CN115057831B - 噻二唑类化合物及其在制备kklc1蛋白抑制剂中的应用 - Google Patents

噻二唑类化合物及其在制备kklc1蛋白抑制剂中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115057831B
CN115057831B CN202210524725.5A CN202210524725A CN115057831B CN 115057831 B CN115057831 B CN 115057831B CN 202210524725 A CN202210524725 A CN 202210524725A CN 115057831 B CN115057831 B CN 115057831B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cancer
tumor
kkbc
protein
application
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210524725.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN115057831A (zh
Inventor
刘彩刚
杨永亮
刘洋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shengjing Hospital of China Medical University
Original Assignee
Shengjing Hospital of China Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shengjing Hospital of China Medical University filed Critical Shengjing Hospital of China Medical University
Priority to CN202210524725.5A priority Critical patent/CN115057831B/zh
Publication of CN115057831A publication Critical patent/CN115057831A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115057831B publication Critical patent/CN115057831B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D285/00—Heterocyclic compounds containing rings having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D275/00 - C07D283/00
    • C07D285/01—Five-membered rings
    • C07D285/02—Thiadiazoles; Hydrogenated thiadiazoles
    • C07D285/04—Thiadiazoles; Hydrogenated thiadiazoles not condensed with other rings
    • C07D285/12—1,3,4-Thiadiazoles; Hydrogenated 1,3,4-thiadiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及噻二唑类化合物或其药学上可接受的盐及其在制备KKLC1蛋白抑制剂中的应用。所述噻二唑类化合物结构式如式I所示，其合成工艺简单易于实现，经活性实验验证，本发明制得的噻二唑类化合物与KKLC1靶蛋白具有特异性的结合，对乳腺癌细胞系MDA‑MB‑231细胞及MDA‑MB‑468细胞的活性具备较明显的抑制作用，有望成为新的治疗癌症的候选药物，具有良好的应用前景。

Description

噻二唑类化合物及其在制备KKLC1蛋白抑制剂中的应用
技术领域
本发明属于医药领域，涉及一类新型噻二唑类化合物及其医药用途，具体 涉及噻二唑类化合物及其在制备KKLC1蛋白抑制剂中的应用。
背景技术
KKLC1(Kita-Kyushu Lung Cancer Antigen-1)是由CT83基因表达的蛋白 质,又称为睾丸抗原83蛋白。目前有相关研究表明，KKLC1蛋白的表达量和多 种肿瘤如胃癌、肺癌、乳腺癌等的发生发展密切相关。我们在前期研究中发 现,KKLC蛋白是促进肿瘤细胞生长增殖的分子靶标。
噻二唑类化合物具有多种生物活性，包括抗虫、除草、调节植物生长、抗 菌、抗炎、抗肿瘤、抗结核和酶抑制作用。在抗肿瘤药物研究方面，噻二唑类 化合物也有报道，其中4-芳基-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1,2,3-噻二唑与5- 芳基-4-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1,2,3-噻二唑活性良好(参见：Mao jiang Wu,et al.Bioorganic&Medicinal ChemistryLetters,2007,17,869-873； Boga Ramesh Babu,et al.Biochemistry,1997,36,7209-7216)。中国专利 CN114195735A中公开了一种1,2,3-噻二唑类化合物及其用途，确切地说，涉及5-苯基-4-(4-苯基哌嗪基-1-羰基)-1,2,3-噻二唑类化合物及其作为肿瘤细 胞增殖抑制剂在制备抗肿瘤的药物方面的应用。但上述噻二唑类化合物抗肿瘤 的作用机制尚未明确。
本发明人近来设计出了一类能够作为KKLC1蛋白抑制剂的新型噻二唑类化 合物，现有技术中尚未有此类噻二唑类化合物用作KKLC1蛋白抑制剂以及抗肿 瘤方面的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于克服了现有技术中存在的技术缺陷，设计出了一类能够 作为KKLC1蛋白抑制剂的新型噻二唑类化合物，并将其作为新型癌症治疗候选 物。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案。
在第一个方面中，本发明提供了一种噻二唑类化合物或其药学上可接受的 盐，其结构式如式I所示：
上述式I中，Ar表示C2-C60的取代或未取代的芳环或杂芳环；
所述取代为单取代或多取代；
所述取代的取代基各自独立地为C1-C30烷基、C1-C30烷氧基、卤素取代 的C1-C30烷基、卤素取代的C1-C30烷氧基、卤素、至少含一个杂原子的三元 -六元环取代的C1-C30烷基。
优选地，式I所示噻二唑类化合物或其药学上可接受的盐的结构式如下所 示：
其中，R表示单取代或多取代；
R独立地选自如下基团中的任一种：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤素取代 的C1-C6烷基、卤素取代的C1-C6烷氧基、卤素、至少含一个杂原子的三元- 六元环取代的C1-C6烷基；
优选地，上述结构式中，R独立地选自如下基团中的任一种：氟取代的C1-C6 烷基(如三氟甲基)、甲氧基、氟、氯、溴、甲基、-OCF3、
更优选地，式I所示噻二唑类化合物为如下化合物中的任一种：
在第二个方面中，本发明提供了上述式I所示噻二唑类化合物或其药学上 可接受的盐的制备方法，其通过包括如下步骤的方法制备得到：
将1-茚醇经溴代反应制得1-溴茚中间体1，再与肌氨酸乙酯反应得到中间 体2，中间体2经氢氧化锂处理制得中间体3，中间体3再与草酸单乙酯酰肼 发生酰化反应得到中间体4，中间体4用Lawesson试剂处理制得噻二唑中间体 5，中间体5经氢氧化锂处理制得中间体6，最后与不同的苄胺化合物反应得到 通式I的化合物。
反应式如下：
反应试剂和反应条件:(a)PBr3,DCM,0℃,overnight；(b)Et3N or K2CO3,DMF,60-70℃,overnight；(c)LiOH,THF, H2O,40℃-60℃,overnight；(d)HBTU,DIPEA,DMF,r.t.,3h-5h；(e)Lawesson reagent,THF,40℃,8h-10h；(f)LiOH, THF,H2O,40℃-60℃,overnight；(g)HBTU,DIPEA,DMF,r.t.,3-5h.
其中，Ar的定义同式I中Ar的定义。
在第三个方面中，式I所示噻二唑类化合物或其药学上可接受的盐在制备 如下功能的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
1)在制备体外或体内KKLC1蛋白抑制剂中的应用；
2)在制备真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂中的应用；或
3)在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
1)中，所述真核生物为哺乳动物；优选地，所述哺乳动物为人或非人灵 长类。
所述肿瘤选自头颈部肿瘤、乳腺癌、胃肠道肿瘤、肺癌、肝癌、胰腺癌、 宫颈癌、卵巢癌、肾癌、胆囊癌、甲状腺癌、神经母细胞瘤、膀胱癌、鼻咽癌、 喉癌、结直肠癌、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤因肉瘤、骨肉瘤或血液系统肿瘤；
优选地，所述肿瘤为乳腺癌、肺癌、结直肠癌或肝癌。
更优选地，所述肿瘤为乳腺癌，特别是三阴性乳腺癌。
所述肿瘤细胞优选为乳腺癌细胞，更优选为MDA-MB-231细胞或MDA-MB-468 细胞。
在第四个方面中，本发明还提供一种作为KKLC1蛋白抑制剂或真核生物肿 瘤细胞增殖抑制剂或预防和/或治疗肿瘤的药物。
本发明所提供的作为KKLC1蛋白抑制剂或真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂或 预防和/或治疗肿瘤的药物，以上述式I所示噻二唑类化合物或其药学上可接受的盐为活性成分。
与现有技术比，本发明的有益效果如下：
本发明提供一种全新结构的噻二唑类化合物，其合成工艺简单易于实现， 经活性实验验证，本发明制得的噻二唑类化合物与KKLC1靶蛋白具有特异性的 结合，且化合物TF-1与TF-6小分子药物对MDA-MB-231细胞及MDA-MB-468细 胞的活性具备较明显的抑制作用，有望成为新的治疗乳腺癌的候选药物，具有 良好的应用前景。
附图说明
图1A-J为本发明实施例11中TF-1-TF-10系列化合物对目标靶蛋白的多 浓度梯度结合、解离曲线。
图2A-J为本发明实施例12中TF-1-TF-10系列化合物对MDA-MB-231/468 细胞的活性抑制曲线。
图3A-K为TF-1-TF-10系列化合物裸鼠皮下成瘤后对肿瘤增长的抑制曲 线，L为对照组与应用TF-1化合物组在观察终点时的肿瘤组织大体图片。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的 优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
联系如下实施例，将更好地理解本发明的化合物和他们的制备，这些实施 例旨在阐述而不是限制本发明的范围。
实施例1：化合物TF-1的制备
步骤a：将1-茚醇(10g,74.53mmol,1eq)溶于100mL二氯甲烷， 冰浴条件下逐滴加入三溴化磷(17.5mL,186.33mmol,2.5eq)，滴加完成 后冰浴反应4小时。反应液用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，用二氯甲烷萃取(50mL×2)，合并有机相用饱和食盐水洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠 干燥。减压浓缩除去溶剂后，得黄色油状液体即中间体1(12.46g,85.3％yield)。直接用于下一步反应。
步骤b：将中间体1(10g,51.02mmol,1eq)溶于N,N-二甲基甲酰胺(80 mL)，加入肌氨酸乙酯盐酸盐(9.40g,61.22mmol,1.2eq)和碳酸钾(14.21 g,102.04mmol,2eq)，70℃搅拌过夜。反应结束后加40mL水稀释，并用 乙酸乙酯萃取(40mL×2)，合并有机相后用饱和食盐水洗涤(30mL×2)， 无水硫酸钠干燥。减压浓缩除去溶剂后经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝6:1) 纯化分离得淡黄色油状物即中间体2(9.33g,78.4％yield)。
步骤c：将中间体2(8g,34.31mmol,1eq)溶于四氢呋喃(80mL) 和水(8mL)的混合溶液，加入氢氧化锂(1.24g,51.47mmol,1.5eq)，40℃搅拌过夜。反应结束后减压浓缩移除溶剂，残余物使用乙酸乙酯打浆(30 mL×2)，过滤干燥得淡黄色固体即中间体3(6.37g,87.9％yield)。
步骤d：将中间体3(5g,23.68mmol,1eq)与HBTU(13.47g,35.52 mmol,1.5eq)分散于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)，室温条件下搅拌10分钟。 加入草酸单乙酯酰肼(3.44g,26.05mmol,1.1eq)和N,N-二异丙基乙基胺 (6.20mL,35.52mmol,1.5eq)，室温搅拌4小时。反应结束后使用乙酸 乙酯萃取(40mL×3)，合并有机相后用饱和食盐水洗涤(30mL×2)，无水 硫酸钠干燥。减压浓缩除去溶剂后经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)纯 化分离得淡黄色固体即中间体4(6.17g,81.7％yield)。
步骤e：将中间体4(5g,15.67mmol,1eq)溶于THF(50mL)，加入 Lawesson试剂(9.51g,23.51mmol,1.5eq)，加热回流反应8h。反应结 束后将溶剂减压蒸除，经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化分离得 淡黄色固体即中间体5(3.82g,76.8％yield)。
步骤f：将中间体5(5g,15.77mmol,1eq)溶于四氢呋喃(60mL) 和水(8mL)的混合溶液，加入氢氧化锂(0.57g,23.66mmol,1.5eq)， 40℃搅拌过夜。反应结束后减压浓缩移除溶剂，残余物使用乙酸乙酯打浆(30 mL×2)，过滤干燥得淡黄色固体中间体6(3.88g,83.4％yield)。
步骤g：将中间体6(5g,16.94mmol,1eq)与HBTU(9.64g,25.41mmol, 1.5eq)分散于N,N-二甲基甲酰胺(50mL)，室温条件下搅拌10分钟。加入 4-三氟甲基苄胺(2.89mL,20.33mmol,1.2eq)和N,N-二异丙基乙基胺(4.44 mL,25.41mmol,1.5eq)，室温搅拌4小时。反应结束后使用乙酸乙酯萃取 (40mL×3)，合并有机相后用饱和食盐水洗涤(30mL×2)，无水硫酸钠干 燥。减压浓缩除去溶剂后经硅胶柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)纯化分离得淡黄色固体即化合物TF-1(5.93g,78.5％yield)。
所得目标产物的结构确证数据如下：
HRMS(ESI):m/zcalcd for C22H21F3N4OS 447.1388[M+H]+,found,447.1325.
1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.26(s,1H),7.54(m,2H),7.22-7.26 (m,2H),7.17(m,2H),7.06-7.13(m,2H),4.11(d,J＝6.5Hz,2H),4.04 (m,1H),3.62(s,2H),3.11-3.21(m,2H),2.26(s,3H),1.98-2.23(m, 2H)；
13C NMR(DMSO-d6,150MHz)168.2,168.0,158.9,143.4,141.2,139.9, 129.0,128.5,126.1,124.9,124.5,124.1,75.9,55.6,43.1,42.9,34.3, 27.7.
实施例2、化合物TF-2的制备
参照实施例1的操作，将最后一步的反应物替换为4-甲氧基苄胺。
所得目标产物的结构确证数据如下：
HRMS(ESI):m/zcalcd for C22H24N4O2S 409.1620[M+H]+,found,409.1767.
1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.27(s,1H),7.54(m,2H),7.22-7.28 (m,2H),7.15(m,2H),7.04-7.14(m,2H),4.11(d,J＝6.5Hz,2H),4.04(m,1H),3.81(s,3H),3.63(s,2H),3.11-3.24(m,2H),2.26(s,3H), 1.99-2.25(m,2H)；
13C NMR(DMSO-d6,150MHz)168.5,168.2,158.9,143.4,141.5,139.1, 129.0,127.5,126.1,124.9,124.4,75.9,55.8,55.6,43.1,42.6,34.3, 27.5.
实施例3、化合物TF-3的制备
参照实施例1的操作，将最后一步的反应物替换为4-氟苄胺。
所得目标产物的结构确证数据如下：
HRMS(ESI):m/zcalcd for C21H21FN4OS 397.1420[M+H]+,found,397.1525.
1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.26(s,1H),7.54(m,2H),7.25-7.28 (m,2H),7.17(m,2H),7.06-7.13(m,2H),4.11(d,J＝6.5Hz,2H),4.04(m,1H),3.62(s,2H),3.11-3.21(m,2H),2.26(s,3H),1.98-2.23(m, 2H)；
13C NMR(DMSO-d6,150MHz)168.2,168.0,158.9,143.4,141.2,139.9, 129.0,128.5,126.1,124.9,124.5,75.9,55.6,43.1,42.9,34.3,27.7.
实施例4、化合物TF-4的制备
参照实施例1的操作，将最后一步的反应物替换为4-氯苄胺。
所得目标产物的结构确证数据如下：
HRMS(ESI):m/zcalcd for C21H21ClN4OS 413.1125[M+H]+,found, 413.1235.
1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.26(s,1H),7.54(m,2H),7.25-7.28 (m,2H),7.17(m,2H),7.06-7.13(m,2H),4.12(d,J＝6.5Hz,2H),4.04(m,1H),3.62(s,2H),3.11-3.21(m,2H),2.26(s,3H),1.98-2.23(m, 2H)；
13C NMR(DMSO-d6,150MHz)168.2,168.0,158.9,143.4,141.2,139.9, 129.0,128.5,126.1,124.9,124.5,75.9,55.6,43.1,42.9,34.3,27.7.
实施例5、化合物TF-5的制备
参照实施例1的操作，将最后一步的反应物替换为4-溴苄胺。
所得目标产物的结构确证数据如下：
HRMS(ESI):m/zcalcd for C21H21BrN4OS 457.0619[M+H]+,found, 457.0668.
1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.26(s,1H),7.54(m,2H),7.25-7.28 (m,2H),7.17(m,2H),7.06-7.13(m,2H),4.11(d,J＝6.5Hz,2H),4.04(m,1H),3.62(s,2H),3.11-3.21(m,2H),2.26(s,3H),1.98-2.23(m, 2H)；
13C NMR(DMSO-d6,150MHz)168.2,168.0,158.9,143.4,141.2,139.9, 129.0,128.5,126.1,124.9,124.5,75.9,55.6,43.1,42.9,34.3,27.7.
实施例6、化合物TF-6的制备
参照实施例1的操作，将最后一步的反应物替换为4-甲基苄胺。
所得目标产物的结构确证数据如下：
HRMS(ESI):m/zcalcd for C22H24N4OS 393.1671[M+H]+,found,393.1660.
1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.27(s,1H),7.54(m,2H),7.25-7.28 (m,2H),7.17(m,2H),7.06-7.13(m,2H),4.12(d,J＝6.5Hz,2H),4.04(m,1H),3.62(s,2H),3.11-3.21(m,2H),2.26(s,3H),2.03(s,3H), 1.98-2.23(m,2H)；
13C NMR(DMSO-d6,150MHz)168.2,168.0,158.9,143.4,141.2,139.9, 129.0,128.5,126.1,124.9,124.5,75.9,55.6,43.1,42.9,36.5,34.3, 27.7.
实施例7、化合物TF-7的制备
参照实施例1的操作，将最后一步的反应物替换为4-三氟甲基醚苄胺。
所得目标产物的结构确证数据如下：
HRMS(ESI):m/zcalcd for C22H21F3N4O2S 463.1337[M+H]+,found, 463.1638.
1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.27(s,1H),7.54(m,2H),7.25-7.28 (m,2H),7.17(m,2H),7.06-7.13(m,2H),4.12(d,J＝6.5Hz,2H),4.04(m,1H),3.62(s,2H),3.11-3.21(m,2H),2.26(s,3H),1.98-2.23(m, 2H)；
13C NMR(DMSO-d6,150MHz)168.2,168.0,158.9,143.4,141.2,139.9, 129.0,128.5,126.7,126.1,124.9,124.5,75.9,55.6,43.1,42.9,34.3, 27.7.
实施例8、化合物TF-8的制备
参照实施例1的操作，将最后一步的反应物替换为4-(吗啉-4-基甲基)苄 胺。
所得目标产物的结构确证数据如下：
HRMS(ESI):m/zcalcd for C26H31N5O2S 478.2198[M+H]+,found,478.2265.
1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.27(s,1H),7.54(m,2H),7.25-7.28 (m,2H),7.17(m,2H),7.06-7.13(m,2H),4.12(d,J＝6.5Hz,2H),4.04(m,1H),3.66(s,2H),3.62(s,2H),3.57(m,4H)3.11-3.21(m,2H), 2.42(m,4H),2.26(s,3H),1.98-2.23(m,2H)；
13C NMR(DMSO-d6,150MHz)168.2,168.0,158.9,143.4,141.2,139.9, 129.0,128.5,126.7,126.1,124.9,124.5,75.9,66.7,55.7,55.6,43.1, 42.9,34.3,27.7.
实施例9、化合物TF-9的制备
参照实施例1的操作，将最后一步的反应物替换为2,4-二甲氧基苄胺。
所得目标产物的结构确证数据如下：
HRMS(ESI):m/zcalcd for C23H26N4O3S 439.1726[M+H]+,found,439.1754.
1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.27(s,1H),7.54(m,2H),7.25-7.28 (m,2H),7.17(m,1H),7.06-7.13(m,2H),4.12(d,J＝6.5Hz,2H),4.04(m,1H),3.84(s,3H),3.72(s,3H),3.62(s,2H),3.11-3.21(m,2H), 2.26(s,3H),1.98-2.23(m,2H)；
13C NMR(DMSO-d6,150MHz)168.2,168.0,158.9,143.4,141.2,139.9,129.0,128.5,126.7,126.1,124.9,124.5,75.9,56.1,55.8,55.6,43.1, 42.9,34.3,27.7.
实施例10、化合物TF-10的制备
参照实施例1的操作，将最后一步的反应物替换为2,4,5-三氟苄胺。
所得目标产物的结构确证数据如下：
HRMS(ESI):m/zcalcd for C21H19F3N4OS 433.1232[M+H]+,found,433.1309.
1H NMR(DMSO-d6,600MHz)δ9.27(s,1H),7.54(m,2H),7.25-7.28 (m,2H),7.17(m,1H),7.06-7.13(m,1H),4.12(d,J＝6.5Hz,2H),4.04(m,1H),3.62(s,2H),3.11-3.21(m,2H),2.26(s,3H),1.98-2.23(m, 2H)；
13C NMR(DMSO-d6,150MHz)168.2,168.0,158.9,143.4,141.2,139.9, 129.0,128.5,126.7,126.1,124.9,124.5,75.9,56.1,43.1,42.9,34.3, 27.7.
实施例11、小分子化合物与靶蛋白的亲和力检测
TF-1-TF-10系列化合物对靶蛋白KKLC1的亲和性的检测采用生物膜干涉 法(BLI，Biolayer interference)进行。K2系统(Molecular Device, ForteBIO,USA)适用于蛋白质-蛋白质或蛋白质-小分子结合动力学和结合亲和 力的表征，该方法由以下步骤组成:1.首先是蛋白质和BLI传感器制备：重组 蛋白KKLC1(50μg/mL)在生物素的作用下室温生物素化45min；然后，通过重 力脱盐柱去除多余的生物素；而后将重组蛋白KKLC1固定在超级链霉亲和素传 感器(SSA,super streptavidin,ForteBIO,USA)上并将固化了蛋白的传感器 预先用PBS润湿；2.BLI实验过程：使用/>K2系统(Molecular DevicesForteBIO,USA)进行自动检测。首先用动态缓冲液将TF-1-TF-10小分子分别 制备成20μm、10μm、5μm、2.5μm、1.25μm浓度的待检测溶液，体系均为200μL。将不同浓度梯度的小分子药物加入96孔板中，在25℃下连续运行，振荡速度 为1000rpm，随后带有KKLC1蛋白的固化探头会依次通过不同浓度小分子药物孔及缓冲液孔。在缓冲液中获得基线读数(60s)，在含化合物的孔中获得结合 读数(180s)，在缓冲液中获得解离读数(120s)。3.数据处理：首先，会在4 个探针上得到4组读数:(a)固定蛋白的传感器在含药物的动力学缓冲液的读 数；(b)未固定蛋白的参比传感器在含药物的动力学缓冲液中的读数；(c)固定 蛋白的传感器在不含药物的动力学缓冲液的读数和(d)未固定蛋白的参比传感 器在不含药物的动力学缓冲液的读数。最后的值用公式(a-c)-(b-d)计算。这 种方法消除了传感器和含药缓冲液体的干扰。利用/>HT V10.0软件对结 合信号进行识别和分析，最终求出每个药物的是否与靶蛋白存在特异性结合及 结合-解离常数(KD)。数据展示的纵坐标为仪器在每个监测时间点的Response 信号值，横坐标为结合/解离反应的时间(s)。
实验结果如图1所示：其中小分子药物TF-1，TF-3，TF-4，TF-6与靶蛋 白具有特异性的结合(结合信号高度大于0.02nm，且具有浓度依赖性的信号升 高，图1A，C，D，F)，结合信号强度分别为2.9×10-6mol/L，9.3×10-6mol/L， 4.9×10-5mol/L，4.4×10-6mol/L。其中TF-1与靶蛋白的结合能力最佳。
实施例12、小分子化合物对MDA-MB-231与MDA-MB-468细胞的活性影响的 检测
将MDA-MB-231细胞与MDA-MB-468细胞(购买于美国模式培养物保藏所 (AmericanType Culture Collection,ATCC))铺于96孔板中，每孔5000 个细胞。将小分子药物溶解于含2％血清及0.1％DMSO的L15或DMEM培养基中， 配置成浓度梯度分别为25μm、12.5μm、6.25μm、3.125μm、1.5625μm，对照孔 使用2％血清及0.1％DMSO的L15或DMEM培养基，每种浓度梯度设置3个复孔。 加入药物后，处理48h，随后弃掉培养基，随后加入与无血清L15或DMEM培养 基1:10混合的CCK8试剂(Takara)，避光37℃孵育2h后，用酶标仪检测在 450nm波长下的吸光度值。经过各个浓度孔与对照孔的比值，求出各个药物浓 度下的细胞相对活性。随后将每个小分子药物在不同浓度下的相对活性，在GraphPad Prism(Version8.0)中用非线性拟合的方式进行IC50值的计算。数 据展示为均值±标准差,纵坐标为相对活性值，横坐标为Log(浓度μm+1)。
实验结果如图2所示：TF-1与TF-6小分子药物对MDA-MB-231细胞及 MDA-MB-468细胞的活性具备较明显的抑制作用，其中TF-1对MDA-MB-231细胞 及MDA-MB-468细胞的IC50浓度分别约为9.5μm，12.3μm(图2A)。TF-6对 MDA-MB-231细胞及MDA-MB-468细胞的IC50浓度分别约为26.0μm，20.1μm(图 2F)。其余小分子化合物对MDA-MB-231细胞及MDA-MB-468细胞未见明显的活 性抑制作用(图2B-E，G-J)。
实施例13、小分子化合物对MDA-MB-231所形成肿瘤的在体抑制作用检测
消化MDA-MB-231肿瘤细胞，将1×106个细胞重悬于100μL PBS中，通过 0.5mm注射器接种与4周龄雌性裸鼠(购自辽宁长生生物技术股份有限公司) 左侧腋窝后皮下，制作原位成瘤模型。每个化合物的检测使用10只裸鼠，其 中5只用于腹腔注射对照药物，5只腹腔注射小分子化合物。待皮下肿物的平 均体积达到50mm3时开始给药。对照组注射含有1％DMSO的生理盐水100μL；应 用小分子药物组，腹腔注射溶解于含1％DMSO生理盐水的小分子药物100μL，所 有小分子化合物浓度均在20mg/kg，给药间隔为每2天给药一次。随着给药，每隔4天进行一次肿瘤体积监测，测量肿物的长(a)短(b)径，共给药观察 32天，肿瘤的体积按照a×b2/2进行计算。数据展示为均值±标准差，纵坐标 为肿瘤体积(mm3)，横坐标为开始监测的时间(天)，统计学差异由卡方检验 进行判定。
实验结果如图3所示：肿瘤生长曲线显示，当用药剂量为20mg/kg时，TF-1 与TF-6可在体内实验抑制MDA-MB-231所形成肿瘤的增长(图3A，F，K)，其 中TF-1小分子的抑制效果最好(图3A，K)，其余小分子药物对MDA-MB-231 细胞所形成肿瘤的增长无明显抑制作用(图3B-E,G-J)。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发 明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及 其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (6)

1.如下任一种噻二唑类化合物在制备如下功能的产品中的应用；
1)在制备体外或体内KKLC1蛋白抑制剂中的应用；
2)在制备真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂中的应用；或
3)在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用；
所述肿瘤由KKLC1蛋白表达引发；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述真核生物为哺乳动物，
所述肿瘤选自头颈部肿瘤、乳腺癌、胃肠道肿瘤、肺癌、肝癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肾癌、胆囊癌、甲状腺癌、神经母细胞瘤、膀胱癌、鼻咽癌、喉癌、结直肠癌、黑色素瘤、横纹肌肉瘤、尤因肉瘤、骨肉瘤或血液系统肿瘤。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述肿瘤为乳腺癌、肺癌、结直肠癌或肝癌。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述肿瘤为乳腺癌。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述肿瘤为三阴性乳腺癌。
6.制备权利要求1中噻二唑类化合物的方法，包括如下步骤：将1-茚醇经溴代反应制得1-溴茚中间体1，再与肌氨酸乙酯反应得到中间体2，中间体2经氢氧化锂处理制得中间体3，中间体3再与草酸单乙酯酰肼发生酰化反应得到中间体4，中间体4用Lawesson试剂处理制得噻二唑中间体5，中间体5经氢氧化锂处理制得中间体6，最后与化合物Ar-CH2-NH2反应，即得；
反应式如下：
其中，Ar为如下任意一种：
CN202210524725.5A 2022-05-13 2022-05-13 噻二唑类化合物及其在制备kklc1蛋白抑制剂中的应用 Active CN115057831B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210524725.5A CN115057831B (zh) 2022-05-13 2022-05-13 噻二唑类化合物及其在制备kklc1蛋白抑制剂中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210524725.5A CN115057831B (zh) 2022-05-13 2022-05-13 噻二唑类化合物及其在制备kklc1蛋白抑制剂中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115057831A CN115057831A (zh) 2022-09-16
CN115057831B true CN115057831B (zh) 2023-08-04

Family

ID=83198920

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210524725.5A Active CN115057831B (zh) 2022-05-13 2022-05-13 噻二唑类化合物及其在制备kklc1蛋白抑制剂中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115057831B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116908468B (zh) * 2023-07-11 2024-03-19 山东大学 一种基于分子相互作用表征中药及其有效成分性味作用的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106008557A (zh) * 2016-07-26 2016-10-12 沈阳药科大学 3,6-二芳基-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二唑类化合物作为肿瘤细胞增殖抑制剂的用途
CN109824621A (zh) * 2019-03-28 2019-05-31 中国药科大学 噁二唑类和噻二唑类化合物及其制备方法和用途
CN112661812A (zh) * 2021-03-17 2021-04-16 南京鼓楼医院 一种kk-lc-1抗原靶向结合肽及其衍生物、探针与应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010132867A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Irx Therapeutics, Inc. Vaccine immunotherapy
CA3021898A1 (en) * 2016-04-26 2017-11-02 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-kk-lc-1 t cell receptors

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106008557A (zh) * 2016-07-26 2016-10-12 沈阳药科大学 3,6-二芳基-[1,2,4]三氮唑并[3,4-b][1,3,4]噻二唑类化合物作为肿瘤细胞增殖抑制剂的用途
CN109824621A (zh) * 2019-03-28 2019-05-31 中国药科大学 噁二唑类和噻二唑类化合物及其制备方法和用途
CN112661812A (zh) * 2021-03-17 2021-04-16 南京鼓楼医院 一种kk-lc-1抗原靶向结合肽及其衍生物、探针与应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
产品目录;Enamine LLC;数据库Registry（在线）;CAS号为2680529-16-0、1298924-37-4 、1197833-41-2 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN115057831A (zh) 2022-09-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3070089B1 (en) Aminomethyl tryptanthrin derivative, preparation method and application thereof
BR112018008880B1 (pt) 7-(tiazol-5-il) pirrolopirimidina, seu uso, e composição farmacêutica
EP3495354A1 (en) Ido1 inhibitor and preparation method and application thereof
JP2016535788A5 (zh)
CN110099900B (zh) 针对Smoothened突变株的刺猬通路抑制剂
CN112300153B (zh) 一种杂环化合物、药物组合物和用途
CN112745335A (zh) 一种三并杂环化合物及其用途
CN115057831B (zh) 噻二唑类化合物及其在制备kklc1蛋白抑制剂中的应用
CN114667289A (zh) 杂芳基血浆激肽释放酶抑制剂
CN113024544A (zh) 一种含氰基并杂环化合物及其用途
CN114920704B (zh) 一种苯基哌嗪喹唑啉类化合物或其药学上可接受的盐、制法与用途
CN113880772B (zh) 一类cdk激酶抑制剂及其应用
CN115353508A (zh) 5-吡啶-1h-吲唑类化合物、药物组合物和应用
KR20200041336A (ko) 지방성 간 질환의 치료제 및 비만증의 치료제
CN109678815A (zh) N-苄基苯甲酰胺类衍生物及其制备方法与制药用途
CN109810100A (zh) 含有苯并呋喃的parp-1和pi3k双靶点抑制剂
CN111943906B (zh) 脒类衍生物、及其制法和药物组合物与用途
CN108191849B (zh) 一种抗表皮生长因子受体耐药性突变抑制剂的制备方法、相关中间体及应用
US20230029066A1 (en) Crystal forms of fused ring compound, and composition thereof, preparation method therefor and application thereof
CN113429351A (zh) 一类hdac与jak双重靶向的抑制剂、制备方法及应用
CN112961081B (zh) 一种联苯甲酰胺脲类化合物及其制备方法和应用
CN111217821B (zh) 系列二噁烷并喹唑啉衍生物的制备方法
CN112574094B (zh) 吲哚酮衍生物及其制药用途
CN110590807B (zh) 一种噻吩并[3,2-d]嘧啶类衍生物及其应用
CN109549931B (zh) 一种抗肿瘤药物的冻干粉剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant