CN115011628B - 蛋白质ZmMADS15在调控玉米开花时间中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了蛋白质ZmMADS15在调控玉米开花时间中的应用。蛋白质ZmMADS15的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。实验证明，在玉米中过表达ZmMADS15基因，得到转基因玉米；在短日照条件下该转基因玉米的吐丝时间和散粉时间均提前。在玉米中抑制ZmMADS15基因，得到敲除ZmMADS15基因玉米，即ZmMADS15突变株；在短日照条件下ZmMADS15突变株的吐丝时间和散粉时间均延迟。因此，在短日照条件下，蛋白质ZmMADS15可以调控玉米吐丝时间和散粉时间。在长日照条件下，蛋白质ZmMADS15不影响玉米吐丝时间和散粉时间。本发明具有重要的应用价值。

Description

蛋白质ZmMADS15在调控玉米开花时间中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及蛋白质ZmMADS15在调控玉米开花时间中的应用。

背景技术

植物的繁衍对于个体而言是非常重要的。适时开花结果能够帮助植物躲避恶劣环境、保证繁衍的顺利进行。玉米是我国非常重要的粮食、经济、饲料作物。玉米的稳产高产对于保障国家粮食安全具有重要的意义。而稳产高产的一个重要前提就是玉米能够适时开花，适时开花可以保证玉米躲避成熟后期的冷害，保证籽粒灌浆所需的温度和光照。虽然玉米在驯化过程中，在纬度适应性和环境适应性方面有了很大的改良。但是目前在实际的生产育种过程中，仍然有一些株型紧凑、产量高、抗性好的品种由于温度和日照的限制，无法大面积的种植。基于此，科研人员希望找到一些特异调控玉米开花的基因，在不改变其他农艺性状的同时改良玉米花期，使其能够扩大现有优良品种的种植范围，为玉米的高产稳产保驾护航。

玉米开花期包括吐丝期、散粉期、抽雄期。玉米花期是一个由多基因控制的复杂的数量性状。已有一些控制开花期的基因通过正向遗传学的方法被克隆。Sun等克隆了玉米开花期主效QTL dlf1，dlf1突变体表现为花期延迟，株高增加、叶片数增加。利用SAM为材料的CHIP-Seq鉴定出包含ZmMADS4和ZmMADS67在内的多个靶基因。Alter等通过对玉米叶片转录组分析，鉴定出调控花期基因ZmMADS1，ZmMADS1是一个开花促进因子，是拟南芥SOC1在玉米的同源基因，编码一个II型MADS-box蛋白，可以直接结合在ZCN8的启动子区激活ZCN8的表达。Su等通过正向遗传学的方法鉴定到一个控制花期的转录因子ZmNF-YC2，在长日照条件下正向调控花期。此外，ZMCCT10、ZMCCT9、ZCN8、RAP2.7、mads69等基因也在玉米的开花中扮演重要角色。

虽然已经有部分控制玉米开花期的基因被克隆，但目前已知的基因对于解析复杂的开花期调控机理还是远远不够的，因此还需要利用正向遗传学和反向遗传学的方法，鉴定更多调控花期的基因，丰富和完善现有调控网络，为玉米遗传改良，提高玉米适应性提供分子基础和理论依据。

发明内容

本发明的目的是促进玉米开花时间提前。

本发明首先保护蛋白质ZmMADS15的应用，可为A1)或A2)：

A1)短日照条件下促进玉米开花时间的提前；

A2)培育短日照条件下开花时间提前的转基因玉米。

本发明还保护编码蛋白质ZmMADS15的核酸分子应用，可为A1)或A2)：

A1)短日照条件下促进玉米开花时间的提前；

A2)培育短日照条件下开花时间提前的转基因玉米。

上述编码蛋白质ZmMADS15的核酸分子可为c1)或c2)或c3)或c4)或c5)或c6)所示的DNA分子：

c1)编码区为SEQ ID NO:4所示的DNA分子；

c2)核苷酸序列为SEQ ID NO:4所示的DNA分子；

c3)核苷酸序列为SEQ ID NO:3所示的DNA分子；

c4)核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示的DNA分子；

c5)与c1)或c2)或c3)或c4)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同源性，来源于玉米且编码蛋白质ZmMADS15的DNA分子；

c6)在严格条件下与c1)或c2)或c3)或c4)限定的核苷酸序列杂交，来源于玉米且编码蛋白质ZmMADS15的DNA分子。

其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。

其中，SEQ ID NO:2由18221个核苷酸组成，SEQ ID NO:3由1780个核苷酸组成，SEQID NO:4由840个核苷酸组成，SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的核苷酸编码SEQID NO:1所示的氨基酸序列。

本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的编码蛋白质ZmMADS15的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明的蛋白质ZmMADS15的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码蛋白质ZmMADS15，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的编码SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成的蛋白质ZmMADS15的核苷酸序列具有75％或更高，或80％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。

本发明还保护一种培育转基因玉米甲的方法，包括如下步骤：提高受体玉米中蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性，得到转基因玉米甲；与受体玉米相比，短日照条件下转基因玉米甲的开花时间提前。

上述方法中，所述“提高受体玉米中蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性”可通过转基因、多拷贝、改变启动子、调控因子等本领域熟知的方法，达到提高受体玉米中蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性的效果。

上述方法中，所述提高受体玉米中蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性通过向受体玉米中导入编码蛋白质ZmMADS15的核酸分子实现。

上述方法中，所述核酸分子可为c1)或c2)或c3)或c4)或c5)或c6)所示的DNA分子：

c1)编码区为SEQ ID NO:4所示的DNA分子；

c2)核苷酸序列为SEQ ID NO:4所示的DNA分子；

c3)核苷酸序列为SEQ ID NO:3所示的DNA分子；

c4)核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示的DNA分子；

c5)与c1)或c2)或c3)或c4)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同源性，来源于玉米且编码蛋白质ZmMADS15的DNA分子；

c6)在严格条件下与c1)或c2)或c3)或c4)限定的核苷酸序列杂交，来源于玉米且编码蛋白质ZmMADS15的DNA分子。

其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。

其中，SEQ ID NO:2由18221个核苷酸组成，SEQ ID NO:3由1780个核苷酸组成，SEQID NO:4由840个核苷酸组成，SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4的核苷酸编码SEQID NO:1所示的氨基酸序列。

所述向受体玉米中导入编码蛋白质ZmMADS15的核酸分子具体可通过向受体玉米中导入含有上述任一所述核酸分子的重组载体实现。

所述含有上述任一所述核酸分子的重组载体可为在表达载体的多克隆位点插入SEQ ID NO：4所示的DNA分子，得到的重组质粒。

所述含有上述任一所述核酸分子的重组载体具体可为重组质粒pBCXUN-ZmMADS15。重组质粒pBCXUN-ZmMADS15可为向植物表达载体pBCXUN-UbiP的限制性内切酶XcmI的识别位点插入核苷酸序列为SEQ ID NO:4所示的DNA分子，得到的重组质粒。

本发明还保护一种玉米育种方法，包括如下步骤：增加玉米中蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性，从而短日照条件下将玉米开花时间提前。

本发明还保护一种培育转基因玉米乙的方法，包括如下步骤：抑制受体玉米中蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性，得到转基因玉米乙；与受体玉米相比，短日照条件下转基因玉米乙的开花时间延迟。

上述方法中，所述抑制受体玉米中蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性可通过RNA干扰、同源重组、基因定点编辑等本领域熟知的方法，达到抑制蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性的目的。

上述方法中，所述抑制受体玉米中蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性通过向受体玉米中导入抑制受体玉米中蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性的物质实现。

上述方法中，所述抑制受体玉米中蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性的物质可为实施例提及的重组质粒pBUE411-ZmMADS15。

上述任一所述开花时间可表现为散粉时间和/或吐丝时间。

上述任一所述蛋白质ZmMADS15可为如下b1)或b2)或b3)或b4)：

b1)氨基酸序列是SEQ ID NO:1所示的蛋白质；

b2)在SEQ ID NO:1所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；

b3)将b1)或b2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的、来源于玉米且与玉米开花时间相关的蛋白质；

b4)与SEQ ID NO:1限定的氨基酸序列具有80％或80％以上同源性，来源于玉米且与玉米开花时间相关的蛋白质。

其中，SEQ ID NO:1由279个氨基酸残基组成。

为了使b1)中的蛋白质便于纯化，可在SEQ ID NO:1所示的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上标签。

上述b3)中的蛋白质，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述b3)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。

上述b3)中的蛋白质的编码基因可通过将SEQ ID NO:4所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上标签的编码序列得到。

上述任一短日照条件是指每天光照时间小于12小时的日照条件。在本发明的实施例中，短日照条件具体为11h光照/13h黑暗。在本发明的实施例中，短日照条件实施例的地点是中国海南。

实验证明，在玉米中过表达ZmMADS15基因，得到转基因玉米；在短日照条件下(11h光照/13h黑暗)该转基因玉米的吐丝时间和散粉时间均提前。在玉米中抑制ZmMADS15基因，得到敲除ZmMADS15基因玉米，即ZmMADS15突变株；在短日照条件下(11h光照/13h黑暗)ZmMADS15突变株的吐丝时间和散粉时间均延迟。因此，在短日照条件下，蛋白质ZmMADS15能够调控花期(如散粉时间提前、吐丝时间提前)，且穗部等农业性状没有减少的趋势。蛋白质ZmMADS15受到光周期调控，这一功能可为玉米育种改良，提高玉米适应性提供新的基因资源。本发明具有重要的应用价值。

附图说明

图1为实时定量PCR检测T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米中ZmMADS15基因的相对表达量。

图2为2020年B73-329、OE-1、OE-2和OE-3在海南(短日照条件)的散粉时间和吐丝时间的统计结果。

图3为2021年B73-329、OE-1、OE-2和OE-3在海南(短日照条件)的散粉时间、吐丝时间、株高、穗位高、总叶片数、穗下叶片数等农艺性状统计结果。

图4为2021年B73-329和KO#1在海南(短日照条件)的散粉时间、吐丝时间、株高、穗位高、总叶片数、穗下叶片数等农艺性状统计结果。

图5为2021年B73-329、OE-1、OE-2和OE-3在北京(长日照条件)的散粉时间、吐丝时间、株高、穗位高、总叶片数、穗下叶片数等农艺性状统计结果。

图6为2021年B73-329、OE-1、OE-2和OE-3在海南(短日照条件)的穗粗、穗行数、行粒数、单株产量和穗长的统计结果。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

下述实施例中，通过T-test进行显著性分析，P<0.5表示差异性显著。

pBUE411-BG载体记载于如下文献中：Xing，H.L.，Dong，L.，Wang，Z.P.，Zhang，H.Y.，Han，C.Y.，Liu,B.，Wang,X.C.，and Chen，Q.J.(2014).ACRISPR/Cas9 toolkit formultiplex genome editing in plants.Bmc Plant Biology 14.pBUE411-BG载体具有抗膦丝菌素抗性(又称草胺磷抗性)。

玉米自交系B73-329记载于如下文献中：Zhang M，Cao Y，Wang Z，et al.Aretrotransposon in an HKT1 family sodium transporter causes variation of leafNa+ exclusion and salt tolerance in maize[J].New Phytologist，2017.，在文献中的名称为玉米B73-329。

植物表达载体pBCXUN-UbiP为将pBCXUN载体(记载于如下文献中：ChenSongbiao，Songkumarn Pattavipha，Liu Jianli，et al.Aversatile zero background T-vectorsystem for gene cloning and functional genomics.[J].Plant Physiol.，2009，150:1111-21.)中的HYG基因更换为Bar基因得到的重组质粒。植物表达载体pBCXUN-UbiP中，启动子为Ubiquitin启动子，终止子为T-nos终止子。植物表达载体pBCXUN-UbiP具有抗膦丝菌素抗性(又称草胺磷抗性)。

下述实施例中，*代表P<0.1、有统计学差异；**代表P<0.01、差异显著；***代表P<0.001、差异极其显著。

实施例1、蛋白质ZmMADS15及其编码基因的发现

本发明的发明人经过大量实验，从玉米B73中发现了ZmMADS15基因。

玉米B73的基因组DNA中，ZmMADS15基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

玉米B73的cDNA中，ZmMADS15基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

玉米B73的cDNA中，ZmMADS15基因的CDS的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

ZmMADS15基因编码蛋白质ZmMADS15。蛋白质ZmMADS15的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

实施例2、蛋白质ZmMADS15在调控玉米开花时间中的应用

一、T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米的获得及鉴定

1、将ZmMADS15基因的CDS序列(SEQ ID NO:4所示)和植物表达载体pBCXUN-UbiP利用同源重组的方式进行连接，得到重组质粒pBCXUN-ZmMADS15。

将重组质粒pBCXUN-ZmMADS15进行测序。测序结果表明，重组质粒pBCXUN-ZmMADS15为向植物表达载体pBCXUN-UbiP的限制性内切酶XcmI的识别位点插入核苷酸序列为SEQ ID NO:4所示的DNA分子，得到的重组质粒。重组质粒pBCXUN-ZmMADS15表达SEQ IDNO:1所示的蛋白质ZmMADS15。

2、重组农杆菌的获得

将重组质粒pBCXUN-ZmMADS15导入根癌农杆菌EHA105，得到重组农杆菌，将该重组农杆菌命名为EHA105/pBCXUN-ZmMADS15。

3、T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米的获得

(1)采用农杆菌侵染玉米幼胚的方法将EHA105/pBCXUN-ZmMADS15转化玉米自交系B73-329，获得T₀代拟转ZmMADS15基因玉米。

(2)分别提取T₀代拟转ZmMADS15基因玉米叶片的基因组DNA并以其作为模板，采用5’-GTTCGTCTTCCTCGTGCTT-3’和5’-TGCACCTTCCACCAACCTC-3’组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，然后进行如下判断：如果能够获得98bp的PCR扩增产物，则相应的T₀代拟转ZmMADS15基因玉米为T₀代转ZmMADS15基因玉米；如果不能获得98bp的PCR扩增产物，则相应的T₀代拟转ZmMADS15基因玉米不为T₀代转ZmMADS15基因玉米。

(3)将T₀代转ZmMADS15基因玉米自交，获得T₁代转ZmMADS15基因玉米；将T₁代转ZmMADS15基因玉米自交，获得T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米。

将其中3个T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米株系分别命名为OE-1、OE-2和OE-3。

4、实时定量PCR检测T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米中ZmMADS15基因的相对表达量

待测玉米为玉米自交系B73-329、OE-1、OE-2或OE-3。

(1)提取待测玉米籽粒的总RNA，之后用逆转录酶进行反转录，得到待测玉米籽粒的cDNA。

(2)实时定量PCR检测待测玉米籽粒的cDNA中ZmMADS15基因的相对表达量(以Tubulin基因为内参基因)。

检测ZmMADS15基因的引物为5’-GCTAGCTGTGACGTTATGCT-3'和5’-CCTCTCCGCTAGGACAACCT-3'。

检测Tubulin基因的引物为5’-GTGTCCTGTCCACCCACTCTCT-3'和5’-GGAACTCGTTCACATCAACGTTC-3'。

以玉米自交系B73-329中ZmMADS15基因的相对表达量作为1，T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米(如OE-1、OE-2或OE-3)中ZmMADS15基因的相对表达量见图1。结果表明，与玉米自交系B73-329相比，T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米(如OE-1、OE-2或OE-3)中ZmMADS15基因的相对表达量均显著增加。

二、ZmMADS15纯合突变株的获得及鉴定

本实施例选择一个靶点进行实验。靶点序列为：5’-ACCTTCTCCAAGCGCCGCT-3’(即SEQ ID No：2自5’末端起第483-501位)，对应靶基因为ZmMADS15基因。

1、重组质粒pBUE411-ZmMADS15的获得

(1)根据靶点设计并合成引物15CAS9-F：5’-ACCTTCTCCAAGCGCCGCT-3’和引物15CAS9-R：5’-AGCGGCGCTTGGAGAAGGT-3’，用去离子水分别将引物15CAS9-F和引物15CAS9-R稀释至100μM，得到引物15CAS9-F稀释液和引物15CAS9-R稀释液；然后进行退火反应，形成退火靶点片段。

(2)将pBUE411-BG载体和退火靶点片段进行连接，得到重组质粒pBUE411-ZmMADS15。

将重组质粒pBUE411-ZmMADS15进行测序。测序结果表明，重组质粒pBUE411-ZmMADS15为将SEQ ID No：5所示的DNA双链分子插入pBUE411-BG载体的限制性内切酶BsaI的识别位点，得到的重组质粒。

SEQ ID No：5：5’-ACCTTCTCCAAGCGCCGCT-3’。

2、ZmMADS15纯合突变株的获得及鉴定

由于玉米是二倍体植株，当Cas9发挥作用开始剪切特定的基因时，同一个细胞内的两条同源染色体上的两个等位基因都有可能被编辑，产生同样类型或不同类型的突变，所以将一个植株中两个等位基因看成是两个基因编辑事件。纯合突变株指的是该植株的两条同源染色体的ZmMADS15基因发生了相同的突变。双等位基因突变株指的是该植株的两条同源染色体的ZmMADS15基因均发生了突变但突变形式不同。杂合突变株数指的是该植株的两条同源染色体中的一条同源染色体的ZmMADS15基因发生了突变、另一条同源染色体的ZmMADS15基因未发生突变。野生型指的是该植株的两条同源染色体中的ZmMADS15基因均未发生突变。

(1)将重组质粒pBUE411-ZmMADS15通过液氮冷冻法转至根癌农杆菌EHA105，得到重组农杆菌。

(2)将重组农杆菌转化至玉米自交系B73-329，经过筛选、分化和生根后，获得T₀代拟转基因玉米。

(3)分别以T₀代拟转基因玉米叶片的基因组DNA为模板，采用引物F：5’-CCCGTCAATCAAGCCTCTCGT-3’和引物R：5’-CATGAATCGGTGGAATACTC-3’组成的引物对进行PCR扩增，得到相应的PCR扩增产物。分别将PCR扩增产物进行Sanger测序。测序结果与ZmMADS15基因(SEQ ID No：2所示)Cas9目标序列进行比对，统计突变类型。

结果表明，共获得1株ZmMADS15纯合突变株，命名为KO#1。KO#1的两条同源染色体的ZmMADS15基因发生了相同的突变，具体为两条同源染色体上在ZmMADS15基因均发生了“C”1个核苷酸的插入(即SEQ ID No：2自5’末端起第498位插入)，从而引起了移码，导致蛋白质ZmMADS15的功能缺失。

三、观察并统计ZmMADS15纯合突变株和T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米的开花时间(如吐丝时间、散粉时间)和农艺性状

1、在短日照条件下(11h光照/13h黑暗)，T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米的吐丝时间和散粉时间提前，ZmMADS15纯合突变株的吐丝时间和散粉时间延迟

本发明的发明人2020年和2021年分别在海南(短日照条件)种植玉米自交系B73-329、OE-1、OE-2、OE-3和KO#1，统计散粉时间、吐丝时间、株高、穗位高、总叶片数、穗下叶片数等农艺性状。

2020年的部分统计结果见图2(A为散粉时间，B为吐丝时间)。结果表明，与玉米自交系B73-329相比，T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米(如OE-1、OE-2或OE-3)的散粉时间和吐丝时间均显著提前：与玉米自交系B73-329相比，OE-1、OE-2和OE-3的散粉时间提前1.2天、1.1天和3.2天，OE-1、OE-2和OE-3的吐丝时间提前0.8天、1.5天和2.7天。

2021年的统计结果见图3(A为散粉时间，B为总叶片数，C为株高，D为吐丝时间，E为穗下叶片数，F为穗位高)和图4(A为吐丝时间，B为散粉时间，C为总叶片数，D为穗下叶片数，E为株高，F为穗位高)。结果表明，与玉米自交系B73-329相比，T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米(如OE-1、OE-2或OE-3)的散粉时间和吐丝时间均显著提前，ZmMADS15纯合突变株(如KO#1)的散粉时间和吐丝时间均显著延迟：与玉米自交系B73-329相比，OE-1、OE-2和OE-3的散粉时间提前2.4天、1.8天和5.7天，吐丝时间提前2.6天、2.4天和5.6天；KO#1的吐丝时间延迟2.1d，散粉时间延迟1.7d。与玉米自交系B73-329相比，T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米(如OE-1、OE-2或OE-3)的穗位高和穗下叶片数显著减少，ZmMADS15纯合突变株(如KO#1)的株高、穗位高、总叶片数和穗下叶片数均显著增加：与玉米自交系B73-329相比，KO#1的总叶片数增加1.35片，穗下叶片数增加0.73片，株高增加19cm，穗位高增加5cm。

因此，在短日照条件下，ZmMADS15基因能够显著促进开花提前(表现为散粉时间和吐丝时间提前)，穗位高和穗下叶片数均显著减少。ZmMADS15基因是1个一因多效基因，影响玉米的株系建成。

2、在长日照条件下(14h光照/10h黑暗)T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米的散粉时间和吐丝时间没有显著变化

本发明的发明人2021年在北京(长日照条件)种植玉米自交系B73-329、OE-1、OE-2和OE-3，统计散粉时间和吐丝时间、

统计结果见图5(A为吐丝时间，B为散粉时间)。结果表明，玉米自交系B73-329和T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米(如OE-1、OE-2或OE-3)的散粉时间和吐丝时间均无显著差异。因此，在长日照条件下，ZmMADS15基因没有促进开花提前的功能。

四、观察T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米的穗部性状

T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米(如OE-1、OE-2或OE-3)在短日照条件下花期提前，一般而言，生育期和产量成正相关，生育期越短，产量也随之减少。考虑到实际生产利用价值，调查统计步骤三中12021年B73-329、OE-1、OE-2和OE-3自由散粉的穗部性状，包括穗粗、穗行数、行粒数、单穗重和穗长。

统计结果见图6。结果表明，与玉米自交系B73-329相比，T₂代纯合转ZmMADS15基因玉米(如OE-1、OE-2或OE-3)的穗部性状并没有减少的趋势，相反，穗行数和行粒数还显著提高。这为蛋白质ZmMADS15在实际生产的利用奠定了基础。

综上所述，在短日照条件下蛋白质ZmMADS15能够调控花期(如散粉时间提前、吐丝时间提前)，且穗部等农业性状没有减少的趋势。蛋白质ZmMADS15受到光周期调控，这一功能可为玉米育种改良，提高玉米适应性提供新的基因资源。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。

<110> 中国农业大学

<120> 蛋白质ZmMADS15在调控玉米开花时间中的应用

<160> 5

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 279

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<400> 1

Met Gly Arg Gly Lys Val Gln Leu Lys Arg Ile Glu Asn Lys Ile Asn

1               5                   10                  15

Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Ser Gly Leu Leu Lys Lys Ala

            20                  25                  30

His Glu Ile Ser Val Leu Cys Asp Ala Glu Val Ala Leu Ile Ile Phe

        35                  40                  45

Ser Thr Lys Gly Lys Leu Tyr Glu Tyr Ser Thr Asp Ser Cys Met Asp

    50                  55                  60

Lys Ile Leu Asp Arg Tyr Glu Arg Tyr Ser Tyr Ala Glu Lys Val Leu

65                  70                  75                  80

Ile Ser Ala Glu Ser Glu Thr Gln Gln Pro Ile Arg Ser His Glu Tyr

                85                  90                  95

Phe Ile Trp Ala Ser Lys Lys Val Ser Tyr Ala Ser Val Trp Ser Ser

            100                 105                 110

Ser Arg Arg Ala Ala Phe Gly Ala Trp Leu Gly Asn Trp Cys His Glu

        115                 120                 125

Tyr Arg Lys Leu Lys Ala Lys Val Glu Thr Ile Gln Lys Cys Gln Lys

    130                 135                 140

His Leu Met Gly Glu Asp Leu Glu Thr Leu Asn Leu Lys Glu Leu Gln

145                 150                 155                 160

Gln Leu Glu Gln Gln Leu Glu Ser Ser Leu Lys His Ile Arg Thr Arg

                165                 170                 175

Lys Asn Gln Leu Met Leu Glu Ser Ile Ser Glu Leu Gln Arg Lys Glu

            180                 185                 190

Lys Ser Leu Gln Glu Glu Asn Lys Val Leu Gln Lys Glu Leu Ala Glu

        195                 200                 205

Lys Gln Lys Ala Gln Arg Lys Gln Val Gln Trp Gly Gln Thr Gln Gln

    210                 215                 220

Gln Thr Ser Ser Ser Ser Ser Cys Phe Val Ile Arg Glu Ala Ala Pro

225                 230                 235                 240

Thr Thr Asn Ile Ser Ile Phe Pro Val Ala Ala Gly Gly Arg Leu Val

                245                 250                 255

Glu Gly Ala Ala Ala Gln Pro Gln Ala Arg Val Gly Leu Pro Pro Trp

            260                 265                 270

Met Leu Ser His Leu Ser Ser

        275

<210>2

<211>18221

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400>2

atcccggttt cgcgataccc cctcactgct ccagtgctcc ctcctcccct cccctccgat 60

caagtcgggg caacgcgcat cactcgcttt aaatccgcac ctcccggccg gtccccttat 120

cacctcacct tctcctttga gtcctctctc tccgccgccg cagctagctg tgacgttatg 180

ctctcgccgg cgccatagcg ccagcgccta ccgtctacaa ctatccagcc ttaggcttac 240

ctatcccgtc aatcaagcct ctcgtaagga acaaggaagg tagctagcta gttctatagc 300

tgctgtcgtc gtcgtcatcg gcggcggcgg cgcctgttct tagaggataa ggttgtccta 360

gcggagaggg agctagccag gatttcggtt gagatcaaga gggggagcag gcggcggcgg 420

cggcgatggg gcgcgggaag gtgcagctga agcggatcga gaacaagatc aaccgccagg 480

tgaccttctc caagcgccgc tcggggctgc tcaagaaggc gcacgagatc tccgtgctct 540

gcgacgccga ggtcgcgctc atcatcttct ccaccaaagg gaagctctac gagtattcca 600

ccgattcatg gtacgtaccc tctcggctcc gctgcttacg tttcggcacg gttccgctgc 660

atgctgcacc atttaatttc gaagctgttt gaagctatgg attacggtgc tccgtaattg 720

tctgttcgaa tttgttgata gtttttgggc tttgggttat tggatagaca aacgacgaac 780

ggctatacag tctagctaga taggtgattt tatgtttcgc tttcgctggg atggcgttgg 840

tactgctatg tttggggaaa atctttactg ccatgctagc tgcatgtcct aattgcttga 900

ctgggttgac tcctaccacg gaacggtgat accaatctcg cactcaagca caattaatca 960

gtatgcgtac ttattttata tataatacct catccgtttt ttatttgtcg tcgtttaatt 1020

taaacagacg aacaaatatt tgagaacata gttagtatta tatctttgtc gtgcgggaac 1080

gactggggat tacatggaga gtattatctt ttggattttt ctcattcaag actggcagca 1140

tcattaatta tttattccca cttccgcagt actccctccg tcctagtata taaggcgtaa 1200

ccacctctgg ttcaaagacc aagaaataca tttaattgtc tctataccac tgcatcgata 1260

tacgtatgca tagagagagc acgcattata ttgtgggaca agaataaaaa gtggttacgc 1320

cttatatcct gagacggagg gagtaatttg cgtgagtatt tcttcgtcct tccatttttt 1380

ttcttatgcc ccctttccga gtacctgtgg ccgcaccaca tggtatagat atatcatata 1440

tggagtcttt gtccactgcc acaagcaact atgctagctt gtctttactc ttgaccgacg 1500

attgacgatg ctgaacctga actccggtag ggcatgctta tatcgcaagc cccatgctgc 1560

acataagttt gtgcgtagac ttcgccgtac atatcactgc tttggttgct atgattttgt 1620

tgaatgaata acatatagac acacggtatg ccgatccatc ctttcttctt cttttgtttt 1680

tactaaagac accgcgacgt ctaaaatgaa gtttgaatta ggcaacataa aaactattaa 1740

ttatatcctc taatttttac ttagtcaaaa cttatacaat aaataatcca tctaaatata 1800

caacttgcta agtgtattgc tattgctatc tttatcacga aagagttata cgtgcaatct 1860

gtattcaatc ctatcactag cctatcaaac taagctagaa atataaagca aggtactcaa 1920

cgtggaagtt aaaaaacaat atagatataa actcttgttt gaagatgctg atatttttaa 1980

tgaggtaccg aaaagctcat atgtccccct aaggctaatc acaatgaagg tttcatgtat 2040

taattagcct gccacatcag ctatttggat gacatgtcac atcatttaag aaggaacatc 2100

atttaagaag gaagagtttc atggagtttc atgggatgaa accatgttaa ctcgtttcca 2160

aggtcttgga aactgtgtga aacctccact gagagtgttt tgtttcatct tcatataatt 2220

gagtaaattt tattggttat ttatatgcag catttaagaa gtatgttgac atataaaata 2280

gtgagatgaa actctctatt gagagaaggt gtttcgttca tctataaaat tgacgtggca 2340

tttttggaaa tagggatatg aaatcctcat tgtgattagc ctaatactcc ttggagcctc 2400

tcgtaagaat gctctccaaa cttctggctg gagcactcca tgtgtatcct cgctggagaa 2460

ctccttgtgt atcctccgag tcttcctcac gtgcaagtgg gtctacaaga tgacctctcg 2520

ctcattgtcg tctttattat cgagctttta gctaaatcgt catgtgcctc atttactcgg 2580

gtactccctc cgtccgcatg actagggcgt tctgattttt ttaagacggg ttaaggcaga 2640

agtaaaatga cacatgtaac cctgcttcat cttgattaag cataaattac aataaaagct 2700

cattattact cggcgccttg acccaagcag caccacgaag atggcccgct ttgcaacggc 2760

ttggctcctc gattcacgcc ggccacgata gtgcgtacag tgtaaacggg aacaaacagc 2820

agggaagggg aggcagcagt ggggaagatg aggcggcggt gtgaagtgaa ggaaagggta 2880

aggatggaat gttgtacggt gcggacagga gagatgggct gagtggcgtc aaagtgcatg 2940

gacaaataaa atgggctaaa acgcctaagt cacgaggacg gagggagtac atggtagttg 3000

tcacaccata aacaaacaca cagttgttgt ggtattacaa gactacaaat cctttggtgt 3060

acaatcatga tacgctgaag tatctaatag cacgaggtat gcaaacctca ctaacgttaa 3120

agctaaaact agagcaagca tggtttaact agctagcata agtacttcac aaaacaacta 3180

tattaatcac cacgtgaatc actagacacc acgtacgtgg agagctctaa tagtattttc 3240

tttctgaata catcaacaaa accagtggcg gatccaaagg gggggggggg ggcaaagtag 3300

gccatggccc cccctcaatt ttatacatgc ctttatgcct aatgattatt tagtattaag 3360

tgtagaaaaa aatcgaagtt ttagatagta taaagtcttg ttctaaatct ctaaaactaa 3420

tagctagttg ctaaaattac ccaagaggtt tagaatggat caactaattg ttagttatac 3480

ccctcaaata agtattagtt gttagatgcc ccaacccagc taaaatcagt taacaattag 3540

ctctaaaggt ttagagcatg gcctaaaaca accatgttat aagcctgctc gccggatcct 3600

ctcgatcaag tccttgcatc taccagtgtg actctaatct tcccgacagc acctaaacca 3660

gtttgctcac tgcctcgttt ccgccgccga cccattcccg atgtgacgcc acccgacttc 3720

gcccctttct gacgcctccg tcctttgtcc tgtttttatc gtgacgtcca tccgctcgac 3780

aagctagatc tcgctcgtcg caacgatatg acttgtcccc tgcagtcggc ggacttggcg 3840

aactagaaaa ttatgactct catatgatct ttttggcccc ccctgaattt tggtcctgcg 3900

tccgccactg aacaaaacca ctcattatac ttgcataagc tgtagtggac ttctagtttc 3960

cttcttttat atcatctttc cttgttccac cactatatca tatcatctct atggcccata 4020

gactcgatga acgtagcctt cccagctgtc tgtgtagtac tccctccatt ctaaaataga 4080

taacctcata taattaaatt ttgttccaaa atacgtaatt tttttatttt tcaatgcatc 4140

tttctctttt tcatattcct atctttaatt atgttcctgc cacttctttt gcacccctcc 4200

gatccgctcc tatatctgaa cctataaaga catctatttt ggaaccgagg aagtagtaaa 4260

aaaaaatatt cggtcttagt aaacatgcgt ctaattggac tgatatgttt atttcttgaa 4320

taatatactg accgatatca agatttatgc atgacagtaa acacctgccc tatcgtacat 4380

aaaaataatt gtatcctccc cggtctccta gcttctctta tctttctgga ccactttgta 4440

ccagtgatca atcaaacttg gacgattagc aatatgtaga tcttccatat atgtaataaa 4500

taaggatgtc attacataat ttaaaaaaat taattccaat ggcacatggt gtcaactcag 4560

atgtttttta cgtgttttct gctctgacga ctgtggtcta attgagttag aattaataat 4620

gctcgatgta gggggcatgc aagcacgtgt cgtgtgatat gattgaaaat gagtgaattt 4680

tggcataaat gggatttttt taacaatggt aggagctgtc ttttaattaa gacaaaaata 4740

attttgacgt caaaaaagta ggcaaatgtg atgccaatca taggacaccc gaaaagctaa 4800

ccccacccac acgacatggt ggagtacaaa actatcatta gtcatcgttg ctgaccatgg 4860

ttgtattata gaaagtagct ctgacttccc gtgatagacc acataacgac ctatcctact 4920

gtctccagca gcatacctat atctatattt aaacttcact tcacaaacag tacaatctac 4980

agtgcagaac atcgcttttg gataaattat aaatagcttc gacttataat aatattggct 5040

gggcaaacga ctagaagcac gagatcactt cagatcatct ttgccgagca taagcacgcc 5100

gagaagagca gcttcgactt tctatctcga tcccatgccc cagtcccaac ggttgtcatg 5160

gctatcgaat cacatcccta acacagcaac tccaagtctc taacttcacg ttgtaacttg 5220

taagactgtg ttcaacagtt tattcatagt ttacttaaat actctttgag gagttggtct 5280

ctagtatgct tagtgtactg gtgctcctgt tcattttttt tttcgttttg ttgggtggtg 5340

tgtagagttg tatgaggttc tttaacacct caccccatct tattctactt aatataatga 5400

tacgtagttc tcctgcgtat tcgagaaaaa aatatggata tatggatgga taagctgctg 5460

gagataatct aagacctctt ccacttgtca attaggtgcc gataagtgaa gacaaaccac 5520

caaaagtggc agtataaggt gtcattatat ttggcaggtc ccccttaatc aaagttcctg 5580

gttacgccac tgctcagagt gaaaagcaaa tgttttgttg aagcattatg agttcttaca 5640

tgagaaacat ggtggtgctt gcatggaacc tataggacga tatgatatgt acttatagat 5700

gtacatttat gttgtgccta ataggtcggt ccaaagcaca caatttttgg cacgacccag 5760

atctggcacg gcccaaccta attgtgggtc tgggccggca cgacccaata tgtgggccgt 5820

gcctgggcct catgtcaagc ccacaggccg gcctggcacg gcccatttaa ctaaggccca 5880

tcgagaccta ctaaatatag actcggcatt taactaagac ccgtcaaagc ccacataata 5940

agcacaactt ggagattcta aagctttaat aggcattcga gaaccaatac ctagatgtgg 6000

atagtgaata gtgatgatga tcattgtata tgtgttttgt atggttgtat agtattcaat 6060

taaacaccga acagagaact gaatattatt tctgagctag ttgtaatatt tttctttctg 6120

accaaaggtt tttaatgtgc atccacaaaa catcttagtt ttattttggt catatatatt 6180

ttatactttt atttgtgtat tacctgttgt atgtatatgg gccggtctga cacattaaga 6240

cattttaggc tatttgggcc ggcctgacac atataactaa ttgcgggccg tgccgtgggc 6300

cgatgactag gcacacgtgc tggtacgaca tggcccataa ttagatatgt gcttttgtgg 6360

gccgtgcctt tgtggaccat gcttttgtgg gcctgtaccg taccgggcca ggccggccca 6420

catgtacatg tatatatgta ctacatgact agaatgctga ataggaaagt aaatgcattt 6480

aattcatgca agtatagtaa tatctccgtt cacaaatata tgacatcgtt gacttttttt 6540

cgaaaacttt gattactcgt cttattcaaa aatataaaat tttaagtcaa acaaaaacta 6600

cgttaagtga taaaataaat cacaaaaaat aaatgataac tcattatttt ttgaataaaa 6660

aaaagagtgg tcaaagtttt ttttaaatca acggtgtcat atatttttga atggagggag 6720

tagtcgataa gtcgtctaat tcagctctct cagactcctg aatctgatct acaggagtag 6780

gcatgcagac attctgtaaa agcaaaaacg agatgatcac ctttcaatta ggcgaacctg 6840

tatcagagaa acttgcttat tcgatatgca ttcatcctag cacctctagc tcgacaacag 6900

aattgtaaca ctttctctaa tagcatccat caatttcagt ttgtaaatat ttctcatatg 6960

cctatattga taatttgata tgctcagttt tgttttccta tctattttga tcccattttc 7020

acatatttta aaaaaaatca gatctttgca gtttcaatga aaaatatgac agataaattc 7080

tgaatggatg tgtatgcatc tcaatatcac atgtacctat acatgtttta ctgaaggtat 7140

aacattccac catataaatg ttcgtgtatg gcagtgcacc ccgtcattgt ggattacgtt 7200

gatctgaatt ttcagttgca gttttcctta ttgttgacat tgttctatac ttgtacgagt 7260

tccccgaaac ttctcttgca gccaactttc ttattataca atcccaaatg ccttttgttt 7320

aattttagca ttttatgtaa agcggtcttt tcaaggcctg aagtttagca ataaatcacg 7380

gtatttttta taaaatttaa tggcttgtgc atgtatgctt cactatttga caatagaatg 7440

ggaattggga accatgtttt tactgtaata acttaaggaa aatgacctta tcttcccgct 7500

ctagtggcac tggctggttc gtgtgtctgg ttatctggtg tatgttgatt acttggtatt 7560

aatgtgtgta gacagtagtg gtgaggactg atggtgtata tttgggtacc cctactgaat 7620

ggacatgttg ctctcatacg tgttcaaagg aaaaaaaaaa actcaagaaa catgaattgc 7680

aagaacagta taatgcagca cgtattgctt tatggttttg atttaacaaa agcaaataat 7740

ggagcatccc cacatggtct ttttatggat gtgttccctg ccaataaaat gttgttgaaa 7800

tcataagttc atacaaagat aatatagtaa tactcttcaa atatttaaga agatatagta 7860

tattcagttg ttatacaaat atgttaacta cgagggagat aaaagtaact taagtttgta 7920

tatgatgatg tcttaaatgt taataagctg ctgaaatttg ctaatgatca tataatttaa 7980

ttttagttcg taaaccgttc catggaaatt aagttactac aaacagcaaa tggtagtttt 8040

ggaacattaa acaaattatt cactcaaaaa acataaaaat aaatcataca tgatgttcac 8100

catagtaatc tgtgttgttt tagatcaaga ttgcctaatt aagtttcagt tttaagattg 8160

cctttgaacc atatcggaga gcgtggctat gccgtcgcag gcaagcacga ccttggccag 8220

ggatccatca agaggaagaa gatgaggcta gcaggtgggg tctgcttgtc actgagagaa 8280

gttgacaaca attttttcca aaactacagt tgttgaacta aacaattttt aacattcgca 8340

caactatttt tccatagccc atagatcaca acaacctttt taaaaaccac acctcaacca 8400

aacacgccct tactccctcc acacagacta gtattatgtg gggaactttc acacactgga 8460

actgattgaa agagctagat agaatataat gcagttagaa agatccataa ctttattttg 8520

gtttgactta attaatttac tttatgcatt tgatatgtga atttgacatt actacaaacg 8580

agaaaggaga tgctagttta aaagatcacg tagtgtccaa aaaggatacc tttcgatatt 8640

aggatcaatg ctacagagag acaacaatat tgatgaagat attagccata gaatcaaagc 8700

aggataaata aagtggcatc aagtatttga cgttctacat gaaaagagag taccacagaa 8760

gctaaaagac aggttttatg aaacgacaat taaacctgct attttgtatt tgttggactg 8820

tgtgctccca ttgtaatggg ccttggtcca acatatacac tattggtatg tatatcgtag 8880

cctaccctaa ttggtgcctg gggattctat tttatccaat agtatcgtgc agaatgttgg 8940

cctacaaaaa gacgatatat ttaacagata agtgttctgg aaatgtgtat gttgtgctgg 9000

atttatgacc atacaagaag ggaccaagtt tggaatgatg atatacgtga taggttagga 9060

gcaacaccaa ttttaaaaag gttattcaat atcggttgag atggtttgga cacattcaac 9120

agatacttct agaggcatca ctgtatattg ggaacctaag acgcgatagt aatgtgaaga 9180

gaaacaaagg aagccaaaat tagcgtagga atagatagta aaagaatact tgaaaagatg 9240

aaatatactc aaatatttag gcttcaatag gaggggtatg aagaataatt attcatgtgc 9300

gtatacattg acttgtggtt tatgttgggt tctaactcta acctacccta acttgtttgg 9360

aactaaaacc caacttgctt ggaactaaaa ttctttattg atgttgttaa tatgtattgt 9420

tgtgattgtt gatatatatt gttgtatcct ataagtgttg ttcttgacat cgttgtgagt 9480

gcattcgaaa ctaatgttgt attctccttt gttacttgac ttgttgaacc aagtgctttt 9540

acaccccagg aaaaggaaga atctttagct actatatgca tatgtatgat atatatatat 9600

aacaacaaca acatagcctt ttagtcccaa acaagttagg gtaggcatgt atgatatata 9660

tcatgtatat tttttttctc gagcgtgcag gagaattacg ccacattata tattaatgtt 9720

gtgaactgcg acgcactcgc aagatagtcc cggtacttac cctcccgtag gatagatcta 9780

tatcttcttc cctcctctac taacaccctg cccctcctta tatagagagg taaccctaac 9840

ttaatagcta agcaacataa caaaccctat ctggccagca ctgttcacgc gctacagtaa 9900

ccataatgac ctagctaatt ggcttaaggc ccatcacaat taagcaaata gagaaaaggt 9960

ctatagaaga cccaaaaaca aaacaaaaga aaaaaaccaa aaacctcctt acggaggcca 10020

aaaacagaca tacataaaga gatccatcag aaaaccaaaa cagactactc gatcctccct 10080

aaagttctgc caagggtgcg gccaaatgag cgagaccctt tgcaccagct attttccatc 10140

ttcttttctc atcaacaact ctaagactca tagttatact tggactgcac actgcagtca 10200

catattacat tatggtttag gtctttagga tataaaggtg atagtgatat ggtaaatgtt 10260

acattaatgg atataatcct accattcttt atcatacata tatattgttt tcaagttttg 10320

caaattgttt agttattcgt gcttgtagta atttacttcc agttttaaat tattatttcc 10380

atctttcaca gtatggacaa aattcttgac cggtacgagc gctactccta tgcagaaaag 10440

gttcttattt cagcagaatc tgaaactcag gtaaatttaa ttttatttag caacatataa 10500

tatgttttgt aacttcattt aatataatag gctttatttg attcattact atagcttttt 10560

agcttttgtt catcagaaaa tttgttcagt tccagtcaag ttagatcaga agtataattt 10620

tttgtactga acaaatgtat atgtgtggtc ttgataggat gagttttagt ggtagtgttt 10680

ttggtggtca tggtgtttta ttgtgttcaa aaggcgtgaa tctaacgaca gtacctacgg 10740

gtgttggtgt gggtgtattg catgagtttt taccctcttt ttttaatatg aaagatacac 10800

aactctcacg cgttagagaa aggaaaaaat aatctctagt gcttcattac ttgttctacc 10860

aaacaattga cttttagcct gcttacatag atgcaccatc aaaggatagg cctgacgcag 10920

tagtgagaag cgttttcatt gagccgaagg ccctggattc gaatcagtct ttctggaaat 10980

gcagagataa ggtttacagt ttttttctag atctactcat gtgagagcta ctagcattgg 11040

gtctgtcctt tacatagatg cgccatccac aataaatctg aatgttatga aactagacga 11100

aggctaaagg aatgtttggt ttctaggtct aaattttagt ccattcattt tattctattt 11160

tatttcctaa atattttagt ttccgtattt gacaatttaa aggctaaatt tgagagacta 11220

aaaattagtc cctagaaacc aaacaccctc taaatcaact aatgtgtatt ggcatttaga 11280

catcatatat gtaaccggag cacatggtgg caaggtgttt tgtagggaag ggaaatatat 11340

aaaggcgcaa caagagttac tgtatttgca tagatagaaa gtttaatcaa tcaagcttaa 11400

aaaactcaac ctgcgagggt aagacaaccc cagtcattgt gtattaaaaa agagatattc 11460

tcacacgtcg aaaaaaccct cgaacctctg ccccacccca tagaaaagac gagatgtttt 11520

ttttaaatct agcctaaaat tcactcccat ggatagccga actccggaca tgagaatagt 11580

taacttatat ttataaaatg gttgaagtat gcaacaaaaa acatcttttt ttaatagcat 11640

taacaaaaaa acatctttgc acaaaatatg ttgtaattgt tgtagcacat ccaaatccca 11700

ctggtctcta atacaataca tttgggcaaa aattagtaca acgttaggac aaccaaatta 11760

gtcaaacttg tactaatttt gttctaacat catcatgtat tagtaaccgg aaggaatgac 11820

aattttatcg ggtccctaca ttataaacat ggtatatatt ggacttttga aaccacaaat 11880

cacatacata cgtgagtttc gtataataaa cttcgctact agccacattt ctaataattt 11940

agtaatttat atgtttttga catttagcag cctatcaggt ctcatgaata ttttatttgg 12000

gcgtccaaga aggtaaggtt gtggaacact tatcttcctc tcctcctatc ccaataatct 12060

tatatgtctt atcaactaag tggtcttcat gctaccgttg ttaattaact tggttgccag 12120

aaaatgacta gagctatctt tggaaaggat attaactatt aatacaggtt ttgggtctaa 12180

aactctacta tagactttat atccatttct aggaaactca atatatgatg gtaacaatgt 12240

tatcaagtca tccaactaat tacaaccagt cgggctaatc ggtgacatgg tgatcgattg 12300

gctattagtc tggctgattg ataccaatat accatggtga ctagaatcaa ttagacgatt 12360

tgataacatt agatggtaaa gatgtaccct catcaccaat tcggatttag taagatcaga 12420

ccatataact taacattttt attgagaata ttggacaccc caaaatgtca tccataaagt 12480

gtatcagaca gtccaaagaa tatctctgta ttattttatt tatattgtaa tgtttgtgag 12540

gtgaaagcaa tttaatggtt cgtaaaagta gggattgtaa gtttaatata tgctttgtat 12600

taagagaaaa aagaatacaa ccttctgatt acagaatccg caatacctca aaagttgagg 12660

ccagagtagg ttgcaagtag aacaaataac caataattga cgagaaggaa aaacacgaga 12720

aagataacat tcaatgcaaa acttatctaa gatctatacc agtgagacat ctagcatcag 12780

acatgcacct gaggtgagct tcctccatga gaacctttgg gcatcatgga tacatgatta 12840

gcatgcactg atgaccatgt caaataattg tgattcacca ctggccagtg taaattggca 12900

caccccaaat tatggaaggg gggaatgaca tgaagtattt atcaaaactt gttttctctt 12960

atagatttgg tggaaatggc aatcgcaaga cataagcact gatacaccgt tgacagttaa 13020

aagaaaacat gggtgtaaaa cggaaattaa gacaagatat tgatatgtta gggtataccg 13080

ttgatagtta aacgaaagca tgggtgtaaa acggaaatta agacaagata ttgatatttt 13140

gagtattcta gattataaaa agtattatat ttatttatat taacaggttt catatgcatc 13200

tgtatggtca tcaagtcgga gggcagcgtt tggtgcttgg ctggtgcatc agctctgcag 13260

gacctcctcc tgcgccagct ccctagggga ccctagcagt ttgcctgctg gtggtcgttt 13320

tggtcgggtt gttgctatgt gtgcgtggcg tgttgtgtta atgtcagggg gtctcgcctt 13380

tgtattaggg gttgacaagt cttgtctctc ctatgttttt ttcttcttaa tataatgaca 13440

cgcaactctc ctgcatttgt ttaaaaaaaa gtctcatcgg ttctttaatt ggagaatagc 13500

gtatatatgt catggacctt cggtccatgg ggatagctgt cttctccggc gaggttatac 13560

cctctaccgc aggcttggtt ctagggtagc agccctaggc gcttgagaga cattaagaga 13620

gagattgctt tgataatttc tttcctccaa ccgccgagta cagtacaggg gctatatata 13680

gccattggcc gacatgacaa gagccaatcg gctcctagaa ttaaggacta acaatagcaa 13740

ctaatcctat ctttcctcct atcctttgat agcaactaat cctctctttc ctcctagcct 13800

tggcatcgat tgttgctttc ctttcctgcg ggtgcggact gcatggtggt gaccgctccc 13860

tatgatgccc atgacatctc tccctccctt gaggaccagc tcgtcctcga gctgccatag 13920

acttacctga cacgacttaa ggttaagtct tttacatctc agcttacctt tattatgtga 13980

gacgaaaata caaaataatt gtggaactaa aatataaatt tgaactgcac ctatgtcctc 14040

ctgtcctcct ggatcccaag aaaagagctg aactgcggcc ttcatattgg atgaaaggtg 14100

gaggaggaac cagctcgttc ttatgttgga tctgtccagc accaaggcag gtgcccgaat 14160

gaaggagacg accctctttg gccatgcagg ggggctgcat acccagatct cgacttctgc 14220

agggggttca aaaagtatag atgagacctg gtggttggac gcgcaggctg cgtgttggtg 14280

cagcgatgag ctgatcaaca agtgtagctt ccgcaccgcc cgcctaacaa ggaagccgcg 14340

cgctgcggct tgcaggcgca ccacggcctg ctcatgtgat gacggccatg gggtggccct 14400

ggaggccata gcaaggtgct tctccccacg aagggactgt acctggcggc gtgccaagaa 14460

ccctcgcgct gccgtctgaa gcgcaccgct gcttggagtt ccttctgtct tctccttgta 14520

gcggtggaac atcacaacga actgatccca cttctctgcg aaacggccaa aactctctgt 14580

atggtcatca agtcggaggg cagcgtttgg tgcttggctg gtgcatcagc tctgcaggac 14640

ctcctcctgc gccagctccc taggggaccc tagcagtttg cctgctggtg gtcgttttgg 14700

tcgggttgtt gctatgtgtg cgtggcgcgt tgtgttaatg tcaggggggt ctcgcctttg 14760

tattaggggt tgacaagtct tgtctctcct atgttttttt cttcttaata taatgacacg 14820

tagctctcct gcgtttgttt tttaaaaaaa gtcccatcgg ttctttaatt ggggaatagc 14880

atatatagac cctggatacc aatagtttgt gatactagta tgtataggag tttaggcaag 14940

tttctgtaag cacaggaaac aataaatcca aatgtattat acgttgtcaa cagttcctcg 15000

ccattttctt ataataatcc atggagctgt cattttttta ctaaatatgg tgctagtcaa 15060

tagttatgtg ataaatttgg tttaaactaa tactaccccc attttaaatt ataagttgtt 15120

taaacctttg tttagataca taacttttgc tacacacctg aatacatgtt atgtctagac 15180

aaattaaaaa actatctatt tagaaaagtt agaatgactt acggtagtac aaagaatatt 15240

atattacagg gcagttattg attcacttaa cccaggttat tatgttgagt gtctccttta 15300

atgttgatat atactagatc agtaacattc cttttcatga tgttgccaca tactaaataa 15360

cgtaaatctg ctttgcttta tgtagggcaa ttggtgccac gagtatagaa aactaaaggc 15420

gaaggtcgag acaatacaaa aatgtcaaaa gtaatttgta gtgattagtt gctgaaaaaa 15480

tgtaatatgc cctgttgaag ataaatatga ccaatacttt tgtgtcctgc aggcacctca 15540

tgggagagga tcttgaaacg ttgaatctca aagagcttca gcaactagag cagcagctgg 15600

agagttcact gaaacatatc agaaccagga aggtagtgtg atcatgtata ttagactgca 15660

gtgcattcct tatgtgttgc ttactacacc actgacagcc ttgcgctctg cgcgttggag 15720

aaagctaaca agtaaatatt catcgtatgc gcagaaccaa cttatgctcg agtcaatttc 15780

ggagctccaa cggaaggtaa attcgtcgag cttgcttaaa gttggccgtt ggaacttcct 15840

ttttaagaaa tgtaaggttt ctttagctgg gcattaggtg ggcatggttt gttgcaagta 15900

ttgactgctc tggttgccta gttacatcca caaaatattc ctgctcttgt gctgtgctga 15960

gtattggcat gcgatgcatt gccgcaggag aagtcgctgc aggaggagaa caaggttctg 16020

cagaaggagg tagccagacg ccgccgctcc tcaacactca gctagccctc tgttttctca 16080

tgacgcaaat taaatttaca gaaagcgttg ctcctgcctg cagctcgcgg agaagcagaa 16140

agcccagcgg aagcaagtgc aatggggcca aacccaacag cagaccagtt cgtcttcctc 16200

gtgcttcgtg ataagggaag ctgccccaac aacaaatatc aggtagagca cattcacatc 16260

gcgctacaag cctacaatcc caaattgtga ggtggcctcg gtttcgggta aagatttgag 16320

tgagcttggg ctttatctaa accccaattc aaaaatacac ataaacttgt gcttttccaa 16380

aatttgtaga aaatatagat tcttgtagac catgcatgga acaattatgt tgacacacaa 16440

tgttcgttga attttttttg accatttatg agccacaaag aaaaagaaaa aaaattcttc 16500

acgtactgat agactcctgt ttttcctttc acagaaggta cgaggtcaac tttttttttt 16560

ctacaaaact ccgtgtgtca gtataattaa tcatccatct agctgtatgc gtttctccga 16620

taaattttat gcttgtggtt tttcttttgt atgttttttt tcaaaagagt agccgtacgc 16680

ctatgctcaa ccaagctaca cccaatttcc tagtacactg ttgacatttc aggaagcaac 16740

tgacaagata gtctccgtct gtgtccgttt ctttgcagca tttttcctgt ggcagcaggc 16800

gggaggttgg tggaaggtgc agcagcgcag ccacaggctc gcgttggact accaccatgg 16860

atgcttagcc acctgagcag ctgaaggttt cagcaactct tcccgtttat ccgcctggtg 16920

cagtatagta tcatcgtgat cgcgagagca gcagcagtgg gtttgccgta tcttttttta 16980

ccaatgtatg tctatatatg taagtatcaa atctgcaatg tgttaatcac catttccgct 17040

ggggcggccg cacgagtact ttacgcatca gtatatgtgc agcatcaaat attccatttt 17100

catgaccata agacgttctt gatccttcat gcattgcgta tgcgatctgt ctgcatactc 17160

atttacttga aaccttattg tgtactcctt tcgttatttt ttatttatca tgttttagtt 17220

caaaaataaa ctagtaggtg aaaaatattt aagaacggag gtagtatttt ttttctaaaa 17280

gagcctgtat tttttaatat gctataatag tattagtata tataaaaata agtgcttgta 17340

tattttttga tatttgacat acatactaca gtagatggtc tagtatgatc atatcttata 17400

catttggtca ggccatatac accataaatt tatacacatg agagtagcta cacctaggag 17460

taggaaataa tttccacaga catatataca ggcaagcatg atcccaccac aactgaaatc 17520

acattaaata cagagtgctg gatgttatgt tctcaaatcc atgcatatcg tcacatattt 17580

ccagtacagg tagcgaaaaa ctgtacctgt atttgtaatt gccgcttgta cccaacagtt 17640

tctttgtgtt tttaacgtcg accaatcact gaagcaaacc gccctaattc ctcaagatct 17700

tgaagccaat ccttaccttt gacaggaaca ttctcttgag cagaataaat gtttgtgttc 17760

taggaagcct gatcctcttt tttttttttg tgaaaataca tcttcaggta tttttctcat 17820

caatcatttc aagagtactg acagaaatct gaggacttcc atcattcctg tccgctgaca 17880

agatcccagg aaaaatgttt ttgcaaaagc aaagctatag gcagagttct catccgggca 17940

aggcgattga accctttgtg aagctttttc agaaccaacc attgagcgtt ccttgacatt 18000

tagcactgaa gactggtcat ggtcatggtc atcctttgac ctgcccgtat ttattttgca 18060

caccttcggc atttggcaca gaaggaccat tgacacccgt agagcactac ttttgagctt 18120

gcccagggcc ttcctttgta ctaccagtac tattttgaaa tacatgcttg cttgcagccc 18180

tgtaaaacca agacactctg atccggatgg cattctgtac c 18221

<210>3

<211>1780

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400>3

atcccggttt cgcgataccc cctcactgct ccagtgctcc ctcctcccct cccctccgat 60

caagtcgggg caacgcgcat cactcgcttt aaatccgcac ctcccggccg gtccccttat 120

cacctcacct tctcctttga gtcctctctc tccgccgccg cagctagctg tgacgttatg 180

ctctcgccgg cgccatagcg ccagcgccta ccgtctacaa ctatccagcc ttaggcttac 240

ctatcccgtc aatcaagcct ctcgtaagga acaaggaagg tagctagcta gttctatagc 300

tgctgtcgtc gtcgtcatcg gcggcggcgg cgcctgttct tagaggataa ggttgtccta 360

gcggagaggg agctagccag gatttcggtt gagatcaaga gggggagcag gcggcggcgg 420

cggcgatggg gcgcgggaag gtgcagctga agcggatcga gaacaagatc aaccgccagg 480

tgaccttctc caagcgccgc tcggggctgc tcaagaaggc gcacgagatc tccgtgctct 540

gcgacgccga ggtcgcgctc atcatcttct ccaccaaagg gaagctctac gagtattcca 600

ccgattcatg tatggacaaa attcttgacc ggtacgagcg ctactcctat gcagaaaagg 660

ttcttatttc agcagaatct gaaactcagc agcctatcag gtctcatgaa tattttattt 720

gggcgtccaa gaaggtttca tatgcatctg tatggtcatc aagtcggagg gcagcgtttg 780

gtgcttggct gggcaattgg tgccacgagt atagaaaact aaaggcgaag gtcgagacaa 840

tacaaaaatg tcaaaagcac ctcatgggag aggatcttga aacgttgaat ctcaaagagc 900

ttcagcaact agagcagcag ctggagagtt cactgaaaca tatcagaacc aggaagaacc 960

aacttatgct cgagtcaatt tcggagctcc aacggaagga gaagtcgctg caggaggaga 1020

acaaggttct gcagaaggag ctcgcggaga agcagaaagc ccagcggaag caagtgcaat 1080

ggggccaaac ccaacagcag accagttcgt cttcctcgtg cttcgtgata agggaagctg 1140

ccccaacaac aaatatcagc atttttcctg tggcagcagg cgggaggttg gtggaaggtg 1200

cagcagcgca gccacaggct cgcgttggac taccaccatg gatgcttagc cacctgagca 1260

gctgaaggtt tcagcaactc ttcccgttta tccgcctggt gcagtatagt atcatcgtga 1320

tcgcgagagc agcagcagtg ggtttgccgt atcttttttt accaatgtat ttttctcatc 1380

aatcatttca agagtactga cagaaatctg aggacttcca tcattcctgt ccgctgacaa 1440

gatcccagga aaaatgtttt tgcaaaagca aagctatagg cagagttctc atccgggcaa 1500

ggcgattgaa ccctttgtga agctttttca gaaccaacca ttgagcgttc cttgacattt 1560

agcactgaag actggtcatg gtcatggtca tcctttgacc tgcccgtatt tattttgcac 1620

accttcggca tttggcacag aaggaccatt gacacccgta gagcactact tttgagcttg 1680

cccagggcct tcctttgtac taccagtact attttgaaat acatgcttgc ttgcagccct 1740

gtaaaaccaa gacactctga tccggatggc attctgtacc 1780

<210>4

<211>840

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400>4

atggggcgcg ggaaggtgca gctgaagcgg atcgagaaca agatcaaccg ccaggtgacc 60

ttctccaagc gccgctcggg gctgctcaag aaggcgcacg agatctccgt gctctgcgac 120

gccgaggtcg cgctcatcat cttctccacc aaagggaagc tctacgagta ttccaccgat 180

tcatgtatgg acaaaattct tgaccggtac gagcgctact cctatgcaga aaaggttctt 240

atttcagcag aatctgaaac tcagcagcct atcaggtctc atgaatattt tatttgggcg 300

tccaagaagg tttcatatgc atctgtatgg tcatcaagtc ggagggcagc gtttggtgct 360

tggctgggca attggtgcca cgagtataga aaactaaagg cgaaggtcga gacaatacaa 420

aaatgtcaaa agcacctcat gggagaggat cttgaaacgt tgaatctcaa agagcttcag 480

caactagagc agcagctgga gagttcactg aaacatatca gaaccaggaa gaaccaactt 540

atgctcgagt caatttcgga gctccaacgg aaggagaagt cgctgcagga ggagaacaag 600

gttctgcaga aggagctcgc ggagaagcag aaagcccagc ggaagcaagt gcaatggggc 660

caaacccaac agcagaccag ttcgtcttcc tcgtgcttcg tgataaggga agctgcccca 720

acaacaaata tcagcatttt tcctgtggca gcaggcggga ggttggtgga aggtgcagca 780

gcgcagccac aggctcgcgt tggactacca ccatggatgc ttagccacct gagcagctga 840

<210>5

<211>19

<212> DNA

<213> Artificial sequence

<400>5

accttctcca agcgccgct 19

Claims (10)

1.蛋白质ZmMADS15的应用，为A1)或A2)：

A1)短日照条件下促进玉米开花时间的提前；

A2)培育短日照条件下开花时间提前的转基因玉米；

所述蛋白质ZmMADS15，为如下b1)或b2)：

b1)氨基酸序列是SEQ ID NO:1所示的蛋白质；

b2)在SEQ ID NO:1所示的蛋白质的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

2.编码权利要求1中所述蛋白质ZmMADS15的核酸分子的应用，为A1)或A2)：

A1)短日照条件下促进玉米开花时间的提前；

A2)培育短日照条件下开花时间提前的转基因玉米。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述核酸分子为c1)或c2)或c3)或c4)所示的DNA分子：

c1)编码区为SEQ ID NO:4所示的DNA分子；

c2)核苷酸序列为SEQ ID NO:4所示的DNA分子；

c3)核苷酸序列为SEQ ID NO:3所示的DNA分子；

c4)核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示的DNA分子。

4.一种培育转基因玉米甲的方法，包括如下步骤：提高受体玉米中权利要求1中所述蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性，得到转基因玉米甲；与受体玉米相比，短日照条件下转基因玉米甲的开花时间提前。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述提高受体玉米中权利要求1中所述蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性通过向受体玉米中导入编码所述蛋白质ZmMADS15的核酸分子实现。

6.一种玉米育种方法，包括如下步骤：增加玉米中权利要求1中所述蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性，从而短日照条件下将玉米开花时间提前。

7.一种培育转基因玉米乙的方法，包括如下步骤：抑制受体玉米中权利要求1中所述蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性，得到转基因玉米乙；与受体玉米相比，短日照条件下转基因玉米乙的开花时间延迟。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述抑制受体玉米中权利要求1中所述蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性通过向受体玉米中导入抑制受体玉米中权利要求1所述ZmMADS15的表达量和/或活性的物质实现。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述抑制受体玉米中权利要求1所述蛋白质ZmMADS15的表达量和/或活性的物质为重组质粒pBUE411-ZmMADS15；重组质粒pBUE411-ZmMADS15为将SEQ ID No：5所示的DNA双链分子插入pBUE411-BG载体的限制性内切酶BsaI的识别位点，得到的重组质粒。

10.根据权利要求1或2所述的应用或权利要求4至8任一所述的方法，其特征在于：所述开花时间表现为散粉时间和/或吐丝时间。

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