CN115003325A - 因子xi/xia抗体的药物制剂和剂量方案 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及抗因子XI和/或活化的因子XI(因子XIa)抗体或其抗原结合片段的药物制剂。还提供了此类抗体或其抗原结合片段的剂量方案、包含其的药物制剂以及用于治疗血栓栓塞性疾病或相关病症的药物制剂。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年12月20日提交的美国临时专利申请第62/951,887号的权益和优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。
序列表
本申请包含以ASCII格式电子提交的序列列表，并在此通过引用将其全部并入。所述ASCII拷贝创建于2020年12月18日，命名为ATD-008WO_ST25.txt，大小为39,163字节。
发明领域
本公开总体上涉及抗因子XI和/或活化的因子XI(因子XIa)抗体或其抗原结合片段的药物制剂；其总体上还涉及此类抗体或其抗原结合片段，或包含它们的药物制剂的剂量方案；和用于治疗血栓栓塞性疾病或相关病症的药物制剂。
背景技术
对于减少血栓栓塞并发症(如中风、全身性栓塞、认知能力下降和死亡率)的更安全疗法，存在高度未满足的医疗需求，其具有与现有疗法相当或改善的功效，并且出血风险较低。
因子XI(FXI)是一种丝氨酸蛋白酶，在内源性和外源性凝血途径中都起作用。因子XI作为同源二聚体以酶原形式存在；在R369-I370处肽键切割后，因子XI被激活(因子XIa，FXIa)。FXI在高组织因子环境中的正常止血中起次要作用，但在血栓形成中确实起关键作用。遗传因子XI缺陷与缺血性卒中和静脉血栓栓塞事件的发生率降低相关(Salomon等人(2008))；Salomon等人(2011年)；105:269-73)。因子XI缺陷的受试者的出血表现不常见，通常是轻微，由损伤或创伤引起，很少影响关键器官(Salomon等人(2011))。
已经研究了结合因子XI和/或因子XIa的抗体。例如，WO 2016/207858描述了一种这样的抗因子XI和/或因子XIa抗体，作为抗体1公开于表1中。本发明补充了这些进展，并提供了进一步的临床方法，包括剂量方案，以期望的安全性和有效性治疗患有特定血栓栓塞性疾病的患者。此外，本发明通过提供包含这样的FXI和/或FXIa抗体的制剂而对该领域的早期发展进行了补充，所述制剂足够稳定并且适合于施用给患者。
发明概述
本公开涉及用于抗因子XI和/或活化的因子XI(因子XIa)抗体或其抗原结合片段的药物制剂。还提供了此类抗体或其抗原结合片段的剂量方案，和用于治疗血栓栓塞性疾病或相关病症的药物制剂。
因此，在一个方面，本文提供了包含药物递送制剂的小瓶，所述药物递送制剂包含：(a)治疗有效量的分离的抗因子XI(FXI)和/或抗活化的因子XI(FXIa)抗体，或其抗原结合片段；(b)组氨酸缓冲液；(c)糖或糖醇；和(d)聚山梨醇酯，pH为5.0至6.0，其中所述小瓶包含过量填充，以用于完全取出治疗有效量的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述小瓶包含治疗有效量的分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段，其浓度为120mg/ml至180mg/ml。在一些实施方案中，所述小瓶包含治疗有效量的分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段，其浓度为约150mg/ml。
在一些实施方案中，组氨酸缓冲液包含组氨酸和组氨酸盐。在一些实施方案中，组氨酸是L-组氨酸。在一些实施方案中，组氨酸盐是组氨酸盐酸盐一水合物。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液的浓度为10mM至30mM。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液的浓度为约20mM。
在一些实施方案中，糖或糖醇是二糖。在一些实施方案中，二糖是蔗糖。在一些实施方案中，蔗糖的浓度为约170mM至270mM。在一些实施方案中，蔗糖的浓度为约220mM。
在一些实施方案中，聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，聚山梨醇酯20的浓度为0.02％(v/v)至0.06％(v/v)。在一些实施方案中，聚山梨醇酯20的浓度为约0.04％(v/v)。
在一些实施方案中，药物递送制剂的pH为5.3至5.7。在一些实施方案中，药物递送制剂的pH为约5.5。
在一些实施方案中，过量填充包含约10％(v/v)至30％(v/v)的药物递送制剂，任选地，其中所述小瓶包含1.1mL至1.3mL的药物递送制剂。在一些实施方案中，过量填充包含约20％(v/v)的药物递送制剂，任选地，其中所述小瓶包含约1.2mL的药物递送制剂。
另一方面，本文公开了包含药物递送制剂的小瓶，所述药物递送制剂包含:
(a)治疗有效量的分离的抗因子XI(FXI)和/或抗活化的因子XI(FXIa)抗体，或其抗原结合片段，浓度为约150mg；
(b)浓度为约20mM的组氨酸缓冲液；
(c)浓度为约220mM的蔗糖；和
(d)浓度为约0.04％(v/v)的聚山梨醇酯-20，
pH为5.5，
其中所述小瓶包含过量填充，以用于完全取出治疗有效量的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面，本文提供了静脉给药制剂，包含：(a)治疗有效量的分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段；(b)组氨酸缓冲液；(c)糖或糖醇；(d)聚山梨醇酯，和(e)稀释剂，pH 5.0至6.0，其中稀释剂是包含第二种糖和水的溶液。
在一些实施方案中，分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段的治疗有效量的浓度为为1.20mg/ml至1.80mg/ml。在一些实施方案中，分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段的治疗有效量的浓度为约1.50mg/ml。
在一些实施方案中，组氨酸缓冲液包含组氨酸和组氨酸盐。在一些实施方案中，组氨酸是L-组氨酸。在一些实施方案中，组氨酸盐是组氨酸盐酸盐一水合物。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液的浓度为0.10mM至0.30mM之间。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液的浓度为约0.20mM。
在一些实施方案中，糖或糖醇是二糖。在一些实施方案中，二糖是蔗糖。在一些实施方案中，蔗糖的浓度为1.70mM至2.70mM。在一些实施方案中，蔗糖的浓度为约2.20mM。
在一些实施方案中，聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，聚山梨醇酯20的浓度小于0.001％(v/v)。在一些实施方案中，聚山梨醇酯20的浓度为约0.0004％(v/v)。
在一些实施方案中，静脉内药物递送制剂的pH为5.3至5.7。在一些实施方案中，静脉内药物递送制剂的pH约为5.5。
在一些实施方案中，稀释剂中的第二种糖是单糖。在一些实施方案中，单糖是葡萄糖。在一些实施方案中，葡萄糖的浓度为2.5％(v/v)至7.5％(v/v)。在一些实施方案中，葡萄糖的浓度为约5％(v/v)。
在另一方面，本文公开了一种静脉内药物递送制剂，其包含：
(a)治疗有效量的分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段，浓度为约1.5mg；
(b)浓度为约0.20mM的组氨酸缓冲液；
(c)浓度为约2.20mM的蔗糖；
(d)浓度为约0.0004％(v/v)的聚山梨醇酯-20，和
(e)pH 5.5的稀释剂，其中稀释剂是5％葡萄糖水溶液(DSW)。
以下特征可纳入上述引用的任何实施方案:
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:9或29中的互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:19或39中的互补决定区LCDR1、LCDR2、LCDR3。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：i.SEQ ID NO:23的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:25的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:33的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:34轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:35的轻链可变区CDR3；ii.SEQ ID NO:26的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:28的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:36的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:37的轻链可变区CDR2和SEQID NO:38的轻链可变区CDR3；iii.SEQ ID NO:43重链可变区CDR1；SEQ ID NO:44的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:45的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:37的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR3；或者iv.SEQ ID NO:46的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:4的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:5的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:33的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR3。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NO:9、29的重链可变区(VH)，以及与其具有90％同一性的VH；和选自SEQ ID NO:19、39轻链可变区(VL ),以及与其具有90％同一性的VL。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NO:9和29的重链可变区(VH)；和选自SEQ ID NO:19和39的轻链可变区(VL)。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含含有选自SEQ ID NO:31、11的氨基酸序列的重链以及与其具有90％同一性的重链；和含有选自SEQ ID NO:41、21的氨基酸序列的轻链以及与其具有90％同一性的轻链。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中，抗体是人单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是人IgG1同种型。在一些实施方案中，抗体包含Fc结构域中的D265A和P329A取代，任选地，其中120mg至180mg是给予受试者的抗因子XI(FXI)和/或抗活化因子XI(FXIa)抗体或其抗原结合片段的治疗有效量。
另一方面，本文提供了一种治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药小瓶中的治疗有效量的药物递送制剂或静脉内药物递送制剂。
在一些实施方案中，血栓栓塞性疾病选自心房颤动或心房扑动、短暂性脑缺血发作、缺血性中风、血栓栓塞性中风、出血性中风、静脉血栓栓塞(VTE)、儿科VTE、全身性栓塞、非中枢神经系统栓塞、心肌梗塞、深静脉血栓形成、严重蛋白S缺乏、脑血管意外和癌症。
在一些实施方案中，小瓶中的药物递送制剂或静脉内药物递送制剂每月给药一次。
在一些实施方案中，小瓶中的药物递送制剂或静脉内药物递送制剂以选自约30mg、约60mg、约90mg、约120mg、约150mg和约180mg的剂量给药。在一些实施方案中，小瓶中的药物递送制剂以约90mg的剂量给药。在一些实施方案中，小瓶中的药物递送制剂以约120mg的剂量给药。在一些实施方案中，小瓶中的药物递送制剂以约150mg的剂量给药。
在一些实施方案中，小瓶中的药物输送制剂为皮下给药。
在一些实施方案中，其中血栓栓塞性疾病为心房颤动或心房扑动。在一些实施方案中，其中心房颤动或心房扑动阵发性心房颤动(PAF)。
在一些实施方案中，小瓶中的药物递送制剂以三个月的时间段每月给药一次。
在一些实施方案中，其中受试者中风风险低。在一些实施方案中，受试者的CHA2DS2VASc风险评分为0至1。
在一些实施方案中，受试者具有中度中风风险。
在一些实施方案中，受试者具有高度中风风险。在一些实施方案中，男性受试者的CHA2DS2VASc风险评分≥2，女性受试者的CHA2DS2VASc风险评分≥3。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括通过在第三剂药物递送制剂之后测量因子XI的抑制的谷值(trough)来评估小瓶中的药物递送制剂的功效。在一些实施方案中，该方法还包括通过评估一种或多种生物标志物来评价小瓶中的药物递送制剂的功效，所述生物标志物选自游离因子XI、总因子XI、因子XI凝血活性、活化部分凝血活酶时间和D-二聚体。
在一些实施方案中，该方法还包括通过测量出血事件或抗药物抗体的存在来评估小瓶中的药物递送制剂的不良事件。在一些实施方案中，该方法还包括对经历不良事件的患者应用以下一种或多种方法，其中所述不良事件是出血事件：(i)使用胶体、晶体、人血浆或血浆蛋白如白蛋白进行液体置换；(ii)输注包装红细胞或全血；或(iii)施用新鲜冷冻血浆(FFP)、凝血酶原复合物浓缩物(PCC)、活化PCC(APCC)，例如因子VIII抑制剂，和/或重组的活化因子VII。
在另一方面，本文提供了治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的并且正经历外科手术的受试者的方法，所述方法包括向有此需要的受试者给药权利要求29-58中任一项的静脉内药物递送制剂，其中在外科手术的同一天向所述受试者给药所述静脉内药物递送制剂。
在一些实施方案中，手术程序选自膝关节置换手术，例如单侧全膝关节置换术(TKA)、髋关节置换手术、矫形手术、起搏器安装、导管安装、胸外科手术和腹部外科手术。在一些实施方案中，外科手术是单侧全膝关节置换术(TKA)。
在一些实施方案中，所述静脉递送制剂每月施用。
在一些实施方案中，所述静脉内药物递送制剂的给药剂量选自约30mg、约60mg、约90mg、约120mg、约150mg和约180mg。在一些实施方案中，所述静脉内药物递送制剂以约30mg的剂量给药。在一些实施方案中，所述静脉内药物递送制剂以约60mg的剂量给药。在一些实施方案中，所述静脉内药物递送制剂以约75mg的剂量给药。在一些实施方案中，所述静脉内药物递送制剂以约150mg的剂量给药。
在一些实施方案中，在手术后约4-8小时使用静脉内药物递送。
另一方面，本文提供了一种治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法，其中所述受试者正在接受非甾体抗炎药(NSAIDs)，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的小瓶中的药物递送制剂或者静脉内药物递送制剂，其与质子泵抑制剂组合。
在一些实施方案中，小瓶中的药物递送制剂或静脉内药物递送制剂每月给药。
在一些实施方案中，小瓶中的药物递送制剂或静脉内药物递送制剂以选自以下的剂量给药：约30mg、约60mg、约90mg、约120mg、约150mg和约180mg。
在一些实施方案中，小瓶中的药物递送制剂为皮下给药。
下文介绍了本发明的其他实施方案和细节。
附图说明
图1A-图1B显示了含有稀释在葡萄糖(D5W，如图1A所示)或抑肽酶(APN，如图1B所示)中的抗体1的药物产品的尺寸排阻高效液相色谱(SE-HPLC)的线性分析。
图2A-图2C显示了抗体1对各种不同生物标志物的作用的持续时间。图2A显示了患有心房颤动(AF)的受试者血浆中抗体1的浓度。图2B显示了用抗体1治疗的AF受试者的血浆游离因子XI。图2C显示了多个剂量的抗体1对游离因子XI的影响。
图3A-图3C显示了基于经历任何静脉血栓栓塞(VTE)事件的患者数量的实验性抗血栓形成治疗安全性分析，针对抗体1(图3A)，以及公开的使用因子XI反义寡核苷酸(FXI-ASO)(图3B)和FOXTROT(图3C)的临床试验；每个实验治疗都显示了与作为对照的依诺肝素的比较。
图4A-图4B显示了抗体1对各种不同的生物标志物的作用的持续时间。图4A显示了接受全膝关节置换术(TKA)的受试者的血浆中抗体1的浓度。图4B显示了用抗体1治疗的TKA受试者的血浆中的游离因子XI。
定义
为便于理解本发明，下文定义了一些术语和短语。
本文使用的术语“一个”表示“一个或多个”，包括复数，除非上下文不合适。
如本文所用，术语“FXI蛋白”、“FXI抗原”和“FXI”可互换使用，指不同物种中的因子XI蛋白。因子XI是哺乳动物血浆凝血因子XI，一种以浓度25-30nM作为酶原存在于人类血浆中的糖蛋白，当通过有限的蛋白水解转化为活性丝氨酸蛋白酶时，参与血液凝固的固有途径。
术语“FXIa蛋白”、“FXIa抗原”和“FXIa”可互换使用，指不同物种中的活化FXI蛋白。酶原因子XI通过血液凝固的相接触或通过凝血酶介导的血小板表面活化转化为其活性形式，即凝血因子Xla(FXIa)。在因子XI的激活过程中，两条链中的每一条都有一个内部肽键被切割，产生激活的因子Xla，一种由二硫键结合在一起的两条重链和两条轻链组成的丝氨酸蛋白酶。这种丝氨酸蛋白酶FXIa将凝血因子IX转化为IXa，随后激活凝血因子X(Xa)。Xa然后可以介导凝血因子II/凝血酶活化。例如，人FXI具有表1中列出的序列(SEQ ID NO:1)，并且已经在以前的报告和文献中描述过(Mandle RJ Jr等人(1979)Blood；54(4):850；NCBI参考序列:AAA51985)。
在本公开的上下文中，术语“FXI”和“FXIa”(等)分别包括天然FXI和FXIa蛋白的突变体和变体，它们具有与上述报道中描述的天然一级结构(氨基酸序列)基本相同的氨基酸序列。
本文使用的术语“催化结构域”、“丝氨酸蛋白酶催化结构域”和类似术语是指氨基酸Ile370至Val607，从循环中成熟蛋白质的N-端的Glu1开始计数。它也可以被描述为FXI C末端的残基388-625。如本文所用，术语“活性位点”是指催化三联体包括氨基酸His4l3、Asp462和Ser557。(Bane和Gailani(2014)Drug Disc.19(9))。
本文使用的术语“抗体”是指完整抗体和任何抗原结合片段(例如，“抗原结合部分”)或其单链。完整的抗体是一种糖蛋白，包含通过二硫键相互连接的至少两条重链(H)和两条轻链(L)。每条重链由重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域组成：CH1、CH2和CH3。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区，其被称为构架区(FR)的更保守的区域分隔开。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一成分(Clq)。在一些具体的方面，抗体可以是单克隆抗体、人抗体、人源化抗体、骆驼化抗体或嵌合抗体。抗体可以是任何同种型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类型(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚型。
抗原结合位点的CDR可通过Kabat等人，J.Biol.Chem.252,6609-6616(1977)和Kabat等人，Sequences of protein of immunological interest.(1991),Chothia等人,J.Mol.Biol.196:901-917(1987),和MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996)定义。当相互比较时，根据这些定义确定的CDR通常包括氨基酸残基的重叠或子集。在一些实施方案中，术语“CDR”是由MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996)和Martin A.,Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains,inAntibody Engineering,Kontermann and Dubel,eds.,31章,pp.422-439,Springer-Verlag,Berlin (2001)中定义。在一些方面实施方案中，术语“CDR”是由Kabat等人,J.Biol.Chem.252,6609-6616(1977)和Kabat等人,Sequences of protein ofimmunological interest.(1991)中定义。一些实施方案中，抗体的重链CDR和轻链CDR使用不同的惯例来定义。例如，在一些实施方案中，根据MacCallum(同上)定义重链CDR，根据Kabat定义轻链CDR(同上)。CDRH1、CDRH2和CDRH3表示重链CDR，CDRL1、CDRL2和CDRL3表示轻链CDR。
如本文所用，术语“药物递送制剂”或“静脉内药物递送制剂”是指包含活性剂与惰性或活性载体的组合的药物制剂，使该组合物特别适用于体内或体外诊断或治疗用途。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”指通过本文所述方法和组合物治疗的生物。此类生物优选包括但不限于哺乳动物(例如，鼠、猴、马、牛、猪、灵长类、犬、猫等)，更优选包括人类。在一些实施方案中，受试者是人类。
本文所用的“血栓栓塞性疾病”或类似术语是指其中固有和/或共同凝血途径异常激活或不能自然失活(例如，在没有治疗手段的情况下)的任何数量的病症或疾病。这些疾病包括但不限于血栓栓塞性中风和其他类型的缺血性中风、心房颤动、心房颤动中的中风预防(SPAF)、深静脉血栓形成、静脉血栓栓塞和肺栓塞。这些还可以包括预防和治疗导管相关血栓(例如，肿瘤患者的Hickman导管)，其中导管形成血栓，以及体外膜氧合(ECMO)，其中管道和氧合膜形成凝块。
本文所用的“血栓栓塞性疾病”或类似术语还可指本公开的抗FXI和/或FXIa抗体或其抗原结合片段可用于预防或治疗的任何数量的下列疾病:
-患有疑似或确诊心律失常(如阵发性、持续性或永久性房颤或房扑)的受试者的血栓栓塞；
-房颤中风预防(SPAF)，是接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的AF患者的亚群；
-急性静脉血栓栓塞事件(VTE)治疗和高出血风险患者的延长二级VTE预防；
-静脉血栓栓塞，其中受试者是儿科受试者(儿科VTE)；
-短暂性脑缺血(TIA)或非致残性中风后二级预防中的心脑血管事件发作和伴窦性心律的心力衰竭中的血栓栓塞事件的预防；
-出血性中风；
-接受心律失常复律的受试者左心房血栓形成和血栓栓塞；
-心律失常消融手术前、中、后血栓形成；
-静脉血栓形成，这包括但不限于下肢或上肢深静脉或浅静脉血栓形成、腹部和胸部静脉血栓形成、窦血栓形成和颈静脉血栓形成的治疗和二级预防；
-静脉或动脉中任何人造表面上的血栓形成，如导管、起搏器金属丝导线，人造动脉移植物；机械或生物心脏瓣膜或左心室辅助装置；
-伴或不伴静脉血栓形成患者的肺栓塞；
-慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)；
-动脉粥样硬化斑块破裂处的动脉血栓形成，动脉内或假体血栓形成、或导管和明显正常动脉中的血栓形成，这包括但不限于急性冠状动脉综合征、ST段抬高心肌梗死、非ST段抬高心肌梗死、不稳定型心绞痛、支架血栓形成、动脉系统中任何人工表面的血栓形成和患有或不患有肺动脉高压的受试者中的肺动脉血栓形成；
-接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的患者中的血栓形成和血栓栓塞；
-心源性和隐源性中风；
-非中枢神经系统栓塞(非CNS系统栓塞)；
-侵袭性和非侵袭性恶性肿瘤患者的血栓形成:
-留置导管上的血栓形成；
-重病患者的血栓形成和血栓栓塞；
-心脏血栓形成和血栓栓塞，包括但不限于心肌梗死后的心脏血栓形成，心脏血栓形成相关的病症，如，心脏动脉瘤、心肌纤维化、心脏扩大和功能不全、心肌炎和心脏中的人工表面；
-伴或不伴心房颤动的瓣膜性心脏病患者的血栓栓塞:
-瓣膜机械或生物假体上的血栓栓塞；
-在简单或复杂心脏畸形的心脏修复后具有天然或人工心脏补片、动脉或静脉导管的患者中的血栓栓塞；
-膝关节置换手术、髋关节置换手术和矫形手术、胸部或腹部手术后的静脉血栓形成和血栓栓塞；
-神经外科手术后的动脉或静脉血栓形成，包括颅内和脊髓介入；
-先天性或获得性血栓形成倾向，包括但不限于因子V Leiden、凝血酶原突变、抗凝血酶III、蛋白C和蛋白S缺乏、因子XIII突变、家族性异常纤维蛋白原血症、先天性纤溶酶原缺乏、因子XI水平升高、镰状细胞病、抗磷脂综合征、自身免疫性疾病、慢性肠病、肾病综合征、溶血性尿毒症、骨髓增生性疾病、播散性血管内凝血、阵发性睡眠性血红蛋白尿和肝素诱导的血小板减少症；
-慢性肾病中的血栓形成和血栓栓塞；和
-血液透析患者和体外膜氧合患者的血栓形成和血栓栓塞。
如本文所用，术语“谷值”或“谷值水平”是指在施用下一剂药物之前，药物达到的最低浓度。在一些实施方案中，因子XI/因子XIa在谷值时的抑制大于约50％(例如，大于约60％、大于约70％、大于约80％或大于约90％)。在一些实施方案中，因子XI/因子XIa在谷值时的抑制大于约80％。在一些实施方案中，因子XI/因子XIa在谷值时的抑制大于约90％。
术语“治疗”(treat)、“治疗”(treating)或“治疗”(treatment)，以及其他语法等同物，包括减轻、降低、改善或预防疾病、病症或症状，预防其他症状，改善或预防症状的潜在代谢原因，抑制疾病或病症，例如，阻止疾病或病症的发展，缓解疾病或病症，引起疾病或病症的消退，缓解由疾病或病症引起的症状，或停止疾病或病症的症状，并且旨在包括预防。该术语还包括实现治疗益处和/或预防益处。“治疗益处”是指根除或改善正在治疗的潜在疾病。此外，通过根除或改善一种或多种与潜在疾病相关的生理症状来实现治疗益处，从而在患者中观察到改善，尽管患者可能仍然患有潜在疾病。
在本文所述方法的一些实施方案中，受试者为初始治疗对象，即在用本文所述的抗因子XI/XIa抗体(例如抗体1)治疗前从未接受过任何形式的抗凝治疗。在本文所述方法的一些实施方案中，受试者已经接受了推荐剂量的新型口服抗凝剂(NOAC)的稳定治疗，例如在用本文所述的抗因子XI/XIa抗体(例如抗体1)治疗之前。在一些实施方案中，受试者已经接受直接口服抗凝剂(DOAC)，例如，在用本文所述的抗因子XI/XIa抗体(例如，抗体1)治疗之前。在一些实施方案中，受试者已经接受了维生素K拮抗剂(VKA)，例如，在用本文所述的抗因子XI/XIa抗体(例如，抗体1)治疗之前。
如本文所用，术语“小瓶”(vial)是指容纳药品的容器。在一些实施方案中，所述小瓶可以是小瓶、袋、笔或注射器。在一些实施方案中，小瓶(vial)可以是小瓶，例如玻璃瓶。
如本文所用，术语“药物产品”是指本文所述的抗XI/因子XIa抗体，例如表1中公开的抗体1，以及赋形剂，例如组氨酸缓冲液、糖和聚山梨醇酯。
术语“约”是指在制剂的制备和疾病或障碍的治疗中，药剂的浓度或量的任何最小变化，其不改变药剂的功效。在一些实施方案中，术语“约”可以包括指定数值或数据点的±5％、±10％，或±15％。
在本公开中，范围可表示为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表达这样的范围时，另一方面包括从一个特定值和/或至另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将数值表示为近似值时，应当理解特定的值构成了另一个方面。还应理解，每个范围的端点相对于另一个端点和独立于另一个端点都是重要的。还应当理解，在本公开中公开了许多值，并且除此该值本身之外，每个值还被公开为“约”该特定值。还应当理解，在整个申请中，数据以多种不同的格式提供，并且该数据代表数据点的任意组合的端点、起点和范围。例如，如果公开了特定的数据点“10”和特定的数据点“15”，应当理解，大于、大于或等于，小于、小于或等于，和等于10和15以及在10和15之间被认为是公开的。还应理解，也公开了两个特定单元之间的每个单元。例如，如果公开了10和15，那么也公开了11、12、13和14。
在整个说明书中，当组合物被描述为具有、包括或包含特定组分时，或当过程和方法被描述为具有、包括或包含特定步骤时，预期另外存在基本上由所述组分组成或由所述组分组成的本公开的组合物，并且存在根据本公开的基本上由所述加工步骤组成或由所述加工步骤组成的工艺和方法。
一般而言，指定百分比的组成是以重量计，除非另有规定。此外，如果变量没有定义，则以变量对照的先前定义为准。
抗因子XI和/或活化的因子XI(因子XIa)抗体
在一些实施方案中，本公开提供包含结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体的药物制剂，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:9或29的氨基酸序列的重链可变域(VH)，所述制剂包含组氨酸缓冲液；糖或糖醇；并且该制剂的pH在pH5.0至6.0之间。在一些实施方案中，抗体包含具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的VH。
在实施方案中，本公开提供了包含结合FXI和/或FXIa蛋白的抗体或其抗原结合片段的药物制剂，所述药物制剂包含在小瓶中，其中所述制剂包括过量填充体积，以用于完全取出治疗有效量的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，小瓶包含药物制剂，该药物制剂包含约150mg结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体，该抗体具有重链可变结构域(VH)；其具有SEQ ID NO:9或29的氨基酸序列；浓度为约20mM的组氨酸缓冲液；浓度为约220mM的蔗糖；和浓度为约0.04％(v/v)的聚山梨醇酯-20；并且制剂的pH值约为pH 5.5。
在实施方案中，本公开提供了静脉内递送药物制剂，其包含约1.5mg的结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体，或其抗原结合片段，所述抗体具有重链可变结构域(VH)，其具有SEQ ID NO:9或29的氨基酸序列；浓度为约0.20mM的组氨酸缓冲液；浓度为约2.20mM的蔗糖；浓度为约0.0004％(v/v)的聚山梨醇酯-20，和稀释剂(例如，5％葡萄糖水溶液(DSW))；并且制剂的pH值为约pH 5.5。
本公开还提供了特异性结合FXI和/或FXIa蛋白的抗体的药物制剂，其中所述抗体包含VH CDR，所述VH CDR具有下表1中列出的任一VH CDR的氨基酸序列，所述制剂包含组氨酸缓冲液；糖或糖醇；和聚山梨醇酯；并且制剂的pH在pH 5.0至6.0之间。具体地，本公开提供了特异性结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体的药物制剂，其中所述抗体包含(或者由以下组成)一个、两个、三个或多个VH CDR，所述VH CDR具有下表1中列出的任何VH CDR的氨基酸序列，该制剂包含组氨酸缓冲液；糖或糖醇；和聚山梨醇酯；并且制剂的pH在pH 5.0至6.0之间。(参见2016年6月24日提交的PCT国际专利申请号PCT/IB2016/053790，公开号为WO2016/207858，其全部内容通过引用并入本文)。
在一些实施方案中，本公开提供特异性结合FXIa蛋白的抗体的药物制剂，所述抗体包含具有SEQ ID NO:19或39的氨基酸序列的轻链可变结构域(VL)，用于本文所述的方法(例如，用于治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法)，所述制剂包含组氨酸缓冲剂；糖或糖醇；和聚山梨醇酯；并且制剂的pH在pH 5.0至6.0之间。在一些实施方案中，抗体包含具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的VL。
在实施方案中，本公开提供了包含结合FXI和/或FXIa蛋白的抗体或其抗原结合片段的药物制剂，其包含在小瓶中，其中所述制剂包括过量填充体积，以用于完全取出治疗有效量的抗FXI和/或抗FXIa的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，小瓶包含药物制剂，所述药物制剂包含约150mg结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体，所述抗体具有轻链可变结构域(VL)，其具有SEQ ID NO:19或39的氨基酸序列；浓度为约20mM的组氨酸缓冲液；浓度为约220mM的蔗糖；和浓度为约0.04％(v/v)的聚山梨醇酯-20；并且制剂的pH值为约pH 5.5。
在实施方案中，本公开提供了静脉内递送药物制剂，其包含约1.5mg结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体，或抗原结合片段，该抗体具有轻链可变区(VL )，其具有SEQ ID NO:19或39的氨基酸序列；浓度为约0.20mM的组氨酸缓冲液；浓度为约2.20mM的蔗糖；浓度为约0.0004％(v/v)的聚山梨醇酯-20，和稀释剂(例如，葡萄糖5％水溶液(DSW))；并且制剂的pH值为约pH 5.5。
本公开还提供特异性结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体的药物制剂，用于本文所述的方法中(例如，用于治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法)，所述抗体包含具有下表1中列出的任一VLCDR的氨基酸序列的VL CDR，该制剂包含组氨酸缓冲液；糖或糖醇；和聚山梨醇酯；并且制剂的pH为pH 5.0至6.0。特异性结合FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体，可以包含(或者由…组成)一个、两个、三个或更多个VL CDR，这些CDR具有下表1中列出的任何VL CDR的氨基酸序列。
在实施方案中，本公开提供了装在小瓶中的包含结合FXI和/或FXIa蛋白或抗原结合片段的抗体的药物制剂的制剂，其中该制剂包括用于完全取出治疗有效量的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段的过量填充体积。在一些实施方案中，小瓶包含药物制剂，该药物制剂包含约150mg的结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体，该抗体具有重链可变区(VH)，其具有SEQ ID NO:9或29的氨基酸序列，和轻链可变区(VL)，其具有SEQ ID NO:19或39的氨基酸序列；浓度为约20mM的组氨酸缓冲液；浓度为约220mM的蔗糖；和浓度为约0.04％(v/v)的聚山梨醇酯-20；并且制剂的pH值为约pH5.5。
在实施方案中，本公开提供了静脉内递送药物制剂，其包含约1.5mg结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体或其抗原结合片段，该抗体具有重链可变区(VH)，其具有SEQ ID NO:9或29的氨基酸序列，和轻链可变区(VL)，其具有SEQID NO:19或39的氨基酸序列；浓度为约0.20mM的组氨酸缓冲液；浓度为约2.20mM的蔗糖；浓度为约0.0004％(v/v)的聚山梨醇酯-20，和稀释剂(例如，5％葡萄糖水溶液(DSW))；并且制剂的pH值为约pH 5.5。
在实施方案中，本公开提供了一种药物制剂，包含结合FXI和/或FXIa蛋白的抗体或其抗原结合片段，其被包含在小瓶中，其中该制剂包含用于完全取出治疗有效量的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段的过量填充体积。在一些实施方案中，小瓶包含药物制剂，该药物制剂包含约150mg结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)抗体，该抗体具有重链可变区(VH)，其具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列，和轻链可变区(VL)，其具有SEQ ID NO:139的氨基酸序列；浓度为约20mM的组氨酸缓冲液；浓度为约220mM的蔗糖；和约0.04％(v/v)浓度的聚山梨醇酯-20；并且制剂的pH值为约pH 5.5。
在实施方案中，本公开提供了静脉内递送药物制剂，其包含约1.5mg结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体，或其抗原结合片段，该抗体具有重链可变区(VH)，其具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列，和轻链可变区(VL)，其具有SEQ IDNO:139的氨基酸序列；浓度为约0.20mM的组氨酸缓冲液；浓度为约2.20mM的蔗糖；浓度为约0.0004％(v/v)的聚山梨醇酯-20，和稀释剂(例如，5％葡萄糖水溶液(DSW))；并且制剂的pH值为约pH 5.5。
在一些实施方案中，用于本文所述方法的其它抗体(例如，治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法疾病)包括已经突变的氨基酸，但在CDR区与表1所述序列中描述的CDR区相比具有至少60％、70％、80％、85％、90％或95％的同一性。在一些实施方案中，抗体包括突变氨基酸序列，其中与表1所述序列中描述的CDR区相比，CDR区中突变的氨基酸不超过1、2、3、4或5个。
表1.FXI/FXIa抗体、Fabs和FXI/FXIa蛋白的实例。
在一些实施方案中，用于本文所述方法或制剂的其它抗体(例如，用于治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法)包括其中氨基酸或编码所述氨基酸的核酸氨基酸已经突变，但与表1中描述的序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的同一性的那些。一些实施方案包括突变氨基酸序列，其中与表1所述序列中描述的可变区相比，可变区中突变的氨基酸不超过1、2、3、4或5个，同时保持基本相同的抗原结合活性。
由于这些抗体中的每一种均可结合FXI和/或FXIa，因此VH、VL、全长轻链和全长重链序列(氨基酸序列和编码氨基酸序列的核苷酸序列)可“混合和匹配”以产生本公开的其它FXI和/或FXIa结合抗体。这样的“混合和”匹配的FXI和/或FXIa结合抗体可以使用本领域已知的结合测定法(例如ELISA和实施例部分中描述的其他测定法)进行测试。当这些链混合和匹配时，来自特定VH/VL配对的VH序列应该被结构相似的VH序列替换。类似的，来自特定全长重链/全长轻链配对的全长重链序列应该被结构相似的全长重链序列取代。类似的，来自特定VH/VL配对的VL序列应该用结构相似的VL序列替换。类似的，来自特定全长重链/全长轻链配对的全长轻链序列应该用结构相似的全长轻链序列替换。
因此，在一个方面，为了用于本文所述的方法(例如，用于治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法)，本公开提供了一种分离的抗体或其抗原结合区，其具有:包含选自SEQ ID NO:9和29的氨基酸序列的重链可变域，和包含选自SEQID NO:19和39的氨基酸序列的轻链可变域，其中所述抗体特异性结合FXI和/或FXIa(例如人、兔、食蟹猴和狒狒FXIa)。在另一方面，为了用于本文所述的制剂(例如，小瓶中的制剂、静脉内药物递送制剂)，本公开提供了一种分离的抗体或其抗原结合区，其具有：包含选自SEQ ID NO:9和29的氨基酸序列的重链可变结构域，和包含选自SEQ ID NO:19和39的氨基酸序列的轻链可变结构域，其中所述抗体特异性结合FXI和/或FXIa(例如人、兔、食蟹猴和狒狒FXIa)。
更具体地，在一些方面，本公开提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其具有重链可变域和轻链可变域，分别包含选自SEQ ID NO:9和29；或19和39的氨基酸序列。
在用于本文所述方法(例如，用于治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法)的具体实施方案中，本文提供的特异性结合人FXI和/或FXIa的抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ IDNO:19的氨基酸序列的轻链可变区。在用于本文所述制剂(例如，小瓶中的制剂、静脉内药物递送制剂)的具体实施方案中，本文提供的特异性结合人FXI和/或FXIa的抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链可变区。
在用于本文所述方法(例如，用于治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法)的具体实施方案中，本文提供的抗体或其抗原结合片段特异性结合人FXI和/或FXIa，包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ IDNO:39的氨基酸序列的轻链可变区。在用于本文所述制剂(例如，小瓶中的制剂、静脉内药物递送制剂)的具体实施方案中，本文提供的抗体或其抗原结合片段特异性结合的人FXI和/或FXIa，包含含有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链可变区，和含有SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链可变区。
在用于本文所述方法的另一方面，本公开提供了(i)分离的抗体，其具有:包含选自SEQ ID NO:11或31的氨基酸序列的全长重链，其已被优化用于在哺乳动物细胞中表达，以及包含选自SEQ ID NO:21或41的氨基酸序列的全长轻链，其已被优化用于在哺乳动物细胞中表达；或(ii)包含其抗原结合部分的功能蛋白。更具体地，在一些方面，本公开提供了一种分离的抗体或其抗原结合区，其具有包含分别选自SEQ ID NO:11和31或21和41的氨基酸序列的重链和轻链。在用于本文所述制剂的另一方面，本公开提供了(i)分离的抗体，其具有:全长重链，包含选自SEQ ID NO:11或31的已经为在哺乳动物细胞中表达而优化的氨基酸序列，和包含选自SEQ ID NO:21或41的已经为在哺乳动物细胞中表达而优化的氨基酸序列的全长轻链；或(ii)包含其抗原结合部分的功能性蛋白质。更具体地，在一些方面，本公开提供了一种分离的抗体或其抗原结合区，其具有包含分别选自SEQ ID NO:11和31或21和41的氨基酸序列的重链和轻链。
在用于本文所述方法的具体实施方案中，抗体或抗原结合片段，其特异性结合人FXI和/或FXIa，包含含有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链，和含有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链。在用于本文所述制剂的具体实施方案中，本文提供了特异性结合人FXI和/或FXIa的抗体或其抗原结合片段，包含含有SEQ ID NO:11氨基酸序列的重链，和含有SEQID NO:21氨基酸序列的轻链。
在用于本文所述方法的具体实施方案中，本文提供的特异性结合人FXI和/或FXIa的抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:31氨基酸序列的重链可变区，和包含SEQ IDNO:41的氨基酸序列的轻链可变区。在用于本文所述制剂的具体实施方案中，本文提供的特异性结合人FXI和/或FXIa的抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:41氨基酸序列的轻链可变区。
本文所用术语“互补决定区”和“CDR”是指抗体可变区内赋予抗原特异性和结合亲和力的氨基酸序列。通常，每个重链可变区(HCDR1、HCDR2、HCDR3)中有三个CDR，每个轻链可变区中有三个CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。
给定CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多众所周知的方案中的任何一种来容易地确定，包括那些描述于Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,”5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(“Kabat”编号方案)，Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案),Lefranc等人,(2003)Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(“IMGT”编号方案),或“组合(Combined)”系统。
例如，在Kabat系统下，抗体重链可变结构域(VH)中抗体2的CDR氨基酸残基编号为31-35(HCDRI)、50-66(HCDR2)和99-111(HCDR 3)；并且轻链可变结构域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为22-35(LCDRI)、51-57(LCDR2)和90-100(LCDR3)。在Chothia的系统下，VH中的CDR氨基酸编号为26-32(HCDR1)、52-57(HCDR2)和99-111(HCDR 3)；VL中的氨基酸残基编号为25-33(LCDR1I)、51-53(LCDR2)和92-99(LCDR3)。通过结合Kabat和Chothia的CDR定义，CDR由人VH中的氨基酸残基26-35(HCDRI)、50-66(HCDR2)和99-111(HCDR3)以及人VL中的氨基酸残基22-35(LCDRI)、51-57(LCDR2)和90-100(LCDR3)组成。通过结合Kabat和Chothia的CDR定义,“组合的”CDR由人VH中的氨基酸残基26-35(HCDR1)、50-66(HCDR2)和99-108(HCDR3)以及人VL中的氨基酸残基24-38(LCDR1)、54-60(LCDR2)和93-101(LCDR3)组成。作为另一个例子，在IMGT下，重链可变结构域(VH)中的CDR氨基酸残基编号为26-33(HCDR1)、51-58(HCDR2)和97-108(HCDR3)；并且轻链可变结构域(VL)中的CDR氨基酸残基编号为27-36(LCDRI)、54-56(LCDR2)和93-101(LCDR3)。表1提供了抗FXI/FXIa抗体(例如，抗体2和抗体1)的示例性Kabat、Chothia、组合和IMGT的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一方面，本公开提供了FXIa结合抗体，其包含如表1中所述的重链和轻链CDRl、CDR2和CDR3或其组合。抗体的VH CDRl的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:3和23中。抗体的VH CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:4和24所示。抗体的VH CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:5和25所示。氨基酸抗体的VL CDRl序列显示在SEQ ID NO:13和33中。抗体的VL CDR 2的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:14和抗体的VL CDR3的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:15和35中。这些CDR区域使用Kabat系统来描述。
或者，如使用Chothia系统(Al-Lazikani等人，(1997)JMB 273，927-948)所定义的，抗体的VH CDRl的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:6和26中。抗体的VH CDR2的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:7和27中。抗体的VH CDR3的氨基酸序列抗体显示在SEQ ID NO:8和28中。抗体的VL CDR1的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:16和36中。抗体的VL CDR 2的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:17和37所示。抗体的VL CDR3的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:18和38中。
或者，如使用组合系统所定义的，抗体的VH CDR1氨基酸序列如SEQ ID NO:46所示。抗体的VH CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。抗体的VH CDR3的氨基酸序列如SEQID NO:5所示。抗体的VL CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:33所示。抗体的VL CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示。抗体的VL CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示。
或者，如使用IMGT编号方案所定义的，抗体的VH CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示。抗体的VH CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:44所示。抗体的VH CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:45所示。抗体的VL CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:47所示。抗体的VL CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示。抗体的VL CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示。
鉴于这些抗体中的每一种均可结合FXI和/或FXIa，且抗原结合特异性主要由CDR1、2和3区域提供，VH CDR1、2和3序列和VL CDR1、2和3序列可以“混合和匹配”(例如，来自不同抗体的CDR可以混合和匹配，尽管每种抗体优选含有VH CDR1、2和3和VL CDR1、2和3以产生本公开的其它FXI和/或FXIa结合分子)。此类“混合和匹配”的FXI和/或FXIa结合抗体可以用本领域已知的结合试验和实施例中描述的那些(例如ELISA、SET、BIACORETM检测)来检测。当VH CDR序列混合和匹配时，来自特定VH序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列应该用结构相似的CDR序列替换。类似的，当VL CDR序列被混合和匹配，来自特定VL序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列应该用结构相似的CDR序列替换。对普通技术人员来说显而易见的是，新的VH和VL序列可以通过将一个或多个VH和/或VL CDR区序列替换为结构上与本文所示的本公开单克隆抗体的CDR序列相似的序列。除了前述之外，在一个实施方案中，本文所述抗体的抗原结合片段可包含VH CDR1、2和3，或VL CDR1、2和3，其中该片段作为单一可变结构域结合FXI和/或FXIa。注意，抗体1和抗体2的CDR序列是相同的。
在本公开的一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段可具有表1中描述的Fabs的重链和轻链序列。更具体地，抗体或其抗原结合片段可以具有抗体2和抗体1的重链和轻链序列。
在本公开的其它实施方案中，特异性结合FXI和/或FXIa的抗体或抗原结合片段包含由Kabat定义并在表1中描述的重链可变区CDR1、重链可变区CDR2、重链可变区CDR3、轻链可变区CDR1、轻链可变区CDR2和轻链可变区CDR3。在的其他实施方案中，特异性结合FXI和/或FXIa的抗体或抗原结合片段包含Chothia定义的并在表1中描述的重链可变区CDR1、重链可变区CDR2、重链可变区CDR3、轻链可变区CDR1、轻链可变区CDR2和轻链可变区CDR3。在其他实施方案中，特异性结合FXI和/或FXIa的抗体或抗原结合片段包含由组合系统定义并在表1中描述的重链可变区CDR1、重链可变区CDR2、重链可变区CDR3、轻链可变区CDR1、轻链可变区CDR2和轻链可变区CDR3。在本公开的其他实施方案中，特异性结合FXI和/或FXIa的抗体或抗原结合片段包含由IMGT定义并在表1中描述的重链可变区CDR1、重链可变区CDR2、重链可变区CDR3、轻链可变区CDR1、轻链可变区CDR2和轻链可变区CDR3。
在用于本文所述方法的具体实施方案中，本公开包括特异性结合FXI和/或FXIa的抗体，其包含SEQ ID NO:3的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:4的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:5的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:13的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR3。
在一个具体实施方案中，本公开包括特异性结合FXI和/或FXIa的抗体，其包含SEQID NO:23的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:25的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:33的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:34的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:35的轻链可变区CDR3。
在一个具体实施方案中，本公开包括特异性结合FXI和/或FXIa的抗体，其包含SEQNO:6的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:7的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:8的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:16的轻链可变区、CDR1、SEQ ID NO:17的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:18的轻链可变区CDR3。
在一个具体实施方案中，本公开包括特异性结合FXI和/或FXIa的抗体，其包含SEQID NO:26的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:28的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:36的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:37的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:38的轻链可变区CDR3。
在一个具体实施方案中，本文提供了特异性结合FXI和/或FXIa的抗体，其包含SEQID NO：43的重链可变区CDR1、SEQ ID NO：44的重链可变区CDR2、SEQ ID NO：45的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:37的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR3。
在一个具体实施方案中，本文提供了特异性结合FXI和/或FXIa的抗体，其包含SEQID NO:46的重链可变区CDR1、SEQ ID NO:4的重链可变区CDR2、SEQ ID NO:5的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:33的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR3。
在一些实施方案中，本公开包括特异性结合FXI和/或FXIa的抗体或抗原结合片段，如表1所述。在用于本文所述方法的具体实施方案中，结合FXI和/或FXIa的抗体或抗原结合片段是抗体2和抗体1。
如本文所用，人抗体包含重链或轻链可变区或全长重链或轻链，它们是特定种系序列的“产物”或“衍生自”特定种系序列，如果抗体的可变区或全长链是从使用人种系免疫球蛋白基因的系统中获得的。此类系统包括用感兴趣的抗原免疫携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠，或用感兴趣的抗原筛选噬菌体上展示的人免疫球蛋白基因文库。人抗体是人种系免疫球蛋白的“产物”或“来源于”人种系免疫球蛋白，通过将人抗体的氨基酸序列与人种系免疫球蛋白的氨基酸序列进行比较，并选择在序列上与人抗体序列最接近(即，最大％同一性)的人种系免疫球蛋白序列，可以鉴定种系免疫球蛋白序列。
人抗体是特定人种系免疫球蛋白的“产物”或“来源于”特定人种系免疫球蛋白，人抗体与种系序列相比可以含有氨基酸差异，这是由于例如天然发生的体细胞突变或有意引入定点突变。然而，在VH或VL构架区，选择的人抗体通常与人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少90％相同，并且包含氨基酸残基，当与其他物种的种系免疫球蛋白氨基酸序列(例如，鼠种系序列)比较时，其将人抗体鉴定为人。在一些情况下，人抗体在氨基酸序列上可以与种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少60％、70％、80％、90％或至少95％，或者甚至至少96％、97％、98％或99％相同。
通常，重组人抗体将在VH或VL构架区显示与人种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过10个氨基酸的差异。在一些情况下，人抗体可以显示与种系免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列不超过5个，或甚至不超过4、3、2或1个氨基酸的差异。人种系免疫球蛋白基因的例子包括但不限于下述可变域种系片段，以及DP47和DPK9。
同源抗体
在用于本文所述方法(例如，用于治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法)的其它实施方案中，本公开提供了抗体或其抗原结合片段，其包含与表1中所述序列(例如，SEQ ID NO:29、31、39或41)同源的氨基酸序列，并且该抗体结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXIa)，并且保留表1中描述的那些抗体(例如抗体2和抗体1)的所需功能特性。在具体的方面，此类同源抗体保留了表1中描述的CDR氨基酸序列(例如，Kabat CDR、Chothia CDR、IMGT CDR或组合CDR)。
例如，在一些实施方案中，本公开提供了分离的抗体或其功能性抗原结合片段，其包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与选自SEQ ID NO:9和29的氨基酸序列具有至少80％、至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列；所述轻链可变结构域包含与选自SEQ ID NO:19和39的氨基酸序列有至少80％、至少90％或至少95％同一性的氨基酸序列；并且所述抗体特异性结合FXI和/或FXIa(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXIa)。在一个实施方案中，分离的抗体或其功能性抗原结合片段包含重链可变区结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列；轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列；并且该抗体特异性结合FXI和/或FXIa(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXIa)。在一个实施方案中，分离的抗体或其功能性抗原结合片段包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中重链可变结构域包括与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列；轻链可变结构域包含与SEQ IDNO:39的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列；并且该抗体特异性结合FXI和/或FXIa(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXIa)。在本公开的一些方面，重链和轻链序列还包含由Kabat定义的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，例如分别为SEQID NO:3、4、5、13、14和15。在本公开的一些其他方面，重链和轻链序列还包含由Chothia定义的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，例如SEQ ID NO:6、7、8、16、17和18。在一些其他方面，重链和轻链序列还包含由组合系统定义的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，例如分别为SEQ ID NO:46、4、5、33、14和15。在一些其他方面，重链和轻链序列还包含由IMGT定义的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，例如分别为SEQ ID NO:43、44、45、47、37和15。
在用于本文所述方法的其它实施方案中，VH和/或VL氨基酸序列可与表1中列出的序列具有50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在用于本文所述的制剂的其它实施方案中，VH和/或VL氨基酸序列可以与表1中列出的序列有50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在其它实施方案中，除了不超过1、2、3、4或5个氨基酸位置的氨基酸取代外，VH和/或VL氨基酸序列可以是相同的。具有与表1中所述的VH和VL区域具有高度(即80％或更高)同一性的VH和VL区的抗体可通过分别编码SEQ ID NO:10或30和SEQ ID NO:20和40的核酸分子的诱变(例如，定点或PCR介导的诱变)获得，随后使用本文所述的功能测定法测试编码的改变的抗体的保留功能来获得。
在用于本文所述方法的其它实施方案中，全长的重链和/或全长轻链氨基酸序列可以与表1所示的序列(例如，SEQ ID NO:11和/或21，或31和/或41)有50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在用于本文所述制剂的其他实施方案中，全长重链和/或全长轻链氨基酸序列可以与表1所示的序列(例如，SEQ ID NO:11和/或21，或31和/或41)有50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。具有与SEQ ID NO:11或31任一个的全长重链以及SEQ ID NO:21或41中任一个的全长轻链高度同一性(例如，80％或更高)的全长重链和全长轻链的抗体，可以通过对编码这种多肽的核酸分子进行诱变(例如，定点或PCR介导的诱变)，随后使用本文所述的功能测定法测试编码的改变的抗体的保留功能来获得。
一方面，本文提供了分离的抗体或功能性抗原的结合片段，其包含重链和轻链，其中重链包含与选自SEQ ID NO:11和31的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列；轻链包含与选自SEQ ID NO:21和41的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列；并且所述抗体特异性结合FXI和/或FXIa(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXIa)。在一个实施方案中，分离的抗体或其功能性抗原结合片段包含重链和轻链，其中重链包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列；轻链包含与SEQ ID NO:21的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列；并且所述抗体特异性结合FXI和/或FXIa(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXIa)。在一个实施方案中，分离的抗体或其功能性抗原结合片段包含重链和轻链，其中重链包含与SEQ IDNO:31的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸，轻链包含与SEQ ID NO:41的氨基酸序列至少80％、至少90％或至少95％相同的氨基酸序列；并且所述抗体特异性结合FXI和/或FXIa(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXIa)。在本公开的一些方面，重链和轻链序列进一步包含由Kabat定义的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，例如分别为SEQ ID NO:3、4、5、13、14和15。在本公开的一些其他方面，重链和轻链序列还包含由Chothia定义的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，例如分别为SEQ ID NO:6、7、8、16、17和18。在一些其他方面，重链和轻链序列还包含由组合系统定义的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，例如分别为SEQ ID NO:46、4、5、33、14和15。在一些其他方面，重链和轻链序列还包含由IMGT定义的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3序列，例如分别为SEQ ID NO:43、44、45、47、37和15。
在用于本文所述方法的其它实施方案中，全长重链和/或全长轻链核苷酸序列可以是与表1所示的序列(例如，SEQ ID NO:12和/或22，或32和/或42)具有60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在用于本文所述方法的其它实施方案中，核苷酸序列的重链可变区和/或轻链可变区可以与表1中列出的序列(例如，SEQ ID NO:10和/或20，或30和/或40)具有60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在用于本文所述制剂的其他实施方案中，重链可变区和/或轻链可变区核苷酸序列可以与表1所示序列(例如，SEQ ID NO:10和/或20，或30和/或40)有60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
如本文所用，两个序列之间的同一性百分比是序列共有的相同位置数目的函数(即，％同一性等于相同位置数目/位置总数×100)，考虑了缺口数目和每个缺口的长度，其需要被引入用于两个序列的最佳比对。比较序列并确定两者之间的同一性百分比序列可以使用数学算法来完成，如下文非限制性实例中所述。
本文所述的分离的抗FXI和/或FXIa抗体或其抗原结合片段可以是单克隆抗体、人或人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段、Fv片段、F(ab’)2片段，或scFv片段，和/或IgG同种型(例如，IgG1如人IgG1)。在具体实施方案中，本文所述的抗FXI和/或抗FXIa抗体是重组人抗体。在具体实施方案中，本文所述的抗FXI和/或抗FXIa抗体是人IgG 1/lambda(λ)抗体。在具体实施方案中，本文所述的抗FXI和/或抗FXIa抗体是人IgG1/lambda(λ)抗体，其包含经工程改造以降低效应子功能潜力的Fc结构域(例如，ADCC和/或CDC)，例如包含D265A和/或P329A取代的人Fc结构域。
此外或可选地，本公开的蛋白质序列还可用作“查询序列”以对公共数据库进行搜索，例如，鉴定相关序列。例如，可以使用Altschul等人，1990J.Mol.Biol.215:403-10的BLAST程序(2.0版)进行这种搜索。
保守修饰的抗体
在一些其他实施方案中，用于本文所述方法(例如，用于治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法)的本公开的抗体具有包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中这些CDR序列中的一个或多个具有基于本文所述抗体或其保守修饰的特定氨基酸序列，并且其中所述抗体保留了本公开的FXIa结合抗体的所需功能特性。在一些其他实施方案中，用于本文所述制剂(例如，小瓶中的制剂、静脉内药物递送制剂)的本公开的抗体具有包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区以及包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中这些CDR序列中的一个或多个具有基于本文所述抗体或其保守修饰的特定氨基酸序列，并且其中所述抗体保留了本公开的FXIa结合抗体的所需功能特性。
因此，为了用于本文所述的方法，在一些实施方案中，本公开提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其由包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区组成，其中:重链可变区CDR1氨基酸序列选自SEQ ID NO:3和23及其保守修饰序列；重链可变区CDR2氨基酸序列选自SEQ ID NO:4和24及其保守修饰序列；重链可变区CDR3氨基酸序列选自SEQ ID NO:5和25及其保守修饰序列；轻链可变区CDR1氨基酸序列选自SEQ ID NO:13和33及其保守修饰序列；轻链可变区CDR2氨基酸序列选自SEQ ID NO:14和34及其保守修饰序列；CDR3氨基酸序列的轻链可变区选自SEQ ID NO:15和35及其保守修饰序列；并且该抗体或其抗原结合片段特异性结合FXIa。
为了用于本文所述的制剂，在一些实施方案中，本公开提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其由包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和包含CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区组成，其中:重链可变区CDR1氨基酸序列选自SEQ ID NO:3和23，及其保守修饰序列；重链可变区CDR2氨基酸序列选自SEQ ID NO:4和24及其保守修饰序列；重链可变区CDR3氨基酸序列选自SEQ ID NO:5和25及其保守修饰序列；轻链可变区CDR1氨基酸序列选自SEQ ID NO:13和33及其保守修饰序列；轻链可变区CDR2氨基酸序列选自SEQ ID NO:14和34及其保守修饰序列；CDR3氨基酸序列的轻链可变区选自SEQ ID NO:15和35，以及其保守修饰序列；并且该抗体或其抗原结合片段特异性结合FXIa。
一方面，本文提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其由包含CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和包含CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区组成的序列，其中:重链可变区CDR1氨基酸序列选自表1中描述的序列及其保守修饰；重链可变区CDR2氨基酸序列选自表1中描述的序列及其保守修饰；这重链可变区CDR3氨基酸序列选自表1中描述的序列及其保守修饰；轻链可变区CDR1氨基酸序列选自表1中描述的序列及其保守修饰；轻链可变区CDR2氨基酸序列选自表1中描述的序列及其保守修饰；CDR3氨基酸序列的轻链可变区选自表1中描述的序列及其保守修饰；并且该抗体或其抗原结合片段特异性结合FXIa。
在用于本文所述方法的其它实施方案中，本公开的抗体经优化以在哺乳动物细胞中表达，其具有全长重链序列和全长轻链序列，其中这些序列中的一个或多个具有基于本文所述抗体或其保守修饰的特定氨基酸序列，且其中所述抗体保留了本公开的FXIa结合抗体的所需功能特性。在用于本文所述制剂的其他实施方案中，本公开的抗体被优化用于在哺乳动物细胞中表达，具有全长重链序列和全长轻链序列，其中一个或多个这些序列具有基于本文所述抗体或其保守修饰的特定氨基酸序列，并且其中所述抗体保留了本公开的FXIa结合抗体的所需功能特性。因此，本公开提供了为在哺乳动物细胞中表达而优化的分离的抗体，其由全长重链和全长轻链组成，其中全长重链具有选自SEQ ID NO:11或31及其保守修饰的氨基酸序列；并且全长轻链具有选自SEQ ID NO:21或41及其保守修饰的氨基酸序列；并且所述抗体特异性结合FXI和/或FXIa(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXIa)。
结合相同表位的抗体
在一些实施方案中，本公开提供了与表1中所述的FXI和/或FXIa结合抗体竞争相同表位的抗体，用于本文所述的方法(例如，用于治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法)。在一些实施方案中，本公开提供了与表1中所述的FXI和/或FXIa结合抗体竞争相同表位的抗体，用于本文所述的制剂中(例如，小瓶中的制剂，静脉内药物递送制剂)。因此，可以根据抗体(例如，竞争性抑制，以统计学上显著的方式通过与相同或重叠的表位结合)与本公开的其他抗体在FXI和/或FXIa结合试验中竞争结合(例如实施例部分中描述的那些)来鉴定另外的抗体。测试抗体抑制本公开抗体与FXI和/或FXIa蛋白结合的能力表明，测试抗体可与该抗体竞争与FXI和/或FXIa的结合；根据非限制性理论，这样的抗体可与FXI和/或FXIa蛋白上与其竞争的抗体相同或相关的(例如，结构相似或空间邻近的)表位结合。在一些实施方案中，与本公开的抗体结合FXI和/或FXIa上相同表位的抗体是人单克隆抗体。此类人单克隆抗体可以如下制备和分离。
如本文所用，当竞争抗体与本公开的抗体或抗原结合片段(例如，抗体1或抗体2)结合相同的FXI和/或FXIa表位时，抗体“竞争”结合，并在等摩尔浓度的竞争抗体的存在下，抑制本公开的抗体或抗原结合片段的FXI和/或FXIa结合超过50％(例如，80％、85％、90％、95％、98％或99％)的抗体。例如，这可以通过本领域技术人员熟知的任何方法在竞争性结合试验中确定。
如本文所用，抗体或其抗原结合片段不与本公开的FXI和/或FXIa抗体或抗原结合片段(例如，抗体1或抗体2)竞争，除非所述竞争抗体或其抗原结合片段与本公开的抗体或抗原结合片段结合相同的FXI和/或FXIa表位，或重叠的FXI和/或FXIa表位。如本文所用，竞争性抗体或其抗原结合片段不包括(i)在空间上阻断本公开的抗体或抗原结合片段与其靶结合的抗体或抗原结合片段(例如，如果所述竞争性抗体与附近的非重叠FXI和/或FXIa表位结合，并在物理上阻止本公开的抗体或抗原结合片段与其靶结合)；和/或(ii)结合不同的、非重叠的FXI和/或FXIa表位，并诱导FXI和/或FXIa蛋白的构象变化，使得所述蛋白不能被本公开的FXI和/或FXIa抗体或抗原结合片段以没有发生所述构象变化时的方式结合。
工程化和修饰抗体
在一些实施方案中，用于本文所述方法的本公开的抗体，还可使用具有本文所示的一种或多种VH和/或VL序列的抗体作为起始材料来制备，以改造经修饰的抗体，所述经修饰的抗体可具有与起始抗体不同的性质。在一些实施方案中，用于制剂中的本公开的抗体的序列，还可以使用具有本文所示的一个或多个VH和/或VL序列的抗体作为起始材料来制备，以改造修饰的抗体，该修饰的抗体可以具有与起始抗体不同的性质。可以通过修饰一个或两个可变区(即VH和/或VL)内的一个或多个残基来改造抗体，例如在一个或多个CDR区内和/或在一个或多个框架区。另外或可选地，可以通过修饰恒定区内的残基来改造抗体，例如改变抗体的效应子功能。
可进行的一种可变区工程是CDR移植。抗体主要通过与位于六个重链和轻链互补决定区(CDR)的氨基酸残基与靶抗原相互作用。由于这个原因，CDR内的氨基酸序列在各个抗体之间比CDR外的序列更加多样化。因为CDR序列负责大多数抗体-抗原相互作用，所以有可能通过构建表达载体来表达模拟特定天然抗体特性的重组抗体载体，所述表达载体包括来自特定天然抗体的CDR序列，所述CDR序列被移植到来自具有不同特性的不同抗体的框架序列上(参见，例如，Riechmann,L.等人,1998Nature 332:323-327；Jones,P.等人,1986Nature 321:522-525；Queen,C.等人,1989Proc.Natl.Acad.,U.S.A.86:10029-10033；Winter的美国专利号5,225,539和美国专利号5,530,101；Queen等人，美国专利号5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
因此，本公开的另一个实施方案涉及分离的抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区，其包含分别具有选自SEQ ID NO:3和23的氨基酸序列的CDR1序列；具有选自SEQ IDNO:4和24的氨基酸序列的CDR2序列；具有选自SEQ ID NO:5和25的氨基酸序列的CDR3序列；和轻链可变区，其包含分别具有选自SEQ ID NO:13和33的氨基酸序列的CDR1序列；具有选自SEQ ID NO:14和34的氨基酸序列的CDR2序列；和选自SEQ ID NO:15和35的氨基酸序列的CDR3序列。因此，此类抗体含有单克隆抗体的VH和VL CDR序列，但可以含有与这些抗体不同的框架序列。
此类框架序列可从公共DNA数据库或包括种系抗体基因序列的公开参考文献中获得。例如，人类重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库中找到，也可以在Kabat,E.A.,等人，1991 Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第五版，U.S.Department of Health and Human Services,NIH PublicationNo.91-3242；Tomlinson,I.M.,等人，1992J.Mol.Biol.227:776-798；和Cox,J.P.L.等人,1994Eur.J Immunol.24:827-836中找到；每个内容通过引用明确并入本文。
用于本公开内容的抗体的框架序列的实例是与本公开内容的选定抗体所使用的框架序列在结构上相似的那些，例如，本公开的单克隆抗体所使用的共有序列和/或框架序列。VH CDR1，2和3序列，以及VL CDR1，2和3序列，可以被移植到具有与在衍生框架序列的种系免疫球蛋白基因中发现的序列相同的序列，或者CDR序列可以被移植到与种系序列相比含有一个或多个突变的框架区域上。例如，已经发现在一些情况下，突变构架区内的残基以保持或增强抗体的抗原结合能力是有益的(参见，例如，Queen等人的美国专利号5,530,101；5,585,089；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。可用作构建本文所述抗体和抗原结合片段的支架的框架包括但不限于VH1A、VH1B、VH3、Vk1、Vl2和Vk2。
因此，为了用于本文所述的方法，本公开的另一个实施方案涉及分离的FXIa结合抗体或其抗原结合片段，其包含含有选自SEQ ID NO:9和29的氨基酸序列，或在这些序列的框架区中具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的重链可变区，还包含含有选自SEQ ID NO:19和39的氨基酸序列的，或在这些序列的框架区中具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的轻链可变区。
因此，为了用于本文所述的制剂，本公开的另一个实施方案涉及分离的FXIa结合抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:9和29的氨基酸序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区具有选自SEQ ID NO:19和39的氨基酸序列，或者在这些序列的框架区中具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列。
另一类可变区修饰是在VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基的突变，从而改善目的抗体的一种或多种结合特性(例如亲和力)，称为“亲和力成熟”。可以进行定点诱变或PCR介导的诱变来引入突变，并且可以在如本文所述和实施例部分所提供的体外或体内试验中评估对抗体结合或其它感兴趣的功能性质的影响。可以引入保守修饰(如上所述)。突变可以是氨基酸取代、添加或缺失。此外，通常CDR区内不超过1、2、3、4或5个残基被改变。
因此，在用于本文所述方法的另一个实施方案中，本公开提供了分离的FXIa结合抗体或抗原结合片段的氨基酸序列，由以下组成：重链可变区，所述重链可变区具有：VHCDR1区，所述VH CDR1区由选自SEQ ID NO:3和23的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3和23相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或或添加的氨基酸序列组成；VH CDR2区，所述VH CDR2区具有选自SEQ ID NO:4和24的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4和24相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列；VH CDR3区，所述VH CDR3区具有选自SEQ ID NO:5和25的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:5和25相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列；具有选自SEQ ID NO:13和33的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:13和33相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR1区；具有选自SEQ ID NO:14和34的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:14和34相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR2区；和具有选自SEQ ID NO:15和35的氨基酸序列，或与SEQ IDNO:15和35相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR3区。
因此，在用于本文所述方法的另一个实施方案中，本公开提供了分离的FXIa结合抗体或其抗原结合片段，其以下组成：重链可变区，所述重链可变区具有VH CDR1区，所述VHCDR1区由选自具有SEQ ID NO:6和26的氨基酸序列或与SEQ ID NO:6和26相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列组成；具有选自SEQ ID NO:7和27的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7和27相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VH CDR2区；具有选自SEQ ID NO:8和28的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:8和28相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VH CDR3区；具有选自SEQ ID NO:16和36的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:16和36相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR1区；具有选自SEQ ID NO:17和37的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:17和37相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR2区；和具有选自SEQ ID NO:18和38的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:18和38相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR3区。
因此，在用于本文所述制剂的另一个实施方案中，本公开提供了分离的FXIa结合抗体或其抗原结合片段，其由以下组成：重链可变区，具有VH CDR1区，所述VH CDR1区由选自具有SEQ ID NO:3和23的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3和23相比有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列组成；具有选自SEQ ID NO:4和24的氨基酸序列或与SEQ IDNO:4和24相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VH CDR2区；具有选自SEQ ID NO:5和25的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5和25相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VH CDR3区；具有选自SEQ ID NO:13和33的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:13和33相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VLCDR1区；具有选自SEQ ID NO:14和34，或与SEQ ID NO:14和34相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列VL CDR2区；和具有选自SEQ ID NO:15和35的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:15和35相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR3区。
因此，在用于本文所述制剂的另一个实施方案中，本公开提供了分离的FXIa结合抗体或其抗原结合片段，其由以下组成：重链可变区，所述重链可变区具有VH CDR1区，所述VH CDR1区由选自SEQ ID NO:6和26的氨基酸序列或与SEQ ID NO:6和26相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列组成；具有选自SEQ ID NO:7和27的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7和27相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失的氨基酸序列的VH CDR2区；具有选自SEQ ID NO:8和28的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:8和28相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VH CDR3区；具有选自SEQ ID NO:16和36，或与SEQ ID NO:16和36相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VLCDR1区；具有选自SEQ ID NO:17和37的氨基酸序列或与SEQID NO:17和37相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR2区；和具有选自SEQ ID NO:18和38的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:18和38相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列的VL CDR3区。
半衰期延长的抗体
在一些实施方案中，本公开提供了特异性结合FXIa蛋白的抗体，其在体内具有延长的半衰期，用于本文所述的方法或制剂中。
许多因素可影响蛋白质的体内半衰期。例如，肾脏过滤、肝脏代谢、蛋白水解酶(蛋白酶)降解，以及免疫原性反应(例如，通过抗体中和蛋白质以及通过巨噬细胞和树突细胞摄取)。多种策略可用于延长本公开抗体的半衰期。例如，通过与聚乙二醇(PEG)、ReCODEPEG、抗体支架、聚唾液酸(PSA)、羟乙基淀粉(HES)、白蛋白结合配体和碳水化合物屏蔽物的化学连接；通过基因融合到与血清蛋白结合的蛋白，例如白蛋白、IgG、FcRn，并转移；通过(基因或化学)偶联到与血清蛋白结合的其它结合部分，如纳米抗体、Fabs、DARPins、avimers、亲和体和抗磷脂；通过与rPEG、白蛋白、白蛋白结构域、白蛋白结合蛋白和Fc的基因融合；或者掺入纳米载体、缓释制剂或医疗装置中。
为了延长体内抗体的血清循环，可将惰性聚合物分子如高分子量PEG与抗体或其片段连接，使用或不使用多功能接头，通过PEG与抗体的N-或C-末端或通过赖氨酸残基上存在的ε-氨基。为了聚乙二醇化抗体，抗体或其片段通常与聚乙二醇(PEG)，例如PEG的反应性酯或醛衍生物，在一个或多个PEG基团连接到抗体或抗体片段的条件下反应。聚乙二醇化可以通过与活性PEG分子(或类似的活性水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应来进行。如本文所用，术语“聚乙二醇”旨在包括已经用于衍生其它蛋白质的任何形式的PEG，例如单(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在一些实施方案中，待聚乙二醇化的抗体是无糖基化的抗体。将使用导致最小生物活性损失的线性或支化聚合物衍生。缀合程度可以通过SDS-PAGE和质谱法密切监测，以确保PEG分子与抗体的正确缀合。未反应的PEG可以通过尺寸排阻或离子交换层析从抗体-PEG缀合物中分离出来。使用本领域技术人员熟知的方法，例如通过本文所述的免疫测定法，可以测试PEG衍生的抗体的结合活性以及体内功效。聚乙二醇化蛋白质的方法是本领域已知的，并且可以应用于本公开的抗体。参见例如Nishimura等人的EP 0 154 316和Ishikawa等人的EP 0 401 384。
其它经修饰的聚乙二醇化技术包括重建化学正交定向工程技术(ReCODE PEG)，其通过包含tRNA合成酶和tRNA的重建系统将化学指定的侧链并入生物合成蛋白质中。这项技术能够将30多种新氨基酸整合到大肠杆菌、酵母和哺乳动物细胞的生物合成蛋白中。tRNA在琥珀密码子的任何位置掺入非天然氨基酸，将琥珀密码子从终止密码子转变为指示掺入了化学上特定的氨基酸的密码子。
重组聚乙二醇化技术(rPEG)也可用于延长血清半衰期。这项技术包括基因融合300-600个氨基酸的非结构化的蛋白尾到现有的药物蛋白。因为此类非结构化蛋白质链的表观分子量是其实际分子量的大约15倍，所以该蛋白质的血清半衰期大大增加。与需要化学结合和再纯化的传统的聚乙二醇化相反，制造过程被大大简化并且产品是均质的。
聚唾液酸是另一种技术，其使用天然聚合物聚唾液酸(PSA)来延长治疗性肽和蛋白质的活性寿命并提高治疗性肽和蛋白质的稳定性。PSA是唾液酸(一种糖)的聚合物。当用于蛋白质和治疗性肽药物递送时，聚唾液酸提供了缀合的保护性微环境。这增加了治疗性蛋白质在循环中的活性寿命，并防止其被免疫系统识别。PSA聚合物天然存在于人体中。它被一些细菌所采用，这些细菌经过数百万年的进化，用它来覆盖它们的细胞壁。这些天然聚唾液酸化的细菌然后能够凭借分子模拟来挫败身体的防御系统。PSA是自然界的终极隐形技术，可以很容易地从此类细菌中大量产生，并具有预定的物理特性。细菌PSA完全无免疫原性，即使与蛋白质偶联，因为它在化学上与人体内的PSA相同。
另一项技术包括使用与抗体连接的羟乙基淀粉(“HES”)衍生物。羟乙基淀粉是一种改性的天然聚合物，来源于蜡质玉米淀粉，可以被身体的酶代谢。HES溶液通常用于补充不足的血容量和改善血液的流变特性。抗体的糖基化能够通过增加分子的稳定性延长循环半衰期，以及通过降低肾清除率，导致生物活性增加。通过改变不同的参数，如HES的分子量，可以定制多种HES抗体缀合物。
也可通过向IgG的恒定结构域或其FcRn结合片段(优选Fc或铰链Fc结构域片段)中引入一个或多个氨基酸修饰(即，取代、插入或缺失)来产生体内半衰期延长的抗体。参见例如国际公开号WO 98/23289；国际公开号WO 97/34631；和美国专利第6,277,375号。
此外，抗体可与白蛋白(例如，人血清白蛋白；HSA)缀合以使抗体或抗体片段在体内更稳定或具有更长的体内半衰期。这些技术在本领域是众所周知的，参见例如国际公开号WO 93/15199、WO 93/15200和WO 01/77137；和欧洲专利EP 413,622。此外，在如上所述的双特异性抗体的情况下可以设计抗体的特异性，使得抗体的一个结合结构域结合FXIa，而抗体的第二个结合结构域结合血清白蛋白，优选HSA。
增加半衰期的策略特别适用于纳米抗体、基于纤连蛋白的结合剂和其他需要增加体内半衰期的抗体或蛋白质。
抗体缀合物
在一些实施方案中，本公开提供了用于本文所述方法或制剂的抗体或其片段，其特异性结合FXIa蛋白与异源蛋白或多肽(或其片段，优选与至少10、至少20、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70、至少80、至少90或至少100个氨基酸的多肽)重组融合或化学缀合(包括共价和非共价缀合)以产生融合蛋白质。具体而言，本公开提供了包含本文所述抗体的抗原结合片段(例如，Fab片段、Fd片段、Fv片段、F(ab)2片段、VH结构域、VH CDR、VL结构域或VL CDR)和异源蛋白、多肽或肽的融合蛋白。将蛋白质、多肽或肽与抗体或抗体片段融合或偶联的方法是本领域已知的。参见例如美国专利5,336,603,5,622,929,5,359,046,5,349,053,5,447,851,和5,112,946；欧洲专利EP 307,434和EP 367,166；国际公开号WO 96/04388和WO 91/06570；Ashkenazi等人，1991年，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:10535-10539；Zheng等人，1995，J.Immunol.154:5590-5600；和Vil等人.,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:11337-11341。
可通过基因改组、基序改组、外显子改组和/或密码子改组(统称为“DNA改组”)技术产生额外的融合蛋白。DNA改组可用于改变本公开抗体或其片段的活性(例如，具有更高亲和力和更低解离速率的抗体或其片段)。通常参见美国专利号5,605,793,5,811,238,5,830,721,5,834,252和5,837,458；Patten等人,1997,Curr.Opinion Biotechnol.8:724-33；Harayama,1998,Trends Biotechnol.16(2):76-82；Hansson等人,1999,J.Mol.Biol.287:265-76；和Lorenzo和Blasco,1998,Biotechniques 24(2):308-313(这些专利和出版物的每一个在此通过提述整体并入本文)。抗体或其片段，或编码的抗体或片段，可以通过在重组前用易错PCR(error-prone PCR)、随机核苷酸插入或其它方法进行随机诱变而被改变。编码特异性结合FXIa蛋白的抗体或其片段的多核苷酸可以与一种或多种异源分子的一种或多种成分、基序、区段、部分、结构域、片段等重组。
此外，抗体或其片段可融合至标记序列，例如肽，以促进纯化。在一些实施方案中，标志氨基酸序列是六组氨酸肽(SEQ ID NO:48)，例如pQE载体(QIAGEN，Inc.，9259EtonAvenue，Chatsworth，CA，91311)中提供的标签，其中许多是可商购的。如Gentz等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:821-824。例如，USA 86:821-824，六组氨酸(SEQ ID NO:48)提供了融合蛋白的方便纯化。可用于纯化的其它肽标签包括但不限于血凝素(“HA”)标签，其对应于衍生自流感血凝素蛋白的表位(Wilson等，1984，Cell 37:767)，以及“flag”标签。
在其它实施方案中，本公开的抗体或其片段缀合至诊断剂或可检测剂。此类抗体可用于监测或预测疾病或病症的发作、发展、进展和/或严重性，作为临床测试程序的一部分，例如确定特定疗法的功效。此类诊断和检测可以通过将抗体与可检测物质偶联来完成，可检测物质包括但不限于各种酶，例如但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；辅基，例如但不限于链霉亲和素生物素和亲和素/生物素；荧光材料，例如但不限于伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素，罗丹明、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料，例如但不限于鲁米诺；生物发光材料，例如但不限于荧光素酶、荧光素和水母发光蛋白；放射性材料，例如但不限于碘(131I、125I、123I和121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(115In、113In、112In和111ln)、锝(99Tc)、铊(201Ti)、镓(68Ga，67Ga)、钯(103Pd)、钼(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn,和117Tin；和正电子发射金属，以及去甲放射性顺磁性金属离子。
在一些实施方案中，本公开进一步涵盖与治疗部分缀合的抗体或其片段的用途。抗体或片段可与治疗部分如细胞毒素(如细胞抑制剂或杀细胞剂)、治疗剂或放射性金属离子(如α-发射体)缀合。细胞毒素或细胞毒剂包括任何对细胞有害的物质。
此外，抗体或其片段可与修饰给定生物反应的治疗部分或药物部分缀合。治疗部分或药物部分不应被解释为限于传统的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有所需生物活性的蛋白质、肽或多肽。此类蛋白质可包括例如毒素，如相思子毒素、蓖麻毒素A、假单胞菌外毒素、霍乱毒素或白喉毒素；蛋白质如肿瘤坏死因子、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生生长因子、组织纤溶酶原激活剂，凋亡剂，抗血管生成剂；或者生物反应调节剂，例如淋巴因子。
此外，抗体可缀合至治疗部分，例如放射性金属离子，例如alph-发射体，例如213Bi或用于缀合放射性金属离子的大环螯合剂至多肽，包括但不限于31In、131LU、131Y、131Ho、131Sm。在一些实施方案中，大环螯合剂是1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N’,N”,N”-四乙酸(DOTA)，其可以通过接头分子连接到抗体上。此类接头分子在本领域中是公知的，并在Denardo等人，1998，Clin Cancer RES.4(10):2483-90；Peterson等人，1999年，Bioconjug.Chem.10(4):553-7；和Zimmerman等人，1999年，Nucl.Med.Biol.26(8):943-50中描述，每一篇都以引用方式全文并入本文。
将治疗部分与抗体缀合的技术是众所周知的，参见，例如，Arnon等人，“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”，载于Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy，Reisfeld等人(编辑)，第243-56页(AlanR.Liss,Inc.1985)；Hellstrom等人，“Antibodies For Drug Delivery”，载于ControlledDrug Delivery(2nd Ed.),Robinson等(编辑)，第623-53页(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe，“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review”，载于Monoclonal Antibodies 84:Biological And Clinical Applications，Pinchera等人(编辑)，第475-506页(1985)；“Analysis,Results,And Future Prospective Of TheTherapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”,载于MonoclonalAntibodies For Cancer Detection And Therapy,Baldwin等人(编辑),pp.303-16(Academic Press 1985),和Thorpe等人,1982,Immunol.Rev.62:119-58。
抗体也可附着于固体支持物，其特别适用于免疫测定或目标抗原的纯化。此类固体支持物包括但不限于玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。
药物制剂
在一些实施方案中，本公开还提供了包含治疗有效量的本文公开的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，抗体1)的药物制剂。药物制剂包含一种或多种赋形剂，并保持在一定的pH值。本文所用的“赋形剂”的非限制性实例包括加入制剂中的任何非治疗剂，以提供所需的物理或化学性质，例如pH、渗透压、粘度、透明度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶解或释放速率、吸附或渗透。
药物物质
抗体1是高亲和力的抗人因子XI单克隆抗体。其在中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-C8TD)中表达。在一些实施方案中，抗体1药物物质被完全配制用于皮下给药(即，不添加其他赋形剂)，因此在组成上与抗体1药物产品相同。在一些实施方案中，对于静脉内给药，抗体1药物产品在合适的载体中进一步稀释。在一些实施方案中，将抗体1药物产品稀释在含有葡萄糖的溶液中，例如5％葡萄糖水溶液(DSW)。
赋形剂和pH
在一些实施方案中，抗体1药物产品中包含的赋形剂为药典级赋形剂。在一些实施方案中，抗体1药物产品中的赋形剂包含组氨酸、组氨酸盐、糖和聚山梨醇酯。在一些实施方案中，抗体1药物产品中的赋形剂包括L-组氨酸和L-组氨酸盐酸盐一水合物(组氨酸缓冲液)、蔗糖和聚山梨醇酯20。赋形剂可以根据其静脉内和皮下给药的适宜性进行选择，提供必要的稳定性、缓冲能力和张力。该制剂使单克隆抗体产品的稳定性最大化，并且可以提供适于皮下或静脉内给药的无菌溶液。在一些实施方案中，糖(例如蔗糖)充当稳定剂。在一些实施方案中，组氨酸(例如，L-组氨酸，L-组氨酸盐酸盐一水合物)作为缓冲剂。在一些实施方案中，聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20)充当稳定剂。在一些实施方案中，将制剂在注射用水(WFI)中调节至最终体积。
本公开的药物制剂中的一种或多种赋形剂包含缓冲剂。本文所用术语“缓冲剂”是指一种或多种组分，当加入到水溶液中时，当加入酸或碱时或用溶剂稀释时能够保护溶液免受pH变化的影响。除了磷酸盐缓冲液，还可以使用甘氨酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、组氨酸缓冲剂等，在这种情况下，钠、钾或铵离子可以作为抗衡离子。
在一些实施方案中，缓冲剂或缓冲系统包含至少一种缓冲范围与pH 5.0-7.4的范围完全或部分重叠的缓冲剂。在一些实施方案中，缓冲剂的pH值为约5.5±0.5。在一些实施方案中，缓冲液包含组氨酸缓冲液。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液以0.05-10mM、0.1-10mM、0.2-10mM、0.5-10mM、1-10mM、5-10mM、5-100mM、10-100mM、15-100mM、20-100mM、30-100mM、40-100mM、50-100mM、60-100mM、70-100mM、80-100mM,90-100mM、5-90mM、5-80mM、5-70mM、5-60mM、5-50mM、5-40mM、5-30mM、5-20mM,10-50mM,10-40mM,10-30mM,10-20mM,5-25mM,10-25mM,15-25mM,20-25mM,5-20mM,10-20mM或15-20mM的浓度存在。在一些情况下，组氨酸以约0.1mM、0.2mM、0.5mM、1mM、5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM或约50mM的浓度存在。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液以约20mM的浓度存在。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液以约0.20mM的浓度存在。在一些实施方案中，组氨酸缓冲液具有约5.0、约5.5、约6.0、约6.5或约7.0的pH。在一个特定的实施方案中，组氨酸缓冲液的pH值约为5.5。
本公开的药物制剂可具有5.0至6.0的pH。例如，在一些实施方案中，药物制剂具有5.0至6.0(即，5.5±0.5)、5.1至5.9(即，5.5±0.4)、5.2至5.8(即，5.5±0.3)、5.3至5.7(即，5.5±0.2)、5.4至5.6(即，5.5±0.1)、或5.45至5.55(即，5.5±0.05)。在一些实施方案中，药物制剂具有约5.5、约5.6、约5.7、约5.8、约5.9、约6.0、约6.1、约6.2、约6.3、约6.4或约6.5的pH。在一些实施方案中，药物制剂具有约5.5的pH。根据科学四舍五入的规则，大于或等于5.45且小于或等于5.55的pH值四舍五入为5.5。
在一些实施方案中，药物制剂的缓冲系统包含10至30mM的组氨酸，pH为5.5±0.2。在一些实施方案中，药物制剂的缓冲系统包含约20mM的组氨酸，pH为5.5±0.2。在一些实施方案中，药物制剂的缓冲系统包含10至30mM的组氨酸，pH为5.5±0.05。在一些实施方案中，药物制剂的缓冲系统包含约20mM的组氨酸，pH为5.5±0.05。
在一些实施方案中，药物制剂的缓冲系统包含0.10至0.30mM的组氨酸，pH为5.5±0.2。在一些实施方案中，药物制剂的缓冲系统包含约0.20mM的组氨酸，pH为5.5±0.2。在一些实施方案中，药物制剂的缓冲系统包含0.10至0.30mM的组氨酸，pH为5.5±0.05。在一些实施方案中，药物制剂的缓冲系统包含约0.20mM的组氨酸，pH为5.5±0.05。
本公开药物制剂中的一种或多种赋形剂还包含糖或糖醇。糖和糖醇在药物制剂中作为热稳定剂是有用的。在一些实施方案中，药物制剂包含糖，例如单糖(葡萄糖、木糖或赤藓糖醇)、二糖(例如蔗糖、海藻糖、麦芽糖或半乳糖)或寡糖(例如水苏糖)。在具体实施方案中，药物制剂包含蔗糖。在一些实施方案中，药物组合物包含糖醇，例如衍生自单糖的糖醇(例如甘露醇、山梨醇或木糖醇)，衍生自二糖的糖醇(例如乳糖醇或麦芽糖醇)，或衍生自寡糖的糖醇。在具体实施方案中，药物制剂包含蔗糖。
包含在制剂中的糖或糖醇的量可根据具体情况和制剂使用的预期目的而变化。在一些实施方案中，药物制剂包含50至300mM、50至250mM、100至300mM、100至250mM、150至300mM、150至250mM、200至300mM、200至250mM或250至300mM的糖或糖醇。在一些实施方案中，药物制剂包含约50mM、约75mM、约100mM、约125mM、约150mM、约200mM、约220mM、约250mM或约300mM的糖或糖醇。在具体实施方案中，药物制剂包含约220mM的糖或糖醇(例如蔗糖)。
包含在制剂中的糖或糖醇的量可根据具体情况和制剂使用的预期目的而变化。在一些实施方案中，药物制剂包含0.50至3.00mM、0.50至2.50mM、1.00至3.00mM、1.00至2.50mM、1.50至3.00mM、1.50至2.50mM、2.00至3.00mM、2.00至2.50mM或2.50至3.00mM的糖或糖醇。在一些实施方案中，药物制剂包含约0.50mM、约0.75mM、约1.00mM、约1.25mM、约1.50mM、约2.00mM、约2.20mM、约2.50mM或约3.00mM的糖或糖醇。在具体实施方案中，药物制剂包含约2.20mM的糖或糖醇(例如蔗糖)。
本文公开的药物制剂中的一种或多种赋形剂还包含表面活性剂。本文使用的术语“表面活性剂”是指包含疏水部分(例如烷基链)和亲水部分(例如羧基和羧酸酯基团)的表面活性分子。表面活性剂在药物制剂中用于减少治疗性蛋白质的聚集。适用于以下领域的表面活性剂药物制剂通常是非离子表面活性剂，包括但不限于聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；脱水山梨醇酯和衍生物；Triton；月桂硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-磺基甜菜碱；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油酸基-或硬脂基-肌氨酸；亚麻酸基-、肉豆蔻基-或十六烷基-甜菜碱；月桂酰氨基丙基-椰油酰氨基丙基-、油酰氨基丙基-，肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基甜菜碱(例如月桂酰胺丙基)；肉豆蔻酰胺丙基-、棕榈酰胺丙基-或异硬脂酰胺丙基-二甲胺；甲基椰油酰钠或甲基油酰牛磺酸钠；和MONAQUATTM系列(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)，聚乙二醇，聚丙二醇，以及乙二醇和丙二醇的共聚物(例如，Pluronics,PF68等)。在一些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯。在一些实施方案中，表面活性剂是聚山梨醇酯20。
本公开药物制剂中包含的非离子表面活性剂的量可根据制剂所需的具体性质以及制剂预期使用的具体情况和目的而变化。在一些实施方案中，药物制剂包含0.02％至0.06％、0.03％至0.05％、或0.035％至0.045％的非离子表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20)。在一些实施方案中，药物制剂包含约0.005％、约0.01％、约0.02％、约0.03％、约0.04％、约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％或约0.1％的非离子表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20)。
本公开药物制剂中包含的非离子表面活性剂的量可根据制剂所需的具体性质以及制剂预期使用的具体情况和目的而变化。在一些实施方案中，药物制剂包含0.0002％至0.0006％、0.0003％至0.0005％、或0.00035％至0.00045％的非离子表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20)。在一些实施方案中，药物制剂包含约0.00005％、约0.0001％、约0.0002％、约0.0003％、约0.0004％、约0.0005％、约0.0006％、约0.0007％、约0.0008％、约0.0009％或约0.001％的非离子表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)。
在一些实施方案中，将药物产品稀释于适用于给药途径(例如，静脉内给药)的水性载体中。示例性的载体包括无菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH缓冲液溶液(例如，磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液或葡萄糖溶液。在一个实施方案中，当制备用于静脉给药的药物制剂时，该药物制剂可以在5％葡萄糖溶液(DSW)中稀释。
示例性制剂
在一些实施方案中，本公开的药物制剂包含因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和具有SEQ ID NO:19或39的氨基酸序列的链可变结构域(VL)的抗体)、组氨酸缓冲液、糖或糖醇(例如蔗糖)和聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，pH为5.5至6.5。
在一些实施方案中，药物制剂包含100至200mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和氨基酸序列为SEQ IDNO:19或39的轻链可变结构域(VL)的抗体)、10至30mM的组氨酸缓冲液、200至300mM的糖或糖醇(例如，蔗糖)和0.02％至0.06％的聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，pH为5.0至6.0。在一些方面实施方案中，药物制剂包含100至200mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和氨基酸序列为SEQ ID NO:19或39的轻链可变结构域(VL)的抗体)、约20mM的组氨酸缓冲液、约220mM的糖或糖醇(例如，蔗糖)和约0.04％的聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，pH值为5.0至6.0。在一些实施方案中，药物制剂包含100至200mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体、约20mM的组氨酸缓冲液、约220mM的糖或糖醇(例如蔗糖)和约0.04％的聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，pH为5.2至5.8。在一些实施方案中，药物制剂包含100至200mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和氨基酸序列为SEQ ID NO:19或39的轻链可变结构域(VL)的抗体)、约20mM的组氨酸缓冲液、约220mM的糖或糖醇(例如，蔗糖)和约0.04％的聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20)，pH为5.45至5.55。
在一些实施方案中，所述药物制剂包含1.00至2.00mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和氨基酸序列为SEQ ID NO:19或39的轻链可变结构域(VL)的抗体)、0.10至0.30mM的组氨酸缓冲液、2.00至3.00mM的糖和0.0002％至0.0006％的聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，pH为5.0至6.0。在一些实施方案中，药物制剂包含1.00至2.00mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和具有SEQ ID NO:19或39的氨基酸序列轻链可变结构域(VL)的抗体)，约0.20mM的组氨酸缓冲液，约2.20mM的糖或糖醇(例如蔗糖)，和约0.0004％的聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)，pH 5.0至6.0。在一些实施方案中，药物制剂包含1.00至2.00mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变区(VH)和氨基酸序列为SEQ ID NO:19或39的轻链可变区(VL)的抗体)，约0.20mM组氨酸缓冲液，约2.20mM的糖或糖醇(例如蔗糖)，以及大约0.0004％的聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20)，pH为5.2至5.8。在一些实施方案中，药物制剂包含1.00至2.00mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和氨基酸序列为SEQ ID NO:19或39的轻链可变结构域(VL)的抗体)、约0.20mM的组氨酸缓冲液、约2.20mM的糖或糖醇(例如蔗糖)和约0.0004％的聚山梨醇酯，pH为5.45至5.55。
在一些实施方案中，所述药物制剂包含100至200mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和氨基酸序列为SEQID NO:19或39的轻链可变结构域(VL)的抗体)，10-30mM组氨酸缓冲液、200-300mM蔗糖和0.02％-0.06％聚山梨醇酯20，pH为5.0至6.0。在一些实施方案中，药物制剂包含100至200mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体、约20mM的组氨酸缓冲液、约220mM的蔗糖和约0.04％的聚山梨醇酯20，pH为5.0至6.0。在一些实施方案中，药物制剂包含100至200mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和氨基酸序列为SEQ ID NO:19或39的轻链可变结构域(VL)的抗体)、约20mM组氨酸缓冲液、约220mM蔗糖和约0.04％聚山梨醇酯20，pH为5.3至5.7。在一些实施方案中，药物制剂包含100至200mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和氨基酸序列为SEQ ID NO:19或39的轻链可变结构域(VL)的抗体)，约20mM组氨酸缓冲液，约220mM蔗糖，和约0.04％聚山梨醇酯20，pH为5.45至5.55。
在一些实施方案中，所述药物制剂包含1.00至2.00mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有SEQ ID NO:9或29的氨基酸序列的重链可变结构域(VH)，和具有SEQ IDNO:19或39的氨基酸序列的轻链可变结构域(VL)的抗体)，0.10至0.30mM组氨酸缓冲液，2.00至3.00mM蔗糖，和0.0002％至0.0006％的聚山梨醇酯20，pH为5.0至6.0。在一些实施方案中，药物制剂包含1.00至2.00mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有SEQ ID NO:9或29的氨基酸序列的重链可变结构域(VH)，和具有SEQ ID NO:19或39的氨基酸序列的轻链可变结构域(VL)的抗体)，约0.20mM的组氨酸缓冲液，约2.20mM的蔗糖，和约0.0004％的聚山梨醇酯20，pH为5.0至6.0。在一些实施方案中，药物制剂包含1.00至2.00mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体，20mM组氨酸缓冲液、约2.20mM蔗糖和约0.0004％聚山梨醇酯20，pH为5.3至5.7。在一些实施方案中，药物制剂包含1.00至2.00mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，具有氨基酸序列为SEQ ID NO:9或29的重链可变结构域(VH)和氨基酸序列为SEQ IDNO:19或39的轻链可变结构域(VL)的抗体)，约0.20mM的组氨酸缓冲液、约2.20mM的蔗糖和约0.0004％的聚山梨醇酯20，pH为5.45至5.55。
在实施方案中，本公开提供了包含结合FXI和/或FXIa蛋白或其抗原结合片段的抗体的药物制剂，所述药物制剂包含在小瓶中，其中所述制剂包括过量填充体积以用于完全取出治疗有效量的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，小瓶包含药物制剂，所述药物制剂包含约150mg结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体，所述抗体具有具有SEQ ID NO:9或29的氨基酸序列的重链可变结构域(VH)，和具有SEQ ID NO:19或39的氨基酸序列的轻链可变结构域(VL)；浓度约为20mM的组氨酸缓冲液；浓度约为220mM的蔗糖；和约0.04％(体积/体积)浓度的聚山梨醇酯-20；并且制剂的pH值为约pH 5.5。
在实施方案中，本公开提供了静脉内递送药物制剂，其包含约1.5mg结合FXI和/或FXIa蛋白(例如，人、兔、食蟹猴和狒狒FXI和/或FXIa)的抗体，或其抗原结合片段，所述抗体具有具有SEQ ID NO:9或29的氨基酸序列的重链可变结构域(VH)，和具有SEQ ID NO:19或39的氨基酸序列的轻链可变结构域(VL)；浓度约为0.20mM的组氨酸缓冲液；浓度约为2.20mM的蔗糖；浓度为约0.0004％(v/v)的聚山梨醇酯-20，和稀释剂(例如，葡萄糖5％水溶液(D5W))；并且制剂的pH值约为pH 5.5。
因子XI和/或因子XIa抗体的稳定性
本公开的药物制剂表现出高水平的稳定性。当制剂中的因子XI和/或因子XIa抗体在规定条件下储存后保持可接受程度的物理性质、化学结构和/或生物功能时，药物制剂是稳定的。
在本公开的实施例1中描述了确定药物制剂中因子XI和/或因子XIa抗体的稳定性的示例性方法。此外，可以通过在一些体外试验中，例如WO 2016/207858中描述的aPTT和FXI活性试验中，测量因子XI和/或因子XIa抗体与其靶标的结合亲和力或因子XI和/或因子XIa抗体的生物活性，来评估蛋白质的稳定性。
药物制剂可作为液体制剂制备和储存。在一些实施方案中，药物制剂是在2-8℃(例如4℃)储存的液体制剂。在一些实施方案中，药物制剂是在4℃避光储存的液体制剂。
稳定性研究发现，用于注射液的抗体1的150mg/mL浓缩物与其赋形剂和初级包装材料相容。抗体1的150mg/mL注射用浓缩物适用于用一次性注射器进行皮下给药，无需稀释或用载体缓冲液稀释，例如5％葡萄糖(D5W)。已证明用市售一次性注射器注射的浓缩物的剂量范围为0.5mg/受试者至600mg/受试者。发现与抗体1相容的材料包括由聚丙烯或聚碳酸酯构成的注射器，以及由不锈钢构成的注射用针头。对于0.5mg/mL至150mg/mL的抗体1浓度，已经用1mL注射器证明了抗体1浓缩物与注射用溶液的相容性。对于150mg/mL的抗体1浓度，已经用3mL注射器证明了抗体1浓缩物与注射用溶液的相容性，对于1mL注射器，总剂量范围为0.5mg至150mg，对于3mL注射器(用约2mL填充)每次注射，总剂量范围为约300mg。
剂型
在药物使用前，如果适用于给药途径，可在水性载体中稀释药物制剂。对于静脉内给药，合适的载体包括无菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH缓冲溶液(例如，磷酸盐缓冲盐水)、无菌盐水溶液、林格氏溶液或葡萄糖溶液。例如，当制备用于静脉内给药的药物制剂时，药物制剂包含5％葡萄糖溶液(D5W)。在一些实施方案中，稀释的药物制剂是等渗的，并且适合于通过静脉输注给药，例如D5W。在一些实施方案中，将制剂稀释成约50毫升D5W、100毫升D5W、150毫升D5W、200毫升D5W、250毫升D5W、300毫升D5W、350毫升D5W、400毫升D5W、450毫升D5W、500毫升D5W或1升D5W。
药物制剂包含适于储存的浓度的因子XI和/或因子XIa抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含浓度为100-200mg/mL、100-190mg/mL、100-180mg/mL、100-170mg/mL、100-160mg/mL、110-150mg/mL、120-150mg/mL、130-150mg/mL、140-150mg/mL、140-160mg/mL、140-170mg/mL、140-180mg/mL、140-190mg/mL、150-190mg/mL、150-180mg/mL、150-170mg/mL或150-160mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含浓度为约10mg/mL、约15mg/mL、约25mg/mL、约50mg/mL、约75mg/mL、约100mg/mL、约120mg/mL、约125mg/mL、约130mg/mL、约135mg/mL、约140mg/mL、约145mg/mL、约150mg/mL、约155mg/mL、约160mg/mL、约165mg/mL、约170mg/mL、约175mg/mL、约180mg/mL、约185mg/mL、约190mg/mL、约195mg/mL,或约200mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体。
药物制剂包含适于储存的浓度的因子XI和/或因子XIa抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含浓度为1.00-2.00mg/mL、1.00-1.90mg/mL、1.00-1.80mg/mL、1.00-1.70mg/mL、1.00-1.60mg/mL、1.10-1.50mg/mL，1.20-1.50mg/mL、1.30-1.50mg/mL、1.40-1.50mg/mL、1.40-1.60mg/mL，1.40-1.70mg/mL、1.40-1.80mg/mL、1.40-1.90mg/mL、1.50-1.90mg/mL，1.50-1.80mg/mL、1.50-1.70mg/mL或1.50-1.60mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体。在一些实施方案中，药物制剂包含浓度约为0.10mg/mL、约0.15mg/mL、约0.25mg/mL、约0.50mg/mL、约0.75mg/mL，约1.00mg/mL、约1.20mg/mL、约1.25mg/mL、约1.30mg/mL、约1.35mg/mL、约1.40mg/mL、约1.45mg/mL、约1.50mg/mL、约1.55mg/mL、约1.60mg/mL、约1.65mg/mL、约1.70mg/mL、约1.75mg/mL、约1.80mg/mL、约1.85mg/mL、约1.90mg/mL、约1.95mg/mL或约2.00mg/mL的因子XI和/或因子XIa抗体。
在一些实施方案中，药物制剂包装在小瓶中(例如，小瓶、袋子、笔或注射器)。在一些实施方案中，小瓶包括过量填充，以允许完全取出预期剂量。在一些实施方案中，小瓶包含5至35％、10至30％、15至25％或10至20％的过量填充。在特定实施方案中，小瓶包括约20％的过量填充。
在一些实施方案中，制剂可为液体制剂。在一些方面的实施方案中，容器中因子XI和/或因子XIa抗体的量适合作为单剂量给药。在一些实施方案中，容器中因子XI和/或因子XIa抗体的量适于多剂量给药。在一些实施方案中，药物制剂包含0.1至200mg的因子XI和/或因子XIa抗体。在一些实施方案中，药物的制剂包含1至200mg、10至200mg、20至200mg、50至200mg、100至200mg、200至200mg、500至2000mg、1000至2000mg、0.1至1000mg、1至1000mg、10至1000mg、20至1000mg、50至0.1至500mg，1至500mg，10至500mg，20至500mg，50至500mg，100至500mg，200至500mg，0.1至200mg，1至200mg、10至200mg，20至200mg，50至200mg，100至200mg，0.1至100mg，1至100mg，10至100mg，20至100mg，50至100mg，0.1至50mg，1至50mg，10至50mg，20至50mg，0.1至20mg、1至20mg、10至20mg、0.1至10mg、1至10mg或0.1至1mg的因子XI和/或因子XIa抗体。在一些实施方案中，药物制剂以治疗有效量包含约0.1mg、约0.5mg、约1mg、约1.5mg、约2mg、约2.5mg、约5mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约400mg、约450mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1500mg或约2000mg的因子XI和/或因子XIa抗体。
剂量方案和治疗用途
在另一方面，本公开提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有此需要的受试者给药本公开的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，抗体1)每月一次。
在一些实施方案中，所述方法还包括在初始治疗周期后，在一个或多个月治疗周期中，例如在3个月的时期内，向受试者给药因子XI和/或因子XIa抗体，其中在第1天、第31天和第61天施用因子XI和/或因子XIa抗体。后续治疗周期，其中受试者每月接受一次因子XI和/或因子XIa抗体的给药，被设计用于维持受试者中因子XI和/或因子XIa抗体的一定水平。在一些实施方案中，受试者接受至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个后续治疗周期。在一些实施方案中，受试者终身接受治疗。
在一些实施方案中，在外科手术的同一天，向患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险且正在接受外科手术的受试者施用静脉内药物递送制剂。在一些实施方案中，静脉内药物递送制剂在手术后2至10小时之间施用。在一些实施方案中，静脉内药物输送制剂在手术后4至8小时之间给药。在一些实施方案中，静脉内药物递送制剂在手术后约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时或约10小时施用。
在一些实施方案中，初始和后续治疗周期中的一次或多次剂量包括以约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1.0mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、约1.9mg/kg、约2.0mg/kg、约2.1mg/kg、约2.2mg/kg、约2.3mg/kg、约2.4mg/kg、约2.5mg/kg、约2.6mg/kg、约2.7mg/kg、约2.8mg/kg、约2.9mg/kg、约3.0mg/kg、约3.1mg/kg、约3.2mg/kg、约3.3mg/kg、约3.4mg/kg、约3.5mg/kg、约3.6mg/kg、约3.7mg/kg、约3.8mg/kg、约3.9mg/kg、约4.0mg/kg、约4.1mg/kg、约4.2mg/kg、约4.3mg/kg、约4.4mg/kg、约4.5mg/kg、约4.6mg/kg、约4.7mg/kg、约4.8mg/kg、约4.9mg/kg、或约5.0mg/kg的剂量皮下施用的因子XI和/或因子XIa抗体。
在一些实施方案中，在初始和后续治疗周期中的一个或多个剂量包括以约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约185mg、约190mg、约195mg或约200mg的剂量皮下施用因子XI和/或因子XIa抗体(例如，抗体1)。在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体以约90mg的剂量皮下给药。在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体以约120mg的剂量皮下给药。在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体以约150mg的剂量皮下给药。在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体以约180mg的剂量皮下给药。在任一上述实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体每月皮下给药。
在一些实施方案中，经皮下给药的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，抗体1)的治疗有效剂量范围为约75mg至约165mg、约80mg至约160mg、约85mg至约155mg或约90mg至约160mg。在一些实施方案中，经皮下给药的因子XI和/或因子XIa抗体(例如抗体1)的治疗有效剂量范围为约90mg至约160mg。
在一些实施方案中，在初始和后续治疗周期中的一个或多个剂量包括以约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1.0mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、约1.9mg/kg、约2.0mg/kg、约2.1mg/kg、约2.2mg/kg、约2.3mg/kg、约2.4mg/kg、约2.5mg/kg、约2.6mg/kg、约2.7mg/kg、约2.8mg/kg、约2.9mg/kg、约3.0mg/kg、约3.1mg/kg、约3.2mg/kg、约3.3mg/kg、约3.4mg/kg、约3.5mg/kg、约3.6mg/kg、约3.7mg/kg、约3.8mg/kg、约3.9mg/kg、约4.0mg/kg、约4.1mg/kg、约4.2mg/kg、约4.3mg/kg、约4.4mg/kg、约4.5mg/kg、约4.6mg/kg、约4.7mg/kg、约4.8mg/kg、约4.9mg/kg、或约5.0mg/kg的剂量静脉内给药因子XI和/或因子XIa抗体(例如，抗体1)。
在一些实施方案中，在初始和后续治疗周期中的一个或多个剂量包括以约5mg、约10mg、约15mg、约20mg，约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约185mg、约190mg、约195mg,或约200mg的剂量静脉内给药因子XI和/或因子XIa抗体(例如，抗体1)。在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体是以约30mg的剂量静脉内给药。在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体以约60mg的剂量静脉内给药。在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体以约75mg的剂量静脉内给药。在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体以约150mg的剂量静脉内给药。在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体以单剂量静脉内给药(例如，给接受医疗手术的受试者，例如，给接受单侧全膝关节成形术(TKA)的受试者，例如，在手术当天)。
医师可以以低于达到所需治疗效果所需的水平开始施用药物组合物中所用的本公开抗体(例如，抗体1)的剂量，并逐渐增加剂量，直到达到所需效果。一般而言，用于治疗本文所述血栓栓塞性疾病的本公开组合物的有效剂量根据许多不同因素而变化，包括给药方式、目标部位、患者的生理状态、给药的其他药物以及治疗是预防性还是治疗性的。可以调整治疗剂量以优化安全性和有效性。对于抗体的全身给药，剂量范围为约0.01至15mg/kg宿主体重。对于抗体的给药(例如，皮下或静脉内给药)，剂量可以在0.1mg至5mg或1mg至600mg的范围内。例如，本文所述的抗FXI/FXIa抗体(例如，抗体1)可以以0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1.0mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、约1.9mg/kg、约2.0mg/kg、约2.1mg/kg、约2.2mg/kg、约2.3mg/kg、约2.4mg/kg、约2.5mg/kg、约2.6mg/kg、约2.7mg/kg、约2.8mg/kg、约2.9mg/kg、约3.0mg/kg、约3.1mg/kg、约3.2mg/kg、约3.3mg/kg、约3.4mg/kg、约3.5mg/kg、约3.6mg/kg、约3.7mg/kg、约3.8mg/kg、约3.9mg/kg、约4.0mg/kg、约4.1mg/kg、约4.2mg/kg、约4.3mg/kg、约4.4mg/kg、约4.5mg/kg、约4.6mg/kg、约4.7mg/kg、约4.8mg/kg、约4.9mg/kg、或约5.0mg/kg的剂量给药。
在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体通过静脉给药。例如，在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体通过静脉输注给药，例如用预充袋、预充笔或预充式注射器。在一些实施方案中，本公开的药物制剂中的因子XI和/或因子XIa抗体在施用前被稀释。例如，在一些实施方案中，药物制剂用5％葡萄糖水溶液(DSW)稀释，并从袋中静脉给药。静脉输注可以持续大约一小时(例如，50至80分钟)。在一些实施方案中，袋子连接到包括管和/或针的通道。
可用本文公开的因子XI和/或因子XIa抗体或药物制剂治疗的血栓栓塞性疾病的类型包括但不限于“血栓栓塞”，或本文使用的类似术语，也可指本公开的抗FXI和/或FXIa抗体或抗原结合其片段可用于预防或治疗下述的任何适应症：患有疑似或确诊心律失常(如阵发性、持续性或永久性房颤或房扑)的受试者的血栓栓塞；房颤的卒中预防(SPAF)，其中一个亚人群是接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的房颤患者；出血高危患者的急性静脉血栓栓塞事件(VTE)治疗和延长的二级VTE预防；短暂性脑缺血发作(TIA)或非致残性卒中后二级预防中的脑和心血管事件，以及窦性心律心力衰竭中血栓栓塞事件的预防；儿科受试者的静脉血栓栓塞症(儿科VTE)；接受心律失常复律的受试者左心房血栓形成和血栓栓塞；心律失常消融手术前、中、后血栓形成；静脉血栓形成，这包括但不限于下肢或上肢深静脉或浅静脉血栓形成、腹部和胸部静脉血栓形成、窦血栓形成和颈静脉血栓形成的治疗和二级预防；静脉或动脉中任何人造表面上的血栓形成，如导管、起搏器导线、合成动脉移植物；机械或生物心脏瓣膜或左心室辅助装置；伴或不伴静脉血栓形成患者的肺栓塞；慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)；破裂动脉粥样硬化斑块上的动脉血栓形成、动脉内假体或导管上的血栓形成和明显正常动脉中的血栓形成，这包括但不限于急性冠状动脉综合征、ST段抬高心肌梗死、非ST段抬高心肌梗死、不稳定型心绞痛、支架血栓形成、动脉系统中任何人工表面的血栓形成和患有或不患有肺动脉高血压的受试者中的肺动脉血栓形成；接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)患者的血栓形成和血栓栓塞:心源性和隐源性中风；非中枢神经系统栓塞(非CNS系统栓塞)；出血性中风；侵袭性和非侵袭性恶性肿瘤患者的血栓形成:留置导管血栓形成；重病患者的血栓形成和血栓栓塞；心脏血栓形成和血栓栓塞，这包括但不限于心肌梗塞后的心脏血栓形成、与诸如心脏动脉瘤、心肌纤维化、心脏增大和功能不全、心肌炎和心脏中的人造表面等病症相关的心脏血栓形成；伴或不伴心房颤动的瓣膜性心脏病患者的血栓栓塞:瓣膜机械或生物假体的血栓栓塞；在简单或复杂心脏畸形的心脏修复后具有天然或人工心脏补片、动脉或静脉导管的患者中的血栓栓塞；膝关节置换手术、髋关节置换手术和矫形手术、胸部或腹部手术后的静脉血栓形成和血栓栓塞；神经外科手术(包括颅内和脊髓介入)后的动脉或静脉血栓形成；先天性或获得性血栓形成倾向，包括但不限于因子V Leiden、凝血酶原突变、抗凝血酶III、蛋白C和蛋白S缺乏、因子XIII突变、家族性异常纤维蛋白原血症、先天性纤溶酶原缺乏、因子XI水平升高、镰状细胞病、抗磷脂综合征、自身免疫性疾病、慢性肠病、肾病综合征、溶血性尿毒症、骨髓增生性疾病、播散性血管内凝血、阵发性夜间血红蛋白尿和肝素诱导的血小板减少症；慢性肾脏疾病中的血栓形成和血栓栓塞；以及进行血液透析的患者和进行体外膜氧合的患者中的血栓形成和血栓栓塞。在一些实施方案中，用因子XI和/或因子XIa抗体或本文公开的药物制剂治疗的受试者是肥胖的(例如，严重肥胖，例如，体重指数(BMI)≥35kg/m2)。在一些实施方案中，用因子XI和/或因子XIa抗体或本公开的药物制剂治疗的受试者不肥胖。在一些实施方案中，在施用与非肥胖受试者相同剂量的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，抗体1)后，肥胖受试者与较低的暴露相关。在一些实施方案中，在施用与非肥胖受试者相同剂量的因子XI和/或因子XIa抗体(例如抗体1)后，肥胖受试者的暴露量减少约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％。在一些实施方案中，在施用与非肥胖受试者相同剂量的因子XI和/或因子XIa抗体(例如抗体1)后，肥胖受试者与aPTT延长的持续时间较短相关。在一些实施方案中，在施用与非肥胖受试者相同剂量的因子XI和/或因子XIa抗体(例如抗体1)后，肥胖受试者的aPTT延长缩短了约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％。
CHA2DS2-VASc风险评分是一项经过验证且广泛使用的分类工具，用于预测房颤患者的血栓栓塞风险，并确定应受益于抗凝治疗的患者(LIP 2011；Camm,et al.(2012)EurHeart J 2012；33:2719–2747)；累积的证据表明，CHA2DS2-VASc在识别发生中风和血栓栓塞的患者方面至少与CHADS2等评分一样准确，甚至可能更好，并且在识别“真正低风险”的房颤患者方面肯定更好。CHA2DS2-VASc风险评分范围从0到最高分9。在一些实施方案中，用因子XI和/或因子XIa抗体或本文公开的药物制剂治疗的受试者的CHA2DS2-VASc风险评分男性为0-1，女性为1-2。在一些实施方案中，用本文公开的因子XI和/或因子XIa抗体或药物制剂治疗的受试者的CHA2DS2-VASc风险评分男性≥2，女性≥3。在一些实施方案中，用本文公开的因子XI和/或因子XIa抗体或药物制剂治疗的受试者具有CHA2DS2-VASc风险评分≥4或≥3，其中至少1个计划伴随使用抗血小板药物(例如阿司匹林和/或P2Y12抑制剂)或根据Cockcroft-Gault方程CrCl≤50ml/min。
本文公开的因子XI和/或因子XIa抗体(例如，抗体1)可用作单一疗法或与一种或多种疗法联合使用。此类联合疗法可用于治疗血栓栓塞性疾病，例如缺血性中风(心源性、血栓性)或全身性栓塞、房颤、房颤中风预防(SPAF)、深静脉血栓形成、静脉血栓栓塞、肺栓塞、急性冠状动脉综合征(ACS)、急性肢体缺血、慢性血栓栓塞性肺动脉高压或全身性栓塞)。在一些实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体根据本公开的剂量方案用作单一疗法。在其它实施方案中，因子XI和/或因子XIa抗体与一种或多种疗法联合使用，其中因子XI和/或因子XIa抗体根据本公开的剂量方案给药，并且一种或多种疗法，按照已知适于治疗患有特定疾病的特定受试者的剂量方案给药。
在一些方面，他汀类疗法可与本公开所述的FXI/FXIa抗体和抗原结合片段或包含所述FXI/FXIa抗体和抗原结合片段的制剂(例如，抗体1)联合使用用于血栓形成和/或血栓栓塞性疾病患者的治疗。在特定方面，适于与本文所述的抗FXI/FXIa抗体(例如抗体1)联合使用的治疗活性剂的非限制性实例包括血栓烷抑制剂(例如阿司匹林)、腺苷二磷酸受体拮抗剂(或P2Y12抑制剂)如噻吩并吡啶类(例如氯吡格雷和普拉格雷)和非噻吩并吡啶类(例如替格瑞洛和坎格雷洛)、蛋白酶激活受体-1(PARI)拮抗剂(例如vorapaxar和atopaxar)和质子泵抑制剂(PPIs)(例如奥美拉唑、地西泮、苯妥英、兰索拉唑、右兰索拉唑、雷贝拉唑、泮托拉唑、埃索美拉唑和萘普生)。在联合治疗中使用PPIs可能适用于受试者患有胃肠道疾病或有胃肠道疾病史，如既往胃肠道出血或消化性溃疡病史。在一个方面，受试者正在接受非甾体抗炎药(NSAIDs)的治疗，并被给予本文所述的抗FXI/FXIa抗体(例如抗体1)与质子泵抑制剂(例如奥美拉唑、地西泮、苯妥英、兰索拉唑、右兰索拉唑、雷贝拉唑、泮托拉唑、埃索美拉唑和萘普生)的组合。在一些实施方案中，用FXI/FXIa抗体和抗原结合片段或包含所述FXI/FXIa抗体和抗原结合片段的制剂(例如，抗体1)治疗的受试者在治疗持续期后(例如，在治疗结束的同一天)被给予直接口服抗凝剂(DOAC)。在一些实施方案中，用FXI/FXIa抗体和抗原结合片段或包含所述FXI/FXIa抗体和抗原结合片段的制剂(例如抗体1)治疗的受试者，在治疗期间后(例如治疗结束前约5天，或治疗结束前约3天)被给予维生素K拮抗剂(VKA)。
在一些实施方案中，本公开的治疗方法导致受试者或患者的疾病应答或改善的存活率。例如，在一些实施方案中，疾病应答是完全应答、部分应答或稳定的疾病。在一些实施方案中，改善的存活率是改善的无进展存活率(PFS)或总存活率。可以相对于本公开的治疗开始之前的时期来确定改善(例如PFS)。确定BTC(例如，晚期BTC、转移性BTC)或胆道肿瘤治疗的疾病应答(例如，完全应答、部分应答或稳定疾病)和患者生存期(例如，PFS、总生存期)的方法是本领域的常规方法，并且在本文中被考虑。在一些实施方案中，在对接受治疗的患者进行受影响区域(例如，覆盖从胸廓入口上部到耻骨联合区域的胸部/腹部和骨盆)的对比增强计算机断层扫描(CT)或磁共振成像(MRI)后，根据RECIST 1.1评估疾病应答。
实施例
通过参考以下实施例，将更容易理解本发明，以下实施例仅用于说明本发明的一些方面和实施例，并不用于限制本发明公开的范围。
实施例1：抗体1的制剂、包装和储存
研究设计
该研究由以下实验部分组成:
-子阶段A：兼容性可行性测试
-评估SE-HPLC分析的定量限，以便对5％葡萄糖中的稀释药物产品进行适当的定量
(包括线性、重现性、
LoQ和自动进样器稳定性)。
-子阶段B：模拟给药相容性研究
-袋给药
-第1部分：向输液袋中添加药品(低、中、高剂量)后，三(3)个静脉输液袋给药系统的短期使用稳定性。用5％葡萄糖稀释药品以获得目标浓度，稀释将直接在输液袋中进行(高剂量)，或通过预稀释进行(中等剂量，低剂量)。
-第2部分：模拟静脉(IV)给药试验是用市售临床给药材料进行的。使用具有低、中和高剂量浓度水平的支架式设计，对(3)种材料(PE、PVC、PP)的输液袋和两(2)种材料(PE、PVC)的输液管线以及两(2)个串联过滤器和导管进行了测试。
-测定了输注系统中药品的稳定性和回收率。
材料和方法
试验材料
活性药物产品(DP)，150mg/1mL抗体1的注射用溶液浓度，以下列配方提供：20mML-组氨酸/组氨酸盐酸盐(组氨酸缓冲液)，pH 5.5、220mM蔗糖、0.04％(w/v)聚山梨醇酯20，pH 5.5，标称浓度150mg/ml。所有计算均使用150mg/ml的标称DP浓度。6R玻璃瓶(I型)的标称灌装量为1mL。
分析方法
使用iLAB和实验室信息和管理系统(LIMS)在研究数据文件中记录了用于分析方法的所有设备，使用唯一的识别号或序列号，软件的当前版本被识别为适当。所有使用的设备都经过适当的鉴定和校准。如果没有另外说明，对于每个测试时间点，分析一个样品或对每个样品进行一次注射。表2总结了所用的测试方法。
表2.分析测试方法
| 序号 | 检测方法 |
| 1 | 可见颗粒的试验方法(PhEur 2.9.20) |
| 2 | 溶液的透明度/乳白色 |
| 3 | 用LICO 690色度计测定颜色 |
| 4 | 根据USP<787>(小体积)，通过LO检测亚可见颗粒 |
| 5 | pH |
| 6 | 密度 |
| 7 | SEC-HPLC分析 |
| 8 | SEC-HPLC纯度 |
回收率的计算(％)
对于低、中和高剂量，根据表3中的公式使用峰面积和浓度计算回收率。
表3.回收率计算公式
*通过重量和DP的标称浓度150mg/ml确定
实验设置
SE-HPLC分析评价
根据推荐的剂量水平和稀释剂，药品在不同稀释剂中连续稀释至一定浓度范围用于相容性测试。表4显示了该研究的稀释浓度。
表4.SEC评估标准曲线的目标浓度
a6制剂，每种制剂注射一次(重复性评估)。第一个重复性样品24小时后重新进样，以评估自动进样器的稳定性。
bApn抑肽酶。
c测试方法中的测试浓度
浓度水平(Concentration Bracketing)
根据Custmor提供的剂量，定义了浓度水平范围，最低浓度为0.50mg/mL(低剂量)，最高浓度为3.0mg/mL(高剂量)(表5)。中等剂量被评估为1.5mg/mL。如表5和表7所述制备剂量溶液。
表5.输注设置子阶段B的浓度范围
a95％目标浓度,b100％目标浓度,c105％目标浓度,dP:预充,eI:输注
剂量溶液的制备
从冷藏储存中取出适当数量的DP小瓶，并在环境温度下平衡，直至不再冰冷(不应超过1小时)。根据表6通过移液制备子阶段A的预稀释液和样品。
对于子阶段B，模拟临床给药相容性试验，根据表7，使用适当尺寸的一次性注射器制备静脉输液袋。在PETG瓶中制备预稀释液。最终剂量溶液直接在输液袋中制备。
表6.用于制备评估子阶段A-SE-HPLC样品溶液的稀释方案
VDP-体积DP,VDil-体积稀释,VTotal-体积稀释1
*独立制备六次，用于重复性评估
对于低剂量，DP在合适的容器中用5％的葡萄糖稀释至15mg/mL。从袋中取出3.2mL稀释剂，然后使用B.Braun
的5mL注射器通过21G SS针头注射3.2mL的预稀释的DP。将装有注射液的袋子混合。
对于中间剂量，DP在合适的容器中用5％的葡萄糖稀释至15mg/mL。从袋中取出10.0mL稀释剂，然后使用10mL BD Plastipak注射器通过21G SS针头注射10.0mL预稀释的DP。将装有注射液的袋子混合。
对于高剂量，从袋中取出2.1mL稀释剂，然后使用3mL BD Plastipak注射器通过21G SS针头注射2.1mL未稀释的DP。将装有注射液的袋子混合。
表7.子阶段B剂量溶液制备的稀释方案
N/A-不适用；VDP-体积DP,VDil-体积稀释，VTotal-体积稀释1
a计算为(袋的理论体积-取出的稀释剂体积(＝注入的D1体积)),b未稀释的DP
子阶段A:SE-HPLC评估
SE-HPLC评估
制备的样品(根据表6)用于评估线性、重复性、定量限和自动进样器稳定性。
子阶段B：模拟给药相容性研究
使用稳定性
温育准备好的输液袋(根据表7)：
-在室温3小时，暴露在室内环境光线下，
-在2-8℃持续20小时，
-在室温1小时，暴露在室内环境光线下。
模拟给药测试
在储存时间(累计24小时)结束时，使用输液袋进行模拟给药测试。
将输液管线、带在线过滤器的延长装置和导管连接至输液袋。用如表5所述的目标浓度的溶液制备袋。灌注袋系统，直到以每小时100毫升的流速第一次滴注。在灌注输注系统(袋、管线、在线过滤器和导管)后，使用输注泵以表5中所述的流速对输注袋中的剩余溶液进行模拟给药，进行输注直到输注袋排空。给药后，断开在线过滤器，以允许从过滤器之前的管线和袋部分收集样品。
对于LD样品，使用输液泵以表5中所述的流速进行部分输液，总共60mL。给药后，单独收集袋中剩余的溶液，并断开在线过滤器，以允许从过滤器之前的管线和袋部分收集样品。
给药溶液与输注装置的总接触时间约为1小时。在模拟给药结束时，与输注材料的累计接触时间约为25小时。给药溶液在室温和环境光条件下的累积时间约为5小时。模拟给药在环境温度和光照条件下在生物安全柜(II级)中进行。
模拟给药测试
按照组合和剂量水平，在无菌PETG瓶中收集以下样品，并根据表8进行测试。
·样品1(T0)：初始溶液(4毫升样品)。
·样品2(T24)：在环境温度培养4小时和在2-8℃培养20小时后，从袋中取出等分样品(4毫升样品)。
·样品3(过滤器后)：总给药中的输注溶液(在线过滤后)(总给药体积中的4mL样品)。
·样品4(过滤器前)：在线过滤之前的输注溶液(从管线和袋子中取出4mL样品)。
结果和讨论
子阶段A–SE-HPLC方法的分析评估
根据推荐剂量水平，在葡萄糖(D5W)和含有流动相(MP)和抑肽酶(APN)(MP:APN＝1:1)的APN混合物中，将药品稀释至浓度范围为0.20-0.90mg/mL。评估高于0.90mg/mL的浓度没有提供额外的益处，因为在SE-HPLC样品制备过程中，样品被稀释至0.75mg/mL。
线性
用葡萄糖(D5W)或APN混合物进行表4所示的稀释方案。APN混合物通过使产物蛋白与接触表面的非特异性结合最小化而用作阳性对照。评估了线性。在0.20-0.90毫克/毫升范围内在葡萄糖中建立了线性关系(葡萄糖如图1A所示，APN如图1B所示)。在随后的研究中，进行了单点评估，以定量相应稀释剂中标准品的回收率。
重现性和自动进样器稳定性
将药品稀释至0.48和0.75mg/mL，每个浓度分别制备6次，每个制剂注射一次。重现性评估的RSD见表9(重现性[RSD％])。在5℃下放置24小时后，将重现性评估的每个浓度的第一个制剂重新注入HPLC样品瓶中，以评估自动进样器的稳定性，如表9所示(绝对峰％差[T24与T0相比])。
表9.SE-HPLC方法的分析评估-重现性和自动进样器稳定性
根据评估，SE-HPLC测试方法(CHVI-260130)被认为适合进一步研究。从SE-HPLC数据计算样品浓度(mg/mL)。对于高剂量，DP用作参考(稀释至检测方法要求的最终浓度)，对于中剂量和低剂量，中间稀释用作参考(稀释至检测方法要求的最终浓度)。
LoQ适用性评估
药品稀释至0.00075mg/mL(标称目标浓度的0.1％)。获得的样品在HPLC系统中进样一次，使用Empower自定义字段“USP s/n”计算相对信噪比(S/N ratio)。获得的比值为21.085，表明该方法适用于测定试验方法中标称浓度的0.1％的浓度值。
子阶段B-模拟给药相容性研究
表10和表11总结了模拟给药相容性测试的结果。
通过SE-HPLC，在所有剂量水平下，袋给药设置的初始、温育和给药溶液的可见颗粒、颜色、浊度和纯度均无相关变化。在整个研究过程中，所有剂量水平和材料的pH值都在4.5-5.9之间。pH值的变化可以用缓冲液稀释来解释。
使用光遮蔽法测量亚可见颗粒(Subvisible particles)。过滤器后收集的样品显示出亚可见颗粒数的有效减少。对于所有测试组合的过滤器后的样品，考虑到体积小于或等于100mL，光遮蔽下的亚可见颗粒在USP<787>的验收限值内，累积亚可见颗粒计数≥25μm的小于或等于600个/容器，累积亚可见颗粒计数≥10μm的小于或等于6000个/容器。
在所有材料组合(PE、PVC和PP)中，所有样品(低剂量、中剂量和高剂量)的回收率≥93％。
结论和建议
使用三种输液袋、两种不同的输液管和两种不同的在线过滤器的接触表面对稀释药品(DP)的相容性进行了测试，以验证代表性临床给药材料。
三种输液袋(PE、PVC和PP)中的DP输液在暴露于环境和冷藏条件下长达24小时(在2-8℃的黑暗条件下20小时，在暴露于光照的环境条件下4小时)的理化稳定性得到了理化分析数据的支持。用每个输注装置(输注袋、输注管线、在线过滤器、旋塞和导管)进行约60分钟的袋输注。
对于所测试的输液袋组合(PE袋、PE线、PES正电荷过滤器；PVC袋、PVC线、PES中性过滤器；PP袋、PVC线、PES中性过滤器)，在物理化学分析试验[溶液外观(浊度、颜色)、pH、SE-HPLC纯度]中未观察到重大变化，表明与所选的材料具有良好的相容性。所有测试的剂量实际上都没有可见的颗粒。使用在线过滤器进行模拟给药后，亚可见颗粒符合药典要求。在线过滤器有效减少了亚可见颗粒，所有样品都在输注的可接受限度内。考虑到输注体积等于100mL，≥25μm的亚可见颗粒数小于或等于600个/容器，≥10μm的亚可见颗粒数小于或等于6000个/容器。在临床环境中，强烈推荐使用在线过滤器。
该研究涵盖0.5mg/mL至3.0mg/mL的目标浓度范围。对于所有测试的材料组合(PE袋、PE线、PES正电荷过滤器；PVC袋、PVC线、PES中性过滤器；PP袋，PVC线，PES中性滤网)，与理论初始浓度相比，过滤器前和过滤器后样品中的浓度回收率(≥93％)在所有剂量水平下获得:低剂量、中等剂量和高剂量(0.5mg/mL、1.5mg/mL和3.0mg/mL)。
在以下每种组合中，DP被认为与5％葡萄糖中目标浓度范围为0.5mg/mL至3.0mg/mL的临床成分相容:
·组合1:
ο输液袋(PE接触材料)
ο输液管线(PE接触材料)
ο在线过滤器(PES，带正电荷)
ο3-通旋塞阀(PA触点)材料
ο导管(PUR接触材料)
·组合2:
ο输液袋(PVC接触材料)
ο输液管线(PVC接触材料)
ο在线过滤器(PES，中性)
ο3-通旋塞阀(PA接触材料)
ο导管(PUR接触材料)
·组合3:
ο输液袋(PP接触材料)
ο输液管线(PVC接触材料)
ο在线过滤器(PES中性)
ο3-通旋塞阀(PA接触材料)
ο导管(PUR接触材料)
实施例2：用抗体1治疗房颤患者
总结
本研究是一项多中心、随机受试者和研究者盲法、安慰剂对照、平行＝组、多次递增剂量范围的研究，旨在评估抗体1对低血栓栓塞性中风风险或周围性栓塞风险的房颤(AF)或房扑患者的安全性、耐受性、药代动力学(PK)和药效学(PD)影响。与安慰剂相比，该试验评估了多达三种不同剂量的抗体1对因子XI(FXI)抑制、凝血指标和血栓形成生物标志物的效果。还评估了注射部位反应、出血事件、免疫原性以及全身动脉和静脉血栓栓塞事件的发生率。该研究结果有助于房颤患者3期试验中抗体1的剂量选择。
详细描述
这是一项针对低中风风险的房颤(AF)或房扑患者的随机、受试者和研究者盲法、安慰剂对照、剂量范围研究。患者被纳入最多3个队列，每个队列大约16名患者。在长达4周的筛选期后，患者以3:1的比例(抗体1:安慰剂)随机接受每月皮下(s.c.)注射3次，并在90天的治疗期内跟踪药代动力学、药效和安全性事件。在洗脱期/随访期内，对患者随访至第170天。
纳入标准
下文描述了入选该实施例中的临床研究的患者的入选标准。患者：
-在获得任何评估之前，已给予书面知情同意；
-为年龄≥18岁且<85岁的男性和女性患者，在筛选时12导联心电图显示阵发性房颤(PAF)或房扑；或有PAF或房扑病史，由(遥测，12导联心电图或动态[如Holter]监护仪)记录，且不是由于可逆疾病(如酗酒)，即使他们在筛查时没有PAF(对此没有时间限制)；
-男性的CHA2DS2-VASc风险评分(作为评估房颤患者中风风险的预测工具，Lip等人，2010年)为0-1，女性为1-2，根据研究者的判断，这些患者没有使用抗凝剂预防中风的指征；
-体重在50到130公斤之间，端点包含在内。
排除标准
下文描述了将患者排除在本实施例所述临床研究之外的标准。患者：
-在招募时，或在招募的5个半衰期内，或直到预期的PD效应恢复到基线，以时间较长者为准，使用其他研究药物；或更长时间，如果当地法规要求的话；
-有中风、短暂性脑缺血发作或全身性栓塞病史；
-患者在接受抗凝剂或抗血小板治疗期间有严重出血史(仅当出血是由可逆原因引起时，例如成功治疗的胃十二指肠溃疡，才可招募一年前接受抗凝剂或抗血小板治疗时出现严重出血的患者)；
-有外伤性或非外伤性颅内、椎管内或眼内出血史；
-具有已知的出血素质或任何已知的活动性出血事件；
-在筛选期之前的12个月内有过心肌梗死、不稳定型心绞痛或冠状动脉旁路移植术(CABG)手术；
-已知有临床意义的心脏瓣膜疾病，包括中度或重度二尖瓣狭窄(瓣膜面积<1.5cm2)；
-有人工心脏瓣膜；
-患有未控制的高血压，定义为筛查时DBP舒张压≥160/100mmHg
-患有纽约心脏协会(NYHA)III-IV级心力衰竭；
-目前正在接受抗凝治疗或在过去12个月内一直在服用抗凝剂；超过12个月前接受抗凝治疗的潜在患者需要在招募前与主办方讨论；
-接受抗血小板治疗，如P2Y12抑制剂或阿司匹林(允许低剂量阿司匹林，定义为≤100mg/天)；
-患有严重的肾功能损害，根据筛选访视时肾病饮食调整(MDRD)公式，其肾小球滤过率估计值≤45毫升/分钟/1.73平方米
-筛查时人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎(乙型肝炎表面抗原(HBsAg))或丙型肝炎(抗丙型肝炎抗体(抗HCV))检测呈阳性的人；
-根据研究者判断，患有在给药前四周内未痊愈的严重疾病；
-具有生育能力的-妇女，定义为所有生理上能够怀孕的妇女，除非她们在经期使用高效的避孕方法。高效避孕方法包括：
ο完全禁欲(当这符合受试者的首选和通常的生活方式时)。周期性禁欲(如日历、排卵、热感疗法、排卵后方法)和停药是不可接受的避孕方法；
ο服用研究药物前至少6周进行女性绝育(双侧卵巢表面切除术，伴或不伴子宫切除术)、全子宫切除术或输卵管结扎术。在单独进行卵巢切除术的情况下，仅当妇女的生殖状况已经通过后续激素水平评估得到确认时；
ο男性性伴侣绝育(至少在筛查前6个月)。对于研究中的女性受试者，输精管切除术后的男性伴侣应为该受试者的唯一伴侣；
ο使用口服(雌激素或黄体酮)、注射或植入激素避孕方法或放置宫内节育器(IUD)或宫内系统(IUS)或具有相当功效(失败率<1％)的其他形式的激素避孕，例如激素阴道环或经皮激素避孕。在口服避孕药的情况下，在服用研究药物之前，女性应至少连续3个月服用同一种药物。
-如果妇女有12个月的自然(自发)闭经，且具有适当的临床特征(例如，年龄合适，有血管舒缩症状史)或至少在6周前做过双侧卵巢切除术(有或没有子宫切除术)、全子宫切除术或输卵管结扎术，则被视为绝经后妇女，没有生育能力。仅在卵巢切除术的情况下，只有当妇女的生殖状态通过卵泡刺激素(FSH)的后续激素水平评估得到证实时，才认为她没有生育能力。男性受试者还必须同意在研究期间使用高效的避孕方法，并且在此期间不得生育或捐献精子；
-怀孕或哺乳(哺乳)(nursing(lactating))妇女，其中怀孕被定义为女性在避孕后直到妊娠终止的状态，经人绒毛膜促性腺激素(hCG)实验室检测证实为阳性；
-有精神疾病或药物滥用史，研究者认为可能会干扰方案依从性；或者
-患有研究者认为可能使患者因参与研究而面临更高风险的任何外科或医学疾病，或可能阻止患者满足研究要求或完成研究。
剂量和施用
在试验开始时，为每位患者随机分配剂量水平。在一些实施方案中，在第1天，患者每月一次通过皮下注射接受120mg抗体1，随后进行两次每月注射。在一些实施方案中，在第1天，患者每月一次通过皮下注射接受180mg抗体1，随后进行两次每月注射。在第1天，每月一次通过皮下注射抗体1，随后进行两次每月注射。在一些实施方案中，在第1天，患者每月1次通过皮下注射安慰剂，随后进行两次每月注射。
结果计量
主要结果测量为第三剂(第91天)后抗体1各剂量组群的FXI谷值抑制(定义为抗体1达到的最低浓度)，确定为第91天抗体1各剂量组群的FXI谷值达到≥50％、≥80％或≥90％抑制(<50％、<20％或<10％游离FXI)的发生率。这在研究的第91天进行评估。
次要结果测量包括在第一次和第二次给药(分别为第31天和第61天)后，针对抗体1的每个剂量群组，FXI谷值抑制(定义为下一次给药前抗体1达到的最低浓度)，确定为针对抗体1的每个剂量群组，在第31天和第61天达到≥50％、≥80％或≥90％的FXI抑制(<50％、<20％或<10％游离FXI)的发生率。这在研究的第31天和第61天进行了评估。
其他预先指定的结果测量包括分析主要心血管、脑血管、全身动脉和静脉血栓栓塞事件(VTE)的发生率，以评估与安慰剂相比，抗体1对主要心血管、脑血管、全身动脉和静脉血栓栓塞事件发生率的影响。如果这些事件发生在治疗期间，从研究的第一次给药到研究药物的最后一次给药，则记录这些事件；如果受试者在第91天的第三次给药之前永久停用研究药物，则加上30天。D-二聚体和其他探索性血栓形成生物标志物的浓度为也进行了评估，以确定在治疗期间，相对于安慰剂，使用抗体1的D-二聚体和其他血栓形成生物标志物相对于基线的变化。在筛选和第1、11、31、61、71、91和121天评估这些生物标志物。
安全评估
体检，包括在筛选时和第1、11、31、61、91、121和170天对总体外观、皮肤、淋巴结、头、眼、耳、鼻和喉(HEENT)、颈、胸/肺、心血管、腹部、肌肉骨骼和神经系统进行评估。在筛选时和第1、11、31、41、61、71、91、101、121和170天测定给药前值、给药后值和生命体征测量值(包括坐位舒张压和收缩压、脉搏、体温和体重)相对于基线的变化。
在治疗的每个时间点，测量12导联心电图(ECG)参数(QTc-fr Erica、QT、RR、心室率、PR和QRS)，列出并总结描述性统计数据(n、均值、标准差、中值、最小值和最大值)。显示并计算研究者判断的心电图结果异常的受试者列表。基线值是首次服用研究药物前的值。这些参数是在筛选和第1、91和170天时确定的。
在筛选和第1、11、31、41、61、91、121和170天进行了血液学、临床化学和尿液分析的安全性实验室分析。
通过在第1、11、31、41、61和71天评估与注射部位反应或过敏反应一致的症状或体征，监测过敏反应和注射部位反应。
记录了不良事件(AEs)，包括严重不良事件(SAEs)，包括发生率、严重程度、关系、持续时间以及事件是否为SAE的确定。记录从筛选到研究结束(第170天)发生的任何AE或SAE。
在治疗期间，记录了与安慰剂相比，使用抗体1的已确认严重出血事件、临床相关非严重(CRNM)出血事件和总出血量。如果此类出血事件发生在治疗期间，从研究的第一次给药到研究药物的最后一次给药，如果受试者在第91天的第三次给药前永久停用研究药物，则加上30天，记录出血事件。
评估抗药物(抗抗体1)抗体(ADA)的筛选和确认，以评估与安慰剂相比的抗体1的免疫原性。在第1、31、61、71、91、121和170天进行筛选。
生物标记评估
该研究的结果证明了抗体1的高效性。如图2A所示，血浆中抗体1的峰值水平在120mg剂量时显示出逐渐下降，突出了抗体的长半衰期。类似地，在血清中观察到的游离因子XI在120毫克剂量下显示出持续下降(图2B)。当以多剂量(即120mg和180mg)施用抗体1时，与单剂量相比，观察到血浆游离FXI显著更长时间的减少(图2C)。对于每个图，点代表观察到的数据，线代表平滑的“拟合”曲线(表示两个变量之间的关系)，底部的数字代表每个时间组的BLQ记录的百分比。
实施例3：接受选择性单侧全膝关节置换术的患者(TKA)的抗体1治疗
目的和理由
本研究的目的是针对接受选择性单侧全膝关节置换术患者(TKA)的术后静脉血栓栓塞(VTE)的预防，提供抗体1与标准护理(依诺肝素)相比(vs.)的抗血栓形成功效的早期指标。
在两项1期单次递增剂量研究中，抗体1似乎是安全且耐受性良好的，在相关剂量下可产生强大且持续的因子XI(FXI)抑制作用，并延长活化部分凝血活酶时间(aPTT)达4周或更长时间。
研究了静脉内施用(i.v.)的3种剂量的抗体1(30mg、75mg和150mg)。预计这些剂量在第10天会使90％的受试者的游离FXI从基线水平下降≥43％、≥97％和≥99％，在第30天会使90％的受试者的游离FXI从基线水平下降≥7％、≥18％和≥93％。
所有剂量均可有效预防VTE。
目标
本研究的主要目的是评估在随机分组后的第10天，在接受单侧TKA的患者中，是否至少有一个剂量的抗体1不劣于依诺肝素40mg。满足非劣效性(NI)，随后测试优越性。
该临床研究的次要目标是：
-根据随机化后至第10天和至第30天判定的严重和临床相关非严重(CRNM)出血的发生率，评估抗体1相对于依诺肝素的效果；和
-在随机化和研究结束(EoS)访视后的至第30天，将根据单侧全膝关节置换术患者判定的总VTE的发生率，评估至少一剂抗体1是否不劣于依诺肝素40mg。如果满足了非劣效性，将测试优越性。非劣性将通过以下方式检验：已确认复合终点的无症状DVT、已确认的症状性VTE、致命性和非致命性PE，或至第30天和至第110天的治疗期间未能排除PE的不明原因死亡的发生率。
该临床研究的探索性目标是：
-将根据至第10天和至第30天严重出血和CRNM出血事件的发生率，评估抗体1相对于依诺肝素的效果，通过至第10天和至第30天严重出血和CRNM出血的已确认复合终点的发生率进行评估。
-将根据至第10天和至第30天的严重出血事件、CRNM出血事件和总出血事件的发生率，评估抗体1相对于依诺肝素的效果，通过至第10天和至第30天严重出血和CRNM出血的已确认复合终点的发生率进行评估。
-将根据至第10天和至第30天的严重出血事件、CRNM出血事件和总出血事件的发生率，评估抗体1相对于依诺肝素的效果，通过至第110天的严重出血和CRNM出血的确认复合终点的发生率进行评估。
-将根据至第10天和至第30天的严重出血事件、CRNM出血事件和总出血事件的发生率，评估抗体1相对于依诺肝素的效果，通过至第30天和EoS访视时需要输血的患者比例以及至第30天和至第110天/EoS访视时输血的单位数量进行评估。
研究设计
这是一项随机、开放性、盲法终点判定研究，筛选期长达30天，治疗期为10±2天，随访期至第110天。每个随机化的患者都在研究的第一天接受了TKA手术。在治疗期间，患者在第1天接受抗体1，在手术后或每天皮下(s.c.)注射依诺肝素直到第10天(±2天)就诊。在研究第10天(±2天)完成手术腿的单侧静脉造影术。静脉造影术的完成结束了研究的治疗期。治疗期结束后，患者进入研究的随访期。
抗体1
抗体1以小瓶浓缩物(150mg/mL)中的液体提供。抗体1按照标签上提供的信息储存在2-8℃，不应冷冻。
抗体1由药剂师或有资质的药房代表制备，用于静脉输注。
依诺肝素
根据当地国家要求和法规，皮下注射40毫克依诺肝素(enox)作为对照。遵循处方信息中描述的储存条件。
人群
本研究包括600名年龄≥18岁、需要进行选择性单侧膝关节置换术的男性和女性患者。预计大约20％的随机患者有不可评估的静脉造影；因此，大约600名患者(每组150名患者)被随机分组，以确保480名患者可作为主要研究终点进行评估。如果不可评估患者的比率与预期的20％不同，将调整随机患者的数量，以确保480名患者可用于研究主要终点的评估。
纳入标准
下文描述了本实施例所述临床研究中患者的入选标准。患者：
-男性和女性患者(年龄≥18岁并<80岁)
-被安排接受选择性单边TKA；
-能够理解并愿意给予书面知情同意
-愿意遵守研究要求，包括第10天±2天的静脉造影；
-体重在50到130公斤之间，包括端点值；和
-筛选时aPTT和PT/INR在正常值上限(ULN)内。
排除标准
下文描述了将患者排除在本实施例所述临床研究之外的标准。患者：
-在招募的5个半衰期内使用过其他研究药物，或在预期药效恢复至基线水平之前使用过其他研究药物，以时间较长者为准；
-对任何研究药物(包括依诺肝素)或其赋形剂、类似化学类别的药物、相同生物来源的药物或依诺肝素标签中列出的任何禁忌症有过敏史；
-在手术前至少7天至EoS访视时，具有全剂量抗凝或双重抗血小板治疗的适应症，或预期同时使用可能影响研究结果的抗凝/抗血小板药物或任何其他影响凝血的药物(低剂量阿司匹林和短效NSAIDs除外)；
-在研究开始时有已知或疑似活动性出血；
-尿蛋白或血液试纸持续阳性；
-由于出血倾向增加的病史(例如，出血素质史、已知的活动性胃肠道病变如血管发育不良或内窥镜检查证实的胃肠道溃疡或过去一年内的胃肠道出血史)或研究者认为增加出血风险的任何其他疾病，或有颅内或眼内出血史的患者；
-在过去6个月内接受过重大手术(包括脑部、脊椎或眼科手术)的人；
-有创伤性脊髓或硬膜外麻醉史，或术中或术后大量出血史；
-在过去6个月内遭受重大创伤的人；
-有VTE史；
-在过去一年中患有恶性肿瘤的患者，除了已经成功治疗的皮肤基底细胞癌或鳞状细胞癌，或者子宫颈原位癌；
-在过去6个月内曾患心肌梗塞、中风或短暂性脑缺血发作的人；
-研究者判断高血压未得到控制；
-估计肾小球滤过率(eGFR)<60mL/min/1.73m2；
-根据研究者的判断，在筛选过程中出现临床显著性贫血；
-筛查时血小板计数<150,000m3或有肝素诱导的血小板减少症病史；
-因已知对造影剂过敏、预期静脉通路不良、肾功能受损或研究者确定和说明的任何其他原因而无法接受静脉造影的患者；
-预期在TKA手术后使用间歇气动加压装置；
-肝功能异常(ALT/AST>3x ULN或总胆红素>2x ULN)、肝硬化诊断、肝性脑病病史、食管静脉曲张、或门腔分流术；
-筛查时人类免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎(乙型肝炎表面抗原[HBsAg])或丙型肝炎(抗丙型肝炎抗体[抗HCV])检测呈阳性的人；
-研究者判断筛选时出现具有临床意义的异常ECG，
-最近或目前有酗酒或吸毒史；
-孕妇或哺乳期(哺乳期(lactating))妇女；
-具有生育能力的妇女，定义为所有生理上能够怀孕的妇女，除非她们使用高效的避孕方法；
-在研究药物开始前两(2)周内患有未痊愈的重大疾病的人；
-患有任何可能妨碍患者遵守研究要求的疾病或其他医疗状况的；或者
-在研究期间接受预期的选择性手术(例如对侧全膝关节置换术)。
剂量和用法
在试验开始时，为每位患者随机分配剂量水平。在一些实施方案中，患者每月一次静脉内(i.v.)接受30mg抗体1。在一些实施方案中，患者每月一次静脉注射75mg抗体1。在一些实施方案中，患者每月一次静脉注射150mg抗体1。在一些实施方案中，患者每天一次皮下(s.c.)接受40mg依诺肝素。TKA手术后约4至8小时给药抗体1。TKA手术后约12小时开始给药依诺肝素，之后每天皮下注射40mg依诺肝素，直至第10天访视静脉造影。研究者根据当地指南自行决定在TKA手术前给予单次初始40mg皮下注射依诺肝素剂量。
功效和安全性评估
功效评估：通过手术腿部单侧上行静脉造影术检测到的判定无症状深静脉血栓形成(DVT)的复合终点、已确认的症状性的DVT、致命性和非致命性肺栓塞(PE)或至第10天(静脉造影术日)的整个治疗期间无法排除PE的不明原因死亡来评估疗效。静脉造影阅读者和复合终点的中心评判者对治疗分配不知情。
患者在治疗期间的第3天、第6天和第10天接受了研究访问。手术后的住院时间由研究者根据当地医疗实践自行决定。如果患者在第10天之前出院，他们应在第10±2天返回研究中心进行临床评估和静脉造影。如果患者在第3天或之前出院，则收集第3天和第6天访视时安排的评估，但不重复。如果患者在第4天出院(在第6±1天研究访视之前，但在第3天评估已经完成之后)，研究中心在出院前收集第6天的评估。
在住院期间和出院后的所有访视中，对患者的DVT(肿胀、局部疼痛、发红、发热、局部发热)和非致命性PE(即不明原因的气短、随着深呼吸而加重的胸痛、咳嗽或胸部运动或咳血)的体征和症状进行了评估。
通过压迫超声(CUS)或单侧或双侧静脉造影术对每个疑似深静脉血栓事件进行即时客观确认。如果在预定的静脉造影之前(第10±2天)，CUS客观地证实了有症状的近端DVT，则可以省略静脉造影。当怀疑的深静脉血栓未被CUS证实时，应安排并进行静脉造影。如果在静脉造影当天怀疑有深静脉血栓形成，静脉造影可以如期进行。只有当CUS客观地证实了疑似症状性深静脉血栓形成时，才可以省略静脉造影。
通过通气/灌注肺闪烁扫描、螺旋计算机断层扫描或肺动脉造影确认了每一次疑似PE发作。
如果在治疗期间使用上述技术确认存在DVT或PE，则在第10天就诊时不进行静脉造影。如果使用上述技术未能证实DVT或PE，患者必须进行静脉造影。
除非如上所述另有规定，否则在第10天访视时进行强制性静脉造影。收集静脉造影图像或疑似症状性DVT和PE的诊断测试图像，并尽快传输给中央独立评审委员会(CIAC)进行审查，该委员会的成员对治疗分配不知情。
在随访期内，患者在第30天、第50天和第110天进行了额外的就诊，评估了其他安全性实验室参数、药代动力学(PK)和药效学(PD)。研究结束(EoS)访视在第110天进行。
在研究期间，CIAC持续对静脉造影术、所有疑似VTE、所有疑似出血事件和不明原因死亡进行判定。指导和安全委员会(SSC)定期审查总VTE(无症状深静脉血栓、有症状VTE和PE相关死亡)、总出血事件和其他未纳入治疗分配的安全性事件的汇总数据，该委员会对试验负有全面的临床和科学责任。该数据对直接参与研究的临床试验团队保密。本次审查的主要目的是，如果VTE率不可接受，则放弃低剂量，或低剂量和中剂量。
通过在第10±2天通过方案要求的手术腿部单侧静脉造影术检测到的确认无症状DVT复合终点、确认有症状的DVT、致命和非致命性PE、或在随机化和EoS访视后至第30天仍不能排除PE的不明原因死亡来评估疗效。
关键安全性评估：监测整个治疗期间和至第30天判定的严重出血和CRNM出血事件的复合结果的发生情况。对不良事件(AE)发生率、体检、过敏反应和注射部位反应(ISR)以及血液和尿液中的实验室标志物进行了监测。
其他评估：在(术前)第1天、第3天、第6天、第10天、第30天、第50天和第110天(EoS访视)测量总抗体1，以进行药代动力学(PK)测定。抗体1的治疗后浓度用于导出以下PK参数：Cmax、Tmax、AUClast、Clast和Tlast。如果可行，AUCinf、T1/2、Vd/F和CL/F。在(术前)第1天、第30天、第50天和第110天(EoS访视)测量抗药物抗体的存在。
在筛选(术前)第1天、第3天、第6天、第10天、第30天、第50天和第110天(EoS访视)测量凝血生物标志物，包括aPTT和PT/INR；在(术前)第1天、第3天、第30天和第50天测量校准的aPTT和FXI:C；在(术前)第1天、第3天、第6天、第10天、第30天、第50天和第110天(EoS访视)测量游离FXI和总FXI。
数据分析：primary Stratified Cochran-Mantel-Haenszel(CMH)检验功效分析用于检验无效假设，即抗体1低、中、高剂量组和依诺肝素组之间判定的总VTE事件发生率的差异等于或大于预先指定的NI界限(14％)，相对于替代假设，即至少一个差异小于NI界限。对于每次比较的最终分析，主要分析基于0.025的总体显著性水平(单侧检验)。对于非劣效性试验，采用了置信区间(CI)方法，95％CI将用于低、中、高剂量抗体1与依诺肝素的比较。因为发生率差异的置信区间的上限小于或等于NI界限，所以实现了非劣效性。显示了非劣效性的进行了优越性检验。此外，还提供了非劣效性和优越性检验的p值(基于单侧检验)。
在mITT-set中进行了功效分析。该人群包括所有接受了至少一剂研究药物且可对主要疗效结果进行评估的患者(即，具有可评估的静脉造影或确诊的症状性深静脉血栓、致命性或非致命性肺栓塞或不明原因死亡)。统计分析中未考虑多重比较程序；然而，统计测试是分等级的。
风险和不良事件监控
基于抗体1的既往临床经验的风险
在迄今为止完成的两项临床研究中，抗体1通常具有良好的耐受性。不良事件(AEs)很少发生，严重程度较轻，且在治疗组和安慰剂组之间平衡良好。尚未观察到剂量依赖性安全性结果。虽然粪便潜血试验在少数受试者中呈阳性，但这些阳性试验结果没有一个在重复试验中保持阳性或与指示活动性出血的任何临床或实验室信号相关。因此，根据抗体1的既往临床经验，尚未发现特定风险。
基于抗体1临床前毒性研究的风险
虽然尚未进行具体的安全药理学研究，但在为期13周的毒性研究中，未观察到归因于抗体1给药的定性或定量心电图变化以及对呼吸和中枢神经系统功能的影响。无死亡发生，对临床症状、体重、食物消耗量、眼科和心电图参数、血液学、临床化学、尿液分析、肉眼观察或组织学无试验药物相关影响，且未在粪便中检测到潜血。本研究中未发现不良结果。根据上述数据，未发现具体的预期风险。
基于抗体1生物效价的风险
在为期13周的符合良好实验室规范(GLP)的毒性研究中，在用抗体1治疗至每周剂量100mg/kg皮下注射(s.c.)或50mg/kg静脉注射(i.v.)后，未观察到出血表现、静脉穿刺或注射部位出血。
用抗体1治疗预计会产生与患有严重FXI缺乏症的患者的出血表型相当的出血表型。与甲型和乙型血友病不同，FXI缺乏症很少伴有自发性出血表现。患有严重FXI缺乏症受试者的出血表现罕见，通常较轻，由损伤引起，优先影响纤维蛋白溶解活性增加的组织，如口腔粘膜、鼻粘膜和泌尿道。FXI缺乏症患者很少出现自发性肌肉或关节出血或颅内出血(Bolton-Maggs2000，Duga和Salomon 2013)。
在健康受试者(Liu等人，2011年)和接受选择性单侧全膝关节置换术的患者(Büller等人，2015年)的首个人体(FIH)研究中，也对FXI反义寡核苷酸(ASO)进行了评估。在最高剂量下，在超过6至8周的时间内实现了游离FXI>80％的强劲和持续减少(几名受试者达到了检测不到的水平)。在FIH的研究中，接受FXI-ASO或安慰剂的88名受试者没有发生出血。此外，与低剂量依诺肝素相比，对接受单侧TKA的患者使用FXI-ASO使FXI:C实现80％降低，似乎与严重或CRNM出血事件发生率较低的趋势相关。一个主要出血事件(1％的患者)发生在高剂量FXI-ASO组(Büller等人，2015)。为了减轻使用抗体1治疗后的出血风险，本试验排除了出血事件风险增加的受试者。
与过敏反应相关的潜在风险
输注治疗性蛋白质可导致立即或延迟的过敏反应。在给药后的最初几个小时内会出现立即反应。临床表现可能包括各种症状，例如发热、寒战、恶心、皮肤症状、支气管痉挛、呼吸困难、头晕、头痛、肌痛、心动过速和/或低血压。还报告了过敏反应、荨麻疹和血管性水肿。迟发型超敏反应可在给药后1-2小时至14天内出现，通常伴有血清病样症状(Corominas等人，2014年)。单克隆抗体过敏反应的发生率取决于人源化程度、获得它们的细胞系和赋形剂。在为期13周的毒性研究和FIH研究中，未观察到过敏反应。
过敏反应的管理取决于临床表现和严重程度。根据需要，可以使用治疗中断(如果适用)；液体、血管加压药、皮质类固醇、抗组胺药、支气管扩张药、肾上腺素和氧气。
与补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)相关的潜
在风险
IgG1单克隆抗体结合Fcγ受体(FcyRs)和人补体1q亚成分(Clq)，因此具有Fc介导的效应子功能的潜力。在ADCC，单克隆抗体直接与表达FcyR的细胞相互作用。在CDC中，单克隆抗体与Clq相互作用，导致补体系统的激活并释放过敏毒素和调理素。
尽管FXI为可溶性靶标，但其可与细胞表面相关，最显著的是在活化血小板的表面上，在此处其与血小板糖蛋白Ibα受体结合。在Fc结构域抗体1中引入了两个Fc受体功能沉默突变，以减轻由于抗体1可能通过血小板结合FXI聚集而改变血小板功能的任何潜在风险。这两种突变已被证明降低了IgGl与FcyRs和Clq的结合，并降低了体外ADCC和CDC(Idusogie等人2000；Shields等人2001)。因此，预计抗体1引起ADCC和CDC的风险较低。
与研究程序相关的潜在风险
在研究过程中，通过静脉穿刺或静脉插管频繁收集血样。与采血相关的风险包括针头插入部位的疼痛、肿胀和/或擦伤。虽然罕见，但局部凝块形成、感染和神经损伤可能发生。在抽血期间或抽血后不久也可能出现头晕和/或昏厥。作为研究的一部分，在大约3.5个月的时间内，从每个随机分组的患者身上采集的血液不超过200毫升。对血液采集的估计不包括为监测任何安全性发现而在计划外访视时采集的额外样本。这一收集量不被认为对该患者群体有风险。
进行静脉造影需要30至90分钟。静脉造影术后可能出现局部并发症，如注射部位出血、擦伤或感染。放射造影剂的副作用范围从轻微的不便，如瘙痒，到危及生命的紧急情况。造影剂诱发的肾病是一种众所周知的与使用静脉内或动脉内造影剂相关的不良反应。其他形式的不良反应包括迟发型超敏反应、过敏反应和皮肤反应。
为降低使用造影剂的风险，已知有对造影剂不耐受以及中度至重度肾功能损害的病史的患者被排除在研究参与范围之外。在进行静脉造影术期间和之后，对患者进行充分的水化。
如果患者出现术后肾功能损害(定义为eGFR<45mL/min或在第6天就诊时比基线下降25％)，则在第10天不进行静脉造影术，以最大限度地降低造影剂诱发肾病的风险。
使用抗体1的潜在益处
与普通人群相比，患有严重FXI缺乏症的患者患静脉血栓形成和中风的风险较低(Salomon等人，2008年；Salomon等人，2011；年Preis等人，2017年)。此外，在接受单侧TKA的患者中，使用FXI ASO平均抑制80％的FXI，就总VTE而言，其疗效优于依诺肝素(Büller等人，2015)。FXI ASO抑制与TKA手术中的出血过多无关，即使在一些患者中检测不到FXI水平(Büller等人，2015)。
抗体1是一种研究药物，其临床益处尚未确定；然而，早期临床数据表明，抑制FXI可能是有益的抗血栓剂。在FIH研究中，150mg剂量和更高剂量的抗体1导致健康受试者的平均aPTT延长>2倍，平均FXI抑制>95％，持续>4周。临床前数据和FIH研究的数据显示了可接受的安全性。与依诺肝素相比，抗体1延长的作用持续时间可能在VTE保护方面提供额外的优势(Falck-Ytter等人，2012)
治疗分配和随机化
按照方案成功完成筛选后，患者以1:1:1:1的比例被随机分配至以下4个治疗组之一。
·抗体1的30mg i.v.x 1
·抗体1的75mg i.v.x 1
·抗体1的150mg i.v.x 1
·每天皮下注射40mg依诺肝素，直到第10天静脉造影
随机化编号以升序顺序分配给合格患者。研究者在CRF上输入了随机化编号。随机化数字由Covance公司或其负责使用经验证的系统生成，该系统可自动将治疗组随机分配到指定比例的随机编号。
Covance随机化小组的一名成员审查并批准了患者的随机化方案。随机化编号用于将患者与治疗组联系起来，并为要分配给患者的抗体1指定唯一的药物编号。生成随机化编号是为了确保治疗分配是无偏倚的。
这是一项开放性盲法终点评估设计研究。研究者和患者将完全了解与依诺肝素相比，抗体1的治疗任务。该研究的主要安全性和疗效终点由CIAC判定，其成员仍对治疗分配不知情。在数据库锁定之前，随机化信息不会发布给临床试验团队。
治疗患者
由合格的医务人员通过静脉输注(抗体1)向患者给药抗体1。
以开放标签的一次性小瓶，为每个研究点提供抗体1。药剂师或药房指定人员根据治疗任务准备了用于给药的研究药物。所有的抗体1剂量都在约1小时内以5％葡萄糖水溶液(DSW)给药。
根据当地指南，皮下给药的依诺肝素由个体研究中心在当地采购，或通过主办方或代表主办方工作的代表提供。
抗体1由药剂师或指定的现场工作人员制备，并在TKA手术后约4-8小时静脉注射，在约1小时内单次输注。
TKA手术后约12小时开始皮下注射40mg依诺肝素，随后每天皮下注射40mg依诺肝素，直至访视第10天静脉造影。研究者根据当地指南自行决定在TKA手术前给予单次初始40mg皮下注射依诺肝素剂量。将依诺肝素治疗延长至第10天静脉造影术之后，由研究者和当地医疗机构决定。表12描述了抗体1和依诺肝素的给药。
表12.给药抗体1和依诺肝素
如果需要调整输注速率(抗体1)或中断给药(抗体1或依诺肝素)来管理患者的不良反应或护理，则输注速率/注射的变更详情记录在CRF中。如果出现以下任何情况，应通知主办方：
·抗体1输注时间<30分钟或≥2小时或输液中断≥60分钟
·对于依诺肝素或抗体1，给药的药物总量<分配剂量的90％或≥110％
对于依诺肝素治疗组的患者，如果患者无法耐受依诺肝素治疗，研究者可酌情考虑暂时中断或永久停用依诺肝素，并应记录在适当的CRF中。
研究完成和中止
当患者完成方案中计划的最后一次访视时，视为患者已完成研究。
当研究药物在方案计划持续时间之前停用时，患者的研究治疗中断。研究药物的停用由患者或研究者发起。
如果研究者认为继续治疗会对参与试验的风险/益处产生负面影响，则他/她应停止对特定患者的研究治疗。
在以下情况下停止研究治疗：患者请求、怀孕、使用禁用治疗、参与研究可能会给患者带来安全风险的任何情况，或研究者在考虑患者整体状况后判断阻止患者继续参与研究的任何实验室异常。
使用抗体1治疗的患者在试验期间仅接受了一剂药物；因此，不可能停止治疗。鉴于抗体1的半衰期，研究者在治疗期间和随访期间密切监测aPTT水平。
如果接受依诺肝素治疗的患者出现出血事件，研究者将评估临床情况，是否可以推迟、暂时停止或永久停止药物施用。接受依诺肝素治疗的患者出血事件的管理由研究者自行决定，并符合当地临床实践。
根据通常的医疗实践，使用当地实验室设施对血小板进行密切监测。如果血小板计数低于100,000/mm3或下降超过50％，则停止依诺肝素治疗，并对肝素诱导的血小板减少症进行评估。是否继续对VTE进行预防性治疗由研究者自行决定，并应符合当地临床实践。
如果接受依诺肝素治疗的患者出现经确认的症状性VTE事件，研究者考虑治疗剂量的依诺肝素随后给药治疗剂量的直接口服抗凝剂(DOAC)或华法林可持续适当的时间，并符合当地临床实践。
程序和评估
表13中所示的评估计划详细说明了试验期间要评估的时间安排和检查。
筛选期(第-30天至第-1天)
在执行任何研究相关程序之前，已获得该研究的书面知情同意书。
在确定潜在患者后，在进行任何研究相关筛选评估前，患者应填写知情同意书(ICF)。AE和SAE报告期从签署ICF时开始。
为完成筛选评估和确定患者是否符合研究资格提供了最多4周的时间。在筛选期间，患者接受了病史和体检，包括生命体征和12导联心电图。采集血液和尿液样本进行临床实验室检测和其他筛查评估。
如果患者具有临界异常实验室值和/或如果重新安排了手术，则允许对患者进行重新筛查。研究期间只允许对患者进行一次重新筛查
直到第1天TKA手术前收集了再筛选评估。在这种情况下，重新筛选的实验室样本被送往当地实验室，以加快周转时间。所有结果在待参加研究的患者接受TKA手术之前都已公布。
治疗期(第1天至第10±2天)
在手术伤口闭合后约4-8小时，随机接受抗体1治疗的患者接受了一次研究药物静脉输注。对于接受依诺肝素治疗的患者，从TKA手术后约12小时开始，每天皮下注射40mg依诺肝素，直到第10±2天完成静脉造影。
在指定日期或指定就诊窗口内对所有就诊的患者进行检查。手术后的住院时间由研究者根据当地医疗实践自行决定。如果患者在第4天出院(在第6±1天研究访问之前，但在第3天评估已经完成之后)，则研究中心在出院前收集第6天的评估。所有在第10天(±2天)前出院的患者返回研究地点进行第10天的临床研究和静脉造影评估。
在所有访视中，研究者将检查并记录DVT/PE的临床体征和症状、出血事件、AEs(包括ISRs)以及伴随的药物变化。
随访期(第10±2天至第110天)
静脉造影术后，患者返回研究中心/医师办公室进行门诊就诊，如评估计划所示。对患者进行随访，直至第110天研究中心访视(EoS访视)。
在所有访视中，研究者检查并记录了：DVT/PE的临床体征和症状、出血事件、AE和伴随的药物变化。
功效
主要疗效结果是下列的综合结果：手术腿部单侧上行静脉造影术检测到的无症状性DVT、经确诊的症状性DVT、致命性和非致命性PE，或在整个治疗期至第10天(静脉造影术日)期间无法排除PE的不明原因死亡。
次要疗效结果是在第10±2天时通过方案要求的手术腿部单侧静脉造影术检测到的无症状性DVT、经确诊的症状性DVT、致命性和非致命性PE，或在至第30天和至第110天无法排除PE的不明原因死亡(EoS)的综合结果。
静脉造影术
在第10±2天就诊时，对手术腿部进行单侧上行静脉造影术(Rabinov和Paulin，1972年)。静脉造影和事件报告手册中提供了有关静脉造影程序和图像采集的详细信息，该手册单独提供给研究中心。
审查结果如下:
·没有凝块
·远端凝块
·近端凝块
·远端和近端凝块
·远端不可评估，但近端没有凝块
·不可评估。
DVT/PE的临床检查
患者在手术后住院期间以及出院后的所有随访接触中接受了DVT(例如肿胀、局部疼痛、发红、发热、局部发热)和PE(例如不明原因的气短、随着深呼吸而加重的胸痛或咳嗽或咳血)的体征和症状评估。
通过CUS或静脉造影术记录每个DVT事件。如果怀疑有DVT形成，首先允许进行CUS。只有当CUS结果显示腿部近端DVT时，才不需要静脉造影。
通过通气/灌注闪烁扫描、螺旋计算机断层扫描(CT)或肺动脉造影记录每一次疑似PE发作。如果使用上述技术证实了PE的存在，则不需要进行第10天的静脉造影。如果使用上述技术未能确诊PE，则患者接受静脉造影。
出血
主要安全性结果是治疗期间(第一次研究药物给药至第10天静脉造影)、第30天和直至第110天EoS研究访视(或早期研究中止/终止)期间严重出血和CRNM出血事件的组合。
研究人员检查并报告了所有可疑出血事件，并在研究人员认为必要时进行了额外检查(例如，血样中的血红蛋白(Hb)、红细胞比容(Hct)、aPTT、PT、INR和血小板计数，或根据出血内窥镜检查的类型，以及(如适用)记录的输注的包装红细胞次数和输注量。
试验期间记录了其他出血相关参数：
·治疗期间Hb水平、Hct和红细胞计数的变化
·各医院通过常规方法量化的失血量(围手术期、手术后)
·手术后30天内输注包装红细胞的次数和输注量(需要区分同源和自体输血)
如果TKA后血红蛋白减少、观察到的失血量或输血次数超过预期，则记录疑似出血事件。
药代动力学
在给定的时间点收集PK样品。遵循中心实验室手册中概述的关于样本采集、编号、处理和运输的说明。
为了更好地定义药代动力学(PK)特征，基于出现的数据改变了药代动力学样本收集的时间。样本/抽血的数量和收集的血液总量未超过方案中规定的数量。PK评估时间的变更(如有)已在剂量调整纪要中传达给各研究中心。
除了分配到依诺肝素组的患者外，在所有剂量水平下均获得并评估了所有患者的药代动力学样本。
通过经验证的LC-MS/MS方法测定血浆总抗体1(即，结合FXI或不结合FXI的抗体1)的浓度。生物分析原始数据和生物分析数据报告(Bioanalytical Data Report)中包含了用于量化总抗体1浓度的方法的详细说明。在浓度数据列表中，所有低于LLOQ或缺失数据的浓度都被标注出来。
根据血浆浓度数据，在数据允许的情况下，使用实际记录的采样时间和PhoenixWinNonlin(版本6.2或更高版本)的非房室方法确定了以下药代动力学参数：C0(输注结束时的浓度)、AUClast、AUCinf、C0/D和AUC/D。线性梯形规则将用于计算AUC。如果可行的话，还根据数据估计了抗体1的终末半衰期(T1/2)、分布体积(Vss)和清除率(CL)。根据情况计算其他药代动力学参数。
血浆总抗体1浓度数据按剂量、患者和访视/取样时间点列出。按剂量和访视/采样时间点提供了描述性汇总统计数据，包括低于LLOQ并报告为零的浓度频率(n，％)。
汇总统计包括平均值(算术和几何)、SD、变异系数(CV)(算术和几何)、中值、最小值和最大值。Tmax仅表示为中值、最小值和最大值。低于LLOQ的浓度从汇总统计中排除。如果数据集包含零值，则不会报告几何平均值。如上所述计算PK参数，并按剂量和患者列出。
在使用C0、AUClast和AUCinf单剂量给药抗体1后，对暴露的剂量比例进行了评估。参数进行对数转换，并使用幂模型进行分析：ln(PK)＝μ+β×ln(剂量)。斜率(β)的点估计值及其90％置信区间(CI)从该模型中获得。
药效学评估
在评估计划中定义的时间点收集PD样品。关于生物样本处理的说明包含在关于样本采集、编号、处理和运输的中心实验室手册(Central Laboratory Manual)中。
为了更好地定义PD特征，根据紧急数据改变了样本收集的时间。样本/抽血的数量和收集的血液总量未超过方案中规定的数量。在所有剂量水平下，对所有患者进行PD样本采集和评估。
研究了包括但不限于以下的生物标记：
·游离FXI-血浆中测得的游离FXI(未与抗体1结合的FXI)
·血浆中测得的与抗体1结合或游离的总FXI-FXI。
·针对FXI缺陷校准aPTT
·在血浆中测量的FXI凝血活性(FXI:C)
使用混合模型重复测量(MMRM)方法分析了与基线游离FXI的对数转换比率，包括治疗、访视、治疗*访视相互作用、对数(基线)和对数(基线)*访视相互作用对非结构化方差-协方差矩阵的影响。也可以考虑其他模型。可以使用适当的对比来研究剂量反应。每次治疗与基线的比率和每次抗体1剂量的安慰剂调整后的基线比率及其相关的置信区间将在回变(back transformation)后得出。此外，将在接受抗体1的剂量组之间比较与基线的比率。将使用相同的方法分析aPTT和其他PD和生物标记参数。游离FXI、FXI:C和aPTT水平之间的关系将使用图解和回归方法进行探讨。
免疫原性
配体结合分析用于检测抗抗体1的抗药物抗体(ADAs)。
探索性生物标志物(血液)
在评估计划中规定的时间点收集血样。这些样本被储存起来，以备将来进行适当的分析。可以对样本进行测试，例如但不限于D-二聚体和血栓形成和凝血活性的其他探索性标志物。
功效
根据对全膝关节置换术(TKA)后接受抗体1与依诺肝素治疗的患者的静脉血栓栓塞(VTE)事件的评估，如上表12所述，抗体1有效预防TKA手术相关的VTE。接受30mg(“B组”)、75mg(“C组”)或150mg(“D组”)抗体1或40mg依诺肝素剂量的患者的结果如图3A所示。在接受75mg抗体1的患者中观察到最大功效。将该试验的结果与已发表的临床试验进行比较，这些临床试验使用来自Büller等人NEJM(2015)的因子XI反义寡核苷酸(FXI-ASO)(图3B)和来自Weitz等人JAMA(2020)的osocimab(FOXTROT)(图3C)评估了相似患者群体(接受TKA手术的受试者)中的VTE事件。相比之下，在FOXTROT研究中，发现抗体1在预防TKA手术相关的VTE方面比任何测试剂量的oscimab更有效，并显示出与最高剂量的FXI-ASO相似的效果。
生物标志物分析
该研究的初步结果证明了抗体1的高效性。如图4A所示，相对于在健康受试者中进行的PK/PD研究(在图中称为“PK”)，在TKA试验中，血浆中抗体1的峰值水平在血浆中表现出明显的浓度差异和模式。相比之下，在血浆中观察到的游离因子XI显示，治疗受试者的显著减少长达约57天，如在用抗体1的研究中观察到的那样(图4B)。对于每个图，点代表观察到的数据，线代表平滑的“拟合”曲线(表示两个变量之间的关系)，底部的数字代表每个时间组的BLQ记录的百分比。
安全性
根据对严重不良事件(SAE)的分析，包括重大出血事件和临床相关的非重大(CRNM)出血，抗体1在TKA手术后患者中是安全且耐受性良好的。与接受依诺肝素治疗的患者相比，接受抗体1治疗的患者发生严重不良事件或出血事件的风险略有增加，但仍然低。与接受FXI-ASO疗法或FOXTROT疗法的患者相比，这些风险略有降低。表14显示了比较抗体1、FXI-ASO或FOXTROT与抗凝化合物的研究中的SAE定量。
表14-接受TKA手术的患者中抗体1、FXI-ASO和FOXTROT的安全性评估
根据接受剂量对接受抗体1的患者的安全性数据进行分层显示，大多数严重不良事件和出血事件发生在接受最高剂量(150mg)的D组患者中。D组出现两起严重不良事件，一名患者在术后4天左右出现可能的肠梗阻，另一名患者在术后12天左右出现假体周围关节感染。经历假体周围感染的患者也经历了大出血和CRNM出血。注意到的唯一其他SAE是C组(75mg)患者的假体周围关节感染。B组(30mg)有两名患者出现CRNM出血。表15详细列出了接受抗体1治疗的患者与依诺肝素相比的安全性数据。
表15-接受不同剂量抗体1的患者的安全性数据
综上所述，这些结果表明抗体1是预防TKA手术后患者的VTE事件的安全有效的疗法。在TKA手术后接受75mg剂量的抗体1的患者中观察到最佳的安全性和有效性结果。
实施例4：用抗体1相比于利伐沙班治疗房颤患者
目的和合理设计
本研究的目的是评估与利伐沙班相比，抗体1在房颤(AF)患者中的安全性和耐受性。
在之前对健康志愿者进行的一项研究中，在剂量≥150mg的情况下，抗体1安全且耐受性良好，对因子XI产生强有力的持续抑制，并使活化部分凝血活酶时间(aPTT)相关延长≥4周。本研究中建议的给药方案有望对FXI和相关的aPTT延长产生强而持久的抑制作用。
该研究将评估中度至高度中风风险房颤患者多次给药后抗体1的安全性和耐受性，以及抗体1的PK和PD生物标志物。该研究将有助于房颤患者对3期抗体1的剂量选择。
目标和终点
本研究的主要目的是评估抗体1相对于利伐沙班对重大或临床相关非重大(CRNM)出血事件发生率的影响，终点是国际血栓与止血学会(International Society onThrombosis and Haemostasis)(ISTH)定义的重大出血或CRNM出血事件的首次事件发生时间。
该研究的次要目标是：
-评估抗体1相对于利伐沙班对严重或CRNM出血事件总数的影响，其中终点是首次事件(国际血栓和止血学会(ISTH)定义的严重出血事件)的时间；和
-评估抗体1相对于利伐沙班对严重或轻微出血事件发生率的影响，其中终点是首次事件(ISTH定义的严重或轻微出血事件)的时间。
该研究的探索性目标是:
-评估抗体1相对于利伐沙班对严重或CRNM出血事件总数的影响，终点为ISTH定义的严重或CRNM出血事件的总数(即首次和复发数)；
-评估抗体1相对于利伐沙班对胃肠道出血事件总数的影响，终点是判定的ISTH定义的严重或CRNM胃肠道出血事件的总数；
-评估抗体1相对于利伐沙班在中风或全身性栓塞发生率方面的功效，终点为首次发生缺血性中风或全身性栓塞事件的时间；
-评估抗体1相对于利伐沙班的净临床结果，终点是缺血性卒中、全身性栓塞事件、严重或CRNM出血事件、全因死亡率的复合事件的首次发生时间；
-评估房颤患者中抗体1相对于利伐沙班的治疗依从性，终点为：相对于利伐沙班漏服剂量的比例，抗体1漏服剂量的比例；
-评估房颤(AF)患者中抗体1的药代动力学(PK)，终点为指定时间点的抗体1血浆浓度谷值；
-评估房颤(AF)患者抗体1的PD，终点为指定时间点的aPTT、游离FXI和总FXI；
-研究抗体1相对于利伐沙班对健康相关生活质量(HRQOL)的影响，终点为EQ-5D-5L问卷和抗凝治疗量表(ACTS)；
-评估用抗体1治疗的患者的免疫原性发生率，终点是产生抗药物抗体(ADAs)的治疗患者的百分比，并评估ADA的产生对安全性、疗效、PK和PD反应的影响；
-评估抗体1相对于利伐沙班对血栓形成和凝血的其他生物标志物的作用，终点是探索性凝血参数，包括但不限于D-二聚体、凝血酶激活的纤维蛋白溶解抑制剂(TAFI)和凝块溶解时间；和
-进行探索性DNA评估，以检查与药物靶途径或其他相关遗传途径相关的基因中的个体遗传变异是否会导致对抗体1的不同反应，终点是探索性评估基因多态性与安全性、疗效、PK和PD反应之间的关联。
研究设计
这是一项随机、双盲、主动控制的[剂量范围发现]研究。在长达4周的筛选期后，将患者以1:1:1的比例随机分配到3个治疗组中的1个(低剂量或高剂量抗体1或利伐沙班)，治疗和随访至少12个月，直至研究结束。随机分组将根据国家和患者在筛选时是否抗凝(是/否)进行分层。在研究结束时(EoS)，研究者将自行决定将患者过渡到NOAC(新型口服抗凝剂)和/或其他标准护理治疗。
人群
约900-1200名年龄≥55岁、有房颤或房扑病史的男性和女性患者将在本研究中随机分组。
纳入标准
下文描述了本实施例所述临床研究中患者的入选标准。患者：-
-为年龄≥18岁的非瓣膜性房颤男女患者；
-心电图记录患有心房颤动或心房扑动；
-CHA2DS2-VASc风险评分≥4或≥3，在试验期间至少有1次计划合并使用抗血小板药物(如阿司匹林和/或P2Y12抑制剂)，或根据Cockcroft-Gault方程crcl≤50ml/min；
-既往有缺血性中风、短暂性脑缺血发作(TIA)或被认为是心源性栓塞的非中枢神经系统(CNS)全身性栓塞病史，或具有以下2种或多种风险因素：
ο心力衰竭和/或左心室射血分数≤35％
ο高血压(定义为6个月内使用抗高血压药物，SBP≥140mmHg或DBP≥90mmHg
ο年龄≥75岁
ο糖尿病(1型或2型病史或6个月内使用抗糖尿病药物)；
-患者要么是未经抗凝治疗，要么在筛查前的8周内接受了推荐剂量的新型口服抗凝剂(NOAC)的稳定治疗；和
-女性，必须绝经(≥2年)，手术绝育，禁欲，或者，如果性活跃，在进入研究前和整个研究过程中实行有效的避孕方法；对于那些有生育能力的人，在筛选时血清b-hCG妊娠试验为阴性。
排除标准
下文描述了排除参与本实施例所述临床研究的患者的标准。患者：
-在招募前的5个半衰期内或直到药效恢复到基线时(以较长者为准)，-使用了其他研究药物；
-有活动性内出血；
-有出血风险增加的病史或相关病症，包括但不限于：
ο30天内的主要外科手术或外伤
ο6个月内临床上显著的胃肠道出血
ο颅内、眼内、脊柱或无创伤性关节内出血史
ο慢性出血性疾病
ο已知的颅内肿瘤、动静脉畸形或动脉瘤
-已经计划了具有潜在不可控出血的侵入性手术，包括大手术；
-临床上显著的二尖瓣狭窄(值面积<1.5cm2)；
-机械心脏瓣膜；
-已知存在心房粘液瘤或左心室血栓；
-左心耳闭合或切除病史；
-活动性心内膜炎；
-在筛选访视时血小板计数≤70,000/μL；
-筛选访视时-血红蛋白<8g/dl；
-如果患者未服用抗凝剂，筛选访视时aPTT或PT>正常值上限(ULN)的1.5倍；
-具有持续未控制的高血压，SBP≥180mmHg或DBP≥100mmhg；
-在3个月内患有严重的致残性中风(改良Rankin评分为4至5分)或在14天内患有任何中风；
-3天内有短暂性脑缺血发作(TIA)；
-有房颤以外的抗凝适应症；
-正在接受治疗：
ο阿司匹林每日≥100mg
ο5天内进行双重抗血小板治疗
ο5天内进行静脉内抗血小板治疗
ο10天内服用抗纤维蛋白药物；或者
-有贫血(血红蛋白<10g/dL)。
剂量和施用
在试验开始时，为每位患者随机分配剂量水平。在一些实施方案中，患者每月一次皮下接受90mg抗体1。在一些实施方案中，患者每月一次皮下接受150mg抗体1。在一些实施方案中，患者每晚口服一次20mg利伐沙班；在一些实施方案中，肌酐清除率≤50mL/min的患者每晚接受一次15mg利伐沙班。
功效和安全性评估
疗效评估：将通过中风(缺血性或出血性)或其他全身性栓塞事件的发生率来评估疗效。
关键安全性评估：基于安全性的主要终点为已确认的重大出血事件、临床相关的非重大出血事件、总出血事件，和/或重大心血管和/或脑部事件的发生(例如中风、短暂性脑缺血发作、全身性栓塞、心肌梗死、深静脉血栓形成、肺栓塞和心血管死亡)。不良事件将通过体检、血液实验室参数监测、心电图、过敏反应、注射部位反应和评估抗药物抗体的发展进行监测。
其他评估：将确定药代动力学。可以评估的生物标志物包括游离因子XI、总因子XI、因子XI凝血活性、活化部分凝血活酶时间和D-二聚体。
数据分析：将对两种剂量的抗体1相对于利伐沙班的暴露-反应分析进行分析，以了解重大出血和临床相关非重大出血的累积发生率。将酌情分析安全性数据，包括出血事件。[假设基于ROCKET-AF的对照组年化事件发生率为14.2％，年化退出率为10％，800名受试者的总样本量将提供80％的功效来检测单侧α为0.025时的HR＝0.60。1100名受试者的总样本量将为HR＝0.65提供80％的功效。这些数字假定在试验:对照、12个月登记和最后登记的患者12个月随访之间1:1分配]
中期分析：中期分析可用于调整样本大小或延长研究持续时间，或停止给药或研究早期疗效或无效性的发现。
临床终点
出血
应记录受试者报告的或研究者观察到的所有可疑出血事件。
公开出血事件将由独立和盲法的CEC裁定。CEC将根据国际血栓和止血学会(ISTH)的定义和指南(Kaatz等人，2015年)对出血事件进行分类。
所有报告的出血事件的详细信息将按照终点报告指南中的说明提交给CEC。这些细节可以包括，但不限于，
-出血的位置
-出血持续时间
-出血事件的治疗，包括医疗保健专业人员的建议记录或摘要，医疗保健专业人员提供了医疗治疗，如耳鼻喉科的耳鼻喉出血咨询；泌尿外科会诊血尿或泌尿生殖道出血；皮肤、软组织或内出血的外科会诊；子宫或阴道出血的妇科会诊；颅内出血的神经病学或神经外科会诊；或眼科会诊眼部出血
-血液制品输血次数
-出血量(如皮肤或皮下血肿的大小)
-出血事件发生时的血红蛋白(Hb)水平、最低值、输血前后的值以及出血事件解决后的值
-为评估出血所做的任何诊断试验，如消化道出血的内窥镜检查
-为评估出血而进行的任何诊断成像，如x射线、计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)或超声波
-有助于CEC裁决出血事件的任何其他信息。
终点报告指南将为每个疑似出血事件所需的文件、数据收集和报告提供详细说明。
功效
独立和盲法的CEC将对以下事件进行裁决和分类：
-缺血性中风
-短暂性脑缺血发作(TIA)
-非中枢神经系统(CNS)(系统性)动脉栓塞事件-
-心肌梗塞(MI)
-死亡
裁决结果将用于最终分析。
其他评估
药代动力学
根据评估计划中的规定，在研究访视中使用研究药物之前，将收集PK血样(如下表16和表17所示)。血浆总抗体1(即与FXI结合或不与FXI结合的抗体1)的浓度将通过经验证的LC-MS/MS方法测定。生物分析原始数据和生物分析数据报告中将详细描述用于量化总抗体1浓度的方法。所有低于LLOQ的浓度或缺失数据将在浓度数据列表中进行标注。
药效学评估
将在评估计划中定义的时间点收集PD样品。生物样本处理说明将包含在《中心实验室手册》中，涉及样本收集、编号、处理和运输。
研究包括但不限于以下的PD生物标志物：
-游离FXI-将在血浆中测量未结合抗体1的FXI；
-总FXI-将在血浆中测量与抗体1结合或游离的FXI；
-aPTT。
此外，基于地点对合适的-70℃/-80℃冰箱的可用，可从所选地点登记的患者子集收集FXI凝血活性(FXI:C)。将在血浆中测量FXI:C。
免疫原性
基于免疫测定的方法将用于检测抗抗体1抗药物抗体(ADAs)。分析方法将在IG生物分析数据报告中详细描述。IG样本将在研究访视时服用研究药物之前收集，如评估计划中所定义(表16-17)。
表16-评估时间表(第一年)
S-结果仅记录在源文档中
1《遗传知情同意书》是一项可选的子研究；基因样本可以在获得选择性基因知情同意后的任何时候收集
2仅从分配给抗体1的患者中收集
3可在患者子集中收集
4只分配给抗体1的患者；可以在门诊或家访时由具有医学资格的、未设盲的研究人员或当地允许的指定人员进行给药。如果在家给药，将在当地允许的情况下，由研究中心通过电话或视频电话对合并用药、AE和其他健康状况变化进行评估
5仅分配给利伐沙班的患者；在适当且当地允许的情况下，可通过门诊访问或虚拟访问(如视频电话)来评估责任
表17-评估时间表(第2年)
S＝结果仅记录在源文件中；永久停用研究药物；EoT＝治疗期结束；EoS＝研究结束
1随后的治疗年将遵循与第2年相同的评估计划
2仅从分配给抗体1的患者中收集
3可以在患者子集中收集
4名患者仅分配给抗体1；可以在诊所或家访时由当地允许的医学合格的、非盲的研究人员或设计者进行给药。如果在家给药；在当地允许的情况下，各研究中心将通过电话或视频电话对合并用药、AE和其他健康状况变化进行评估
5患者仅接受利伐沙班治疗；在适当且当地允许的情况下，可通过门诊访问或虚拟访问(如视频电话)来评估责任
其他生物标志物(血液)
将在评估计划中规定的时间点收集额外的血液样本，并储存以备将来可能的探索性分析(表16)。
其他生物标志物可包括，但不必然限于：
-D-二聚体
-凝血酶激活的纤维蛋白溶解抑制剂(TAFI)活性
-凝块溶解时间
该列表可以进一步改变或扩展，因为认识到在研究进行期间可以发现更相关或新的生物标志物。这可以在一部分患者中进行。
健康相关生活质量(HRQOL)
本研究将使用两种患者报告结果(PRO)工具：
-EQ-5D-5L问卷将用于收集揭示疾病及其治疗对患者身体、情感和社会福祉的影响的信息。EQ-5D-5L是一个自我管理的，有效的工具，衡量一般健康相关的生活质量的5个方面：移动性，自理，日常活动，疼痛/不适和焦虑/抑郁。对于每个维度，有五个响应级别：此外，该措施包含一个视觉模拟量表(VAS)，以0-100为尺度衡量受访者的整体健康状况。该工具已广泛应用于各种临床条件和普通人群的临床试验中(Berg等人，2010年)。
-抗凝治疗量表(ACTS)是一个由15个项目组成的经过验证的PRO工具，它根据负担和收益两个方面来评估患者对抗凝治疗的满意度(Cano等人，2012)。
将在评估计划中注明的时间点以电子方式管理两种PROs。这可以在一部分患者中进行。
研究完成
在EoT访视时，必须从患者处收集所有研究药物，研究者必须根据表18中的指南开始计划将患者过渡到SoC抗凝治疗，除非患者有抗凝治疗禁忌症。
表18-研究结束过渡指南
通过引用并入
本文引用的每个专利文献和科学文章的全部公开内容通过引用结合于此。
等同方式
在不脱离本发明精神或基本特征的情况下，本发明可体现为其他特定形式。因此，前述实施例在所有方面都被认为是说明性的，而不是限制这里描述的公开内容。不同实施例的各种结构元件和各种公开的方法步骤可以在各种组合和排列中使用，并且所有这些变型都被认为是本公开的形式。因此，本发明的范围由所附权利要求而不是由前面的描述来指示，并且在权利要求的等同物的含义和范围内的所有改变都旨在包含在其中。
序列表
<110> 安托斯治疗股份有限公司
<120> 因子XI/XIA抗体的药物制剂和剂量方案
<130> ATD-08WO
<150> 62/951887
<151> 2019-12-20
<160> 42
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 625
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Ile Phe Leu Tyr Gln Val Val His Phe Ile Leu Phe Thr Ser Val
1 5 10 15
Ser Gly Glu Cys Val Thr Gln Leu Leu Lys Asp Thr Cys Phe Glu Gly
20 25 30
Gly Asp Ile Thr Thr Val Phe Thr Pro Ser Ala Lys Tyr Cys Gln Val
35 40 45
Val Cys Thr Tyr His Pro Arg Cys Leu Leu Phe Thr Phe Thr Ala Glu
50 55 60
Ser Pro Ser Glu Asp Pro Thr Arg Trp Phe Thr Cys Val Leu Lys Asp
65 70 75 80
Ser Val Thr Glu Thr Leu Pro Arg Val Asn Arg Thr Ala Ala Ile Ser
85 90 95
Gly Tyr Ser Phe Lys Gln Cys Ser His Gln Ile Ser Ala Cys Asn Lys
100 105 110
Asp Ile Tyr Val Asp Leu Asp Met Lys Gly Ile Asn Tyr Asn Ser Ser
115 120 125
Val Ala Lys Ser Ala Gln Glu Cys Gln Glu Arg Cys Thr Asp Asp Val
130 135 140
His Cys His Phe Phe Thr Tyr Ala Thr Arg Gln Phe Pro Ser Leu Glu
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His Arg Asn Ile Cys Leu Leu Lys His Thr Gln Thr Gly Thr Pro Thr
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Arg Ile Thr Lys Leu Asp Lys Val Val Ser Gly Phe Ser Leu Lys Ser
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Cys Ala Leu Ser Asn Leu Ala Cys Ile Arg Asp Ile Phe Pro Asn Thr
195 200 205
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Val Ser Gly Arg Ile Cys Thr His His Pro Gly Cys Leu Phe Phe Thr
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Phe Phe Ser Gln Glu Trp Pro Lys Glu Ser Gln Arg Asn Leu Cys Leu
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Cys Thr Asn Ala Val Arg Cys Gln Phe Phe Thr Tyr Thr Pro Ala Gln
325 330 335
Ala Ser Cys Asn Glu Gly Lys Gly Lys Cys Tyr Leu Lys Leu Ser Ser
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Asn Gly Ser Pro Thr Lys Ile Leu His Gly Arg Gly Gly Ile Ser Gly
355 360 365
Tyr Thr Leu Arg Leu Cys Lys Met Asp Asn Glu Cys Thr Thr Lys Ile
370 375 380
Lys Pro Arg Ile Val Gly Gly Thr Ala Ser Val Arg Gly Glu Trp Pro
385 390 395 400
Trp Gln Val Thr Leu His Thr Thr Ser Pro Thr Gln Arg His Leu Cys
405 410 415
Gly Gly Ser Ile Ile Gly Asn Gln Trp Ile Leu Thr Ala Ala His Cys
420 425 430
Phe Tyr Gly Val Glu Ser Pro Lys Ile Leu Arg Val Tyr Ser Gly Ile
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Leu Asn Gln Ser Glu Ile Lys Glu Asp Thr Ser Phe Phe Gly Val Gln
450 455 460
Glu Ile Ile Ile His Asp Gln Tyr Lys Met Ala Glu Ser Gly Tyr Asp
465 470 475 480
Ile Ala Leu Leu Lys Leu Glu Thr Thr Val Asn Tyr Thr Asp Ser Gln
485 490 495
Arg Pro Ile Cys Leu Pro Ser Lys Gly Asp Arg Asn Val Ile Tyr Thr
500 505 510
Asp Cys Trp Val Thr Gly Trp Gly Tyr Arg Lys Leu Arg Asp Lys Ile
515 520 525
Gln Asn Thr Leu Gln Lys Ala Lys Ile Pro Leu Val Thr Asn Glu Glu
530 535 540
Cys Gln Lys Arg Tyr Arg Gly His Lys Ile Thr His Lys Met Ile Cys
545 550 555 560
Ala Gly Tyr Arg Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Lys Gly Asp Ser Gly
565 570 575
Gly Pro Leu Ser Cys Lys His Asn Glu Val Trp His Leu Val Gly Ile
580 585 590
Thr Ser Trp Gly Glu Gly Cys Ala Gln Arg Glu Arg Pro Gly Val Tyr
595 600 605
Thr Asn Val Val Glu Tyr Val Asp Trp Ile Leu Glu Lys Thr Gln Ala
610 615 620
Val
625
<210> 2
<211> 3278
<212> DNA
<213> 智人
<400> 2
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gaaataaaat taaaaaaata aattcagtgt attgagaaag caagcaattc tctcaaggta 120
tatttctgac atactaagat tttaacgact ttcacaaata tgctgtactg agagagaatg 180
ttacataaca ttgagaacta gtacaagtaa atattaaagt gaagtgacca tttcctacac 240
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ttcattttat ttacttcagt ttctggtgaa tgtgtgactc agttgttgaa ggacacctgc 420
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gctcactgtt tctatggggt agagtcacct aagattttgc gtgtctacag tggcatttta 1680
aatcaatctg aaataaaaga ggacacatct ttctttgggg ttcaagaaat aataatccat 1740
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aatactctcc agaaagccaa gataccctta gtgaccaacg aagagtgcca gaagagatac 1980
agaggacata aaataaccca taagatgatc tgtgccggct acagggaagg agggaaggac 2040
gcttgcaagg gagattcggg aggccctctg tcctgcaaac acaatgaggt ctggcatctg 2100
gtaggcatca cgagctgggg cgaaggctgt gctcaaaggg agcggccagg tgtttacacc 2160
aacgtggtcg agtacgtgga ctggattctg gagaaaactc aagcagtgtg aatgggttcc 2220
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gctagaagaa aacaaactgt cacaagttgt tatgtccaaa actcccgttc tatgatcgtt 2400
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<220>
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Gly
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Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ala
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Ser Tyr Leu Tyr Ser Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 10
caggtgcaat tgctggaaag cggcggtggc ctggtgcagc cgggtggcag cctgcgtctg 60
agctgcgcgg cgtccggatt caccttttct actgctgcta tgtcttgggt gcgccaggcc 120
ccgggcaaag gtctcgagtg ggtttccggt atctctggtt ctggttcttc tacctactat 180
gcggatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata attcgaaaaa caccctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgcg tgcggaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtgaactg 300
tcttacctgt actctggtta ctacttcgat tactggggcc aaggcaccct ggtgactgtt 360
agctca 366
<210> 11
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 11
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ala
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Ser Tyr Leu Tyr Ser Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 12
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 12
caggtgcaat tgctggaaag cggcggtggc ctggtgcagc cgggtggcag cctgcgtctg 60
agctgcgcgg cgtccggatt caccttttct actgctgcta tgtcttgggt gcgccaggcc 120
ccgggcaaag gtctcgagtg ggtttccggt atctctggtt ctggttcttc tacctactat 180
gcggatagcg tgaaaggccg ctttaccatc agccgcgata attcgaaaaa caccctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgcg tgcggaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtgaactg 300
tcttacctgt actctggtta ctacttcgat tactggggcc aaggcaccct ggtgactgtt 360
agctcagcct ccaccaaggg tccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 600
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagcagcg 720
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 840
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
tacaacagca cgtaccgggt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1080
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 1260
aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1356
<210> 13
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 13
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser
1 5 10
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 14
Lys Asn Tyr Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 15
Ser Ala Trp Asp Gln Arg Gln Phe Asp Val Val
1 5 10
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 16
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp
1 5
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 17
Lys Asn Tyr
1
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 18
Trp Asp Gln Arg Gln Phe Asp Val
1 5
<210> 19
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 19
Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Lys Asn Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Gln Arg Gln
85 90 95
Phe Asp Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 20
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 20
gatatcgtgc tgacccagcc gccgagcgtg agcggtgcac cgggccagcg cgtgaccatt 60
agctgtagcg gcagcagcag caacattggt tctaacgacg tgtcttggta ccagcagctg 120
ccgggcacgg cgccgaaact gctgatctac aaaaactaca accgcccgag cggcgtgccg 180
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gcagaagacg aagcggatta ttactgctct gcttgggacc agcgtcagtt cgacgttgtg 300
tttggcggcg gcacgaagtt aaccgtccta 330
<210> 21
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 21
Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Lys Asn Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Gln Arg Gln
85 90 95
Phe Asp Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 22
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 22
gatatcgtgc tgacccagcc gccgagcgtg agcggtgcac cgggccagcg cgtgaccatt 60
agctgtagcg gcagcagcag caacattggt tctaacgacg tgtcttggta ccagcagctg 120
ccgggcacgg cgccgaaact gctgatctac aaaaactaca accgcccgag cggcgtgccg 180
gatcgcttta gcggatccaa aagcggcacc agcgccagcc tggcgattac cggcctgcaa 240
gcagaagacg aagcggatta ttactgctct gcttgggacc agcgtcagtt cgacgttgtg 300
tttggcggcg gcacgaagtt aaccgtccta ggtcagccca aggctgcccc ctcggtcact 360
ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420
agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag 480
gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540
tatctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600
catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctacag aatgttca 648
<210> 23
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 23
Thr Ala Ala Met Ser
1 5
<210> 24
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 24
Gly Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 25
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 25
Glu Leu Ser Tyr Leu Tyr Ser Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 26
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ala
1 5
<210> 27
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 27
Ser Gly Ser Gly Ser Ser
1 5
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 28
Glu Leu Ser Tyr Leu Tyr Ser Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 29
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 29
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ala
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Ser Tyr Leu Tyr Ser Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 30
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 30
caggtgcagc tgctggaatc aggcggcgga ctggtgcagc ctggcggtag cctgagactg 60
agctgcgctg ctagtggctt cacctttagc accgccgcta tgagctgggt tcgacaggcc 120
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tctagc 366
<210> 31
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 31
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Ala
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Ser Tyr Leu Tyr Ser Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Ala Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
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Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 32
<211> 1356
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 32
caggtgcagc tgctggaatc aggcggcgga ctggtgcagc ctggcggtag cctgagactg 60
agctgcgctg ctagtggctt cacctttagc accgccgcta tgagctgggt tcgacaggcc 120
ccagggaaag gcctcgagtg ggtctcaggg attagcggta gcggctctag cacctactac 180
gccgatagcg tgaagggccg gttcactatc tctagggata actctaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga atagcctgag agccgaggac accgccgtct actactgcgc tagagagctg 300
agctacctgt atagcggcta ctacttcgac tactggggtc aaggcaccct ggtcaccgtg 360
tctagcgcta gcactaaggg cccctccgtg ttccctctgg ccccttccag caagtctacc 420
tccggcggca cagctgctct gggctgcctg gtcaaggact acttccctga gcctgtgaca 480
gtgtcctgga actctggcgc cctgacctct ggcgtgcaca ccttccctgc cgtgctgcag 540
tcctccggcc tgtactccct gtcctccgtg gtcacagtgc cttcaagcag cctgggcacc 600
cagacctata tctgcaacgt gaaccacaag ccttccaaca ccaaggtgga caagcgggtg 660
gagcctaagt cctgcgacaa gacccacacc tgtcctccct gccctgctcc tgaactgctg 720
ggcggccctt ctgtgttcct gttccctcca aagcccaagg acaccctgat gatctcccgg 780
acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggcc gtgtcccacg aggatcctga agtgaagttc 840
aattggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagcctcg ggaggaacag 900
tacaactcca cctaccgggt ggtgtccgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 960
ggcaaagagt acaagtgcaa agtctccaac aaggccctgg ccgcccctat cgaaaagaca 1020
atctccaagg ccaagggcca gcctagggaa ccccaggtgt acaccctgcc acccagccgg 1080
gaggaaatga ccaagaacca ggtgtccctg acctgtctgg tcaagggctt ctacccttcc 1140
gatatcgccg tggagtggga gtctaacggc cagcctgaga acaactacaa gaccacccct 1200
cctgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctgtactcca aactgaccgt ggacaagtcc 1260
cggtggcagc agggcaacgt gttctcctgc tccgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1320
tacacccaga agtccctgtc cctgtctccc ggcaag 1356
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 33
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser
1 5 10
<210> 34
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 34
Lys Asn Tyr Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 35
Ser Ala Trp Asp Gln Arg Gln Phe Asp Val Val
1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 36
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp
1 5
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 37
Lys Asn Tyr
1
<210> 38
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 38
Trp Asp Gln Arg Gln Phe Asp Val
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 39
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
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Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Lys Asn Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Gln Arg Gln
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100 105 110
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 40
cagtcagtcc tgactcagcc ccctagcgct agtggcaccc ctggtcaaag agtgactatt 60
agctgtagcg gctctagctc taatatcggc tctaacgacg tcagctggta tcagcagctg 120
cccggcaccg cccctaagct gctgatctat aagaactata ataggcctag cggcgtgccc 180
gataggttta gcggatctaa atcagggact tctgctagtc tggctattag cggcctgcag 240
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ttcggcggag gcactaagct gaccgtgctg 330
<210> 41
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 41
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Lys Asn Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Gln Arg Gln
85 90 95
Phe Asp Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 42
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 42
cagtcagtcc tgactcagcc ccctagcgct agtggcaccc ctggtcaaag agtgactatt 60
agctgtagcg gctctagctc taatatcggc tctaacgacg tcagctggta tcagcagctg 120
cccggcaccg cccctaagct gctgatctat aagaactata ataggcctag cggcgtgccc 180
gataggttta gcggatctaa atcagggact tctgctagtc tggctattag cggcctgcag 240
tcagaggacg aggccgacta ctactgtagc gcctgggatc agcgtcagtt cgacgtggtg 300
ttcggcggag gcactaagct gaccgtgctg ggtcaaccta aggctgcccc cagcgtgacc 360
ctgttccccc ccagcagcga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
agcgacttct acccaggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgacagcag ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac ccccagcaag cagagcaaca acaagtacgc cgccagcagc 540
tacctgagcc tgacccccga gcagtggaag agccacaggt cctacagctg ccaggtgacc 600
cacgagggca gcaccgtgga aaagaccgtg gccccaaccg agtgcagc 648
Claims (93)
1.一种包含药物递送制剂的小瓶，所述药物递送制剂包含:
(a)治疗有效量的分离的抗因子XI(FXI)和/或抗活化的因子XI(FXIa)抗体，或其抗原结合片段；
(b)组氨酸缓冲液；
(c)糖或糖醇；和
(d)聚山梨醇酯，
pH为5.0至6.0，
其中所述小瓶包含过量填充，以用于完全取出治疗有效量的所述抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段。
2.根据权利要求1所述的小瓶，其中所述治疗有效量的分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段的浓度为120mg/mL至180mg/mL。
3.根据权利要求1或2所述的小瓶，其中所述治疗有效量的分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段的浓度为约150mg/ml。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的小瓶，其中所述组氨酸缓冲液包含组氨酸和组氨酸盐。
5.根据权利要求4所述的小瓶，其中所述组氨酸是L-组氨酸。
6.根据权利要求4或5所述的小瓶，其中所述组氨酸盐是组氨酸盐酸盐一水合物。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的小瓶，其中所述组氨酸缓冲液的浓度为10mM至30mM。
8.根据权利要求7所述的小瓶，其中所述组氨酸缓冲液的浓度为约20mM。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的小瓶，其中所述糖或糖醇是二糖。
10.根据权利要求9所述的小瓶，其中所述二糖是蔗糖。
11.根据权利要求10所述的小瓶，其中所述蔗糖的浓度为170mM至270mM。
12.根据权利要求11所述的小瓶，其中所述蔗糖的浓度为约220mM。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的小瓶，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20。
14.根据权利要求13所述的小瓶，其中所述聚山梨醇酯20的浓度为0.02％(v/v)至0.06％(v/v)。
15.根据权利要求14所述的小瓶，其中所述聚山梨醇酯20的浓度为约0.04％(v/v)。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的小瓶，其中所述pH为5.3至5.7。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的小瓶，其中所述pH为约5.5。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的小瓶，其中所述过量填充包含10％(v/v)至30％(v/v)的所述药物递送制剂，任选地，其中所述小瓶包含1.1mL至1.3毫升的所述药物递送制剂。
19.根据权利要求18所述的小瓶，其中所述过量填充包含约20％(v/v)的所述药物递送制剂，任选地，其中所述小瓶包含约1.2mL的所述药物递送制剂。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的小瓶，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:9或29中的互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3；以及轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:19或39中的互补决定区LCDR1、LCDR2、LCDR3。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的小瓶，其中所述抗体或其抗原结合片段包含:
i.SEQ ID NO:23的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:25的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:33的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:34的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:35的轻链可变区CDR3；
ii.SEQ ID NO:26的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:28的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:36的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:37的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:38的轻链可变区CDR3；
iii.SEQ ID NO:43的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:44的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:45的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:37的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR3；或者
iv.SEQ ID NO:46的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:4的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:5的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:33的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR2和SEQID NO:15的轻链可变区CDR3。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的小瓶，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NO:9、29的重链可变区(VH)和与其具有90％同一性的VH；和选自SEQ ID NO:19、39的轻链可变区(VL)和与其具有90％同一性的VL。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的小瓶，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NO:9和29的重链可变区(VH)；和选自SEQ ID NO:19和39的轻链可变区(VL)。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的小瓶，其中所述抗体包含含有选自SEQ ID NO:31、11的氨基酸序列的重链和与其具有90％同一性的重链；和含有选自SEQ ID NO:41、21的氨基酸序列的轻链和与其具有90％的同一性的轻链。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的小瓶，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的小瓶，其中所述抗体是人单克隆抗体。
27.根据权利要求26所述的小瓶，其中所述抗体是人IgG1同种型。
28.根据权利要求26或27所述的小瓶，其中所述抗体包含Fc结构域中的D265A和P329A取代，任选地，其中120mg至180mg是对受试者施用抗因子XI(FXI)和/或抗活化的因子XI(FXIa)抗体或其抗原结合片段的治疗有效量。
29.一种包含药物递送制剂的小瓶，所述药物递送制剂包含:
(a)治疗有效量的分离的抗因子XI(FXI)和/或抗活化的因子XI(FXIa)抗体，或其抗原结合片段，浓度为约150mg；
(b)浓度为约20mM的组氨酸缓冲液；
(c)浓度为约220mM的蔗糖；和
(d)浓度为约0.04％(v/v)的聚山梨醇酯-20，
pH为5.5
其中所述小瓶包含过量填充，以用于完全取出治疗有效量的所述抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段。
30.一种静脉内药物递送制剂，包含:
(a)治疗有效量的分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段；
(b)组氨酸缓冲液；
(c)糖或糖醇；
(d)聚山梨醇酯，和
(e)稀释剂
pH为5.0至6.0，
其中所述稀释剂是包含第二种糖和水的溶液。
31.根据权利要求30所述的静脉内药物递送制剂，其中
所述治疗有效量的分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或抗原结合片段的浓度为1.20mg/ml至1.80mg/ml。
32.根据权利要求30或31所述的静脉内药物递送制剂，其中所述治疗有效量的分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段的浓度为约1.50mg/ml。
33.根据权利要求30-32中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述组氨酸缓冲液包含组氨酸和组氨酸盐。
34.根据权利要求33所述的静脉内药物递送制剂，其中所述组氨酸是L-组氨酸。
35.根据权利要求33或34所述的静脉内药物递送制剂，其中所述组氨酸盐是组氨酸盐酸盐一水合物。
36.根据权利要求30-35中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述组氨酸缓冲液的浓度为0.10mM至0.30mM。
37.根据权利要求30-36中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述组氨酸缓冲液的浓度为约0.20mM。
38.根据权利要求30-37中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述糖或糖醇是二糖。
39.根据权利要求38所述的静脉内药物递送制剂，其中所述二糖是蔗糖。
40.根据权利要求39所述的静脉内药物递送制剂，其中所述蔗糖的浓度为1.70mM至2.70mM。
41.根据权利要求40所述的静脉内药物递送制剂，其中所述蔗糖的浓度为约2.20mM。
42.根据权利要求30-41中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20。
43.根据权利要求42所述的静脉内药物递送制剂，其中所述聚山梨醇酯20的浓度小于0.001％(v/v)。
44.根据权利要求43所述的静脉内药物递送制剂，其中所述聚山梨醇酯20的浓度为约0.0004％(v/v)。
45.根据权利要求30-44中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述pH为5.3至5.7。
46.根据权利要求30-45中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述pH为约5.5。
47.根据权利要求30-46中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述稀释剂中的第二种糖是单糖。
48.根据权利要求47所述的静脉内药物递送制剂，其中所述单糖是葡萄糖。
49.根据权利要求48所述的静脉内药物递送制剂，其中所述葡萄糖的浓度为2.5％(v/v)至7.5％(v/v)。
50.根据权利要求48或49所述的静脉内药物递送制剂，其中所述葡萄糖的浓度为约5％(v/v)。
51.根据权利要求30-50中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)，其包含SEQ ID NO:9或29中的互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3；以及轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO:19或39中的互补决定区LCDR1、LCDR2、LCDR3。
52.根据权利要求30-51中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
i.SEQ ID NO:23的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:24的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:25的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:33的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:34的轻链可变区CDR2；和SEQ ID NO:35的轻链可变区CDR3；
ii.SEQ ID NO:26的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:28的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:36的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:37的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:38的轻链可变区CDR3；
iii.SEQ ID NO:43的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:44的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:45的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:47的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:37的轻链可变区CDR2和SEQ ID NO:15的轻链可变区CDR3；或者
iv.SEQ ID NO:46的重链可变区CDR1；SEQ ID NO:4的重链可变区CDR2；SEQ ID NO:5的重链可变区CDR3；SEQ ID NO:33的轻链可变区CDR1；SEQ ID NO:14的轻链可变区CDR2和SEQID NO:15的轻链可变区CDR3。
53.根据权利要求30-52中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NO:9、29的重链可变区(VH)和与其具有90％同一性的VH；和选自SEQ ID NO:19、39轻链可变区(VL)和与其具有90％同一性的VL。
54.根据权利要求30-53中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述抗体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NO:9和29的重链可变区(VH)；和选自SEQ ID NO:19和39的轻链可变区(VL)。
55.根据权利要求30-54中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述抗体包含含有选自SEQ ID NO:31、11的氨基酸序列的重链和与其具有90％同一性的重链；以及含有选自SEQ ID NO:41、21的氨基酸序列的轻链和与其具有90％同一性的轻链。
56.根据权利要求30-55中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链。
57.根据权利要求30-56中任一项所述的静脉内药物递送制剂，其中所述抗体是人单克隆抗体。
58.根据权利要求57所述的静脉内药物递送制剂，其中所述抗体是人IgG1同种型。
59.根据权利要求57或58所述的静脉内药物递送制剂，其中所述抗体包含Fc结构域中的D265A和P329A取代，任选地，其中120mg至180mg是对受试者施用抗因子XI(FXI)和/或抗活化的因子XI(FXIa)抗体或其抗原结合片段的治疗有效量。
60.一种静脉内药物递送制剂，包含：
(a)治疗有效量的分离的抗FXI和/或抗FXIa抗体或其抗原结合片段，浓度为约1.5mg；
(b)浓度为约0.20mM的组氨酸缓冲液；
(c)浓度为约2.20mM的蔗糖；
(d)浓度为约0.0004％(v/v)的聚山梨醇酯-20，和
(e)稀释剂，
pH为5.5，
其中所述稀释剂是5％葡萄糖水溶液(D5W)。
61.一种治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-28中任一项的小瓶中的药物递送制剂或权利要求30-59中任一项的静脉内药物递送制剂。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述血栓栓塞性疾病选自心房颤动或心房扑动、短暂性脑缺血发作、缺血性中风、血栓栓塞性中风、出血性中风、静脉血栓栓塞(VTE)、小儿VTE、全身性栓塞、非中枢神经系统栓塞、心肌梗死、深静脉血栓形成、严重蛋白S缺乏、脑血管意外和癌症。
63.根据权利要求61或62所述的方法，其中所述小瓶中的药物递送制剂或所述静脉内药物递送制剂每月施用一次。
64.根据权利要求61-63中任一项所述的方法，其中以选自约30mg、约60mg、约90mg、约120mg、约150mg和约180mg的剂量施用所述小瓶中的药物递送制剂或所述静脉内药物递送制剂。
65.根据权利要求61-64中任一项所述的方法，其中所述小瓶中的药物递送制剂以约120mg的剂量给药。
66.根据权利要求61-64中任一项所述的方法，其中所述小瓶中的药物递送制剂以约150mg的剂量给药。
67.根据权利要求61-66中任一项所述的方法，其中所述小瓶中的药物递送制剂经皮下给药。
68.根据权利要求61-67中任一项所述的方法，其中所述血栓栓塞性疾病为心房颤动或心房扑动。
69.根据权利要求68所述的方法，其中所述心房颤动或心房扑动为阵发性心房颤动(PAF)。
70.根据权利要求61到69中任一项所述的方法，其中所述小瓶中的药物递送制剂以三个月的时间段每月给药一次。
71.根据权利要求61-70中任一项所述的方法，其中所述受试者处于中风的低风险。
72.根据权利要求71所述的方法，其中所述受试者的CHA2DS2VASc风险评分为0至1。
73.根据权利要求61-70中任一项所述的方法，其中所述受试者处于中度中风风险。
74.根据权利要求61-70中任一项所述的方法，其中所述受试者处于高度中风风险。
75.根据权利要求74所述的方法，其中男性受试者的CHA2DS2VASc风险评分≥2，女性受试者的CHA2DS2VASc风险评分≥3。
76.根据权利要求61-75中任一项所述的方法，所述方法进一步包括通过在第三剂药物递送制剂之后测量因子XI的抑制的谷值(trough)来评估小瓶中的药物递送制剂的功效。
77.根据权利要求61-76中任一项所述的方法，所述方法进一步包括通过评估选自游离因子XI、总因子XI、因子XI凝血活性、活化部分凝血活酶时间和D-二聚体的一种或多种生物标志物来评估所述小瓶中的药物递送制剂的功效。
78.根据权利要求61-77中任一项所述的方法，所述方法进一步包括通过测量出血事件或抗药物抗体的存在来评估所述小瓶中的药物递送制剂的不良事件。
79.根据权利要求78所述的方法，所述方法还包括向经历不良事件的患者应用一种或多种下列步骤，其中所述不良事件是出血事件：
(i)使用胶体、晶体、人血浆或血浆蛋白质如白蛋白进行补液；
(ii)输注包装红细胞或全血；或
(iii)施用新鲜冷冻血浆(FFP)、凝血酶原复合物浓缩物(PCC)、活化PCC(APCC)，例如因子VIII抑制剂，和/或重组的活化因子VII。
80.一种治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的并且正经历外科手术的受试者的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用权利要求30-59中任一项的静脉内药物递送制剂，其中在外科手术的同一天向所述受试者施用所述静脉内药物递送制剂。
81.根据权利要求80所述的方法，其中，所述外科手术选自：膝关节置换手术、髋关节置换手术、整形外科手术、起搏器安装、导管安装、胸外科手术和腹部外科手术。
82.根据权利要求80或81所述的方法，其中所述静脉内药物递送制剂每月给药一次。
83.根据权利要求80-82中任一项所述的方法，其中所述静脉内药物递送制剂以选自约30mg、约60mg、约90mg、约120mg、约150mg和约180mg的剂量给药。
84.根据权利要求80-83中任一项所述的方法，其中所述静脉内药物递送制剂以约30mg的剂量给药。
85.根据权利要求80-83中任一项所述的方法，其中所述静脉内药物递送制剂以约60mg的剂量给药。
86.根据权利要求80-83中任一项所述的方法，其中所述静脉内药物递送制剂以约150mg的剂量给药。
87.根据权利要求80-82中任一项所述的方法，其中所述静脉内药物递送制剂以约75mg的剂量给药。
88.根据权利要求80-87中任一项所述的方法，其中所述静脉内药物递送制剂在手术后约4-8小时给药。
89.一种治疗患有血栓栓塞性疾病或有发展血栓栓塞性疾病风险的受试者的方法，其中所述受试者正在接受非甾体抗炎药(NSAID)，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-28中任一项的小瓶中的药物递送制剂，或者权利要求30-59中任一项的静脉内药物递送制剂，其与质子泵抑制剂组合。
90.根据权利要求89所述的方法，其中所述小瓶中的药物递送制剂或所述静脉内药物递送制剂每月给药一次。
91.权利要求89或90的方法，其中所述小瓶中的药物递送制剂或所述静脉内药物递送制剂以选自约30mg、约60mg、约90mg、约120mg、约150mg和约180mg的剂量给药。
92.根据权利要求88或89所述的方法，其中所述小瓶中的所述药物递送制剂或所述静脉内药物递送制剂以约75mg的剂量给药。
93.根据权利要求89-91中任一项所述的方法，其中所述小瓶中的药物递送制剂经皮下给药。
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