CN104853806A - 使用ccr5调节剂治疗癌症 - Google Patents
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Abstract
本发明部分地针对一种判定患有癌症的受试者是否处于出现所述癌症转移的风险中的方法。在一个实施例中,所述方法包含(a)从所述患有癌症的受试者获得生物样品;(b)测定所述生物样品中的CCR5表达水平和/或至少一种CCR5配体的表达水平;以及(c)如果在步骤(b)中所测定的CCR5表达水平和/或至少一种CCR5配体的表达水平与对照样品中的CCR5表达水平和/或至少一种CCR5配体的表达水平相比较增加,那么所述受试者被鉴别为很可能处于出现所述癌症转移的风险中。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2012年5月14日提交的名称为“CCR5调节剂在癌症和癌症转移的治疗中的用途”的美国临时专利申请号61/646,586;以及2012年5月14日提交的名称为“CCR5调节剂在癌症和癌症转移的治疗中的用途”的美国临时专利申请号61/646,593的权益,所述两篇申请的通过全文引用的方式结合在此。
技术领域
本发明部分地针对一种判定患有癌症的受试者是否处于出现癌症转移的风险中的方法和一种阻断癌症转移的方法。
关于联邦政府赞助研发的声明
本发明部分地由PASPA-UNAM(M.A.V-V.)、NIH资助R01CA070896、R01CA075503、R01CA132115、R01CA107382、R01CA086072(R.G.P.)、R01CA120876(M.P.L)、基梅尔癌症中心NIH癌症中心核心资助(Kimmel Cancer Center NIH Cancer Center Coregrant)P30CA056036(R.G.P.)、来自拉尔夫博士和玛丽安C.法尔克医学研究基金(Dr.Ralph and Marian C.Falk Medical Research Trust)和玛格丽特Q.蓝登伯格研究基金会(Margare Q.Landenberger ResearchFoundation)的慷慨资助,以及来自宾夕法尼亚州卫生部门(PennsylvaniaDepartment of Health)的资助(R.G.P.)提供支持。因此,美国政府享有本发明的某些权利。
背景技术
乳癌每年造成美国40,000名女性死亡,并且造成世界上410,000名女性死亡。1尽管所述疾病的治疗有所进展,但20%到30%的患有早期乳癌的患者将出现复发并伴有远处转移性疾病。2在那些患者中,转移为死亡的主要原因。患有基底肿瘤的患者发生转移的风险增加并且存活率较低。3,4肯内克(Kennecke)等人研究了3,726名乳癌患者并且报导了与患有管状A型或B型肿瘤的患者相比,基底肿瘤具有较高的转移频率并且从鉴别出转移到死亡的时间缩短。4在基底乳房肿瘤中常见的AR、ER以及HER-2的缺乏5意味着它们不大可能对激素疗法或HER-2靶向疗法作出反应。目前,化学疗法、放射以及手术是患有基底乳癌的患者的唯一选择,但都展现出不良的结果。6对于针对基底乳癌的特定靶向疗法的需求仍然很迫切。
发明内容
下文概述本文通过举例的方式所披露的实施例的某些方面。应了解这些方面只是为了给读者提供关于本文中所披露和/或要求的发明可能采用的某些形式的简单概述而提出,且这些方面并不意图限制本文中所披露和/或要求的任何发明的范围。实际上,本文中所披露和/或要求的任何发明可以涵盖下文可能未阐述的各个方面。
本发明总体上涉及多种方法,包括判定受试者是否患有癌症或是否处于患上癌症的风险中和/或是否处于出现癌症转移的风险中的方法。在一些实施例中,本发明的方法包括治疗、预防或管理患者的赘瘤或癌症转移的方法。在一些实施例中,本发明的方法包括下调来源于鼠类上皮或前列腺上皮细胞的转导并且经从由NeuT、Ha-Ras以及c-Src组成的群组中选出的至少一种致癌基因转化的一组一或多种前列腺癌细胞系中的CCR5表达的体内方法。在一些例示性实施例中,靶向病毒用以进入并感染宿主细胞的HIV受体CCR5的药物用于防止癌细胞从它们的原发组织迁移并扩散到患者体内的继发部位。在一个实施例中,靶向HIV受体CCR5的药物可以用作辅助疗法或辅助护理,其中所述药物是在针对癌症的初级、主要或初始治疗之外向患者施用。在一些实施例中,此类辅助疗法可以与针对癌症的其它疗法伴随地或并行地施用。在一个实施例中,此类辅助疗法可以与其它辅助疗法并行地给予或在其它辅助疗法之后给予。
在一些实施例中,当CCR5受体拮抗剂用作辅助疗法时,它们改善癌症患者的预后。在一些实施例中,在针对癌症疗法组合使用多种抗癌药物的情况下,CCR5受体拮抗剂可以被包括作为辅助疗法以便通过阻断所治疗癌症的转移来改善治疗效果,进而有助于改善癌症疗法的临床结果。
附图说明
前述概述以及本发明的其他特征、方面和优点以及本发明的实施例的以下详细描述在结合权利要求书和例示性实施例的附图阅读时将得到更好的理解,其中:
图1A示出了来自患有由分子亚型(管状A型、管状B型、基底型、类似正常型以及Her-2型)基于其基因表达模式划分的乳癌的患者的样品中CCL5及其受体CCR5的表达的热图;
图1B1到1B5示出了乳癌分子亚型管状A型、管状B型、基底型、类似正常型以及Her-2型当中CCL5和CCR5表达的散点图和相关性分析(学生t检验);
图1C示出了过表达CCL5和CCR5的乳癌样品的比例,即代表图B中所示的散点图的右上方象限的条形物的分数的定量;
图1D示出了本申请的材料和方法章节中描述的分析数据库中不同乳癌分子亚型的无转移卡普兰-麦尔曲线(Kaplan-Meier plot)以及对数秩分析;
图2A示出了在MDA-MB-231乳癌细胞中的CCR5表达的流式细胞术直方图鉴别出一个CCR5+细胞亚群;
图2B1和2B2示出了在加载有Fluo-4-AM的细胞中在依次加入CCL5(60μg/mL)和FBS(5%)之前钙信号传导的诱导;
图2C示出了乳癌细胞系到胶原蛋白凝胶中的3D侵袭,使用CCL5(15μg/mL)作为化学引诱剂;
图2D示出了来自3次独立实验的平均侵袭距离±SEM;
图2E为MCF-10A细胞和MCF-10A-NeuT、-Ras以及-Src衍生物的3D侵袭分析,显示CCL5诱导的侵袭经致癌性转化激活;
图2F示出了图2E中所示的MCF-10A细胞和MCF-10A-NeuT、-Ras以及-Src衍生物的3D侵袭分析的定量(F,平均值±SEM,n=3),显示CCL5诱导的侵袭经致癌性转化激活;
图2G示出了通过FACS分离的来自SUM-159细胞系的CCR5+和CCR5-亚群以及使用胎牛血清(FBS)作为化学引诱剂评估的其到胶原蛋白凝胶中的相关侵袭;
图2H示出了图2G所示的两次独立实验的CCR5+和CCR5-亚群到胶原蛋白中的侵袭的定量,呈平均值±SEM形式;
图3A1到3A4示出了用CCR5拮抗剂马拉维若或维克利诺(100nmol/L)处理30分钟的加载有Fluo-4-AM的MDA-MB-231细胞在加入CCL5(60μg/mL)之前的强度对比时间分析;
图3B示出了在加入CCL5后荧光强度增加的细胞的分数的比较;
图3C1到3C4显示在Hs578T细胞中CCL5诱导的钙信号传导被CCR5拮抗剂阻断;
图3D示出了图3A-3C中所示的3到4次独立实验的定量(平均值±SEM);
图4A示出了在CCR5拮抗剂(100nmol/L)存在下FBS诱导的Hs578T乳癌细胞到胶原蛋白凝胶中的侵袭的3D重构;
图4B示出了图4A中所示的FBS诱导的Hs578T乳癌细胞到胶原蛋白凝胶中的侵袭的定量(平均值±SEM,n=3)和分析(包法隆尼t检验(Bonferroni t test));
图4C示出了在CCR5拮抗剂(100nmol/L)存在下FBS诱导的SUM-159乳癌细胞到胶原蛋白凝胶中的侵袭的3D重构;
图4D示出了图4A中所示的FBS诱导的SUM-159乳癌细胞到胶原蛋白凝胶中的侵袭的定量(平均值±SEM,n=3)和分析(包法隆尼t检验);
图5A显示媒剂或马拉维若处理(8mg/kg,每隔12小时)的非肥胖糖尿病(NOD)/重度综合性免疫缺陷(SCID)小鼠(下文简称为NOD/SCID小鼠)的例示性体内生物发光图像(BLI);
图5B显示对照组(媒剂处理的NOD/SCID小鼠,红色线条/方块)和处理组(马拉维若处理的NOD/SCID小鼠,蓝色线条/三角形)的体内生物发光图像(BLI)的定量(平均值±SEM,n=6);
图5C1和5C2显示通过离体成像(左)和印度墨染色(右)证实的肺肿瘤的存在和处理之间的差异;
图5D显示在对照组中具有转移性肿瘤的小鼠的分数明显较大(P<0.0001,费舍尔精确检验(Fisher exact test));
图5E显示肺载玻片中被转移性肿瘤覆盖的面积的组织学分析(苏木精和曙红染色,×100);
图5F显示图5E中所示的肺载玻片中被转移性肿瘤覆盖的面积的定量;
图6A显示CCR5拮抗剂对乳癌细胞活力的影响。使MDA-MB-231细胞暴露于递增浓度的马拉维若(倒三角形)或维克利诺(方块)持续48小时,并且通过MTT分析评估细胞活力;
图6B示出了显示用pcDNA3.1+/Zeo+(MDA.载体)或克隆到pCDNA3+Zeo+中的人CCR5(MDA.CCR5)稳定转染的MDA-MB-231细胞中的CCR5表达的流式细胞术分析;
图6C示出了MDA.载体和MDA.CCR5中的MDA-MB-231的体外增殖速率的比较;
图6D示出了马拉维若对小鼠已确立转移的生长的体内影响的评估,其中如所示在注入MDA.pFULG细胞之后10天开始处理小鼠,并且在第0、10、17、24、31以及38天进行小鼠的体内生物发光成像(BLI)以便评估处理的功效;
图6E示出了对照组(红色/方块)和处理组(蓝色/三角形)中的体内BLI的定量(平均值±SEM,n=5),显示生长速率无差异;
图6F示出了用来评估CCR5在MDA-MB-231细胞肺定殖中的作用的实验设计的概要;
图6G示出了在小鼠注入MDA.pFULG细胞之后24小时小鼠肺中的eGFP+细胞的例示性共焦图像,其中在每只小鼠2个不同组织切片的3个随机视场(彼此隔开700μm)中计数表达eGFP的细胞(n=5只小鼠/组);
图6H示出了在小鼠注入MDA.pFULG细胞之后24小时小鼠肺中的eGFP+细胞数的定量(H),其中在每只小鼠2个不同组织切片的3个随机视场(彼此隔开700μm)中计数表达eGFP的细胞(n=5只小鼠/组);
图7A示出了使用KEGG和GO肿瘤样品确定与CCR5和CCL5的富集相关的基因表达信号传导路径的GSEA分析,其中所检查乳癌数据集中的基因通过代表其在最高2.5%CCL5/CCR5表达样品对比最低(2.5%)CCL5/CCR5表达样品(N=54)中的差异性表达的信噪比量度排列,用颜色梯度描绘,其中红色指示与CCL5/CCR5表达正相关且蓝色表示与CCL5/CCR5表达负相关;
图7B1到7B5示出了来自图1A中所示的一组2250例人乳癌数据的乳癌分子亚型当中CCR1和CCR5表达的散点图和使用学生t-检验的相关性分析;
图7C1到7C5显示来自图1A中所示的一组2250例人乳癌数据的乳癌分子亚型当中CCR3和CCL5表达的散点图和相关性分析;
图7D1和7D2显示具有富集最高水平CCR5(高50%)对比较低水平CCR5表达(低50%)的乳癌样品的患者的卡普兰麦尔曲线;
图8A示出了健康群体中CCL5及其受体CCR5、CCR1以及CCR3表达的热图;
图8B示出了表示健康群体之中CCL5表达及其受体CCR5、CCR1以及CCR3的交叉相关性的热图;
图8C和8D示出了表示来源于2550例乳癌集合的乳癌患者之中CCL5表达及其受体CCR5、CCR1以及CCR3的交叉相关性的热图;
图9A示出了用别藻蓝蛋白(APC)标记的CCR5抗体稳定转染的HS578T细胞中的CCR5表达的流式细胞术曲线;
图9B1和9B2示出了加载有Fluo-4-AM的HS578T细胞中在依次加入CCL5(60μg/mL)和胎牛血清(FBS)(5%)之前钙信号传导的诱导,其中RFI表示相对荧光强度。红色迹线是对CCL5配体没有反应但对FBS(胎牛血清)有反应的细胞的,绿色线条是对加入CCL5有反应并且对FBS也有反应的细胞的迹线。此数据告诉我们MDA-MB-231细胞是其中一些细胞具有受体且对CCL5有反应并且一些细胞不具有CCR5受体且对其配体CCL5没有反应的细胞群体;
图9C示出了用别藻蓝蛋白(APC)标记的CCR5抗体稳定转染的SUM159细胞中的CCR5表达的流式细胞术曲线;
图9D1和9D2示出了加载有Fluo-4-AM的SUM159细胞中在依次加入CCL5(60μg/mL)和胎牛血清(FBS)(5%)之前钙信号传导的诱导,其中RFI表示相对荧光强度。红色迹线是对CCL5配体没有反应但对FBS(胎牛血清)有反应的细胞的,绿色线条是对加入CCL5有反应并且对FBS也有反应的细胞的迹线。此数据告诉我们SUM-159细胞是其中一些细胞具有受体且对CCL5有反应并且一些细胞不具有CCR5受体且对其配体CCL5没有反应的细胞群体;
图10A1和10A2示出了SUM159-载体对照细胞或稳定过表达CCR5受体的SUM159细胞中CCR5受体的丰度的荧光激活细胞分选(FACS)分析。使用APC标记的CCR5抗体来跟踪CCR5阳性细胞;
图10B示出了钙信号传导诱导的时间轴的示意图,其中在60秒时向SUM159载体对照细胞或稳定地过表达CCR5受体的SUM159细胞中加入CCL5并且在320秒时加入FBS;
图10C示出了加载有Fluo-4-AM的SUM159-载体对照细胞中在加入CCL5或FBS之前和之后钙信号传导的诱导(对CCL5对比FBS的Ca+2反应);
图10D示出了SUM159载体对照细胞群体的平均荧光;
图10E示出了在60秒时并且在320秒时加入FBS稳定过表达CCR5受体的SUM159细胞中钙信号传导的诱导(对CCL5对比FBS的Ca+2反应);
图10F示出了SUM159-CCR5细胞群体的平均荧光;
图11A示出了马拉维若减少MDA-MB-231乳癌肺转移负荷这一事实,如通过对马拉维若处理的NOD/SCID小鼠进行的持续5周的每周一次的BLI定量结果所证明,其中临死前肺转移性肿瘤光亮度用作肺肿瘤负荷的替代测量值(见图5B);
图11B示出了马拉维若减少MDA-MB-231乳癌肺转移负荷这一事实,如通过对媒剂处理的NOD/SCID小鼠进行的持续5周的每周一次的BLI定量结果所证明,其中临死前肺转移性肿瘤光亮度用作肿瘤负荷的替代测量值;
图12A到12F示出了肺肿瘤富集CCR5+4细胞这一事实,如通过对由尾静脉注射MDA.pFULG细胞所引起的进入到转移性肿瘤中的CCR5+细胞比例的FACS分析所证明。将培养物中eGFP+MDA.pFULG细胞内的CCR5+细胞的比例(图12A)与从转移性肿瘤分离的细胞相比较(图12B)。数据分析(图12C)显示肿瘤中CCR5+分数增加8倍(平均值±SEM,n=6;学生t检验);
图13A1到13A5示出了通过FACS分析细胞系MDA-MB-23、HS578T、SUM159、MCF-7、Jurkat细胞中的CCR1蛋白质的细胞表面表达;
图13B1到13B5示出了通过FACS分析细胞系MDA-MB-23、HS578T、SUM159、MCF-7、Jurkat细胞中CCR3的细胞表面表达;
图13C1到13C5示出了通过FACS分析细胞系MDA-MB-23、HS578T、SUM159、MCF-7、Jurkat细胞中的CCR5蛋白质的细胞表面表达;
图13D显示如通过FACS分析测定细胞系MDA-MB-23、HS578T、SUM159、MCF-7、Jurkat细胞的CCR1、CCR3以及CCR5的细胞表面表达的相对丰度;
图14A示出了乳癌组织中CCR5的免疫组织化学染色,显示与正常乳房组织相比较染色主要定域在乳癌上皮细胞;
图14B示出了正常乳房组织中CCR5的免疫组织化学染色,显示正常乳房组织中的CCR5的染色非常低,表明与乳房肿瘤相比较正常乳房中缺乏CCR5;
图14C示出了乳癌组织中CCR5的免疫组织化学染色,表明与正常乳房组织相比较CCR5免疫组织化学染色主要定域在乳癌上皮细胞;以及
图14D显示正常乳房组织中CCR5的免疫组织化学染色,表明与乳房肿瘤相比较正常乳房组织(与图14B中所示的患者不同)中缺乏CCR5。
具体实施方式
趋化因子(C-C基元)配体5(“CCL5”),也称为RANTES(受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(Regulated on Activation,Normal Tcell Expressed and Secreted)的首字母缩写),是一种在人体内由CCL5基因编码的蛋白质。其受体C-C趋化因子受体5(“CCR5”或“CD195”)是在白血细胞上发现的一种蛋白质。CCR5是被巨噬细胞(M)-热带株型人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)和HIV-2使用的主要共同受体,其负责病毒穿透。因此CCR5在HIV发病机制中扮演着重要的角色。许多发炎性CC-趋化因子,包括MIP-1α、MIP-1β、RANTES、MCP-2以及HCC-1[9-74],充当CCR5促效剂,而MCP-3是所述受体的一种天然拮抗剂。CCR5主要在记忆T-细胞、巨噬细胞以及未成熟的树突状细胞中表达,并且被促炎性细胞因子上调。
具有抵抗HIV活性的抗反转录病毒药剂的类别包括核苷类似物、非核苷反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂、整合酶抑制剂以及CCR5受体拮抗剂。CCR5拮抗剂通过阻断CCR5-热带病毒进入到CD4T细胞中来发挥其抵抗HIV的抗病毒活性。因此,CCR5拮抗剂在历史上只与在免疫系统发炎性细胞中的表达有关。
在本发明之前,趋化因子CCL5及其受体CCR5在癌症发展中的作用不清楚。如本文中所披露,患有表达CCL5及其受体CCR5的癌症的患者呈现出新的药物标靶。如本文中所披露,表达CCL5及其受体CCR5的癌症用阻断其关于CCL5及其受体CCR5的活性的药物治疗选择性地影响那些表达突变型趋化因子CCL5及其受体CCR5的癌细胞。在一个实施例中,发现一个人乳癌细胞系亚群表达CCR5,对CCL5展现功能性反应。
对2,254人乳癌样本进行的微阵列分析发现在基底和HER-2基因亚型中CCL5及其受体CCR5,而不是CCR3,的表达增加。发现所述人乳癌细胞系亚群表达CCR5,对CCL5展现功能性反应。此外,致癌基因转化诱导CCR5表达,并且表达功能性CCR5的癌细胞亚群还展现出侵袭性增加。
在一个实施例中,最初开发用来阻断CCR5HIV共同受体功能的CCR5拮抗剂减少癌细胞的体外侵袭而不影响细胞增殖或活力。在一个实施例中,CCR5拮抗剂包括马拉维若(maraviroc)和维克利诺(vicriviroc)。在一个实施例中,表达功能性CCR5的癌细胞亚群包括基底乳癌细胞。在一个实施例中,CCR5拮抗剂包括马拉维若和维克利诺,其减少基底癌细胞的体外侵袭而不影响基底癌细胞增殖或活力。在一个实施例中,CCR5拮抗剂包括马拉维若和维克利诺,其减少基底癌细胞的体内侵袭而不影响基底癌细胞增殖或活力。
然而,如本文中所披露,CCL5及其受体CCR5被发现在癌细胞(包括乳癌细胞)中表达,还被发现能调节癌症转移,即癌症从其原发部位扩散到体内的其它部位(例如脑、肝、肺)。此外,发现用CCR5拮抗剂(如马拉维若和维克利诺)阻断CCR5受体防止癌症从其原发部位迁移并扩散到体内的其它部位。
如本文所描述,发现CCR5和CCL5在癌症侵袭中扮演着关键的角色。举例来说,已经展示CCR5拮抗剂减缓和/或防止表达CCL5和/或其受体CCR5的癌症对体内继发部位的侵袭,表明了CCR5拮抗剂作为可行的辅助疗法用于降低癌症患者(包括患有表达CCL5和/或其受体CCR5的基底乳癌分子亚型的患者)转移的风险的有用性。
细胞受体状态可以判定癌症患者是否对具体的抗癌治疗敏感。举例来说,被诊断患有基底乳癌亚型的患者在所述基底乳癌亚型不表达雄激素或雌激素受体或HER-2的情况下,目前的治疗选择,包括化学疗法、放射或手术,不仅是这些患者的唯一选择,而且都对这些患者展示出不良结果。虽然事实上目前不存在对于他们可用的其它有效疗法,但患有此基底乳癌变型的患者由于此基底乳癌变型还通常伴随有转移这一事实而更处于不利的情形中。新的癌症治疗为这些患者呈现出了无癌症存活的唯一希望。因此,对于针对所述基底乳癌亚型的特定靶向疗法存在迫切需求。
一方面,本发明涉及CCR5调节剂治疗、预防或管理赘瘤或赘瘤转移的用途。在一个实施例中,所述赘瘤是癌症。可以根据本发明的例示性实施例治疗、预防或管理的例示性癌症和相关病症包括(但不限于):白血病,如(但不限于)急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓细胞性白血病(如骨髓母细胞性、前髓细胞性、骨髓单核细胞性、单核细胞性和红白血病白血病和骨髓发育不良症候群;慢性白血病,如(但不限于)慢性骨髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛状细胞白血病;真性红细胞增多症;淋巴瘤,如(但不限于)霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏病;多发性骨髓瘤,如(但不限于)郁积型多发性骨髓瘤、非分泌型骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、浆细胞白血病、孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤;瓦萨罗德斯氏巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulinemia);意义不明确的单克隆丙种球蛋白病;良性单克隆丙种球蛋白病;重链疾病;骨骼和结缔组织肉瘤,如(但不限于)骨骼肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、恶性巨细胞瘤、骨骼纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤(血管内皮瘤)、纤维肉瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肉瘤、淋巴管肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤;脑肿瘤,如(但不限于)神经胶瘤、星形细胞瘤、脑干神经胶瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、非神经胶质肿瘤、听神经纤维瘤、颅咽管瘤、神经管胚细胞瘤、脑膜瘤、松果体细胞瘤、成松果体细胞瘤、原发性脑淋巴瘤;乳癌,包括(但不限于)乳腺管癌瘤、腺癌、小叶(小细胞)癌瘤、管内癌瘤、髓质乳癌、黏液性乳癌、管状乳癌、乳头状乳癌、佩吉特氏病(Paget's disease)以及发炎性乳癌;肾上腺癌,如(但不限于)嗜铬细胞瘤和肾上腺皮质癌瘤;甲状腺癌,如(但不限于)乳头状或卵泡甲状腺癌、髓质甲状腺癌和退行性甲状腺癌;胰脏癌,如(但不限于)胰岛素瘤、胃泌素瘤、胰升血糖素瘤、血管活性肠肽瘤、生长抑素分泌肿瘤以及类癌瘤或胰岛细胞肿瘤;垂体癌,如(但不限于)库欣氏病(Cushing's disease)、促乳素分泌肿瘤、肢端肥大症以及尿崩症(diabetes insipius);眼部癌症,如(但不限于)眼部黑素瘤,如虹膜黑素瘤、脉络膜黑素瘤以及睫状体黑素瘤以及成视网膜细胞瘤;阴道癌,如鳞状细胞癌、腺癌以及黑素瘤;外阴癌症,如鳞状细胞癌、黑素瘤、腺癌、基底细胞癌、肉瘤以及佩吉特氏病;颈椎癌症,如(但不限于)鳞状细胞癌和腺癌;子宫癌,如(但不限于)子宫内膜癌瘤和子宫肉瘤;卵巢癌,如(但不限于)卵巢上皮癌瘤、交界性肿瘤、胚细胞肿瘤以及间质瘤;食道癌,如(但不限于)鳞状细胞癌、腺癌、腺样囊性癌症、粘液表皮样癌、腺鳞癌瘤、肉瘤、黑素瘤、浆细胞瘤、疣状癌以及燕麦细胞(小细胞)癌瘤;胃癌,如(但不限于)蕈伞型(息肉状)、溃疡型、表面扩散型、弥散性扩散型腺癌、恶性淋巴瘤、脂肉瘤、纤维肉瘤以及癌肉瘤;结肠癌;直肠癌;肝癌,如(但不限于)肝细胞癌和肝母细胞瘤;胆囊癌,如腺癌;胆管癌,如(但不限于)乳头状、结节状以及弥散性;肺癌,如非小细胞肺癌、鳞状细胞癌(表皮样癌瘤)、腺癌、大细胞癌和小细胞肺癌;睾丸癌,如(但不限于)胚组织瘤、精原细胞瘤(退行性、经典(典型)、精母细胞性)、非精原细胞瘤、胚胎癌、畸胎瘤、绒膜癌(卵黄囊瘤)、前列腺癌,如(但不限于)前列腺上皮内瘤形成、腺癌、平滑肌肉瘤以及横纹肌肉瘤;阴茎癌;口腔癌,如(但不限于)鳞状细胞癌;基底癌症;唾液腺癌,如(但不限于)腺癌、粘液表皮样癌以及腺样囊性癌瘤;咽癌,如(但不限于)鳞状细胞癌和疣状;皮肤癌,如(但不限于)基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑素瘤、表面扩散黑素瘤、结节状黑素瘤、雀斑恶性黑素瘤、肢端雀斑黑素瘤;肾脏癌,如(但不限于)肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或尿道);威尔姆斯肿瘤(Wilms'tumor);膀胱癌,如(但不限于)移行细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌、癌肉瘤。此外,癌症包括粘液肉瘤、骨原性肉瘤、内皮肉瘤、淋巴内皮肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、血管母细胞瘤、上皮癌瘤、囊腺癌、支气管癌、汗腺癌瘤、皮脂腺癌瘤、乳头状癌以及乳头状腺癌。
在一个实施例中,CCR5拮抗剂用于治疗CCR5表达赘瘤或所述CCR5表达赘瘤转移。在一个实施例中,CCR5拮抗剂用于预防赘瘤或所述赘瘤转移。在一个实施例中,CCR5拮抗剂用于管理所述赘瘤的赘瘤转移。在一个实施例中,CCR5拮抗剂用于减缓CCR5表达赘瘤或所述CCR5表达赘瘤转移的发展。在一个实施例中,CCR5拮抗剂用于延迟CCR5表达赘瘤的转移。
在一个实施例中,适合根据本发明的例示性方法使用的CCR5拮抗剂包括(但不限于)沛洛斯(Perros)等人的美国专利号6,667,314中所述的化合物。沛洛斯等人的化合物以及包括其的所有配制品和剂型以引用的方式结合到本申请中。沛洛斯等人的化合物的优选实例包括:
4,4-二氟-N-[(1S)-3-[(1R,5S)-3-(3-甲基-5-丙烷-2-基-1,2,4-三唑-4-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-1-苯基丙基]环己烷-1-甲酰胺(“马拉维若”);
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基环丁烷甲酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基环戊烷甲酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基-4,4,4-三氟丁酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基-4,4-二氟环己烷甲酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-(3-氟苯基)丙基-4,4-二氟环己烷甲酰胺;及其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在一个实施例中,适合于治疗赘瘤或所述赘瘤转移;或预防赘瘤或所述赘瘤转移;或管理所述赘瘤的赘瘤转移;或减缓赘瘤或所述赘瘤转移的发展;或延迟赘瘤或所述赘瘤转移的CCR5受体调节剂包括(但不限于)阿穆尔(Armour)等人的美国专利号6,586,430中所述的化合物以及包含其的所有配制品或剂型以引用的方式结合到本申请中。阿穆尔等人的化合物的优选实例包括:
N-{3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-羟基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
2-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丙烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-3-呋喃甲酰胺;
3,3,3-三氟-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2-呋喃甲酰胺;
1-(乙酰基氨基)-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
1-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
1-氨基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氧代-4-吡咯烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基)3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[6-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{(1S)-3-[3-外-(3-{4-[(甲基磺酰基)氨基]苯甲基}-1,2,4-噁二唑-5-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3,3,3-三氟-N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
N-{(1S)-3-[7-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{(1S)-3-[7-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-硫杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-[(1S)-3-(3-内-{[2-(4-氟苯基)乙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]乙酰胺;
N-[(1S)-3-(3-{[3-内-(4-氟苯基)丙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]环丁烷甲酰胺;
N-[(1S)-3-(3-{[3-外-(4-氟苯基)丙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-[(1S)-3-(3-外-{[2-(4-氟苯基)乙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基)}1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-3-呋喃甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2H-吡喃4-甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2-呋喃甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
3-[({(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}氨基)羰基]-1-氮杂环丁烷甲酸甲酯;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氮杂环丁烷甲酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
2-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-吡咯烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氧代-4-吡咯烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-乙基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-乙基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)乙酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)乙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N(1S)-3-[3-外-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N(1S)-3-[3-外-(5-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基)3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(5-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(5-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(5-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
(2S)-1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氮杂环丁烷甲酰胺;
(2R)-1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氮杂环丁烷甲酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-吡咯烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-(三氟甲基)环丙烷甲酰胺;
2-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
2-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-l-苯基丙基}丙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-甲基-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
3-乙基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
3-乙基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-甲基-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-甲基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-甲氧基乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N{-1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-甲氧基丙酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;及其药学上可接受的盐。
在又一个实施例中,适合于治疗赘瘤或所述赘瘤转移;或预防赘瘤或所述赘瘤的转移;或管理所述赘瘤的赘瘤转移;或减缓赘瘤或所述赘瘤转移的发展;或延迟赘瘤或所述赘瘤的转移的CCR5受体调节剂包括(但不限于)巴劳迪(Baroudy)等人的美国专利号6,689,765和7,384,944中所述的化合物。巴劳迪等人的化合物以及包含其的所有配制品或剂型以引用的方式结合到本申请中。巴劳迪等人的化合物的优选实例包括:(4,6-二甲基嘧啶-5-基)-[4-[(3S)-4-[(1R)-2-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基]-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基]甲酮(维克利诺,此前还称为SCH 417690和SCH-D),其替代性IUPAC名称为5-({4-[(3S)-4-{2-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4,6-二甲基嘧啶;以及其药学上可接受的盐或溶剂合物。
一方面,本发明提供一种判定受试者是否患有癌症或是否处于患上癌症的风险中和/或是否处于出现癌症转移的风险中的方法。在一个实施例中,所述方法包括从患有或怀疑患有癌症的受试者获得生物样品并评定所述生物样品中CCR5和/或至少一种CCR5配体的表达水平。在一个实施例中,将所述生物样品中的CCR5和/或至少一种CCR5配体的表达水平与对照样品中的CCR5和/或至少一种CCR5配体的表达水平比较。在一个实施例中,如果生物样品中的CCR5和/或至少一种CCR5配体的表达水平比对照样品中的CCR5和/或至少一种CCR5配体的表达水平高,那么受试者被诊断为很可能患有癌症。在一个实施例中,如果所述生物样品中的CCR5和/或至少一种CCR5配体的表达水平比对照样品中的CCR5和/或至少一种CCR5配体的表达水平高,那么受试者被诊断为患上癌症的风险增加。在一个实施例中,如果生物样品中的CCR5和/或至少一种CCR5配体的表达水平比对照样品中的CCR5和/或至少一种CCR5配体的表达水平高,那么受试者被诊断为出现癌症转移的风险增加。
如本文所使用的术语“受试者”意图包括动物。在特定实施例中,受试者是哺乳动物、人或非人类灵长类动物、狗、猫、马、牛或啮齿动物。
另一方面,本发明提供一种基于癌症生物样品中的CCR5和/或至少一种CCR5配体的表达水平对癌症进行分子分类的方法。在一个实施例中,对癌症进行分子分类的方法包含(a)从受试者获得癌症生物样品;(b)测定所述生物样品中的CCR5的表达水平和/或至少一种CCR5配体的表达水平;以及(c)如果在步骤(b)中测定的CCR5的表达水平和/或至少一种CCR5配体的表达水平比对照样品中的CCR5表达水平和/或至少一种CCR5配体的表达水平高,那么所述癌症被分类为CCR5表达癌症。在一个实施例中,癌症已被分类为CCR5表达癌症的癌症受试者被诊断为很可能处于出现癌症转移的风险中。在一个实施例中,癌症为乳癌。在一个实施例中,癌症是前列腺癌。可以根据本发明的例示性实施例治疗、预防或管理的例示性癌症和相关病症包括(但不限于):白血病,如(但不限于)急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓细胞性白血病(如骨髓母细胞性、前髓细胞性、骨髓单核细胞性、单核细胞性和红白血病白血病和骨髓发育不良症候群;慢性白血病,如(但不限于)慢性骨髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛状细胞白血病;真性红细胞增多症;淋巴瘤,如(但不限于)霍奇金氏病、非霍奇金氏病;多发性骨髓瘤,如(但不限于)郁积型多发性骨髓瘤、非分泌型骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、浆细胞白血病、孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤;瓦萨罗德斯氏巨球蛋白血症;意义不明确的单克隆丙种球蛋白病;良性单克隆丙种球蛋白病;重链疾病;骨骼和结缔组织肉瘤,如(但不限于)骨骼肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性巨细胞瘤、骨骼纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肉瘤、淋巴管肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤;脑肿瘤,如(但不限于)神经胶瘤、星形细胞瘤、脑干神经胶瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、非神经胶质肿瘤、听神经纤维瘤、颅咽管瘤、神经管胚细胞瘤、脑膜瘤、松果体细胞瘤、成松果体细胞瘤、原发性脑淋巴瘤;乳癌,包括(但不限于)乳腺管癌瘤、腺癌、小叶(小细胞)癌瘤、管内癌瘤、髓质乳癌、黏液性乳癌、管状乳癌、乳头状乳癌、佩吉特氏病以及发炎性乳癌;肾上腺癌,如(但不限于)嗜铬细胞瘤和肾上腺皮质癌瘤;甲状腺癌,如(但不限于)乳头状或卵泡甲状腺癌、髓质甲状腺癌和退行性甲状腺癌;胰脏癌,如(但不限于)胰岛素瘤、胃泌素瘤、胰升血糖素瘤、血管活性肠肽瘤、生长抑素分泌肿瘤以及类癌瘤或胰岛细胞肿瘤;垂体癌,如但限于库欣氏病、促乳素分泌肿瘤、肢端肥大症以及尿崩症;眼部癌症,如(但不限于)眼部黑素瘤,如虹膜黑素瘤、脉络膜黑素瘤以及睫状体黑素瘤以及成视网膜细胞瘤;阴道癌,如鳞状细胞癌、腺癌以及黑素瘤;外阴癌症,如鳞状细胞癌、黑素瘤、腺癌、基底细胞癌、肉瘤以及佩吉特氏病;颈椎癌症,如(但不限于)鳞状细胞癌和腺癌;子宫癌,如(但不限于)子宫内膜癌瘤和子宫肉瘤;卵巢癌,如(但不限于)卵巢上皮癌瘤、交界性肿瘤、胚细胞肿瘤以及间质瘤;食道癌,如(但不限于)鳞状细胞癌、腺癌、腺样囊性癌症、粘液表皮样癌、腺鳞癌瘤、肉瘤、黑素瘤、浆细胞瘤、疣状癌以及燕麦细胞(小细胞)癌瘤;胃癌,如(但不限于)蕈伞型(息肉状)、溃疡型、表面扩散型、弥散性扩散型腺癌、恶性淋巴瘤、脂肉瘤、纤维肉瘤以及癌肉瘤;结肠癌;直肠癌;肝癌,如(但不限于)肝细胞癌和肝母细胞瘤;胆囊癌,如腺癌;胆管癌,如(但不限于)乳头状、结节状以及弥散性;肺癌,如非小细胞肺癌、鳞状细胞癌(表皮样癌瘤)、腺癌、大细胞癌和小细胞肺癌;睾丸癌,如(但不限于)胚组织瘤、精原细胞瘤(退行性、经典(典型)、精母细胞性)、非精原细胞瘤、胚胎癌、畸胎瘤、绒膜癌(卵黄囊瘤)、前列腺癌,如(但不限于)前列腺上皮内瘤形成、腺癌、平滑肌肉瘤以及横纹肌肉瘤;阴茎癌;口腔癌,如(但不限于)鳞状细胞癌;基底癌症;唾液腺癌,如(但不限于)腺癌、粘液表皮样癌以及腺样囊性癌瘤;咽癌,如(但不限于)鳞状细胞癌和疣状;皮肤癌,如(但不限于)基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑素瘤、表面扩散黑素瘤、结节状黑素瘤、雀斑恶性黑素瘤、肢端雀斑黑素瘤;肾脏癌,如(但不限于)肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或尿道);威尔姆斯肿瘤;膀胱癌,如(但不限于)移行细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌、癌肉瘤。此外,癌症包括粘液肉瘤、骨原性肉瘤、内皮肉瘤、淋巴内皮肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、血管母细胞瘤、上皮癌瘤、囊腺癌、支气管癌、汗腺癌瘤、皮脂腺癌瘤、乳头状癌以及乳头状腺癌。
另一方面,本发明提供一种治疗、预防或管理受试者CCR-5表达赘瘤或CCR5表达赘瘤转移的方法。在一个实施例中,治疗或管理患有CCR5表达赘瘤或处于出现CCR5表达赘瘤转移的风险中的受试者的CCR-5表达赘瘤或CCR5表达赘瘤转移的方法,其包含向所述受试者施用CCR5调节剂。在一个实施例中,所述CCR5调节剂包含CCR5拮抗剂。在一个实施例中,CCR5拮抗剂包含4,4-二氟-N-[(1S)-3-[(1R,5S)-3-(3-甲基-5-丙烷-2-基-1,2,4-三唑-4-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-1-苯基丙基]环己烷-1-甲酰胺(“马拉维若”)。在一个实施例中,所述CCR5调节剂包含CCR5拮抗剂。在一个实施例中,CCR5拮抗剂包含(4,6-二甲基嘧啶-5-基)-[4-[(3S)-4-[(1R)-2-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基]-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基]甲酮(“维克利诺”)。在一个实施例中,CCR5拮抗剂拮抗剂是选自由以下组成的群组:4,4-二氟-N-[(1S)-3-[(1R,5S)-3-(3-甲基-5-丙烷-2-基-1,2,4-三唑-4-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-1-苯基丙基]环己烷-1-甲酰胺(“马拉维若”)和(4,6-二甲基嘧啶-5-基)-[4-[(3S)-4-[(1R)-2-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基]-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基]甲酮(“维克利诺”)。
在一个实施例中,适合的CCR5拮抗剂是选自由以下组成的群组:4,4-二氟-N-[(1S)-3-[(1R,5S)-3-(3-甲基-5-丙烷-2-基-1,2,4-三唑-4-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-1-苯基丙基]环己烷-1-甲酰胺(“马拉维若”);
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基环丁烷甲酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基环戊烷甲酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基-4,4,4-三氟丁酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基-4,4-二氟环己烷甲酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-(3-氟苯基)丙基-4,4-二氟环己烷甲酰胺;及其药学上可接受的盐或溶剂合物。
在一个实施例中,适合的CCR5拮抗剂是选自由以下组成的群组::
N-{3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-羟基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
2-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丙烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-3-呋喃甲酰胺;
3,3,3-三氟-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2-呋喃甲酰胺;
1-(乙酰基氨基)-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
1-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
1-氨基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氧代-4-吡咯烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基)3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[6-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{(1S)-3-[3-外-(3-{4-[(甲基磺酰基)氨基]苯甲基}-1,2,4-噁二唑-5-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3,3,3-三氟-N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
N-{(1S)-3-[7-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{(1S)-3-[7-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-硫杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-[(1S)-3-(3-内-{[2-(4-氟苯基)乙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]乙酰胺;
N-[(1S)-3-(3-{[3-内-(4-氟苯基)丙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]环丁烷甲酰胺;
N-[(1S)-3-(3-{[3-外-(4-氟苯基)丙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-[(1S)-3-(3-外-{[2-(4-氟苯基)乙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基)}1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-3-呋喃甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2H-吡喃4-甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2-呋喃甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
3-[({(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}氨基)羰基]-1-氮杂环丁烷甲酸甲酯;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氮杂环丁烷甲酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
2-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-吡咯烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氧代-4-吡咯烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-乙基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-乙基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)乙酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)乙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N(1S)-3-[3-外-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N(1S)-3-[3-外-(5-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基)3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(5-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(5-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(5-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
(2S)-1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氮杂环丁烷甲酰胺;
(2R)-1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氮杂环丁烷甲酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-吡咯烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-(三氟甲基)环丙烷甲酰胺;
2-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
2-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-l-苯基丙基}丙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-甲基-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
3-乙基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
3-乙基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-甲基-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-甲基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-甲氧基乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N{-1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-甲氧基丙酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;及其药学上可接受的盐。
如本文中所披露,本发明的一方面提供一种通过向受试者施用CCR5受体拮抗剂来治疗、预防或管理所述受试者的CCR-5表达赘瘤或所述CCR5表达赘瘤转移的方法。在一个实施例中,CCR5受体拮抗剂是以包括所述CCR5受体拮抗剂的药物配制品或剂型形式施用。在一个实施例中,所述CCR5受体拮抗剂是以酸、酯或其它适合的化学衍生物形式使用。在一个实施例中,所述CCR5受体拮抗剂是呈根据所属领域熟知的程序来源于多种有机和无机酸和碱的药学上可接受的盐的形式。在一个实施例中,如本文所使用的表达“药学上可接受的盐”意指包含以盐形式采用的CCR5受体拮抗剂的活性成分,尤其是在所述盐形式与所述CCR5受体拮抗剂的游离形式或此前所披露的其它盐形式相比较赋予CCR5受体拮抗剂以改善的药物动力学性质的情况下。在一个实施例中,CCR5受体拮抗剂的药学上可接受的盐形式还可以首先赋予CCR5受体拮抗剂以它此前不具有的合乎需要的药物动力学特性,并且甚至可能正面地影响CCR5受体拮抗剂在它在体内的治疗活性方面的药效动力学。在一个实施例中,CCR5受体拮抗剂可能有利地受影响的药物动力学性质包括例如CCR5受体拮抗剂被传输跨过细胞膜的方式,所述方式又可能直接并且正面地影响CCR5受体拮抗剂的吸收、分布、生物转化或排泄。
虽然药物组合物的投药途径是重要的并且多种解剖学、生理以及病理因素会关键地影响生物利用率,但CCR5受体拮抗剂的溶解性通常取决于其被采用的特定盐形式的特征。另外,水性溶液可能提供活性成分到所治疗患者体内的最快速吸收,但脂质溶液和悬浮液以及固体剂型可能产生程度较低的快速吸收。CCR5受体拮抗剂的口服摄取是出于安全性、便利性以及经济性原因的最优选投药途径,但此类口服剂型的吸收会受到以下因素的不利影响:如极性、胃肠粘膜刺激引起的呕吐、消化酶和低pH引起的破坏、在食物或其它药物存在下非常规的吸收或推进,以及粘膜、肠道菌群或肝脏的酶引起的代谢。CCR5受体拮抗剂配制成不同的药学上可接受的盐形式可能有效地克服或缓解在口服剂型吸收的情况下所碰到的上述一或多个问题。熟知的药学上可接受的盐包括(但不限于)乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate)、苯磺酸盐(besylate)、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖庚酸盐、葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半丁二酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、顺丁烯二酸盐、杏仁酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、膦酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、磷酸钠、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、硫代苹果酸盐、甲苯磺酸盐以及十一烷酸盐。
适合的CCR5受体拮抗剂化合物的碱盐包括(但不限于)铵盐;碱金属盐,如钠盐和钾盐;碱土金属盐,如钙盐和镁盐;与如二环己胺、葡甲胺、N-甲基-D-还原葡糖胺、三(羟甲基)甲胺(缓血酸胺)的有机碱形成的盐;以及与如精氨酸、赖氨酸等氨基酸形成的盐。包含碱性含氮基团的本发明化合物可以用以下试剂季铵化:如(C1-C4)烷基卤化物,例如甲基、乙基、异丙基以及叔丁基氯化物、溴化物和碘化物;硫酸二(C1-C4)烷基酯,例如硫酸二甲、硫酸二乙酯以及硫酸二戊酯;(C10-C18)烷基卤化物,例如癸基、十二烷基、月桂基、十四烷基以及十八烷基氯化物、溴化物以及碘化物;以及芳基-(C1-C4)烷基卤化物,例如苯甲基氯和苯乙基溴。此类盐允许制备本发明的水溶性和油溶性化合物。
优选的上述药物盐包括(但不限于)乙酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖酸盐、半丁二酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、羟乙磺酸盐、杏仁酸盐、葡甲胺、硝酸盐、油酸盐、膦酸盐、特戊酸盐、磷酸钠、硬脂酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、硫代苹果酸盐、甲苯磺酸盐以及缓血酸胺。
多盐形式包括在本发明的范围内,其中CCR5受体拮抗剂含有一个以上能够形成此类药学上可接受的盐的基团。典型的多盐形式的实例包括(但不限于)酒石酸氢盐、二乙酸盐、二反丁烯二酸盐、二葡甲胺、二磷酸盐、二钠以及三盐酸盐。
适合的CCR5受体拮抗剂可以单独施用但一般将以与关于预期投药途径和标准药物实践选择的一或多种适合的药物赋形剂、稀释剂或载剂的混杂物形式施用。
举例来说,CCR5受体拮抗剂可以经口或经舌下,以片剂、胶囊、珠剂(ovule)、酏剂、溶液或悬浮液形式施用,其可能含有调味剂或着色剂,用于立即或控制释放应用。此类片剂可能含有赋形剂,如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸二钙以及甘氨酸;崩解剂,如淀粉(优选的是玉米、马铃薯或木薯淀粉)、海藻酸以及某些复合硅酸盐;以及造粒粘合剂,如聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明胶以及阿拉伯胶。另外,可以包括润滑剂,如硬脂酸镁、月桂基硫酸钠以及滑石。类似类型的固体组合物还可以用作明胶胶囊中的填充剂。就此而言优选的赋形剂包括乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇。对于水性悬浮液和/或酏剂,CCR5受体拮抗剂可以与以下各物组合:多种甜味剂或调味剂、着色物质或染料;乳化剂和/或悬浮剂;以及稀释剂,如水、乙醇、丙二醇以及甘油,及其组合。
适合的CCR5受体拮抗剂还可以非经肠注射,例如静脉内、腹膜內、鞘内、脑室内、胸骨内、颅内、肌内或皮下注射,或者它们可以通过输液技术施用。它们最佳以无菌水溶液形式使用,其可能含有其它物质,例如足够的盐或葡萄糖以使得所述溶液与血液等渗。必要时,水溶液应经适当缓冲(优选地缓冲到3到9的pH)。适合的非经肠配制品在无菌条件下的制备易于通过熟习此项技术者熟知的标准药物技术实现。
对于向人类受试者经口以及非经肠投药,CCR5受体拮抗剂的日剂量水平通常将为1μg/kg到25mg/kg(单次或多次给药)。因此CCR5受体拮抗剂的片剂或胶囊可能含有0.05mg到1.0g活性化合物,按需要一次施用一个或两个或两个以上。在任何情况下医生将确定最适合于任何个别患者的实际剂量,并且它将随特定患者的年龄、体重以及反应而变化。上述剂量是平均情形的例示。当然可能存在应该使用更高或更低剂量范围的个别例子,并且所述剂量范围在本发明范围内。
适合的CCR5受体拮抗剂还可以经鼻内或通过吸入施用,并且方便地用以下形式递送:干粉吸入器或来自加压容器或使用适合的推进剂的喷雾器的气雾剂喷雾呈现形式,适合的推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟烷烃,如1,1,1,2-四氟乙烷(HFA 134a)、二氧化碳或其它适合的气体。在加压气雾剂的情况下,可以通过提供用于递送量定量的阀门来确定剂量单位。加压容器或喷雾器可能含有活性化合物的溶液或悬浮液,例如使用乙醇和推进剂的混合物作为溶剂,其可能另外含有润滑剂,例如脱水山梨糖醇三油酸酯。在吸入器或吹入器中使用的容器和药筒(例如由明胶制得)可以经配制成含有CCR5受体拮抗剂与如乳糖或淀粉的适合的粉末基质的粉末混合物。
气雾剂或干粉调配物优选地经过安排以使得每个计量剂量或“喷吹”含有20μg到20mg CCR5受体拮抗剂以供传送给所述受试者。气雾剂总日剂量将在20μg到20mg范围内,其可以单次剂量或更通常在一天内的分次剂量施用。
或者,适合的CCR5受体拮抗剂可以以栓剂或子宫托形式施用,或其可以以洗剂、溶液、乳膏、软膏或敷粉形式表面应用。CCR5受体拮抗剂还可以通过使用皮肤贴片经皮施用。其还可以通过眼部途径施用,尤其用于治疗眼部的神经病症。
对于眼科使用,化合物可以被调配为在等渗、pH调节、无菌生理盐水中的微粉化悬浮液悬,或优选地调配为在等渗、pH调节、无菌生理盐水中的溶液,任选地与如苯扎氯铵的防腐剂组合。或者,其可以调配成软膏,如石蜡脂。
对于表面应用到皮肤,式(I)化合物可以调配为含有悬浮或溶解于例如具有以下中的一或多者的混合物中的活性化合物的适合的软膏:矿物油、液体石蜡脂、白矿脂、丙二醇、聚氧化乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡以及水。或者,其可以调配作为悬浮或溶解于例如以下中的一或多者的混合物中的适合的洗剂或乳膏:矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇以及水。
在一些实施例中,本文所描述的化合物可以调节CCR5趋化因子受体活性以及接着由CCR5受体和其配体介导的后续或相关的病原性过程。如本文所使用的表达“调节CCR5趋化因子受体活性”意指操控涉及CCR5趋化因子受体和其配体的基本生理过程和机构。此预期含义的范围包括所有类型和亚型的CCR5受体,在发现其的特定患者的任何组织中,以及在构成其可能定位的那些组织的细胞的任何组分中或上。最常见的,CCR5受体位于特定细胞类型(如单核细胞)的细胞膜上。CCR5受体连同其天然结合的多种内源性配体一起参与并定义如下信号传导路径,其借助于其对如趋化因子的因子进出那些细胞和组织的移动所发挥的影响来控制重要的细胞和组织功能。
根据本发明的治疗方法,包含向所述患者施用治疗有效量的CCR5受体拮抗剂,有效治疗或预防患者如本文所描述由CCR5趋化因子受体活性调节或与之相关的疾病和病状以及有利地影响其在患者中的结果的式(I)化合物的剂量和给药率将取决于各种因素,如CCR5受体拮抗剂的本质、患者的大小、治疗目标、所治疗病变的本质、所使用特定药物组合物、患者可能接受的并行治疗以及治疗医师的观察结果和结论。
然而,一般而言,将向个体施用的适合的CCR5受体拮抗剂的有效治疗剂量将在每天约10μg(0.01mg)/kg与约60.0mg/kg体重CCR5受体拮抗剂之间,优选地在每天约100μg(0.1mg)/kg与约10mg/kg体重CCR5受体拮抗剂之间,更优选地在每天约1.0mg/kg与约6.0mg/kg体重CCR5受体拮抗剂之间,并且最优选地在每天约2.0mg/kg与约4.0mg/kg体重CCR5受体拮抗剂之间。
本发明的范围内包括除作为活性成分的CCR5受体拮抗剂之外共施用额外治疗剂及活性成分的实施例,以及除作为活性成分的CCR5受体拮抗剂之外还含有额外治疗剂及活性成分的组合物。此类多重药物方案,常常称为组合疗法,可以用于治疗和预防由CCR5趋化因子受体调节介导或与之相关的任何疾病或病状,尤其是癌症转移。此类治疗剂组合尤其适合用于治疗、预防或管理需要治疗癌症、预防癌症或管理癌症转移风险的受试者内的癌症转移。
例示性CCR5受体拮抗剂可以根据每天1到4次,优选地每天一次或两次的方案施用。针对任何特定患者的特定剂量水平和频率可以变化并且将取决于各种因素,包括所采用特定化合物的活性、所述化合物的代谢稳定性和作用持续时间、年龄、体重、一般健康状况、性别、膳食、投药模式和时间、排泄速率、药物组合、特定病状的严重度以及主体经历。
如沛洛斯等人的美国专利号6,667,314中所披露,CCR5拮抗剂可以经口、经颊或舌下,以片剂、胶囊、多粒子、凝胶、膜、珠剂、酏剂、溶液或悬浮液形式施用,其可能含有调味剂或着色剂,用于立即、延迟、改质、持续、脉冲式或控制释放应用。CCR5受体拮抗剂还可以作为快速分散或快速溶解剂型或以高能分散液形式或作为经涂布的粒子施用。CCR5受体拮抗剂化合物的适合的调配物可以按需要呈经涂布的或未经涂布的形式。此类固体药物组合物(例如片剂)可能含有赋形剂,如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙、甘氨酸以及淀粉(优选的是玉米、马铃薯或木薯淀粉);崩解剂,如乙醇酸淀粉钠、交联羧甲纤维素钠以及某些复合硅酸盐;以及造粒粘合剂,如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶以及阿拉伯胶。另外,可以包括如硬脂酸镁、硬脂酸、二十二酸甘油酯以及滑石的润滑剂。
如本文所使用的“转移”被定义为恶性肿瘤细胞或赘瘤通过循环或淋巴系统或通过天然体腔转移,通常从瘤形成的原发部位转移到体内远端部位,随后在新的位置形成继发性肿瘤或群落。在本发明方法的一些例示性实施例中,转移包含选自由以下组成的群组的一或多种器官中的肿瘤转移:肝、脑、膀胱、肺、肾上腺、肾脏、骨骼、皮肤或胰腺或对照肾脏(control kidney)及其组合。
另一方面,本发明提供一种鉴别减少或预防或治疗癌症转移的化合物的方法。在一个实施例中,所述方法鉴别选择性干扰过表达CCR5和/或过表达至少一种CCR5受体配体的赘生性细胞的增殖或活力的候选化合物。在一个实施例中,所述方法鉴别选择性阻断过表达CCR5和/或过表达至少一种CCR5受体配体的赘生性细胞中的CCR5和/或至少一种CCR5受体配体的活性的候选化合物。在一个例示性实施例中,鉴别减少或预防或治疗过表达CCR5和/或过表达至少一种CCR5受体配体的赘生性细胞中的癌症转移的候选化合物的方法包含(a)使过表达CCR5和/或过表达至少一种CCR5受体配体的一或多个赘生性细胞和一或多种候选化合物接触;和(b)检测过表达CCR5和/或过表达至少一种CCR5受体配体的一或多个赘生性细胞的活性和/或增殖或活力,其中一或多个赘生性细胞的活性降低和/或增殖降低和/或活力降低(相对于和对照样品相比)将候选化合物鉴别为选择性减少或预防或治疗过表达CCR5和/或过表达至少一种CCR5受体配体的赘生性细胞中的癌症转移的化合物。在一个实施例中,如果一或多个赘生性细胞的增殖和过表达CCR5和/或过表达至少一种CCR5受体配体的未处理(对照)赘生性细胞相比减少/受到抑制,那么将候选化合物鉴别为选择性减少或预防或治疗过表达CCR5和/或过表达至少一种CCR5受体配体的赘瘤细胞的转移的化合物。在一个实施例中,如果一或多个赘生性细胞的活力和过表达CCR5和/或过表达至少一种CCR5受体配体的未处理(对照)赘生性细胞相比减少/受到抑制,那么将候选化合物鉴别为选择性减少或防止或治疗过表达CCR5和/或过表达至少一种CCR5受体配体的赘瘤细胞的转移的化合物。在一个实施例中,一或多种CCR5受体配体包含CCL5。在一个实施例中,一或多种CCR5受体配体包含CCL8。在一个实施例中,一或多种CCR5受体配体包含CCL7。
对于本文所披露的研究,研究人乳癌细胞系中的CCL5和CCR5表达以及CCR5拮抗剂的体外和体内作用。使用微阵列数据集进行询问以评估在2,254例患者乳癌样品背景下的CCR5和CCL5表达。将数据集中的样品分配为5个乳癌亚型,包括管状A型、管状B型、类似正常型、基底型以及HER-2过表达疾病。分析揭示在具有基底和HER-2亚型的患者中CCL5和CCR5的表达增加。58%的癌症样品指示阳性CCR5和CCL5特征。发现致癌基因在正常乳房细胞被转化成癌细胞时激活正常乳房细胞中的CCR5受体。还发现那些细胞的转移受CCR5调节。
为了在体外评估CCR5在细胞迁移和侵袭中的功能相关性,在3-D侵袭分析中使用两种不同细胞系测试药物。发现两种拮抗剂都抑制乳癌细胞侵袭性。
为了在体内评估CCR5在细胞迁移和侵袭中的功能相关性,向小鼠注射拮抗剂并且用生物发光成像追踪基底乳癌细胞对其它组织(亦即肺)的侵袭性。发现用药物处理的小鼠与未处理小鼠相比较肺转移的数目和尺寸都显示减少超过90%。这一和其它临床前研究为研究CCR5拮抗剂用作新的治疗来阻断基底乳癌的传播提供了合理的基础。这些发现还可能暗示CCR5促进转移的其它癌症,如前列腺癌和胃癌。
详细参看图式,其中所有相同的图式元件符号指示相同的要素,本发明的例示性实施例示于图1A-14D。
参看图1A,显示在来自患有由乳癌分子亚型(即管状A型、管状B型、基底型、类似正常型以及Her-2型)基于其基因表达模式划分的乳癌的患者的样品中CCL5及其受体CCR5的表达的热图。所述热图显示在患有基底型和HER-2型乳癌亚型的患者中CCL5和CCR5的相对丰度增加(被过表达)。所述热图还显示在Her-2型乳癌亚型中CCL5和CCR5被过表达。
参看图1B1到1B5,显示CCL5及其受体CCR5的表达示于图1A中的乳癌分子亚型当中CCL5和CCR5表达的荧光激活细胞分选(FACS)散点图和相关性分析(学生t检验)。与图A中所观测到的CCL5及其受体CCR5的表达相一致,散点图显示在患有基底型和HER-2型乳癌亚型的患者中CCL5和CCR5被过表达。
参看图1C,显示图1B1到1B5中所展现的过表达CCL5和CCR5的乳癌样品的比例(代表图1B1到1B5中所示的散点图的右上方象限的条形物的分数)的定量。各亚型中的样品数指示于条形物的顶部。
参看图1D,显示本发明的材料和方法章节中所述的分析数据库中的不同基因亚型的无转移卡普兰-麦尔曲线和对数秩分析。无转移卡普兰-麦尔曲线显示患有基底或HER-2亚型乳癌的患者展现出出现转移的可能性增加。
图2A-2H显示对CCL5作出反应而表达CCR5的人乳癌细胞系。在图1A中,MDA-MB-231乳癌细胞中的CCR5表达的流式细胞术直方图鉴别出一个CCR5+细胞亚群。在图2B和2B2中,显示在加载有Fluo-4-AM的细胞中在依次加入CCL5(60μg/mL)和FBS(5%)之前钙信号传导的诱导。一部分细胞对CCL5作出反应(在显微照片中间的实心箭头),而其余的无反应(空心箭头)。5种反应性(绿色线条)和5种无反应(红色线条)细胞的平均荧光变化示于最右边的图中。所示数据代表了针对各细胞系的3到5次独立实验(比例条,100μm)。在图2C中,显示使用CCL5(15μg/mL)作为化学引诱剂,乳癌细胞系到胶原蛋白凝胶中的3D侵袭。图2D显示3D侵袭示于图2C中的3次独立实验的平均侵袭距离±SEM。图2E显示MCF-10A细胞和MCF10A-NeuT、-Ras以及-Src衍生物的3D侵袭分析,且其相对应的定量(平均±SEM,n=3)示于图2F中,显示CCL5诱导的侵袭被致癌性转化激活。图2G显示CCR5+细胞展现出增加的侵袭性。通过FACS分离来自SUM-159细胞系的CCR5+和CCR5-亚群,并且使用FBS作为化学引诱剂来评估到胶原蛋白凝胶中的侵袭。图2G中的样品的FACS和到胶原蛋白凝胶中的侵袭实验的定量示于图2H中,呈2次独立实验的平均值±SEM形式。使用学生t检验进行统计分析。
图3A1-3D显示CCR5拮抗剂阻断CCL5诱导的钙信号传导。在图3A1到3A4中,显示在加入CCL5(60μg/mL)之前用CCR5拮抗剂马拉维若或维克利诺(100nmol/L)处理30分钟的加载有Fluo-4AM的MDA-MB-231细胞的强度对比时间分析。显微照片示出了假线性扫描曲线的轴(x-x')。使用这些轴来构建相邻的强度对比时间曲线。在图3B中,显示在加入CCL5后荧光强度增加的细胞分数的比较。在图3C1到3C4中,在Hs578T细胞中CCL5-诱导的钙信号传导也被CCR5拮抗剂阻断。相对应的定量示于图3D中。图3B和3D中的数据是3到4次独立实验的平均值±SEM。使用学生t检验进行统计分析。
图4A-4D显示CCR5拮抗剂阻断FBS诱导的乳癌细胞侵袭。在图4A中,显示在CCR5拮抗剂(100nmol/L)存在下FBS诱导的Hs578T乳癌细胞到胶原蛋白凝胶中的侵袭的3D重构。在图3C中,显示在CCR5拮抗剂(100nmol/L)存在下FBS诱导的SUM-159乳癌细胞到胶原蛋白凝胶中的侵袭的3D重构。相对应的定量(平均值±SEM,n=3)以及分析(包法隆尼t检验)展现于图4B和4D中。
参看图5A-5F,所呈现的数据显示CCR5拮抗剂马拉维若体内抑制肺转移。在图5A中,将用Luc2-eGFP融合蛋白质转导的MDA-MB-231细胞注射于NOD/SCID小鼠的尾静脉中,并且每周一次定量体内生物发光信号。媒剂或马拉维若处理(8mg/kg,每隔12小时)的小鼠的代表性体内图像示于图5A中。在图5B中,显示对照组(红色线条)和处理组(蓝色线条)中BLI的定量(平均值±SEM,n=6)。使用学生t检验进行统计比较(*,P=0.048),针对异质性方差进行韦尔奇校正(Welch correction)。如图5C1和5C2中所示,通过离体成像(左)和印度墨染色(右)证实了肺肿瘤的存在和处理之间的差异。如图5D中所示,在对照组中具有转移性肿瘤的小鼠的分数明显较大(P<0.0001,费舍尔精确检验)。图5E显示肺载玻片中被转移性肿瘤覆盖的面积的组织学分析(苏木精和曙红染色,×100)和相对应的定量(示于图5F中)。用尼康(Nikon)Elements BR 3.0软件在低放大率(×40)下分析每只小鼠2个不同组织切片的2个随机视场(彼此隔开600μm)来定量肿瘤面积。使用学生t检验进行统计分析,针对异质性方差进行韦尔奇校正(对照组和处理组分别为n=33和12)。
参看图6A-6H,显示马拉维若减少肺定殖但不改变细胞增殖。在图6A中,显示CCR5拮抗剂对乳癌细胞活力的影响。使MDA-MB-231细胞暴露于递增浓度的马拉维若(倒三角形)或维克利诺(方块)持续48小时,并且通过MTT分析评估细胞活力。图表是来自重复六次进行的代表性实验。在3个独立实验中未发现统计差异。在图6B中,显示用pcDNA3.1+/Zeo+(MDA.载体)或克隆到pCDNA3+Zeo+中的人CCR5(MDA.CCR5)稳定转染的MDA-MB-231细胞中的CCR5表达。在图6C中,MDA.载体对比MDA.CCR5的体外增殖速率的比较显示无差异(ANOVA)。重复六次进行来自2的代表性实验。在图6D中,为了评估马拉维若对已确立转移的生长的体内影响,如所示在注入MDA.pFULG细胞之后10天开始处理小鼠。在图6E中,对照组(红色/方块)和处理组(蓝色/三角形)中的体内BLI的定量(平均值±SEM,n=5)显示生长速率无差异。肿瘤一旦在肺中确立,则马拉维若对其的生长速率无影响。因此,肺中肿瘤块的减小是归因于对肿瘤“归巢(homing)”或扩散到肺中的抑制。图6F显示用来评估CCR5在肺定殖中的作用的实验设计的概要。图6G显示在注入MDA.pFULG细胞之后24小时肺中eGFP+细胞的代表性共焦图像和eGFP+细胞数的定量(图6H)。在每只小鼠2个不同组织切片的3个随机视场(彼此隔开700μm)中计数表达eGFP的细胞(n=5只小鼠/组)。使用学生t检验进行统计分析。显微照片中的比例条,100μm。
现在参看图7A1-7D2。为了确定与CCR5和CCL5富集相关的基因表达信号传导路径,使用KEGG和GO对本文中所讨论的肿瘤样品进行GSEA分析。图7A显示GSEA分析。这些研究显示包括淋巴细胞活化、詹纳斯激活激酶(Janus-activated kinase,JAK)-STAT信号传导以及Toll样受体激活在内的路径的基因表达的富集。CCL5的受体包括CCR1和CCR3。在基底和HER-2基因肿瘤型中CCL5的表达增加与CCR1而非CCR3的增加有关(图7B1-7B5和7C1到7C5)。在接受化学疗法的ER-阴性患者中,与CCR5表达减少的群体相比较,CCR5增加的群体中的无转移存活和无复发存活减少的趋势不明显(图7D1和7D2)。
在图8A-8D中,CCL5对比CCR5、CCR1以及CCR3的表达水平的比较比较了正常乳房和乳癌,显示与健康乳房组织相比较肿瘤中的受体和配体表达水平之间的相关性增加。图8A示出了健康群体中CCL5表达及其受体CCR5、CCR1以及CCR3的热图。所述健康群体此前被描述为2550例乳癌集合中的一部分(厄特尔,A.、迪恩,J.L.、瑞,H.、刘,C.、维特凯维奇,A.K.、努森,K.E.以及努森,E.S.乳癌中RB-路径的破坏:与疾病亚型、疾病特异性预后以及治疗反应的差异性关联.细胞循环,9:4153-4163,2010.)(Ertel,A.,Dean,J.L.,Rui,H.,Liu,C.,Witkiewicz,A.K.,Knudsen,K.E.,and Knudsen,E.S.RB-pathway disruption in breast cancer:differential association withdisease subtypes,disease-specific prognosis and therapeutic response.CellCycle,9:4153-4163,2010.)。
参看图9A-9D2,研究中使用具有基底表现型和分子特征的三种人乳癌细胞系作为模型:MDA-MB-231、Hs578T以及SUM-159(34-37)。通过FACS分析CCR5表达显示在所有3个细胞系中有一个小细胞亚群对于所述受体呈阳性(图2A为MDA-MB-231,图9A和图9C为Hs578T和SUM-159)。因为CCR5激活诱导钙流动(38,39),所以通过CCL5评定钙信号传导的激活。在一个细胞亚群中向培养物中加入CCL5立即诱导出钙流动(图2B为MDA-MB-231,图9B和9D为Hs578T和SUM-159),表明CCR5在基底型乳癌细胞中发挥功能。作为阳性对照,使相同培养物暴露于5%FBS(40)。超过95%的细胞在加入FBS之后,通过相对荧光强度评定的钙流动增加(图2B和图9B、9D1以及9D2)。为了进一步区分CCL5依赖性信号传导,用CCR5表达载体稳定转导SUM159细胞,并且将对CCL5和FBS的Ca+2反应进行对比(图10C和10D对比图10E和10F)。在CCR5过表达细胞中CCR5诱导Ca+2信号传导,而两种细胞系对FBS诱导的Ca+2激活作出的反应类似(图10A1-10F)。
鉴于CCR5拮抗剂抑制CCR5减少钙信号传导和细胞侵袭这一发现,确定了马拉维若对肺转移的体内影响。在实验转移模型中,在Luc2-eGFP慢病毒载体内转导MDA-MB-231细胞(MDA.pFULG细胞)。Luc2基因是Luc的密码子优化型式,并且表达此报导基因的细胞比未修饰Luc基因亮10到100倍(30)。在将MDA.pFULG细胞注入到小鼠尾静脉中之后,非侵袭性BLI使得能够早期检测到乳癌转移(41)。每周一次进行BLI持续5周,并且将临死前的光亮度用作肿瘤负荷的替代测量值。用马拉维若(8mg/kg,每天两次)处理的小鼠显示与媒剂处理的小鼠相比较肺转移的数目和尺寸都明显减少(图5A和5B、图11A和11B)。为了避免由于不适当成像而遗漏转移的可能性,对肺进行离体成像、印度墨染色(图5C1和5C2)以及组织学(图5E)。组织学分析证实了肿瘤负荷对应于生物发光,如此前所示(30)。在50%的马拉维若处理的小鼠中转移性肿瘤仍然可检测到,但其平均尺寸减小了65%(图5D和5F)。有趣的是,对照小鼠肺中CCR5表达的分析显示CCR5+分数发生8倍富集(图12A到12F)。总起来说,这些结果提供了CCR5拮抗剂减少体内乳癌转移的证据。
鉴于基底型乳癌侵袭性的临床特性并且缺乏针对它的靶向疗法,评估CCL5/CCR5在人乳癌细胞系MDA-MB-231、Hs578T以及SUM-159中的侵袭和转移中的重要性。这些细胞系反映了基底亚型乳癌的临床病理学特征(包括缺乏HER-2、ER以及孕酮受体)、基底样分子特征、特定信号传导路径(例如低氧或EGF受体反应)的激活以及上皮-间叶细胞转换蛋白质的过表达(FN、VIM以及基质金属蛋白酶2;参看34-37)。如通过FACS分析,此项研究中所用的细胞系内,只有一小部分细胞表达CCR5。所述研究通过反转录酶PCR确证了CCR5在MDA-MB-23细胞中的表达,并且通过FACS分析显示CCR5蛋白的存在(图13A1-13D1),并且显示与正常乳房组织相比较CCR5免疫组织化学染色主要定域在乳癌上皮细胞(图14A-14D)。
本文所披露的结果显示CCL5激活基底样人乳癌细胞中的钙流动。通过使用选择性CCR5拮抗剂马拉维若和维克利诺(两者的IC50都在30nmol/L以下;参看44,45),已经显示CCL5激活的信号传导是由CCR5介导的。然而,通过FACS测定,CCL5反应性细胞的分数(MDA-MB-231和Hs578T细胞分别为10%和12%)比CCR5表达细胞的百分比高。这可能归因于Ca2+激活分析的灵敏度比FACS分析的灵敏度大。此外,CCL5诱导的钙重新分布未被CCR5拮抗剂完全阻断。这可能是由其它受体对CCL5,即CCR1和CCR3的表达引起的。CCR5已经被鉴别为MDA-MB-231细胞中的主要CCL5受体(13),并且在MDA-MB-231或Hs578T细胞系(8)和乳房肿瘤样品中都不存在CCR1和CCR3转录物(11)。CCR1和CCR3能够通过FACS检测到(图13A-13D),提示了对CCR5拮抗剂的不完全反应的一种可能机制。
一方面,本发明提供一种鉴别在过表达选自由NeuT、Ha-Ras、c-Src及其组合组成的群组的内源性或病毒转导的致癌基因的肿瘤细胞中下调CCR5和/或其一或多种配体的表达的候选化合物的体内方法。在一个实施例中,所述方法包含(a)向肿瘤细胞的动物模型施用候选化合物;(b)并且测量所述动物模型中的CCR5RNA或蛋白质表达水平,其中如果所述动物模型中的CCR5RNA或蛋白质表达水平与未处理动物模型中的CCR5RNA或蛋白质表达水平相比减少,那么所述候选化合物被鉴别为在过表达选自由NeuT、Ha-Ras、c-Src及其组合组成的群组的内源性或病毒转导的致癌基因的肿瘤细胞中下调CCR5和/或其一或多种配体的表达的化合物。在一个实施例中,肿瘤细胞包含哺乳动物前列腺癌细胞。在一个实施例中,肿瘤细胞包含具有已经用带有选自由NeuT、Ha-Ras、c-Src及其组合组成的群组的致癌基因的反转录病毒载体感染的一组初级哺乳动物上皮细胞中的至少一或多者的哺乳动物前列腺癌细胞系。
适合用于本发明的例示性哺乳动物前列腺癌细胞系包括(但不限于)2012年5月14日提交的美国临时专利申请号61/646,586中所披露的哺乳动物前列腺癌细胞系,所述申请通过全文引用的方式结合在此。在一个实施例中,哺乳动物前列腺癌细胞系包含已经用带有致癌基因的反转录病毒载体感染的一组初级哺乳动物上皮细胞中的至少一或多者。在一个实施例中,致癌基因是选自由以下组成的群组:c-Myc、Ha-Ras、NeuT、c-Src及其组合。在哺乳动物前列腺癌细胞系的一个实施例中,表达选自由以下组成的群组的致癌基因:c-Myc、Ha-Ras、NeuT、c-Src及其组合。哺乳动物前列腺癌细胞系可以包括任何适合的哺乳动物细胞,包括初级鼠类上皮细胞。在一些实施例中,所述初级哺乳动物上皮细胞是来源于任何具有免疫能力的哺乳动物。在一个实施例中,所述初级哺乳动物上皮细胞是来源于选自由以下组成的群组的具有免疫能力的哺乳动物:啮齿动物,包括大鼠和小鼠。
在一些实施例中,适合的癌症动物模型包含植入有用选自由以下组成的群组的一组致癌基因中的一或多者转化的癌细胞系的具有免疫能力的哺乳动物:c-Myc、Ha-Ras、NeuT、c-Src及其组合。在一个实施例中,癌症动物模型是使用本发明的哺乳动物前列腺癌细胞系建立的具有免疫能力的转基因小鼠,其产生能够产生可基于选自由以下组成的群组的一组致癌基因中的一或多者的表达水平检测的分子基因特征的前列腺肿瘤:c-Myc、Ha-Ras、NeuT、c-Src及其组合。
在一些实施例中,适合的癌症动物模型是通过体外方法产生。在一个实施例中,产生适合的动物模型的体外方法包括产生永生化初级哺乳动物上皮细胞。在一个实施例中,体外产生永生化初级哺乳动物上皮细胞的方法包含用带有选自由c-Myc、Ha-Ras、NeuT、c-Src及其组合组成的群组的致癌基因的反转录病毒载体感染初级哺乳动物上皮细胞以提供受感染细胞,其中所述初级哺乳动物上皮细胞能够被所述反转录病毒载体感染并且处于使得c-Myc、Ha-Ras、NeuT、c-Src及其组合在所述感染细胞中表达的条件下。
实例
A.材料和方法
A.1.乳癌患者数据集和统计分析
使用此前从公共存储库基因表达综合数据库(23)和阵列表达(24)编译的微阵列数据集(21)来评估在临床样品背景下的CCR5和CCL5表达。将这个数据集中的样品分配成5种典型乳癌亚型,包括管状A型、管状B型、类似正常型、基底型以及HER-2过表达疾病。在这5种亚型中的微阵列样品的分类通过计算它们针对各亚型的代表性表达谱质心的相关性且将样品分配为具有最高对应相关性系数的亚型来实现(25)。最大相关性系数在0.3以下的样品认为是未分类的。随后特定地在管状A、管状B、基底、类似正常以及HER-2亚型中进行CCL5和CCR5转录的分析。使用双尾学生t检验评估在这些样品子集中的平均基因特征量值的差异性表达。使用卡普兰-麦尔分析来评估样品子集内的存活趋势。也生成CCL5对比CCR5样品的散点图来观察特定针对于各亚型的共调节图案。对于这些散点图,将基因谱集中在中间且按比例调整为单一SD。
A.2.细胞系和细胞培养物
将MDA-MB-231、MCF-7以及Hs578T细胞维持在补充有10%FBS的杜尔贝科氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco's Modified Eagle'sMedium,DMEM)中。将SUM-159细胞(最好由史蒂芬伊瑟尔博士,密歇根州,底特律,韦恩州立大学(Dr.Stephen Ethier,Wayne StateUniversity,Detroit,MI)提供)维持在补充有4μg/mL胰岛素、1μg/mL氢化可的松以及5%FBS的哈姆氏(Ham's)F-12中。将MCF-10A细胞的致癌基因转化的衍生物(MCF10A-NeuT、MCF10A-Src以及MCF10A-Ras;参看26)维持在补充有4mg/mL胰岛素、10ng/mL EGF以及1mg/mL氢化可的松的DMEM:哈姆氏F-12(50/50)中。在所有培养基中包括总共100μg/mL的青霉素和100μg/mL的链霉素。在37℃下在5%CO2中培养细胞。对于体外处理,使马拉维若溶解在二甲亚砜(DMSO)中且在培养基中稀释。处理和对照培养物中的的最终浓度是0.5%。使维克利诺溶解在培养基中。
A.3.荧光激活细胞分选分析
CCR5的细胞标记和荧光激活细胞分选(FACS)分析是基于此前公开案(27),作了少量改动。在标记之前,用正常小鼠IgG(1/100)和纯化大鼠抗小鼠FcγIII/II受体抗体(1/100;Pharmingen)将细胞阻断30分钟且随后用别藻蓝蛋白(APC)标记的CCR5抗体(安迪生物公司)培育细胞。在4℃下进行所有实验。在FACSCalibur流式细胞仪(碧迪生物科学公司(BD Biosciences))上进行样品分析。用FlowJo软件(树星公司(Tree Star,Inc.))分析这些数据。
A.4.侵袭分析
如此前所报导(12)进行3维侵袭分析。简单来说,将100μL的1.67mg/mL大鼠尾部胶原蛋白I型(碧迪生物科学公司)用移液管移取到24孔8μm孔隙的传斯维尔(Transwell)(康宁(Corning))的顶部腔室中。将传斯维尔在37℃下隔夜培育以使胶原蛋白凝固。随后使总共30,000个细胞在传斯维尔膜的底部上接种且使它们附着。将无血清的生长培养基放置到底部腔室中,而15ng/mL的CCL5或5%FBS在上部腔室的培养基中用作化学引诱剂。随后历时3天通过上述胶原蛋白将细胞化学引诱穿过过滤器。将细胞固定在4%甲醛中,用0.2%曲拉通X(Triton-X)在PBS中渗透并且随后用40μg/mL碘化丙锭(PI)染色2小时。在基梅尔癌症中心生物成像设施(Kimmel Cancer CenterBioimaging Facility)使用蔡司(Zeiss)LSM 510Meta倒置共焦显微镜通过来自过滤器底部的在×10放大率下的共焦z-切片(每20μm一个切片)分析荧光。
A.5.细胞内钙分析
如此前所报导(28)在荧光共焦显微镜下监视由人类癌细胞系中的CCL5或FBS诱导的钙反应。简单来说,将乳癌细胞在4孔labtek腔室(能肯(Nunc))中以104细胞/cm2接种并且培育1天。在12小时饥饿之后,通过用2mmol/L Fluo-4-AM(分子探针公司(MolecularProbes))在HBSS中将细胞培育30分钟来标记细胞,将细胞洗涤两次并且在显微镜下成像之前再培育30分钟。在培育箱在37℃下的情况下使用蔡司LSM 510Meta倒置共焦显微镜收集延时图像。通过在添加CCL5(60ng/mL)或FBS(5%)之后Fluo-4-AM的荧光强度的变化来测定相对细胞内Ca2+浓度并且将它计算为(FIt-FI0)/FI0。
A.6.MTT分析
MTT分析是用于测量细胞酶的活性的比色分析,所述细胞酶将四唑染料溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑(黄色四唑)(MTT)还原成它的不溶甲腊,产生紫色。这些分析测量借助NAD(P)H依赖性细胞氧化还原酶的细胞代谢活性并且可以在限定条件下反映活细胞数目(细胞增殖)。也可以使用四唑染料分析来测量潜在药剂和毒性材料的细胞毒性(活细胞丧失)或细胞抑制活性(从增殖变化为静止状态)。因为MTT试剂对光敏感,所以通常在黑暗中进行MTT分析。
使用可溶四唑盐MTT分析(29)估计CCR5拮抗剂对细胞活力和增殖率的影响。通过活细胞的线粒体来还原MTT并且还原的甲腊的量和活细胞的数目成比例。在暴露于药物72小时之后,用1mg/mL MTT将细胞培育90分钟。随后,使还原的(不溶性并且有颜色)甲臜溶解在DMSO中并且在570nm下以分光光度法测量。如此前所描述(18)在用亚克隆到pcDNA3.1+/Zeo+载体(最好由埃莉诺菲什博士,加拿大,安大略省,多伦多,多伦多大学(Dr.Eleanor Fish,University of Toronto,Toronto,ON,Canada)提供)中的全长人类CCR5转染并且用匀霉素(200μg/mL)进行选择的MDA-MB-231细胞中研究CCR5过表达在乳癌细胞增殖中的影响。使用96孔微量培养板一式六份进行MTT分析。
A.7.病毒细胞转导
编码萤火虫荧光素酶2(Luc2)-eGFP融合蛋白质的慢病毒载体是来自桑吉夫S.甘比尔博士(Dr.Sanjiv S.Gambhir)(加利福尼亚州,斯坦福,斯坦福大学,医学院(School of Medicine,Stanford University,Stanford,CA);参看30)的慷慨馈赠。在如萨莱尔(Zahler)和同事所描述的方案(31)之后进行慢病毒繁殖。在8mg/mL聚凝胺(西格马(Sigma))存在的情况下在感染复数为20下将乳癌细胞系转导24小时(30,31)。
A.8.实验转移分析和生物发光成像
用无酶催化的细胞解离缓冲液(不含Ca2+和Mg2+的PBS中的4mmol/L EDTA)分开表达Luc2-eGFP的MB-MDA-231细胞(在文章剩余部分中称为MDA.pFLUG),使它们再悬浮在无Ca2+和Mg2+的杜尔贝科氏PBS中并且将它们立即注射到8周大、雌性非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠(国家癌症研究所,马里兰州贝塞斯达(NCI,Bethesda MD))的尾静脉中。每只小鼠接受106个细胞。通过用马拉维若(每12小时8mg/kg)或媒剂(酸化水中的5%DMSO;参看32)经口管饲来处理小鼠。紧接在注射之后或10天后针对分析确立转移的增殖的实验开始处理。对于体内生物发光成像(BLI),用200μL的d-荧光素(30mg/mL)向小鼠提供腹膜内(i.p.)注射。用异氟醚(在1L/min氧气中2%)麻醉小鼠并且使用IVIS XR系统(卡立泊生命科学公司(Caliper Life Sciences))在d-荧光素注射10到15分钟之后获得生物发光图像。获得时间在10秒(针对较迟时间点)到5分钟(针对较早时间点)范围内。将数据表示为总光子通量并且使用生动图像3.0软件(Living Image 3.0software)(卡立泊生命科学公司)分析数据。对于离体BLI,将d-荧光素在PBS中稀释至300μg/mL的最终浓度并且在成像之前使用它来将刚分离的肺浸泡2到3分钟。如此前所报导(33)将一些肺用印度墨染色或用苏木精和曙红加工并且染色来证实肺部肿瘤的存在。对于归巢分析,在静脉内注射MDA.pFULG细胞24小时之后使小鼠安乐死。用PBS灌注肺、用刚制备的甲醛(在PBS中4%)固定肺并且将肺冷冻在最优切削温度(樱花精机(Sakura Finetek))中。用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚将冷冻切片(10μm)对比染色,通过共焦显微术分析冷冻切片。动物实验由托马斯杰佛森大学机构动物饲养和使用委员会(Thomas Jefferson University's Institutional Animal Care andUse Committee)批准。
A.9.试剂和抗体
从安迪生物公司购买CCL5(目录号278-RN)和抗CCR5APC抗体(目录号FAB1802A)。兔抗人类CCR5多克隆抗体(金斯特(GenScipt);目录号A00979)用于免疫组织化学染色。从碧迪生物科学公司购买大鼠尾部胶原蛋白I型。从赛莱克化学制品公司(SelleckChemicals)获得维克利诺和马拉维若。从戈尔德生物技术公司(GoldBiotechnology)获得荧光素。
B.结果
B.1.基底乳癌中的活性CCL5/CCR5信号传导
为了通过基因亚型检查CCL5和它的受体CCR5的相对丰度,在包含来自27个独立研究的2,254份人类乳癌样品的组合微阵列数据库内进行询问(21)。和类似正常、管状A以及管状B亚型相比,基底和HER-2亚型的CCL5和CCR5的相对丰度显著增加(图1A)。CCL5和CCR5的增加的表达在单独乳癌样品中正相关并且相关性在基底和HER-2亚型中非常显著(图1B1到1B5)。在基底和HER-2亚型中有CCL5/CCR5阳性特征的患者的比例是超过58%(图1C)。和此前报导一致,这个数据库中的案例的临床信息显示在基底、管状B以及HER-2亚型中患有转移的概率增加(图1D)。
为了确定和CCR5和CCL5富集相关的基因表达信号传导路径,使用KEGG和GO对这些肿瘤样品进行GSEA分析(图7A)。这些研究显示包括淋巴细胞活化、詹纳斯激活激酶-STAT信号传导以及Toll样受体激活在内的路径的基因表达的富集(图7A)。CCL5的受体包括CCR1和CCR3。在基底和HER-2基因肿瘤型中CCL5的表达增加和CCR1而非CCR3的增加有关(图7B1到7B5和7C1到7C5)。在接受化学疗法的ER-阴性患者中,和CCR5表达减少的群体相比较,CCR5增加的群体中的无转移存活和无复发存活减少的趋势不明显(图7D1和7D2)。CCL5对比CCR5、CCR1以及CCR3的表达水平的比较比较了正常乳房和乳癌,显示和健康乳房组织相比较肿瘤中的受体和配体表达水平之间的相关性增加(图8A)。
B.2.CCL5促进乳癌Ca
2+
信号传导和细胞侵袭
在本文中所描述的研究中使用具有基底表现型和分子特征的三种人乳癌细胞系作为模型:MDA-MB-231、Hs578T以及SUM-159(34-37)。通过FACS分析CCR5表达显示在所有3个细胞系中有一个小细胞亚群对于所述受体呈阳性(图2A是MDA-MB-231并且图9A和图9C是Hs578T和SUM-159)。因为CCR5激活诱导钙流动(38,39),所以通过CCL5评定钙信号传导的激活。在一个细胞亚群中向培养物中加入CCL5立即诱导出钙流动(图2B为MDA-MB-231并且图9B1/9B2和9D1/9D2为Hs578T和SUM-159),表明CCR5在基底型乳癌细胞中发挥功能。作为阳性对照,使相同培养物暴露于5%FBS(40)。超过95%的细胞在加入FBS之后,通过相对荧光强度评定的钙流动增加(图2B1/2B2和图9B1/9B2以及9D1/9D2)。为了进一步区分CCL5依赖性信号传导,用CCR5表达载体稳定转导SUM159细胞,并且将对CCL5和FBS的Ca+2反应进行对比(图10C和10D对比图10E和10F)。在CCR5过表达细胞中CCR5诱导Ca+2信号传导,而两种细胞系对FBS诱导的Ca+2激活作出的反应类似(图10A1-10F)。
随后,使用3D迁移分析评定CCR5激活对乳癌细胞侵袭的影响。CCL5诱导基底MDA-MB-231、Hs578T、SUM-159而非管状MCF-7细胞的侵袭(图2C和2D)。和MCF10A载体转导细胞相比,CCL5促进了被工程改造来表达NeuT、H-Ras或c-Src致癌基因的MCF-10A细胞的侵袭(图2E和2F),提示了CCL5反应可以在转化期间获得并且需要特定的协作致癌信号。CCL5诱导细胞侵袭的发现引导我们检查CCR5+细胞对比CCR5-细胞的迁移能力。在同一种SUM-159乳癌细胞系内,CCR5+细胞显示大约40倍高的细胞侵袭性(图2G和2H),指示CCR5的表达和促侵袭表型相关。
B.3.CCR5拮抗剂阻断乳癌钙信号传导和细胞侵袭
CCR5在HIV感染中的重要性使得研发靶向这种受体的不同药物。因此,指示CCR5拮抗剂马拉维若和维克利诺是否能够阻断CCL5/CCR5在基底乳癌细胞中的信号传导。两种CCR5拮抗剂都阻断了CCL5诱导的钙移动。在MDA-MB-231细胞中,马拉维若和维克利诺分别将钙反应抑制了65%和90%(图3A和3B)。在Hs578T细胞中用两种药物进行类似观察(图3C1到3C4和3D),指示在不同基底乳癌细胞中表达的CCR5对药物抑制敏感。
为了评估CCR5在细胞迁移和侵袭中的功能相关性,在3D侵袭分析中测试马拉维若和维克利诺的影响。使用2种不同细胞系,发现两种CCR5拮抗剂以100nmol/L的临床相关浓度抑制FBS诱导的乳癌细胞侵袭(图4A-4D)。因此,可以通过使用特定拮抗剂来消除CCR5的促侵袭影响。
B.4.CCR5抑制阻断乳癌在体内转移
鉴于CCR5拮抗剂抑制CCR5减少钙信号传导和细胞侵袭这一发现,确定了马拉维若对肺转移的体内影响。在实验转移模型中使用在Luc2-eGFP慢病毒载体内转导的MDA-MB-231细胞(MDA.pFULG细胞)。Luc2基因是Luc的密码子优化型式,并且表达此报导基因的细胞比未修饰Luc基因亮10到100倍(30)。在将MDA.pFULG细胞注入到小鼠尾静脉中之后,非侵袭性BLI使得能够早期检测到乳癌转移(41)。每周一次进行BLI持续5周,并且将临死前的光亮度用作肿瘤负荷的替代测量值。用马拉维若(8mg/kg,每天两次)处理的小鼠显示和媒剂处理的小鼠相比较肺转移的数目和尺寸都明显减少(图5A和B,图11A和11B)。为了避免由于不适当成像而遗漏转移的可能性,对肺进行离体成像、印度墨染色(图5C1和5C2)以及组织学(图5E)。组织学分析证实了肿瘤负荷对应于生物发光,如此前所示(30)。在50%的马拉维若处理的小鼠中转移性肿瘤仍然可检测到,但其平均尺寸减小了65%(图5D和5F)。有趣的是,对照小鼠肺中CCR5表达的分析显示CCR5+分数发生8倍富集(图12A到12F)。总起来说,这些结果提供了CCR5拮抗剂减少体内乳癌转移的证据。
B.5.CCR5拮抗剂削弱肺定殖而非细胞增殖或肿瘤生长
确定通过马拉维若减少转移性肿瘤是否涉及细胞增殖及/或靶器官定殖变化。分析CCR5抑制对体外和体内细胞活力和增殖的影响。用马拉维若或维克利诺处理MDA-MB-231细胞48小时不影响MTT减少,它用作癌细胞数目的替代测量值(图6A)。一致地,和用空载体转染的细胞相比,CCR5在MDA-MB-231细胞中的过表达不改变它们的增殖率(图6B和6C)。最后,用马拉维若处理有确立肺转移的小鼠不改变肿瘤生长(图6D和6E),指示CCR5激活不促进体外或免疫功能不全小鼠的肺微环境中的基底乳癌细胞的增殖。
在不同体内实验中,检查马拉维若对归巢到肺的乳癌细胞的影响。为了在血浆和组织中达到稳定状态浓度,在静脉内注射MDA.pFULG细胞之前向小鼠投与马拉维若10次(每天两次历时5天)(图6F)。紧接在注射之后通过BLI证实对照和处理组中的相等数目的MDA.pFULG细胞的接种。马拉维若将肺中的eGFP+细胞数目减少了40%(图6G和6H),提示了马拉维若的体内抗转移作用是由从循环中定殖到靶器官中的癌细胞的数目减少造成的。
C.讨论
当前研究首次显示:(i)CCL5/CCR5表达的富集出现在有基底和Her2阳性基因亚型乳癌的患者中;(ii)利用不同致癌基因的永生人类乳房细胞的致癌转化诱导CCL5反应;以及(iii)马拉维若,一种用于治疗亲CCR5HIV感染的经过FDA批准的药物,减少体内转移性肿瘤负荷。
此前研究显示在乳房原发性和转移性肿瘤中CCL5水平升高(9-11),提示了CCL5在获得恶性肿瘤中的作用。本发明显示CCL5和CCR5的表达增加是相关联的并且CCL5/CCR5表达水平在不同基因亚型乳癌中不同。在基底和HER-2亚型中发现CCL5和CCR5的表达增加。一致地,主要在ER-阴性患者中发现CCL5表达增加(42)。CCL5增加也和基底和Her2基因亚型乳癌中的CCR1增加相关。在接受化学疗法的患者的CCR5过表达肿瘤中观察到无转移存活和无复发存活减少的趋势。
鉴于基底型乳癌侵袭性的临床特性并且缺乏针对它的靶向疗法,评价CCL5/CCR5轴在人乳癌细胞系MDA-MB-231、Hs578T以及SUM-159中的侵袭和转移中的重要性。这些细胞系反映了基底亚型乳癌的临床病理学特征(包括缺乏HER-2、ER以及孕酮受体)、基底样分子特征、特定信号传导路径(例如低氧或EGF受体反应)的激活以及上皮-间叶细胞转换蛋白质的过表达(FN、VIM以及基质金属蛋白酶2;参看34-37)。如通过FACS分析,此项研究中所用的细胞系内,只有一小部分细胞表达CCR5。我们的发现和穆勒(Müller)和同事的研究一致,他们的研究通过定量实时PCR(8)显示了CCR5在MDA-MB-231中表达。这些研究通过反转录酶PCR确证了CCR5在MDA-MB-23细胞中的表达,并且通过FACS分析显示CCR5蛋白的存在(图13A1-13D),并且显示和正常乳房组织相比较,CCR5免疫组织化学染色主要定域在乳癌上皮细胞(图14A-14D)。
本文结果显示CCL5激活了基底样人类乳癌细胞中的钙流动,如此前在免疫系统细胞(39,43)和CCR5-转染的细胞(27,44,45)中所描述。通过使用选择性CCR5拮抗剂马拉维若和维克利诺(两者的IC50都在30nmol/L以下;参看44,45),已经显示CCL5激活的信号传导是由CCR5介导的。然而,通过FACS测定,CCL5反应性细胞的分数(MDA-MB-231和Hs578T细胞分别是10%和12%)比CCR5表达细胞的百分比高。这可能归因于Ca2+激活分析的灵敏度比FACS分析的灵敏度大。此外,CCL5诱导的钙重新分布未被CCR5拮抗剂完全阻断。这可能是由其它受体对CCL5,即CCR1和CCR3的表达引起的。CCR5已经被鉴别为MDA-MB-231细胞中的主要CCL5受体(13),并且在MDA-MB-231或Hs578T细胞系(8)和乳房肿瘤样品中都不存在CCR1和CCR3转录物(11)。CCR1和CCR3能够通过FACS检测到(图13A1-13D),提示了对CCR5拮抗剂的不完全反应的一种可能机制。
观察到CCR5+细胞亚群展现侵袭性增加,指示在基底样乳癌细胞中CCR5有利于细胞迁移和侵袭。回应于CCL5的类管状MCF-7细胞的衰竭和此前公开案(12)一致。这些研究也显示用马拉维若或维克利诺抑制CCR5在不影响细胞活力的情况下减少了体外FBS诱导的乳癌细胞侵袭。CCR5拮抗剂阻断FBS诱导的侵袭的发现是新颖的并且提示了CCR5激活促成存在不同趋化性和生长信号的体内转移的产生。参与CCR5调节FBS激活的侵袭性的机制是未表征的但它们可以包括其它GPCR(46)的杂二聚和配体亲和力调节,或成长因子受体(47)或整合素介导的信号传导(48)的转录激活,如非癌细胞中所描述。
通过将MDA.pFULG细胞注入到免疫缺陷小鼠的循环中并且用临床相关剂量的药物处理它们来显示马拉维若的体内抗转移性影响。在人类中,300mg的口服剂量产生的平均Cmax是1,200nmol/L(49),而在小鼠中,16mg/kg产生的平均Cmax是1,045nmol/L(32)。因为在临床配置中药物每天服用两次,所以将16mg/kg/d分成2份剂量并且在本文中所描述的实验期间投与。马拉维若显著减少肺肿瘤负荷。尽管已经提出药物CCR5抑制可以有益于患乳癌的患者,但是据我们所知这是显示系统性投与CCR5拮抗剂减少基底乳癌细胞的转移性定殖的第一个研究。
马拉维若的抗转移性影响不是由确立转移的生长变化造成。CCL5激活CCR5驱使CCR5转染的MCF-7乳癌细胞(18)和前列腺癌细胞(50)增殖,但是这个研究和其它研究(13)显示CCL5/CCR5轴在基底样MDA-MB-231细胞的细胞增殖或存活中不起作用。另外,在MDA-MB-231细胞中通过显性阴性形式的CCR5(CCR5Δ32)抑制CCR5表面表达不改变体内增殖或凋亡反应(17)。另一方面,发现马拉维若减少MDA.pFULG癌细胞的肺定殖。这一结果和在乳癌细胞内抑制CCR5表达或向带有肿瘤的小鼠投与抗CCL5中和抗体减少了由共注射间叶细胞干细胞(MSC;参看13)诱导的增强转移能力的此前研究一致。作者将癌细胞外渗鉴别为受CCL5/CCR5抑制影响的关键转移步骤(13)。这些数据共同支持了CCR5拮抗剂阻断基底乳癌细胞到达转移部位的能力而非在到达之后抑制它们的增殖或存活的作用。阻断癌细胞归巢到转移部位是真正抗转移性药物(51)所需的特征。因此,CCR5拮抗剂可以适用作有CCR5过表达的乳房基底肿瘤或CCR5促进转移的其他肿瘤类型(例如前列腺癌(50)或胃癌(52))的辅助疗法。
所属领域的技术人员应了解,可以在不脱离上文所显示并且描述的例示性实施例的广泛发明概念情况下改变所述例示性实施例。因此,应理解本发明不限于所显示并且描述的例示性实施例,但是希望涵盖如由权利要求所定义的在本发明的精神和范畴内的修改。举例来说,例示性实施例的特定特征可以是或可以不是所要求的发明的部分并且可以将所揭示的实施例的特征组合。本文中除非特定阐述,否则术语“一个(a/an)”和“所述”不限于一个元素但是替代地应理解为意指“至少一个”。
应理解已经将本发明的图式和描述中的至少一些简化以集中于和本发明的清楚理解相关的元素,出于明确性的目的,在省略时所属领域的技术人员将理解的其他元素也可以构成本发明的一部分。但是,因为这些元素在所属领域中熟知并且因为它们不必促进更好地理解本发明,所以本文中未提供这些元素的描述。
另外,就方法不依赖于本文中阐述的步骤的特定顺序来说,不应将步骤的特定顺序理解为限制权利要求。针对本发明的方法的权利要求不应限于以所写顺序执行它们的步骤,并且所属领域的技术人员可以容易理解步骤可以改变并且仍然在本发明的精神和范畴内。
本文所引用的所有参考文献,包括公开案、专利申请案以及专利特此以引用的方式并入,其引用程度就如同每一个参考文献单独地并且特定地指示为以引用的方式并入并且全文阐述于本文中一般。
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Claims (14)
1.一种判定患有癌症的受试者是否处于出现所述癌症转移的风险中的方法,所述方法包含:
(a)从所述患有癌症的受试者获得生物样品;
(b)测定所述生物样品中的CCR5表达水平和/或至少一种CCR5配体的表达水平;以及
(c)如果在步骤(b)中所测定的所述CCR5表达水平和/或所述至少一种CCR5配体的表达水平与对照样本中的CCR5表达水平和/或至少一种CCR5配体的表达水平相比较增加,那么所述受试者被鉴别为很可能处于出现所述癌症转移的风险中。
2.根据权利要求1所述的方法,其进一步包含如果所述受试者被鉴别为很可能处于出现所述癌症转移的风险中,那么通过向所述受试者施用CCR5拮抗剂来治疗、预防或管理所述癌症转移。
3.根据权利要求2所述的方法,其中所述CCR5拮抗剂阻断所述癌症的转移。
4.根据权利要求2所述的方法,其中所述CCR5拮抗剂在除针对所述癌症的初级、主要或初始治疗之外向所述受试者施用。
5.根据权利要求1所述的方法,其中所述癌症是选自由以下组成的群组:急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓细胞性白血病、骨髓母细胞性白血病、前髓细胞性白血病、骨髓单核细胞性白血病、单核细胞性白血病、红白血病白血病、骨髓发育不良症候群;慢性骨髓细胞性(粒细胞性)白血病、慢性淋巴细胞性白血病、毛状细胞白血病;真性红细胞增多症;淋巴瘤、霍奇金氏病、非霍奇金氏病;多发性骨髓瘤、郁积型多发性骨髓瘤、非分泌型骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、浆细胞白血病、孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤;瓦萨罗德斯氏巨球蛋白血症;意义不明确的单克隆丙种球蛋白病;良性单克隆丙种球蛋白病;重链疾病;骨骼和结缔组织肉瘤、骨骼肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性巨细胞瘤、骨骼纤维肉瘤、脊索瘤、骨膜肉瘤、软组织肉瘤、血管肉瘤(血管内皮瘤)、纤维肉瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肉瘤、淋巴管肉瘤、神经鞘瘤、横纹肌肉瘤、滑膜肉瘤;脑肿瘤、神经胶瘤、星形细胞瘤、脑干神经胶瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、非神经胶质肿瘤、听神经纤维瘤、颅咽管瘤、神经管胚细胞瘤、脑膜瘤、松果体细胞瘤、成松果体细胞瘤、原发性脑淋巴瘤;乳癌,包括(但不限于)乳腺管癌瘤、腺癌、小叶(小细胞)癌瘤、管内癌瘤、髓质乳癌、黏液性乳癌、管状乳癌、乳头状乳癌、佩吉特氏病以及发炎性乳癌;肾上腺癌、嗜铬细胞瘤和肾上腺皮质癌瘤;甲状腺癌、乳头状或卵泡甲状腺癌、髓质甲状腺癌和退行性甲状腺癌;胰脏癌、胰岛素瘤、胃泌素瘤、胰升血糖素瘤、血管活性肠肽瘤、生长抑素分泌肿瘤以及类癌瘤或胰岛细胞肿瘤;垂体癌,库欣氏病、促乳素分泌肿瘤、肢端肥大症以及尿崩症;眼部癌症、眼部黑素瘤、虹膜黑素瘤、脉络膜黑素瘤以及睫状体黑素瘤以及成视网膜细胞瘤;阴道癌、鳞状细胞癌、腺癌以及黑素瘤;外阴癌症、鳞状细胞癌、黑素瘤、腺癌、基底细胞癌、肉瘤以及佩吉特氏病;颈椎癌症、鳞状细胞癌和腺癌;子宫癌、子宫内膜癌瘤、子宫肉瘤;卵巢癌、卵巢上皮癌瘤、交界性肿瘤、胚细胞肿瘤以及间质瘤;食道癌、鳞状细胞癌、腺癌、腺样囊性癌症、粘液表皮样癌、腺鳞癌瘤、肉瘤、黑素瘤、浆细胞瘤、疣状癌以及燕麦细胞(小细胞)癌瘤;胃癌、腺癌、蕈伞型(息肉状)、溃疡型、表面扩散型、弥散性扩散型腺癌、恶性淋巴瘤、脂肉瘤、纤维肉瘤以及癌肉瘤;结肠癌;直肠癌;肝癌、肝细胞癌和肝母细胞瘤;胆囊癌、腺癌;胆管癌、乳头状癌症、结节状癌症以及弥散性癌症;肺癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞癌(表皮样癌瘤)、腺癌、大细胞癌和小细胞肺癌;睾丸癌、胚组织瘤、精原细胞瘤(退行性、经典(典型)、精母细胞性)、非精原细胞瘤、胚胎癌、畸胎瘤、绒膜癌(卵黄囊瘤)、前列腺癌、前列腺上皮内瘤形成、腺癌、平滑肌肉瘤以及横纹肌肉瘤;阴茎癌;口腔癌、鳞状细胞癌;基底癌症;唾液腺癌、腺癌、粘液表皮样癌以及腺样囊性癌瘤;咽癌、鳞状细胞癌和疣状;皮肤癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌和黑素瘤、表面扩散黑素瘤、结节状黑素瘤、雀斑恶性黑素瘤、肢端雀斑黑素瘤;肾脏癌、肾细胞癌、腺癌、肾上腺样瘤、纤维肉瘤、移行细胞癌(肾盂和/或尿道);威尔姆斯肿瘤;膀胱癌、移行细胞癌、鳞状细胞癌、腺癌、癌肉瘤、黏液肉瘤、骨原性肉瘤、内皮肉瘤、淋巴内皮肉瘤、间皮瘤、滑膜瘤、血管母细胞瘤、上皮癌瘤、囊腺癌、支气管癌、汗腺癌瘤、皮脂腺癌瘤、乳头状癌以及乳头状腺癌。
6.根据权利要求1所述的方法,其中所述癌症是选自由基底乳癌和Her2阳性乳癌组成的群组。
7.根据权利要求2所述的方法,其中所述CCR5拮抗剂是选自由以下组成的群组:4,4-二氟-N-[(1S)-3-[(1R,5S)-3-(3-甲基-5-丙烷-2-基-1,2,4-三唑-4-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-1-苯基丙基]环己烷-1-甲酰胺(“马拉维若”)和(4,6-二甲基嘧啶-5-基)-[4-[(3S)-4-[(1R)-2-甲氧基-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基]-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基]甲酮(“维克利诺”)。
8.根据权利要求2所述的方法,其中所述CCR5拮抗剂是选自由以下组成的群组:4,4-二氟-N-[(1S)-3-[(1R,5S)-3-(3-甲基-5-丙烷-2-基-1,2,4-三唑-4-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-1-苯基丙基]环己烷-1-甲酰胺(“马拉维若”);
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基环丁烷甲酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基环戊烷甲酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基-4,4,4-三氟丁酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-苯基丙基-4,4-二氟环己烷甲酰胺;
N-(1S)-3-3-(3-异丙基-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-4-基)-外-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基-1-(3-氟苯基)丙基-4,4-二氟环己烷甲酰胺;及其药学上可接受的盐或溶剂合物。
9.根据权利要求2所述的方法,其中所述CCR5拮抗剂是选自由以下组成的群组:
N-{3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2H-吡喃-4-甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-羟基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
2-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环丙烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-3-呋喃甲酰胺;
3,3,3-三氟-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2-呋喃甲酰胺;
1-(乙酰基氨基)-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
1-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
1-氨基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}环戊烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氧代-4-吡咯烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基)3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[6-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{(1S)-3-[3-外-(3-{4-[(甲基磺酰基)氨基]苯甲基}-1,2,4-噁二唑-5-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3,3,3-三氟-N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
N-{(1S)-3-[7-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-{(1S)-3-[7-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[7-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-3-硫杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基]-1-苯基丙基}环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-[(1S)-3-(3-内-{[2-(4-氟苯基)乙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]乙酰胺;
N-[(1S)-3-(3-{[3-内-(4-氟苯基)丙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]环丁烷甲酰胺;
N-[(1S)-3-(3-{[3-外-(4-氟苯基)丙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]环丁烷甲酰胺;
2-环丙基-N-[(1S)-3-(3-外-{[2-(4-氟苯基)乙酰基]氨基}-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基)-1-苯基丙基]乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基)}1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-3-呋喃甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2H-吡喃4-甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}四氢-2-呋喃甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-内-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
3-[({(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}氨基)羰基]-1-氮杂环丁烷甲酸甲酯;
N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氮杂环丁烷甲酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
2-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-吡咯烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-内-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氧代-4-吡咯烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-乙基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-乙基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)乙酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-((1S)-1-苯基-3-{3-外-[2-(三氟甲基)-1H-苯并咪唑-1-基]-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基}丙基)乙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N(1S)-3-[3-外-(1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N(1S)-3-[3-外-(5-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基)3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(5-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(5-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(5-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
(2S)-1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氮杂环丁烷甲酰胺;
(2R)-1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-氮杂环丁烷甲酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-吡咯烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-(三氟甲基)环丙烷甲酰胺;
2-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-甲基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
2-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-甲氧基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-l-苯基丙基}丙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-甲基-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
3-乙基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-2-甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
3-乙基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-甲基-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氧杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-甲基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
1-乙酰基-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-1-丙酰基-3-氮杂环丁烷甲酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-2-甲氧基乙酰胺;
N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
N{-1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}-3-甲氧基丙酰胺;
2-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}乙酰胺;
3-[乙酰基(甲基)氨基]-N-{(1S)-3-[3-外-(4-氟-1H-苯并咪唑-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-苯基丙基}丙酰胺;及其药学上可接受的盐。
10.根据权利要求4所述的方法,其中所述转移是选自由以下组成的群组的一或多种器官中的肿瘤转移:肝、脑、膀胱、肺、肾上腺、肾脏、骨骼及其组合。
11.根据权利要求2所述的方法,其中所述CCR5拮抗剂与针对癌症的其它疗法伴随地或并行地施用。
12.根据权利要求2所述的方法,其中所述CCR5拮抗剂与其它辅助疗法并行地施用或在其它辅助疗法之后施用。
13.根据权利要求2所述的方法,其中所述CCR5受体拮抗剂改善所述患有癌症的受试者的预后。
14.根据权利要求2所述的方法,其中所述CCR5受体拮抗剂通过阻断所治疗的所述癌症的转移来改善伴随地或并行地施用的癌症疗法的治疗效果,进而有助于改善所述癌症疗法的临床结果。
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