CN114720687A

CN114720687A - Sfrp4作为胃癌预后标志物的应用

Info

Publication number: CN114720687A
Application number: CN202210613184.3A
Authority: CN
Inventors: 程向东; 袁莉; 于鹏程; 徐志远; 胡灿
Original assignee: Zhejiang Cancer Hospital
Current assignee: Zhejiang Cancer Hospital
Priority date: 2022-06-01
Filing date: 2022-06-01
Publication date: 2022-07-08

Abstract

本发明公开了SFRP4作为胃癌预后标志物的应用，属于肿瘤分子生物学领域，本发明还公开了SFRP4作为治疗靶标在制备胃癌治疗药物中的应用，SFRP4在胃癌组织中表达上调，与不良预后显著相关；SFRP4与胃癌组织中各种淋巴细胞、免疫调节剂和趋化因子的丰度显着相关，可以更好地预测患者的生存时间，甚至评估免疫微环境的状态，是指导免疫治疗和确定胃癌患者预后的潜在有用和可靠的生物标志物。本发明还提供SFRP4联合CD8⁺T作为胃癌预后标志物的应用，SFRP4联合CD8⁺T可以更好地预测胃癌预后，组织样本中SFRP4低表达伴CD8⁺T细胞高浸润，提示病人的预后良好。

Description

SFRP4作为胃癌预后标志物的应用

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及SFRP4作为胃癌预后标志物的应用。

背景技术

据国际癌症研究机构的癌症发病率和死亡率估计值显示：2020年全球有1930万癌症新发病例和1000万癌症死亡病例。胃癌（GC）是全球第五大常见恶性肿瘤和癌症相关死亡的第四大原因。尽管近年来胃癌的诊断和治疗取得了进展，但由于早期症状轻，诊断率低，大多患者确诊时已是晚期胃癌，且胃癌的预后仍然不令人满意，5年总生存率低于40%。因此，寻找有效的生物标志物用于早期检测胃癌及开发新的治疗策略显得尤为重要。此外，肿瘤免疫微环境在癌症发展中发挥着重要作用，癌细胞和免疫细胞之间复杂的关联可以促进或抑制癌症进展。近年来免疫治疗具有免疫调节、抗肿瘤等方面的优势，且免疫治疗能通过抗肿瘤的免疫反应提高患者对化疗的敏感性。有许多临床研究表明，胃癌的免疫治疗取得了较好的效果。免疫检查点抑制剂(ICIs)，例如抗程序性细胞死亡-1(PD-1)或程序性细胞死亡配体-1(PD-L1)单克隆抗体，可延长胃癌及各种恶性肿瘤的生存期，已被批准用于治疗转移性和难治性胃癌患者。但免疫检查点抑制剂治疗仅使一小部分胃癌患者受益。因此，有必要尽快探索新的生物标志物来扩大胃癌免疫治疗的获益人群。

分泌型卷曲相关蛋白(secretedfrizzled—relatedproteins, SFRPs)是一个糖蛋白家族，包括SFRP1、SFRP2、SFRP3、SFRP4和SFRP5，SFRPs包括一个C端结构域和一个N端结构域，每个结构域各自独立运行。在C端结构域内是netrin样结构域(NLD)。N端由富含半胱氨酸的120个氨基酸的结构域(CRD)组成，该结构域由10个半胱氨酸残基的保守区域组成，与Wnt受体Frizzled（Fz）蛋白的CRD区域相似序列较多。SFRP4基因位于7号染色体(7p14.1)的短臂上，由六个编码外显子组成，长度为10.99kb，它包含一个富含半胱氨酸的域，因与Wnt结合位点同源，SFRP通常被认为是肿瘤抑制因子。且SFRP4被证明可以抑制恶性肿瘤的增殖和转移。在食管癌，卵巢癌、肝癌、胰腺癌、乳腺癌中，SFRP4在肿瘤中相较于邻近正常组织存在表达量下调的结果。但另一些研究存在互相矛盾的结果，与邻近正常组织相比，SFRP4在结直肠癌、前列腺癌、甲状腺癌中过度表达。可见，SFRP4同时可以作为肿瘤抑制因子和促癌因子，在不同肿瘤类型中发挥着完全相反的作用，但它在胃癌中的作用仍不清楚。因此，分析SFRP4在胃癌中的表达情况、预后价值及与免疫细胞浸润之间的相关性，可以为胃癌的发病机制研究提供新的理论依据，以及临床上胃癌的诊断和治疗提供新的手段。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种SFRP4作为胃癌预后标志物的应用，SFRP4在胃癌组织中表达上调，是胃癌患者独立的预后因素，与不良预后显著相关。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

本发明提供SFRP4作为胃癌预后标志物的应用。

SFRP4在胃癌组织中表达上调，是胃癌患者独立的预后因素，与不良预后显著相关；同时，SFRP4高表达与PD-L1表达阳性、CD8⁺T高浸润呈正相关。此外，在线数据库挖掘中同样表明胃癌组织中SFRP4高表达，并与胃癌组织中各种淋巴细胞、免疫调节剂和趋化因子的丰度显着相关。可见，SFRP4是一个重要的免疫相关因子，可以更好地预测患者的生存时间，甚至评估免疫微环境的状态，是指导免疫治疗和确定胃癌患者预后的潜在有用和可靠的生物标志物。

本发明还提供一种可作为胃癌患者独立的预后因素的胃癌预后标志物，包括SFRP4。组织样本中SFRP4的表达升高提示病人的预后不良。

本发明还提供一种可用于预测胃癌预后和指导免疫治疗的H评分系统的构建方法，包括如下步骤：

1）将胃癌组织样本构建组织芯片；

2）采用免疫组化法检测组织芯片中SFRP4的表达；

3）构建H评分系统；

H评分系统的公式如下：

H分数=（∑IS×AP)，其中，

IS表示染色强度，无染色为0分，弱染色为1分，中度染色为2分，强染色为3分；

AP表示阳性染色的细胞的百分比，0%为0分，1%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，76%-100%为4分。

本发明构建方法构建的H评分系统可以用于SFRP4表达强度评估，根据评分的中位数，患者被分为SFRP4高表达组和SFRP4低表达组，SFRP4低表达组比SFRP4高表达组胃癌患者有更长的生存时间，SFRP4低表达组患者更适合使用免疫治疗。本发明的H评分系统为预测胃癌预后和指导免疫治疗提供了一种新的方法，在临床上具有良好的应用前景。

本发明还提供SFRP4作为胃癌预后标志物在构建评估胃癌预后的模型中的应用。

可选地，评估胃癌预后的模型通过如下方法构建，

1）将胃癌组织样本构建组织芯片；

2）采用免疫组化法检测组织芯片中SFRP4的表达，采用上述的H评分系统进行SFRP4表达强度评估；

3）根据SFRP4表达情况情况评估患者存活率。

本发明还提供SFRP4作为治疗靶点在制备胃癌治疗药物中的应用。

可选地，SFRP4作为免疫治疗靶点在制备胃癌治疗药物中的应用。

本发明还提供检测SFRP4表达量的试剂在制备胃癌预后评估试剂盒中的应用；试剂盒中包含有检测组织样本中SFRP4表达量的试剂，用于该检测的组织样本为福尔马林固定和/或石蜡包埋的胃癌组织样本。

本发明还提供SFRP4联合CD8⁺T作为胃癌预后标志物的应用。SFRP4联合CD8⁺T可以更好地预测胃癌预后。

本发明还提供SFRP4联合CD8⁺T在制备胃癌预后检测试剂中的应用，其中，组织样本中SFRP4低表达伴CD8⁺T细胞高浸润，提示病人的预后良好。

本发明由于采用了SFRP4作为胃癌预后标志物，因而具有如下有益效果：本发明SFRP4在胃癌组织中表达上调，是胃癌患者独立的预后因素，与不良预后显著相关；胃癌组织中SFRP4高表达，并与胃癌组织中各种淋巴细胞、免疫调节剂和趋化因子的丰度显着相关；本发明SFRP4可以更好地预测患者的生存时间，甚至评估免疫微环境的状态，是指导免疫治疗和确定胃癌患者预后的潜在有用和可靠的生物标志物。因此，本发明提供一种SFRP4作为胃癌预后标志物的应用，SFRP4在胃癌组织中表达上调，是胃癌患者独立的预后因素，与不良预后显著相关。

附图说明

图1A为SFRP4在肿瘤及癌旁组织中表达的代表图；

图1B为SFRP4在肿瘤及癌旁组织中表达的差异；

图2为TIMER数据库中SFRP4在多种肿瘤中的表达差异；

图3A为胃癌中PD-L1表达与SFRP4表达之间的关联性；

图3B为胃癌中CD3⁺T细胞与SFRP4表达之间的关联性；

图3C为胃癌中CD4⁺T细胞在SFRP4表达之间的关联性；

图3D为胃癌中CD8⁺T细胞在SFRP4表达之间的关联性；

图3E为TIMER数据库中，胃腺癌SFRP4表达与免疫细胞的相关性；

图4A为SFRP4表达水平与淋巴细胞之间的关系；

图4B为SFRP4表达水平与免疫抑制分子之间的关系；

图4C为SFRP4表达水平与免疫激动分子之间的关系；

图4D为SFRP4表达水平与主要组织相容性复合物分子之间的关系；

图4E为SFRP4表达水平与趋化因子之间的相关性；

图4F为SFRP4表达水平与受体之间的相关性；

图5A为基于肿瘤组织中SFRP4表达情况的OS的Kaplan-Meier生存曲线；

图5B为基于肿瘤组织中PD-L1表达情况的OS的Kaplan-Meier生存曲线；

图5C为基于肿瘤组织中CD3表达情况的OS的Kaplan-Meier生存曲线；

图5D为基于肿瘤组织中CD4表达情况的OS的Kaplan-Meier生存曲线；

图5E为基于肿瘤组织中CD8表达情况的OS的Kaplan-Meier生存曲线；

图5F为基于肿瘤组织中SFRP4联合CD8表达情况的OS的Kaplan-Meier生存曲线。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明进一步详细说明。

本发明实施方式公开了SFRP4作为胃癌预后标志物的应用。

作为本发明一实施例，预后包括总生存期。

作为本发明一实施例，组织样本中SFRP4的表达水平越高，提示胃癌的临床分级越高，肿瘤浸润深度越高，病人的预后越差，生存期越短。

作为本发明一实施例，组织样本中SFRP4高表达较SFRP4低表达的5年总生存率差。

本发明还提供一种胃癌预后标志物，包括SFRP4。胃癌组织样本中SFRP4的表达升高提示病人的预后不良。

作为本发明一实施例，胃癌预后标志物还包括CD8⁺T。SFRP4联合CD8⁺T可以更好地预测胃癌预后。

本发明实施方式公开了SFRP4在制备胃癌预后检测试剂中的应用，其中，组织样本中SFRP4的表达水平越高，提示胃癌的临床分级越高，肿瘤浸润深度越高，病人的预后越差，生存期越短。

本发明实施方式公开了一种H评分系统的构建方法，包括如下步骤：

1）将胃癌组织样本构建组织芯片；

2）采用免疫组化法检测组织芯片中SFRP4的表达；

3）构建H评分系统；

H评分系统的公式如下：

H分数=（∑IS×AP)，其中，

本发明实施方式公开了SFRP4作为胃癌预后标志物在构建评估胃癌预后的模型中的应用。

作为本发明一实施例，评估胃癌预后的模型通过如下方法构建，

1）将胃癌组织样本构建组织芯片；

3）根据SFRP4表达情况情况评估患者存活率。

作为本发明一实施例，评估胃癌预后的模型通过如下方法构建，包括：

1）将胃癌组织样本构建组织芯片；

2）采用免疫组化法检测组织芯片中SFRP4和/或PD-L1和/或CD3⁺T和/或CD4⁺T和/或CD8⁺T的表达；

3）根据SFRP4和/或PD-L1表达情况和/或T细胞浸润情况评估患者存活率。

作为本发明一实施例，PD-L1的表达通过联合阳性评分（CPS）评分来表示，CPS=[PD-L1阳性细胞数（肿瘤细胞、淋巴细胞、巨噬细胞）/总肿瘤细胞数）]×100进行评价，其中CPS≥10分为阳性。

作为本发明一实施例，在组织芯片上计算CD3⁺T、CD4⁺T、CD8⁺T细胞数量，根据染色细胞数的中位数，患者被分为高表达组和低表达组。

本发明实施方式公开了检测SFRP4表达量的试剂在制备胃癌预后评估试剂盒中的应用；试剂盒中包含有检测组织样本中SFRP4表达量的试剂，用于该检测的组织样本为福尔马林固定和/或石蜡包埋的胃癌组织样本。

作为本发明一实施例，试剂为SFRP4抗体。优选地，试剂为SFRP4:15328-1-AP。

本发明实施方式公开了SFRP4作为治疗靶点在制备胃癌治疗药物中的应用。

作为本发明一实施例，SFRP4作为免疫治疗靶点在制备胃癌治疗药物中的应用。

本发明实施方式公开了SFRP4作为胃癌免疫治疗效果预测标志物的应用。SFRP4表达与免疫微环境之间存在关联，SFRP4表达水平与胃腺癌患者的淋巴细胞、免疫调节剂和趋化因子之间存在一定关联，这可能是因为SFRP4在胃癌进展过程中与免疫细胞浸润相互作用，从而影响免疫微环境。因此，SFRP4在胃癌肿瘤免疫微环境中起着重要的调节作用，可能是胃癌免疫治疗关键的关键靶点。

本发明实施方式公开了一种胃癌免疫治疗效果预测标志物，包括SFRP4。

作为本发明一实施例，免疫治疗疗效预测标志物用于提示免疫微环境激活。

本发明实施方式公开了检测SFRP4表达量的试剂在制备预测免疫治疗胃癌效果的试剂盒中的应应用；试剂盒中包含有检测组织样本中SFRP4表达量的试剂，用于该检测的组织样本为福尔马林固定和/或石蜡包埋的胃癌组织样本。

本发明实施方式公开了SFRP4联合CD8⁺T作为胃癌预后标志物的应用。SFRP4联合CD8⁺T可以更好地预测胃癌预后。

作为本发明一实施例，预后包括总生存期。

作为本发明一实施例，组织样本中SFRP4低表达伴CD8⁺T细胞高浸润，提示病人的预后良好。

作为本发明一实施例，组织样本中SFRP4低表达伴CD8⁺T细胞高浸润的5年总生存率为69.23%。

本发明实施方式公开了SFRP4联合CD8⁺T在制备胃癌预后检测试剂中的应用，其中，组织样本中SFRP4低表达伴CD8⁺T细胞高浸润，提示病人的预后良好。

本发明实施方式公开了SFRP4联合CD8⁺T作为胃癌预后标志物在构建评估胃癌预后的模型中的应用。

评估胃癌预后的模型通过如下方法构建，包括：

1）将胃癌组织样本构建组织芯片；

2）采用免疫组化法检测组织芯片中SFRP4和CD8⁺T的表达，采用上述的H评分系统进行SFRP4表达强度评估；

3）根据SFRP4表达情况和CD8⁺T细胞浸润情况评估患者存活率。

作为本发明一实施例，在组织芯片上计算CD3⁺T细胞数量，根据染色细胞数的中位数，患者被分为高表达组和低表达组。

本发明实施方式公开了检测SFRP4和CD8⁺T表达量的试剂在制备胃癌预后评估试剂盒中的应用；试剂盒中包含有检测组织样本中SFRP4和CD8⁺T表达量的试剂，用于该检测的组织样本为福尔马林固定和/或石蜡包埋的胃癌组织样本。

作为本发明一实施例，试剂为SFRP4抗体和CD8⁺T抗体。优选地，SFRP4抗体为15328-1-AP，CD8⁺T抗体为ab17147。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1：

1.方法

1.1. 患者和组织芯片构建

选取2013年1月至2017年12月中国科学院大学附属肿瘤医院（浙江省肿瘤医院）收治的胃癌患者137例。纳入标准：（1）样本病理诊断结果均为胃癌；（2）术前未行化放疗、生物治疗或免疫治疗等抗肿瘤治疗；（3）患者病历资料完整。排除标准：（1）既往患有其他类型的恶性肿瘤患者；（2）术前行抗肿瘤治疗的患者；（3）其他瘤种转移而来的患者。

收集所有患者手术切除的胃癌组织样本和癌旁组织样本，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋。对137例胃癌患者术后样本采用组织芯片技术构建胃癌组织及配对癌旁组织石蜡组织芯片，用免疫组化法检测该芯片中SFRP4、CD3⁺T、CD4⁺T、CD8⁺T、PD-L1的表达。回顾性收集137例患者的临床病理资料。包括患者的年龄、性别、吸烟史、饮酒史、体重下降、胃癌家族史、肿瘤位置、Borrmann分型、Lauren分型、分化程度、病理类型、肿瘤大小、T分期、N分期、M分期、TNM分期、肿瘤标志物及5年生存率等。其中胃癌TNM分期参照第八版AJCC分期标准。

1.2. 免疫组织化学与免疫组化评估

收集上述经福尔马林固定、石蜡包埋的胃癌组织样本和癌旁组织样本。经由两名病理科医师独立筛选，选择具有代表性的胃癌组织及癌旁组织构建成组织芯片。将切片分别脱蜡处理，蒸馏水冲洗:然后进行抗原修复，PBS洗5分钟×3次。接着添加SFRP4、CD3⁺T、CD4⁺T、CD8⁺T、PD-L1抗体（SFRP4:15328-1-AP;CD3⁺T：ab16669;CD4⁺T：ab133616;CD8⁺T：ab17147;PD-L1：SK006），4°C孵育过夜，PBS洗5分钟×3次；然后再组织芯片上添加山羊抗兔IgGH&L(Biotin)(稀释比例1:1000)/山羊抗小鼠IgGH&L(Biotin)(稀释比例1:500),孵育30分钟，PBS洗5分钟×3次;然后用DAB显色试剂盒进行DAB显色及苏木素复染细胞核;最后将组织芯片脱水，用中性凝胶封闭。

在组织芯片上计算CD3⁺T、CD4⁺T、CD8⁺T细胞数量。根据染色细胞数的中位数，患者被分为高表达组和低表达组。PD-L1的表达通过联合阳性评分（CPS）评分来表示，CPS=[PD-L1阳性细胞数（肿瘤细胞、淋巴细胞、巨噬细胞）/总肿瘤细胞数）]*100进行评价。其中CPS≥10分为阳性。

以H评分系统进行SFRP4表达强度评估。H评分系统的公式如下:H分数=（∑ISxAP)，其中IS表示染色强度，AP表示阳性染色的细胞的百分比。IS取决于细胞的染色:无染色为0分；弱染色为1分；中度染色为2分；强染色为3分，AP染色细胞的百分比:0%为0分；1%-25%为1分；26%-50%为2分；51%-75%为3分；76%-100%为4分。根据评分的中位数，患者被分为SFRP4高表达组和低表达组。以上结果分别由两位副高以上病理科的医师进行判读。

1.3.数据库分析

使用TIMER数据库进行差异表达分析。基于TIMER和TISIDB数据库评估了SFRP4与免疫微环境之间的关系。

1.4.统计分析

采用SPSS26.0统计软件对数据进行统计分析，采用GraphpadPrism9进行作图。计量资料以中位数+上下四分位数表示，计数资料以值和百分比表示并采用卡方检验及Fisher精确检验分析表示，计数资料以值和百分比表示。使用Kaplan-Meier法进行生存分析，采用Cox回归进行单因素多因素风险评估。P＜0.05认为差异有统计学意义。

2. 结果

2.1. 一般资料

对137例胃癌患者进行回顾性队列研究，其中男性97（70.80%）例，女性40（29.20%）例；中位年龄为61（28-86）岁；有饮酒史患者33（24.09%）例，无饮酒史患者104（75.91%）例；有体重下降患者53（38.69%）例，无体重下降患者83（60.58%）例；有胃癌家族史患者20（14.60%）例，无胃癌家族史患者117（85.40%）例；肿瘤位于近端胃患者43（31.39%）例，肿瘤位于远端胃患者85（62.04%）例，肿瘤位于全胃患者9（6.57%）例；劳伦分型为肠型患者69（50.36%）例，劳伦分型为混合型患者18（13.14%）例，劳伦分型为弥漫型患者50（36.50%）例；病理为腺癌患者123（89.78%）例，病理为其它类型患者14（10.22%）例；TNM分期为I期患者1（0.73%）例，II期患者17（12.41%）例，III期患者106（77.37%）例，IV期患者13（9.49%）例；中位OS为39（2-92）个月；随访期间共有73（53.28%）例患者死亡。患者其余的详细临床病理特征见表1。

表1患者队列的临床病理学特征(n=137)

2.2. SFRP4在胃癌中过表达并与肿瘤浸润深度相关

SFRP4在胃癌组织及癌旁组织的细胞膜和细胞质中均表达，在细胞核中几乎不表达（图1A）。在137例患者癌组织中检测到SFRP4高表达96（70.07%）例，癌旁组织中检测到SFRP4高表达76（55.47%）例（表2），癌组织中SFRP4表达较癌旁组织明显上调（P=0.012）（图1B）。使用卡方检验分析SFRP4表达情况与一般临床病理特征之间的相关性，结果表明SFRP4表达程度与肿瘤浸润深度呈正相关（P=0.025），未发现胃癌组织中SFRP4表达与年龄、性别、体重下降、胃癌家族史、肿瘤位置、Borrmann分型、Lauren分型、分化程度、病理类型、肿瘤大小、N分期、M分期、TNM分期等临床病理特征之间存在显着关系（表3）。为进一步验证SFRP4在胃癌组织中的表达情况，使用TIMER数据库分析SFRP4在恶性肿瘤及其相应正常组织之间的表达差异。结果表明，SFRP4在胃腺癌（STAD）组织中过表达，这与我们的结果相一致（图2）。

表2 SFRP4在胃癌组织和癌旁组织中的差异表达

表3 SFRP4表达与胃癌患者临床病理特征的关系（n=137）

2.3. SFRP4高表达与PD-L1阳性表达、CD8+T高浸润呈正相关

利用卡方检验分析SFRP4表达与PD-L1的关联，结果显示在胃癌组织中，SFRP4高表达与PD-L1表达程度呈正相关（图3A）。随后利用秩和检验分析SFRP4表达与T细胞浸润的关联。我们发现胃癌组织中SFRP4高表达时CD8⁺T细胞浸润程度更高（P=0.015）（图3D）。CD3⁺T和CD4⁺T浸润程度在SFRP4高、低表达组之间无明显差异（图3B、图3C），为验证上述结果，使用TIMER数据库分析胃腺癌中SFRP4表达与免疫细胞浸润之间的相关性。结果显示SFRP4表达与CD8⁺T细胞（partialcor=0.211，P=4.42e-05）、CD4⁺T细胞（partialcor=0.347，P=8.67e-12）表达相关。这些结果显示，无论是我们研究结果还是数据库分析均表明SFRP4可以调节胃癌肿瘤免疫微环境（图3E）。

2.4. SFRP4表达与免疫微环境相关联

为进一步探索SFRP4表达与免疫微环境之间是否存在关联，我们使用TISIDB数据库分析了胃腺癌患者SFRP4表达水平与免疫成分之间的关系，以更深入地了解SFRP4与免疫微环境的关系。首先研究了肿瘤中淋巴细胞的浸润丰度与SFRP4表达水平之间的关系。结果表明，SFRP4表达水平与Tfh细胞（rho=0.411，P<2.2e-16）、NK细胞（rho=0.532，P<2.2e-16）、Tcm_CD8细胞（rho=0.254，P<1.64e-07）、Treg细胞（rho=0.451，P<2.2e-16)、Macrophage细胞(rho=0.53,P<2.2e-16)和Tcm_CD4细胞(rho=0.314,P<7.12e-11)相关(图4A）。接下来，我们评估了免疫抑制分子、免疫激动分子和主要组织相容性复合物分子这三种免疫调节剂与SFRP4表达之间的关系。SFRP4表达水平与免疫抑制分子IL10_exp、CD96_exp、CD160_exp、CTLA4_exp、TGFBR1_exp和PDCD1_exp相关（图4B）。以及SFRP4与免疫激动分子之间的相关性，包括CD28_exp、CD86_exp、CXCL12_exp、CD80_exp、IL6_exp和TNFRSF25_exp（图4C）。SFRP4表达水平与主要组织相容性复合物分子TAP1_exp、HLA-DPB1_exp、HLA-DMB_exp、HLA-DQA1_exp、HLA-DRB1_exp和HLA-DRA_exp相关（图4D）。最后，我们分析了SFRP4表达和趋化因子、受体之间的关系。趋化因子与SFRP4表达之间存在相关性，包括CCL2_exp、CCL14_exp、CCL19_exp、CXCL1_exp、CCL3_exp和XCL2_exp（图4E）。受体与SFRP4表达之间存在相关性，包括CCR1_exp、CX3CR1_exp、XCR1_exp、CXCR3_exp、CCR10_exp和CCRB_exp（图4F）。以上研究结果，进一步证实SFRP4在胃癌肿瘤免疫微环境中起着重要的调节作用，可能是胃癌免疫治疗关键的关键靶点。

2.5. SFRP4是胃癌独立的预后因素，SFRP4联合CD8⁺T可以更好地预测胃癌预后。

根据肿瘤中SFRP4、PD-L1、CD3、CD4和CD8的表达，进行Kaplan-Meier分析评估OS。胃癌组织中SFRP4高表达组较SFRP4低表达组OS较差（P=0.021），5年总生存率分别为60.02%和39.81%（图5A）。与低表达组相比，高CD4⁺T、CD8⁺T细胞浸润有较好的OS（P=0.008和P=0.026）（图5D、图5E）。PD-L1阳性组与阴性组之间、CD3⁺T高低表达组之间OS均没有显着差异（P=0.973,P=0.091）（图5B，图5C）。SFRP4低表达伴CD8⁺T细胞高浸润组相较于其它组的预后最好，5年总生存率为69.23%（图5F）。

使用Cox比例风险回归模型分析特征，以评估预后值。在单变量分析中，肿瘤SFRP4高表达（P=0.024），有胃癌家族史（P=0.005)、CD4高表达（P=0.009)、CD8高表达（P=0.048)等临床病理因素是患者OS的危险或保护因素（表4）。多变量分析中，SFRP4高表达（P=0.011）、有胃癌家族史（P=0.011)是胃癌患者OS的独立预测因子。CD4高表达（P=0.708)、CD8高表达（P=0.060)等其它临床病理参数在多变量分析中没有表现出显着差异（表5）。由此可见，无论是单因素还是多因素分析中，SFRP4均是胃癌独立的预后因素。

表4 GC患者生存预后参数的单变量分析

表5 GC患者生存预后参数的多变量分析

本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.SFRP4作为胃癌预后标志物的应用。

2.一种胃癌预后标志物，包括SFRP4。

3.一种H评分系统的构建方法，包括如下步骤：

1）将胃癌组织样本构建组织芯片；

2）采用免疫组化法检测所述的组织芯片中SFRP4的表达；

3）构建H评分系统；

所述的H评分系统的公式如下：

H分数=（∑IS×AP)，其中，

4.SFRP4作为胃癌预后标志物在构建评估胃癌预后的模型中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的评估胃癌预后的模型通过如下方法构建，

1）将胃癌组织样本构建组织芯片；

2）采用免疫组化法检测所述的组织芯片中SFRP4的表达，采用权利要求3所述的H评分系统进行SFRP4表达强度评估；

3）根据SFRP4表达情况情况评估患者存活率。

6.SFRP4作为治疗靶点在制备胃癌治疗药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的SFRP4作为免疫治疗靶点在制备胃癌治疗药物中的应用。

8.检测SFRP4表达量的试剂在制备胃癌预后评估试剂盒中的应用；试剂盒中包含有检测组织样本中SFRP4表达量的试剂；用于该检测的组织样本为福尔马林固定和/或石蜡包埋的胃癌组织样本。

9.SFRP4联合CD8⁺T作为胃癌预后标志物的应用。

10.SFRP4联合CD8⁺T在制备胃癌预后检测试剂中的应用，其中，组织样本中SFRP4低表达伴CD8⁺T细胞高浸润，提示病人的预后良好。