CN115023235A - 用于治疗或预防过敏或过敏反应的组合物 - Google Patents

用于治疗或预防过敏或过敏反应的组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN115023235A
CN115023235A CN202080089704.4A CN202080089704A CN115023235A CN 115023235 A CN115023235 A CN 115023235A CN 202080089704 A CN202080089704 A CN 202080089704A CN 115023235 A CN115023235 A CN 115023235A
Authority
CN
China
Prior art keywords
composition
allergen
allergens
mammal
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080089704.4A
Other languages
English (en)
Inventor
亨里克·扬·安科斯密特
米夏埃尔·米尔德纳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Aposcience AG
Original Assignee
Aposcience AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aposcience AG filed Critical Aposcience AG
Publication of CN115023235A publication Critical patent/CN115023235A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4612—B-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4613—Natural-killer cells [NK or NK-T]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4614—Monocytes; Macrophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/464839—Allergens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0635—B lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0645—Macrophages, e.g. Kuepfer cells in the liver; Monocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2529/00—Culture process characterised by the use of electromagnetic stimulation
    • C12N2529/10—Stimulation by light

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明涉及一种组合物，其包含外周血单核细胞(PBMC)的细胞培养物的上清液，用于治疗或预防因向人体或哺乳动物施用至少一种食物和/或吸入过敏原或全身施用至少一种药物而引起的过敏或过敏反应。

Description

用于治疗或预防过敏或过敏反应的组合物
技术领域
本发明涉及用于治疗和预防因人体或哺乳动物摄取过敏原而引起的紊乱的组合物和方法。
背景技术
在过敏的致敏阶段，专职抗原呈递细胞吞噬抗原(在过敏方面称为过敏原)，并将处理过的抗原交叉呈递给TH2淋巴细胞。这些细胞通过释放白介素4对遭遇的过敏原作出反应，并与B淋巴细胞互动。活化的B细胞与IL-4一起产生针对过敏原的E型免疫球蛋白(IgE)。分泌的IgE被存在于例如肥大细胞的IgE特异性受体结合。这些免疫细胞因此对过敏原敏化。再次暴露的结果是过敏原与涂覆有IgE的免疫细胞结合，在受体交联后，导致致敏细胞的激活。被激活的肥大细胞通过从细胞内颗粒中大量释放免疫介质，例如组胺、细胞因子和促炎脂质物质而作出反应。释放的介质有多重效应，包括血管扩张、粘液分泌和神经刺激，从而导致瘙痒和发红。这些症状可能是局部或全身性的。
肥大细胞主要存在于反复面临病原刺激的组织中，如皮肤、呼吸道和胃肠道。通常，肥大细胞通过免疫学信号激活，例如通过抗原/IgE复合物交联的Fcγ受体、补体系统的蛋白质或toll样受体激动剂激活。肥大细胞对激活的反应是大量释放免疫介质。肥大细胞以其在IgE依赖性过敏反应中的作用和靶向肥大细胞功能(如脱粒)而闻名，这可能有助于缓解与过敏反应相关的大多数疼痛症状。
本发明的目的是提供预防或治疗因向人体或哺乳动物施用过敏原而引起的过敏反应的方法和手段。
发明内容
本发明涉及一种组合物，其包含外周血单核细胞(PBMC)的细胞培养物的上清液，用于治疗或预防过敏或过敏反应，该过敏或过敏反应是由向人体或哺乳动物施用至少一种食物和/或吸入过敏原或全身施用至少一种药物而引起的，其中PBMC在培养之前或培养期间受到电离辐射。
结果令人惊讶的是，PBMC培养物的上清液可用于治疗或预防因向人体或哺乳动物施用食物或吸入过敏原而引起的过敏和过敏反应。此外，本发明的组合物也可用于治疗或预防由全身施用至少一种过敏原引起的过敏或过敏反应。
长期以来，基于干细胞的疗法一直被认为是用于再生各种受伤组织和器官的有前景的手段。此后，许多工作都通过报道分泌的因子，而不是细胞本身，表现出了可观察到的再生效果而激发了这一构思。与干细胞相比，外周血单核细胞(PBMC)是具有多种用途特征的细胞分泌蛋白质组(secretome)的有吸引力且易于获取的来源。尽管免疫调节作用已归因于优选的γ-辐照PBMC(Aposec)的分泌蛋白质组，但令人惊讶的是，PBMC培养物的上清液显示出对过敏反应和过敏的有益作用，特别是触发过敏原时。
本发明的另一方面涉及一种治疗或预防由人体或哺乳动物摄取至少一种过敏原而引起的过敏或过敏反应的方法，该方法包括施用本文定义的组合物的步骤。
本发明的另一方面涉及一种方法，该方法用于确定如本文所定义的组合物是否适合用于治疗或预防过敏或过敏反应，该过敏或过敏反应是由向人体或哺乳动物施用至少一种食物和/或吸入过敏原或全身施用至少一种药物而引起的，该方法包括以下步骤：
a)将哺乳动物的至少两个皮肤区域与过敏原接触；
b)将权利要求1至17中任一项定义的组合物施用于所述皮肤区域中的至少一个，其中所述皮肤区域中的至少一个没有用所述组合物处理；
c)将与过敏原接触的皮肤区域和与过敏原和所述组合物接触的皮肤区域进行比较；
d)识别所述区域之间的差异，以及
e)确定该组合物是否适合于治疗或预防所述紊乱或疾病。
附图说明
图1示出了MNCaposec可预防由初级人肥大细胞释放的化合物48/80和IgE/抗IgE诱导的介质。在(A)化合物48/80和(B)IgE/抗IgE刺激初级人肥大细胞时，通过释放β-氨基己糖苷酶(beta-hexaminidase)评估肥大细胞脱粒。星号表示与培养基对照组(CellGro)相比，Aposec的P<0.05。肥大细胞培养基是指常规用于培养肥大细胞的培养基(单独的DMEM)。
图2示出了PBMC分泌蛋白质组Aposec减轻DNFB诱导的超敏反应(hypersensitivity)中的耳朵肿胀。在DNFB再次激发后24小时，通过测微计辅助测量评估耳朵厚度。P<0.05Aposec对比(vs.)培养基对照组。
具体实施方式
本发明涉及一种包含PBMC细胞培养物的上清液的组合物，其用于治疗或预防由向人体或哺乳动物施用至少一种食物和/或吸入过敏原或全身施用至少一种药物而引起的过敏或过敏反应。
细胞，特别是哺乳动物细胞，已知在培养到细胞培养基期间会分泌许多物质。如此获得的条件培养基可用于治疗和/或预防各种疾病和紊乱。例如，WO 2010/070105和WO2010/079086公开了条件培养基(“上清液”)，其通过培养PBMCs获得，可用于治疗各种炎性病症。因此，如本文所用的“外周血单核细胞(PBMC)的细胞培养物的上清液”是指通过在培养基中体外培养PBMC可获得的任何上清液。培养步骤结束后，将培养的PBMC从培养基中移除，以获得基本无细胞，优选完全无细胞的上清液。PBMC培养物的上清液除了培养基的成分外，还包含由PBMC产生和分泌的物质，和/或甚至裂解的PBMC。“上清液”可与通过培养PBMC获得的条件培养基互换使用。
本发明的上清液可通过培养PBMC获得，PBMC在培养前或培养期间受到电离辐射。该电离辐射优选伽马辐射。
如本文所用的“由向人体或哺乳动物施用至少一种食物和/或吸入过敏原或全身施用至少一种药物而引起的过敏或过敏反应”是指由向人体或哺乳动物施用食物和/或吸入过敏原而引起的任何不良反应。食物过敏原通常是通过口服施用于人体或哺乳动物。吸入性过敏原通常是通过鼻或口吸入到肺部和呼吸道而施用的。一些用于治疗人体和哺乳动物的药物一旦全身施用于人体和哺乳动物，就会引起过敏反应。这类药物可以通过口服、吸入、肠外施用或任何其他途径施用于人体或哺乳动物，导致药物在人体和哺乳动物体内的全身分布。药物的肠外施用可包括肌肉、腹膜内、静脉和其他施用途径。药物过敏原或任何其他过敏原在皮肤上的局部施用不会导致全身性扩散，因此不会导致人体或哺乳动物的全身施用。
向人体或哺乳动物施用时引起过敏或过敏反应的过敏原包括食物过敏原、药物过敏原、吸入过敏原(例如花粉和化学物质)以及施用/引入人体或哺乳动物的所有种类的过敏原。因此，当过敏原引入，例如血流时，向人体或哺乳动物施用过敏原而引起的典型过敏反应除其他外包括流鼻涕、呼吸困难、恶心、腹泻、流鼻血、耳疾、喘息、咳嗽，甚至过敏症等。
如本文所用的“过敏原”是指能够通过免疫球蛋白E(IgE)反应在人体和/或哺乳动物体内刺激超敏反应的抗原，通常导致肥大细胞过度释放组胺。术语“过敏原”包括-如果过敏原是生物来源的并且是蛋白质或多肽-当这些片段在人体或哺乳动物体内释放组胺方面表现出与自然发生的过敏原类似的效果时，也包括这种自然发生的过敏原的片段。
如本文使用的术语“预防”(preventing)和“预防”(prevention)是指，因根据本发明的上清液的施用，预防或抑制在人体和哺乳动物体内的过敏或其症状的复发、发作和发展。在一些实施方式中，“预防”(preventing)和“预防”(prevention)是指针对特定过敏原减少发生过敏的风险。术语“预防(preventing)”不仅包括预防过敏发生的措施，而且还包括，一旦过敏发生抑制其进展并减少其后果。
如本文使用的术语“治疗”(treatment)和“治疗”(treating)是指减少或抑制过敏的进展和持续时间，减少或改善过敏的严重程度以及改善其一个或多个症状。“治疗(treatment)”还包括改善和/或逆转过敏或过敏反应的症状。术语“治疗(treatment)”是指治疗性治疗和预防措施两者。例如，可从本发明的组合物和方法的治疗中获益的人包括已经患有过敏的人以及预防过敏的人。
根据本发明的另一优选实施方式，至少一种过敏原是生物或化学过敏原。
生物过敏原包括衍生自生物系统，如植物、动物(如昆虫和蛛形纲动物)或微生物(如霉菌和细菌)的过敏原。这种过敏原在大多数情况下是蛋白质、多肽或肽。生物过敏原在本领域是众所周知的，并在各种数据库如http://www.allergen.org/或http://www.allergome.org/中公开。
根据本发明的进一步优选实施方式，生物过敏原选自由动物过敏原、植物过敏原、霉菌过敏原或细菌过敏原所组成的组。
动物过敏原是包括在动物(包括脊椎动物和无脊椎动物)中发现的一种或多种化合物的过敏原。可能存在于混合过敏原组合物中的脊椎动物过敏原包括禽类过敏原，例如蛋过敏原，如nGal d 1卵类黏蛋白、n Gal d 2卵清蛋白、nGal d 3伴清蛋白和蛋清完全过敏原等；哺乳动物过敏原，例如牛奶过敏原，如，nBos d 4α-乳清蛋白、nBos d 5β-乳球蛋白、nBos d 8酪蛋白、nBos d乳铁蛋白和牛奶完全过敏原等；鱼类过敏原，如rCyp c 1、rGadc 1、鳕鱼完全过敏原、白鱼过敏原和粉鱼过敏原等。可存在于混合过敏原组合物中的无脊椎动物过敏原包括：甲壳类动物过敏原，例如虾类过敏原，如rPen a 1原肌球蛋白和虾类完全过敏原等；昆虫过敏原，如蜂刺毒液过敏原、黄蜂刺毒液过敏原和蚊虫叮咬过敏原等；以及其他。吸入性动物过敏原可包括猫或狗的毛和皮屑、蟑螂萼和尘螨排泄物。
植物过敏原是包括在植物中发现的一种或多种化合物的过敏原。相关的植物过敏原包括：小麦过敏原，如rTri a 19 Omega-5醇溶蛋白、小麦完全过敏原、醇溶蛋白小麦和rTri a 14 LTP等；猕猴桃过敏原，如rAct d 8 PR-10和猕猴桃完全过敏原等；芹菜过敏原，如rApi g 1.01 PR-10、rPhl p 12，芹菜完全过敏原、来自菠萝蛋白酶(Bromelain)的CCDMUXF3等；大豆过敏原，如rGly m 4 10 PR-10、大豆完全过敏原、nGly m 5β-伴大豆球蛋白和nGly m 6大豆球蛋白等；核果类过敏原，如f419、f420、f421、f95、f242,o214 rPru p 1PR-10、rPru p 3 LTP、核果类初级完全过敏原和来自菠萝蛋白酶的CCD MUXF3等；燕麦过敏原，如燕麦成分过敏原和燕麦完全过敏原等；芝麻过敏原，如芝麻籽成分过敏原、芝麻籽完全过敏原等。植物过敏原还包括吸入性过敏原，如花粉过敏原。此类过敏原可包括桦树花粉过敏原(例如Bet v 1)、草花粉过敏原(例如Phl p 1)、黑麦草和梯牧草过敏原。
过敏原包括从天然来源分离的或重组或化学生产的过敏原。
根据本发明的另一优选实施方式，PBMC细胞培养物包含单核细胞、T细胞、B细胞和/或NK细胞。
根据本发明的进一步优选实施方式，PBMC细胞在细胞培养基中培养，该培养基选自由细胞生长培养基，优选CellGro培养基，更优选Cellgro GMP DC培养基、RPMI、DMEM、X-vivo和Ultraculture所组成的组。
在培养前或培养期间，对PBMC细胞培养物的PBMC进行电离辐射。除了这些应激诱导条件之外，PBMC还可以受到进一步的应激。因此，根据本发明的优选实施方式，在培养前或培养期间，PBMC要经受一个或多个进一步的应激诱导条件。
如本文所用的术语“在应激诱导条件下”是指导致应激细胞的培养条件。导致细胞应激的条件除其他外包括热、化学品、辐射、低氧、渗透压等。
对本发明的细胞的额外应激导致物质的表达和分泌的进一步增加，该增加有利于治疗炎症性皮肤病症，特别是与局部缺血有关的皮肤病症。
根据本发明的优选实施方式，压力诱导条件包括低氧、臭氧、热(如高于2℃，优选高于5℃，更优选高于10℃，高于PBMC的最佳培养温度，即37℃)、辐射(如紫外线辐射和伽马射线)、化学品、渗透压(即与体液中，特别是血液中经常出现的渗透条件相比，渗透条件至少升高10％)或其组合。
因此，根据本发明的另一优选实施方式，应激诱导条件选自由紫外线辐射、低氧、臭氧、热、渗透压和pH值变化所组成的组。
根据本发明的另一优选实施方式，PMC受到电离辐射，优选伽马辐射，其剂量至少为10Gy，优选至少为20Gy，更优选至少为40Gy，更优选至少为50Gy。
根据本发明的优选实施方式，在分离PBMC的细胞培养物的上清液之前，将PBMC培养至少4小时，优选至少6小时，更优选至少12小时。
根据本发明的另一优选实施方式，在过敏反应和/或暴露于至少一种过敏原之前、期间和/或之后，施用本发明的组合物。
本发明的组合物可以在过敏反应的不同阶段或甚至在反应发生之前施用。在本发明的特别优选的实施方式中，本发明的组合物可以在人体或哺乳动物暴露于过敏原之前施用。令人惊讶的是，本发明的组合物能够预防抗原呈递细胞对过敏原或其片段的摄取。因此，如果可以预防这种摄取，那么过敏原或其片段将不会呈递给人体或哺乳动物的免疫系统。
根据本发明的优选实施方式，PCBMC细胞培养物包含1×105至1×108个PBMC/ml，优选1×106至1×107个PBMC/ml，更优选2×106至5×106个PBMC/ml。
事实证明，如果培养一定量的PBMC/ml细胞培养基，则通过培养PBMC可获得的上清液的组合物显示出有利特性。
根据本发明的另一优选实施方式，将0.1至5ml上清液/kg体重，优选0.3至3ml/kg体重，更优选0.5至2ml/kg体重，更优选0.8至1.2ml/kg体重，施用于人体或哺乳动物。
本发明的组合物包含上清液，其量足以治疗或预防过敏和过敏反应。上述香人体或哺乳动物施用的上清液的体积/kg体重是直接指上清液。如果向人体或哺乳动物施用的体积太大，可以通过，例如冻干法来减少这一体积。因此，要施用的本发明组合物的体积可低于上清液的指示体积。本领域技术人员知道哪些体积可以使用特定的施用途径来施用。
根据本发明的优选实施方式，组合物通过吸入、局部、口服、舌下、口腔、皮下或静脉注射施用。
本发明的组合物可包含药学上可接受的赋形剂，如稀释剂、稳定剂和载体等。根据剂型，本发明的制剂包括各自的成分。制备根据本发明的制剂的方法是技术人员所熟知的。
为了增加根据本发明的组合物的保质期，上清液或甚至整个组合物可以被冻干。冻干这种制剂的方法是本领域的技术人员所熟知的。
在使用前，冻干制剂可以与水或包含缓冲剂、稳定剂和盐等的水溶液接触。
根据本发明的另一优选实施方式，哺乳动物是马、狗、猫或骆驼。
本发明的组合物可用于治疗任何种类的哺乳动物。但最优选上述哺乳动物。
本发明的另一方面涉及一种治疗或预防由人体或哺乳动物摄取至少一种过敏原而引起的过敏或过敏反应的方法，该方法包括施用如上定义的组合物的步骤。
本发明的另一方面涉及一种确定如上定义的组合物是否适合用于治疗或预防由人体或哺乳动物摄取至少一种过敏原而引起的过敏或过敏反应的方法，该方法包括以下步骤：
a)将哺乳动物的至少两个皮肤区域与过敏原接触；
b)向所述皮肤区域中的至少一个施用如上定义的组合物，其中所述皮肤区域中的至少一个未用所述组合物处理；
c)将与过敏原接触的皮肤区域和与过敏原和所述组合物接触的皮肤区域进行比较；
d)识别所述区域之间的差异；以及
e)确定组合物是否适合治疗或预防所述紊乱或疾病。
为了测试本发明的组合物是否可用于治疗或预防由向人体或哺乳动物施用至少一种食物和/或吸入过敏原或全身施用至少一种药物而引起的过敏或过敏反应，可使用划痕试验(scratch assay)。如果与未处理的划痕部位或用阴性对照组合物处理的划痕部位相比，本发明的组合物能够减少划痕部位的过敏反应，则可将本发明的组合物施用于有需要的人体或哺乳动物。
实施例
实施例1：Aposec对肥大细胞脱粒的损害
材料和方法
Aposec的制造
如Wagner T等人(Sci Rep.2018；8(1):1801)所述，生产PBMC的分泌蛋白质组(“Aposec”)。简而言之，通过Ficoll-Paque PLUS(GE Healthcare,USA)辅助密度梯度离心获得PBMC，并调整浓度到2.5×107个细胞/mL。随后，细胞暴露于60Gy的铯137γ射线照射(IBL 437C，Isotopen Diagnostik CIS GmbH,Germany)，并在不含酚红的CellGenix GMPDC培养基(CellGenix GmbH,Germany)中培养24±2小时。通过离心分离去除细胞和细胞碎片，上清液通过0.2μm的过滤器。使用Theraflex亚甲基蓝技术(MacoPharma,France)进行病毒清除，并对冻干粉进行如前所述的(Haider T et al.Exp Neurol.2015；267:230-42)γ射线照射(25,000Gy,Gammatro 1500,Mediscan,Austria)。无菌冻干物通常在-80℃下冷冻保存。
初级人肥大细胞的分离和体外维护
用于分离肥大细胞的皮肤和皮下脂肪组织从接受腹部整形术的患者获得。去除皮下组织和网状真皮，将剩余的组织切成小块，在4℃下进行酶解(2.4U/mL来自多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)的分散酶II，Roche，Switzerland)过夜。去除表皮后，在37℃下用胶原酶I(Gibco,Thermo Fisher Scientific,USA)消化真皮组织2小时。按照生产商的建议，通过磁细胞分选技术(MACS系统，Miltenyi Biotec，Germany)富集CD117+肥大细胞。为了提高分离细胞的纯度，用来自第一次分离的CD117+细胞再重复一次分离过程。在DMEM中培养CD117+肥大细胞，DMEM中补充有10％(vol/vol)热灭活胎牛血清(均为Gibco)、1％(vol/vol)青霉素/链霉素(Biochrom,Germany)和100ng/mL重组人干细胞因子(PeproTech,USA)。
初级人肥大细胞的化合物48/80诱导的脱粒
初级人肥大细胞以50,000至100,000个/孔的密度接种于平底96孔板中的50μL无彩色pH指示剂的DMEM中，DMEM中补充有如上所述的血清和SCF。用50μL Aposec或50μL培养基对照组(CellGenix)预处理细胞过夜。第二天，用100μL HEPES(N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸(N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethane sulfonic acid)；Thermo FisherScientific)仔细清洗细胞，并通过加入含有50μg/mL化合物48/80(Sigma Aldrich,USA)的100μL HEPES诱发脱粒。对于非刺激对照组，加入HEPES。细胞在37℃和正常环境CO2中培养1小时。分离并保存50μL上清液，用100μL 0.1％triton X-100(Sigma Aldrich)溶解细胞。
初级人肥大细胞的IgE/抗IgE诱导的脱粒
初级人肥大细胞以50,000至100,000个/孔的密度接种于平底96孔板中的50μL无彩色pH指示剂的DMEM中，DMEM中补充有如上所述的血清和SCF。用50μL Aposec、50μL培养基对照组(CellGenix)或50μLDMEM(肥大细胞培养基)预处理细胞，并另外用100ng/mL人IgE(myeloma,Merck KGaA,Germany)刺激过夜。第二天，用100μL HEPES(N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙烷磺酸；Thermo Fisher Scientific)仔细清洗细胞，并通过加入含有5μg/mL抗IgE抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories,Inc.,USA)的100μL HEPES诱导脱粒。对于非刺激对照组，加入HEPES。细胞在37℃和正常环境CO2中培养1小时。分离并保存50μL上清液，用100μL 0.1％triton X-100(Sigma Aldrich)溶解细胞。
β-氨基己糖苷酶试验的试剂
通过将8.9g二水合磷酸氢二钠(Na2HPO4·2H2O)和650mg对硝基-N-乙酰基-β-D-葡糖酰胺溶解在400ml双蒸水中，并用0.4M柠檬酸将pH值调整到4.5(所有试剂SigmaAldrich)制备β-氨基己糖苷酶(hexosiminidase assay)试验的底物溶液。终止溶液包括在900mL aqua bidest中的15.02g甘氨酸，并使用3M氢氧化钠将pH值调节至10.7。
β-氨基己糖苷酶试验
将50μL底物溶液分别加入到50μL上清液和50μL triton裂解的细胞中，并将样品在37℃和环境CO2下培养90分钟。加入75μL终止缓冲液，并使用FlUOstar OPTIMA软件(version 1.20-0，BMG LABTECH)，通过读板式发光仪LUMIstar OPTIMA Reader(BMGLABTECH,Ortenberg,Germany)测定405nm处的光密度。
数据和统计分析
使用以下公式计算释放的β-氨基己糖苷酶百分比：
Figure BDA0003709404700000101
数据表示为技术重复次数的算术平均值(arithmetic means of technicalreplicates)和平均值的标准误差。通过单尾t检验进行统计分析，比较两组Aposec与培养基对照组，P<0.05被认为具有统计学意义。
结果
Aposec废除强迫肥大细胞脱粒
为了确定Aposec是否能够预防肥大细胞脱粒，用Aposec或培养基对照组预处理肥大细胞，并评估初级人肥大细胞在受到化合物48/80和IgE/抗IgE刺激后的β-氨基己糖苷酶释放。与培养基对照组相比，Aposec明显阻止了化合物48/80以及IgE/抗IgE诱导的介质释放(在化合物48/80和IgE/抗IgE刺激后，Aposec释放了27.9±3.6％和27.3±1.1％的β-氨基己糖苷酶，而对照培养基组则释放了35.7±3.4％和36.7±3.1％的介质，两者的P<0.05Aposec对比对照组)(图1)。与肥大细胞培养基相比，对照培养基显示对肥大细胞脱粒没有影响[在化合物48/80和IgE/抗IgE刺激后，肥大细胞培养基分别释放36.7±2.3和36.9±1.9的介质。在(A)和(B)中，P>0.05肥大细胞培养基对比培养基对照组]。
结论
本数据表明，当用化合物48/80和IgE/抗IgE刺激时，Aposec有效地预防初级人肥大细胞释放介质。而在化学刺激后，酶的释放减少了超过20％，在IgE/抗IgE处理后，与培养基对照组相比，用Aposec使β-氨基己糖苷酶释放减少超过25％。综上所述，这些数据表明Aposec可用于治疗肥大细胞脱粒介导的过敏反应。
实施例2：通过体内应用Aposec减轻过敏性超敏反应的症状
背景
在过去的几十年中，对过敏性超敏反应病理学的广泛研究促进了对免疫反应的更好理解。然而，复杂和多方面的疾病病因是开发有效的新型治疗干预的主要障碍，且迄今为止，临床治疗选择仍然有限。由于之前已经描述了Aposec的强效抗炎作用，因此研究了Aposec缓解过敏性超敏反应相关症状的潜力。
材料和方法
小鼠模型
1-氟-2,4-二硝基苯(DNFB,Sigma-Aldrich)作为过敏原，诱导C57BL/6小鼠的炎症病症。在第0天和第1天施用20μL 0.25％(vol/vol)的DNFB的橄榄油溶液。每天用Aposec处理耳朵，而对侧耳朵从第0天开始连续6天接受载体培养基。
显微测量
DNFB重新激发后24小时，使用电子数字测微计(0-25mm,Marathon ManagementInc,USA)评估耳朵厚度，测量耳朵的外部三分之二的厚度。一式四份进行测量。
统计学分析
使用GraphPad Prism 6软件(GraphPad Software Inc.)对数据进行统计学评估。进行单尾配对t检验以比较Aposec与对照培养基。认为P值低于0.05具有统计学意义。数据表示为生物复制的算术平均值(arithmetic means of biological replicates)和平均值的标准误差。
结果
Aposec减轻过敏原诱导的组织肿胀
以鼠DNFB诱导的超敏反应为模型，研究Aposec对体内过敏反应的抗炎作用。耳朵肿胀程度反映了免疫反应的严重程度，与中度对照组相比，在再次暴露于DNFB 24小时后，Aposec显著降低了耳朵肿胀程度(载体处理的耳朵厚度为553.9±12.7μm，而Aposec处理的耳朵厚度为472.4±47.3μm，P<0.05Aposec对比中度对照组。原始耳朵厚度为：355±12.7μm)(图2)。
结论
这些数据表明，应用Aposec有效地预防了再次暴露于过敏原后的组织肿胀。这些发现表明，Aposec是治疗过敏反应相关症状的有前景的候选药物。

Claims (16)

1.一种组合物在治疗或预防由向人体或哺乳动物施用至少一种食物和/或吸入过敏原或全身施用至少一种药物而引起的过敏或过敏反应的用途，所述组合物包含外周血单核细胞(PBMC)的细胞培养物的上清液，其中，所述PBMC在培养前或培养期间受到电离辐射。
2.根据权利要求1所述的组合物的用途，其中，所述至少一种过敏原是生物过敏原或化学过敏原。
3.根据权利要求2所述的组合物的用途，其中，所述生物过敏原选自由动物过敏原、植物过敏原、霉菌过敏原或细菌过敏原所组成的组。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物的用途，其中，所述PBMC细胞培养物包含单核细胞、T细胞、B细胞和/或NK细胞。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物的用途，其中，所述PBMC在细胞培养基中培养，所述细胞培养基选自由细胞生长培养基，优选CellGro培养基，更优选Cellgro GMPDC培养基、RPMI、DMEM、X-vivo和Ultraculture所组成的组。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物的用途，其中，所述PBMC在培养前或培养期间受到一种或多种进一步的应激诱导条件。
7.根据权利要求6所述的组合物的用途，其中，所述应激诱导条件选自由紫外线辐射、低氧、臭氧、热、渗透压和pH值变化所组成的组。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物的用途，其中，所述PMC受到的电离辐射的剂量为至少10Gy，优选为至少20Gy，更优选为至少40Gy，更优选为至少50Gy。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物的用途，其中，在分离PBMC的细胞培养物的上清液之前，将所述PBMC培养至少4小时，优选至少6小时，更优选至少12小时。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物的用途，其中，所述组合物在过敏反应和/或暴露于至少一种过敏原之前、期间和/或之后施用。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物的用途，其中，所述PCBMC的细胞培养物包含1×105至1×108个PBMC/ml，优选1×106至1×107个PBMC/ml，更优选2×106至5×106个PBMC/ml。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物的用途，其中，向人体或哺乳动物施用0.1至5ml上清液/kg体重，优选0.3至3ml/kg体重，更优选0.5至2ml/kg体重，更优选0.8至1.2ml/kg体重。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物的用途，其中，所述组合物通过吸入、局部、口服、舌下、口腔、皮下或静脉施用。
14.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物的用途，其中，所述哺乳动物是马、狗、猫或骆驼。
15.一种治疗或预防由向人体或哺乳动物施用至少一种食物和/或吸入过敏原或全身施用至少一种药物而引起的过敏或过敏反应的方法，包括施用如权利要求1至13中任一项所定义的组合物的步骤。
16.一种确定如权利要求1至13中任一项所定义的组合物是否适合用于治疗或预防由向人体或哺乳动物施用至少一种食物和/或吸入过敏原或全身施用至少一种药物而引起的过敏或过敏反应的方法，包括以下步骤：
a)将哺乳动物的至少两个皮肤区域与过敏原接触；
b)将如权利要求1至13中任一项所定义的组合物施用于所述皮肤区域中的至少一个，其中所述皮肤区域中的至少一个没有用所述组合物处理；
c)将与过敏原接触的皮肤区域和与过敏原和所述组合物接触的皮肤区域进行比较；
d)识别所述区域之间的差异，以及
e)确定所述组合物是否适合于治疗或预防所述紊乱或疾病。
CN202080089704.4A 2019-12-23 2020-12-23 用于治疗或预防过敏或过敏反应的组合物 Pending CN115023235A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP19219342.3A EP3842064A1 (en) 2019-12-23 2019-12-23 Composition for treating or preventing an allergy or allergic reaction
EP19219342.3 2019-12-23
PCT/EP2020/087757 WO2021130305A1 (en) 2019-12-23 2020-12-23 Composition for treating or preventing an allergy or allergic reaction

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115023235A true CN115023235A (zh) 2022-09-06

Family

ID=69061128

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080089704.4A Pending CN115023235A (zh) 2019-12-23 2020-12-23 用于治疗或预防过敏或过敏反应的组合物

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20230000910A1 (zh)
EP (2) EP3842064A1 (zh)
JP (1) JP2023507518A (zh)
KR (1) KR20220119039A (zh)
CN (1) CN115023235A (zh)
AU (1) AU2020415329A1 (zh)
BR (1) BR112022011976A2 (zh)
CA (1) CA3161094A1 (zh)
DK (1) DK4081246T3 (zh)
ES (1) ES2982055T3 (zh)
HU (1) HUE066648T2 (zh)
WO (1) WO2021130305A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4197547A1 (en) * 2021-12-20 2023-06-21 Aposcience AG Composition for treating or preventing vasculitis and diseases associated with vasculitis

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2201954A1 (en) 2008-12-18 2010-06-30 Aposcience AG Pharmaceutical preparation
EP2198873A1 (en) 2008-12-18 2010-06-23 Aposcience AG Pharmaceutical preparation comprising supernatant of blood mononuclear cell culture
EP3502692A1 (en) * 2017-12-20 2019-06-26 Aposcience AG Potency assay for secretomes

Also Published As

Publication number Publication date
HUE066648T2 (hu) 2024-08-28
CA3161094A1 (en) 2021-07-01
ES2982055T3 (es) 2024-10-14
AU2020415329A1 (en) 2022-06-09
WO2021130305A1 (en) 2021-07-01
EP3842064A1 (en) 2021-06-30
KR20220119039A (ko) 2022-08-26
EP4081246A1 (en) 2022-11-02
DK4081246T3 (da) 2024-06-10
EP4081246B1 (en) 2024-04-10
JP2023507518A (ja) 2023-02-22
BR112022011976A2 (pt) 2022-08-30
US20230000910A1 (en) 2023-01-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bodhankar et al. Role for microglia in sex differences after ischemic stroke: importance of M2
Hiromura et al. IL-21 administration into the nostril alleviates murine allergic rhinitis
DE69332518T2 (de) Unterdrückung von autoimmunkrankheiten durch antigene in wartestellung
Nishikimi et al. Collagen‐derived peptides modulate CD4+ T‐cell differentiation and suppress allergic responses in mice
Shi et al. Cinnamtannin D1 attenuates autoimmune arthritis by regulating the balance of Th17 and treg cells through inhibition of aryl hydrocarbon receptor expression
Zaoui et al. Natural killer-cell function in hemodialysis patients: effect of the dialysis membrane
JPH07505892A (ja) 多型性クラスｉｉｍｈｃアロペプチドを用いた増殖反応の抑制及び寛容の誘発
JP4804626B2 (ja) 免疫レギュレータ
US20230158112A1 (en) Targeting gamma-delta T Cells in Obesity and Cachexia
Zhang et al. Cow's milk α S1-casein is more sensitizing than goat's milk α S1-casein in a mouse model
Mo et al. SERPINB10 contributes to asthma by inhibiting the apoptosis of allergenic Th2 cells
AU2003250892A1 (en) Use of alanyl-aminopeptidase inhibitors and pharmaceutical compositions containing said inhibitors
CN115023235A (zh) 用于治疗或预防过敏或过敏反应的组合物
US20240131119A1 (en) Use of pertussis toxin as a therapeutic agent
Fujii et al. Monocyte activation in early onset rheumatoid arthritis.
CN101126076A (zh) TGF-β诱导的调节T细胞及其形成方法和应用
RU2827897C1 (ru) Композиция для лечения или предотвращения аллергии или аллергической реакции
JP2009518387A (ja) 免疫反応を調節する組成物および方法
KR20160013275A (ko) 장염 병태의 치료용 조성물
CN113825832A (zh) 一种体外诱导CD4+Foxp3+CD69+Treg的扩增方法及其用途
US5981472A (en) Methods for treating diseases
CN117582444B (zh) Gs-9620在制备预防和/或治疗银屑病的药物中的应用
Burns et al. Immunology of aging
JP2813356B2 (ja) ウィルス病予防・治療剤およびインターフェロン産生増強法
Yu et al. GPR43 in Eosinophils Prevents the Emergence of Pathogenic Siglec-Fhi Neutrophils in Allergic Airway Inflammation

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination