CN115052579A - 透明质酸产生促进剂 - Google Patents
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Abstract
提供新的透明质酸产生促进剂。提供含有波长转换物质作为有效成分的透明质酸产生促进剂、含有这样的透明质酸产生促进剂的组合物和制品、以及使用了它们的用于促进皮肤中的透明质酸的产生的方法。根据本发明，通过有效地利用紫外线而使皮肤中的透明质酸的产生促进，从而可以发挥对皮肤好的作用。
Description
技术领域
本发明涉及含有波长转换物质的透明质酸产生促进剂、含有这样的透明质酸产生促进剂的组合物和制品、以及使用了它们的用于促进皮肤中的透明质酸的产生的方法。
背景技术
作为由紫外线引起的对皮肤的弊病，例如，具有皮肤癌、光老化、斑、皱纹、炎症这样的不良影响，从健康、美容的观点考虑也是不优选的。作为紫外线的利用，虽然存在以杀菌效果作为目的的紫外线的利用等，但是如果考虑与由紫外线引起的弊病的平衡，则焦点与其放在积极地利用紫外线不如放在进行防御是现状。
因此，采取了大量用于对肌肤防御紫外线的对策。可举出例如，防晒剂的使用、不接触日光那样的室内的活动、进行了防UV加工的帽子、衣服类、防紫外线膜的使用等。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本专利第6424656号公报
专利文献2：日本专利第6361416号公报
专利文献3：国际公开第2018/004006号
专利文献4：日本特开2018-131422号公报
专利文献5：日本特开平5-117127号公报
专利文献6：日本专利第4048420号公报
专利文献7：日本专利第4677250号公报
专利文献8：日本专利第3303942号公报
专利文献9：日本特开2017-88719号公报
专利文献10：国际公开第2018/117117号
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的课题是提供利用了紫外线的新的透明质酸产生促进剂。
用于解决课题的方法
本发明者们为了可以对皮肤有用地利用紫外线而进行了深入研究。其结果想到了转换紫外线的波长而促进皮肤细胞中的透明质酸的产生的透明质酸产生促进剂。
本申请提供以下发明。
(1)一种透明质酸产生促进剂，是含有波长转换物质作为有效成分的透明质酸产生促进剂，
上述波长转换物质转换入射光所包含的紫外线的波长而放出波长比上述紫外线的波长更长的发射光。
(2)根据(1)所述的透明质酸产生促进剂，上述紫外线在200nm～400nm具有峰波长。
(3)根据(1)或(2)所述的透明质酸产生促进剂，上述发射光在450nm～700nm具有峰波长。
(4)根据(1)～(3)中任一项所述的透明质酸产生促进剂，上述波长转换物质包含选自别藻蓝蛋白、C-藻蓝蛋白、R-藻蓝蛋白、藻红蓝蛋白、B-藻红蛋白、b-藻红蛋白、C-藻红蛋白、和R-藻红蛋白中的1种或多种藻胆色素蛋白；选自氧化锌荧光体、钛酸镁荧光体、和磷酸钙荧光体中的1种或多种无机荧光体；选自维生素A、β胡萝卜素、维生素K、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸、烟酸、番茄红素、栀子、红花、姜黄、胭脂虫红、紫苏、紫甘蓝、黄酮类化合物、类胡萝卜素、醌型化合物、卟啉类、花色素苷类、和多酚类中的1种或多种成分；以及/或者选自红色401号、红色227号、红色504号、红色218号、橙色205号P、黄色4号、黄色5号、绿色201号、绿色204号(Pyranine Conc)、蓝色1号、盐酸2,4-二氨基苯氧基乙醇、紫色201号(Alizurine Purple SS)、紫色401号、黑色401号、红色226号(Helindone Pink)、黄色401号、联苯胺黄G、蓝色404号、红色104号、和间氨基苯酚中的1种或多种色素。
(5)根据(4)所述的透明质酸产生促进剂，上述波长转换物质包含选自别藻蓝蛋白、C-藻蓝蛋白、R-藻蓝蛋白、藻红蓝蛋白、B-藻红蛋白、b-藻红蛋白、C-藻红蛋白、和R-藻红蛋白中的1种或多种藻胆色素蛋白；选自氧化锌荧光体、钛酸镁荧光体、和磷酸钙荧光体中的1种或多种无机荧光体；以及/或者选自维生素B1、维生素B2、维生素B6、和维生素B12中的1种或多种维生素B。
(6)一种组合物，含有(1)～(5)中任一项所述的透明质酸产生促进剂。
(7)根据(6)所述的组合物，上述组合物为皮肤外用组合物，其通过使皮肤暴露于包含紫外线的光从而用于促进皮肤中的透明质酸的产生。
(8)一种用于促进对象的皮肤中的透明质酸的产生的美容方法，包括：
将(6)或(7)所述的组合物涂抹于对象的皮肤；以及
使涂抹上述组合物后的皮肤暴露于包含紫外线的光。
(9)一种制品，含有(1)～(5)中任一项所述的透明质酸产生促进剂。
(10)根据(9)所述的制品，上述制品通过使皮肤暴露于使包含紫外线的光透过该制品之后的光，从而用于促进皮肤中的透明质酸的产生。
(11)一种用于促进对象的皮肤中的透明质酸的产生的美容方法，包括：
使包含紫外线的光透过(9)或(10)所述的制品；以及
使对象的皮肤暴露于上述透过光。
发明的效果
本发明通过有效地利用紫外线而使皮肤中的透明质酸的产生促进，从而可以发挥对皮肤好的作用。以往，紫外线由于对皮肤不好，因此采用使皮肤尽量不接触紫外线那样的对策是本领域的技术常识。另一方面，本发明基于相反利用紫外线而带来对皮肤好的作用这样的认识，是非常令人惊讶的。此外，本发明对以往主要作为色素、颜料、紫外线散射剂、紫外线吸收剂、营养成分、抗氧化剂等而被利用的上述化合物提供新的用途。进一步，本发明有时即使对于迄今为止因为美容、健康上的理由而尽量避免了紫外线的人，也带来感觉想要积极地外出这样的生活品质的提高。
附图说明
图1显示由成纤维细胞的透明质酸的产生(图中，P＜0.01，P＜0.05表示对UV照射的t检验的结果)。
具体实施方式
本发明的透明质酸产生促进剂含有波长转换物质作为有效成分。所谓波长转换物质，是指转换入射光所包含的紫外线的波长而放出波长比上述紫外线的波长更长的发射光的物质。
紫外线可以包含UVA、UVB、UVC等。在某实施方式中，紫外线为在200nm～400nm具有峰波长的光。此外，例如在太阳光这样的入射光中可以包含紫外线。或者，入射光可以为紫外线，也可以使用人工生成的紫外线。
通过波长转换物质而放出的发射光波长比紫外线长，优选在450nm～700nm具有峰波长，更优选在500nm～700nm具有峰波长。发射光例如虽然没有限定，但是可以在450nm、460nm、470nm、480nm、490nm、500nm、510nm、520nm、530nm、540nm、550nm、560nm、570nm、580nm、590nm、600nm、610nm、620nm、630nm、640nm、650nm、660nm、670nm、680nm、690nm、700nm、或这些数值的任意的范围内具有1或多个峰，或可以为红色光、橙色光、绿色光、蓝色光等。在某实施方式中，波长转换物质在用200nm～400nm的激发光进行了激发时发出的光的主波长显示450nm～700nm，更优选显示500nm～700nm。
作为波长转换物质的例子，可举出以下成分：可举出别藻蓝蛋白、C-藻蓝蛋白、R-藻蓝蛋白、藻红蓝蛋白、B-藻红蛋白、b-藻红蛋白、C-藻红蛋白、R-藻红蛋白等藻胆色素蛋白；维生素A、β胡萝卜素、维生素K、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸、烟酸、番茄红素、栀子、红花、姜黄、胭脂虫红、紫苏、紫甘蓝、黄酮类化合物、类胡萝卜素、醌型化合物、卟啉类、花色素苷类、多酚类等天然来源或合成成分；红色401号、红色227号、红色504号、红色218号、橙色205号P、黄色4号、黄色5号、绿色201号、绿色204号(Pyranine Conc)、蓝色1号、盐酸2,4-二氨基苯氧基乙醇、紫色201号(Alizurine Purple SS)、紫色401号、黑色401号、红色226号(Helindone Pink)、黄色401号、联苯胺黄G、蓝色404号、红色104号、间氨基苯酚等色素；掺杂在无机化合物中使其具有荧光的荧光体，例如，日本专利第6424656号所记载的包含非晶质二氧化硅粒子、铈、和磷和/或镁的蓝色荧光体和日本专利第6361416号所记载的在碱土金属硫化物与镓化合物的混晶物中包含活化了铕的化合物的红色荧光体、国际公开第2018/004006号所记载的氧化锌荧光体、日本特开2018-131422号所记载的氧化锌荧光体；日本特开平5-117127号所记载的无机荧光体；等。在某实施方式中，无机荧光体为选自可以将如ZnO：Zn、Zn1+z、ZnO1-x那样表示的氧化锌用国际公开第2018/004006号所记载的例如硫化锌、硫酸锌等硫化盐和/或硫酸盐这样的含硫化合物进行了掺杂的荧光体、将MgTiO3、Mg2TiO4这样的钛酸镁用锰进行了掺杂的钛酸镁荧光体、和将Ca(H2PO4)2、CaHPO4、Ca3(PO4)2这样的磷酸钙用铈进行了掺杂的磷酸钙荧光体中的1种或多种荧光体。
波长转换物质可以从动物、植物、藻类等天然物通过提取等方法来获得，也可以通过化学合成这样的人工方法来获得。例如，藻胆色素蛋白可以通过将螺旋藻(Spirulinaplatensis)等蓝藻类、紫球藻(Porphyridium purpureum)等红藻类这样的藻类通过例如日本专利第4048420号、日本专利第4677250号、日本专利第3303942号等所记载的方法进行提取来调制。氧化锌荧光体可以通过例如国际公开第2018/004006号、日本特开2018-131422号、日本特开平5-117127号所记载的方法来制造。钛酸镁荧光体可以通过日本特开2017-88719号所记载的方法来制造。磷酸钙荧光体可以通过国际公开第2018/117117号所记载的方法来制造。
只要不损害本发明的波长转换效果，这些波长转换物质就可以由上面例示的成分构成，可以包含上面例示的成分，可以单独使用也可以混合多种。例如，可以在上述藻胆色素蛋白、无机物荧光体中混合其它波长转换物质例如维生素B(维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12等)而以协同效果作为目标。然而，这些成分为例示，也可以使用发挥本发明的波长转换效果的任何物质。
此外，只要不损害本发明的波长转换效果，本发明的透明质酸产生促进剂、组合物或制品中的波长转换物质的含量就没有特别限定，可以根据波长转换物质的种类、透明质酸产生促进剂或组合物的用途来适当确定。例如，在0.01～99.99重量％、0.1％～999重量％等范围内是任意的。
所谓透明质酸产生促进，虽然没有限定，但是指包括人在内的动物的细胞、例如皮肤的成纤维细胞和/或角质形成细胞中的透明质酸的产生的促进。已知由于紫外线、年龄增长等而皮肤细胞的透明质酸量减少。如果皮肤中的透明质酸的产生被促进，则期待皱纹的预防/改善、保湿、皮肤的弹性的提高、由紫外线引起的炎症的抑制这样的效果。
透明质酸产生促进效果的测定例如实施例那样，可以通过使用阿尔玛蓝测定细胞的生存率、增殖来进行，可以使用其它色素测定法、线粒体膜电位依赖性色素测定法、弹性蛋白酶切断色素测定法、ATP、ADE测定法、糖酵解通量和氧消耗测定法等任意的方法。
本发明的透明质酸产生促进剂和组合物的施与形态是任意的，但为了通过使皮肤暴露于包含紫外线的光从而使皮肤中的透明质酸的产生促进，有时优选为药品、准药品、化妆品等皮肤外用剂。在使用本发明的透明质酸产生促进剂或组合物作为皮肤外用剂的情况下，剂型、涂抹法、施与次数等可以任意确定。例如，可以以化妆水、喷雾、油、霜、乳液、凝胶、防晒剂、晒黑剂这样的形态，定期或不定期地例如早晨、白天、傍晚等1天1次～数次，在外出、野外活动、海洋运动、滑雪等预想暴露于阳光之前等每次涂抹于皮肤。
此外，本发明的透明质酸产生促进剂和组合物可以根据需要任意选择例如赋形剂、保存剂、增稠剂、粘合剂、崩解剂、分散剂、稳定剂、胶凝剂、抗氧化剂、表面活性剂、保存剂、油分、粉末、水、醇类、增稠剂、螯合剂、有机硅类、抗氧化剂、保湿剂、香料、各种药效成分、防腐剂、pH调节剂、中和剂等添加剂而并用。进一步，为了提高本发明的效果，可以并用其它透明质酸产生促进剂等。
此外，本发明也提供包含本发明的透明质酸产生促进剂，并通过使皮肤暴露于包含紫外线的光从而用于使皮肤中的透明质酸的产生促进的例如遮阳板、帽子、衣服类、手套、屏幕膜、窗用喷雾、窗用霜、窗材料、墙壁材料这样的制品。与上述同样地，本发明的制品中的添加剂等的使用、制品的形态等也是任意的。
此外，本发明也提供本发明的透明质酸产生促进剂、组合物或制品的制造方法。此外，也提供用于促进对象的皮肤中的透明质酸的产生的方法，这里，该方法包含：将本发明的透明质酸产生促进剂或组合物涂抹于对象的皮肤、以及使涂抹上述透明质酸产生促进剂或组合物后的皮肤暴露于包含紫外线的光；或包含：使包含紫外线的光透过本发明的制品、以及使对象的皮肤暴露于上述透过光，该透明质酸产生促进剂、组合物和制品转换入射光所包含的紫外线的波长而放出波长比上述紫外线的波长更长的发射光，优选使在200nm～400nm具有峰波长的紫外线透过而成为优选在450nm～700nm、更优选在500nm～700nm具有峰波长的光。用于促进对象的皮肤中的透明质酸的产生的方法有时以美容作为目的，而不是医生、医疗从业者使用的治疗方法。此外，本发明也提供包含向对象提示本发明的美容方法、透明质酸产生促进剂、组合物或制品的、支援对象的美容行为的美容咨询方法。
实施例
接下来通过实施例进一步详细地说明本发明。另外，本发明不限定于此。
实验1：各种波长转换物质的透明质酸产生促进效果
实验1-1：波长转换物质的调制
如以下那样调制出波长转换物质。
(1)B-藻红蛋白
B-藻红蛋白(B-phycoerythrin)由紫球藻(Porphiridium Cruentum)提取物获得，吸收光谱在305nm具有峰波长，发射光谱在570nm和610nm具有峰波长。
(2)C-藻蓝蛋白
C-藻蓝蛋白(C-phycocyanin)由螺旋藻(Spirulina platensis)提取物获得，吸收光谱在350nm具有峰波长，发射光谱在640nm和700nm具有峰波长。
(3)氧化锌荧光体
使用了堺化学工业株式会社制的Lumate G。Lumate G为如国际公开第2018/004006号所记载的那样将ZnO用含硫化合物掺杂后进行了烧成的氧化锌荧光体，吸收光谱在365nm具有峰波长，发射光谱在510nm具有峰波长。
(4)钛酸镁荧光体
使用了堺化学工业株式会社制的Lumate R。Lumate R为将MgTiO3用锰进行了掺杂的钛酸镁荧光体，吸收光谱在365nm具有峰波长，发射光谱在660～680nm的带具有峰波长。
(5)磷酸钙荧光体
使用了堺化学工业株式会社制的Lumate B。Lumate B为将磷酸钙用铈进行了掺杂的荧光体，发射光谱在350～700nm的带具有峰波长。
将(1)～(2)的波长转换物质溶解于水，调制出1％的浓度的溶液。
(3)～(5)的波长转换物质通过分散在丙烯酸系聚合物中从而制作出10％的膜。
实验1-2：细胞试样的调制
如以下那样调制出细胞试样。
1.使用了由Kurabo社购入的人皮肤成纤维细胞。将用液氮保存了的细胞悬浮液(1mL)供于热水浴(37℃)而解冻为小的冰颗粒残留的程度，接着用9mL的温培养基进行了稀释。
2.将稀释物温和混合后转移到T75烧瓶中，在37℃下孵育了一晚。
3.第二天，将培养基交换为10mL的新鲜培养基。
4.将培养基定期地(2天1次)交换，继续进行细胞的增殖。其间，使用显微镜观察细胞，确认了细胞以正确的形态增殖。
5.在细胞达到约80％的汇合后，将细胞传代。细胞的传代通过用10mL的温PBS将细胞洗涤1次后，将5mL的温胰蛋白酶加入到T75烧瓶中，用胰蛋白酶溶液覆盖烧瓶的底面在室温下放置1分钟后吸引来进行。
6.将烧瓶在37℃的烘箱内静置(最大)2分钟。使用显微镜观察细胞，确认了细胞小且为椭圆形。
7.然后，轻轻地敲击T75烧瓶的侧面而使细胞游离。使用显微镜观察细胞，确认了细胞自由活动。
8.细胞再悬浮于5mL的温FGM(含有10％血清)，转移到灭菌50mL Falcon管中。将烧瓶进一步用5mL的温FGM冲洗而加入到Falcon管从而确实地移动全部细胞。
9.将细胞以10,000rpm离心5分钟(4℃)，一边小心不打乱细胞颗粒一边除去了上清液。
10.根据细胞的种类，以2×104细胞/孔(500μL)的浓度再悬浮于FGM或KGM，铺板于24孔板。
11.在24孔板接种细胞，定期地(2天1次)交换培养基，直到达到60～70％的汇合(根据实验的种类而不同)为止使细胞增殖了。(注：成纤维细胞如果为2×104细胞/孔的细胞密度则应该在24小时达到所希望的融合度。在细胞密度低达例如1×104细胞/孔等的情况下，成纤维细胞达到所希望的融合度花费48小时。)
12.在照射的24小时前，变更为含有低浓度的血清的(0.5％FCS)培养基。
实验1-3：紫外线的照射
1.在照射的至少30分钟前接通太阳模拟器的电源而使灯变热。太阳模拟器为使用UG11滤光片的设定。UG11滤光片为仅使UVB通过而截止其它波长光的滤光片。透过了UG11滤光片的UV光在300nm～385nm具有峰波长。
2.将温度控制板接通而设定为33℃。
3.将在实验1-2中调制的细胞用温PBS洗涤1次。
4.在各孔中加入了0.5mL的温PBS。
5.将细胞孔载置在板上，不使用波长转换物质，以100mJ/cm2的剂量进行了照射。
6.在5之后立即在细胞孔上，将包含在实验1-1中调制的波长转换物质(1)～(2)的溶液0.5ml注入到24孔板的各孔中，以覆盖加有细胞的孔的方式载置，波长转换物质的溶液不与细胞溶液直接接触，UV光通过波长转换物质的溶液而被照射到细胞溶液。或者，将包含在实验1-1中调制的波长转换物质(3)～(5)的膜载置在24孔板上，UV光通过波长转换物质的膜而被照射到细胞溶液。
7.以100mJ/cm2的剂量进行了15分钟照射。此外，作为对照，制作出在细胞孔上不载置波长转换物质的板或膜而向细胞直接照射了UV光的试样、和不向细胞照射UV光而在暗处培养了的试样。
8.在照射后，将溶液与0.5％DMEM交换，将板返回到37℃的培养箱中。
实验1-4：透明质酸的产生促进作用的测定
使用在实验1-3后在培养箱内保持了48小时的细胞，按照制品说明书使用QnEHyaluronic Acid(HA)ELISA Assay Kit(Funakoshi社制，Cat.#BTP-96200)而测定了培养液中的成纤维细胞产生的透明质酸浓度。
将结果示于图1中。如果照射UV(UV)则与未照射的对照(对照组)相比透明质酸浓度降低了。然而，如果通过波长转换物质而照射UV，则与UV照射组(UV)相比透明质酸量增加了。进一步，在使用了B-藻红蛋白、C-藻蓝蛋白、钛酸镁荧光体的情况下，与未进行UV照射的组(对照组)相比反而透明质酸量增加了。
由以上结果可知，虽然通过UV照射而透明质酸量降低，但是如果使用波长转换物质则不仅透明质酸量的降低被抑制，而且透明质酸量上升。
以上，显示了关于人皮肤成纤维细胞的结果，但是关于角质形成细胞也观察到同样的结果(数据未显示)。通过这些结果可知，波长转换物质不仅抑制由UV照射引起的细胞活性的降低，而且具有利用UV光将细胞活化的效果。如果皮肤的细胞被活化，则期待皱纹、斑、皮肤老化、光老化等的预防/改善。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。然而，本发明不限定于它们，化妆料、药品组合物等可以在不超出发明的宗旨的范围适当变更。
Claims (11)
1.一种透明质酸产生促进剂，是含有波长转换物质作为有效成分的透明质酸产生促进剂，
所述波长转换物质转换入射光所包含的紫外线的波长而放出波长与所述紫外线的波长相比更长的发射光。
2.根据权利要求1所述的透明质酸产生促进剂，所述紫外线在200nm～400nm具有峰波长。
3.根据权利要求1或2所述的透明质酸产生促进剂，所述发射光在450nm～700nm具有峰波长。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的透明质酸产生促进剂，所述波长转换物质包含选自别藻蓝蛋白、C-藻蓝蛋白、R-藻蓝蛋白、藻红蓝蛋白、B-藻红蛋白、b-藻红蛋白、C-藻红蛋白和R-藻红蛋白中的1种或多种藻胆色素蛋白；选自氧化锌荧光体、钛酸镁荧光体和磷酸钙荧光体中的1种或多种无机荧光体；选自维生素A、β胡萝卜素、维生素K、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、叶酸、烟酸、番茄红素、栀子、红花、姜黄、胭脂虫红、紫苏、紫甘蓝、黄酮类化合物、类胡萝卜素、醌型化合物、卟啉类、花色素苷类和多酚类中的1种或多种成分；以及/或者选自红色401号、红色227号、红色504号、红色218号、橙色205号P、黄色4号、黄色5号、绿色201号、绿色204号、蓝色1号、盐酸2,4-二氨基苯氧基乙醇、紫色201号、紫色401号、黑色401号、红色226号、黄色401号、联苯胺黄G、蓝色404号、红色104号和间氨基苯酚中的1种或多种色素。
5.根据权利要求4所述的透明质酸产生促进剂，所述波长转换物质包含选自别藻蓝蛋白、C-藻蓝蛋白、R-藻蓝蛋白、藻红蓝蛋白、B-藻红蛋白、b-藻红蛋白、C-藻红蛋白和R-藻红蛋白中的1种或多种藻胆色素蛋白；选自氧化锌荧光体、钛酸镁荧光体和磷酸钙荧光体中的1种或多种无机荧光体；以及/或者选自维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B12中的1种或多种维生素B。
6.含有权利要求1～5中任一项所述的透明质酸产生促进剂的组合物。
7.根据权利要求6所述的组合物，所述组合物为皮肤外用组合物，通过使皮肤暴露于包含紫外线的光从而用于促进皮肤中的透明质酸的产生。
8.一种用于促进对象的皮肤中的透明质酸的产生的美容方法，包括：
将权利要求6或7所述的组合物涂抹于对象的皮肤；以及
使涂抹所述组合物后的皮肤暴露于包含紫外线的光。
9.含有权利要求1～5中任一项所述的透明质酸产生促进剂的制品。
10.根据权利要求9所述的制品，所述制品通过使皮肤暴露于使包含紫外线的光透过该制品之后的光，从而用于促进皮肤中的透明质酸的产生。
11.一种用于促进对象的皮肤中的透明质酸的产生的美容方法，包括：
使包含紫外线的光透过权利要求9或10所述的制品；以及
使对象的皮肤暴露于所述透过光。
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