CN114990218A - 一种预测肺癌脑转移的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种预测肺癌脑转移的试剂盒，涉及生物医药领域和临床医学领域。所述试剂盒包括检测生物分子标志物表达量的试剂，所述生物分子标志物为半醛脱氢酶ALDH6A1和/或巢蛋白。本发明提供的试剂盒可用于评估肺腺癌患者的脑转移风险，具有较好分辨力、准确性和临床应用价值，有助于患者分层管理，利于医生对脑转移高风险的患者制定个性化治疗方案，使得有脑转移风险的患者尽早得到适当的治疗，也有利于脑转移低风险患者规避过度的治疗方法，以减少生理痛苦和经济损失。

Description

一种预测肺癌脑转移的试剂盒
技术领域
本发明涉及生物医药领域和临床医学领域，具体涉及一种预测肺癌脑转移的试剂盒。
背景技术
肺癌是全球发病率及死亡率最高的恶性肿瘤。脑是肺癌最常见的转移部位之一，约20％-50％的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)在疾病不同时期出现脑转移。其中，10-20％的NSCLC在初诊时已经存在脑转移。值得关注的是：约30％局部晚期NSCLC在局部肿瘤控制良好的情况下出现脑转移。在肺癌的不同病理类型中，有文献报道表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)敏感突变NSCLC人群的脑转移发生率更高。脑转移严重影响肺癌患者的生活质量和生存时间。如不治疗，患者的中位总生存(overall survival，OS)仅为1-3个月。脑转移已成为肺癌患者死亡的主要原因之一。
目前，临床上对NSCLC脑转移的干预手段包括手术、放疗、全身化疗、靶向治疗等，均属于姑息治疗方法，效果并不理想。寻找NSCLC脑转移的关键分子标志物，预测脑转移发生的可能性，根据风险对患者进行分层，有针对性进行早期干预及治疗，对改善临床预后，具有重要的临床及社会意义。
脑预防照射(prophylactic cranial irradiation，PCI)已被证实可以降低小细胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)脑转移发生率、提高患者生存率，并成为SCLC综合治疗的一个重要组成部分。PCI在SCLC中运用的成功经验能否在NSCLC中得到复制值得深入研究。研究表明，III期NSCLC患者接受PCI能够降低脑转移率，但是没能得到生存获益。这可能与放疗毒性、患者未进行分层管理及NSCLC脑转移发生率存在着巨大的差异等因素有关。因此亟待构建有效的预测模型用于评估肺癌患者发生脑转移的风险，筛选高危患者，精确识别能获益于PCI的患者，可以尽早进行个体化的治疗。
目前，临床上采用一些临床和病理学指标预测肺癌脑转移的风险，如：年龄≤60岁、原发灶大、非鳞状细胞癌病理亚型、淋巴结阳性比例≥30％及纵膈淋巴结大于2cm等。但由于研究结果差异较大，其结论不能有效指导临床治疗方案的选择。鉴于临床病理特征在预测NSCLC脑转移方面的局限性，从分子生物学角度寻找肺癌脑转移的分子生物学标记具有重要价值。蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象，从整体水平上分析研究细胞、组织或生物体蛋白质组成及其变化规律的科学。该技术不仅有助于在蛋白质水平阐释肿瘤的发生、发展机制，还可加速新的肿瘤标志物及药物靶点的筛选。对来源相同、具有不同转移特性的一组细胞进行蛋白质组学研究，有利于鉴定其分子指纹，解析肺癌细胞脑转移相关的分子标志物。
发明内容
本发明是为了克服现有技术中存在的不足，提供一种预测肺癌脑转移的试剂盒，该试剂盒基于临床信息和蛋白质标志物相结合，可以用于预测肺腺癌脑转移的早期风险，具有较好的分辨力、准确性和临床应用价值，有助于医生对肺癌患者进行分层管理，使脑转移高风险的患者能够更早地得到适当的治疗。
为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是提供一种肺腺癌脑转移的临床预测模型，预测模型为基于蛋白标志物和临床信息的Logistics回归分析构建的Nomogram模型；模型包括患者年龄小于等于65岁、半醛脱氢酶ALDH6A1(ALDH6A1)和巢蛋白(Nestin)3个关键影响因素。
本发明的技术方案如下：
本发明提供了生物分子标志物在制备预测肺癌脑转移的试剂盒中的应用，所述生物分子标志物为半醛脱氢酶ALDH6A1和/或巢蛋白。
本发明提供了检测生物分子标志物表达量的试剂在制备预测肺癌脑转移试的剂盒中的应用，所述生物分子标志物为半醛脱氢酶ALDH6A1和/或巢蛋白。
将肺癌患者的肺癌组织样本进行免疫组化检测，免疫组化检测肺癌组织样本，将肺癌细胞蛋白染色，对染色强度评分时，将阴性染色定义为0分，淡黄色为弱染色定义为1分，褐黄色为中染色定义为2分，深黄色为强染色定义为3分；对阳性细胞占全部视野的比例评分时，无阳性细胞定义为0分，有阳性细胞但阳性细胞比例＜1/3定义为1分，1/3≤阳性细胞比例＜2/3定义为2分，阳性细胞比例≥2/3定义为3分；对染色强度的评分和对阳性细胞占全部视野比例的评分的乘积作为免疫组化评分，评分大于4分的为高表达，小于等于4分的为低表达；
患者年龄≤65岁是肺癌脑转移的危险因素之一；所述肺癌患者的年龄≤65岁，肺癌患者的肺癌组织内半醛脱氢酶ALDH6A1高表达和/或巢蛋白高表达的患者，发生肿瘤脑转移的概率高。
本发明提供了一种预测肺癌脑转移的试剂盒，包括检测生物分子标志物表达量的试剂，所述生物分子标志物为半醛脱氢酶ALDH6A1和/或巢蛋白。所述生物分子标志物还包括胞内胆固醇转运受体NPC2、肿瘤相关钙信号转导蛋白2和numb蛋白同源物中的至少一种。
优选的，所述试剂包括与所述生物分子标志物基因特异性结合的引物或探针；与所述生物分子标志物蛋白特异性结合的抗体、肽、适配体或化合物。
本发明提供了一种预测肺癌脑转移的系统，所述系统包括所述的试剂盒，所述系统还包括根据半醛脱氢酶ALDH6A1和/或巢蛋白的表达量计算肺癌脑转移风险值的计算装置。
所述计算肺癌脑转移风险值包括免疫组化评分，免疫组化检测肺癌组织样本，将肺癌细胞蛋白染色，对染色强度评分时，将阴性染色定义为0分，淡黄色为弱染色定义为1分，褐黄色为中染色定义为2分，深黄色为强染色定义为3分；对阳性细胞占全部视野的比例评分时，无阳性细胞定义为0分，有阳性细胞但阳性细胞比例＜1/3定义为1分，1/3≤阳性细胞比例＜2/3定义为2分，阳性细胞比例≥2/3定义为3分；对染色强度的评分和对阳性细胞占全部视野比例的评分的乘积作为免疫组化评分，评分大于4分的为高表达，小于等于4分的为低表达；
肺癌组织内半醛脱氢酶ALDH6A1高表达和/或巢蛋白高表达的患者，发生肿瘤脑转移的概率高。
患者年龄≤65岁是肺癌脑转移的危险因素之一；患者年龄≤65岁，且肺癌组织内半醛脱氢酶ALDH6A1高表达和/或巢蛋白高表达，联合用于预测肺腺癌脑转移具有较好准确性。
通过对初诊肺腺癌的患者，充分利用穿刺或手术肺腺癌组织的病理样本，进行免疫组化分析，结合临床信息进行多因素Logistics回归分析，获得预测肺腺癌脑转移的危险因素，构建脑转移预测Nomogram模型，并采用TMA独立验证集对预测模型准确性进行验证。
本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
本发明提供的试剂盒可用于评估肺腺癌患者的脑转移风险，具有较好分辨力、准确性和临床应用价值，有助于患者分层管理，利于医生对脑转移高风险的患者制定个性化治疗方案，使得有脑转移风险的患者尽早得到适当的治疗，也有利于脑转移低风险患者规避过度的治疗方法，以减少生理痛苦和经济损失。
附图说明
图1为差异蛋白在亲代肺癌细胞H1975与具有高潜能脑转移细胞株H1975-luc-BM4的核酸表达示意图。
图2为差异蛋白在亲代肺癌细胞H1975与具有高潜能脑转移细胞株H1975-luc-BM2、H1975-luc-BM4的蛋白表达示意图；其中，*p＜0.05，**p＜0.01。
图3为预测模型建立流程示意图。
图4为NPC2、ALDH6A1、TACSTD2、NUMB、Nestin在肺腺癌样本中的表达情况图。
图5为基于脑转移关键因素构建的Nomogram模型图。
图6为ROC曲线下面积图。
图7为TMA验证数据集ROC曲线下面积图。
具体实施方式
实施例1
H1975-luc与H1975luc-BM2和H1975luc-BM4细胞株的构建。
1)采用慢病毒转染法构建人肺腺癌H1975-luc单克隆细胞株；
2)H1975-luc细胞接种至裸鼠左心室构建脑转移动物模型；
3)活体成像确认发生脑转移后，无菌取裸鼠大脑，将肿瘤组织进行原代培养，反复贴壁法纯化后获得脑转移肺癌细胞H1975luc-BM1。
4)重复步骤2)-3)，经过4个周期筛选，获得高潜能脑转移肺癌细胞系H1975luc-BM4。
5)收集不同转移特性的H1975-luc、H1975luc-BM2和H1975luc-BM4细胞；
具体的构建步骤参见公开号为CN111187753A的专利申请，其中高潜能脑转移肺癌细胞系H1975luc-BM4，命名为：荧光素酶基因标记的人肺腺癌脑转移细胞系，株号H1975luc-BM4，于2018年4月23日保藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.15586。
实施例2
蛋白质组学分析筛选脑转移标志物。
1.样品全蛋白抽提：细胞样本中加入裂解液，超声裂解；
2.蛋白定量：用2D Quant试剂盒，测定蛋白浓度；
3.蛋白还原、酶解、除盐和标记：通过还原剂、胰蛋白酶反应、C18 SPE小柱除盐，收集酶解后肽段，通过TMT标签进行标记；
4.标记肽段的HPLC预分离：用试剂溶解步骤3的样品，用常规高效液相色谱进行碱性条件下的反向梯度分离；
5.液质联用分析：将预分离得到的组份用试剂复溶，吸取上清上样，得到分离梯度数据，选择数据库进行质谱分析得到表达蛋白；
6.差异蛋白分析：经过TMT标记后检出的蛋白数据，通过亲代细胞H1975-luc与不同转移潜能的H1975luc-BM2和H1975luc-BM4对比，对比值小于特定值，认为是蛋白表达下调，对比值大于特定值，认为是蛋白表达上调；
7.验证：对所筛选出来上调的差异蛋白进行基因水平和蛋白水平的验证。
实施例3
H1975-luc、H19751uc-BM2和H1975luc-BM4细胞经过蛋白质谱鉴定，分别进行2次技术重复，总共鉴定到7843个蛋白，其中6594个可定量。本项目有3组样本，分别为对照组H1975-luc(以Con表示)，实验组H1975luc-BM2(以BM2表示)，实验组H1975luc-BM4(以BM4表示)。比较组按照相对定量值大于1.3倍或小于0.769，且P小于0.05筛选得到差异表达蛋白；相对定量值＞1.3时为显著上调，当相对定量值＜0.769时为显著下调。表1显示，与对照组相比，BM4组检测到268个差异蛋白，其中189个蛋白上调，79个蛋白下调；BM2组检测到331个差异蛋白，其中209个蛋白上调，122个蛋白下调，提示特定蛋白质的上调可能是肺癌转移到大脑机制的重要部分。
表1不同转移特性细胞之间的差异蛋白
对比样品 上调 下调
BM4/BM2 30 32
BM2/Con 209 122
BM4/Con 189 79
对H1975-luc、H1975luc-BM2和H1975luc-BM4重复鉴定到的质谱差异蛋白，经过统计学分析，综合考虑差异蛋白在BM2组和BM4组逐渐上调且P＜0.05，筛选出显著上调的前20个蛋白(表2)，分别为：蛋白S100-A4(S100A4)，NPC2胞内胆固醇转运受体(NPC2)，半醛脱氢酶ALDH6A1(ALDH6A1)，半胱氨酸蛋白酶抑制物-B(CSTB)，肿瘤相关钙信号转导蛋白2(TACSTD2)，麦角固醇生物合成蛋白28(ERG28)，酮戊二酸脱氢酶复合体之二氢硫辛酸琥珀酰转移酶(DLST)，热休克蛋白相关70kDa蛋白2(HSPA2)，蛋白S100-A2(S100A2)，胞苷脱氨酶(CDA)，numb蛋白同源物(NUMB)，TBC1结构域家族蛋白2A(TBC1D2)，锌指蛋白185(ZNF185)，锌指FYVE结构域含蛋白1(ZFYVE1)，层粘连蛋白亚单位γ-2(LAMC2)，四加半LIM域蛋白1(FHL1)，尿苷磷酸化酶1(UPP1)，Rho GTP酶激活蛋白29(ARHGAP29)，巢蛋白(NES)和脂滴包被蛋白-4(PLIN4)。
表2肺癌脑转移相关上调的差异蛋白
Figure BDA0003674157780000061
Figure BDA0003674157780000071
实施例4
采用荧光定量qPCR方法验证筛选出的差异表达的分子标志物。
基于实施例3的筛选结果，文献调研后，选择与迁移侵袭相关的5个蛋白：胞内胆固醇转运受体NPC2(NPC2)，半醛脱氢酶ALDH6A1(ALDH6A1)，肿瘤相关钙信号转导蛋白2(TACSTD2)，numb蛋白同源物(NUMB)，巢蛋白(Nestin)进行基因水平的验证。
1.提取细胞RNA：利用TIANGEN公司的RNA提取试剂盒进行总RNA的提取，具体操作详见说明书；
2.合成cDNA：利用TaKaRa公司的PrimeScriptTM RT reagent试剂盒进行逆转录，实验操作按产品说明书进行；
3.QPCR反应：利用Bimake 2x SYBR Green qPCR master mix试剂盒进行扩增，实验操作按产品说明书进行。以SYBR Green作为荧光标志物，在ABI 7500型荧光定量PCR仪上进行PCR反应，通过溶解曲线分析，2-ΔΔCT法进行相对定量。
如图1所示，与H1975细胞相比，脑转移细胞H1975-BM4中的NPC2、ALDH6A1、TACSTD2、NUMB和Nestin的表达水平显著上调，与蛋白质谱结果一致(P＜0.05)。
实施例5
采用Western Blot方法验证筛选出的差异表达的分子标志物。
1.提取细胞总蛋白：细胞样本中加入裂解液，超声裂解；
2.蛋白定量：采用Solarbio公司的Bradford蛋白定量试剂盒进行蛋白定量，具体操作详见说明书；
3.WB检测：取20μL蛋白进行SDS-PAGE电泳，转膜后，采用脱脂牛奶进行封闭后，分别加入NPC2(Abcam公司，货号ab218192)、ALDH6A1(Abcam公司，货号ab228584)、TACSTD2(Abcam公司，货号ab214488)、NUMB(CST公司，货号2756T)和Nestin抗体(Abcam公司，货号ab105389)，之后孵育HRP标记的二抗(Proteintech公司)，ECL(增强型化学发光试剂，Cyanagen公司)显色。
结果如图2显示，NPC2、ALDH6A1、NUMB和Nestin蛋白表达水平在高转移性肺癌细胞BM2和BM4中逐渐上调，TACSTD2蛋白表达水平没有显著差异，提示NPC2、ALDH6A1、NUMB和Nestin蛋白与肺癌脑转移密切相关，有潜力成为预测脑转移的分子标志物。
实施例6
NPC2、ALDH6A1、TACSTD2、NUMB以及Nestin蛋白在肺腺癌组织样本中的表达及相关性分析。
预测模型建立流程示意图如图3所示。
一、研究对象：
本研究收集浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院2013年8月至2018年9月间收治并在本院病理学确诊的肺腺癌患者。
入组标准：
①经病理证实为肺腺癌(两名病理科医师会诊获得相同结果)；
②确诊的组织样本为肺原发灶；
③临床病理资料完整，随访资料完整，有完善的头颅MRI检查信息；
④石蜡包埋的组织样本充足，能够支撑后续免疫组化研究；
⑤病理确诊前未行抗肿瘤治疗；
⑥年龄＞18岁；
排除标准：
①以往有恶性肿瘤病史(但除外皮肤癌，或预计生存时间大于2年的原位乳腺癌、口腔癌和宫颈癌等)；
②确诊的病理组织非肺原发灶，如转移淋巴结、肝转移灶等；
③临床病理资料不完整、失访及无完善脑部MRI检查信息；
④缺乏足够的组织样本；
⑤病理确诊前已行抗肿瘤治疗；
⑥年龄≤18岁；
随访：
①常规随访项目包括：病史采集、体检、血液学检查、超声检查、胸部CT和脑部MRI检查；
②治疗结束后每3个月复查，连续2年，然后每6个月检查一次，持续3年，之后每年复查一次；末次随访时间为2019年6月；
③随访终点包括，脑转移在内的远处转移、肿瘤复发和死亡。
本发明研究得到按照浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院伦理委员会同意，并遵循批准的指导方针和条例进行。本发明研究入组患者81例。患者的临床病理特征如表3所示：其中男性46例(56.8％)，女性35例(43.2％)。确诊时患者年龄在38～88岁，中位年龄66岁。＞65岁组患者42例(51.9％)。中位随访时间19.2个月(2.0-62.1个月)。至2018年9月，患者的中位随访时间27.2个月(2.0个月-66.2个月)，初诊时有脑转移患者23例(28.4％)，在治疗过程中发现脑转移患者31例(38.3％)。在后续分析时将初诊时发现脑转移和治疗过程中发现脑转移患者统一归为具有脑转移患者。未发现脑转移患者共有27例(33.3％)，其中，14例患者已死亡，13例未死亡患者的中位随访时间31.6个月(15.8个月-62.1个月)。
表3患者一般临床病理特征
Figure BDA0003674157780000091
Figure BDA0003674157780000101
二、免疫组化试验方法：
①石蜡切片脱蜡：将切片一次放入二甲苯I反应15min→二甲苯II反应15min→二甲苯III反应15min→无水乙醇I反应5min→无水乙醇II反应5min→85％酒精(v/v)反应5min→75％酒精(v/v)反应5min→蒸馏水洗；
②抗原修复：组织切片置于修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火反应10min至沸，停火5min保温再进行中低火5min，停火2min，再转中低火5min；自然冷却后将玻片置于PBS中在脱色摇床上晃动洗涤5min，共3次；
③阻断内源性过氧化物酶：将切片放入3％双氧水溶液(v/v)，避光孵育25min，将玻片置于PBS(PH＝7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤5min，共3次；
④血清封闭：滴加3％BSA(牛血清白蛋白，m/v)至组化圈内覆盖组织，室温封闭30min；
⑤加一抗：甩掉封闭液，在切片上滴加配好的一抗，切片平置于湿盒内4℃孵育过夜；
⑥加生物素标记的二抗(Vector Laboratories公司)：玻片置于PBS中在脱色摇床上晃动洗涤每次5min，共3次；切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，室温孵育50min；
⑦DAB显色(二氨基联苯胺法)：玻片置于PBS中在脱色摇床上晃动洗涤5min，共3次；切片稍甩干后在圈内滴加DAB显色液，阳性为棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。
⑧复染细胞核：苏木素复染3min后水洗，苏木素分化液分化数秒继续冲洗，苏木素返蓝液返蓝后流水冲洗；
⑨脱水封片：将切片依次经75％酒精(v/v)反应5min→85％酒精(v/v)反应5min→无水乙醇I反应5min→无水乙醇II反应5min→二甲苯I反应5min脱水透明，将切片从二甲苯拿出来晾干，中性树胶封片；
⑩显微镜镜检，免疫组化结果判定：采用SINICROPE改良法判断阳性，即随机选取5个400倍视野区域观察染色细胞，评估阳性表达细胞个数所占全部细胞比值以及染色程度。请两位病理科医生进行免疫组化阅片。
三、评分标准
肿瘤细胞蛋白阳性染色为细胞浆上呈现棕黄色颗粒，由两人分别独立进行免疫组化评分。对染色结果进行评分，包括两个指标：染色强度和阳性染色占全部视野的比例。阴性染色定义为0分，淡黄色为弱染色1分，褐黄色为中染色2分，深黄色为强染色3分，如图4所示。对阳性细胞的比例进行评分时，无阳性细胞定义为0分，有阳性细胞但阳性细胞比例＜1/3定义为1分，1/3≤阳性细胞比例＜2/3定义为2分，阳性细胞比例≥2/3定义为3分。两个指标的乘积为最终的免疫组化评分(表达量)，Cut-off值取表达量(免疫组织化学评分)的中位数。本发明中Cut-off值为4，大于Cut-off值为高表达，小于等于Cut-off值为低表达。
四、蛋白表达和肺腺癌脑转移的相关分析：
本研究采用ROC曲线检测Nestin蛋白表达水平与脑转移的相关性，研究结果显示：Nestin蛋白表达水平预测脑转移的灵敏度为0.87，特异度为0.74，ROC曲线下面积为0.81(P＜0.001)；ROC曲线检测ALDH6A1表达水平预测脑转移的灵敏度为0.52，特异度为0.89，ROC曲线下面积为0.70(P＝0.003)；ROC曲线检测TACSTD2蛋白表达水平预测脑转移的灵敏度为0.69，特异度为0.63，ROC曲线下面积为0.66(P＝0.021)；ROC曲线检测NPC2蛋白表达水平与脑转移发生的相关性显示其灵敏度为0.65，特异度为0.26，ROC曲线下面积为0.45(P＝0.499)；ROC曲线检测NUBM蛋白表达水平与脑转移发生的相关性显示其灵敏度为0.72，特异度为0.37，ROC曲线下面积为0.55(P＝0.499，表4)。
表4五种蛋白表达水平对脑转移预测的准确性评价
Figure BDA0003674157780000121
实施例7
列线图(Nomogram)建立肺腺癌脑转移高危人群预测模型。
本发明将单变量分析中的显著预测因子(P＜0.1)纳入多因素Logistics回归分析，确认了肺腺癌脑转移的关键预测因素，如表5：Nestin高表达(OR＝0.011，95％可信区间0.001-0.113，P＜0.001)、ALDH6A1高表达(OR＝0.018，95％可信区间0.001-0.234，P＝0.002)以及年龄≤65岁(OR＝0.046，95％可信区间0.005-0.420，P＝0.006)。将这3个独立危险因素进行整合，建立研究人群的预测肺腺癌脑转移的Nomogram模型。该模型利用Nestin蛋白表达水平、ALDH6A1蛋白表达水平和年龄为肺腺癌脑转移的风险预测提供了一个定量、方便的工具，如图5所示。
图5的Nomogram列线图有6行，其中第2-4行代表所包含的自变量，三个自变量的点数被加在第5行的总点数中，并与第6行的脑转移风险概率相对应。变量Nestin的回归系数β＝4.545，高水平Nestin在列线图里对应的点数为100分，其他变量以它为标准进行转化。
表5多因素Logistics回归分析
Figure BDA0003674157780000122
Figure BDA0003674157780000131
ROC曲线分析对上述模型进行预测价值分析，结果如图6所示。由图6可见，该ROC曲线下面积(AUC)为0.934(95％CI，0.881-0.988)。年龄≤65岁、Nestin高表达和ALDH6A1高表达联合用于预测肺腺癌脑转移具有较高准确性。
实施例8
验证集进一步验证三个危险因素预测肺腺癌脑转移的准确度。
一、采用组织芯片TMA(上海芯超生物科技有限公司，阵列编号：HLugA180Su011)作为脑转移模型独立验证数据集，除去缺点和临床资料不全的病例，最终入组64例。患者的临床病理特征如表6所示：
表6 TMA患者一般临床病理特征
Figure BDA0003674157780000132
Figure BDA0003674157780000141
二、免疫组化实验方法同实施例6第二部分：TMA组织芯片进行免疫组化实验，检测预测因子Nestin蛋白和ALDH6A1蛋白在肺腺癌组织中的表达情况；
三、评分标准同实施例6第三部分；
四、用ROC曲线法对独立验证数据集进行脑转移预测价值分析，结果如图7所示。由图7可见，该ROC曲线下面积(AUC)为0.719(95％CI，0.595-0.843)。Nestin高表达、ALDH6A1高表达以及年龄≤65岁联合用于预测肺腺癌脑转移具有较好准确性。

Claims (9)

1.生物分子标志物在制备预测肺癌脑转移的试剂盒中的应用，所述生物分子标志物为半醛脱氢酶ALDH6A1和/或巢蛋白。
2.检测生物分子标志物表达量的试剂在制备预测肺癌脑转移试的剂盒中的应用，所述生物分子标志物为半醛脱氢酶ALDH6A1和/或巢蛋白。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，将肺癌患者的肺癌组织样本进行免疫组化检测：免疫组化检测肺癌组织样本，将肺癌细胞蛋白染色，对染色强度评分时，将阴性染色定义为0分，淡黄色为弱染色定义为1分，褐黄色为中染色定义为2分，深黄色为强染色定义为3分；对阳性细胞占全部视野的比例评分时，无阳性细胞定义为0分，有阳性细胞但阳性细胞比例＜1/3定义为1分，1/3≤阳性细胞比例＜2/3定义为2分，阳性细胞比例≥2/3定义为3分；对染色强度的评分和对阳性细胞占全部视野比例的评分的乘积作为免疫组化评分，评分大于4分的为高表达，小于等于4分的为低表达；
肺癌组织内半醛脱氢酶ALDH6A1高表达和/或巢蛋白高表达的患者，发生肿瘤脑转移的概率高。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，肺癌患者的年龄≤65岁。
5.一种预测肺癌脑转移的试剂盒，其特征在于，包括检测生物分子标志物表达量的试剂，所述生物分子标志物为半醛脱氢酶ALDH6A1和/或巢蛋白。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述生物分子标志物还包括胞内胆固醇转运受体NPC2、肿瘤相关钙信号转导蛋白2和numb蛋白同源物中的至少一种。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括与所述生物分子标志物基因特异性结合的引物或探针；与所述生物分子标志物蛋白特异性结合的抗体、肽、适配体或化合物。
8.一种预测肺癌脑转移的系统，其特征在于，所述系统包括权利要求5-7任一所述试剂盒，所述系统还包括根据半醛脱氢酶ALDH6A 1和/或巢蛋白的表达量计算肺癌脑转移风险值的计算装置。
9.如权利要求8所述的系统，其特征在于，所述计算肺癌脑转移风险值包括免疫组化评分，免疫组化检测肺癌组织样本，将肺癌细胞蛋白染色，对染色强度评分时，将阴性染色定义为0分，淡黄色为弱染色定义为1分，褐黄色为中染色定义为2分，深黄色为强染色定义为3分；对阳性细胞占全部视野的比例评分时，无阳性细胞定义为0分，有阳性细胞但阳性细胞比例＜1/3定义为1分，1/3≤阳性细胞比例＜2/3定义为2分，阳性细胞比例≥2/3定义为3分；对染色强度的评分和对阳性细胞占全部视野比例的评分的乘积作为免疫组化评分，评分大于4分的为高表达，小于等于4分的为低表达；
肺癌组织内半醛脱氢酶ALDH6A1高表达和/或巢蛋白高表达的患者，发生肿瘤脑转移的概率高。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN115472294A (zh) * 2022-11-14 2022-12-13 中国医学科学院肿瘤医院 预测小细胞转化肺腺癌患者转化速度的模型及其构建方法

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