CN115047195A - 一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片以及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及检测细胞应激反应技术领域，且公开了一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片以及制备方法，包括支持物以及列阵式固定在支持物表面的应激反应标志物，支持物的选择，玻璃：用去离子水800mL加热到95度,加入约洗衣粉5g,将新玻片浸泡在洗衣粉水中3h;取出玻片,用1mM的K0H去离子水溶液中浸泡1h;取出玻片,用去离子水清洗3次,每次5min,晾干,得到清洗干净的玻片，将清洗干净的玻片用含5%氨基甲氧基硅烷(V/V)的乙醇溶液浸泡30min;取出玻片,用丙酮洗3次,每次5min;再用去离子水清洗3次,每次5min,氮气吹干,获得氨基化修饰的玻片。

Description

一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片以及制备方法
技术领域
本发明涉及检测细胞应激反应技术领域，具体为一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片以及制备方法。
背景技术
微阵列芯片是指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物（如玻片、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子反应，通过特定的仪器，比如激光共聚焦扫描仪或电荷偶联摄影像机对反应信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量，现有的微阵列芯片在检测的过程中一般比较繁琐，无法有效的提升检测。
发明内容
（一）解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片以及制备方法，解决了上述的问题。
（二）技术方案
为实现上述所述目的，本发明提供如下技术方案：
一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片，包括支持物以及列阵式固定在支持物表面的应激反应标志物；
支持物的选择，玻璃：用去离子水800mL加热到95度,加入约清洗液,将新玻片浸泡在清洗液3h;取出玻片,用的K0H去离子水溶液中浸泡两个小时;取出玻片,用去离子水清洗三次,每次清洗时间保持在三到五分钟,晾干,得到清洗干净的玻片；
将清洗干净的玻片用洗涤液进行清洗，洗涤液以磷酸缓冲液为主，含 TW-20、0.05%NaN3，清洗完毕后，取出玻片,用丙酮洗三次,每次清洗时间保持在三到五分钟，再用去离子水清洗3次,每次清洗时间保持在三到五分钟,然后利用烘干设备对其进行烘干，烘干时间保持在五分钟。
一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片的制备方法，包括以下步骤：
S1：将特异性抗体溶液以列阵式或者环形列阵点样于支持物上；
S2：室温干燥后，需要放置1小时-2小时,在此期间需要将支持物固定，固定完成之后将其放置于密封箱体中，保持密封状态；
S3：最终获得微阵列芯片。
一种检测细胞反应中蛋白表达的检测方法，包括以下步骤：
S1：将试剂盒放置在室温下静置半个小时，使得试剂盒温度平衡至室温，然后进行标本稀释，用标本稀释液稀释血清，标本于试管中混匀；
S2：取出玻璃基片拆封并平放于实验台上，于每方格中加入已稀释的标本，需要让标本布满方格；
S3：将玻片置于湿盒中并放置三十五到三十八度之间温育半个小时，甩去方格内液体，于每格内加入 4 滴洗涤液，停顿三秒后甩掉洗液，连续洗涤三次，最后用蒸馏水冲洗一秒，甩干后在棉化吸干方格周围水滴；
S4：每格滴三滴示踪物，此处注意不要溢出，湿盒中在三十七度温育 30 分钟，再次洗 3次，用棉花吸干周围水滴。
S5：每格加入 2 滴显色剂，37℃孵育箱显色15分钟，甩去方格内液体，用蒸馏水流洗 1 秒种，甩干，然后用吸水棉花吸干液体。
一种检测细胞反应中蛋白表达的试剂盒，包括盒体，所述盒体的顶部开设有矩形凹槽，所述矩形凹槽的底部内壁上等距开设有试管槽，所述的顶部通过合页活动安装有盖板，这样的设置可以有效安全的放置试剂管的同时，盖上盖板，可以使得试剂保持相对密闭的状态，有利于试剂的存储以及搬运。
（三）有益效果
与现有技术相比，本发明提供了一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片以及制备方法，具备以下有益效果：
1、该一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片以及制备方法，通过激光共聚焦扫描仪或电荷偶联摄影像机对反应信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，扫描与探针杂交的靶点表现出来的信号强度，这样可以更加高效快捷的进行检测，避免了现有的微阵列芯片在检测的过程中一般比较繁琐，无法有效的提升检测的问题。
2、该一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片以及制备方法，顶部通过合页活动安装有盖板，这样的设置可以有效安全的放置试剂管的同时，盖上盖板，可以使得试剂保持相对密闭的状态，有利于试剂的存储以及搬运。
附图说明
图1为试剂盒结构示意图。
图中：1、盒体；2、矩形凹槽；3、试管槽；4、盖板。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片，包括支持物以及列阵式固定在支持物表面的应激反应标志物；
支持物的选择，玻璃：用去离子水800mL加热到95度,加入约清洗液,将新玻片浸泡在清洗液3h;取出玻片,用的K0H去离子水溶液中浸泡两个小时;取出玻片,用去离子水清洗三次,每次清洗时间保持在三到五分钟,晾干,得到清洗干净的玻片；
将清洗干净的玻片用洗涤液进行清洗，洗涤液以磷酸缓冲液为主，含 TW-20、0.05%NaN3，清洗完毕后，取出玻片,用丙酮洗三次,每次清洗时间保持在三到五分钟，再用去离子水清洗3次,每次清洗时间保持在三到五分钟,然后利用烘干设备对其进行烘干，烘干时间保持在五分钟。
一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片的制备方法，包括以下步骤：
S1：将特异性抗体溶液以列阵式或者环形列阵点样于支持物上；
S2：室温干燥后，需要放置1小时-2小时,在此期间需要将支持物固定，固定完成之后将其放置于密封箱体中，保持密封状态；
S3：最终获得微阵列芯片。
一种检测细胞反应中蛋白表达的检测方法的检测方法，包括以下步骤：
S1：将试剂盒放置在室温下静置半个小时，使得试剂盒温度平衡至室温，然后进行标本稀释，用标本稀释液稀释血清，标本于试管中混匀；
S2：取出玻璃基片拆封并平放于实验台上，于每方格中加入已稀释的标本，需要让标本布满方格；
S3：将玻片置于湿盒中并放置三十五到三十八度之间温育半个小时，甩去方格内液体，于每格内加入 4 滴洗涤液，停顿三秒后甩掉洗液，连续洗涤三次，最后用蒸馏水冲洗一秒，甩干后在棉化吸干方格周围水滴；
S4：每格滴三滴示踪物（酶标记 SPA，含蛋白稳定剂，0.02%硫柳汞），此处注意不要溢出，湿盒中在三十七度温育 30 分钟，再次洗 3次，用棉花吸干周围水滴。
S5：每格加入 2 滴显色剂，37℃孵育箱显色15分钟，甩去方格内液体，用蒸馏水流洗 1 秒种，甩干，然后用吸水棉花吸干液体。
显色剂：四甲基联苯胺、醋酸缓冲液 。
一种检测细胞反应中蛋白表达的试剂盒，包括盒体1，所述盒体1的顶部开设有矩形凹槽2，所述矩形凹槽2的底部内壁上等距开设有试管槽3，所述1的顶部通过合页活动安装有盖板4，这样的设置可以有效安全的放置试剂管的同时，盖上盖板4，可以使得试剂保持相对密闭的状态，有利于试剂的存储以及搬运。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (3)

1.一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片，其特征在于：包括支持物以及列阵式固定在支持物表面的应激反应标志物；
支持物的选择，玻璃：用去离子水800mL加热到95度,加入约清洗液,将新玻片浸泡在清洗液3h;取出玻片,用的K0H去离子水溶液中浸泡两个小时;取出玻片,用去离子水清洗三次,每次清洗时间保持在三到五分钟,晾干,得到清洗干净的玻片；
将清洗干净的玻片用洗涤液进行清洗，洗涤液以磷酸缓冲液为主，含 TW-20、0.05%NaN3，清洗完毕后，取出玻片,用丙酮洗三次,每次清洗时间保持在三到五分钟，再用去离子水清洗3次,每次清洗时间保持在三到五分钟,然后利用烘干设备对其进行烘干，烘干时间保持在五分钟。
2.一种检测细胞反应中蛋白表达的微阵列芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将特异性抗体溶液以列阵式或者环形列阵点样于支持物上；
S2：室温干燥后，需要放置1小时-2小时,在此期间需要将支持物固定，固定完成之后将其放置于密封箱体中，保持密封状态；
S3：最终获得微阵列芯片。
3.一种检测细胞反应中蛋白表达的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将试剂盒放置在室温下静置半个小时，使得试剂盒温度平衡至室温，然后进行标本稀释，用标本稀释液稀释血清，标本于试管中混匀；
S2：取出玻璃基片拆封并平放于实验台上，于每方格中加入已稀释的标本，需要让标本布满方格；
S3：将玻片置于湿盒中并放置三十五到三十八度之间温育半个小时，甩去方格内液体，于每格内加入 4 滴洗涤液，停顿三秒后甩掉洗液，连续洗涤三次，最后用蒸馏水冲洗一秒，甩干后在棉化吸干方格周围水滴；
S4：每格滴三滴示踪物，此处注意不要溢出，湿盒中在三十七度温育 30 分钟，再次洗3次，用棉花吸干周围水滴。
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