国和日本，肺癌的发病率和死亡率均高于世界其他国家。
肺癌按照细胞类型分为非小细胞肺癌(NSCLC，85％)和小细胞肺癌(SCLC，15％)。目前，针对非小细胞肺癌的治疗主要以靶向治疗为主。上皮生长因子受体(EGFR)是上皮生长因子(EGF)的膜受体，它是一种跨膜受体蛋白，EGFR的突变主要以外显子19缺失和外显子21的突变(包括L858R和Del19，占比85％)为主，发生突变后， EGFR会异常激活，持续的促进肿瘤细胞的增殖，进而促进肿瘤的发生发展。EGFR突变是靶向治疗的主要驱动基因，全球非小细胞肺癌患者中EGFR突变频率为17％，亚裔人群更为敏感，突变频率约为40％。针对EGFR的突变开发了第一代靶向抑制剂，如吉非替尼(阿斯利康，2003年美国上市，2010年中国上市)，厄洛替尼(罗氏，2004 年美国上市，2012年中国上市)，埃克替尼(贝达，2011年中国上市)；第二代共价抑制剂，如阿法替尼(勃林格殷格翰，2013年美国上市，2017年中国上市)，达克替尼 (辉瑞，2018年美国上市，2019年中国上市)。在第一代或第二代抑制剂持续用药一年左右，会产生耐药性，其重要耐药机制是T790M突变(约50-70％)。第三代EGFR 抑制剂，如奥希替尼(阿斯利康，2015年美国上市，2017年中国上市)，可以有效克服T790M的突变耐药，但是大部分患者用药后仍然会产生耐药，耐药机制包括C797S (20-40％)。如果是顺式突变(T790M和C797S位于同一条DNA链，占比约85％)，则EGFR抑制剂单用或者联用均无效，这类患者面临无药可用的状态。如果是反式突变(T790M和C797S位于不同DNA链)，则可以使用第一代和第三代抑制剂联用，但是用药后易发生顺式突变，依旧面临无药可用的状态。因此，靶向EGFR的新疗法具有很大的临床需求。
蛋白质靶向嵌合体(Protein Targeting Chimeras,PROTACs)是一种双功能分子，其一端可以结合靶蛋白，另一端结合E3泛素连接酶(CRBN)，形成三元复合物，将靶蛋白进行泛素化标记。蛋白酶体会识别泛素化的靶蛋白，将其水解，降低靶蛋白的表达量，实现抑制其功能的目的。与传统的小分子抑制剂相比，PROTACs具有一定的优势：(1)不需要对靶蛋白有特别强的亲和力；(2)能够重复利用，可以降低给药剂量；(3)能够有效的克服小分子抑制剂的耐药问题等。
EGFR(Epidermal Growth Factor Receptor)是跨膜蛋白酪氨酸激酶erbB受体家族的一员。通过与其配体-例如表皮生长因子(EGF)的结合，EGFR在细胞膜上可以形成同源二聚体，或者与家族中其他的受体(比如erbB2，erbB3，或erbB4)形成异源二聚体。这些二聚体的形成，可引起EGFR细胞内关键的酪氨酸残基磷酸化，从而激活细胞内多个下游的信号通路。这些细胞内信号通路在细胞增殖、生存及抗凋亡中起重要作用。 EGFR信号传导通路失调，包括配体及受体的表达增高、EGFR基因扩增以及突变等，可促进细胞向恶性转化，并在肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移以及血管形成中起重要作用。因此EGFR被认为是抗癌药物开发的靶点。
EGFR除具有激酶功能外，还具有其它的非激酶功能，例如与肿瘤细胞外基质的金属蛋白酶有一定的关系，可以调节肿瘤微环境，同时，作为一种膜蛋白，其参与细胞间的相互作用。
因此，开发EGFR靶向降解剂，既可以抑制其激酶的功能，也能一定程度的调节肿瘤微环境，协同达到抑制肿瘤的目的。目前的EGFR降解剂面临活性较低，成药性较差的问题，需要开发新型的EGFR降解剂，以提高临床价值。
发明内容
本发明提供了一种用于EGFR降解的双功能化合物及其应用，利用蛋白质靶向嵌合体(PROTACs)技术，将靶蛋白EGFR募集到E3泛素连接酶上，进而促进靶蛋白的降解，提高双功能化合物的降解活性。
第一方面，本申请提供一种用于EGFR降解的双功能化合物，或所述双功能化合物的对映异构体、非对映异构体、药学上可接受的盐、前药、同位素衍生物、溶剂化物，所述双功能化合物包括具有式I所示结构的化合物：
Figure BDA0003664422910000031
其中，所述CRBN配体为与E3泛素连接酶非共价结合的基团，所述接头为与上式I中相邻苯环和CRBN配体通过共价键连接的基团；
每个R1独立地选自卤素、羟基、C1-C3烷氧基或氰基；n选自0、1、2或3。
在一些可行的实施方式中，每个R1独立地选自羟基、甲氧基、氟或氯；n选自0、 1或2。
在一些可行的实施方式中，所述接头选自式L1～式L4所示结构的基团：
Figure BDA0003664422910000032
其中，
Figure BDA0003664422910000033
表示与相邻原子的结合位点；
炔基或芳基与所述双功能化合物中的苯并内磺酰胺结构通过共价键连接；
Z2或碳链与所述双功能化合物中的所述CRBN配体通过共价键连接；
X1选自N或CH，X2不存在或选自O、S或NR2；R2选自H、C1-C3烷基；
Y选自CH或N；
Z1选自CH、C-OH或N，Z2选自CH或N；
m选自0、1、2、3、4、5或6。
在一些可行的实施方式中，X2选自O。
在一些可行的实施方式中，m选自0、1或2。
在一些可行的实施方式中，所述CRBN配体选自式D1或式D2所示结构的基团：
Figure BDA0003664422910000041
其中，X3选自C(O)或CH2，X4不存在或选自O、NH；
R3选自氢、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基或氰基。
在一些可行的实施方式中，X3选自C(O)。
在一些可行的实施方式中，R3选自氢、卤素或氰基。
在一些可行的实施方式中，所述的双功能化合物选自下列化合物中的任意一种：
2-(6-(4-((1-(2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酰基) 哌啶-4-基)氧基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺
2-(6-(4-(4-(2-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)- 哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-(3-氟苯基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(6-(4-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基) 哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(1-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基) 哌啶-4-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)- 哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-(5-氟-2-羟基苯基)-N-(噻唑-2-基) 乙酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑 -6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶 -4-基)吡啶酰胺；
N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4- 基)-5-((2-(1-(3-氟苯基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-1,1-二氧代-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)吡啶酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑 -6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基) 乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺；
5-((2-(1-(2,5-二氟苯基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-1,1-二氧代-2,3-二氢苯并[d] 异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基) 哌啶-4-基)吡啶酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑 -6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑 -6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶 -4-基)吡啶酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑 -6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基) 哌啶-4-基)吡啶酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑 -6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺。
第二方面，本申请提供根据上述第一方面所述的双功能化合物在制备药物中的应用。
在一些可行的实施方式中，所述药物选自用于调节突变型EGFR蛋白含量与功能的药物，优选为突变型EGFR的降解剂。
在一些可行的实施方式中，所述应用选自癌症或增值性疾病，所述癌症选自肺癌、肾细胞癌、皮肤癌、血液肿瘤、乳腺癌、胶质瘤、消化系统肿瘤、生殖系统肿瘤、淋巴瘤、神经系统肿瘤或头颈癌中的至少一种。
第三方面，本申请提供一种药物组合物，所述药物组合物包括上述第一方面所述的双功能化合物或其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、前药或溶剂化物，以及至少一种药学上可接受的载体、添加剂、助剂或赋形剂。
为了适应不同的给药方式，本发明的药物组合物可以制成多种剂型。具体地，本发明所述药物组合物的制剂形式可以是口服制剂或注射剂。
第四方面，本申请还提供一种制备双功能化合物的中间体的制备方法，所述制备方法包括以下反应路线A或B中的任意一种：
反应路线A:
Figure BDA0003664422910000061
反应路线B:
Figure BDA0003664422910000062
其中，每个R1独立地选自卤素、羟基、C1-C3烷氧基或氰基；n选自0、1、2或3； X1选自N或CH；
X2不存在或选自O、S或NR2，且R2选自H、C1-C3烷基；
Y选自CH或N。
本申请的技术方案至少具有以下有益的效果：
本申请提供的用于EGFR降解的双功能化合物及其应用，双功能化合物包含结合EGFR蛋白的部分，以及结合E3泛素连接酶CRBN的CRBN配体，两部分通过接头共价连接。该双功能化合物可以利用机体细胞内的泛素-蛋白酶体系统，将EGFR蛋白招募到E3泛素连接酶CRBN处，将EGFR蛋白泛素化，进而被蛋白酶体降解，降低肿瘤细胞内EGFR蛋白的表达量，可以用于治疗EGFR突变引起的相关的肿瘤性疾病。
具体实施方式
为更好地说明本申请，便于理解本申请的技术方案，下面对本申请进一步详细说明。应当明确，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的，而非旨在限制本发明。在本发明实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”、“所述”和“该”也旨在包括多数形式，除非上下文清楚地表示其它含义。
本发明的含义内，有如下使用术语：
“卤素”是指F、Cl、Br、I、At；
“C1-C3卤代烷基”是指具有1-3个碳原子的烷基链，可以是直链，也可以带支链，其中，烷基碳上的氢原子被至少一个卤素原子取代；
“C1-C3烷氧基”是指具有1-3个碳原子的烷基链，可以是直链，也可以带支链，通过氧原子与所述位置进行链接；
“前药”是指在生理条件下，在活体内通过酶催化进行的氧化、还原、水解等反应而转化为本发明化合物的衍生物。
“同位素衍生物”是指构成本发明化合物的结构中，含有一个或多个以非天然比例存在的同位素原子。例如氘(2H或D)，碳-13(13C)，氮-15(15N)。
“溶剂化物”是指本发明化合物与溶剂分子通过物理结合的形式形成溶剂络合物。该物理结合包含氢键结合。常规溶剂包含水、甲醇、乙醇、乙酸、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙腈等。式(I)化合物可以结晶形式制备且可呈溶剂化物形式(包括水合物形式)。
式(I)化合物的药学上可接受的盐，包含一个或多个碱性或酸性基团，特别是其药学上可以利用的盐。例如碱金属盐、碱土金属盐、铵盐。更精确的可以是钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或有机胺如乙胺、乙醇胺、三乙胺或氨基酸盐。本发明化合物可以与无机酸或有机酸形成被质子化的式(I)化合物，酸的实例包括盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、甲磺酸、乳酸、苹果酸、马来酸、酒石酸等以及本领域人员已知的其他酸。
“药物组合物”在用作药物时，是指本发明式(I)化合物以及其盐、同位素衍生物、前药、溶剂化物与其他具有或不具有生物活性物质组成的组合物，可以用于治疗或预防与EGFR相关的疾病。
下面分多个实施例对本申请实施例进行进一步的说明。其中，本申请实施例不限定于以下的具体实施例。在不变主权利的范围内，可以适当的进行变更实施。
一、中间体L1的制备:
Figure BDA0003664422910000081
步骤1：将式L1-SM01所示的化合物(2mmol)、式L1-SM02所示的化合物(3mmol)、四三苯基膦钯(0.1mmol)、碳酸钠(4mmol)溶于混合溶剂中得到混合液，其中，混合溶剂包括体积比为6:1的二氧六环和水；在氩气保护下，上述混合液100℃进行反应。液相色谱显示反应结束后，冷却至室温，旋蒸除去部分溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠进行干燥，过滤，采用减压蒸馏的方法将溶剂旋干得到粗产品，将粗产品通过柱层析进行纯化，得到中间体L1-A(1.37mmol，收率68.3％)；
步骤2：将中间体L1-A(1.37mmol)溶于乙酸乙酯，加入10％钯碳(100mg)，氢气条件下室温反应，液相色谱显示反应结束后，过滤，采用减压蒸馏的方法将溶剂旋干得中间体L1-B粗品；
步骤3：将步骤2中得到的中间体L1-B粗品溶于8mL二氯甲烷，加入等体积的三氟乙酸，室温反应，反应结束后，采用减压蒸馏的方法将溶剂旋干，得中间体L1-C (1.09mmol，综合收率80％)；
步骤4：将中间体L1-C(341mg，1mmol)、溴乙酸叔丁酯(1.5mmol)、N,N-二异丙基乙胺(2mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，室温反应。液相色谱显示反应结束后，加入30mL水，乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥，通过柱层析进行纯化，得到中间体L1-D(0.66mmol,收率66％)；
步骤5：将中间体L1-D(0.66mmol)溶于乙酸乙酯(8mL)，加入等体积的氯化氢 -乙酸乙酯溶液(浓度为2mol/L)，室温反应，反应结束后，旋干，得中间体L1(0.46mmol，收率70％)。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.03(s,1H),11.06(s,1H),7.97(dd,J＝2.0,0.6Hz,1H),7.82(d,J＝7.9Hz,1H),7.43-7.49(m,1H),4.40-4.50(m,1H),3.36(s,2H),2.51-2.75(m,7H),2.15-2.20(m,1H),1.72-1.98(m,5H).
质谱m/z：400.3[M+H]+。
二、中间体L2的制备:
Figure BDA0003664422910000091
步骤1：将式L2-SM1所示的化合物(2mmol)、N-Boc哌嗪(2mmol)、N,N-二异丙基乙二胺(3mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺，90℃反应。反应结束后，冷却至室温，加入30mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体L2-A(1.58mmol，收率79.2％)；
步骤2：将中间体L2-A(1.58mmol)溶于10mL二氯甲烷，加入等体积的三氟乙酸，室温反应，反应结束后，采用减压蒸馏的方法将溶剂旋干，得中间体L2-B粗品；
步骤3：将步骤2中得到的中间体L2-B、溴乙酸叔丁酯(1.5当量)、N,N-二异丙基乙胺(2.0当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，室温反应。液相色谱显示反应结束后，加入30mL水，乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥，通过柱层析进行纯化，得到中间体L2-C(0.95mmol，综合收率60.1％)；
步骤4：将中间体L2-C(0.95mmol)溶于乙酸乙酯，加入等体积的氯化氢-乙酸乙酯溶液(浓度为2mol/L)，室温反应，反应结束后，旋干，得中间体L2(0.96mmol，收率90.5％)。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,1H),11.00(s,1H),7.97(d,J＝7.9Hz,1H),7.35(d,J＝2.0Hz,1H),7.05-7.10(m,1H),4.50-4.60(m,1H),3.45(s,2H),3.35-3.50(m,4H),2.45-2.65(m,4H),2.00-2.30(m,4H).
中间体L2质谱m/z：401.3[M+H]+。
三、中间体L3的制备:
Figure BDA0003664422910000101
步骤1：式L3-SM01所示的化合物(2mmol)、式L3-SM02所示的化合物(3mmol)、 N,N-二异丙基乙二胺(6mmol)溶于二氧六环，80℃反应。反应结束后，柱层析纯化得中间体L3-A(1.31mmol，收率65.4％)；
步骤2：将中间体L3-A(1.31mmol)溶于10mL二氯甲烷，加入等体积的三氟乙酸，室温反应，反应结束后，采用减压蒸馏的方法将溶剂旋干，得中间体L3-B；
步骤3：将步骤2中得到的中间体L3-B、溴乙酸叔丁酯(1.5当量)、N,N-二异丙基乙胺(2.0当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，室温反应。液相色谱显示反应结束后，加入30mL水，乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥，通过柱层析进行纯化，得到中间体L3-C(0.89mmol，综合收率67.9％)；
步骤4：将中间体L3-C(0.89mmol)溶于10mL乙酸乙酯，加入等体积的氯化氢- 乙酸乙酯溶液(浓度为2mol/L)，室温反应，反应结束后，旋干，得中间体L3(0.80mmol，收率90％)。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.98(s,1H),11.08(s,1H),7.05(d,J＝7.9Hz,2H),6.56(d,J＝7.9Hz,2H),5.50-5.55(m,1H),4.30-4.40(m,1H),3.45(s,2H),2.50-2.75(m,7H),1.80-2.00(m,5H),1.50-1.60(m,1H).
中间体L3质谱m/z：346.6[M+H]+。
四、中间体L4的制备:
Figure BDA0003664422910000111
步骤1：将式L4-SM1所示的化合物(2mmol)、式L4-SM2所示的化合物(3mmol)、碳酸氢钠(3mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺，70℃反应。反应结束后，加入30mL水，乙酸乙酯萃取，柱层析纯化得到中间体L4-A(1.6mmol，收率75.5％)。
步骤2：将中间体L4-A(1.6mmol)溶于10mL乙酸乙酯，加入等体积的氯化氢- 乙酸乙酯溶液(浓度为2mol/L)，室温反应，反应结束后，旋干，得到中间体L4(1.47mmol，收率92％)。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),10.85(s,1H),6.99(d,J＝8.2Hz,2H),6.66(d,J＝8.2Hz,2H),5.54-5.60(m,1H),4.30-4.40(m,1H),3.45(s,2H),2.75-2.78(m,1H),2.54-2.61(m,1H),2.07-2.13(m,1H),1.81-1.92(m,1H).
中间体L4质谱m/z：263.5[M+H]+。
五、中间体L5的制备:
Figure BDA0003664422910000112
步骤1：将式L5-SM01所示的化合物(2mmol)、式L5-SM02所示的化合物(3mmol)、四三苯基膦钯(0.1mmol)、碳酸钠(4mmol)溶于混合溶剂中，其中，混合溶剂包括体积比为6:1的二氧六环和水；在氩气保护下，100℃进行反应。液相色谱显示反应结束后，冷却至室温，旋蒸除去部分溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠进行干燥，过滤，采用减压蒸馏的方法将溶剂旋干得到粗产品，将粗产品通过柱层析进行纯化，得到中间体L5-A(1.6mmol，收率80％)；
步骤2：将中间体L5-A(1.6mmol)溶于10mL二氯甲烷，加入等体积的三氟乙酸，室温反应，反应结束后，采用减压蒸馏的方法将溶剂旋干，得中间体L5-B；
步骤3：将中间体L5-B、溴乙酸叔丁酯(1.5当量)、N,N-二异丙基乙胺(2.0当量) 溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，室温反应。液相色谱显示反应结束后，加入30mL水，乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥，通过柱层析进行纯化，得到中间体L5-C(0.96mmol，综合收率60％)；
步骤5：将中间体L5-C(0.96mmol)溶于8mL乙酸乙酯，加入等体积的氯化氢- 乙酸乙酯溶液(浓度为2mol/L)，室温反应，反应结束后，旋干，得中间体L5(0.84mmol，收率88％)。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.00(s,1H),11.06(s,1H),6.82(d,J＝7.9Hz,2H),6.60(d,J＝7.9Hz,2H),5.35-5.45(m,1H),4.30-4.40(m,1H),3.35(s,2H),3.20-3.30(m,4H),2.73-2.84(m,4H),2.45-2.55(m,2H),1.95-2.05(m,1H),1.50-1.60(m,1H).
中间体L5质谱m/z：347.7[M+H]+。
六、中间体L6的制备:
Figure BDA0003664422910000121
步骤1：将式L6-SM1所示的化合物(1mmol)、式L6-SM2所示的化合物(1.5mmol)、四三苯基膦钯(0.05mmol)、碳酸钠(2mmol)溶于混合溶剂中，其中，混合溶剂包括体积比6:1的N,N-二甲基甲酰胺和水，氩气保护下100℃反应。反应结束后，加入20mL 水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体L6-A(0.73mmol，收率73.0％)；
步骤2：将中间体L6-A(0.73mmol)溶于5mL乙醇，加入钯碳(10％，100mg)，氢气条件下室温反应，反应结束后，过滤，柱层析纯化得到中间体L6-B(0.54mmol，收率74.1％)；
步骤3：将中间体L6-B(0.54mmol)溶于5mL二氯甲烷，加入等体积的三氟乙酸，室温反应，反应结束后，采用减压蒸馏的方法将溶剂旋干，得中间体L6-C；
步骤4：将中间体L6-C、溴乙酸叔丁酯(1.5当量)、N,N-二异丙基乙胺(2.0当量) 溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)，室温反应。液相色谱显示反应结束后，加入30mL水，乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥，通过柱层析进行纯化，得到中间体L6-D(0.324mmol，综合收率60％)；
步骤5：将中间体L6-D(0.324mmol)溶于5mL乙酸乙酯，加入等体积的氯化氢- 乙酸乙酯溶液(浓度为2mol/L)，室温反应，反应结束后，旋干，得中间体L6(0.28mmol, 收率87％)。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.03(s,1H),11.04(s,1H),7.20(d,J＝7.9Hz,2H),6.73(d,J＝7.9Hz,2H),3.63-3.68(m,1H),3.35(s,2H),3.20-3.30(m,4H),2.73-2.84(m,4H),2.45-2.55(m,2H),1.95-2.05(m,2H).
中间体L6质谱m/z：332.3[M+H]+。
七、中间体L7的制备:
Figure BDA0003664422910000131
步骤1：-70℃条件下，将二异丙基氨基锂(LDA，6mmol)逐滴加入到乙酸叔丁酯(5mmol)的四氢呋喃溶液中，保持温度1小时，将上述溶液加入到含有式L7-SM1 所示化合物(5mmol)的四氢呋喃溶液中，-70℃反应1h，将反应液加入到饱和氯化铵溶液中，乙酸乙酯萃取，柱层析纯化得中间体L7-A(0.9mmol，收率18.0％)；
步骤2：中间体L7-A(0.9mmol)溶于8mL乙酸乙酯，加入钯碳(10％，100mg)，氢气条件下室温反应，反应结束后，过滤，旋干得中间体L7-B粗品；
步骤3：将中间体L7-B、式L7-SM02所示的化合物(2.0当量)、碳酸氢钠(3.0 当量)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，70℃反应。液相色谱显示反应结束后，加入 30mL水，乙酸乙酯萃取，用无水硫酸钠干燥，通过柱层析进行纯化，得到中间体L7-C (0.495mmol，综合收率55％)；
步骤4：将中间体L7-C(0.495)溶于8mL乙酸乙酯，加入等体积的氯化氢-乙酸乙酯溶液(浓度为2mol/L)，室温反应，反应结束后，旋干，得中间体L7(0.45mmol，收率91％)。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.03(s,1H),10.98(s,1H),6.80(d,J＝7.9Hz,2H),6.61(d,J＝7.9Hz,2H),5.35-5.45(m,1H),4.35-4.45(m,2H),3.33-3.50(m,4H),2.43-2.59(m,4H),2.00-2.20(m,3H),1.95-2.05(m,2H),1.55-1.65(m,1H).
中间体L7质谱m/z：362.5[M+H]+。
实施例1
本实施例制备得到双功能化合物：2-(6-(4-((1-(2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑 -2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，其结构式如式I-1所示：
Figure BDA0003664422910000141
合成路线：
Figure BDA0003664422910000142
步骤1：将式1-SM1所示的化合物(3mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(7mL)，冰水浴条件下，加入氢化钠(3.6mmol)，保持冰水浴1h，加入式1-SM2所示的化合物 (4mmol)，室温反应。反应结束后，加入饱和氯化铵溶液(30ml)，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体1-A(2.18mmol，收率72.7％)；
步骤2：将中间体1-A(0.5mmol)、式1-SM3所示的化合物(300mg，0.75mmol)、碳酸钠(1mmol)以及四三苯基膦钯(0.05mmol)溶于7mL的混合溶剂中，混合溶剂包括体积比为6:1的二氧六环和水，在氩气保护下80℃反应。反应结束后，冷却至室温，除去部分溶剂。加入水20mL，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体1-B (0.4mmol，收率80％)；
步骤3：将中间体1-B(0.4mmol)溶于四氢呋喃和水的混合溶剂，加入氢氧化锂一水合物(1mmol)，室温反应。反应结束后，调节pH至4-5之间，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得中间体1-C(0.36mmol，收率90％)；
步骤4：将中间体1-C(0.2mmol)、2-氨基噻唑(0.3mmol)、丙基磷酸酐(0.3mmol) 以及N,N-二异丙基乙胺(0.4mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)室温反应，反应结束后，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体1-D(0.1mmol，收率50％)；
步骤5：将中间体1-D(0.1mmol)溶于5mL乙酸乙酯，加入等体积的氯化氢-乙酸乙酯溶液(2M)，室温反应，反应结束后，旋干得中间体1-E(0.09mmol，收率90％)；
步骤6：将中间体1-E(20mg，0.035mmol)、中间体L1(0.035mmol)、丙基磷酸酐(0.07mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.07mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL) 室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝12.67(s,1H)，11.08(s,1H)，8.14(s,1H)， 7.98(dd,J＝8.2,1.8Hz,1H)，7.72(d,J＝8.8Hz,2H),7.68(d,J＝8.5Hz,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.47-7.54(m,3H),7.39-7.47(m,3H),7.36(d,J＝2.3Hz,1H),7.31(d,J＝3.6Hz,1H),7.26(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.07-7.13(m,2H),5.90(s,1H),5.03-5.12(m,2H),4.68-4.75(m,1H),4.16(d,J＝14.8Hz,1H),3.83-3.94(m,2H),3.38-3.54(m,5H), 3.17-3.29(m,3H),2.82-2.95(m,1H),2.52-2.69(m,5H),1.89-2.08(m,3H),1.47-1.73(m, 2H),1.25(d,J＝6.9Hz,1H)；
质谱m/z：942.2[M+H]+。
实施例2
本实施例制备得到双功能化合物：2-(6-(4-(4-(2-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2- 苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，其结构式如式I-2所示：
Figure BDA0003664422910000161
合成路线：
Figure BDA0003664422910000162
步骤1：将2-SM1(0.5mmol)、2-SM2(0.75mmol)、碳酸钠(1mmol)以及四三苯基膦钯(0.05mmol)溶于7mL的混合溶剂中，混合溶剂包括体积比为6:1的二氧六环和水，在氩气保护下80℃反应。反应结束后，冷却至室温，除去部分溶剂。加入水 20mL，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体2-A(0.36mmol，收率72％)；
步骤2：将中间体2-A(0.36mmol)溶于四氢呋喃和水的混合溶剂，加入氢氧化锂一水合物(1mmol)，室温反应。反应结束后，调节pH至4-5之间，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得中间体2-B(0.32mmol，收率88.9％)；
步骤3：将中间体2-B(0.2mmol)、2-氨基噻唑(0.3mmol)、丙基磷酸酐(0.3mmol) 以及N,N-二异丙基乙胺(0.4mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)室温反应，反应结束后，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体2-C(0.12mmol，收率60％)；
步骤4：将中间体2-C(0.12mmol)溶于5mL乙酸乙酯，加入等体积的乙酸乙酯溶液(2M)，室温反应，反应结束后，旋干得中间体2-D(0.10mmol，收率83.3％)；
步骤5：将中间体2-D(0.05mmol)、中间体L1(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.67(s,1H),11.11(s,1H),8.12(d,J＝1.7 Hz,1H),7.98(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.84(d,J＝7.7Hz,1H),7.75-7.81(m,2H), 7.66-7.73(m,2H),7.61(d,J＝8.2Hz,1H),7.42-7.54(m,6H),7.31(d,J＝3.6Hz,1H), 7.05-7.12(m,2H),5.90(s,1H),5.13(dd,J＝12.9,5.4Hz,1H),5.07(d,J＝14.8Hz,1H), 4.15(d,J＝14.8Hz,1H),3.76(m,2H),3.62(m,2H),3.17-3.27(m,4H),2.72-3.03(m,4H), 2.52-2.64(m,1H),2.19(t,J＝11.1Hz,2H),2.01-2.10(m,1H),1.66-1.86(m,4H),1.47(m, 1H),1.24(m,1H),0.93(m,1H)；
质谱m/z：927.5[M+H]+。
实施例3
本实施例制备得到双功能化合物：2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基 -N-(噻唑-2-基)乙酰胺，其结构式如式I-3所示：
Figure BDA0003664422910000171
合成路线：
Figure BDA0003664422910000172
步骤1：将中间体2-D(0.05mmol)、中间体L3(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.68(s,1H),10.76(s,1H),8.12(d,J＝1.7 Hz,1H),7.98(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.66-7.73(m,2H),7.62(d,J＝8.3Hz,1H), 7.47-7.54(m,3H),7.40-7.46(m,3H),7.31(d,J＝3.6Hz,1H),7.08(d,J＝8.6Hz,2H), 6.95(d,J＝8.3Hz,2H),6.57-6.64(m,2H),5.90(s,1H),5.65(s,1H),5.07(d,J＝14.7Hz, 1H),4.25(dd,J＝11.4,4.8Hz,1H),4.15(d,J＝14.8Hz,1H),3.73(m,2H),3.63(m,2H), 3.30(m,2H),3.17-3.25(m,2H),2.95-3.05(m,2H),2.65-2.80(m,1H),2.51-2.61(m,1H), 2.30-2.42(m,1H),2.15-2.27(m,2H),2.06-2.13(m,1H),1.85(qd,J＝12.1,4.7Hz,1H), 1.41-1.76(m,5H),0.89-0.95(m,1H)；
质谱m/z：873.5[M+H]+。
实施例4
本实施例制备得到双功能化合物：2-(6-(4-(4-(2-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2- 苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，其结构式如式I-4所示：
Figure BDA0003664422910000181
合成路线：
Figure BDA0003664422910000182
步骤1：将中间体2-D(0.05mmol)、中间体L2(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.67(s,1H),11.08(s,1H),8.11(d,J＝1.7 Hz,1H),7.98(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.65-7.73(m,3H),7.61(d,J＝8.3Hz,1H), 7.40-7.54(m,6H),7.37(s,1H),7.31(d,J＝3.5Hz,1H),7.27(d,J＝8.9Hz,1H),7.07(d,J ＝8.5Hz,2H),5.90(s,1H),5.03-5.11(m,2H),4.15(d,J＝14.8Hz,1H),3.60-3.75(m,5H), 3.40-3.55(m,5H),3.16-3.34(m,4H),2.88(ddd,J＝17.3,14.0,5.4Hz,1H),2.52-2.72(m, 5H),1.98-2.05(m,1H),1.42-1.58(m,1H),0.88-0.98(m,1H)；
质谱m/z：928.6[M+H]+。
实施例5
本实施例制备得到双功能化合物：2-(6-(4-(4-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)- 基)-2-(3-氟苯基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，其结构式如式I-5所示：
Figure BDA0003664422910000191
合成路线：
Figure BDA0003664422910000192
步骤1：将5-SM1(0.5mmol)、2-SM2(0.75mmol)、碳酸钠(1mmol)以及四三苯基膦钯(0.05mmol)溶于7mL的混合溶剂中，混合溶剂包括体积比为6:1的二氧六环和水，在氩气保护下80℃反应。反应结束后，冷却至室温，除去部分溶剂。加入水 20mL，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体5-A(0.45mmol，收率90％)；
步骤2：将中间体5-A(0.45mmol)溶于四氢呋喃和水的混合溶剂，加入氢氧化锂一水合物(1mmol)，室温反应。反应结束后，调节pH至4-5之间，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得中间体5-B(0.43mmol，收率95.6％)；
步骤3：将中间体5-B(0.2mmol)、2-氨基噻唑(0.3mmol)、丙基磷酸酐(0.3mmol) 以及N,N-二异丙基乙胺(0.4mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)室温反应，反应结束后，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体5-C(0.10mmol，收率50％)；
步骤4：将中间体5-C(0.10mmol)溶于5mL乙酸乙酯，加入等体积的乙酸乙酯溶液(2M)，室温反应，反应结束后，旋干得中间体5-D(0.095mmol，收率95％)；
步骤5：将中间体5-D(0.05mmol)、中间体L2(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.72(s,1H),11.08(s,1H),8.12(d,J＝1.7 Hz,1H),7.99(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.65-7.74(m,3H),7.62(d,J＝8.3Hz,1H), 7.50-7.59(m,2H),7.38(s,1H),7.20-7.35(m,5H),7.07(d,J＝8.5Hz,2H),5.90(s,1H), 5.01-5.12(m,2H),4.25(d,J＝14.7Hz,1H),3.18-3.77(m,12H),2.54-2.95(m,7H), 1.99-2.10(m,1H),1.40-1.60(m,1H),0.90-0.98(m,1H)；
质谱m/z：946.4[M+H]+。
实施例6
本实施例制备得到双功能化合物：2-(6-(6-(4-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑 -2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，其结构式如式I-6所示：
Figure BDA0003664422910000201
合成路线：
Figure BDA0003664422910000211
步骤1：将2-SM1(0.5mmol)、6-SM2(0.75mmol)、碳酸钠(1mmol)以及四三苯基膦钯(0.05mmol)溶于7mL的混合溶剂中，混合溶剂包括体积比为6:1的二氧六环和水，在氩气保护下80℃反应。反应结束后，冷却至室温，除去部分溶剂。加入水 20mL，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体6-A(0.42mmol，收率84％)；
步骤2：将中间体6-A(0.42mmol)溶于四氢呋喃和水的混合溶剂，加入氢氧化锂一水合物(1mmol)，室温反应。反应结束后，调节pH至4-5之间，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得中间体6-B(0.40mmol，收率95.2％)；
步骤3：将中间体6-B(0.2mmol)、2-氨基噻唑(0.3mmol)、丙基磷酸酐(0.3mmol) 以及N,N-二异丙基乙胺(0.4mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)室温反应，反应结束后，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体6-C(0.10mmol，收率50％)；
步骤4：将中间体6-C(0.10mmol)溶于5mL乙酸乙酯，加入等体积的乙酸乙酯溶液(2M)，室温反应，反应结束后，旋干得中间体6-D(0.09mmol，收率90.0％)；
步骤5：将中间体6-D(0.05mmol)、中间体L2(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.08(s,1H),8.59(d,J＝2.6Hz,1H),8.20(d, J＝1.6Hz,1H),7.97-8.06(m,2H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H), 7.40-7.54(m,8H),7.27-7.34(m,2H),6.99(d,J＝9.0Hz,1H),5.90(s,1H),5.04-5.12(m, 2H),4.16(d,J＝14.8Hz,1H),3.50-3.70(m,7H),2.80-3.00(m,3H),2.52-2.63(m,3H), 1.99-2.06(m,1H),1.41-1.66(m,4H),0.90-0.98(m,3H)；
质谱m/z：929.6[M+H]+。
实施例7
本实施例制备得到双功能化合物：2-(6-(4-(1-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)- 基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，其结构式如式I-7所示：
Figure BDA0003664422910000221
合成路线：
Figure BDA0003664422910000222
步骤1：将2-SM1(0.5mmol)、7-SM2(0.75mmol)、碳酸钠(1mmol)以及四三苯基膦钯(0.05mmol)溶于7mL的混合溶剂中，混合溶剂包括体积比为6:1的二氧六环和水，在氩气保护下80℃反应。反应结束后，冷却至室温，除去部分溶剂。加入水 20mL，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体7-A(0.40mmol，收率80％)；
步骤2：将中间体7-A(0.40mmol)溶于四氢呋喃和水的混合溶剂，加入氢氧化锂一水合物(1mmol)，室温反应。反应结束后，调节pH至4-5之间，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得中间体7-B(0.38mmol，收率95％)；
步骤3：将中间体7-B(0.2mmol)、2-氨基噻唑(0.3mmol)、丙基磷酸酐(0.3mmol) 以及N,N-二异丙基乙胺(0.4mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)室温反应，反应结束后，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体7-C(0.13mmol，收率65％)；
步骤4：将中间体7-C(0.10mmol)溶于5mL乙酸乙酯，加入等体积的乙酸乙酯溶液(2M)，室温反应，反应结束后，旋干得中间体7-D(0.09mmol，收率90.0％)；
步骤5：将中间体7-D(0.05mmol)、中间体L2(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.67(s,1H),11.08(s,1H),8.17(d,J＝1.6 Hz,1H),8.01(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),7.62-7.77(m,4H),7.34-7.55(m,9H),7.24-7.34(m,2H),5.90(s,1H),5.03-5.13(m,2H),4.55(d,J＝12.5Hz,1H),4.17(d,J＝14.8Hz,2H),3.40-3.52(m,4H),3.13(t,J＝12.5Hz,1H),2.81-2.94(m,3H),2.53-2.77(m,5H), 1.95-2.05(m,1H),1.80-1.90(m,2H),1.62-1.75(m,1H),1.40-1.55(m,2H),1.26– 1.20-1.27(m,1H),0.90-0.96(m,1H)；
质谱m/z：927.7[M+H]+。
实施例8
本实施例制备得到双功能化合物：2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基 -N-(噻唑-2-基)乙酰胺，其结构式如式I-8所示：
Figure BDA0003664422910000231
合成路线：
Figure BDA0003664422910000232
步骤1：将中间体2-D(0.05mmol)、中间体L5(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.67(s,1H),10.74(s,1H),8.11(d,J＝1.7 Hz,1H),7.97(dd,J＝8.3,1.7Hz,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.61(d,J＝8.3Hz,4H), 7.40-7.54(m,6H),7.31(d,J＝3.6Hz,1H),7.07(d,J＝8.6Hz,2H),6.75(d,J＝8.5Hz, 2H),6.60(d,J＝8.8Hz,2H),5.90(s,1H),5.30-5.40(m,1H),5.07(d,J＝14.7Hz,1H), 4.11-4.23(m,2H),3.73(m,2H),3.63(m,2H),3.28(m,2H),3.22(m,2H),2.97(m,3H), 2.72(ddd,J＝17.4,11.8,5.3Hz,1H),2.52-2.61(m,5H),2.05-2.15(m,1H),1.75-1.90(m, 1H),1.40-1.52(m,1H),1.20-1.28(m,1H),0.88-0.96(m,1H)；
质谱m/z：874.2[M+H]+。
实施例9
本实施例制备得到双功能化合物：2-(6-(4-(4-(2-(2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)- 基)-2-(5-氟-2-羟基苯基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺，其结构式如式I-9所示：
Figure BDA0003664422910000241
合成路线：
Figure BDA0003664422910000251
步骤1：将9-SM1(0.5mmol)、2-SM2(0.75mmol)、碳酸钠(1mmol)以及四三苯基膦钯(0.05mmol)溶于7mL的混合溶剂中，混合溶剂包括体积比为6:1的二氧六环和水，在氩气保护下80℃反应。反应结束后，冷却至室温，除去部分溶剂。加入水 20mL，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体9-A(0.40mmol，收率80％)；
步骤2：将中间体9-A(0.40mmol)溶于四氢呋喃和水的混合溶剂，加入氢氧化锂一水合物(1mmol)，室温反应。反应结束后，调节pH至4-5之间，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得中间体9-B(0.39mmol，收率97.5％)；
步骤3：将中间体9-B(0.2mmol)、2-氨基噻唑(0.3mmol)、丙基磷酸酐(0.3mmol) 以及N,N-二异丙基乙胺(0.4mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)室温反应，反应结束后，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体9-C(0.13mmol，收率65％)；
步骤4：将中间体9-C(0.10mmol)溶于5mL乙酸乙酯，加入等体积的乙酸乙酯溶液(2M)，室温反应，反应结束后，旋干得中间体9-D(0.09mmol，收率90.0％)；
步骤5：将中间体9-D(0.05mmol)、中间体L2(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到中间体9-E(15mg，收率31％)。
步骤6：将中间体9-E(15mg)溶于1,2-二氯乙烷(2mL)，冰水浴下加入三氯化铝(5当量)，室温反应，反应结束后，加入20mL水，二氯甲烷萃取，干燥，制备液相色谱纯化，冻干得双功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.67(s,1H),10.76(s,1H),8.04(d,J＝2.0 Hz,1H),7.77(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),7.63(d,J＝7.2Hz,1H),7.50-7.55(m,1H),7.45(d, J＝4.6Hz,1H),7.32-7.39(m,3H),7.03-7.11(m,3H),6.92-6.97(m,1H),6.82-6.89(m, 2H),5.93(s,1H),5.35-5.42(m,1H),4.65-4.75(m,2H),3.60-3.70(m,4H),3.12-3.31(m, 10H),2.72-2.80(m,4H),2.51-2.66(m,2H),2.12-2.22(m,1H),1.72-1.82(m,1H)；
质谱m/z：962.7[M+H]+。
实施例10
本实施例制备得到双功能化合物：5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺，其结构式如式I-10所示：
Figure BDA0003664422910000261
合成路线：
Figure BDA0003664422910000262
步骤1：10-SM1(5mmol)，10-SM2(5mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.5mmol)，三苯基膦(1mmol)，碘化亚铜(0.5mmol)，N,N-二异丙基乙胺(15mmol)溶于N,N- 二甲基甲酰胺(10mL)，氩气保护，微波条件下，100℃反应。反应结束后，冷却至室温，加入水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体10-A(3.5mmol，收率70％)；
步骤2：将10-A(3.5mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(7mL)，冰水浴条件下，加入氢化钠(4.2mmol)，保持冰水浴1h，加入式10-SM3所示的化合物(4.7mmol)，室温反应。反应结束后，加入饱和氯化铵溶液(30ml)，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体10-B(2.54mmol，收率72.7％)；
步骤3：将中间体10-B(2.0mmol)溶于四氢呋喃和水的混合溶剂，加入氢氧化锂一水合物(5.0mmol)，室温反应。反应结束后，调节pH至4-5之间，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得中间体10-C(1.9mmol，收率95％)；
步骤4：将中间体10-C(1.9mmol)、2-氨基噻唑(2.85mmol)、丙基磷酸酐(2.85mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(3.8mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)室温反应，反应结束后，加入50mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体10-D(0.95mmol，收率50％)；
步骤5：将中间体10-D(0.95mmol)溶于10mL乙酸乙酯，加入等体积的氯化氢- 乙酸乙酯溶液(2M)，室温反应，反应结束后，旋干得中间体10-E(0.9mmol，收率 94.7％)；
步骤6：将中间体10-E(0.05mmol)、中间体L3(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.66(s,1H),10.77(s,1H),8.80-8.88(m,2H),8.27(d,J＝1.5Hz,1H),8.20(dd,J＝8.1,2.1Hz,1H),8.10(dd,J＝8.1,0.9Hz,1H),7.94(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.70(d,J＝8.2Hz,1H),7.39-7.54(m,6H),7.32(d,J＝3.6Hz,1H),6.96(d,J＝8.5Hz,2H),6.61(d,J＝8.5Hz,2H),5.89(s,1H),5.67(s,1H),5.11(d,J ＝15.5Hz,1H),4.38(d,J＝12.5Hz,1H),4.18-4.30m,2H),4.08(m 2H),3.00-3.18(m, 3H),2.65-2.80(m,2H),2.52-2.62(m,1H),2.05-2.14(m,1H),1.61-1.89(m,9H),1.40-1.58 (m,3H),0.83-0.96(m,2)；
质谱m/z：940.5[M+H]+。
实施例11
本实施例制备得到双功能化合物：N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基) 哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-5-((2-(1-(3-氟苯基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-1,1-二氧代-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)吡啶酰胺，其结构式如式I-11所示：
Figure BDA0003664422910000281
合成路线：
Figure BDA0003664422910000282
步骤1：将10-A(1.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，冰水浴条件下，加入氢化钠(1.2mmol)，保持冰水浴1h，加入式11-SM1所示的化合物(1.5mmol)，室温反应。反应结束后，加入饱和氯化铵溶液(30ml)，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体11-A(0.70mmol，收率70％)；
步骤2：将中间体11-A(0.70mmol)溶于四氢呋喃和水的混合溶剂，加入氢氧化锂一水合物(1.8mmol)，室温反应。反应结束后，调节pH至4-5之间，加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得中间体11-B(0.67mmol，收率95％)；
步骤3：将中间体11-B(0.5mmol)、2-氨基噻唑(0.6mmol)、丙基磷酸酐(1.0mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(2.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)室温反应，反应结束后，加入30mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体11-C(0.28mmol，收率55％)；
步骤4：将中间体11-C(0.2mmol)溶于10mL乙酸乙酯，加入等体积的氯化氢- 乙酸乙酯溶液(2M)，室温反应，反应结束后，旋干得中间体11-D(0.19mmol，收率96％)；
步骤5：将中间体11-D(0.05mmol)、中间体L3(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ10.77(s,1H),8.80-8.88(m,2H),8.27(d,J＝1.5Hz,1H),8.21(dd,J＝8.1,2.1Hz,1H),8.10(d,J＝8.2Hz,1H),7.95(dd,J＝8.0,1.5 Hz,1H),7.70(d,J＝8.2Hz,1H),7.50-7.60(m,2H),7.26-7.35(m,3H),7.23(dt,J＝9.7,2.2Hz,1H),6.97(d,J＝8.2Hz,2H),6.62(d,J＝8.2Hz,2H),5.89(s,1H),5.69(s,1H), 5.09(d,J＝15.6Hz,1H),4.22-4.42(m,3H),4.03-4.16(m,2H),3.08-3.20(m,3H), 2.65-2.80(m,3H),2.52-2.62(m,2H),2.06-2.14(m,1H),1.65-1.91(m,8H),1.42-1.60(m, 3H),0.87-0.98(m,1H)；
质谱m/z：958.5[M+H]+。
实施例12
本实施例制备得到双功能化合物：5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3- 二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺，其结构式如式I-12所示：
Figure BDA0003664422910000291
合成路线：
Figure BDA0003664422910000292
步骤1：将中间体10-E(0.05mmol)、中间体L1(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：11.11(s,1H),8.79-8.8(m,2H),8.26(d,J＝1.5Hz,1H),8.17-8.24(m,1H),8.07-8.14(m,1H),7.94(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.86(d,J＝7.7Hz,1H),7.75-7.83(m,2H),7.70(d,J＝8.2Hz,1H),7.39-7.54(m,6H),7.31(d,J＝3.5Hz,1H),5.89(s,1H),5.05-5.17(m,2H),4.38(d,J＝12.5Hz,1H),4.22(d,J＝15.5Hz,1H),4.04-4.17(m,2H),3.33(d,J＝13.2Hz,1H),3.00-3.18(m,2H),2.83-2.98(m,2H),2.55-2.79(m,5H),2.10-2.20(m,2H),2.01-2.08(m,1H),1.62-1.89(m,7H),1.45-1.55(m,1H)；
质谱m/z：994.7[M+H]+。
实施例13
本实施例制备得到双功能化合物：5-((2-(1-(2,5-二氟苯基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基) 乙基)-1,1-二氧代-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶 -3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺，其结构式如式I-13所示：
Figure BDA0003664422910000301
合成路线：
Figure BDA0003664422910000302
步骤1：将10-A(1.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，冰水浴条件下，加入氢化钠(1.2mmol)，保持冰水浴1h，加入式13-SM1所示的化合物(1.5mmol)，室温反应。反应结束后，加入饱和氯化铵溶液(30ml)，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体13-A(0.67mmol，收率67％)；
步骤2：将中间体13-A(0.67mmol)溶于四氢呋喃和水的混合溶剂，加入氢氧化锂一水合物(1.70mmol)，室温反应。反应结束后，调节pH至4-5之间，加入20mL 水，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得中间体13-B(0.64mmol，收率96％)；
步骤3：将中间体13-B(0.5mmol)、2-氨基噻唑(0.6mmol)、丙基磷酸酐(1.0mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(2.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，室温反应，反应结束后，加入30mL水，乙酸乙酯萃取，干燥，柱层析纯化得中间体13-C(0.24mmol，收率48％)；
步骤4：将中间体13-C(0.2mmol)溶于10mL乙酸乙酯，加入等体积的氯化氢- 乙酸乙酯溶液(2M)，室温反应，反应结束后，旋干得中间体13-D(0.19mmol，收率 96％)；
步骤5：将中间体13-D(0.05mmol)、中间体L3(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.77(s,1H),8.80-8.88(m,2H),8.26(d,J＝1.4Hz,1H),8.20-8.24(m,1H),8.07-8.16(m,2H),7.96(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.71(d,J＝8.2Hz,1H),7.51(d,J＝3.5Hz,1H),7.40-7.48(m,2H),7.32(d,J＝3.6Hz,1H), 7.22-7.28(m,1H),6.97(d,J＝8.0Hz,2H),6.63(d,J＝8.1Hz,2H),6.05(s,1H),5.15(d,J ＝15.2Hz,1H),4.20-4.42(m,5H),4.05-4.15(m,2H),3.07-3.21(m,3H),2.67-2.75(m,3H),2.54-2.62(m,4H),2.05-2.14(m,1H),1.76-1.92(m,5H),1.40-1.55(m,2H),0.90-0.96(m,1H)；
质谱m/z：976.5[M+H]+。
实施例14
本实施例制备得到双功能化合物：5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基) 苯基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺，其结构式如式I-14所示：
Figure BDA0003664422910000321
合成路线：
Figure BDA0003664422910000322
步骤1：将中间体10-E(0.05mmol)、中间体L4(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.64(s,1H),10.73(s,1H),9.00(d,J＝1.8 Hz,1H),7.93-8.03(m,3H),7.84(d,J＝8.8Hz,1H),7.53(dd,J＝8.2,2.2Hz,1H), 7.39-7.47(m,4H),7.27-7.38(m,3H),7.14-7.18(m,2H),7.09(d,J＝4.6Hz,1H),6.59-6.65 (m,2H),5.93(s,1H),5.31(d,J＝7.3Hz,1H),4.59-4.72(m,2H),4.30-4.40(m,1H), 3.85-3.95(m,1H),3.55-3.66(m,4H),3.35-3.45(m,2H),2.48-2.58(m,2H),1.85-2.05(m, 3H),1.51-1.75(m,3H)；
质谱m/z：857.5[M+H]+。
实施例15
本实施例制备得到双功能化合物：5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺，其结构式如式I-15所示：
Figure BDA0003664422910000323
合成路线：
Figure BDA0003664422910000331
步骤1：将中间体10-E(0.05mmol)、中间体L5(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.76(m,1H),8.78-8.87(m,2H),8.26(s, 1H),8.20(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H),8.09(d,J＝8.1Hz,1H),7.94(d,J＝8.1Hz,1H),7.70(d, J＝8.2Hz,1H),7.40-7.54(m,5H),7.32(d,J＝3.5Hz,1H),7.17(d,J＝8.5Hz,1H),6.99 (d,J＝8.6Hz,1H),6.78(d,J＝8.4Hz,2H),6.62(d,J＝8.4Hz,2H),5.89(s,1H),5.11(d, J＝15.4Hz,1H),4.38(d,J＝12.7Hz,1H),4.25-4.35(m,2H),4.03-4.12(m,1H),2.95-3.15 (m,5H),2.65-2.77(m,3H),2.52-2.62(m,1H),2.05-2.15(m,1H),1.75-1.90(m,3H), 1.40-1.62(m,5H),0.85-1.00(m,3H)；
质谱m/z：941.5[M+H]+。
实施例16
本实施例制备得到双功能化合物：5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺，其结构式如式I-16所示：
Figure BDA0003664422910000332
合成路线：
Figure BDA0003664422910000333
步骤1：将中间体10-E(0.05mmol)、中间体L7(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：12.65(s,1H),10.75(s,1H),8.85(d,J＝2.0 Hz,1H),8.77(d,J＝8.3Hz,1H),8.26(s,1H),8.20(dd,J＝8.1,2.1Hz,1H),8.10(d,J＝ 8.1Hz,1H),7.91-7.97(m,1H),7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.40-7.54(m,6H),7.31(d,J＝3.6 Hz,1H),6.76(d,J＝8.5Hz,2H),6.60(d,J＝8.5Hz,2H),5.89(s,1H),5.11(d,J＝15.5Hz, 1H),4.46(d,J＝12.5Hz,1H),4.15-4.25(m,2H),4.00-4.14(m,2H),3.05-3.20(m,4H), 2.85-2.95(m,2H),2.67-2.78(m,2H),2.55-2.64(m,1H),2.06-2.14(m,1H),1.75-1.88(m, 3H),1.60-1.74(m,4H),1.43-1.57(m,3H),0.85-0.95(m,2H)；
质谱m/z：956.9[M+H]+。
实施例17
本实施例制备得到双功能化合物：5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯基) 哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺，其结构式如式I-17所示：
Figure BDA0003664422910000341
合成路线：
Figure BDA0003664422910000342
步骤1：将中间体11-E(0.05mmol)、中间体L6(0.05mmol)、丙基磷酸酐(0.10mmol)以及N,N-二异丙基乙胺(0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)室温反应，反应结束后，制备高相液相色谱纯化，冻干，得到多功能化合物。
核磁1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：10.77(s,1H),8.84(d,J＝2.1Hz,1H),8.80(d, J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝1.4Hz,1H),8.20(dd,J＝8.1,2.1Hz,1H),8.09(d,J＝8.1Hz,1H),7.94(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.70(d,J＝8.2Hz,1H),7.40-7.53(m,6H),7.31(d,J＝3.5Hz,1H),7.06(d,J＝8.2Hz,2H),6.91(d,J＝8.3Hz,2H),5.89(s,1H),5.11(d,J＝15.4Hz,1H),4.38(d,J＝12.9Hz,1H),4.22(d,J＝15.5Hz,1H),4.00-4.15(m,2H), 3.70-3.78(m,3H),3.05-3.25(m,4H),2.57-2.76(m,4H),1.95-2.18(m,2H),1.75-1.85(m, 2H),1.40-1.55(m,4H),0.86-0.96(m,3H)；
质谱m/z：926.8[M+H]+。
对照例1
2-(6-(4-(4-(2-(2-(2-(2-((2，6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基) 乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)苯基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺。
Figure BDA0003664422910000351
质谱m/z：941.5[M+H]+。
药理实验
1.1细胞培养
将接种Ba/F3-EGFR(T790M/C797S/L858R)过表达细胞(2*10^4个细胞每孔)培养于1640培养基中，培养基中加入1％双抗(链霉素以及青霉素)、10％胎牛血清(FBS)、 1％谷氨酰胺(Glumax)和2ug/ml嘌呤霉素(Puromycin)，培养基置于37℃、5％CO2条件下培养2天，得到培养后的细胞。
1.2化合物准备
Figure BDA0003664422910000361
1)将对照例以及实施例的双功能化合物从10mmol/L储液稀释到1mmol/L，开始 3倍稀释10个浓度；
2)制备空白对照孔，空白对照孔为培养后的细胞加0.1％二甲基亚砜，作为高读值对照孔；
3)将培养后的细胞加1μmol对照例的化合物，作为低读值对照孔；
4)使用Echo 665转移20nl梯度稀释的实施例的化合物到384细胞培养板中，1000rpm离心30s。
1.3细胞铺板
1)收集细胞，并用Hank平衡盐溶液重悬、计数，配制成合适密度的细胞悬液。
2)使用Echo 665转移20nl梯度稀释的化合物(实施例以及对比例的样本)到384细胞培养板中，二甲基亚砜终浓度为0.1％，1000rpm离心30s。
3)每孔加20μl Hank平衡盐溶液重悬的细胞悬液100000/孔细胞到384细胞培养板中。
4)细胞在37℃，5％CO2培养箱中培养24h。
1.4细胞裂解和检测
1)每细胞孔加5μL的5倍稀释的补充裂解缓冲液(Supplemented lysis buffer)，1000 rpm离心30s。350rpm震荡2min，然后冰上孵育30min。
2)转移8μL细胞裂解液到784075板。
3)每孔加4μL受体混合物(Acceptor mix)，1000rpm离心30s。室温孵育1h。
4)每孔加4μL供体混合物(Donor mix)，1000rpm离心30s。室温避光孵育1h。
5)Envision读Alphalisa信号。
数据分析
用GraphPad Prism 8软件对EGFR相对水平进行分析，并得到双功能化合物的DC50值，利用非线性拟合公式来得到双功能化合物的DC50(半数降解浓度)；
降解率(％)＝100-(实施例化合物孔读值-低读值对照孔读值)/(高读值对照孔读值-低读值对照孔读值)*100
高读值对照孔：细胞加20nL二甲基亚砜
低读值对照孔：细胞加20nL对照例化合物
测试结果见表1
表1实施例化合物降解活性
Figure BDA0003664422910000371
由表1可知：本申请的双功能化合物具有较高的降解突变型EGFR效率，表明本申请涉及的双功能化合物能够很好的降低肿瘤细胞EGFR的表达量，由于内磺酰胺的存在，以及不同接头的优化，使得降解效率优于对比例。本发明的双功能分子可以用于治疗EGFR突变相关的肿瘤或癌症疾病，具有良好的应用前景。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。本申请虽然以较佳实施例公开如上，但并不是用来限定权利要求，任何本领域技术人员在不脱离本申请构思的前提下，都可以做出若干可能的变动和修改，因此本申请的保护范围应当以本申请权利要求所界定的范围为准。

Claims (10)

1.一种用于EGFR降解的双功能化合物，或所述双功能化合物的对映异构体、非对映异构体、药学上可接受的盐、前药、同位素衍生物、溶剂化物，其特征在于，所述双功能化合物包括具有式I所示结构的化合物：
Figure FDA0003664422900000011
其中，CRBN配体为与E3泛素连接酶CRBN非共价结合的基团，接头为与上式I中相邻苯环和CRBN配体通过共价键连接的基团；
每个R1独立地选自卤素、羟基、C1-C3烷氧基或氰基；n选自0、1、2或3。
2.根据权利要求1所述的双功能化合物，其特征在于，每个R1独立地选自羟基、甲氧基、氟或氯；n选自0、1或2。
3.根据权利要求1所述的双功能化合物，其特征在于，所述接头选自式L1～式L4所示结构的基团：
Figure FDA0003664422900000012
其中，
Figure FDA0003664422900000013
表示与相邻原子的结合位点；
炔基或芳基与所述双功能化合物中的苯并内磺酰胺结构通过共价键连接；
Z2或碳链与所述双功能化合物中的所述CRBN配体通过共价键连接；
X1选自N或CH；
X2不存在或选自O、S或NR2，且R2选自H、C1-C3烷基；
Y选自CH或N；
Z1选自CH、C-OH或N，Z2选自CH或N；
m选自0、1、2、3、4、5或6。
4.根据权利要求3所述的双功能化合物，其特征在于，其满足以下特征中的至少一种：
(1)X2选自O；
(2)m选自0、1或2。
5.根据权利要求1所述的双功能化合物，其特征在于，所述CRBN配体选自式D1或式D2所示结构的基团：
Figure FDA0003664422900000021
其中，X3选自C(O)或CH2，X4不存在或选自O、NH；
R3选自氢、卤素、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基或氰基。
6.根据权利要求5所述的双功能化合物，其特征在于，其满足以下特征中的至少一种：
(1)X3选自C(O)；
(2)R3选自氢、卤素或氰基。
7.根据权利要求1～6任一项所述的双功能化合物，其特征在于，所述的双功能化合物选自下列化合物中的任意一种：
2-(6-(4-((1-(2-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)氧基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-(3-氟苯基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(6-(4-(2-(2-(2，6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(1-(2-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-苯基-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
2-(6-(4-(4-(2-(2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)乙酰基)-哌嗪-1-基)苯基)-1,1-二氧代苯并[d]异噻唑-2(3H)-基)-2-(5-氟-2-羟基苯基)-N-(噻唑-2-基)乙酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺；
N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)-5-((2-(1-(3-氟苯基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-1,1-二氧代-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)吡啶酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺；
5-((2-(1-(2,5-二氟苯基)-2-氧代-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-1,1-二氧代-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺；
5-((1,1-二氧代-2-(2-氧代-1-苯基-2-(噻唑-2-基氨基)乙基)-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)乙炔基)-N-(1-(2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)苯基)哌嗪-1-基)乙酰基)哌啶-4-基)吡啶酰胺。
8.根据权利要求1～7任一项所述的双功能化合物在制备药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物选自用于调节突变型EGFR蛋白含量与功能的药物，优选为突变型EGFR的降解剂。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述应用选自癌症或增值性疾病，所述癌症选自肺癌、肾细胞癌、皮肤癌、血液肿瘤、乳腺癌、胶质瘤、消化系统肿瘤、生殖系统肿瘤、淋巴瘤、神经系统肿瘤或头颈癌中的至少一种。
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