CN115006432A - 一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌组合物，属于微生物制剂技术领域。本发明发现采用动物双歧杆菌Bb‑12和白藜芦醇作为联合用药物，其具有协同增效的作用，能够明显地抑制幽门螺旋杆菌的增殖，从而清除人体内的幽门螺旋杆菌，减少胃癌的发生。
Description
技术领域
本发明属于微生物制剂技术领域，具体涉及一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌组合物。
背景技术
幽门螺旋杆菌属于革兰氏阴性菌，长约2.5-4.0μm，宽约0.5-1.0μm，菌体呈螺旋形、S形或海鸥状，其所需生长环境严格，属于微需氧型的细菌。Warren和Marshall在1983年首次从慢性胃炎患者的胃组织中发现并分离出幽门螺旋杆菌。幽门螺旋杆菌菌体具有光滑的被膜，并且在细胞的一极有2-4根鞭毛(Marshall et al.1984)。现有研究表明，幽门螺旋杆菌是人类胃微生物群的主要组成部分，正常范围内的幽门螺旋杆菌不会对健康造成严重影响，但如果任其大量繁殖就会引起持续的炎症反应-胃炎，幽门螺旋杆菌诱发的胃炎是导致胃部癌症的最有力的单一因素，而胃癌是世界范围内死亡率第二高的癌症。
幽门螺旋杆菌可传染，一般经消化道进行传播，主要包括粪-口途径和口-口途径，其中，粪-口途径指感染者含菌的粪便直接或间接污染了饮食，饮食者被感染，口-口途径指感染者含菌的唾液污染了食物或餐具，食用食物或使用餐具后被感染。此外，还有一类特殊的途径，即医源性感染，主要是感染者进行消化内镜检查后，未彻底灭菌，从而导致其他人检查时被传染幽门螺杆菌。
现如今，针对幽门螺旋杆菌的常用疗法是“三联疗法”，进一步发展为“四联疗法”。两种抗生素搭配使用并且结合一种质子泵抑制剂或枸橼酸铋两者取其一，是现在医学上“三联”疗法的主流配方(连续服用一周半至两周)。而“四联疗法”则是在两种抗菌药和质子泵的基础上再加一剂枸橼酸铋连续服用10-14天。在体外实验中，许多抗生素对幽门螺旋杆菌都有一定的抑制作用，但只有少数抗生素可用于体内治疗。而幽门螺旋杆菌常用疗法的不彻底性以及反复复发，加上有限的抗生素选择，导致了幽门螺旋杆菌菌株易产生突变以及耐药性，治疗不良的情况下还会导致超级细菌的出现。这在很大程度上削弱了相关疗法抑制幽门螺旋杆菌的有效性与持续性，耽误相关疾病的治疗(Gerrits et al.2006)。实际上，在临床治疗疾病时，过量使用抗生素不但不会对人体有益，还会对人体造成一系列的潜在危害，滥用抗生素会影响人体内部正常菌群分布及数量，可能抑制益生菌生长，更有甚者会引发一系列由微生物群紊乱而引发的内源性疾病，例如艰难梭菌感染或代谢性疾病(Ianiro et al.2016)。相比于抗生素，益生菌在幽门螺旋杆菌治疗中具有明显优势，例如，益生菌具有加强胃黏膜生物屏障、释放细胞毒素及产生短链脂肪酸来抵御幽门螺旋杆菌感染、竞争抑制幽门螺旋杆菌定植、平衡多种细胞因子水平等功能。专利CN201910101339.3公开了一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌组合物，所述组合物包括植物乳杆菌(CCTCCNO：M2018268)菌粉体以及所述植物乳杆菌代谢物粉体为活性成分，将所述植物乳杆菌通过扩大菌种培养、一级种子培养、种子罐培养以及发酵培养获得植物乳杆菌发酵菌液，可有效抑制幽门螺旋杆菌，直至清除人体内幽门螺杆菌，减少胃癌的发生，而且对人体无伤害。专利CN202010574273.2则提供了一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物及其应用，所述复合益生菌组合物包含罗伊氏乳杆菌活菌数1-2×1010CFU/g、约氏乳杆菌活菌数3-4×1010CFU/g，其他组分按重量份计为：低聚果糖80-160份、抗性糊精400-600份、低聚半乳糖200-400份、甘草提取物8-12份、草莓提取物4-6份、麦芽糊精余量、组合物总量为2000份，其抑制幽门螺旋杆菌能力强，各添加的组分有助于益生菌的定植和提高其活力，能显著改善胃部环境，因此能有效根除幽门螺旋杆菌，在治疗幽门螺旋杆菌所致疾病方面具有较大的应用潜力。
因此，亟需提供一种抗幽门螺旋杆菌效果更好的益生菌产品。
发明内容
针对以上问题，本发明提供了一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌组合物。本发明意外发现白藜芦醇与动物双歧杆菌联用，可进一步提高其抗幽门螺旋杆菌能力，能够显著地清除人体内的幽门螺旋杆菌，减少胃癌的发生。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：
一方面，本发明提供了一种动物双歧杆菌和白藜芦醇联用在制备抗幽门螺旋杆菌产品中的应用。
具体地，所述的动物双歧杆菌为动物双歧杆菌Bb-12。
进一步具体地，所述的动物双歧杆菌Bb-12的活菌数为106-1010CFU/mL。
具体地，所述的白藜芦醇的浓度为5-20mg/L，优选为10-15mg/L。
进一步具体地，所述的产品为保健品、食品或药物。
进一步具体地，所述保健品的类型包括但不限于：药酒、胶囊、片剂、冲剂、茶制品、果汁、水果醋、口服液、软胶囊、颗粒、发酵奶制品、发酵谷制品、发酵豆制品、蜜膏、露剂、散剂、鲜汁、代餐粉等。
所述保健品还包括保健品添加剂。
所述保健品添加剂包括但不限于：香精香料、着色剂、甜味剂、酸味剂、增鲜剂、乳化剂、增稠剂、防腐剂、抗氧剂、营养强化剂等。
进一步具体地，所述的食品的类型包括但不限于：饼干、乳制品、代餐品、肉制品、酱汁、烘焙食品、酸奶、冰淇淋、发酵谷类基产品、果汁、米酒、糖果、糖浆、罐头食品、腌制品、调味品、豆制品、巧克力、馅料、茶制品、膨化食品等。
所述的食品还包括食品添加剂。
所述的食品添加剂包括但不限于防腐剂、酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、胶基糖果中基础剂物质、着色剂、护色剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、防腐剂、稳定剂和凝固剂、甜味剂、增稠剂、食品用天然香料、食品用合成香料等。
进一步具体地，所述的药物的剂型根据给药方式包括但不限于：经胃肠道给药剂型或非经胃肠道给药剂型。
所述的经胃肠道给药剂型包括但不限于散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、油剂。
所述的非经胃肠道给药剂型包括但不限于：注射给药剂型、呼吸道给药剂型、皮肤给药剂型、粘膜给药剂型、腔道给药剂型。
所述的注射给药剂型包括但不限于：静脉注射剂、肌内注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂、腔内注射剂。
所述的呼吸道给药剂型包括但不限于喷雾剂、气雾剂、粉雾剂。
所述的皮肤给药剂型包括但不限于外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂。
所述的粘膜给药剂型包括但不限于滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂、粘贴片及贴膜剂。
所述的腔道给药剂型包括但不限于栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂及滴丸剂。
所述的药物还包括药学上可接受的辅料。
所述的药学上可接受的辅料包括但不限于溶剂、乳化剂、崩解剂、增溶剂、抗氧剂、pH调节剂、渗透压调节剂、抑菌剂、稀释剂、润湿剂、粘合剂、成膜剂等。
另一方面，本发明提供了一种抗幽门螺旋杆菌产品，所述的产品包括动物双歧杆菌和白藜芦醇。
具体地，所述的动物双歧杆菌为动物双歧杆菌Bb-12。
进一步具体地，所述的动物双歧杆菌Bb-12的活菌数为106-1010CFU/mL。
具体地，所述的白藜芦醇的浓度为5-20mg/L，优选为10-15mg/L。
进一步具体地，所述的产品为保健品、食品或药物。
进一步具体地，所述保健品的类型包括但不限于：药酒、胶囊、片剂、冲剂、茶制品、果汁、水果醋、口服液、软胶囊、颗粒、发酵奶制品、发酵谷制品、发酵豆制品、蜜膏、露剂、散剂、鲜汁、代餐粉等。
所述保健品还包括保健品添加剂。
所述保健品添加剂包括但不限于：香精香料、着色剂、甜味剂、酸味剂、增鲜剂、乳化剂、增稠剂、防腐剂、抗氧剂、营养强化剂等。
进一步具体地，所述的食品的类型包括但不限于：饼干、乳制品、代餐品、肉制品、酱汁、烘焙食品、酸奶、冰淇淋、发酵谷类基产品、果汁、米酒、糖果、糖浆、罐头食品、腌制品、调味品、豆制品、巧克力、馅料、茶制品、膨化食品等。
所述的食品还包括食品添加剂。
所述的食品添加剂包括但不限于防腐剂、酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、胶基糖果中基础剂物质、着色剂、护色剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、防腐剂、稳定剂和凝固剂、甜味剂、增稠剂、食品用天然香料、食品用合成香料等。
进一步具体地，所述的药物的剂型根据给药方式包括但不限于：经胃肠道给药剂型或非经胃肠道给药剂型。
所述的经胃肠道给药剂型包括但不限于散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、油剂。
所述的非经胃肠道给药剂型包括但不限于：注射给药剂型、呼吸道给药剂型、皮肤给药剂型、粘膜给药剂型、腔道给药剂型。
所述的注射给药剂型包括但不限于：静脉注射剂、肌内注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂、腔内注射剂。
所述的呼吸道给药剂型包括但不限于喷雾剂、气雾剂、粉雾剂。
所述的皮肤给药剂型包括但不限于外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂。
所述的粘膜给药剂型包括但不限于滴眼剂、滴鼻剂、眼用软膏剂、含漱剂、舌下片剂、粘贴片及贴膜剂。
所述的腔道给药剂型包括但不限于栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂及滴丸剂。
所述的药物还包括药学上可接受的辅料。
所述的药学上可接受的辅料包括但不限于溶剂、乳化剂、崩解剂、增溶剂、抗氧剂、pH调节剂、渗透压调节剂、抑菌剂、稀释剂、润湿剂、粘合剂、成膜剂等。
本发明中所述的药物、食品、保健品的制备方法可采用本领域目前现有的以及未来研发出的相关制备方法。应当明确的是采用何种具体制备方法并不能作为对本申请保护范围的限定。无论采用目前已有的还是未来研发的制备方法，只要包含上述微生物和白藜芦醇，均在本申请要求保护的范围内。
与现有技术相比，本发明的积极和有益效果在于：
本发明发现采用动物双歧杆菌Bb-12和白藜芦醇作为联合用药物，发现其具有协同增效的作用，能够明显地抑制幽门螺旋杆菌的增殖，从而清除人体内的幽门螺旋杆菌，减少胃癌的发生。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实验材料
1.动物双歧杆菌Bb-12，购自科汉森公司。
2.白藜芦醇：购自南京合谷生命生物科技有限公司。
3.胃幽门螺旋杆菌(ATCC43504)：购自北京百欧博伟生物技术有限公司。
4.BALB/c小鼠：SPF级，雄性，6-8周龄，购自凯学生物科技(上海)有限公司。
5.胰酪大豆胨液体培养基(TSB)：购自海博生物。
实施例1.一种抗幽门螺旋杆菌产品
动物双歧杆菌Bb-12活菌数为106CFU/mL，白藜芦醇的浓度为10mg/L。
实施例2.一种抗幽门螺旋杆菌产品
动物双歧杆菌Bb-12活菌数为108CFU/mL，白藜芦醇的浓度为12mg/L。
实施例3.一种抗幽门螺旋杆菌产品
动物双歧杆菌Bb-12活菌数为1010CFU/mL，白藜芦醇的浓度为15mg/L。
对比例1.一种抗幽门螺旋杆菌产品
动物双歧杆菌Bb-12活菌数为108CFU/mL。
对比例2.一种抗幽门螺旋杆菌产品
白藜芦醇的浓度为12mg/L。
实验例1.幽门螺旋杆菌抑菌检测
(1)菌液准备：将幽门螺旋杆菌培养至对数期，取5mL菌液，5000g离心5min，用TSB培养基重悬菌体，并调整菌液浓度为1×106CFU/mL。
(2)取96孔板，每孔加入100μL上述步骤(1)的菌液，95μL TSB培养基，并分别加入5μL上述实施例1-3，对比例1-2的产品，空白对照则为加入5μL DMSO溶液，每个处理分别设置3个重复。将96孔板置于37℃，150rpm震荡培养48h。
(3)以OD600的值反映菌液浓度，抑菌率(％)按照如下公式计算：
(OD600对照菌液-OD600处理菌液)/OD600对照菌液×100％。
检测结果如下表1所示。
表1
由上表可知，采用动物双歧杆菌Bb-12和白藜芦醇联用，能够更好地发挥抗幽门螺旋杆菌效力。
实验例2.
(1)模型制备
选取42只小鼠，给予灌胃混合抗生物溶液(氨苄青霉素10mg/mL、庆大霉素1.2mg/mL、阿奇霉素10mg/mL)，0.3mL/只，1次/d，共3d。灌胃混合抗生素7d后，对小鼠灌胃0.3mL新鲜培养的幽门螺旋杆菌(1×109CFU/mL)，隔日1次，共5次。小鼠灌胃前禁食24h，灌胃后禁食2h。于末次灌胃2周时，随机选取2只小鼠，处死，取胃窦部组织，加入RUT试剂，常温下静置，12h内试剂转为红色即为阳性，反之则为阴性。同时取胃窦-胃体组织，用4％多聚甲醛固定，包埋，切片，进行HE染色，判断感染是否为阳性。RUT和HE染色结果均显示阳性表明造模成功。
(2)分组及给药
将造模成功的小鼠随机分为4个组别，分别为模型组、实施例2组、对比例1组，对比例2组，每组10只。未造模小鼠为空白对照组(10只)。各组给药方式如下：
空白对照组：不采取干预措施。
模型组：灌胃生理盐水，100mg/(kg·d)，连续4周。
实施例2组：灌胃实施例2所述产品，100mg/(kg·d)，连续4周。
对比例1组：灌胃对比例1所述产品，100mg/(kg·d)，连续4周。
对比例2组：灌胃对比例2所述产品，100mg/(kg·d)，连续4周。
(3)幽门螺旋杆菌治疗结果
按照上述给药4周后，处死小鼠，取胃窦部组织，加入RUT试剂染色，常温下静置，12h内试剂转为红色即为阳性，反之则为阴性，阴性即为油门螺旋菌彻底根除。检测结果如下表2所示。
表2
由上表2内容可知，本申请所述的动物双歧杆菌Bb-12和白藜芦醇联用，在体内对于幽门螺旋杆菌也具有显著的抑制作用，可有效清除幽门螺旋杆菌，减少胃癌的发生。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (15)
1.一种动物双歧杆菌和白藜芦醇联用在制备抗幽门螺旋杆菌产品中的应用，其特征在于：所述的动物双歧杆菌为动物双歧杆菌Bb-12。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的动物双歧杆菌Bb-12的活菌数为106-1010CFU/mL。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的白藜芦醇的浓度为5-20mg/L，优选为10-15mg/L。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的产品为保健品、食品或药物。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的保健品的类型包括：药酒、胶囊、片剂、冲剂、茶制品、果汁、水果醋、口服液、软胶囊、颗粒、发酵奶制品、发酵谷制品、发酵豆制品、蜜膏、露剂、散剂、鲜汁或代餐粉。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的保健品还包括保健品添加剂。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的保健品添加剂包括：香精香料、着色剂、甜味剂、酸味剂、增鲜剂、乳化剂、增稠剂、防腐剂、抗氧剂或营养强化剂。
8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的食品的类型包括：饼干、乳制品、代餐品、肉制品、酱汁、烘焙食品、酸奶、冰淇淋、发酵谷类基产品、果汁、米酒、糖果、糖浆、罐头食品、腌制品、调味品、豆制品、巧克力、馅料、茶制品或膨化食品。
9.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的食品还包括食品添加剂。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的食品添加剂包括：防腐剂、酸度调节剂、抗结剂、消泡剂、抗氧化剂、漂白剂、膨松剂、胶基糖果中基础剂物质、着色剂、护色剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、防腐剂、稳定剂、凝固剂、甜味剂、增稠剂、食品用天然香料或食品用合成香料。
11.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的药物的剂型根据给药方式包括：经胃肠道给药剂型或非经胃肠道给药剂型。
12.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的药物还包括药学上可接受的辅料。
13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于：所述的药学上可接受的辅料包括：溶剂、乳化剂、崩解剂、增溶剂、抗氧剂、pH调节剂、渗透压调节剂、抑菌剂、稀释剂、润湿剂、粘合剂或成膜剂。
14.一种抗幽门螺旋杆菌产品，其特征在于：所述的产品包括动物双歧杆菌和白藜芦醇，所述的动物双歧杆菌为动物双歧杆菌Bb-12。
15.根据权利要求14所述的产品，其特征在于：所述的动物双歧杆菌Bb-12的活菌数为106-1010CFU/mL；所述的白藜芦醇的浓度为5-20mg/L，优选为10-15mg/L。
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2022
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