CN115039766A - 一种常温猪精液稀释剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及人工授精领域,具体涉及一种常温猪精液稀释剂。根据本发明的常温猪精液稀释剂,活性组分包括DSO、DSFO和MP,能够保护猪精子膜完整性,维持猪精子活力、顶体功能,最终提高猪精子的受精能力。利用本发明的常温猪精液稀释剂,猪精液常温保存时间10天以上,精子活力80%以上,畸形率低于10%,精子顶体完整性高于85.8%。此猪精液稀释保存剂在低温保藏中效果更佳。同时,该稀释剂使用方便,适于广泛推广,对促进生猪产业健康持续发展具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及人工授精领域,具体涉及一种常温猪精液稀释剂。
背景技术
随着人工授精技术的广泛应用,对种公猪精液品质的要求也越来越高,那么对猪精保存的技要求也越来越高,猪精液保存的效果好坏一直是限制优秀种公猪发挥优势的重要因素。
目前稀释剂价格较贵,增加了养殖成本,如何改善精液稀释剂的配方,从而让猪精液品质在常温状态下保存时间更久,并且降低人工授精的成本,是当今养猪事业发展待攻克的难题。现有的常用的猪精液稀释液基础配方主要成分包括葡萄糖、柠檬酸钠、氯化钾、EDTA-2Na、三羟甲基甲烷、柠檬酸、碳酸氢钠、青霉素、链霉素等。
海藻寡糖(DSO)有多种生物学功能,降低血糖、血脂,调整肠道健康,解毒抗凝血、抗炎、免疫调节等作用,已经在医药、食品添加剂、饲料添加剂等领域得到广泛应用。深海鱼油(DSFO)含有丰富的EPA(二十碳五烯酸)、DHA(二十二碳六烯酸),可以调节血脂,清理血栓,防止血液凝固,营养大脑、改善记忆,改善视力维护视网膜等功能,已经在婴儿奶粉、医药等领域得到广泛应用。牛奶多肽(MP)具有高生理活性,可有效美白肌肤,令肌肤紧致嫩滑,同时富含L色氨酸、安神助眠的功效,已经在美容、改善睡眠领域得到了应用。
现有技术并未报道海藻寡糖(DSO)、深海鱼油(DSFO)和牛奶多肽(MP)可以应用于到猪精液稀释液,提高猪精保存的保存质量。
发明内容
本发明的目的是提供一种常温猪精液稀释剂。
根据本发明的常温猪精液稀释剂包括基础成分以及活性成分,其中,所述活性成分包括海藻寡糖、深海鱼油和牛奶多肽。
根据本发明的常温猪精液稀释剂,包括基础成分以及活性成分,其中,所述基础成分包括葡萄糖、柠檬酸钠、氯化钾、EDTA-2Na、三羟甲基甲烷、柠檬酸、碳酸氢钠、青霉素和链霉素。
根据本发明的常温猪精液稀释剂,其中,基于1L所述常温猪精液稀释剂,所述基础成分包括葡萄糖27.5g、柠檬酸钠6.9g、 EDTA-2Na 2.35g、碳酸氢钠1.0g、氯化钾0.75g、 柠檬酸2.9g、tris5.65g、青霉素0.6g、链霉素1.0g。
根据本发明的常温猪精液稀释剂,其中,基于1L所述常温猪精液稀释剂,所述海藻寡糖的浓度为0.01~10克/升,所述深海鱼油的浓度为 0.001~1毫克/升,所述牛奶多肽的浓度为 0.1~5克/升。
根据本发明的常温猪精液稀释剂,其中,基于1L所述常温猪精液稀释剂,海藻寡糖的浓度为0.1g/L,所述深海鱼油的浓度为0.01mg/L,所述牛奶多肽的浓度为0.05g/L。
根据本申请的技术方案,首次将海藻寡糖(DSO)、深海鱼油(DSFO)和牛奶多肽(MP)应用于到猪精液稀释液,现有技术并未报道相关应用。
根据本发明的常温猪精液稀释剂,活性组分包括DSO、DSFO和MP,能够保护猪精子膜完整性,维持猪精子活力、顶体功能,最终提高猪精子的受精能力。利用本发明的常温猪精液稀释剂,猪精液常温(17-20°C)保存时间10天以上,精子活力80%以上,畸形率低于10%,精子顶体完整性高于85.8%。此猪精液稀释保存剂在低温保藏(4-8°C)中效果更佳。同时,该稀释剂使用方便,适于广泛推广,对促进生猪产业健康持续发展具有重要意义。
附图说明
图1显示常温下DSO和DSFO对保存过程中猪精子活力的影响;
图2显示常温下DSO和DSFO对保存过程中猪精子畸形率的影响;
图3显示常温下DSO和DSFO对保存过程中猪精子顶体完整性的影响;
图4显示常温下DSO、DSFO、MP对保存过程中猪精子活力的影响;
图5显示常温下DSO、DSFO、MP对保存过程中猪精子畸形率的影响;
图6常温下DSO、DSFO、MP对保存过程中猪精子畸形率的影响。
具体实施方式
本发明的常温猪精液稀释剂包括基础成分以及活性成分,其中,所述活性成分包括海藻寡糖(DSO,Deep sea seaweed oligosaccharides)、深海鱼油(DSFO,Deep sea fishoil)和牛奶多肽(MP,Milk peptides);所述基础成分包括葡萄糖、柠檬酸钠、氯化钾、EDTA-2Na、三羟甲基甲烷、柠檬酸、碳酸氢钠、青霉素和链霉素。
根据猪精液稀释保存液的配方,基础成分在1升(1L)稀释保存液里的含量:葡萄糖27.5g,柠檬酸钠6.9g, EDTA-2Na 2.35g,碳酸氢钠1.0g,氯化钾0.75g, 柠檬酸2.9g,tris5.65g, 青霉素0.6g,链霉素1.0g。在基础成分的基础上添加了活性成分海藻寡糖(DSO,Deep seaweed oligosaccharides)、深海鱼油(DSFO,Deep sea fish oil)和牛奶多肽(MP,Milk peptides)。海藻寡糖(DSO)浓度为0.01~10克/升(g/L),深海鱼油(DSFO)0.001~1毫克/升(mg/L),牛奶多肽(MP) 0.1~5克/升(g/L)。其中DSO浓度0.1g/L最优,DSFO浓度0.01mg/L最优,MP浓度0.05g/L最优。
实施例1
基础成分在1升(1L)稀释保存液里的含量:葡萄糖27.5g,柠檬酸钠6.9g, EDTA-2Na 2.35g,碳酸氢钠1.0g,氯化钾0.75g, 柠檬酸2.9g,tris5.65g, 青霉素0.6g,链霉素1.0g。
在保持常用猪精液稀释保存剂中基础成分固定不变的条件下,优化DSO、DSFO和MP:
1、优化海藻寡糖(DSO)和深海鱼油(DSFO)的含量对精子性状的影响
优化
海藻寡糖(DSO)和深海鱼油(DSFO)的含量(1L稀释保存液)。在基础成分的基础上添加了DSO和DSFO,DSO设置4个剂量:0.01、 0.1、 1、10克/升(g/L);DSFO设置4个剂量:0.001、 0.01、 0.1、1毫克/升(mg/L)。同时用市场上常用的猪精液稀释剂作为对照。
1.1猪精子活力
如图1所示,常温(17-20°C)保存1天(第1天),在基础成分添加了DSO和DSFO(试验组)的猪精液稀释液和对照稀释液保存猪精子活力上没有明显差异,猪精子活力都可以达到90%以上;保存第5天,对照稀释液的保存猪精子活力的能力下降显著至83.5%,而试验组猪精液稀释液保存的猪精子活力大于86.2% ;保存到第10天,对照组猪精液稀释液精子活力为77.7%,而试验组猪精液稀释液的精子活力仍保存在81.8%以上。其中,DSO浓度0.1g/L最优,DSFO浓度0.01mg/L最优,而且DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)在它们的组合中最优。重复上述试验5次,图中结果显示是5次平均值±标准误。DSO和 DSFO一起添加[DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)]可以更好的保存猪精子活力,具有协同增效的作用。
1.2精子畸形率
如图2所示,常温(17-20°C)保存1天(第1天),基础成分添加了DSO和DSFO的猪精液稀释液(试验组)和对照稀释液保存猪精子畸形率上没有明显差异,猪精子畸形率小于等于8.2%;保存到第10天,对照组猪精液稀释液中精子畸形率为12.4%,而试验组猪精液稀释液中精子畸形率小于9.8%。重复上述试验5次,图中结果显示是5次平均值±标准误。DSO和DSFO一起添加[DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)]可以更好的保存猪精子,降低猪精子畸形率,具有协同增效的作用。
1.3顶体完整性
如图3所示,常温(17-20°C)保存1天(第1天),基础成分添加了DSO和DSFO的猪精液稀释液(试验组)和对照稀释液保存猪精子顶体完整性上没有明显差异,猪精子顶体完整性都大于90.2%;保存到第10天,对照组猪精液稀释液中精子顶体完整性为81.8%,而试验组猪精液稀释液中顶体完整性大于86.7%。重复上述试验5次,图中结果显示是5次平均值±标准误。DSO和 DSFO一起添加[DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)]可以更好的保存猪精子,提高猪精子顶体完整性,具有协同增效的作用。
2、第二步在第一步的基础上,优化了牛奶多肽的含量(1L稀释保存液)。
第一步研究发现了DSO最优浓度是0.1g/L,DSFO的最优浓度是0.01mg/L。在基础成分+DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)的基础上添加牛奶多肽(MP),MP设置4个剂量:0.01、0.05、 0.1、1克/升(g/L)。同时用市场上常用的猪精液稀释剂作为对照。
2.1精子活力
如图4所示,常温(17-20°C)保存1天(第1天),基础成分+DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)+MP的猪精液稀释液(试验组)和对照稀释液保存猪精子活力上没有明显差异,猪精子活力都可以达到89.8%以上;保存第5天,对照稀释液的保存猪精子活力的能力显著下降至82.9%,而试验组的猪精液稀释液保存的猪精子活力>88.3% ;保存到第10天,对照组猪精液稀释液中精子活力为77.5%,而试验组猪精液稀释液中精子活力仍保存在82.4%以上。其中MP浓度0.05g/L最优,而且DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)+ MP(0.05g/L)在它们的组合中最优。重复上述试验5次,图中结果显示是5次平均值±标准误。MP、DSO和 DSFO一起添加[DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)+ MP(0.05g/L)]可以更好的保存猪精子活力,三者具有协同增效的作用。
2.2精子畸形率
如图5所示,常温(17-20°C)保存1天(第1天),基础成分+DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)+MP的猪精液稀释液(试验组)和对照稀释液保存猪精子畸形率没有明显差异,猪精子畸形率大约8%;保存到第10天,对照组猪精液稀释液中精子畸形率为12.3%,而试验组猪精液稀释液中精子畸形率低于9.0%。重复上述试验5次,图中结果显示是5次平均值±标准误。MP、DSO和 DSFO一起添加[DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)+ MP(0.05g/L)]可以更好的保存猪精子,降低猪精子畸形率,三者具有协同增效的作用。
2.3猪精顶体完整性
如图6所示,常温(17-20°C)保存1天(第1天),基础成分+DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)+MP的猪精液稀释液(试验组)和对照稀释液保存猪精顶体完整性没有明显差异,猪精子顶体完整性大于89.8%;保存到第10天,对照组猪精液稀释液中精子顶体完整性为82.1%,而试验组中精子顶体完整性大于87.5%。重复上述试验5次,图中结果显示是5次平均值±标准误。MP、DSO和 DSFO一起添加[DSO(0.1g/L)+ DSFO(0.01mg/L)+ MP(0.05g/L)]可以更好的保存猪精子,提高猪精子顶体完整性,三者具有协同增效的作用。
以上实施例仅用于解释本申请的技术方案,不限定本申请的保护范围。
Claims (5)
1.一种常温猪精液稀释剂,包括基础成分以及活性成分,其特征在于,所述活性成分包括海藻寡糖、深海鱼油和牛奶多肽。
2.根据权利要求1所述的常温猪精液稀释剂,其特征在于,所述基础成分包括葡萄糖、柠檬酸钠、氯化钾、EDTA-2Na、三羟甲基甲烷、柠檬酸、碳酸氢钠、青霉素和链霉素。
3.根据权利要求2所述的常温猪精液稀释剂,其特征在于,基于1L所述常温猪精液稀释剂,所述基础成分包括葡萄糖27.5g、柠檬酸钠6.9g、 EDTA-2Na 2.35g、碳酸氢钠1.0g、氯化钾0.75g、 柠檬酸2.9g、tris5.65g、青霉素0.6g、链霉素1.0g。
4.根据权利要求1所述的常温猪精液稀释剂,其特征在于,基于1L所述常温猪精液稀释剂,所述海藻寡糖的浓度为0.01~10克/升,所述深海鱼油的浓度为 0.001~1毫克/升,所述牛奶多肽的浓度为 0.1~5克/升。
5.根据权利要求4所述的常温猪精液稀释剂,其特征在于,基于1L所述常温猪精液稀释剂,海藻寡糖的浓度为0.1g/L,所述深海鱼油的浓度为0.01mg/L,所述牛奶多肽的浓度为0.05g/L。
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