CN114946752A - 一种抑郁症小鼠模型的构建方法 - Google Patents
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Abstract
一种抑郁症小鼠模型的构建方法。本发明旨在开发一种能够重点针对抑郁症的核心症状，能够很好的进行抗焦虑性抑郁症的药效评价的动物模型。该模型在诱发抑郁症经典症状，以及血压偏高、炎性因子释放紊乱等抑郁症伴随症状上均表现出较高的成功率和稳定性。本发明的抑郁症动物模型的构建方法中，通对动物腹腔注射神经毒素红藻氨酸和LPS+腹腔注射炎症因子IL‑2+饲喂高糖饲料+应激刺激+乙醇灌胃得到抑郁症动物模型，这种非单因素诱导的抑郁症动物模型与病因学上认为抑郁症是多因素诱导发生相符，能够更好地模拟人类抑郁症的特征。本发明非单因素诱导的抑郁症动物模型，将为抑郁症的多因素诱导发病机制提供支持，并为开发抑郁症治疗的新方案提供理论依据。
Description
技术领域
本发明属于动物模型构建领域，具体涉及一种抑郁症小鼠模型的构建方法。
背景技术
抑郁症是一种严重的精神疾病，以显著而持久的情绪低落为主要临床特征，给个人、家庭以及社会带来巨大压力和沉重的负担。近年来，国内外众多学者对抑郁症的基础或临床开展研究，使其成为医学研究的热点之一。因此，稳定、易于操作的抑郁症动物模型制备方法是这些研究的基础和关键。2019年，中华中医药学会中药实验药理专业委员会起草并公布了《抑郁症动物模型制备规范(草案)》。该草案基于对现有抑郁症动物模型大量实验研究，总结了 6类抑郁模型，其中有药物、手术和慢性不可预知应激刺激结合孤养等多种不同的方式。慢性不可预知应激刺激结合孤养模型是近年来广受关注的一种抑郁症研究模型，其疾病发生和表现形式更符合人类的发病原因，可模拟人类的抑郁症状及一系列抑郁后生物化学改变，已被广泛应用于抑郁症研究领域。但该方法存在耗时较长，劳动量大，结果不稳定，难重复的问题。特别是造模的强度和时间难以掌握，实验组动物如所受刺激过于强烈，动物会对应激产生耐受或者动物变得异常狂躁；如所受刺激过于温和，动物则不易产生抑郁样行为。
目前，抑郁症动物模型最常用的是应激模型，通过给予动物各种刺激，使动物产生应激反应，表现出抑郁的状态。此外，也有通过改变动物脑内的单胺神经递质导致抑郁的神经生化模型。在进行抗抑郁药理学研究时，现存类别有限的抑郁动物模型，无法满足所有抗抑郁中药的筛选，部分研究中使用的抑郁动物模型往往不一定正确，导致不能准确地反应药物的真正作用机制。
在临床治疗中发现，很多抑郁症患者都有过食高糖食物或过量饮酒，使摄入过剩的能量堆积于体内，导致脾胃运化失调，致血液供应不足，心、肝、肺等脏腑无所养，淤积于脏腑中的郁气无法疏泄，久淤成病，表现为精力减退、情绪低落、兴趣缺失、思维能力下降等。因此模拟中医临床抑郁症病因、病症，建立基于高糖饮食、乙醇灌胃、制动因素相关动物模型，不但可用于探究这些因素对抑郁症的科学内涵，还能对新药的筛选提供能反应疾病本质的动物模型。
发明内容
本发明旨在开发一种能够重点针对抑郁症的核心症状，能够很好的进行抗焦虑性抑郁症的药效评价的动物模型。该模型在诱发抑郁症经典症状，以及血压偏高、炎性因子释放紊乱等抑郁症伴随症状上均表现出较高的成功率和稳定性。
抑郁症的发生与下丘脑-垂体-肾上腺轴过度激活、炎症反应密切相关.机体长期处于应激状态，导致糖皮质激素水平升高，糖皮质激素受体抵抗，下丘脑-垂体-肾上腺轴过度激活，促肾上腺皮质激素、皮质酮等持续性升高，造成对海马等脑区的结构功能损伤；其次，过度应激还可导致肠黏膜屏障破坏，致使肠道内毒素(LPS)释放入血，刺激巨噬细胞释放TNF-α和IL-6等炎症因子，进入脑内引起炎症，并影响神经递质的释放；以上因素共同导致抑郁症的发生。基于此，本研究尝试制备腹腔注射神经毒素红藻氨酸和LPS+腹腔注射炎症因子IL-2+饲喂高糖饲料+应激刺激+乙醇灌胃的小鼠抑郁模型，以期能更好地反映下丘脑-垂体-肾上腺轴过度激活+炎症反应导致的抑郁状态.
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种抑郁症小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、腹腔注射和皮下注射：选择4周龄SPF级雌性小鼠，适应性饲养1周；建模共持续15天。适应性饲养结束后，在建模的第1、5、10天分别对小鼠腹腔注射红藻氨酸10-15mg/kg，在第2、7天分别对小鼠腹腔注射LPS 10μg/kg，在第3天对小鼠皮下注射IL-210μg/kg。
(2)、饲喂高糖饲料：在建模的第1-13天对小鼠饲喂高糖饲料，所述高糖饲料由基础饲料添加质量为基础饲料质量8％的葡萄糖、2％的胆酸钠、0.5％的谷氨酸、0.3％的乙酰胆碱。
(3)、应激刺激：在建模的15天期间，每天上午对小鼠冷热交替刺激2小时，每天下午对小鼠阴暗交替刺激2小时，所述冷热交替刺激为20℃和38℃每隔10分钟交替进行，即将小鼠置于20℃恒温箱10 分钟和将小鼠置于38℃恒温箱10分钟交替进行，持续2小时；所述阴暗交替刺激为黑暗和300～400lux 人工光照交替进行，即将小鼠置于黑暗条件下10分钟和将小鼠置于和300～400lux人工光照条件下10分钟交替进行，持续2小时。
(4)、乙醇灌胃：在建模的第14天对小鼠进行禁食，并在第15天灌胃乙醇20mg/kg；即可得到抑郁症小鼠模型。
所述小鼠为C57BL/6J小鼠。
15天建模结束后，通过小鼠体重变化、血压变化、糖水消耗、旷场实验、转棒实验、悬尾不动时间、游动不动时间的检测，结果表明，小鼠表现了典型的抑郁行为，符合抑郁症动物模型可靠性和有效性的判定治病，即疾病的发病原因、症状表现、病理生理，按照本发明的构建方法，能够成功获得抑郁症小鼠模型。
本发明的技术方案，具有如下优点：
1、本发明的抑郁症动物模型的构建方法中，通对动物腹腔注射神经毒素红藻氨酸和LPS+腹腔注射炎症因子IL-2+饲喂高糖饲料+应激刺激+乙醇灌胃得到抑郁症动物模型，这种非单因素诱导的抑郁症动物模型与病因学上认为抑郁症是多因素诱导发生相符，能够更好地模拟人类抑郁症的特征。本发明非单因素诱导的抑郁症动物模型，将为抑郁症的多因素诱导发病机制提供支持，并为开发抑郁症治疗的新方案提供理论依据。
2、本发明构建的抑郁症动物模型效果稳定，个体差异小，建模时间短；多因素之间相互协同，构建的疾病模型更为准确。该模型在诱发抑郁症经典症状，以及血压偏高、炎性因子释放紊乱等抑郁症伴随症状上均表现出较高的成功率和稳定性。
3、本发明的抑郁症动物模型，为非单因素诱导的抑郁症动物模型，将为抑郁症的多因素诱导发病机制提供支持，以及更好地模拟人类抑郁症的缓慢进展的优势，为开发一种有效治疗抑郁症的新药物制剂提供重要的理论依据。不但可用于探究多因素对抑郁症的科学内涵，还能对新药的筛选提供能反应疾病本质的动物模型。
4、本发明采用了腹腔注射神经毒素红藻氨酸+LPS、以及皮下注射IL-2相结合的诱导方式，以上三种试剂在各自发挥作用的同时，能够相互协同加强，能够极佳的诱导抑郁症的发生。发明人经过多次试验和验证，优化了以上三种试剂的注射时间和注射剂量，保证了更为准确的抑郁症小鼠模型。
5、本发明同时还采用了饲喂高糖饲料+乙醇灌胃的诱导方法，能够更好的模拟中医临床抑郁症病因、病症，同时与注射三种试剂和冷热刺激阴暗刺激相结合，能够极佳的诱发抑郁症经典症状和伴随症状。发明人经过无数次的创造性劳动和科学实验，筛选出了基础饲料添加8％的葡萄糖、2％的胆酸钠、0.5％的谷氨酸、0.3％的乙酰胆碱的高糖饲料配方，不仅非常适宜于小鼠，而且极利于抑郁症病因病症的临床模拟。建模的最后一天灌胃乙醇20mg/kg，在本研究中起到了画龙点睛的作用，保证了效果稳定的抑郁症小鼠模型。
具体实施方式
一种抑郁症小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、腹腔注射和皮下注射：选择4周龄SPF级雌性小鼠，适应性饲养1周；建模共持续15天。适应性饲养结束后，在建模的第1、5、10天分别对小鼠腹腔注射红藻氨酸10-15mg/kg，在第2、7天分别对小鼠腹腔注射LPS 10μg/kg，在第3天对小鼠皮下注射IL-210μg/kg。
(2)、饲喂高糖饲料：在建模的第1-13天对小鼠饲喂高糖饲料，所述高糖饲料由基础饲料添加质量为基础饲料质量8％的葡萄糖、2％的胆酸钠、0.5％的谷氨酸、0.3％的乙酰胆碱。
(3)、应激刺激：在建模的15天期间，每天上午对小鼠冷热交替刺激2小时，每天下午对小鼠阴暗交替刺激2小时，所述冷热交替刺激为20℃和38℃每隔10分钟交替进行，即将小鼠置于20℃恒温箱10 分钟和将小鼠置于38℃恒温箱10分钟交替进行，持续2小时；所述阴暗交替刺激为黑暗和300～400lux 人工光照交替进行，即将小鼠置于黑暗条件下10分钟和将小鼠置于和300～400lux人工光照条件下10分钟交替进行，持续2小时。
(4)、乙醇灌胃：在建模的第14天对小鼠进行禁食，并在第15天灌胃乙醇20mg/kg；即可得到抑郁症小鼠模型。
所述小鼠为C57BL/6J小鼠。
15天建模结束后，通过小鼠体重变化、血压变化、糖水消耗、旷场实验、转棒实验、悬尾不动时间、游动不动时间的检测，结果表明，小鼠表现了典型的抑郁行为，符合抑郁症动物模型可靠性和有效性的判定治病，即疾病的发病原因、症状表现、病理生理，按照本发明的构建方法，能够成功获得抑郁症小鼠模型。
对比实验：试验分为6组，第1组采用本发明的建模方法，第2组仅采用步骤(1)的注射法，第3 组仅采用骤(2)的高糖饲料饲喂法，第4组仅采用骤(3)的应激刺激法，第5组仅采用骤(4)的乙醇灌胃法，第6组为空白对照组。15天建模结束后，通过小鼠体重变化、血压变化、糖水消耗、旷场实验、转棒实验、悬尾不动时间、游动不动时间的检测，结果表明，第1组成功构建了典型的抑郁症小鼠模型，第2-5组的小鼠仅在一定程度上表现了抑郁行为，但还不足够符合抑郁症动物模型标准，第6组表现正常。
Claims (2)
1.一种抑郁症小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下歩骤：
(1)、腹腔注射和皮下注射：选择4周龄SPF级雌性小鼠，适应性饲养1周；建模共持续15天。适应性饲养结束后，在建模的第1、5、10天分别对小鼠腹腔注射红藻氨酸10-15mg/kg，在第2、7天分别对小鼠腹腔注射LPS 10μg/kg，在第3天对小鼠皮下注射IL-2 10μg/kg；
(2)、饲喂高糖饲料：在建模的第1-13天对小鼠饲喂高糖饲料，所述高糖饲料由基础饲料添加质量为基础饲料质量8％的葡萄糖、2％的胆酸钠、0.5％的谷氨酸、0.3％的乙酰胆碱；
(3)、应激刺激：在建模的15天期间，每天上午对小鼠冷热交替刺激2小时，每天下午对小鼠阴暗交替刺激2小时，所述冷热交替刺激为20℃和38℃每隔10分钟交替进行，即将小鼠置于20℃恒温箱10分钟和将小鼠置于38℃恒温箱10分钟交替进行，持续2小时；所述阴暗交替刺激为黑暗和300～400lux人工光照交替进行，即将小鼠置于黑暗条件下10分钟和将小鼠置于和300～400lux人工光照条件下10分钟交替进行，持续2小时；
(4)、乙醇灌胃：在建模的第14天对小鼠进行禁食，并在第15天灌胃乙醇20mg/kg；即可得到抑郁症小鼠模型。
2.根据权利要求1所述的抑郁症小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述小鼠为C57BL/6J小鼠。
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