CN115032397B

CN115032397B - 一种胃癌预后分子标志物

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Publication number: CN115032397B
Application number: CN202210953043.6A
Authority: CN
Inventors: 程向东; 袁莉; 王以; 徐志远
Original assignee: Zhejiang Cancer Hospital
Current assignee: Zhejiang Cancer Hospital
Priority date: 2022-08-10
Filing date: 2022-08-10
Publication date: 2022-12-30
Anticipated expiration: 2042-08-10
Also published as: CN115032397A

Abstract

本发明公开了一种胃癌预后分子标志物，涉及生物医学检测技术领域。该胃癌预后分子标志物包括：HDAC5与CD4+T cells，或HDAC5与CD8+T cells，其可用于构建评估胃癌患者预后评估模型；胃癌患者的胃癌组织中HDAC5表达水平越低，CD4+T cells或CD8+T cells表达水平越高，提示胃癌患者预后越好。且能够调节胃癌肿瘤免疫微环境，是一个潜在的免疫治疗靶点。

Description

一种胃癌预后分子标志物

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，具体涉及一种胃癌预后分子标志物。

背景技术

胃癌（GC）是一个全球性的健康问题，全球每年有超过100万人新诊断出胃癌。尽管过去5年发病率和死亡率有所下降，但最新的统计数据报道，胃癌全球发病率和死亡率分别位居第5位和第4位。目前胃癌早期诊断主要依赖影像学检查，血清肿瘤标志物，内镜检查和活检病理，早期诊断困难。手术治疗仍是治疗胃癌的主要手段，随着化疗，放疗，靶向治疗等综合治疗的介入，虽然对胃癌患者的预后有了明显的改善，但常规疗法的临床疗效有限，预后仍然较差。免疫治疗作为癌症治疗新的突破口之一，已成为继手术、化疗、放疗和靶向治疗后的一种有效治疗方式。因此，亟需寻找一种新的特异性标志物以及免疫治疗相关的潜在靶点，以助于改善胃癌的诊疗现状。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胃癌预后分子标志物，该标志物包括HDAC5与CD4+Tcells或CD8+T cells，其可用于构建评估胃癌患者预后评估模型；且能够调节胃癌肿瘤免疫微环境，是一个潜在的免疫治疗靶点。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

HDAC5作为胃癌预后分子标志物的应用。本发明通过对HDAC5高低表达进行生存分析，得到胃癌预后与HDAC5的表达水平呈负相关，同时单因素及多因素分析证实HDAC5是患者不良预后的独立影响因素。且HDAC5的表达水平与Lauren分型和M分期以及年龄、吸烟具有显著相关，表明HDAC5在老年、吸烟、Lauren分型为混合型和伴有远处转移的患者中更容易高表达。此外，CD3+T cells、CD4+T cells和CD8+T cells均与HDAC5表达水平呈负相关，且HDAC5的表达水平与activated CD4+T cells、activated+CD8 T cells等多类免疫细胞呈负相关，表明HDAC5可能在胃癌肿瘤免疫微环境中发挥着重要的调节作用。本发明提出了HDAC5在胃癌组织中高表达，是胃癌不良预后的独立因素；且进一步证实HDAC5可能参与胃癌肿瘤微环境的调节，是一个潜在的免疫治疗靶点。

于具体实施方式中，分子标志物用于预测胃癌的预后效果。

于具体实施方式中，HDAC5的表达水平与预后呈负相关。

于具体实施方式中，HDAC5在胃癌组织中高表达，并与不良预后相关，同时HDAC5能够调节胃癌肿瘤免疫微环境，可以作为胃癌诊断、免疫治疗、预后评估的潜在标志物。

于具体实施方式中，HDAC5低表达情况下，判定为良好预后；HDAC5高表达情况下，判定为不良预后。

本发明又公开了上述HDAC5作为分子标志物在制备用于预测胃癌预后产品中的应用。

于具体实施方式中，上述用于预测胃癌预后产品包括HDAC5分子标志物的检测试剂和/或检测试剂盒。

于具体实施方式中，上述检测试剂和/或检测试剂盒检测胃癌组织样本中HDAC5的蛋白表达量；用于该检测的组织样本为福尔马林固定和/或石蜡包埋的胃癌组织样本。

本发明的又一目的在于，提供了上述HDAC5作为治疗靶点在制备胃癌治疗药剂中的应用。

本发明还公开了HDAC5作为分子标志物在构建用于评估胃癌患者的胃癌预后的模型中的应用。

一种胃癌预后分子标志物，包括：HDAC5与CD4+T cells，或HDAC5与CD8+T cells。本发明又提供了HDAC5联合CD4+T cells或CD8+T cells作为胃癌预后分子标志物的应用，胃癌患者的胃癌组织中HDAC5表达水平越低，CD4+T cells或CD8+T cells表达水平越高，提示胃癌患者预后越好；能够用于构建评估胃癌患者的胃癌预后的模型。

于具体实施方式中，胃癌患者组织样本中HDAC5低表达，CD4+T cells高表达，判定为良好预后；胃癌患者组织样本中HDAC5高表达，CD4+T cells低表达，判定为不良预后。

于具体实施方式中，胃癌患者组织样本中HDAC5低表达，CD8+T cells高表达，判定为良好预后；胃癌患者组织样本中HDAC5高表达，CD8+T cells低表达，判定为不良预后。

本发明的又一目的在于，公开了HDAC5联合CD4+T cells或HDAC5联合CD8+T cells作为分子标志物在构建用于评估胃癌患者的胃癌预后的模型中的应用。

进一步的，上述模型通过如下方法构建：

S1：胃癌患者样本构建组织芯片；

S2：采用免疫组化法检测组织芯片中HDAC5与CD4+T cell或HDAC5与CD8+T cell的表达；

S3：采用H评分系统进行HDAC5、CD4+T cell或CD8+T cell表达水平评估；其中，

-若胃癌患者样本的HDAC5水平≥截断值，CD4+T cell或CD8+T cell水平＜截断值，提示胃癌患者的预后不良；

-若胃癌患者样本的HDAC5水平＜截断值，CD4+T cell或CD8+T cell水平≥截断值，提示胃癌患者的预后良好。

于具体实施方式中，H评分系统的公式如下：H score=（∑IS×AP）；其中，IS表示染色强度，AP表示阳性染色的细胞的百分比。

进一步的，IS取决于细胞的染色：无染色为0分，弱染色为1分，中度染色为2分，强染色为3分；AP染色细胞的百分比：0%为0分，1%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，76%-100%为4分。

更进一步的，将H-score=6分设定为截断值，H-score≥6 score定义为HDAC5高表达组；H-score<6 score定义为HDAC5低表达组。

更进一步的，通过记录整个倍镜视野下所有相对应淋巴细胞的个数，以中位数为截断值，≥截断值定义为CD4+T cell或CD8+T cell高表达；＜截断值定义为CD4+T cell或CD8+T cell低表达组。

于具体实施方式中，胃癌患者的胃癌组织中HDAC5低表达与CD4+T cell高表达组的5年总生存率达69.5%。

于具体实施方式中，胃癌患者的胃癌组织中HDAC5低表达与CD8+T cell高表达组的5年总生存率达62.4%。

本发明还提供了上述的胃癌预后分子标志物的应用，包括评价或预测预后风险、预测免疫治疗适用性、预测生存率、制定治疗/用药方案、构建免疫治疗适用性的模型、构建预测胃癌生存率的模型中的任意一种或几种的组合。

本发明的又一目的在于，公开了HDAC5联合CD4+T cells或HDAC5联合CD8+T cells作为分子标志物在制备用于预测胃癌预后产品中的应用。

于具体实施方式中，用于预测胃癌预后产品包括HDAC5表达量和CD4+T cells表达量的检测试剂和/或检测试剂盒。

于具体实施方式中，用于预测胃癌预后产品包括HDAC5表达量和CD8+T cells表达量的检测试剂和/或检测试剂盒。

于具体实施方式中，检测试剂和/或检测试剂盒检测胃癌组织样本中HDAC5、CD4+Tcells、CD8+T cells的蛋白表达量；用于该检测的组织样本为福尔马林固定和/或石蜡包埋的胃癌组织样本。

本发明还公开了HDAC5联合CD4+T cells或HDAC5联合CD8+T cells作为治疗靶点在制备胃癌治疗药剂中的应用。

相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：

本发明公开了HDAC5在胃癌组织中的阳性表达率相较于癌旁组织更高，是影响胃癌预后的独立因子。HDAC5的表达水平与年龄、吸烟史、Lauren分型、M分期相关。HDAC5的表达水平与CD3+Tcells、CD4+Tcells和CD8+Tcells的表达负相关，与PD-L1的表达正相关。以上结果表明，HDAC5在胃癌组织中高表达，是胃癌不良预后的独立因素；同时，HDAC5能够调节胃癌肿瘤免疫微环境，是一个潜在的免疫治疗靶点。此外，本发明还公开了HDAC5联合CD4+T cells或CD8+T cells作为胃癌预后分子标志物的应用，胃癌患者的胃癌组织中HDAC5表达水平越低，CD4+T cells或CD8+T cells表达水平越高，提示胃癌患者预后越好。能够用于构建评估胃癌患者的胃癌预后的模型。

因此，本发明提供了该标志物包括HDAC5与CD4+T cells或CD8+T cells，其可用于构建评估胃癌患者预后评估模型；且能够调节胃癌肿瘤免疫微环境，是一个潜在的免疫治疗靶点。

附图说明

图1为IHC对HDAC5染色后胃癌组织和癌旁组织的免疫组织化学染色图；

图2为HDAC5在胃癌的肿瘤组织和癌旁组织中的差异表达结果；

图3为胃癌患者肿瘤组织中不同HDAC5水平的Kaplan-Meier OS曲线（Log-rank检验）；

图4为胃癌患者癌旁组织中不同HDAC5水平的Kaplan-Meier OS曲线（Log-rank检验）；

图5为IHC染色后CD3+T cell的免疫组织化学染色图；

图6为IHC染色后CD4+T cell的免疫组织化学染色图；

图7为IHC染色后CD8+T cell的免疫组织化学染色图；

图8为IHC染色后PD-L1的免疫组织化学染色图；

图9为胃癌患者肿瘤组织中不同CD3+T水平的Kaplan-Meier OS曲线（Log-rank检验）；

图10为胃癌患者肿瘤组织中不同CD4+T水平的Kaplan-Meier OS曲线（Log-rank检验）；

图11为胃癌患者肿瘤组织中不同CD8+T水平的Kaplan-Meier OS曲线（Log-rank检验）；

图12为胃癌患者肿瘤组织中不同PD-L1水平的Kaplan-Meier OS曲线（Log-rank检验）；

图13为HDAC5表达与CD3+T cell表达的相关性；

图14为HDAC5表达与CD4+T cell表达的相关性；

图15为HDAC5表达与CD8+T cell表达的相关性；

图16为HDAC5表达与PD-L1表达的相关性；

图17为HDAC5相关浸润细胞的热图；

图18为HDAC5差异性免疫浸润细胞的小提琴图；

图19为胃癌患者不同HDAC5和CD4+T cell水平的Kaplan-Meier OS曲线（Log-rank检验）；

图20为胃癌患者不同HDAC5和CD8+T cell水平的Kaplan-Meier OS曲线（Log-rank检验）；

图21为胃癌患者不同HDAC5和CD3+T cell水平的Kaplan-Meier OS曲线（Log-rank检验）；

图22为胃癌患者不同HDAC5和PD-L1水平的Kaplan-Meier OS曲线（Log-rank检验）。

具体实施方式

以下结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细描述：

实施例1：

一、模型构建

样本收集与筛选

收集2008年7月至2017年7月间在中国科学院大学附属肿瘤医院(浙江省肿瘤医院)收治的接受胃癌根治手术的355例患者。纳入研究的355例胃癌患者平均年龄为63.74岁，中位年龄为64岁，年龄范围在28-91岁，其中男性有256名（72.11%），而女性仅有99例（27.89%）。根据术后病理类型发现纳入研究的患者以腺癌为主要病理类型，共有322例，占总数的90.70%；同时，肿瘤分化程度为未分化和低分化为主，共占比47.89%。从肿瘤发生部位来看,该研究中远端胃癌占多数，共有226例（63.66%），近端胃癌仅有116例（32.68%）。从pTNM分期来看，入组病人大多数为III病人，占总人数的72.68%，其余I期、II期和III期病人分别为4.79%、14.37%和6.20%。具体的临床病理资料如表1所示：

表1 355例胃癌患者临床病理特征

注释：AFP，甲胎蛋白；CEA，癌胚抗原；CA199，糖类抗原199；CA724，糖类抗原724；CA125，糖类抗原125；CA50，糖类抗原50。

纳入标准：(1)术后病理诊断均为胃癌(包括胃腺癌等其他病理类型)；(2)病历资料相对完整；(3)术前未行放化疗、靶向治疗或免疫治疗等抗肿瘤综合治疗；(4)生存随访数据完整。排除标准：(1)合并有其他类型的恶性肿瘤患者；(2)其他恶性肿瘤转移而来的患者；(3)伴有严重心肺功能不全，肾功能不全等基础疾病患者。通过住院病历系统回顾收集患者的病历数据，包括人口统计学特征和临床病理特征，所有病理分期均参照AJCC 8th标准。生存资料通过电话随访或医疗记录获得，末次随访时间为2021年8月。总生存期（OS）定义为从初次手术到死亡或最后一次随访的持续时间。此外，从The Cancer Genome Atlas（TCGA）数据库中下载了包含375个胃腺癌肿瘤组织样本的数据集。本研究经中国科学院大学肿瘤医院(浙江省肿瘤医院)伦理委员会批准并符合《赫尔辛基宣言》(2013年修订)的原则（伦理号：IRB-2021-431）。

收集经福尔马林固定、石蜡包埋的355例胃癌组织标本和300例癌旁组织标本，选择具有代表性的胃癌组织及癌旁组织构建成组织芯片（tissue microarrays, TMA）。

二、样本处理-免疫组化染色法

将切片分别脱蜡处理，蒸馏水冲洗；然后进行抗原修复，PBS洗5min×3次。接着添加一抗（HDAC5：16166-1-AP；CD3：ab16669；CD4：ab133616；CD8：ab17147；PD-L1：SK006），4°C孵育过夜，PBS洗5min×3次，然后在TMA上添加山羊抗兔IgG H&L（Biotin）（稀释比例1:1000）,孵育30min，PBS洗5min×3次；然后用DAB显色试剂盒进行DAB显色及苏木素复染细胞核；最后将组织芯片脱水，用中性凝胶封闭。

三、IHC评估

采用H评分系统进行HDAC5表达水平的评估。H评分系统的公式如下：H score =(∑IS×AP)，其中IS表示染色强度，AP表示阳性染色的细胞的百分比。IS取决于细胞的染色：无染色为0分，弱染色为1分，中度染色为2分，强染色为3分。AP染色细胞的百分比：0%为0分，1%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，76%-100%为4分。将H-score=6分设定为截断值，将HDAC5的表达水平分为高（Positive）表达组和低（Negative）表达组。PD-L1的表达通过联合阳性评分（CPS）评分来表示，CPS=[PD-L1阳性细胞数(肿瘤细胞、淋巴细胞、巨噬细胞)/总肿瘤细胞数)]*100进行评价，其中CPS≥10分为阳性。肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的测定通过病理科医生观察记录整个倍镜视野下所有相对应淋巴细胞的个数，并以中位数为截断值，分为高表达与低表达组。

四、统计分析方法

采用SPSS25.0（IBM Corp, Armonk, NY, USA）和GraphPad Prism8（GraphPadSoftware, San Diego, California USA）统计学软件对数据进行统计分析，计数资料以频数和百分比表示，计量资料以x±S表示。采用Mann-Whitney Test或Chi-Square Test确定HDAC5表达水平与临床病理特征和免疫相关因子的相关性；采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，用单因素和多因素Cox回归分析确定影响胃癌患者预后的独立因素；同时计算危险比（HR）及其相应的95%可信区间（CI）。TCGA数据使用基因集方差分析（GSVA）包，按照HDAC5基因的表达水平进行高低分组，分别进行单样本基因集富集分析（ssGSEA），鉴定差异免疫浸润细胞，并绘制热图和小提琴图。p<0.05表示具有统计学差异。

五、结果分析

5.1、IHC染色结果

测试结果如图1-2所示。通过观察355例胃癌组织和300例癌旁组织的免疫组织化学染色图（图1），我们发现HDAC5在细胞质和细胞核中均有表达。具体的IH-score见图2，其中355例胃癌组织芯片中有268例存在不同水平的HDAC5表达，HDAC5表达率为75.49%，87例组织芯片HDAC5表达阴性，占24.51%，如表2所示：

表2 HDAC5在胃癌中的差异表达

变量	N	0 score	<6 score	≥6 score	高表达率(＞1)	低表达率(≥6)
							HDAC5	355	87	217	138	75.49%	38.87%

实验分析中，将H-score=6 score分定义为cut-off值，将H-score≥6 score定义为HDAC5阳性(高)表达组，H-score<6 score定义为HDAC5阴性(低)表达组。分析结果如表3所示，发现355例胃癌组织中，有138例HDAC5高表达，高表达率达38.87%，而300例癌旁组织样本免疫组化染色样本中仅有44例HDAC5高水平表达，高表达率仅为14.67%，结果表明相较于癌旁组织，HDAC5在胃癌组织中高表达（p<0.001）。

表3 HDAC5在肿瘤组织和癌旁组织中的差异表达

注释：#代表P<0.05。

接着采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，结果如图3-4所示。发现癌组织中HDAC5高表达水平的患者预后较低表达组更差（图3，5-year OS: 44.7% vs. 60.6%，p=0.007），但对癌旁组织高低表达组间进行分析发现并不具有显著的统计学意义（图4，5-year OS:52.9% vs. 60.1%, p=0.227），这意味着在癌组织中，HDAC5的表达水平与预后呈负相关。

5.2、胃癌预后影响因素分析

为了探究影响胃癌预后的独立因素，首先将性别、年龄、家族史、肿瘤位置等重要临床病理资料，PD-L1和TILs纳入单因素Cox回归方程，结果如表4所示：

表4 355例胃癌患者的单因素Cox回归分析

注释：#代表P<0.05。AFP，甲胎蛋白；CEA，癌胚抗原；CA199，糖类抗原199；CA724，糖类抗原724；CA125，糖类抗原125；CA50，糖类抗原50。

分析发现HDAC5表达水平（p=0.008）、CD4+Tcells（p=0.029）、CD8+Tcells（p=0.040）、胃癌家族史（p=0.002）、肿瘤的T分期（p=0.010）、N分期（p<0.001）、M分期（p<0.001）、TNM分期（p<0.001）、CEA（p=0.004）、CA199（p=0.25）和CA50（p=0.035）对胃癌预后有一定影响。接着构建多因素Cox回归方程如表5所示：

表5 355例胃癌患者的多元COX回归分析

注释：#代表P<0.05。CEA，癌胚抗原；CA199，糖类抗原199；CA50，糖类抗原50。

结果发现HDAC5表达水平（p=0.036，HR=1.581，95%CI=1.031-2.426），CD4+T cells（p=0.012，HR=0.539，95%CI=0.334-0.872），CD8+T cells（p<0.001，HR=0.288，95%CI=0.144-0.577），TNM分期（p<0.001，HR=3.757，95%CI=1.790-7.886）是影响胃癌预后的独立因子。由此可见，单因素和多因素分析均表明HDAC5是胃癌的独立预后因素。

5.3、HDAC5表达水平与临床病理特征的相关性分析

为了进一步探讨HDAC5表达水平与临床病理特征的相关性,，对收集的临床病理资料进行分析，运用Chi-Square Test进行组间相关性分析，结果如表6所示：

表6 HDAC5表达与胃癌临床病理特征的相关性

分析结果发现年龄超过65岁时，HDAC5的阳性表达率更高（44.19% vs. 33.88%，p=0.046），同时相较于不吸烟患者，吸烟患者的阳性率也更高（43.59% vs. 38.41%, p=0.001）。此外，发现Lauren分型与HDAC5的表达水平密切相关，混合型患者HDAC5阳性表达水平较肠型和弥漫型相比显著提高（p=0.042），其中肠型、弥漫型和混合型的阳性表达率分别为39.09%、31.48%和53.49%。另外，M分期与HDAC5的表达水平同样具有显著相关性，M1分期时HDAC5的表达水平更高（p=0.012）。这意味着HDAC5的表达水平与年龄、吸烟史、Lauren分型和M分期具有一定的相关性。然而，其余指标如性别、家族史、肿瘤位置及大小、Borrmann分型、分化程度、T分期、N分期、CEA等常见消化道肿瘤标志物均与HDAC5表达水平无显著的相关性。

5.4、胃癌患者肿瘤免疫微环境分析

对355例患者进行组织免疫组化染色测定癌组织中的TILs（CD3+T cells，CD4+Tcells，CD8+T cells）和PD-L1的表达情况，结果如图5-8所示。以CD3+T cells、CD4+Tcells、CD8+T cells数量的中位数为截断值分为高表达组和低表达组（图5-7）。以CPS评分为依据，将PD-L1分为阳性表达组和阴性表达组（图8）。

接下来，对TILs和PD-L1表达水平进行生存分析，Kaplan-Meier生存曲线如图9-12所示。分析发现CD4+T cells和CD8+T cells数量对预后有一定的影响，CD4+Tcells或CD8+Tcells为高表达组时患者的预后均更好（图10、图11，CD4+T cells 5-year OS：60.6% vs.48.9%，p=0.027，CD8+T cells 5-year OS：60.6% vs. 48.6%，p=0.038），但CD3+T cells和PD-L1表达水平对患者的预后无显著影响（图9、图12，CD3+T cells 5-year OS：55.2% vs.54.5%，p=0.994，PD-L1 5-year OS：55.2% vs. 53.5%，p=0.981）。这表明CD4+T cells和CD8+T cells的表达与胃癌患者的预后呈正相关。

5.5、HDAC5的表达与胃癌TILs和PD-L1表达相关性分析

对HDAC5的表达与胃癌TILs和PD-L1表达的关系分析结果如表7所示：

表7胃癌中HDAC5表达与CD3、CD4、CD8、PD-L1表达的相关性（Mann-Whitney检验和Chi-Square检验）

参数	HDAC5 vs CD3	HDAC5 vs CD4	HDAC5 vs CD8	HDAC5 vs PD-L1
					χ2/Z值	-6.055	-3.840	-5.980	11.247
<i>P</i>	<0.001<sup>#</sup>	<0.001<sup>#</sup>	<0.001<sup>#</sup>	0.001<sup>#</sup>

注释：#代表P<0.05。

进一步的对CD3+T cells, CD4+T cells和CD8+T cells与HDAC5进行相关性分析，结果如图13-15所示，发现CD3+T cells（292.23±14.88 vs. 197.62±18.16，p<0.001）、CD4+T cells（56.83±4.62 vs. 44.83±7.13，p<0.001）和CD8+T cells（177.08±10.22vs. 108.79±10.30，p<0.001）与HDAC5的表达水平呈负相关。随后对HDAC5高低表达两组间PD-L1表达情况进行分析，结果如图16所示，发现HDAC5高表达时，PD-L1的阳性率更高（20.7% vs. 37.0%，p=0.001），说明PD-L1的表达与HDAC5的表达水平呈正相关。

此外，对TCGA数据库中下载的375个胃腺癌组织信息进行ssGSEA分析，鉴定其差异免疫浸润细胞并绘制出了热图和小提琴图，结果如图17-18所示，发现HDAC5的表达水平与activated CD4 T cells（p<0.0001）、activated CD8 T cells（p<0.0001）、activateddendritic cell（p<0.001）、CD56 bright natural killer cell（p<0.01）、centralmemory CD8 T cell（p<0.05）、gamma delta T cell（p<0.01）、neutrophil（p<0.001）、plasmacytoid dendritic cell（p<0.05）、type 17 T helper cell（p<0.01）和type 2Thelper cell（p<0.05）显著相关，并且除plasmacytoid dendritic cell外，其余免疫浸润细胞水平均与HDAC5的表达水平呈负相关。

5.6、HDAC5与TILs和PD-L1共表达时对胃癌预后的影响分析

根据CD4+T cells水平和HDAC5表达水平将患者分为四组：HDAC5^low+CD4^low，HDAC5^low+CD4^high，HDAC5^high+CD4^low，HDAC5^high+CD4^high；进行Kaplan-Meier生存分析如图19-22所示。HDAC5联合CD4+T cells进行预后分析如图19所示，发现HDAC5^low+CD4^high组预后最佳（5-year OS：69.5%），HDAC5^high+CD4^high组预后最差（5-year OS：39.9%），HDAC5^low+CD4^low和HDAC5^high+CD4^low的5年OS相似（5-year OS：49.0% vs. 48.4%），四组总体预后具有统计学意义（p=0.004）。HDAC5联合CD8+T cells进行预后分析如图20所示，发现HDAC5^low+CD8^high组预后最佳（5-year OS: 62.4%），HDAC5^high+CD8^low组预后最差（5-year OS: 40.6%），其余两组预后相似（5年OS：57.2% vs 53.6%），且组间预后差异具有统计学意义（p=0.023）。虽然CD3+T cells和PD-L1进行生存分析发现与预后均无显著相关，但基于其表达水平与HDAC5存在的相关性，对HDAC5表达和CD3+T cells联合进行预后分析如图21所示，结果发现HDAC5^low+CD3^low组和HDAC5^low+CD3^high组预后相对较好，两组间5年OS相似，分别为60.6%和60.5%，HDAC5^high+CD3^low组预后其次（5-year OS：48.3%），HDAC5^high+CD3^high组预后最差37.9%，四组间总体生存差异有意义（p=0.031）。最后，根据HDAC5和PD-L1表达情况进行生存分析如图22所示，结果发现HDAC5^low+PD-L1-和HDAC5^low+PD-L1+组预后较好，两组预后类似（5-year OS:59.4% vs. 64.9%），HDAC5^high+PD-L1-和HDAC5^high+PD-L1+组预后相对更差（5-year OS:46.5% vs. 42.6%），整体生存差异具有统计学差异（p=0.046）。

六、实验结论

对HDAC5高低表达进行生存分析，发现胃癌预后与HDAC5的表达水平呈负相关，同时单因素及多因素分析证实HDAC5是患者不良预后的独立影响因素。HDAC5的表达水平与Lauren分型和M分期具有显著相关。此外，HDAC5的表达水平与年龄和吸烟也具有显著相关性，这表明HDAC5在老年、吸烟、Lauren分型为混合型和伴有远处转移的患者中更容易高表达。

同时，将HDAC5表达水平与CD3+T cells、CD4+T cells和CD8+T cells数量进行相关性分析，发现CD3+T cells、CD4+T cells和CD8+T cells均与HDAC5表达水平呈负相关。HDAC5的表达水平与activated CD4+T cells、activated CD8+T cells等多类免疫细胞呈负相关，表明HDAC5可能在胃癌肿瘤免疫微环境中发挥着重要的调节作用。

此外，高表达水平的CD4+T cells和CD8+T cells与患者的良好预后相关；同时单因素及多因素分析也证实CD4+T cells和CD8+T cells均为患者预后的独立影响因素。通过联合生存分析，发现HDAC5^low+CD4^high和HDAC5^low+CD8^high组的预后最佳，5年OS分别达到了69.5%和62.4%；即胃癌患者的胃癌组织中HDAC5表达水平越低，CD4+T cells或CD8+T cells表达水平越高，提示胃癌患者预后越好。根据HDAC5表达水平与预后呈负相关，高表达水平的CD4+T cells和CD8+T cells与预后呈正相关，表明HDAC5与CD4+T cells，CD8+T cells的共同作用会对胃癌预后产生一定影响，进一步证实了HDAC5可能参与胃癌肿瘤微环境的调节，是一个潜在的免疫治疗靶点。

上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims

1.HDAC5联合CD8+T cells作为分子标志物在构建用于评估胃癌患者的胃癌预后的模型中的应用；

上述模型通过如下方法构建：

S1：胃癌患者样本构建组织芯片；

S2：采用免疫组化法检测组织芯片中HDAC5与CD8+T cell的表达；

S3：对HDAC5、CD8+T cell表达水平进行评估；其中，

-若胃癌患者样本的HDAC5为高表达，CD8+T cell为低表达，提示胃癌患者的预后不良；

-若胃癌患者样本的HDAC5为低表达，CD8+T cell为高表达，提示胃癌患者的预后良好；

其中，采用H评分系统进行HDAC5表达水平评估，H评分系统的公式如下：H score=（∑IS×AP）；其中，IS表示染色强度，AP表示阳性染色的细胞的百分比；

IS取决于细胞的染色：无染色为0分，弱染色为1分，中度染色为2分，强染色为3分；AP染色细胞的百分比：0%为0分，1%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，76%-100%为4分；

将H-score=6分设定为截断值I，H-score大于等于6 score定义为HDAC5高表达；H-score小于6 score定义为HDAC5低表达；

CD8+T cell表达水平评估方法为：以CD3+T cells、CD4+T Cells、CD8+T cells数量的中位数为截断值II，大于等于截断值II定义为CD8+T cell高表达；小于截断值II定义为CD8+T cell低表达。