CN115054703A - 具有近红外光响应性和靶向性的脂质体、制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有近红外光响应性和靶向性的脂质体、制备方法及应用。本发明所述的脂质体为表面接枝有CD68抗体的Ce6脂质体；所述Ce6脂质体含有疏水性光敏剂，所述Ce6脂质体包含摩尔比为50～80:25～35:2.5～3.5:3.5～4.5的磷脂、胆固醇、DSPE‑PEG2000‑COOH和疏水性光敏剂。本发明制备的脂质体经近红外激光照射后，脂质体表面修饰的CD68抗体可以靶向泡沫细胞，在光敏剂与氧分子的作用下，释放Ce6增强光动力治疗(PDT)作用，促进泡沫细胞自噬，稳定斑块。同时，该方法制备技术简单、可重复性强，使用具有良好生物相容性的材料，可通过正常的生理途径代谢和排泄，避免在体内堆积。

Description

具有近红外光响应性和靶向性的脂质体、制备方法及应用
技术领域
本发明属于生物医用材料技术领域，具体涉及具有近红外光响应性和靶向性的脂质体、制备方法及应用。
背景技术
动脉粥样硬化是一种慢性累积性炎症疾病，病理特征是动脉内膜中的脂质不断积聚，继而在血管壁上形成稳定的斑块。动脉粥样硬化是引发心血管疾病的主要因素，也是导致全球老年人死亡的主要原因。药物治疗是目前抗动脉粥样硬化治疗的首选，但会引起耐药性和其他副作用，同时，传统的临床药物，如阿托伐他汀和辛伐他汀，不能完全消除斑块。为了解决上述问题，迫切需要开发新的有效策略来提高当前动脉粥样硬化治疗的效果。
光动力疗法(PDT)是一种新兴的治疗慢性炎症疾病的方法，涉及光敏剂和对应波长的激光照射。二氢卟吩e6(Ce6)是一种被广泛使用的光敏剂，具有低细胞毒性和深层组织渗透性，常被用于疾病治疗。在660nm激光照射下，Ce6可以激活并选择性地聚集在靶点位置，然后诱导活性氧(ROS)的产生，以促进细胞自噬和凋亡。如何通过Ce6的可控释放来积极地靶向斑块部位，以获得一种新的抗动脉粥样硬化疗法仍然是一个巨大的挑战。
在过去几十年中，纳米给药系统已被广泛开发用于诱导光敏剂释放，以最大限度地提高斑块部位的光敏剂浓度，减少光敏剂泄漏的脱靶效应。临床前研究表明，脂质体作为一种有效的纳米给药系统，因其高生物相容性、低细胞毒性和优异的靶向性而备受学者关注。近年来的研究表明，以Ce6为激光信号的脂质体可以靶向肿瘤中的炎症部位。然而，这些研究很少应用于动脉粥样硬化治疗。基于PDT潜在的应用，Ce6纳米递送系统是一种很有前景的递送系统，有望实现动脉粥样硬化的治疗。
脂质体的表面修饰，靶向给药在动脉粥样硬化治疗中起着重要作用。脂质体通过将特异性的抗体偶联到脂质体上，能够靶向特定受体。CD68作为一种特异性的靶点，在动脉粥样硬化斑块的活化巨噬细胞上高度表达，一旦脂质体与靶向的特定受体结合，它就可以与巨噬细胞衍生的泡沫细胞结合被内化。随后，诱使光敏剂集中聚集在斑块部位，通过光动力作用，发挥治疗效果。
由于Ce6的疏水性，给静脉注射带来了挑战，因此设计一种有效的纳米递送系统就显得十分必要，结合动脉粥样硬化部位中的泡沫细胞靶点，通过特异性靶向将光敏剂递送至斑块位置以发挥光动力作用稳定斑块，治疗动脉粥样硬化。
发明内容
发明目的：为了解决上述问题，本发明提供了一种具有近红外光响应性和靶向性的脂质体、制备方法及应用，通过脂质体来包裹Ce6，增加载药量，并通过共价键在Ce6脂质体表面进一步接枝CD68，将特异性靶向给药与PDT相结合，以增强Ce6在泡沫细胞中的滞留，以在抗动脉粥样硬化治疗中发挥积极作用。
技术方案：本发明所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，所述脂质体为表面接枝有CD68抗体的Ce6脂质体；所述Ce6脂质体含有疏水性光敏剂，所述Ce6脂质体包含摩尔比为50～80:25～35:2.5～3.5:3.5～4.5的磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-COOH和疏水性光敏剂。
作为本发明的一种优选实施方式，所述Ce6脂质体包含摩尔比为50～80:30:3:4的磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-COOH和疏水性光敏剂。
作为本发明的一种优选实施方式，所述CD68抗体通过CD68抗体的氨基末端共价键接枝至Ce6脂质体表面的羧基。
作为本发明的一种优选实施方式，所述的磷脂选自卵磷脂、氢化卵磷脂或脑磷脂。
作为本发明的一种优选实施方式，所述疏水性光敏剂选自二氢卟吩e6、血卟啉单甲醚、金属卟啉或叶绿素。
作为本发明的一种优选实施方式，所述CD68抗体与所述Ce6脂质体的质量比为4～8:2.5～4.5μg/mg。
作为本发明的一种优选实施方式，所述脂质体通过以下方法制备：将磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-COOH和疏水性光敏剂混合，加入有机溶剂，通过薄膜选蒸法制备Ce6脂质体，将具有氨基末端的CD68抗体通过共价键接枝至Ce6脂质体表面的羧基，得到具有近红外光响应性和靶向性的脂质体。
作为本发明的一种优选实施方式，所述Ce6脂质体在共价接枝前，加入EDC和NHS进行活化。
本发明所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将摩尔比为50～80:25～35:2.5～3.5:3.5～4.5的磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-COOH和疏水性光敏剂混合，加入有机溶剂，通过薄膜蒸发法制备Ce6脂质体；
(2)加入EDC和NHS至Ce6脂质体中，活化Ce6脂质，将具有特异靶向性的CD68抗体与活化后的脂质体共价接枝得到具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，CD68抗体与Ce6脂质体的反应的比例为4～8:2.5～4.5μg/mg。
作为本发明的一种优选实施方式，所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体通过以下方法制备：
(1)将磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-COOH和疏水性光敏剂加到圆底烧瓶中，加入甲醇和氯仿混合溶液，常温超声至完全溶解，置于旋转蒸发仪中，25～30℃，20～30rpm/min旋蒸挥发有机溶剂形成一层薄膜，真空干燥过夜，采用PBS溶液将膜洗脱，搅拌水化0.5～1.5h，再用超声波细胞破碎仪冰浴超声，经0.45μm滤膜过滤，得到载有Ce6的光动力介导的Ce6脂质体，整个过程在避光条件下进行；
(2)取制备的Ce6脂质体，加入0.5M的EDC和0.5M的NHS到Ce6脂质体中，活化，加入CD68抗体，4℃反应过夜，反应后透析，去除多余的EDC和NHS，即得具有近红外光响应性和靶向性的多功能脂质体。
作为本发明的另一种优选实施方式，所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体通过以下方法制备：
(1)将氢化卵磷脂(HSPC)、胆固醇(Chol)、DSPE-PEG2000-COOH和疏水性光敏剂加到圆底烧瓶中，加入甲醇和氯仿混合溶液(V:V＝1:1)，常温超声至完全溶解，置于旋转蒸发仪中旋蒸挥发有机溶剂形成一层薄膜(30℃，30rpm/min)，真空干燥过夜，采用0.01M PBS溶液将膜洗脱，37℃，800rpm/min搅拌水化0.5～1.5h，再用超声波细胞破碎仪冰浴超声10min(超声功率100-300W)，经0.45μm滤膜过滤，即得载有Ce6的光动力介导的脂质体，整个过程在避光条件下进行；
(2)取制备的Ce6脂质体，加入0.5M的EDC和0.5M的NHS到Ce6脂质体中，30℃活化4h，加入CD68抗体，4℃反应过夜，透析24h，去除多余的EDC和NHS，得到具有近红外光响应性和特异靶向性的多功能脂质体，整个过程在避光条件下进行。
作为本发明的一种优选实施方式，CD68抗体与Ce6脂质体反应的比例为4-8μgCD68抗体/mL脂质体。
上述方法制备的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，脂质体的粒径尺寸为190～200nm。
发明原理：脂质体的外部是疏水性的脂质，Ce6光敏剂是疏水性的，通过自组装包载进脂质体的磷脂双分子层中。CD68抗体提供氨基，与脂质体DSPE-PEG2000-COOH结合是通过其官能团氨基与Ce6脂质体表面的羧基发生共价交联，形成稳定的酰胺键，CD68抗体结合到Ce6脂质体表面，有利于泡沫细胞表面受体识别与摄取，发挥PDT作用。
本发明所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体在药物载体中的应用。
作为本发明的一种优选实施方式，所述的应用为在660nm激光照射20～30s。
有益效果：(1)本发明制备的具有近红外光响应性和特异靶向性的多功能脂质体，制备技术简单、可重复性强，使用具有良好生物相容性的材料，可通过正常的生理途径代谢和排泄，避免在体内堆积；(2)本发明制备的具有近红外光响应性和特异靶向性的多功能脂质体经近红外激光照射后，脂质体表面修饰的CD68抗体可以靶向泡沫细胞，在光敏剂与氧分子的作用下，释放Ce6增强PDT作用，促进泡沫细胞自噬，稳定斑块。
附图说明
图1为实施例3具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的制备示意图；
图2为实施例3的Ce6脂质体的粒径分布图；
图3为实施例3的CD68脂质体的粒径分布图；
图4为实施例3的CD68脂质体的SDS-PAGE结果；
图5为实施例3的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的流式细胞摄取结果；
图6为实施例3的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的泡沫细胞自噬蛋白表达结果。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，包括如下步骤：
实施例1：具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的制备
(1)Ce6脂质体的制备：精密称量HSPC 30mg、Chol 6mg、DSPE-PEG2000-COOH 4mg、和疏水性光敏剂Ce6 1.2mg于圆底烧瓶中，加入到5mL甲醇和氯仿混合溶液(V:V＝1:1)，常温超声至完全溶解，置于旋转蒸发仪中旋蒸挥发有机溶剂形成一层薄膜(30℃，30rpm/min)。真空干燥过夜，采用10mL 0.01M PBS溶液将膜洗脱，37℃，800rpm/min搅拌水化0.5h，再用超声波细胞破碎仪冰浴超声10min(超声功率300W)，经0.45μm滤膜过滤，即得所述载有Ce6的光动力介导的脂质体，整个过程在避光条件下进行。
(2)具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的制备：取1mL制备的Ce6脂质体，加入10μL 0.5M的EDC和10μL 0.5M的NHS到Ce6脂质体中，30℃活化4h，加入8μg CD68抗体，4℃反应过夜，透析24h，去除多余的EDC和NHS。即得所述具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，整个过程在避光条件下进行。
实施例2：具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的制备
(1)Ce6脂质体的制备：精密称量HSPC 24mg、Chol 6mg、DSPE-PEG2000-COOH 4mg、和疏水性光敏剂Ce6 1.2mg于茄形瓶中，加入到5mL甲醇和氯仿混合溶液(V:V＝1:1)，常温超声至完全溶解，置于旋转蒸发仪中旋蒸挥发有机溶剂形成一层薄膜(30℃，30rpm/min)。真空干燥过夜，采用10mL 0.01M PBS溶液将膜洗脱，37℃，800rpm/min搅拌水化1h，再用超声波细胞破碎仪冰浴超声10min(超声功率200W)。经0.45μm滤膜过滤，即得所述载有Ce6的光动力介导的脂质体，整个过程在避光条件下进行。
(2)具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的制备：取1mL制备的Ce6脂质体，加入10μL 0.5M的EDC和10μL 0.5M的NHS到Ce6脂质体中，30℃活化4h，加入6μg CD68抗体，4℃反应过夜，透析24h，去除多余的EDC和NHS。即得所述具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，整个过程在避光条件下进行。
实施例3：具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的制备
(1)Ce6脂质体的制备：精密称量HSPC 18mg、Chol 6mg、DSPE-PEG2000-COOH 4mg、和疏水性光敏剂Ce6 1.2mg于茄形瓶中，加入到5mL甲醇和氯仿混合溶液(V:V＝1:1)，常温超声至完全溶解，置于旋转蒸发仪中旋蒸挥发有机溶剂形成一层薄膜(30℃，30rpm/min)。真空干燥过夜，采用10mL 0.01M PBS溶液将膜洗脱，37℃，800rpm/min搅拌水化1.5h，再用超声波细胞破碎仪冰浴超声10min(超声功率100W)。经0.45μm滤膜过滤，即得所述载有Ce6的光动力介导的脂质体，整个过程在避光条件下进行。
(2)具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的制备：取1mL制备的Ce6脂质体，加入10μL 0.5M的EDC和10μL 0.5M的NHS到Ce6脂质体中，30℃活化4h，加入4μg CD68抗体，4℃反应过夜，透析24h，去除多余的EDC和NHS。即得具有近红外光响应性和靶向性的脂质体(CD68脂质体)，整个过程在避光条件下进行。
实施例4：实施例3制备的CD68脂质体的SDS-PAGE结果
取CD68抗体、Ce6脂质体和CD68脂质体10μL溶解在上样缓冲液中，然后在100℃下煮沸5min，加10μL样品到预制胶中，120V电压跑胶，结束后通过蛋白质条带分析证明CD68与脂质体之间的偶联以及CD68脂质体中抗体的完整性。
结果如图4所示，CD68脂质体中有一条分子量约为55kDa的条带，与天然CD68抗体的条带结果一致且Ce6脂质体对照组未出现蛋白条带。说明CD68抗体有效地接枝到Ce6脂质体上。
实施例5：对实施例3制备的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的摄取实验
将25μg/mL氧化性低密度脂蛋白诱导48h的泡沫细胞以4×105个细胞/mL的密度接种于6孔板中，去掉培养基，添加浓度为15μg/mL的2mL脂质体溶液，37℃下培养4h后，660nm激光照射20s，并在37℃下培养2h。然后，弃去脂质体溶液，细胞刮刀刮取收获细胞，PBS洗涤三次，1000rpm/min离心5min收集细胞，用100μL PBS重悬。取20μL PBS溶液，通过流式细胞仪分析FL3-A通道Ce6荧光强度。
结果如图5所示，脂质体经激光照射后，荧光强度明显增强，这表明激光照射一定程度上可以改善泡沫细胞对Ce6的摄取。此外，CD68脂质体的荧光明显高于Ce6脂质体，这是因为泡沫细胞膜表面高表达CD68受体，会增加脂质体对Ce6的摄取。
实施例6：对实施例3制备的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体对泡沫细胞自噬蛋白表达WB分析实验
将25μg/mL氧化性低密度脂蛋白诱导48h的泡沫细胞以4×105个细胞/mL的密度接种于6孔板中，去掉培养基，添加2mL浓度为15μg/mL脂质体溶液共培养4h。660nm激光照射20s后，共同孵育10min后，将150μL RIPA裂解缓冲液添加到6孔板中，从泡沫细胞中提取总蛋白质，然后使用Bicinchonic acid(BCA)试剂盒在562nm处测定收集的蛋白质的OD值。凝胶电泳后，将20μg蛋白质样品转移到0.22mm聚偏氟乙烯膜(PVDF)上，然后用5％低脂牛奶封闭蛋白质样品，用Tris吐温20缓冲液(TBST)稀释1h，并在4℃下用一级抗体培养PVDF膜过夜。然后用TBST清洗PVDF膜3次，用辣根过氧化物酶(HRP)结合的二级抗体培养室温1h。在用TBST清洗三次后，根据增强化学发光试剂检测偶联物。抗p62和LC3按照1：1000稀释。抗GAPDH抗体按照1:6000稀释。HRP结合的小鼠和兔二抗按照1:6000稀释，使用Image J软件分析结果。
结果如图6所示，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ是自噬体形成的明显标志物，p62蛋白在自噬过程中会降解。激光照射后，光动力介导的脂质体相比于空白脂质体LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达增加，p62蛋白表达减少，表明光动力促进了自噬的发生。同时CD68脂质体中的自噬蛋白表达最强，说明CD68脂质体显著促进了泡沫细胞自噬。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (10)

1.一种具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，其特征在于，所述脂质体为表面接枝有CD68抗体的Ce6脂质体；所述Ce6脂质体含有疏水性光敏剂，所述Ce6脂质体包含摩尔比为50～80:25～35:2.5～3.5:3.5～4.5的磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-COOH和疏水性光敏剂。
2.根据权利要求1所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，其特征在于，所述CD68抗体通过CD68抗体的氨基末端共价键接枝至Ce6脂质体表面的羧基。
3.根据权利要求1所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，其特征在于，所述的磷脂选自卵磷脂、氢化卵磷脂或脑磷脂。
4.根据权利要求1所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，其特征在于，所述疏水性光敏剂选自二氢卟吩e6、血卟啉单甲醚、金属卟啉或叶绿素。
5.根据权利要求1所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，其特征在于，所述CD68抗体与所述Ce6脂质体的质量比为4～8:2.5～4.5μg/mg。
6.根据权利要求1所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，其特征在于，所述脂质体通过以下方法制备：将磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-COOH和疏水性光敏剂混合，加入有机溶剂，通过薄膜选蒸法制备Ce6脂质体，将具有氨基末端的CD68抗体通过共价键接枝至Ce6脂质体表面的羧基，得到具有近红外光响应性和靶向性的脂质体。
7.根据权利要求6所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，其特征在于，所述Ce6脂质体在共价接枝前，加入EDC和NHS进行活化。
8.一种如权利要求1所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将摩尔比为50～80:25～35:2.5～3.5:3.5～4.5的磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-COOH和疏水性光敏剂混合，加入有机溶剂，通过薄膜蒸发法制备Ce6脂质体；
(2)加入EDC和NHS至Ce6脂质体中，活化Ce6脂质，将具有特异靶向性的CD68抗体与活化后的脂质体共价接枝得到具有近红外光响应性和靶向性的脂质体，CD68抗体与Ce6脂质体的反应的比例为4～8:2.5～4.5μg/mg。
9.根据权利要求8所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将磷脂、胆固醇、DSPE-PEG2000-COOH和疏水性光敏剂加到圆底烧瓶中，加入甲醇和氯仿混合溶液，常温超声至完全溶解，置于旋转蒸发仪中，25～30℃，20～30rpm/min旋蒸挥发有机溶剂形成一层薄膜，真空干燥过夜，采用PBS溶液将膜洗脱，搅拌水化0.5～1.5h，再用超声波细胞破碎仪冰浴超声，经0.45μm滤膜过滤，得到载有Ce6的光动力介导的Ce6脂质体，整个过程在避光条件下进行；
(2)取制备的Ce6脂质体，加入0.5M的EDC和0.5M的NHS到Ce6脂质体中，活化，加入CD68抗体，4℃反应过夜，反应后透析，去除多余的EDC和NHS，即得具有近红外光响应性和靶向性的多功能脂质体。
10.一种如权利要求1所述的具有近红外光响应性和靶向性的脂质体在药物载体中的应用。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1222076A (zh) * 1996-06-14 1999-07-07 Qlt光治疗股份有限公司 绿卟啉在制备无须有意光照卟啉衍生物而治疗动脉硬化药物上的应用
US6890555B1 (en) * 1992-02-05 2005-05-10 Qlt, Inc. Liposome compositions of porphyrin photosensitizers
WO2009063995A1 (ja) * 2007-11-14 2009-05-22 Katayama Chemical Industries Co., Ltd. 動脈硬化の診断及び治療
CN104107432A (zh) * 2013-03-08 2014-10-22 王庶 用于预防、诊断、和治疗动脉粥样硬化的以氧化磷脂为靶向配体的基于纳米粒子的传输系统
CN113827721A (zh) * 2020-06-23 2021-12-24 中国科学院宁波工业技术研究院慈溪生物医学工程研究所 一种纳米材料作为制备治疗动脉粥样硬化药物的应用
WO2022053744A1 (en) * 2020-09-11 2022-03-17 Helsingin Ja Uudenmaan Sairaanhoitopiirin Kuntayhtymä Liposome-assisted imaging of vascular inflammation

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6890555B1 (en) * 1992-02-05 2005-05-10 Qlt, Inc. Liposome compositions of porphyrin photosensitizers
US20050107329A1 (en) * 1992-02-05 2005-05-19 Desai Narendra R. Liposome compositions of porphyrin photosensitizers
CN1222076A (zh) * 1996-06-14 1999-07-07 Qlt光治疗股份有限公司 绿卟啉在制备无须有意光照卟啉衍生物而治疗动脉硬化药物上的应用
WO2009063995A1 (ja) * 2007-11-14 2009-05-22 Katayama Chemical Industries Co., Ltd. 動脈硬化の診断及び治療
CN104107432A (zh) * 2013-03-08 2014-10-22 王庶 用于预防、诊断、和治疗动脉粥样硬化的以氧化磷脂为靶向配体的基于纳米粒子的传输系统
CN113827721A (zh) * 2020-06-23 2021-12-24 中国科学院宁波工业技术研究院慈溪生物医学工程研究所 一种纳米材料作为制备治疗动脉粥样硬化药物的应用
WO2022053744A1 (en) * 2020-09-11 2022-03-17 Helsingin Ja Uudenmaan Sairaanhoitopiirin Kuntayhtymä Liposome-assisted imaging of vascular inflammation

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