CN115003691A - 用于治疗ccr5阳性转移癌的ccr5结合剂 - Google Patents

Abstract

本公开涉及CCR5结合剂诸如leronlimab在治疗或预防CCR5+转移性癌症中的用途。本文提供了用于通过向受试者施用有效量的CCR5结合剂诸如leronlimab治疗受试者的转移性乳腺癌的方法。

Description

用于治疗CCR5阳性转移癌的CCR5结合剂

关于序列表的声明

与本申请相关联的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并据此通过引用并入本说明书。包含序列表的文本文件的名称为230042_431WO_SEQUENCE_LISTING.txt。该文本文件大小为16Kb，创建于2021年1月7日，并通过EFS网站以电子方式提交。

技术背景

乳腺癌仍然是影响妇女的最常见的实体瘤，并且是妇女癌症相关死亡的第二大原因。转移是乳腺癌患者死亡的主要原因。目前还没有专门针对转移过程的治疗方法。

10％至15％的乳腺癌患者患有三阴性乳腺癌(TNBC)，其被定义为缺乏雌激素受体(ER)、孕酮受体(PgR)和人表皮生长因子受体-2(HER-2)表达，它们分别是内分泌疗法和抗HER2剂的已知靶点。大约70-84％的TNBC是基底样的；相反，约70％的基底样肿瘤是TNBC(Nielson 2004,Prat 2011,Prat 2013)。

与其它乳腺癌亚组相比，TNBC患者是临床上高度相关的患者群，其特征在于年龄较轻，包括高组织学分级、有丝分裂计数升高、p53突变率高、推进的侵袭边缘以及总生存期(OS)和无病生存期(DFS)缩短在内的不利的组织病理学特征[Dawood,2011][Engstrom,2013][Malorni,2012]。由于这些原因，在乳腺癌患者当中，TNBC占转移的百分比高得不成比例，尤其是远处复发和死亡。此外，在年轻女性中，TNBC已被描述为更频繁地发生复发和死亡的高风险，后者在初次诊断后3年达到峰值发病率。与其它乳腺癌亚型相比，复发模式更经常涉及内脏器官以及不太常见地涉及骨骼[Foulkes,2010]。

与激素受体阳性乳腺癌相比，TNBC预后更差，具有侵袭性自然史[Lebert 2018]。在诊断时，TNBC肿瘤更可能是T2或T3，淋巴血管浸润阳性，并且已经转移到淋巴结[Dent2007]。转移性TNBC(mTNBC)在乳腺癌患者的转移，特别是远处复发和死亡中占不成比例的高百分比。目前，没有专门针对转移过程的治疗方法。

化学疗法仍然是TNBC患者的主要治疗选择，标准治疗是手术加辅助疗法，诸如化学疗法和放射疗法。虽然TNBC对诸如紫杉烷类和蒽环类化疗药物的反应优于其它亚型的乳腺癌，但预后仍然很差。作为一种变化，新辅助化学疗法经常用于三阴性乳腺癌[Hudis2011]。这使得保乳手术的比率更高，并且通过评估对化学疗法的反应，提供了关于特定癌症对化学疗法的个体反应性的重要线索。

由于ER、PGR和HER-2等靶受体的缺失，TNBC患者无法从基于激素或曲妥珠单抗的疗法中获益。因此，手术和化学疗法(单独地或联合地)似乎是仅有的可用方式。迄今为止，有多种方法试图改善三阴性乳腺癌患者的护理，包括DNA损伤剂如铂、靶向EGFR和VEGF抑制剂以及PARP抑制剂；然而，没有一种像预期的那样在临床上取得成功，需要开发和探索更有针对性的疗法[Aysola 2013]。因此，转移性TNBC是一种复杂疾病，在临床上需求未得到满足且治疗方案未经证实。

附图简要说明

图1A、图1B、图1C、图1D、图1E和图1F显示了小鼠模型中肺转移的马拉维罗抑制。图1A显示了用马拉维罗治疗的小鼠的小鼠肺转移的时间过程图像。图1B显示了在时间过程期间每周一次进行的光子通量测量。图1C显示了肺部肿瘤的存在。图1D是患有肿瘤的小鼠的百分比的图。图1E显示肿瘤覆盖的载玻片区域的组织学染色。图1F显示了肿瘤区域。

图2显示了对淋巴结阴性乳腺癌的Kaplan-Meier分析，按低CCR5表达(上线)和高CCR5表达(下线)分层。

图3A和图3B显示了在肺癌、乳腺癌和膀胱癌样品中从肿瘤微环境中分离的Treg上的CCR5的表达。图3A显示了FACS分析的直方图，图3B显示了样品中群体的百分比。

图4A、图4B和图4C显示了来自患有三阴性乳腺癌的第一受试者的组织样品中CCR5的免疫组织化学染色。

图5显示了对参与研究的患者D报道的不良事件。

图6显示了在单个患者紧急使用研究中来自患者A的损伤和结节尺寸的测量值(以cm或mm为单位)。在乳腺和肝脏中测量病变和结节；也对转移灶进行定性描述。

图7A和图7B显示了在单个患者紧急使用研究中来自患者A的个体CAML上CCR5(图7A)和PD-L1(图7B)的蛋白质表达水平。通过流式细胞术测量表达，并将其以平均荧光强度(MFI)报告。通过从实验值中减去阴性对照样品的本底信号来计算CCR5 MFI(“CCR5INT”)。也测量了CAML的尺寸并以μM为单位报告。

图8显示了在单个患者紧急使用研究中来自患者A的组织样品中CCR5的免疫组织化学染色。

图9显示小鼠抗CCR5抗体PA14的人源化形式的轻链可变区的氨基酸序列(SEQ IDNO:1)和编码其的核酸序列(SEQ ID NO:2)。CDR带有下划线。

图10显示了根据本发明的小鼠抗CCR5抗体PA14的人源化形式的第一重链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO:3)以及编码其的核酸序列(SEQ ID NO:4)。该重链可变区存在于本文命名为PRO 140#2的抗体中。CDR带有下划线。

图11显示了根据本发明的小鼠人源化抗CCR5抗体PA14的人源化形式的第二重链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO:5)和编码其的核酸序列(SEQ ID NO:6)。该重链可变区存在于本文命名为PRO 140#1的抗体中。CDR带有下划线。

具体实施方式

尽管转移是乳腺癌患者死亡的主要原因，但是目前还没有可用的针对转移过程的治疗方法。因此，需要用于转移性癌症(包括转移性乳腺癌)的更好治疗方法。本文提供了通过向受试者施用有效量的CCR5结合剂诸如leronlimab来治疗受试者的转移性乳腺癌的方法。

临床前和临床数据表明，趋化因子受体及其配体，也称为化学吸引剂或趋化细胞因子，参与了特定器官对癌细胞的嗜性过程[Moser,2001][Neagu,2015][Velasco-Velazquez,2012]。C-C趋化因子受体5型(CCR5)在去分化和转化过程中选择性地在肿瘤细胞的表面上重新表达(velasco-velazquez-2012)。Velasco-Velazquez等人评估了对包含2254个乳腺癌样本的组合微阵列数据库的分析，结果表明CCL5/CCR5在乳腺癌的基底亚型中的表达比在腔亚型中更高(超过58％的样品)[Velasco-Velazquez,2012]。CCR5已被证明足以诱导乳腺癌细胞的体外侵袭性和转移，该过程被CCR5抑制剂阻断[velasco-velazquez-2012]。CCR5抑制剂，诸如马拉韦罗，在乳腺癌肿瘤模型中有效阻断肺转移[见第4节]。

CCR5结合剂，包括leronlimab(PRO 140)，在乳腺癌肿瘤模型中显示出肿瘤体积的显著减小。CCR5表现出潜在作用的另一个癌症标志是DNA修复途径。这种癌症特征减弱了细胞凋亡，并助于化疗耐药性和肿瘤细胞永生。已有研究将C-C趋化因子配体5型(CCL5)的表达改变与乳腺癌患者的疾病进展相关联[Luboshits,1999][Niwa,2001][Zhang,2009]。

CCR5结合剂，诸如拮抗剂马拉韦罗和维立韦罗，显著增强了由DNA损伤性化学治疗剂介导的细胞杀伤。单细胞分析显示，CCR5控制PI3K/Akt、核糖体生物发生和细胞存活信号传导[Jiao-2018]。

CCR5阻断CCL5-CCR5途径在肿瘤免疫控制中的作用最近得到了证明，并为靶向这种致命疾病提供了新的视野[de Oliveira,2017,Del Prete,2017,Lanitis,2017]。活组织检查的CCR5免疫组织化学允许选择性地选择不仅在肿瘤上而且在肿瘤微环境中的肿瘤内免疫细胞上表达CCR5的患者。

利用一种或多种CCR5结合剂诸如leronlimab(PRO 140)的靶向疗法，由于化学治疗剂诸如卡铂在DNA交联链断裂中的协同作用，可能具有增加总响应率的潜力，并减少由leronlimab(PRO 140)结合CCR5而继发的DNA修复。

如本文给出的实施例中所示，来自1b/2期试验中第一位患者的数据显示，患者在外周血中没有可检测的循环肿瘤细胞(CTC)或推定的转移性肿瘤细胞，并且在用leronlimab治疗11周时，癌症相关细胞上CCR5表达额外大幅减少。该患者的数据还表明，仅经过几周治疗后，肿瘤缩小了>20％。另外，来自根据紧急性IND方案患有HER2+转移性4期MBC的患者的数据显示，在用leronlimab治疗期间，在肝、肺和脑中没有新的转移斑的迹象。这些数据证明了患有转移性乳腺癌—一种需要立即采取新的治疗方案的致命疾病的患者中的显著改善。

在更详细地阐述本公开之前，提供在本文中使用的某些术语的定义可能有助于理解本公开。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的相同的含义。在整个本公开中给出了其他的定义。

在本说明书中，除非另有说明，否则任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围都应理解为包括所述范围内的任何整数的值，并且在适当时，包括其分数(诸如整数的十分之一和百分之一)。此外，除非另有说明，否则本文所述的与任何物理特征诸如剂量相关的任何数值范围应理解为包括所述范围内的任何整数。如本文中所用，术语“约”意指指示的范围、数值或结构的±20％，除非另有说明。

应该理解，如本文中所用，术语“一个/种(a)”和“一个/种(an)”是指“一个/种或多个/种”列举的组分。替代方案(例如“或(or)”)的使用应理解为表示替代方案之一、两者或其任意组合。

如本文中所用，术语“包括”、“具有”和“包含”可同义地使用，所述术语及其变型旨在被解释为非限制性的。

术语“基本上由......组成”将权利要求的范围限制于指定的材料或步骤，或者限制于那些不会实质上影响所要求保护的发明的基本特征的材料或步骤。例如，蛋白质结构域、区域或模块(例如，结合结构域、铰链区、接头模块)或蛋白质(其可具有一个或多个结构域、区域或模块)在结构域、区域或模块或蛋白质的氨基酸序列包含延伸、缺失、突变或其任意组合(例如，处于氨基末端或羧基末端或结构域之间的氨基酸)时，“基本上由”特定的氨基酸序列组成，所述延伸、缺失、突变或其组合一起占结构域、区域或模块或蛋白质的长度的至多20％(例如至多15％、10％、8％、6％、5％、4％、3％、2％或1％)，并且基本上不影响所述结构域、区域、模块或蛋白质的活性(例如，结合蛋白质的靶结合亲和力)(即，不使活性降低超过50％，诸如不超过40％、30％、25％、20％、15％、10％、5％或1％)。

本公开的抗体、抗原结合片段或组合物的“治疗有效量”或“有效量”是指足以产生治疗效果的组合物的量；所述治疗效果包括改善的临床结果、减缓肿瘤生长、缩小肿瘤体积、防止肿瘤形成、防止肿瘤转移；减少循环肿瘤细胞、上皮间充质转化细胞和/或癌症相关巨噬细胞样细胞的数量；减轻或缓解与疾病相关的症状；症状发生率降低；生活质量提高；更长的无病状态；疾病程度减轻，稳定疾病状态；延缓疾病进展；缓解；生存；或以统计学上显著的方式延长生存期。当提及单独施用的单个活性成分时，治疗有效量是指单独施用该成分或表达该成分的细胞的效果。当提及组合时，治疗有效量是指活性成分或组合的辅助活性成分与表达活性成分的细胞的组合量，无论是连续、相继还是同时施用，会产生治疗效果。

如本文中所用，“稳定的”或“稳定的疾病”是指既不符合进行性疾病的标准也不符合部分响应的疾病。如本文中所用，“进行性疾病”是指多达5个目标病变(2个病变/器官)的直径总和增加至少20％，以研究中的最小总和和至少5mm的绝对病变增加或新病变的出现作为参考。完全响应是指所有目标病变消失，部分响应(PR)被定义为目标病变总数至少减少30％。稳定的疾病被定义为既不符合进行性疾病的标准也不符合部分响应的标准。

如本文中所用，“趋化因子”意指能刺激白细胞运动的细胞因子。根据两个氨基末端半胱氨酸残基是紧密相邻还是被一个氨基酸分开，可将趋化因子表征为cys-cys或cys-X-cys。其包括但不限于CCL5(也称为RANTES)、MIP-1α、MIP-1β或SDF-1或另一种具有类似活性的趋化因子。

如本文中所用，“趋化因子受体”意指结合趋化因子的七跨膜细胞表面蛋白同源家族的成员。

如本文中所用，“C-C趋化因子受体5”，也称为“CCR5”或“CD195”，是指在淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞、T细胞)、巨噬细胞、树突细胞、嗜酸性粒细胞和小神经胶质细胞上表达的G蛋白偶联受体，其作为C-C趋化因子组的趋化因子受体起作用。CCR5的同源配体包括CCL3、CCL4、CCL3L1和CCL5。在一些实施方案中，CCR5是指人CCR5。在一些实施方案中，CCR5是指具有NCBI参考序列：NP_000570.1(SEQ ID NO:15)中提供的氨基酸序列的蛋白质。

如本文中所用，“抗体”意指包含两条重链和两条轻链并识别抗原的免疫球蛋白分子。免疫球蛋白分子可源自任何公知的种类或同种型，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG亚类也为本领域技术人员所熟知，包括但不限于人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。举例来说，其包括天然存在的和非天然存在的抗体。具体而言，“抗体”包括多克隆和单克隆抗体，及其单价和二价片段。此外，“抗体”包括嵌合抗体、全合成抗体、单链抗体及其片段。任选地，抗体可以用可检测的标记物标记。可检测的标记物包括例如放射性或荧光标记物。抗体可以是人或非人抗体。非人抗体可以通过重组方法人源化，以降低其在人体内的免疫原性。人源化抗体的方法是本领域技术人员已知的。

如本文中所用，“单克隆抗体”，也称为“mAb”，用于描述其一级序列基本相同并表现出相同抗原特异性的抗体分子。单克隆抗体可以通过杂交瘤技术、重组技术、转基因技术或本领域技术人员已知的其它技术产生。

如本文中所用，“重链”意指由一个可变结构域(VH)和三个或四个恒定结构域(CH1、CH2、CH3和CH4)或其片段组成的抗体分子的较大多肽。

如本文中所用，“轻链”意指由一个可变结构域(VL)和一个恒定结构域(CL)或其片段组成的抗体分子的较小多肽。

如本文中所用，抗体的“结合片段”或“抗原结合片段或部分”是指完整抗体的具有或保留与被所述完整抗体识别的抗原靶分子结合的能力的片段或部分，包括抗原结合(Fab)片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、单链抗体片段，包括单链可变片段(scFv)和单结构域抗体(例如sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。该术语包括遗传工程改造的或以其它方式修饰的免疫球蛋白形式，诸如胞内抗体、肽抗体、嵌合抗体、完全人抗体、人源化抗体和异源缀合抗体、多特异性抗体例如双特异性抗体、双抗体、三抗体、四抗体、串联双scFv和串联三-scFv。

如本文中所用，“Fab”意指由一条轻链以及重链的一部分组成的免疫球蛋白的单价抗原结合片段。其可以通过简单的木瓜蛋白酶消化或重组方法获得。

如本文中所用，“F(ab′)2片段”意指由两条轻链和重链的一部分组成的免疫球蛋白的二价抗原结合片段。其可通过简单的胃蛋白酶消化或重组方法获得。

如本文中所用，“CDR”或“互补决定区”意指抗体的可变结构域中高度可变的氨基酸序列。

如本文中所用，“人源化”描述了其中CDR区外的一些、大部分或全部氨基酸被源自人免疫球蛋白分子的相应氨基酸替代的抗体。在抗体的人源化形式的一个实施方案中，CDR区外的一些、大部分或全部氨基酸已被来自人免疫球蛋白分子的氨基酸替代，但其中一个或多个CDR区内的一些、大部分或全部氨基酸未改变。氨基酸的少量添加、缺失、插入、取代或修饰是允许的，只要它们不会消除抗体结合给定抗原的能力。合适的人免疫球蛋白分子包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgM分子。“人源化”抗体将保留与原始抗体相似的抗原特异性，例如，在本公开中是结合CCR5的能力。

本领域技术人员将知道如何制备本发明的人源化抗体。各种出版物(其中一些据此通过引用并入本申请)也描述了如何制备人源化抗体。例如，美国专利第4,816,567号中描述的方法包括嵌合抗体的生产，所述嵌合抗体具有一种抗体的可变区和另一种抗体的恒定区。美国专利第5,225,539号描述了用于产生人源化抗体的另一种方法。该专利描述了重组DNA技术用于产生人源化抗体的用途，在所述人源化抗体中一种免疫球蛋白的可变区的CDR被来自具有不同特异性的免疫球蛋白的CDR替代，使得人源化抗体能够识别所需的靶标，但不会被人受试者的免疫系统以显著的方式识别。具体而言，定点诱变用于将CDR移植到框架上。

将抗体人源化的其它方法描述于美国专利第5,585,089号和第5,693,761号以及WO 90/07861中，它们描述了生产人源化免疫球蛋白的方法。这些人源化抗体具有来自供者免疫球蛋白的一个或多个CDR和可能的额外氨基酸，以及来自受者人免疫球蛋白的框架区。这些专利描述了增加抗体对所需抗原的亲和力的方法。框架中的一些氨基酸被选择为与供者中而不是受者中那些位置处的氨基酸相同。具体而言，这些专利描述了通过将小鼠单克隆抗体的CDR与人免疫球蛋白框架区和恒定区组合来制备与受体结合的人源化抗体。可以选择人构架区以最大化与小鼠序列的同源性。可以使用计算机模型来鉴定框架区中可能与CDR或特定抗原相互作用的氨基酸，然后可以在这些位置使用小鼠氨基酸来产生人源化抗体。

上述美国专利第,585,089号和第5,693,761号以及WO 90/07861也提出了四种可用于设计人源化抗体的可能标准。第一个建议是对于受者，使用与要人源化的供者免疫球蛋白异常同源的特定人免疫球蛋白的框架，或使用许多人抗体的共有框架。第二个建议是，如果人免疫球蛋白的框架中的氨基酸是不寻常的，并且该位置处的供者氨基酸对于人序列是典型的，那么可以选择供者氨基酸而非受者氨基酸。第三个建议是在紧邻人源化免疫球蛋白链中的3个CDR的位置处，可以选择供者氨基酸而非受者氨基酸。第四个建议是在框架位置处使用供者氨基酸残基，所述位置处的氨基酸经预测在抗体的三维模型中CDR的3A内具有侧链原子，并且经预测能够与CDR相互作用。上述方法仅仅是本领域技术人员可采用来制备人源化抗体的一些方法的示例。人源化抗体结合的亲和力和/或特异性可以使用如Wu等，J.Mol.Biol.,284:151(1999)和美国专利第6,165,793号、第6,365,408号和第6,413,774号中描述的定向进化的方法来增加。

人源化抗体的可变区可以与人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区的至少一部分连接。在一个实施方案中，人源化抗体包含轻链和重链恒定区。重链恒定区通常包括CH1、铰链、CH2区、CH3区，有时还包括CH4区。在一个实施方案中，人源化抗体的恒定区是人IgG4同种型的恒定区。本文公开的抗体或结合片段可以是标记的或未标记的。未标记的抗体可与其它标记的抗体(第二抗体)组合使用，所述其它标记的抗体可与人源化抗体，诸如对人免疫球蛋白恒定区特异的抗体反应。或者，可以直接标记抗体。可以使用多种标记物，诸如放射性核素、荧光素(fluors)、酶、酶底物、酶辅因子、酶抑制剂、配体(特别是半抗原)等。许多类型的免疫测定是可用的，并且是本领域技术人员公知用于检测表达CCR5的细胞或检测CCR5对能够表达CCR5的细胞的调节。

在一些实施方案中，本公开提供了具有轻链可变区(VL)的抗CCR5抗体或其抗原结合片段的用途，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO:1具有至少70％同一性、与SEQ ID NO:1具有至少75％同一性、与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性、与SEQ ID NO:1具有至少85％同一性、与SEQ ID NO:1至少具有90％同一性或与SEQ ID NO:1具有至少95％同一性。在一些实施方案中，本公开提供了具有轻链可变抗体区的抗CCR5抗体或其抗原结合片段的用途，所述轻链可变抗体区与SEQ ID NO:1具有70％-100％同一性、与SEQ ID NO:1具有75％-100％同一性、与SEQ ID NO:1具有80％-100％同一性、与SEQ ID NO:1具有85％-100％同一性、与SEQ ID NO:1具有90％-100％同一性或与SEQ ID NO:1具有91％-100％同一性。

在一些实施方案中，本公开提供了具有轻链可变区(VL)的抗CCR5抗体或其抗原结合片段的用途，所述轻链可变区与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有至少70％同一性，与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有至少75％同一性，与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有至少80％同一性，与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有至少85％同一性，与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有至少90％同一性或与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有至少95％的同一性。在一些实施方案中，本公开提供了具有轻链可变抗体区的抗CCR5抗体或其抗原结合片段的用途，所述抗体或其抗原结合片段具有与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有70％-100％同一性，与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有75％-100％同一性，与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有80％-100％同一性，与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有85％-100％同一性，与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有90％-100％同一性或与SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有91％-100％同一性。

在一些实施方案中，本公开提供了具有重链可变区(VH)的抗CCR5抗体或其抗原结合片段的用途，所述重链可变区与SEQ ID NO:3具有至少70％同一性，与SEQ ID NO:3具有至少75％同一性，与SEQ ID NO:3具有至少80％同一性，与SEQ ID NO:3具有至少85％同一性，与SEQ ID NO:3具有至少90％同一性或与SEQ ID NO:3具有至少95％同一性。在一些实施方案中，本公开提供了具有重链抗体可变区的抗CCR5抗体或其抗原结合片段的用途，所述重链抗体可变区与SEQ ID NO:3具有70％-100％同一性、与SEQ ID NO:3具有75％-100％同一性、与SEQ ID NO:3具有80％-100％同一性、与SEQ ID NO:3具有85％-100％同一性、与SEQ ID NO:3具有90％-100％同一性或与SEQ ID NO:3具有91％-100％的同一性。

在一些实施方案中，本公开提供了具有重链可变区(VH)的抗CCR5抗体或其抗原结合片段的用途，所述重链可变区与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有至少70％同一性、与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有至少75％同一性、与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有至少80％同一性、与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有至少85％同一性、与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有至少90％同一性或与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有至少95％同一性。在一些实施方案中，本公开提供了具有重链抗体可变区的抗CCR5抗体或其抗原结合片段的用途，所述重链抗体可变区与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有70％-100％同一性，与SEQID NO:3的氨基酸20-141具有75％-100％同一性，与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有80％-100％同一性，与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有85％-100％同一性，与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有90％-100％同一性或与SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有91％-100％的同一性。

在一些实施方案中，本公开提供了具有重链可变区(VH)的抗CCR5抗体的用途，所述重链可变区与SEQ ID NO:5具有至少70％同一性，与SEQ ID NO:5具有至少75％同一性，与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性、与SEQ ID NO:5具有至少85％同一性、与SEQ ID NO:5具有至少90％同一性、或与SEQ ID NO:5具有至少95％同一性。在一些实施方案中，本公开提供了具有重链可变抗体区的抗CCR5抗体的用途，所述重链可变抗体区与SEQ ID NO:5具有70％-100％同一性，与SEQ ID NO:5具有75％-100％同一性、与SEQ ID NO:5具有80％-100％同一性，与SEQ ID NO:5具有85％-100％同一性，与SEQ ID NO:5具有90％-100％同一性或与SEQ ID NO:5具有91％-100％同一性。

在一些实施方案中，本公开提供了具有重链可变区(VH)的抗CCR5抗体的用途，所述重链可变区与SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有至少70％同一性，与SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有至少75％同一性，与SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有至少80％同一性，与SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有至少85％同一性，与SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有至少90％同一性，或与SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有至少95％同一性。在一些实施方案中，本公开提供了具有重链可变抗体区的抗CCR5抗体的用途，所述重链可变抗体区与SEQID NO:5的氨基酸20-141具有70％-100％同一性，与SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有75％-100％同一性，与SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有80％-100％同一性，与SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有85％-100％同一性，与SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有90％-100％同一性或与SEQ ID NO:5的氨基酸序列20-141具有91％-100％同一性。

在一些实施方案中，本公开提供了包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的抗CCR5抗体或其抗原结合片段的用途，其中所述VH包含含有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的重链CDR1(VH-CDR1)、含有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链CDR2(VH-CDR2)和含有SEQ IDNO:14的氨基酸序列的重链CDR3(VH-CDR3)；并且所述VL包含含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链CDR1(VL-CDR1)、含有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链CDR2(VL-CDR2)和含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR3(VL-CDR3)。在一些此类实施方案中，所述VH包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列或SEQ ID NO:3的氨基酸20-141具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，而所述VL包含与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，条件是VH-CDR(SEQ ID NOS:12-14)和VL-CDR(SEQ ID NOS:9-11)的氨基酸序列没有改变；或者VH包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列或SEQ ID NO:5的氨基酸20-141具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，而VL包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列或SEQ ID NO:1的氨基酸20-131具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，条件是VH-CDR(SEQ ID NOS:12-14和VL-CDR(SEQ ID NOS:9-11)的氨基酸序列没有改变。

在一些实施方案中，本公开提供了抗CCR5抗体或其抗原结合片段的用途，所述抗CCR5抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或SEQ ID NO:3的氨基酸20-141的VH，和包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或SEQ ID NO:1的氨基酸20-131的VL；或(b)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列或SEQ ID NO:5的氨基酸20-141的VH，和包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列或SEQ ID NO:1的氨基酸20-131的VL。

在一些实施方案中，本公开提供了包含重链(HC)和轻链(LC)的抗CCR5抗体的用途，其中所述HC包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，并且所述LC包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开提供了抗CCR5抗体的用途，所述抗体包含HC和LC，所述HC包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的氨基酸序列，所述LC包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的氨基酸序列。

本公开还提供了具有有效大小或分子量的抗体或抗体片段-聚合物缀合物，其相对于未衍生的抗体片段赋予了血清半衰期延长、循环中平均驻留时间(MRT)延长和/或血清清除率降低。抗体片段-聚合物缀合物可以通过用惰性聚合物衍生所需的抗体片段来制备。应当理解，任何提供具有所需表观大小的缀合物或具有选定实际分子量的惰性聚合物都适用于构建本发明的抗体片段-聚合物缀合物。

许多惰性聚合物适用于药物。参见，例如，Davis等人，Biomedical Polymers:Polymeric Materials and Pharmaceuticals for Biomedical Use，第441-451页(1980)。对于本文公开的抗体或抗体片段-聚合物缀合物，使用非蛋白质性质聚合物。非蛋白质性质聚合物通常是亲水性合成聚合物，即原本在自然界中不存在的聚合物。然而，自然界中存在的和通过重组或体外方法产生的聚合物也是有用的，从天然来源分离的聚合物也是有用的。亲水性聚乙烯聚合物，例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，落在本发明的范围内。特别有用的是聚亚烷基醚，诸如聚乙二醇(PEG)；聚氧亚烷基，诸如聚氧乙烯、聚氧丙烯以及聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物(Pluronics)；聚甲基丙烯酸酯；卡波姆；包含糖单体D-甘露糖、D-和L-半乳糖、岩藻糖、果糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖醛酸、唾液酸、D-半乳糖醛酸、D-甘露糖醛酸(例如聚甘露糖醛酸或藻酸)、D-葡糖胺、D-半乳糖胺、D-葡萄糖和神经氨酸的支链或未支化的多糖，包括同多糖和杂多糖，诸如乳糖、支链淀粉、淀粉、羟乙基淀粉、直链淀粉、硫酸葡聚糖、葡聚糖、糊精、糖原，或酸性粘多糖的多糖亚单位，例如透明质酸、糖醇的聚合物诸如聚山梨醇和聚甘露醇、肝素或类肝素(heparon)。交联前的聚合物不必是水溶性的，但优选是水溶性的，但最终的缀合物必须是水溶性的。优选地，缀合物表现出至少约0.01mg/ml，更优选至少约0.1mg/ml，还更优选至少约1mg/ml的水溶解度。在一个实施方案中，如果缀合物打算通过静脉输注或注射途径施用，则所述聚合物在缀合物形式下不应是高免疫原性的，也不应具有与此类途径不相容的粘度。

在一个实施方案中，聚合物仅包含单个反应性基团。这有助于避免蛋白质分子的交联。然而，最大化反应条件以减少交联，或通过凝胶过滤或离子交换色谱纯化反应产物以回收基本上均质的衍生物也在本发明的范围内。在其它实施方案中，为了将多个抗体片段连接到聚合物主链上，聚合物含有两个或更多个反应性基团。

凝胶过滤或离子交换色谱可用于回收呈基本上均质的形式的所需衍生物。

聚合物的分子量可高达约500,000D，优选为至少约20,000D，或至少约30,000D，或至少约40,000D。分子量的选择可取决于待实现的缀合物的有效大小、聚合物的性质(例如，结构，诸如线性或分支的)和衍生化程度，即每个抗体片段的聚合物分子数，以及抗体片段上的一个或多个聚合物附接位点。

聚合物可以通过多官能交联剂共价连接至抗体片段，所述多官能交联剂与聚合物和待连接的抗体片段的一个或多个氨基酸残基反应。然而，通过使衍生的聚合物与抗体片段反应直接交联聚合物，或者反之亦然，也在本发明的范围内。

抗体片段上的共价交联位点包括存在于赖氨酸残基上的N-末端氨基和ε氨基，以及其它氨基、亚氨基、羧基、巯基、羟基或其它亲水基团。所述聚合物可以直接共价键合至抗体片段，而不需要使用多功能(通常是双功能)交联剂，如美国专利第6,458,355号中所述的。

这种聚合物的取代度将根据抗体片段上反应位点的数量、聚合物的分子量、亲水性和其它特性以及所选择的特定抗体片段衍生位点而变化。通常，缀合物包含1至约10个聚合物分子，但是也考虑了附接至本发明抗体片段的更多数量的聚合物分子。通过使用实验基质可以容易地获得所需的衍生量，其中改变时间、温度和其它反应条件以改变取代程度，之后通过尺寸排阻色谱法或本领域已知的其它方法测定缀合物的聚合物取代水平。修饰本发明的抗体片段的功能化PEG聚合物可从hearwater Polymers,Inc.(Huntsville,Ala.)获得。此类商购可得的PEG衍生物包括但不限于氨基-PEG、PEG氨基酸酯、PEG-酰肼、PEG-硫醇、PEG-琥珀酸酯、羧甲基化PEG、PEG-丙酸、PEG氨基酸、PEG琥珀酰亚胺基琥珀酸酯、PEG琥珀酰亚胺基丙酸酯、羧甲基化PEG的琥珀酰亚胺酯、PEG的琥珀酰亚胺碳酸酯、氨基酸PEG的琥珀酰亚胺酯、PEG-氧羰基咪唑、PEG-硝基苯碳酸酯、PEG甲苯磺酸酯、PEG-缩水甘油基醚、PEG-醛、PEG-乙烯基砜、PEG-马来酰亚胺、PEG-正吡啶基-二硫化物、杂官能PEG、PEG乙烯基衍生物、PEG硅烷和PEG磷脂。偶联这些PEG衍生物的反应条件将根据蛋白质、所需的PEG化程度和所用的PEG衍生物而变化。在PEG衍生物的选择中涉及的一些因素包括：所需的附接点(诸如赖氨酸或半胱氨酸R-基团)、衍生物的水解稳定性和反应性、键联的稳定性、毒性和抗原性、分析的适合性等。任何特定衍生物的具体使用说明可从制造商处获得。可以通过凝胶过滤或离子交换HPLC将其缀合物与未反应的原料分离。

如本文中所用，“抗趋化因子受体抗体”意指识别并结合趋化因子受体上的表位的抗体。如本文中所用，“抗CCR5抗体”意指识别CCR5趋化因子受体上的表位并与其结合的单克隆抗体。

如本文中所用，“表位”意指形成用于结合抗体或其它化合物的表面的一个或多个分子的一部分。该表位可以包含连续或不连续的氨基酸、碳水化合物或其它非肽基部分或寡聚物特异性表面。

如本文中所用，“多肽”意指通过肽键连接的两个或更多个氨基酸。

“核酸分子”或“多核苷酸”可以是RNA或DNA的形式，其包括cDNA、基因组DNA和合成DNA。核酸分子可以是双链或单链的，如果是单链的，则可以是编码链或非编码链(反义链)。编码分子可具有与本领域已知的编码序列相同的编码序列，或者可具有不同的编码序列，所述编码序列由于遗传密码的冗余或简并，或者通过剪接，可以编码同一多肽。

抗体或结合片段的“类似物”包括通过保守氨基酸取代而与抗体或结合片段相异的分子。为了将氨基酸取代分类为保守的或非保守的，可将氨基酸如下分类：组I(疏水侧链)：met、ala、val、leu、ile；组II(中性亲水侧链)：cys、ser、thr；组III(酸性侧链)：asp、glu；组IV(碱性侧链)：asn、gln、his、lys、arg；组V(影响链取向的残基)：gly、pro；和组VI(芳族侧链)：trp、tyr、phe。保守取代包括同一类中氨基酸之间的取代。非保守取代构成将这些类别之一的成员替换为另一类别的成员。

由于遗传密码的简并性，多种核酸序列编码本文公开的蛋白质或多肽。例如，同源核酸分子可以包含与参考核苷酸序列具有至少约90％同一性的核苷酸序列。更优选地，所述核苷酸序列与参考核苷酸序列具有至少约95％同一性，至少约97％同一性，至少约98％同一性，或至少约99％同一性。可以使用本领域普通技术人员公知的各种可公开获得的软件工具来计算同源性。示例性工具包括可从国立卫生研究院的国家生物技术信息中心(NCBI)的网站获得的BLAST系统。

鉴定高度同源的核苷酸序列的一种方法是通过核酸杂交。因此，同源核酸分子在高严格条件下杂交。相关序列的鉴定也可以使用聚合酶链式反应(PCR)和其它适于克隆相关核酸序列的扩增技术来实现。优选地，选择PCR引物来扩增目标核酸序列的部分，诸如CDR。

如本文中所用，术语“高严格条件”是指本领域熟悉的参数。核酸杂交参数可在汇编此类方法的参考文献中找到，所述参数文献是例如Molecular Cloning:A LaboratoryManual,J.Sambrook等人，编辑，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,N.Y.,(1989)，或Current Protocols in Molecular Biology,F.M.Ausubel等人，编辑，John Wiley&Sons,Inc.,New York。高严格条件的一个实例是在65℃下于杂交缓冲液(3.5×SSC,0.02％Ficoll,0.02％聚乙烯吡咯烷酮，0.02％牛血清白蛋白，2.5mM NaH2PO4(pII7),0.5％SDS,2mM EDTA)中进行的杂交。SSC为0.15M氯化钠/0.015M柠檬酸钠，pH7；SDS是十二烷基硫酸钠；EDTA是乙二胺四乙酸。杂交后，例如，将核酸被转移至其上的膜在室温下于2×SSC中清洗，然后在高达68℃的温度下于0.1–0.5×SSC/0.1×SDS中进行清洗。

CCR5结合剂

一方面，本公开涉及CCR5结合剂用于治疗和/或预防CCR5阳性转移性乳腺癌的方法的用途。

在一个实施方案中，本公开提供了leronlimab(也称为PRO140)或其结合片段在治疗或预防CCR5阳性转移性乳腺癌中的用途。PRO140是美国专利第7,122,185号和第8,821,877号(其通过引用以其整体并入本文)中描述的人源化单克隆抗体。PRO 140是鼠mAb PA14的人源化形式，其是针对CD4⁺CCR5⁺细胞产生的。Olson等人，Differential Inhibition ofHuman Immunodeficiency Virus Type 1Fusion,gp 120Binding and CC-ChemokineActivity of Monoclonal Antibodies to CCR5,J.Virol.,73:4145-4155.(1999)。PRO140与在细胞表面上表达的CCR5结合，并在体外和HIV-1感染的hu-PBL-SCID小鼠模型中，以不影响CCR5趋化因子受体活性的浓度强效抑制HIV-1的进入和复制。Olson等人，Differential Inhibition of Human Immunodeficiency Virus Type 1Fusion,gp120Binding and CC-Chemokine Activity of Monoclonal Antibodies to CCR5,J.Virol.,73:4145-4155.(1999)；Trkola等人，Potent,Broad-Spectrum Inhibition ofHuman Immunodeficiency Virus Type 1by the CCR5 Monoclonal Antibody PRO 140,J.Virol.,75:579-588(2001)。

编码人源化PRO 140抗体的重链和轻链的核酸已在ATCC保藏。具体而言，分别命名为pVK-HuPRO140、pVg4-HuPRO140(mut B+D+I)和pVg4-HuPRO140 HG2的质粒按照并满足布达佩斯条约的要求于2002年2月22日保藏在ATCC，Manassas,Va.,U.S.A.20108，ATCC保藏号分别为PTA 4097、PTA 4099和PTA 4098。

在一个实施方案中，本文公开的方法包括施用命名为PRO 140的人源化抗体或与PRO 140竞争与CCR5受体的结合的抗体，其中PRO140包含(i)两条轻链，每条轻链包含命名为pVK:HuPRO140-VK(ATCC保藏号PTA-4097)的质粒的表达产物，和(ii)两条重链，每条重链包含命名为pVg4:HuPRO140 HG2-VH(ATCC保藏号PTA-4098)的质粒或命名为pVg4:HuPRO140(mut B+D+I)-VH(ATCC保藏号PTA-4099)的质粒的表达产物。在另一个实施方案中，PRO 140是人源化抗体或人抗体，其结合与抗体PRO 140所结合的表位相同的表位。在另一个实施方案中，单克隆抗体是命名为PRO 140的人源化抗体。

在另外一个实施方案中，本公开涉及命名为CCR5mAb004的人抗体或其结合片段的用途。CCR5mAb004是使用Abgenix

技术产生的完全人mAb，其特异性识别并结合CCR5。参见Roschke等，Characterization of a Panel of Novel HumanMonoclonal Antibodies That Specifically Antagonize CCR5 and Block HIV Entry,44th Annual Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy,Washington,D.C.,Oct.30-Nov.2,2004(2004)；HGS Press Release,Human GenomeSciences Characterizes Panel of Novel Human Monoclonal Antibodies ThatSpecifically Antagonize the CCR5 Receptor and Block HIV-1Entry,Nov.2,2004(2004)；HGS Press Release,Human Genome Sciences Begins Dosing of Patients in aPhase 1Clinical Trial of CCR5 mAb in Patients Infected With HIV-1,Mar.30,2005(2005)。

在一个实施方案中，本公开涉及由命名为PA14的杂交瘤细胞系(ATCC保藏号HB-12610)产生的单克隆抗体PA14、其结合片段或与单克隆抗体PA-14竞争与CCR5受体的结合的抗体在治疗或预防癌症中的用途。

在本文所述方法的一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含该抗体的轻链。在另一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含该抗体的重链。在进一步的实施方案中，所述抗体或其结合片段包含该抗体的Fab部分。在又一另外的实施方案中，所述抗体或其结合片段包含该抗体的F(ab′)₂部分。在另一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含该抗体的Fd部分。在另一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含该抗体的Fv部分。在另外的实施方案中，所述抗体或其结合片段包含该抗体的可变结构域。在又一另一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含该抗体的一个或多个CDR结构域。在另一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含该抗体的六个CDR结构域。

治疗转移性乳腺癌和实体瘤的方法

一方面，本公开提供了治疗或预防转移性乳腺癌的方法，其包括向有此需要的受试者施用CCR5结合剂。

在一个实施方案中，本公开提供了治疗或预防CCR5阳性转移性乳腺癌的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的CCR5结合剂。

在另外一个实施方案中，所述CCR5结合剂与CCL5竞争与CCR5细胞受体的结合。在另外一个实施方案中，所述CCR5结合剂包括单克隆抗体PA14、leronlimab或CCR5mAb004或其结合片段。在另外一个实施方案中，所述竞争性抑制剂竞争与单克隆抗体PA14、leronlimab或CCR5mAb004或其结合片段的结合。

在一个实施方案中，本公开提供了治疗或预防CCR5阳性转移性乳腺癌的方法，其包括向有此需要的受试者施用leronlimab或其结合片段。

一方面，本公开提供了治疗或预防实体瘤的方法，其包括向有此需要的受试者施用CCR5结合剂。

在一个实施方案中，本公开提供了治疗或预防CCR5阳性实体瘤的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的CCR5结合剂。

在又一实施方案中，所述CCR5结合剂与CCL5竞争与CCR5细胞受体的结合。在又一实施方案中，所述CCR5结合剂包括单克隆抗体PA14、leronlimab或CCR5mAb004或其结合片段。在另外一个实施方案中，所述竞争性抑制剂竞争与单克隆抗体PA14、leronlimab或CCR5mAb004或其结合片段的结合。

在一个实施方案中，本公开提供了治疗或预防CCR5阳性实体瘤的方法，其包括向有需要的受试者施用leronlimab或其结合片段。

在任一前述实施方案中，预防转移性乳腺癌或实体瘤可包括向有需要的受试者施用leronlimab或其结合片段作为辅助疗法。如本文中所用，术语“辅助疗法”是指在主要治疗后给予的附加治疗，以降低疾病复发的机会。在一些情况下，在所有可检测到的疾病已经被去除，但由于不可检测到的疾病而存在复发的统计风险的情况下，在手术后进行辅助疗法。

在任一前述实施方案中，预防转移性乳腺癌可包括减缓癌转移或原发性肿瘤的生长或扩散，预防转移性肿瘤的形成，或限制或减少转移性肿瘤或原发性肿瘤的生长或尺寸。

在任一前述实施方案中，预防实体瘤可包括减缓癌转移或原发性肿瘤的生长或扩散，预防转移性肿瘤的形成，或限制或减少转移性肿瘤或原发性肿瘤的生长或尺寸。

在一个实施方案中，将CCR5结合剂诸如leronlimab与药学上可接受的运载体一起施用。药学上可接受的运载体是本领域技术人员熟知的。此类药学上可接受的载体可以包括但不限于水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油诸如橄榄油和可注射的有机酯诸如油酸乙酯。水性运载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液、盐水和缓冲介质。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发油。静脉内媒介物包括液体和营养补充剂、电解质补充剂诸如基于林格氏葡萄糖的补充剂等。也可以存在防腐剂和其它添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。在一个实施方案中，CCR5结合剂以如美国专利第9,956,165号(其内容通过该引用并入本文)中公开的制剂形式提供。

本发明组合物的剂量将根据受试者和所用的特定施用途径而变化。剂量范围为0.1μg/kg至100,000μg/kg。基于该组合物，所述剂量可以连续递送，诸如通过连续泵，或者以周期性间隔输送，例如在一个或多个单独的场合施用。本领域技术人员无需过多实验即可确定特定组合物的多个剂量的所需时间间隔。

在本方法的一个实施方案中，向受试者施用所述抗体或其结合片段多次，每次施用向受试者递送0.01mg/kg体重至50mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送0.05mg/kg体重至25mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另外一个实施方案中，每次施用向受试者递送0.1mg/kg体重至10mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在又一另外的实施方案中，每次施用向受试者递送0.5mg/kg体重至5mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送1mg/kg体重至3mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送约2mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。实施方案包括量为约175mg至约1,400mg的剂量，包括递送一定量的CCR5结合剂(诸如175mg、350mg、525mg、700mg、875mg、1050m g、1,225mg和1,400mg)的剂型。

在一个实施方案中，多次施用所述抗体或其结合片段，并且第一次施用与随后的施用间隔少于一周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔至少一周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔一周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔2-4周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔两周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔四周。在另一个实施方案中，多次施用所述抗体或其结合片段，并且第一次施用与随后的施用间隔至少一个月。

在另一个实施方案中，通过静脉输注向受试者施用所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，通过皮下注射向受试者施用所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，通过肌内注射向受试者施用所述抗体或其结合片段。

在一个实施方案中，上述方法还可包括向受试者施用细胞疗法，例如自体或同种异体免疫疗法；小分子；化学治疗剂；或CCR5/CCL5信号传导的抑制剂。在一个实施方案中，施用CCR5/CCL5信号传导的抑制剂，并且其包括马拉韦罗、维立韦罗、阿拉韦罗、SCH-C、TAK-779、PA14抗体、2D7抗体、RoAb13抗体、RoAb14抗体或45523抗体。

在一个实施方案中，将CCR5细胞受体的竞争性抑制剂(诸如PRO140)与以下的一种或多种其它治疗性分子或治疗方法(诸如细胞疗法，例如自体或同种异体免疫疗法联合施用)组合施用：小分子；化学治疗药物；或CCR5/CCL5信号传导的抑制剂，如马拉韦罗、维立韦罗、阿拉韦罗、SCH-C、TAK-779、PA14抗体、2D7抗体、RoAb13抗体、RoAb14抗体或45523抗体。在一个实施方案中，本文公开的方法包括施用PRO 140与马拉韦罗、维立韦罗、阿拉韦罗、SCH-C、TAK-779、PA14抗体、2D7抗体、RoAb13抗体、RoAb14抗体或45523抗体的组合。

在特定的实施方案中，本文公开的方法包括联合施用leronlimab和卡铂。在特定的实施方案中，转移性乳腺癌包括转移性三阴性乳腺癌，并且该方法包括联合施用leronlimab和卡铂。

在特定的实施方案中，本文公开的方法包括联合施用leronlimab与赫赛汀和培妥珠单抗。在特定的实施方案中，转移性乳腺癌包括HER2+乳腺癌，并且该方法包括联合施用leronlimab与赫赛汀和培妥珠单抗。

在一个实施方案中，联合施用CCR5结合剂(诸如PRO 140)和一种或多种化学治疗剂，所述化学治疗剂是例如：烷化剂，诸如塞替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，诸如苯并多巴、卡巴醌、甲脲多巴和脲多巴；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三乙烯磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺；氮芥类，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯膦酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼氮芥(prednimustine)、曲磷酰胺和尿嘧啶氮芥；亚硝脲类诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，诸如阿克拉霉素、放线菌素、阿曲霉素、氮丝氨酸、博来霉素、卡替霉素(cactinomycin)、刺孢霉素、卡比霉素(carabicin)、卡米诺霉素(caminomycin)、卡嗪霉素(carzinophilin)、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、马塞罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链脲菌素、杀结核素、乌苯美司、净司他丁和佐柔比星；抗代谢物，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤和三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤；和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-阿扎尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺西他滨、氟尿苷和5-FU；雄激素类，诸如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷和睾酮内酯；抗肾上腺素类，诸如氨鲁米特、米托坦和曲洛司坦；叶酸补充剂，如弗罗林酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；去叶黄素(defofamine)；地美可辛；地吖醌；elformithine；醋酸鱼藤酮；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫匹达醇；硝氨丙吖；喷司他丁；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSKTM；雷佐生；西索菲兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2′,2″-三氯三乙胺；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿拉伯糖苷("Ara-C")；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷类，例如紫杉酚(Taxol^TM,Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)和多西紫杉醇(Taxotere^TM,Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，如顺铂和卡铂；长春碱；铂金；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；长春瑞滨；诺维本；诺消灵；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；埃斯波霉素；和卡培他滨；以及任何上述物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

如本文中所用，“小分子”CCR5受体拮抗剂包括，例如，与CCR5受体结合并抑制该受体活性的有机小分子。在一个实施方案中，所述小分子具有小于1,500道尔顿的分子量。在另一个实施方案中，小分子具有小于600道尔顿的分子量。

在一个实施方案中，将CCR5结合剂诸如PRO 140与一种或多种小分子组合施用，所述小分子是诸如SCH-C(Strizki等人，PNAS,98:12718-12723(2001))；SCH-D(SCH 417670；维立韦罗)；UK-427,857(马拉韦罗；1-[(4，6-二甲基-5-嘧啶基)羰基]-4-[4-[2-甲氧基-1(R)-4-(三氟甲基)苯基]乙基-3(S)-甲基-1-哌嗪基-4-甲基哌啶)；GW873140；TAK-652；TAK-779；AMD070；AD101；1,3,4-三取代的吡咯烷(Kim等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,15:2129-2134(2005))；经修饰的4-哌啶基-2-苯基-1-(苯基磺酰基氨基)-丁烷(Shah等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,15:977-982(2005))；阿尼巴明(Anibamine)TFA,蛇孢菌素(Ophiobolin)C或19,20-环氧细胞抑素Q(Jayasuriya等人，J.Nat.Prod.,67:1036-1038(2004))；5-(哌啶-1-基)-3-苯基-戊基砜(Shankaran等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,14:3589-3593(2004))；4-(杂芳基哌啶-1-基-甲基)-吡咯烷-1-基-乙酸拮抗剂(Shankaran等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,14:3419-3424(2004))；含有4-(吡唑基)哌啶侧链的剂(Shu等，Bioorg.Med.Chem.Lett.,14:947-52(2004)；Shen等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,14:935-939(2004)；Shen等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,14:941-945(2004))；3-(吡咯烷-1-基)丙酸类似物(Lynch等人，Org.Lett.,5:2473-2475(2003))；[2-(R)-[N-甲基-N-(1-(R)-3-(S)-((4-(3-苄基-1-乙基-(1H)-吡唑-5-基)哌啶-1-基)甲基)-4-(S)-(3-氟苯基)环戊-1-基)氨基]-3-甲基丁酸(MRK-1)](Kumar等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.,304:1161-1171(2003))；带有4-氨基杂环取代的哌啶侧链的1,3,4-三取代的吡咯烷(Willoughby等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,13:427-431(2003)；Lynch等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,12:3001-3004(2003)；Lynch等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,13:119-123(2003)；Hale等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,12:2997-3000(2002))；双环异噁唑烷(Lynch等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,12:677-679(2002))；CCR5拮抗剂的组合合成(Willoughby等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,11:3137-41(2001))；含杂环化合物(Kim等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,11:3103-3106(2001))；含有乙内酰脲的拮抗剂(Kim等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,11:3099-3102(2001))；1,3,4三取代的吡咯烷(Hale等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,11:2741-2745(2001))；1-[N-(甲基)-N-(苯基磺酰基)氨基]-2-(苯基)-4-(4-(N-(烷基)-N-(苄基氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丁烷(Finke等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,11:2475-2479(2001))；来自植物Lippia alva的化合物(Hedge等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,12:5339-5342(2004))；基于哌嗪的CCR5拮抗剂(Tagat等人，J.Med.Chem.,47:2405-2408(2004))；基于肟基-哌啶子基-哌啶的CCR5拮抗剂(Palani等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,13:709-712(2003))；SCH 351125的旋转异构体(Palani等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,13:705-708(2003))；基于哌嗪的对称杂芳基甲酰胺(McCombie等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,13:567-571(2003))；肟基-哌啶子基-哌啶酰胺(Palani等人，J.Med.Chem.,45:3143-3160(2002))；Sch-351125和Sch-350634(Este,Curr.Opin.Investig.Drugs.,3:379-383(2002))；1-[(2,4-二甲基-3-吡啶基)羰基]-4-甲基-4-[3(S)-甲基-4-[1(S)-4-(三氟甲基)苯基]乙基]-1-哌嗪基]-哌啶N1-氧化物(Sch-350634)(Tagat等，J.Med.Chem.,44:3343-3346(2001))；4-[(Z)-(4-溴苯基)-(乙氧基亚氨基)甲基]-1′-[(2,4-二甲基-3-吡啶基)羰基]-4′-甲基-1,4′-二哌啶N-氧化物(SCH351125)(Palani等，J.Med.Chem.,44:3339-3342(2001))；2(S)-甲基哌嗪类(Tagat等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,11:2143-2146(2001))；哌啶-4-甲酰胺衍生物(Imamura等人，Bioorg.Med.Chem.,13:397-416,2005)；含有亚砜部分的1-苯并氮杂衍生物(Seto等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.,13:363-386(2005))；含有吡啶N-氧化物部分的苯胺衍生物(Seto等人，Chem.Pharm.Bull.(Tokyo),52:818-829(2004))；含有叔胺部分的1-苯并噻吩1,1-二氧化物和1-苯并氮杂衍生物(Seto等人，Chem.Pharm.Bull.(Tokyo),52:577-590(2004))；N-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙基]-N,N′-二苯基脲(Imamura等人，Bioorg.Med.Chem.,12:2295-2306(2004))；5-氧代吡咯烷-3-甲酰胺衍生物(Imamura等人，Chem.Pharm.Bull.(Tokyo),52:63-73(2004)；具有季铵部分的苯胺衍生物(Shiraishi等人，J.Med.Chem.,43:2049-2063(2000))；AK602/ONO4128/GW873140(Nakata等人，J.Virol.,79:2087-2096(2005))；螺二酮哌嗪衍生物(Maeda等人，J.Biol.Chem.,276:35194-35200(2001)；Maeda等人，J.Virol.,78:8654-8662(2004))；和选择性CCR5拮抗剂(Thoma等，J.Med.Chem.,47:1939-1955(2004))。

在一个实施方案中，所述CCR5结合剂如PRO 140与SCH-C、SCH-D(SCH 417670或维立韦罗)、UK-427，857(马拉韦罗)、GW873140、TAK-652、TAK-779AMD070或AD101中的一种或多种组合施用。参见美国专利第8,821,877号。

在一个实施方案中，CCR5细胞受体的竞争性结合剂，诸如PRO140，当与一种或多种其它治疗性分子或治疗方法，诸如细胞疗法、小分子、化学治疗剂或CCR5/CCL5信号传导抑制剂组合施用时，表现出协同效应。两种或更多种药剂之间的“协同作用”是指药剂的组合效果大于它们的累加效应。药剂之间的协同效应、累加效应或拮抗效应可以通过使用组合指数(CI)法分析剂量反应曲线来定量。CI值大于1表示拮抗效应；CI值等于1表示累加效应；CI值小于1表示协同效应。在一个实施方案中，协同相互作用的CI值小于0.9。在另一个实施方案中，CI值小于0.8。在另一个实施方案中，CI值小于0.7。

在几个实施方案中，预防癌症包括减少循环肿瘤细胞、上皮间充质转化细胞和/或癌症相关巨噬细胞样细胞的数量。如本文中所用，“循环肿瘤细胞”(CTC)是指已经从肿瘤分离并开始在脉管系统和淋巴管中循环的癌细胞；CTC作为转移性癌症的前体。如本文中所用，“上皮-间充质转化细胞”(EMT细胞)，是指已经转分化为能动的间充质细胞的上皮细胞。上皮细胞在EMT转分化过程中经历的事件可包括但不限于上皮细胞-细胞连接的溶解；极性的改变；细胞骨架结构的重组和细胞形状的改变；上皮基因表达特征的下调和间充质表型定义基因的激活；细胞突起和运动性增加；增强的侵入能力；对衰老和凋亡的获得性抗性。最后，如本文中所用，“癌症相关巨噬细胞样细胞”(CAML)是指高度分化的巨大循环(巨噬细胞样)细胞，其显示CD14+表达和吞噬物质的空泡；从癌症患者的外周血中分离CAML，所述癌症包括但不限于乳腺癌、前列腺癌或胰腺癌。

序列表

>SEQ ID NO:1VL蛋白质序列；氨基酸1-19处的信号肽；CDRs下划线MKLPVRLLVLMFWIPASSSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQRLLSSYGHTYLHWYLQKPGQSPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHVPLTFGQGTKVEIK

>SEQ ID NO:2VL核苷酸序列

>SEQ ID NO:3PRO#2VH蛋白质序列；氨基酸1-19处的信号肽；CDRs下划线

MEWSGVFIFLLSVTAGVHSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGYTFSNYWIGWVRQAPGKGLEWIGD IYPGGNYIRNNEKFKDKTTLSADTSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCGSSFGSNYVFAWFTYWGQGTLVTVSS

>SEQ ID NO:4PRO#2VH核苷酸序列

>SEQ ID NO:5PRO#1VH蛋白质序列；氨基酸1-19处的信号肽；CDRs下划线

MEWSGVFIFLLSVTAGVHSQVQLVQSGPDVKKPGTSMKMSCKTSGYTFSNYWIGWVRQAPGQGLEWIGD IYPGGNYIRNNEKFKDKTTLTADTSTSTAYMQLGSLRSEDTAVYYCGSSFGSNYVFAWFTYWGQGTLVTVSS

>SEQ ID NO:6PRO#1VH核苷酸序列

>SEQ ID NO:7重链蛋白质序列

EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGYTFS NYWIGWVRQA PGKGLEWIGDIYPGGNYIRNNEKFKDKTTL SADTSKNTAY LQMNSLKTED TAVYYCGSSF GSNYVFAWFTYWGQGTLVTVSSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNSTYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQEGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSLGK

>SEQ ID NO:8轻链蛋白质序列

DIVMTQSPLS LPVTPGEPAS ISCRSSQRLL SSYGHTYLHW YLQKPGQSPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCSQSTHVP LTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC

>SEQ ID NO:9LCDR1氨基酸序列

RSSQRLLSSYGHTYLH

>SEQ ID NO:10LCDR2氨基酸序列

EVSNRFS

>SEQ ID NO:11LCDR3氨基酸序列

SQSTHVPLT

>SEQ ID NO:12HCDR1氨基酸序列

NYWIG

>SEQ ID NO:13HCDR2氨基酸序列

DIYPGGNYIRNNEKFKD

>SEQ ID NO:14HCDR3氨基酸序列

SFGSNYVFAWFTY

>SEQ ID NO:15人CCR5,NCBI参考序列:NP_000570.1

MDYQVSSPIYDINYYTSEPCQKINVKQIAARLLPPLYSLVFIFGFVGNMLVILILINCKRLKSMTDIYLLNLAISDLFFLLTVPFWAHYAAAQWDFGNTMCQLLTGLYFIGFFSGIFFIILLTIDRYLAVVHAVFALKARTVTFGVVTSVITWVVAVFASLPGIIFTRSQKEGLHYTCSSHFPYSQYQFWKNFQTLKIVILGLVLPLLVMVICYSGILKTLLRCRNEKKRHRAVRLIFTIMIVYFLFWAPYNIVLLLNTFQEFFGLNNCSSSNRLDQAMQVTETLGMTHCCINPIIYAFVGEKFRNYLLVFFQKHIAKRFCKCCSIFQQEAPERASSVYTRSTGEQEISVGL

实施例

实施例1

Leronlimab抑制小鼠肿瘤生长

在小鼠中，乳腺肿瘤中只有一小部分细胞亚群能够引发肿瘤形成。这些肿瘤起始细胞与转移倾向的增加相关。已显示CCR5+乳腺癌上皮细胞在小鼠体内形成乳腺球并以>60倍的效率引发肿瘤[Jiao 2018]。用编码CCR5的表达载体稳定转染的SUM-159乳腺癌细胞进行的实验表明，乳腺癌细胞中的内源性CCR5和CCR5的过表达均足以在体内诱导基底乳腺癌细胞肿瘤形成[Jiao 2018]。

CCR5已被证明足以诱导乳腺癌细胞的体外侵袭和转移，这被CCR5抑制剂阻断[Velasco-Velazquez]。CCR5抑制剂马拉韦罗被证明阻断乳腺癌细胞归巢至肺(图1)。这些小鼠模型中使用的CCR5抑制剂的剂量与用于患者进行HIV治疗的剂量相同。临床前研究还表明，在转化过程中，具有Ha-Ras、c-Myc、ErbB2(NeuT)或c-Src的永生人乳腺癌细胞的致癌转化诱导CCR5的mRNA表达和蛋白质丰度[Velasco-Velazquez]。

为了确定leronlimab(PRO 140)的生长抑制作用，并比较其与FDA批准的CCR5拮抗剂马拉韦罗和维立韦罗的作用，在雌性NCI无胸腺NCr-nu/nu小鼠中进行了临床前研究。每只小鼠通过尾静脉接受100万(10⁶)个表达Luc2-eGFP的MDA-MB-231细胞(称为MDA-MB-231.pFLUG)。通过口服管饲法用马拉维罗(8mg/kg，每天两次)、维立韦罗(16mg/kg，每天两次)或通过腹膜内注射leronlimab(PRO 140)(2mg/小鼠，每周两次)对小鼠进行了治疗。注射前一天开始治疗。

给对照组和治疗组腹膜内注射100μl D-萤光素(30mg/mL)后，进行体内生物发光成像。图1A、图1B、图1C、图1D、图1E和图1F显示了小鼠模型中对肺转移的马拉维罗抑制。图1A显示了用马拉维罗治疗的小鼠的小鼠肺转移的时间过程图像。图1B显示了在时间过程期间每周一次进行的光子通量测量。图1C显示了肺部肿瘤的存在。图1D是患有肿瘤的小鼠的百分比的图。图1E显示肿瘤覆盖的载玻片区域的组织学染色。图1F显示了肿瘤区域。

实施例2

CCR5在患者样品中的表达

如图2所示，评估了人乳腺癌中CCR5表达对比患者结果的相关性。在来自537名淋巴结阴性乳腺癌患者的样品中进行CCR5的免疫组织化学染色，并对其样品显示CCR5低表达的患者和其样品显示CCR5高表达的患者的存活率作图。如图2所示，CCR5的高表达与较差的存活率相关。

在同行评议的医学文献中的一些出版物中已经定义了CCR5阻断CCL5-CCR5途径在肿瘤免疫控制中的作用[

2003]。CCR5在肿瘤细胞(尤其是在原发性肿瘤中逃避局部免疫控制的肿瘤细胞)上的表达导致CCR5阳性循环肿瘤细胞，其具有通过CCL5-CCR5轴再次扩散和迁移到远处的肿瘤部位的能力。先前的研究和当前的数据还确定了来自CCR5阻断的其它免疫介导的抗肿瘤效应[Lanitis,2017,Halama,2016]。以前发表的报告表明，CCR5由Treg细胞表达，所述Treg细胞由于淋巴细胞表达CCL5而迁移到肿瘤中[de Oliveira,2017,Del Prete,2017,Lanitis,2017]。Treg负责最小化或消除CD8 T细胞的抗肿瘤作用，所述CD8 T细胞通过新型免疫肿瘤药物阻断PD-L1/PD-1而恢复[de Oliveira，2017]。另外，阻断肿瘤相关巨噬细胞(TAMS)(肿瘤微环境中抑制T细胞介导的抗肿瘤免疫反应的主要细胞之一)上的CCR5，通过重新编程TAM而恢复了抗肿瘤活性[Lanitis,2017,Walens,2019]。对用IVD IncellPREP装置产生的单细胞悬浮液进行的新型24色流式细胞术测定的数据证实了来自肺癌、乳腺癌和膀胱癌样品中肿瘤微环境的Treg上CCR5的表达(图3A和图3B)。这种技术或已经获得的活组织检查的CCR5免疫组织化学(IHC)允许选择在肿瘤微环境中携带表达CCR5的肿瘤细胞以及表达CCR5的肿瘤内免疫细胞的患者。图4A、图4B和图4C显示了来自患有三阴性乳腺癌的第一受试者的三阴性乳腺癌活检物中CCR5的免疫组织化学染色。

实施例3

CCR5+转移性TNBC的Leronlimab和卡铂治疗

leronlimab(PRO 140)与卡铂的组合治疗CCR5+转移性三阴性乳腺癌(mTNBC)患者的Ib/II期研究正在进行中。1b期的主要目的是确定PRO 140在与卡铂组合以确定该组合的II期推荐剂量时在TNBC患者中的安全性、耐受性和最大耐受剂量(MTD)。2b期的主要目的是评估PRO 140与卡铂的组合对先前在新辅助和辅助环境下接受过蒽环类和紫杉烷类治疗的CCR5+TNBC患者的无进展生存期(PFS)的影响。关于研究计划的更多详情，请参考SN001(IND141723)中的第5.3.5节。

参与该研究的第一个受试者，患者D，是患有IV期转移性三阴性乳腺癌的42岁女性。受试者有左乳腺癌伴右肺转移的病史。

受试者被诊断为IIA 3级浸润性导管癌(ER neg/PR neg/HER-2-NEU阴性),并且先前接受了剂量密集的阿霉素(多柔比星)以及环磷酰胺(ddAC)和紫杉醇。受试者在诊断后三周接受了左侧乳腺肿块切除术和前哨淋巴结活检。

受试者在诊断后十周签署了方案CD07_TNBC的预筛查知情同意书。

在右上肺中识别出25mm大小的基线目标病变。病变被描述为在右脐中基于胸膜的、主要裂隙、软组织密度结节。

在鉴定和测量基线病变后大约六周，受试者接受了350mg leronlimab(PRO 140)的首次治疗(1)。每个治疗周期由21天组成。在每个周期(C)(每21天)的第1天，每周在第1天、第8天和第15天皮下施用Leronlimab(PRO 140)与卡铂AUC 5的组合。除非另有说明，否则该治疗方案适用于所有参加mTNBC研究的受试者。

表1：Leronlimab(PRO 140)和卡铂剂量

*待定剂量信息

在基线时收集用于循环肿瘤细胞(CTC)和癌症相关巨噬细胞样细胞(CAML)评估的血液样品，随后在每个治疗周期的第1天收集，以评估治疗后CTC和CAML的变化，并进行CCR5表达与PD-L1表达之间的相关分析。

Creatv Microtech开发了基于大小的技术和检测方法(LifeTrac Assay)，其使得能够收集和表征血液中的所有癌症相关细胞，即CTC、上皮间充质转化细胞(EMT)和CAML[Adams Cytometry 2015,Adams RSC 2014]。CellSieve^TM过滤平台用于捕获CAML和CTC。

CCR5表达和PD-L1表达的结果总结如下：

表2:患者D–表达CCR5和表达PD-L1的CTC、EMT和CAML结果

总的CTC、EMT和CAML的结果的概述如下：

表3:患者D–CTC、EMT和CAML结果

在每两个周期(每6周)结束时进行扫描。受试者在6周后进行第1次扫描，12周后进行第2次扫描，18周后进行第3次扫描(表4)。在第3次扫描时，没有发现新的肺结节。在肺结节右上叶发现的目标病变的尺寸测量为2.1x1.6 cm，之前为2.4x1.9(2019年10月28日)，尺寸减少了20％。

表4：患者D-肿瘤成像

在受试者完成第6周期第1天的随访时，受试者已经按照方案接受了每周一次的leronlimab(PRO 140)注射和每三周一次的卡铂输注。在第6周期第1天随访时，未报告严重不良事件。所报道的不良事件如图5所示。

在对参与mTNBC研究的第一个受试者进行16周的leronlimab治疗后，显示在外周血中未检测到循环肿瘤细胞(CTC)或推定的转移性肿瘤细胞。此外，在用leronlimab治疗大约11周后，患者在癌症相关细胞上的CCR5表达大幅降低。另外，在肺结节的右上叶发现的目标病变显示出大于20％的尺寸减小(如通过肿瘤体积所测量的)。这一结果是疾病结果的显著改善，并证明了leronlimab是治疗转移性三阴性乳腺癌的有前途的辅助疗法。

第二个受试者，患有mTNBC的患者C，参加了mTNBC研究。从参与公司的mTNBC 1b/2期试验中的第二名患者收集的数据显示，在用之前描述的leronlimab与卡铂组合的治疗方案治疗两周之后，未检测到CTC水平。这位患者在仅仅两周的治疗后就显示出70％的EMT细胞减少。mTNBC试验中第二名患者的初始数据表明，在用leronlimab治疗两周之后，CTC降至零。另外，第二名患者的初始CAML计数为45，在至少两周的治疗后，CAML计数下降至30。

第三名受试者参与了mTNBC研究。在治疗开始时和用先前描述的治疗方案开始治疗后两周测量CTC+EMT计数。结果表明，在治疗的前两周，第三名患者的CTC+EMT总计数减少了75％。

实施例4

转移性HER2+乳腺癌的Leronlimab治疗

该受试者，患者A，是一名78岁的女性，被诊断为IV期转移性乳腺癌。该受试者之前接受了泰索帝/赫赛汀/帕妥珠单抗作为转移性HER2阳性乳腺癌的一线疗法。她对其全身性疾病有部分响应，但随后出现弥漫性脑转移(全身性疾病稳定)。她完成了全脑放射疗法，并继续服用赫赛汀和帕妥珠单抗。她患有神经病和来自化学疗法的残留副作用，由于担心副作用，限制了目前二线方案的使用。要求使用Leronlimab(PRO 140)是为了控制疾病并延长无化疗间隔时间，因为该患者可能无法耐受化疗副作用。

受试者每周接受700mg leronlimab(PRO 140)的注射(表5)。

表5：Leronlimab(PRO 140)施用方案

单个患者紧急使用IND主题

初始治疗后约4周，进行CT扫描，结果表明，与开始治疗前约6周获得的CT扫描结果相比，在用leronlimab治疗期间，肝、肺和脑中没有新的转移性斑点的迹象。

初始治疗后大约两个月，在用leronlimab治疗后，在脑中没有检测到新的转移，leronlimab是受试者接受以治疗脑转移的唯一治疗。在参与试验之前，该患者大脑中有18个可鉴定的肿瘤斑点。在开始每周700mg剂量的leronlimab后大约两个月，如通过MRI所检测的，只有三个损伤是可鉴定的。此外，所述治疗导致在治疗开始时在受试者脑中鉴定的最大脑肿瘤的肿瘤体积减少56％。

治疗开始后大约10周，测量受试者的CTC和EMT计数，鉴定到0个CTC和0个EMT。在患者A的乳房和肝脏中测量了病变和结节的尺寸，并且还定性描述了转移(图6)。通过流式细胞术测量来自患者A的个体CAML上的CCR5(图7A)和PD-L1(图7B)的蛋白质表达水平，并以平均荧光强度(MFI)的形式报告。通过从实验值中减去阴性对照样品的本底信号来计算CCR5MFI(“CCR5 INT”)。也测量了CAML的尺寸并以μM为单位报告。受试者的肿瘤活检显示肿瘤浸润性白细胞上CCR5的高表达(图8)。

实施例5

用于治疗实体瘤的Leronlimab

美国食品和药品管理局(FDA)正在进行一项篮式试验的2期方案，作为治疗癌症的研究性新药(IND)申请。至少22种实体瘤癌症类型在该方案下接受治疗，所述癌症包括但不限于黑色素瘤、脑癌(胶质母细胞瘤)、喉癌、肺癌、胃癌、结肠癌、结肠癌瘤、乳腺癌、睾丸癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、膀胱癌、食道癌、阑尾癌和前列腺癌，以及其它适应症。篮式试验是2期研究，有30名CCR5+局部晚期或转移性实体瘤患者。将以每周350mg的剂量皮下施用Leronlimab。参与本研究的受试者将被允许接受由治疗医师决定的标准护理化疗并继续该治疗。

到目前为止，已经有几名患者参与了2期篮式试验。在参与研究之前，患者被诊断为患有乳腺癌、结肠癌、食道癌、阑尾癌、卵巢癌或前列腺癌。

本说明书中提及的和/或申请数据表中列出的所有美国专利、美国专利申请公布、美国专利申请、外国专利、外国专利申请，包括2020年1月13日提交的美国临时专利申请第62/960,613号；2020年1月31日提交的美国临时专利申请第62/968,954号和2020年2月14日提交的美国临时专利申请第62/977,023号通过引用以其整体并入本文。如果需要，可以修改实施方案的各方面以采用各种专利和申请的概念来提供另外的实施方案。可组合上述各种实施方案以提供进一步的实施方案。

虽然已经示出和描述了本发明的具体实施方案，但是容易理解的是，可以组合上述各种实施方案以提供进一步的实施方案，并且在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以在其中进行各种改变。根据以上详细描述，可以对实施方案进行这些和其它改变。

通常，在下面的权利要求中，所使用的术语不应该被解释为将权利要求限制于说明书和权利要求中公开的具体实施方案，而应被解释为包括所有可能的实施方案以及这些权利要求所授权的等同物的全部范围。因此，权利要求不受本公开的限制。

参考文献

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序列表

<110> CytoDyn Inc.

<120> 用于治疗CCR5阳性转移癌的CCR5结合剂

<130> 230042.431WO

<140> WO

<141> 2021-01-13

<150> US 62/960,613

<151> 2020-01-13

<150> US 62/968,954

<151> 2020-01-31

<150> US 62/977,023

<151> 2020-02-14

<160> 15

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 131

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体 PRO140 VL

<220>

<221> 信号肽

<222> 1...19

<223> 氨基酸1-19处的信号肽

<400> 1

Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala

1 5 10 15

Ser Ser Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val

20 25 30

Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Arg Leu

35 40 45

Leu Ser Ser Tyr Gly His Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro

50 55 60

Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser

65 70 75 80

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

85 90 95

Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys

100 105 110

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val

115 120 125

Glu Ile Lys

130

<210> 2

<211> 429

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体PRO140 VL

<400> 2

tctagaccac catgaagttg cctgttaggc tgttggtgct gatgttctgg attcctgctt 60

ccagcagtga tattgtgatg acccaatctc cactctccct gcctgtcact cctggagagc 120

cagcctccat ctcttgcaga tctagtcagc gccttctgag cagttatgga catacctatt 180

tacattggta cctacagaag ccaggccagt ctccacagct cctgatctac gaagtttcca 240

accgattttc tggggtccca gacaggttca gtggcagtgg gtcagggaca gatttcacac 300

ttaagatcag tagagtggag gctgaggatg tgggagttta ttactgctct caaagtacac 360

atgttcctct cacgttcgga caggggacca aggtggaaat aaaacgtaag tagtcttctc 420

aactctaga 429

<210> 3

<211> 141

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体PRO140 #2 VH

<220>

<221> 信号肽

<222> 1...19

<223> 氨基酸1-19处的信号肽

<400> 3

Met Glu Trp Ser Gly Val Phe Ile Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Ser Asn Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asn Tyr Ile Arg Asn Asn

65 70 75 80

Glu Lys Phe Lys Asp Lys Thr Thr Leu Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn

85 90 95

Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Gly Ser Ser Phe Gly Ser Asn Tyr Val Phe Ala Trp Phe

115 120 125

Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 4

<211> 457

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体PRO#2 VH

<400> 4

acgcgtccac catggaatgg agcggagtct ttatctttct cctgtcagta actgcaggtg 60

tccactccga ggtgcagctg gtggagtctg gtggaggctt ggtaaagcct ggaggttccc 120

ttagactctc ctgtgcagcc tctggttaca ctttcagtaa ctattggatc ggatgggtcc 180

gccaggctcc aggcaaaggg ctggagtgga ttggcgatat ctaccctgga gggaactaca 240

tcaggaacaa tgagaagttc aaggacaaga ccaccctgtc agcagatact tccaagaaca 300

cagcctatct gcaaatgaac agcctgaaaa ccgaggacac agccgtgtat tactgtggaa 360

gcagcttcgg tagtaactac gtgttcgcct ggtttactta ctggggccaa gggactctgg 420

tcacagtctc ctcaggtgag tccttaaaac ctctaga 457

<210> 5

<211> 141

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体PRO140#1 VH

<220>

<221> 信号肽

<222> 1...19

<223> 氨基酸1-19处的信号肽

<400> 5

Met Glu Trp Ser Gly Val Phe Ile Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Thr Ser Met Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Ser Asn Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Ile Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asn Tyr Ile Arg Asn Asn

65 70 75 80

Glu Lys Phe Lys Asp Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Gly Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Gly Ser Ser Phe Gly Ser Asn Tyr Val Phe Ala Trp Phe

115 120 125

Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

130 135 140

<210> 6

<211> 457

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体PRO#1 VH

<400> 6

tctagaccac catggaatgg agcggggtct ttatctttct cctgtcagta actgcaggtg 60

tccactccca ggtccaactg gtgcagtctg gacctgatgt gaaaaagcct gggacttcaa 120

tgaagatgtc ctgcaagacg tctggataca ccttcagtaa ctattggatc ggatgggtta 180

ggcaggcgcc tggacaaggc cttgagtgga ttggagatat ttaccctgga gggaactata 240

tcaggaacaa tgagaagttc aaggacaaga ccacactgac ggcagacaca tcgaccagca 300

cggcctacat gcaacttggc agcctgagat ctgaagacac tgccgtctat tactgtggaa 360

gcagcttcgg tagtaactac gtgttcgcct ggtttactta ctggggccaa gggactctgg 420

tcacagtctc ctcaggtgag tccttaaaac ctctaga 457

<210> 7

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体重链

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asn Tyr Ile Arg Asn Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Thr Thr Leu Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Ser Ser Phe Gly Ser Asn Tyr Val Phe Ala Trp Phe Thr Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr

210 215 220

Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

Lys

<210> 8

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体轻链

<400> 8

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Arg Leu Leu Ser Ser

20 25 30

Tyr Gly His Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 9

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体LCDR1

<400> 9

Arg Ser Ser Gln Arg Leu Leu Ser Ser Tyr Gly His Thr Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 10

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体LCDR2

<400> 10

Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体LCDR3

<400> 11

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Leu Thr

1 5

<210> 12

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体HCDR1

<400> 12

Asn Tyr Trp Ile Gly

1 5

<210> 13

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体HCDR2

<400> 13

Asp Ile Tyr Pro Gly Gly Asn Tyr Ile Arg Asn Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 14

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人源化抗体HCDR3

<400> 14

Ser Phe Gly Ser Asn Tyr Val Phe Ala Trp Phe Thr Tyr

1 5 10

<210> 15

<211> 352

<212> PRT

<213> 人

<220>

<223> CCR5 NCBI参考序列: NP_000570.1

<400> 15

Met Asp Tyr Gln Val Ser Ser Pro Ile Tyr Asp Ile Asn Tyr Tyr Thr

1 5 10 15

Ser Glu Pro Cys Gln Lys Ile Asn Val Lys Gln Ile Ala Ala Arg Leu

20 25 30

Leu Pro Pro Leu Tyr Ser Leu Val Phe Ile Phe Gly Phe Val Gly Asn

35 40 45

Met Leu Val Ile Leu Ile Leu Ile Asn Cys Lys Arg Leu Lys Ser Met

50 55 60

Thr Asp Ile Tyr Leu Leu Asn Leu Ala Ile Ser Asp Leu Phe Phe Leu

65 70 75 80

Leu Thr Val Pro Phe Trp Ala His Tyr Ala Ala Ala Gln Trp Asp Phe

85 90 95

Gly Asn Thr Met Cys Gln Leu Leu Thr Gly Leu Tyr Phe Ile Gly Phe

100 105 110

Phe Ser Gly Ile Phe Phe Ile Ile Leu Leu Thr Ile Asp Arg Tyr Leu

115 120 125

Ala Val Val His Ala Val Phe Ala Leu Lys Ala Arg Thr Val Thr Phe

130 135 140

Gly Val Val Thr Ser Val Ile Thr Trp Val Val Ala Val Phe Ala Ser

145 150 155 160

Leu Pro Gly Ile Ile Phe Thr Arg Ser Gln Lys Glu Gly Leu His Tyr

165 170 175

Thr Cys Ser Ser His Phe Pro Tyr Ser Gln Tyr Gln Phe Trp Lys Asn

180 185 190

Phe Gln Thr Leu Lys Ile Val Ile Leu Gly Leu Val Leu Pro Leu Leu

195 200 205

Val Met Val Ile Cys Tyr Ser Gly Ile Leu Lys Thr Leu Leu Arg Cys

210 215 220

Arg Asn Glu Lys Lys Arg His Arg Ala Val Arg Leu Ile Phe Thr Ile

225 230 235 240

Met Ile Val Tyr Phe Leu Phe Trp Ala Pro Tyr Asn Ile Val Leu Leu

245 250 255

Leu Asn Thr Phe Gln Glu Phe Phe Gly Leu Asn Asn Cys Ser Ser Ser

260 265 270

Asn Arg Leu Asp Gln Ala Met Gln Val Thr Glu Thr Leu Gly Met Thr

275 280 285

His Cys Cys Ile Asn Pro Ile Ile Tyr Ala Phe Val Gly Glu Lys Phe

290 295 300

Arg Asn Tyr Leu Leu Val Phe Phe Gln Lys His Ile Ala Lys Arg Phe

305 310 315 320

Cys Lys Cys Cys Ser Ile Phe Gln Gln Glu Ala Pro Glu Arg Ala Ser

325 330 335

Ser Val Tyr Thr Arg Ser Thr Gly Glu Gln Glu Ile Ser Val Gly Leu

340 345 350

Claims (31)

1.一种治疗或预防癌症的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的CCR5结合剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症包括CCR5阳性转移性乳腺癌。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症包括CCR5阳性黑色素瘤、脑癌、胶质母细胞瘤、喉癌、肺癌、胃癌、结肠癌、结肠癌瘤、乳腺癌、睾丸癌、卵巢癌、子宫癌、胰腺癌、膀胱癌、食道癌、阑尾癌或前列腺癌。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CCR5结合剂与CCL5竞争与CCR5细胞受体的结合。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CCR5结合剂包括单克隆抗体PA14、leronlimab或CCR5mAb004或其结合片段。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将所述CCR5结合剂与另一种癌症疗法组合施用。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述CCR5结合剂包括抗体，所述抗体包含：

(a)重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:12的重链互补决定区1(HCDR1)、SEQ ID NO:13的重链互补决定区2(HCDR2)和SEQ ID NO:14的重链互补决定区3(HCDR3)；和

(b)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:9的轻链互补决定区1(LCDR1)、SEQ ID NO:10的轻链互补决定区2(LCDR2)和SEQ ID NO:11的轻链互补决定区3(LCDR3)。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述CCR5结合剂包括leronlimab。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述转移性乳腺癌为转移性三阴性转移性乳腺癌。

10.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述癌症为转移性HER2阳性乳腺癌。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中预防所述癌症包括减缓所述癌症的生长。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中预防所述癌症包括预防肿瘤的形成。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中预防所述癌症包括预防肿瘤转移灶的形成。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中预防所述癌症包括限制或减小肿瘤的尺寸。

15.根据权利要求14所述的方法，其中预防所述癌症包括限制或减小转移性肿瘤的尺寸。

16.根据权利要求15所述的方法，其中限制或减小转移性肿瘤的尺寸包括至少50％的肿瘤体积减小。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中预防所述癌症包括减少所述受试者中循环肿瘤细胞的数量。

18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中预防所述癌症包括减少所述受试者中上皮间充质转化细胞的数量。

19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中预防所述癌症包括减少所述受试者中癌症相关巨噬细胞样细胞的数量。

20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中治疗包括使癌症进展变得稳定。

21.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用细胞疗法、化学治疗剂、小分子或CCR5/CCL5信号传导抑制剂。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述化学治疗剂包括卡铂。

23.根据权利要求21所述的方法，其中所述化学治疗剂包括泰索帝、赫赛汀和帕妥珠单抗中的一种或多种。

24.根据权利要求21所述的方法，其中所述CCR5/CCL5信号传导抑制剂包括马拉韦罗、维立韦罗、阿拉韦罗、SCH-C、TAK-779、PA14抗体、2D7抗体、RoAb13抗体、RoAb14抗体或45523抗体。

25.一种用于降低患有CCR5+癌症的受试者的肿瘤负荷的方法，其包括：

选择适合用CCR5结合剂治疗的癌症患者，包括确定所述患者患有通常已知特征在于CCR5+表达水平升高的癌症类型，或者测量来自所述患者的肿瘤活检物的CCR5+表达；以及

施用单克隆抗体PA14、leronlimab或CCR5mAb004或其结合片段。

26.根据权利要求25所述的方法，其中以每周700mg的注射量施用单克隆抗体PA14、leronlimab或CCR5mAb004或其结合片段。

27.根据权利要求25或权利要求26所述的方法，所述方法还包括消除可检测的脑转移。

28.根据权利要求25-27中任一项所述的方法，所述方法还包括减少通过MRI可检测的脑损伤的数量。

29.根据权利要求25-28中任一项所述的方法，所述方法还包括将至少一种脑肿瘤的肿瘤体积减小大于50％。

30.根据权利要求25-29中任一项所述的方法，所述方法还包括将所述受试者CTC或EMT计数减少至零。

31.一种用于治疗CCR5+癌症的组合物，其包含单克隆抗体PA14、leronlimab或CCR5mAb004或其结合片段。

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