CN114940704A - 一种高等电点蛋白、纳米药物递送系统及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医学材料技术领域，尤其涉及一种高等电点蛋白、纳米药物递送系统及其制备方法和应用。本发明的高等电点蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列经取代、缺失或添加氨基酸且蛋白活性不发生改变的氨基酸序列。本发明将所述高等电点蛋白与多肽类抗肿瘤抑制剂和阴离子表面活性剂制备得到纳米药物递送系统，实验表明，该纳米药物递送系统具有高生物相容性，可用于肿瘤的治疗，具有广泛的临床应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学材料技术领域，尤其涉及一种高等电点蛋白、纳米药物递送系统及其制备方法和应用。
背景技术
癌症已成为一种严重威胁人类健康和生命的常见病，据2019年国家癌症中心发布的全国癌症统计数据，2015年恶性肿瘤发病约为392.9万人，死亡233.8万人。也就是说平均每天有超过1万人被确诊为癌症，每分钟7.5人。与历史数据相比，恶性肿瘤的发病率呈上升态势。近10年来，恶性肿瘤发病率每年保持约3.9％的增幅，死亡率每年保持2.5％的增幅。尽管在过去的10年里，我国的恶性肿瘤患者的生存率呈现上升态势，但是与发达国家相比依然具有很大的差距。
传统的肿瘤治疗方法有放射性疗法、化学疗法和手术治疗等，但这些治疗方法都有其缺陷，治疗效果不佳，使得患者的生活质量明显下降，如：放射治疗在破坏肿瘤细胞的DNA的同时，也会影响正常细胞；手术治疗风险较高、创伤面积大，若不能按预期清除病灶会造成癌细胞的转移；化疗对病灶部位缺乏精确的选择性，副作用较大等。另外这些疗法的费用昂贵，不仅使患者以及我国政府承担着巨大的经济压力。除了恶性肿瘤本身的性质，传统抗肿瘤药物存在的缺陷是造成这些问题的主要原因。当前，抗肿瘤药物的临床前研发已取得了阶段性进展，但其临床应用仍旧受到限制，面临的困难主要有：药物缺乏肿瘤治疗特异性、透膜性差、难以应对肿瘤的异质性和耐药性，从而导致肿瘤治疗效果不佳。
近年来，多肽药物成为世界新药开发研究的热点，同样也是我国生物医药研发的重点方向之一。多肽药物相比传统药物具有以下优势：活性高，在低剂量和浓度下能够表现出显著的活性；分子量小，相比蛋白质而言易于人工合成，方便进行人工改造；合成效率高，技术的进步使得多肽的固相合成变得简单，易于自动化以及控制；副作用小，大部分多肽药物采用与人同源的序列，加之分子量小，无抗原性，因此不易引起免疫反应。尽管多肽药物具有上述优异的性能，但是其缺陷却无法忽视，即易被体内的酶降解失活；脂溶性较差，难以透过细胞膜。这些缺陷导致多肽药物的半衰期较短，使多肽药物的生物利用度降低。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种高等电点蛋白、纳米药物递送系统及其制备方法和应用。本发明提供的高等电点蛋白制备的纳米药物递送系统可以通过EPR效应在肿瘤部位富集，并通过内吞途径进入细胞内部，帮助多肽药物到达作用位点，延长多肽药物的半衰期，从而提高多肽类药物在体内的药效。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种高等电点蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列经取代、缺失或添加氨基酸且蛋白活性不发生改变的氨基酸序列。
本发明中，所述高等电点蛋白由原核表达系统制备获得。所述原核表达系统采用的骨架载体为pET25b，转化的宿主为大肠杆菌，具体的，所述高等电点蛋白的制备方法为：
将编码所述高等电点蛋白的核酸克隆至骨架载体pET25b，获得重组载体；
将所述重组载体转化大肠杆菌，经表达、筛选获得稳定表达菌株，发酵后收集菌体。
本发明还提供一种纳米药物递送系统，由本发明所述的高等电点蛋白，多肽类抗肿瘤抑制剂和阴离子表面活性剂组成。
本发明中，所述高等电点蛋白和阴离子表面活性剂的摩尔比优选为1:(216～720)，进一步优选为1：30-1：70，具体可为1:216或1:720；所述阴离子表面活性剂为含羧基的阴离子表面活性剂，具体为羧基聚乙二醇。
本发明中，所述的多肽抗肿瘤抑制剂是脂溶性多肽，包括p110EK，MAML1，PMI-2K和M3-2K中的至少一种；具体序列如下：
M3-2K：KLTFLEYWAQLMQK(SEQ ID NO.2:)；
PMI-2K:KTSFAEYWNLLSPK(SEQ ID NO.3)；
MAML1:ERLRRRIELCRRHHST(SEQ ID NO.4)；
p110EK:SEITKQEKDFLWSHRHYC(SEQ ID NO.5)。
本发明提供的药物递送系统以本发明所述的高等电点蛋白为核心，与阴离子表面活性剂PEG-COOH上的羧基进行静电力结合，通过物理吸附作用包裹多肽抗肿瘤抑制剂。所述纳米药物递送系统的粒径为100-200nm。
本发明还提供了所述纳米药物递送系统的制备方法，流程图如图1所示，具体包括如下步骤：
将所述高等电点蛋白、多肽抗肿瘤抑制剂和阴离子表面活性剂在水中进行混合，经自组装获得纳米蛋白复合物。
在本发明的具体实施例中，所述纳米蛋白复合物的制备方法具体包括：
(1)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的高等电点蛋白用超纯水配置成浓度为2mg/mL的蛋白溶液，同时配置浓度为102.9mg/mL的阴离子表面活性剂水溶液。
(2)取5mg的多肽抗肿瘤抑制剂(p110EK，MAML1，PMI-2K和M3-2K其中的一种)，加入至步骤(1)中所述的阴离子表面活性剂溶液中，最终形成含有多肽抗肿瘤抑制剂的复合溶液，抑制剂的浓度为5mg/mL。
(3)将步骤(1)中所述的蛋白复合物溶液和步骤(2)中的复合溶液按照体积比为1：1的比例进行混合，确保高等电点蛋白与阴离子表面活性剂的摩尔比为1：720，然后透析除去多余的阴离子表面活性剂以及未被包覆的多肽抗肿瘤抑制剂得到纳米蛋白复合物。
本发明中，所述阴离子表面活性剂为羧基聚乙二醇。步骤(1)-(3)中，透析取分子量大于5000的产物。
本发明中，所述高等电点蛋白和阴离子表面活性剂在水中混合，通过静电力作用形成蛋白-表面活性剂自组装形成纳米蛋白复合物，并在自组装的过程中，对多肽抗肿瘤抑制剂进行包裹，获得纳米药物递送系统。研究表明，本发明纳米药物递送系统具有高生物相容性，可用于肿瘤治疗。
本发明还提供了所述纳米药物递送系统在制备治疗和/或预防肿瘤的药物中的应用。
其中，所述肿瘤结肠癌、人胶质母细胞癌、肺癌中的至少一种。
本发明提供一种高等电点蛋白、纳米药物递送系统及其制备方法和应用。所述高等电点蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列经取代、缺失或添加氨基酸且蛋白活性不发生改变的氨基酸序列。本发明将所述高等电点蛋白与多肽类抗肿瘤抑制剂和阴离子表面活性剂制备得到纳米药物递送系统，实验表明，该纳米药物递送系统具有高生物相容性，可用于肿瘤的治疗，具有广泛的临床应用前景。
附图说明
图1为本发明的高等电点蛋白复合物、纳米药物递送系统的结构及合成示意图；
图2为本发明的高等电点蛋白纯化结果示意图；
图3为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送(p110EK)系统的TEM图；
图4为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送系统(p110EK)的粒径分布图；
图5为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送(MAML1)系统的TEM图；
图6为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送系统(MAML1)的粒径分布图；
图7为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送(PMI-2K)系统的TEM图；
图8为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送系统(PMI-2K)的粒径分布图；
图9为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送(M3-2K)系统的TEM图；
图10为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送系统(M3-2K)的粒径分布图；
图11为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送系统(含有多肽抗肿瘤抑制剂p110EK和MAML1)对人结肠癌肿瘤细胞(HCT116)的毒性；
图12为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送系统(含有多肽抗肿瘤抑制剂M3-2K和PMI-2K)对人脑胶质瘤细胞(U87MG)的毒性；
图13为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送系统(p110EK和MAML1)对小鼠皮下结肠癌的治疗作用；
图14为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送系统(M3-2K和PMI-2K)对小鼠皮下人脑胶质瘤的治疗作用；
图15为本发明的高等电点蛋白纳米药物递送系统对多肽类抗肿瘤抑制剂在血清中的降解时间的提升作用。
具体实施方式
本发明提供了一种高等电点蛋白、纳米药物递送系统及其制备方法和应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
(1)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的高等电点蛋白用超纯水配置成浓度为2mg/mL的蛋白溶液，同时配置浓度为102.9mg/mL的阴离子表面活性剂水溶液。
(2)取5mg的多肽抗肿瘤抑制剂(p110EK)，加入至步骤(1)中所述的阴离子表面活性剂溶液中，最终形成含有多肽抗肿瘤抑制剂的复合溶液，抑制剂的浓度为5mg/mL。
(3)将步骤(1)中所述的蛋白复合物溶液和步骤(2)中的复合溶液按照体积比为1：1的比例进行混合，确保高等电点蛋白与阴离子表面活性剂的摩尔比为1：720，然后透析除去多余的阴离子表面活性剂以及未被包覆的多肽抗肿瘤抑制剂得到纳米蛋白复合物。
步骤(1)-(4)中，透析取分子量大于5000的产物。
获得的纳米药物递送系统用于人结肠癌治疗。TEM图如图3所示，粒径分布情况见图4。
结果显示，本发明纳米药物递送系统具有均匀的纳米形态和良好的稳定性，在水中具有很好的分散性和均匀性。
实施例2
(1)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的高等电点蛋白用超纯水配置成浓度为2mg/mL的蛋白溶液，同时配置浓度为102.9mg/mL的阴离子表面活性剂水溶液。
(2)取5mg的多肽抗肿瘤抑制剂(MAML1)，加入至步骤(1)中所述的阴离子表面活性剂溶液中，最终形成含有多肽抗肿瘤抑制剂的复合溶液，抑制剂的浓度为5mg/mL。
(3)将步骤(1)中所述的蛋白溶液和步骤(2)中的符合溶液按照体积比为1：1的比例进行混合，确保高等电点蛋白与阴离子表面活性剂的摩尔比为1：720，然后透析除去多余的阴离子表面活性剂以及未被包覆的多肽抗肿瘤抑制剂得到纳米药物递送系统。
步骤(1)-(3)中，透析取分子量大于5000的产物。
获得的纳米药物递送系统用于人结肠癌治疗。TEM图如图5所示，粒径分布情况见图6。
结果显示，本发明纳米药物递送系统具有均匀的纳米形态和良好的稳定性，在水中具有很好的分散性和均匀性。
实施例3
(1)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的高等电点蛋白用超纯水配置成浓度为2mg/mL的蛋白溶液，同时配置浓度为102.9mg/mL的阴离子表面活性剂水溶液。
(2)取5mg的多肽抗肿瘤抑制剂(PMI-2K)，加入至步骤(1)中所述的阴离子表面活性剂溶液中，最终形成含有多肽抗肿瘤抑制剂的复合溶液，抑制剂的浓度为5mg/mL。
(3)将步骤(1)中所述的蛋白溶液和步骤(2)中的复合溶液按照体积比为1：1的比例进行混合，确保高等电点蛋白与阴离子表面活性剂的摩尔比为1：720，然后透析除去多余的阴离子表面活性剂以及未被包覆的多肽抗肿瘤抑制剂得到纳米药物递送系统。
步骤(1)～(3)中，透析取分子量大于5000的产物。
获得的纳米药物递送系统用于人脑胶质瘤的治疗。TEM图如图7所示，粒径分布情况见图8。
结果显示，本发明纳米药物递送系统具有均匀的纳米形态和良好的稳定性，在水中具有很好的分散性和均匀性。
实施例4
(1)将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的高等电点蛋白用超纯水配置成浓度为2mg/mL的蛋白溶液，同时配置浓度为102.9mg/mL的阴离子表面活性剂水溶液。
(2)取5mg的多肽抗肿瘤抑制剂(M3-2K)，加入至步骤(1)中所述的阴离子表面活性剂溶液中，最终形成含有多肽抗肿瘤抑制剂的复合溶液，抑制剂的浓度为5mg/mL。
(3)将步骤(1)中所述的蛋白溶液和步骤(2)中的复合溶液按照体积比为1：1的比例进行混合，确保高等电点蛋白与阴离子表面活性剂的摩尔比为1：720，然后透析除去多余的阴离子表面活性剂以及未被包覆的多肽抗肿瘤抑制剂得到纳米药物递送系统。
步骤(1)-(3)中，透析取分子量大于5000的产物。
获得的纳米药物递送系统用于人脑胶质瘤的治疗。TEM图如图9所示，粒径分布情况见图10。
结果显示，本发明纳米药物递送系统具有均匀的纳米形态和良好的稳定性，在水中具有很好的分散性和均匀性。
实施例5性能测试
1、蛋白纳米药物递送系统对人结肠癌的细胞毒性。
采用标准MTT法测定体外细胞毒性。待细胞长满后，取活化好的细胞培养基悬浮液，用PBS洗三次，加入1mL胰酶消化，后加入1mL培养基终止消化，将HCT116细胞接种在96孔板中，使细胞浓度至每孔约6000个，加入100μL DMEM+10％FBS培养基，放入含有5％CO2、37℃恒温培养箱中培养24h。待细胞约长至80％汇合后，将加入的培养基除去，向每个孔中添加100μL以培养基为溶剂的浓度为500,250,125,62.5,31,15,7.5,3.75,1.8μmol/L的实施例1和实施例2包含p110EK和MAML1多肽抗肿瘤抑制剂的蛋白纳米药物递送系统的蛋白复合物溶液，左右轻轻摇晃，置于含有5％CO2，37℃恒温培养箱中培养24小时。吸去上清液，然后向每个孔中添加100μL10％MTT溶液(PBS缓冲液中为5mg/mL)，在37℃下培养4h。然后弃去上清，每孔加入150μL DMSO来溶解细胞内的紫色甲臜晶体。置于摇床上平摇10min后，酶标仪检测490nm处的吸光度，计算细胞生长的活力。以空白浓度为0的孔为对照，按照下面的公式分别计算不同药物浓度作用于肺癌细胞时的细胞抑制率。
抑制率(％)＝(对照组吸光值－实验组吸光值)/对照组吸光值×100％
存活率(％)＝1－抑制率(％)，结果如图11所示，由图11可以看出，本发明未形成蛋白复合物的多肽抗肿瘤抑制剂的存活率均在80％以上，而加入多肽的细胞存活率非常低，说明了其在体内肿瘤治疗方面的潜力。
2、高等电点蛋白纳米药物递送系统体内的肿瘤治疗效果。
将高等电点蛋白纳米药物递送系统取1mg，溶于PBS缓冲液之中，得1mg/mL的澄清药物溶液在人结肠癌小鼠肿瘤模型中进行治疗效果检测：
步骤如下：
1)小鼠皮下人结肠癌肿瘤模型建立
取4-6周的Balb/c-nu裸鼠，左后腿皮下注射1×107个HCT116人结肠癌细胞，之后等待14天，进行下一步实验。
2)纳米药物递送系统注射剂制备
将实施例1～2高等电点蛋白纳米药物递送系统溶解在PBS中，配置成终浓度1mg/mL的澄清溶液。
3)纳米药物递送系统的体内治疗研究
将上述配置好的实施例1和实施例2的纳米药物递送系统注射剂尾静脉注射进小鼠皮下人结肠癌肿瘤模型的小鼠体内，治疗周期结束后，评估其治疗效果。
从图13中可以看出，其在注射后肿瘤大小得到明显抑制。综上，本发明的蛋白纳米药物递送系统材料在治疗肿瘤中具有很好的应用前景。
3、高等电点蛋白纳米药物递送系统对多肽类抗肿瘤抑制剂在血清中的降解时间的提升作用。
从图15中可以看到，相比于单独多肽抗肿瘤抑制剂(p110EK和MAML1)，纳米药物递送系统中的两种肿瘤抑制剂的降解时间明显增长。综上，本发明的蛋白纳米药物递送系统材料在治疗肿瘤中具有很好的应用前景。
实施例6性能测试
1、蛋白纳米药物递送系统对人脑胶质瘤的细胞毒性。
采用标准MTT法测定体外细胞毒性。待细胞长满后，取活化好的细胞培养基悬浮液，用PBS洗三次，加入1mL胰酶消化，后加入1mL含有10％FBS的培养基终止消化，将U87MG细胞接种在96孔板中，使细胞浓度至每孔约6000个，加入100mLDMEM+10％FBS培养基，放入含有5％CO2、37℃恒温培养箱中培养24h。待细胞约长至80％汇合后，将加入的培养基除去，向每个孔中添加100μL以培养基为溶剂的浓度为500,250,125,62.5,31,15,7.5,3.75,1.8μmol/L的实施例3和实施例4包载PMI-2K和M3-2K多肽抗肿瘤抑制剂纳米药物递送系统溶液，左右轻轻摇晃，置于含有5％CO2，37℃恒温培养箱中培养24小时。吸去上清液，然后向每个孔中添加100μL10％MTT溶液(PBS缓冲液中为5mg/mL)，在37℃下培养4h。然后弃去上清，每孔加入150μLDMSO来溶解细胞内的紫色甲臜晶体。置于摇床上平摇10min后，酶标仪检测490nm处的吸光度，计算细胞生长的活力。以药物浓度为0的孔为对照，按照下面的公式分别计算不同药物浓度作用于肺癌细胞时的细胞抑制率。
抑制率(％)＝(对照组吸光值－实验组吸光值)/对照组吸光值×100％
存活率(％)＝1－抑制率(％)，结果如图12所示，由图12可以看出，本发明未形成蛋白复合物的多肽抗肿瘤抑制剂的存活率均在80％以上，而加入多肽的细胞存活率非常低，说明了其在体内肿瘤治疗方面的潜力。
2、高等电点蛋白纳米药物递送系统体内的肿瘤治疗效果。
将高等电点蛋白纳米药物递送系统取1mg，溶于PBS缓冲液之中，得1mg/mL的澄清药物溶液在人脑胶质瘤小鼠模型中进行治疗效果检测：
步骤如下：
1)小鼠皮下人脑胶质瘤的模型建立
取4-6周的Balb/c-nu裸鼠，左后腿皮下注射1×107个U87MG人脑胶质瘤细胞，之后等待14天，进行下一步实验。
2)纳米药物递送系统注射剂制备
将实施例1～2高等电点蛋白纳米药物递送系统溶解在PBS中，配置成终浓度1mg/mL的澄清溶液。
3)纳米药物递送系统的体内治疗研究
将上述配置好的实施例3和实施例4的纳米药物递送系统注射剂尾静脉注射进小鼠皮下人脑胶质瘤模型的小鼠体内，治疗周期结束后，评估其治疗效果。
从图14中可以看出，其在注射后肿瘤大小得到明显抑制。综上，本发明的蛋白纳米药物递送系统材料在治疗肿瘤中具有很好的应用前景。
3、高等电点蛋白纳米药物递送系统对多肽类抗肿瘤抑制剂在血清中的降解时间的提升作用。
从图15中可以看到，相比于单独多肽抗肿瘤抑制剂(PMI-2K和M3-2K)，本发明纳米药物递送系统中的两种肿瘤抑制剂的降解时间明显延长。综上，本发明的蛋白纳米药物递送系统材料在治疗肿瘤中具有很好的应用前景。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 清华大学 上海大学
<120> 一种高等电点蛋白、纳米药物递送系统及其制备方法和应用
<130> MP21038887
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 419
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Gly Ala Gly Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly
1 5 10 15
Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys
20 25 30
Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly
35 40 45
Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys Gly Val
50 55 60
Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro
65 70 75 80
Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly
85 90 95
Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys
100 105 110
Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly
115 120 125
Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val
130 135 140
Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro
145 150 155 160
Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro
225 230 235 240
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245 250 255
Val Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys
260 265 270
Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly
275 280 285
Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val
290 295 300
Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro
305 310 315 320
Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly
325 330 335
Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys
340 345 350
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly
355 360 365
Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val
370 375 380
Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly Val Pro
385 390 395 400
Gly Lys Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Trp Pro His His His
405 410 415
His His His
<210> 2
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Lys Leu Thr Phe Leu Glu Tyr Trp Ala Gln Leu Met Gln Lys
1 5 10
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Lys Thr Ser Phe Ala Glu Tyr Trp Asn Leu Leu Ser Pro Lys
1 5 10
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Glu Arg Leu Arg Arg Arg Ile Glu Leu Cys Arg Arg His His Ser Thr
1 5 10 15
<210> 5
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Ser Glu Ile Thr Lys Gln Glu Lys Asp Phe Leu Trp Ser His Arg His
1 5 10 15
Tyr Cys
Claims (10)
1.一种高等电点蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；或为SEQ IDNO.1所示氨基酸序列经取代、缺失或添加氨基酸且蛋白活性不发生改变的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的高等电点蛋白，其特征在于，所述高等电点蛋白由原核表达系统制备获得。
3.一种纳米药物递送系统，其特征在于，由权利要求1所述的高等电点蛋白、多肽类抗肿瘤抑制剂和阴离子表面活性剂组成。
4.根据权利要求3所述的纳米药物递送系统，其特征在于，所述高等电点蛋白和阴离子表面活性剂的摩尔比为1:216-1:720。
5.根据权利要求3所述的纳米药物递送系统，其特征在于，所述高等电点蛋白和多肽类抗肿瘤抑制剂的摩尔比为1：30-1：70。
6.根据权利要求3所述的纳米药物递送系统，其特征在于，所述多肽类抗肿瘤抑制剂包括p110EK、MAML1、PMI-2K和M3-2K中的至少一种。
7.根据权利要求3所述的纳米药物递送系统，其特征在于，所述阴离子表面活性剂为羧基聚乙二醇。
8.权利要求3～7任一项所述的纳米药物递送系统，其特征在于，其粒径为100-200nm。
9.权利要求3～8任一项所述的纳米药物递送系统的制备方法，其特征在于，包括：
将所述多肽类肿瘤抑制剂、蛋白复合物和阴离子表面活性剂在水中进行混合，经自组装获得纳米蛋白复合物。
10.权利要求3～8任一项所述的纳米药物递送系统在制备治疗和/或预防肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤包括结肠癌、人胶质母细胞癌、肺癌中的至少一种。
Priority Applications (1)
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2022
- 2022-05-13 CN CN202210519515.7A patent/CN114940704B/zh active Active
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