CN114923965B - 一种一体式多指标传感器及其制作方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种一体式多指标传感器，包括基底层；电极层；绝缘层，带有至少两个试剂区；胶粘层，设于绝缘层上方，形成进样槽；亲水层，设于胶粘层上方，覆盖进样槽，与胶粘层、绝缘层配合形成毛细进样通道；至少两个试剂层，分别对应试剂区设置，其沿着进样通道延伸方向间隔布设，检测不同的指标；试剂层包括试剂主体和高聚物，试剂层之间设有阻挡层，当加入待测样品，该高聚物和阻挡层限制试剂主体随着待测样品扩散，以阻止或减缓相邻试剂层之间的物质传递。本发明还公开了一种一体式多指标传感器的制作方法。本发明将两个或多个电化学单指标检测试纸集合在一起，节省使用成本用，简化操作流程；相邻试剂层之间的干涉小，检测结果的准确性高。

Description

一种一体式多指标传感器及其制作方法
技术领域
本发明属于电化学试纸检测领域，尤其是涉及一种一体式多指标传感器及其制作方法。
背景技术
随着时代的发展，人们的生活水平越来越好，但是由于生活节奏的加快，人们的压力也越来越大，身体处于亚健康的人数也越来越多。而在这种亚健康状态下生活的人们很容易患上高血糖、高尿酸、高血脂、高血压、酮血症等疾病，这些疾病之间的联系是很密切的，是相互影响的。
随着检测技术的发展，用户只需要采集微量血液或少量尿液样本，吸入电化学试纸并连接分析仪，就可以快速检测人体血糖、酮体、尿糖、尿酸、胆固醇、甘油三酯、血红蛋白等化学标志物的浓度值。目前市面上的单指标试纸，每次只能检测一种指标，若用户有两个指标的检测需求，他们每次都需要分别检测两次，并且单指标试纸通常因厂家不同而需要使用不同的分析仪器，即使两个单指标试纸的厂家相同，其分析仪器一般也不相同；若用户需要检测多个指标就需要使用多个单指标试纸和多个分析仪器，还需要进行多次加样，不仅需要重复采血，还成倍增加采购仪器和使用的成本。
目前，市场上已有双参数或多参数分析仪，可以使用一台分析仪检测两个或更多的指标。如血糖、尿糖双参数分析仪，血糖、尿糖、尿酸、胆固醇多参数分析仪等。这些仪器，是将多个指标电流信号读取功能，集成到一台分析仪中。通过更换不同检测指标的试纸，完成不同分析物指标检测。为了避免重复采血，多数使用者加大针刺手指深度，或者用力挤压手指采血创口，以获得足够的血液样本，使皮下细胞液渗出成分增加，血样暴露在空气中的时间延长，血样中还原性物质与空气中的氧离子结合发生氧化，无法保证检测结果的一致性和准确性。
目前，市面上已有双指标或多指标试纸，但其结构较复杂，例如CN204330601U公开了一种能实现多指标检测的POCT检测卡装置，检测卡盒体上设置有至少两个加样孔，虽然实现多指标的检测，但是需要多次加样，且结构复杂；CN106996951A公开了一种多指标检测的试纸，虽然实现了一次进样可以检测两个指标的功能，但其有两个独立的进样通道和检测系统，导致多指标的检测会使得试纸变大，结构变得复杂。
电化学多指标检测试纸可以检测两种或多种的分析物，通常电化学多指标试纸检测两种或多种分析物时，为了减小用户加血量和加快取样速度，通常会将多指标电化学试纸的反应区连通，但这种设计会造成两种或多种分析物之间的物质传递和交换，改变真实的检测电流，影响电化学检测的准确性。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种可以同时检测多项指标，减弱了相邻试剂层之间有效成分的扩散和传递，保证电化学多指标检测试纸检测的准确性的一体式多指标传感器及其制作方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种一体式多指标传感器，包括：
基底层；
电极层，设于基底层上方；
绝缘层，设于电极层上方，带有至少两个试剂区；
胶粘层，设于绝缘层上方，形成有进样槽；
亲水层，设于胶粘层上方，覆盖所述进样槽，与胶粘层、绝缘层配合形成毛细进样通道；
至少两个试剂层，分别对应试剂区设置，其沿着毛细进样通道的延伸方向间隔布设，用于检测不同指标；
所述试剂层包括试剂主体和高聚物，当待测样品进入毛细进样通道内，该高聚物限制试剂主体随着待测样品扩散，以阻止或减缓相邻试剂层之间的物质传递。
进一步的，所述高聚物为水溶性高聚物，水溶胀性高聚物，水不溶性高聚物的组合。
进一步的，所述水溶性高聚物为聚乙二醇，或羟乙基纤维素，或羟丙基纤维素，或羧甲基纤维素，或聚乙烯吡咯烷酮；所述水溶胀性高聚物为海藻酸钠，或壳聚糖；所述水不溶性高聚物为乙基纤维素，或醋酸纤维素，或聚乙烯，或聚乳酸微粒。
进一步的，所述试剂层还包括缓冲体系，稳定剂，保护剂，催化剂，及分散剂；所述缓冲体系为磷酸缓冲体系，或为Tris-HCl缓冲体系，或为柠檬酸缓冲体系，或为碳酸缓冲体系，或为醋酸缓冲体系；所述稳定剂为Tx-100，或为山梨醇，或为氯化钠，或为环糊精，或为甘氨酸，或上述的组合；所述保护剂为甘油，或为牛血清白蛋白，或为海藻糖，或上述的组合；所述催化剂为黄素腺嘌呤二核苷酸，或为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；所述分散剂为烷基葡糖苷，或为脂肪酸甘油酯，或为蔗糖酯，或为脂肪酸山梨坦，或为聚山梨酯，或为聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物，或上述的组合。
进一步的，所述试剂主体包括电子介体和酶，所述电子介体为铁氰化钾，或二茂铁及其衍生物，或吩嗪类，或黄素类，或有机染料、醌及其衍生物，或四硫富瓦烯，或富勒烯衍生物。
进一步的，所述高聚物包括占试剂层总重量0.01-0.40％的水溶性高聚物，0.10-2.00％的水溶胀性高聚物，0.10-3.00％的的水不溶性高聚物。
进一步的，所述高聚物包括占试剂层总重量0.20％的水溶性高聚物，1.20％的水溶胀性高聚物，2.00％的的水不溶性高聚物比例具有最佳的限制扩散效果。
进一步的，相邻试剂区之间设有阻挡层，其高度大于试剂层的厚度，小于毛细进样通道的高度。
进一步的，所述阻挡层与试剂区的间距为0.25-20mm。
进一步的，所述阻挡层与试剂层相切设置。
进一步的，所述阻挡层为绝缘油墨，其通过丝网印刷工艺设置在绝缘层；或为单面胶型，由薄膜材料覆盖胶水制成，该薄膜材料为聚酯或聚乙烯或聚氨酯；或为高聚物型，由水溶性高聚物、水溶胀性高聚物和水不溶性高聚物组成，通过印刷或者点胶的方式装载于试纸上。
本发明还公开了一种一体式多指标传感器的制作方法，包括以下步骤：
将电极层和绝缘层设置在基底层；
配制带有高聚物的试剂层，并将其分别装载在试剂区，并烘干；
在绝缘层上依次设置胶粘层和亲水层，胶粘层上的进样槽暴露试剂层。
进一步的，在试剂层装载在试剂区之前或之后，包括在相邻试剂区之间设置阻挡层的步骤。
根据图5实际检测的结果，试剂层加入高聚物后，血糖的扩散电流可由2.05μA降低至0.6μA左右，此时扩散电流对电化学检测影响相对减小；在试剂层加入高聚物的基础上，在试剂层之间增加阻挡层，扩散电流可进一步降低至0.2μA，高聚物和阻挡层的使用使得扩散电流降低90％以上，此时扩散电流对电化学检测影响相对较小，适用于各种浓度分析物的检测。血酮的扩散电流结果也显示，加入高聚物和阻挡层后的扩散电流下降程度与血糖扩散电流结果接近。
本发明的有益效果是，通过将两个或多个电化学单指标检测试纸集合在一体式多指标传感器上，节省用户购买多款仪器的费用，简便用户操作多款仪器的流程；通过一个加样口进样，简化一体式多指标传感器的结构，节约生产制造中材料的使用，节约用户采样量和加样量，减少用户加样次数，提高用户使用感；仅通过一次加样即完成两个或多种指标的检测，减少多试剂层之间电化学反应的影响，提高检测的准确度；通过在试剂层配方中增加高聚物，再固定到试剂层，可以减弱对流扩散以及试剂层的物质向外传递；并在多指标传感器的结构上设计阻挡层，试剂层配方的优化与试纸结构的改进配合可将扩散电流减少90％以上，即减小相邻试剂层之间的干涉，显著提高多指标传感器检测结果的准确性和真实性。
附图说明
图1为本发明的传感器上物质传递和交换产生的三种形式。
图2为本发明一体式多指标传感器的分解结构示意图。
图3为本发明物质传递过程示意图。
图4为本发明中多指标测试系统的建立流程。
图5为本发明中高聚物和阻挡层对血酮和血糖扩散电流的影响示意图。
图6为本发明实施例一中单一高聚物实验结果示意图，此时高聚物只含有水溶胀性高聚物。
图7为本发明实施例一中单一高聚物实验结果示意图，此时高聚物只含有水不溶性高聚物。
图8为本发明实施例一中单一高聚物实验结果示意图，此时高聚物只含有水溶性高聚物
图9为本发明实施例一中两种高聚物实验结果示意图，此时包括水不溶性高聚物和水溶胀性高聚物。
图10为本发明实施例一中两种高聚物实验结果示意图，此时包括水溶性高聚物和水溶胀性高聚物。
图11为本发明实施例一中三种高聚物实验结果示意图，此时包括水不溶性高聚物、水溶性高聚物和水溶胀性高聚物。
图12为本发明实施例二中阻挡层装载量与扩散电流关系示意图。
图13为本发明中仅含有高聚物的血酮、血糖准确性验证结果示意图。
图14为本发明中含有高聚物和阻挡层的血酮、血糖准确性验证结果示意图。
图15为本发明中仅含有阻挡层的血酮、血糖准确性验证结果示意图。
图16为不含高聚物和阻挡层的血酮、血糖准确性验证结果示意图。
图17为本发明实施例三的血酮、血糖准确性验证结果示意图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好的理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
结合图1的内容，对传感器上物质传递和交换产生的过程描述如下：
溶解扩散：每个试剂层中物质向待检液体中溶解扩散，即物质的溶解引起的扩散，如图1a所示。
对流扩散：血液流动过程引起的物质对流扩散，试剂层物质向血液中溶解，毛细作用带动血液流动，物质从一个试剂区到达另一个试剂区，如图1b所示。
浓度差扩散：多个试剂层之间的物质扩散和交换，浓度差为主要驱动力，如图1c所示。
实施例一
一种一体式多指标传感器，包括基底层1，设置在基底层1上方的电极层，设置在电极层上方的绝缘层4，设置在绝缘层4上方的胶粘层6，设置在胶粘层6上方的亲水层7，及至少两个试剂层；其中电极层包括银电极2和碳电极3，银电极2可用以下的1种或几种混合油墨代替：金油墨、铂油墨、碳油墨、铜油墨，碳电极3可以用以下的1种或几种混合油墨代替：金油墨、铂油墨、银油墨，银电极和碳电极选用能导电，惰性的油墨即可。胶粘层6上设置有一端开口的进样槽，亲水层7覆盖进样槽，其与胶粘层6、绝缘层4配合形成毛细进样通道；绝缘层4带有至少两个试剂区，试剂层与试剂区对应设置，且试剂层沿着毛细进样通道的延伸方向间隔布设，用于检测不同的指标。
试剂层包括试剂主体和高聚物，当待测样品进入毛细进样通道内，该高聚物限制试剂主体随着待测样品扩散，从而阻止或减缓相邻试剂层之间的物质传递，避免相邻的试剂层之间产生不利于检测的相互干涉。
以图2为例进行说明，本实施例中，试剂区的数量为两个，包括第一试剂区403和第二试剂区404，相应的，试剂层的数量也为两个，在绝缘层4上设置绝缘层镂空401和阻挡层镂空402，该阻挡层镂空402位于第一试剂区403和第二试剂区404之间。胶粘层6为双面胶，亲水层7为亲水膜，其开设有气孔701。具体的，在基底层1上印刷有银电极2，在银电极2上印刷碳电极3，在银电极2和碳电极3上印刷绝缘层4，绝缘层4覆盖部分电极形成绝缘层镂空401、阻挡层镂空402、第一试剂区403和第二试剂区404，在对应于第一试剂区403、第二试剂区404分别涂覆试剂层501和试剂层502，试剂层501检测血糖，试剂层502检测血酮。
胶粘层6、亲水层7与基底层1上的绝缘层4构成毛细进样通道，当血液被吸入一体式多指标传感器，试剂层501和试剂层502在血液中充分溶解，试剂层中的试剂主体，也就是酶和电子介体，参与分析物的氧化还原反应产生电流，电流可反映出物质浓度的大小。
一体式多指标传感器的检测电流是试剂层中的试剂主体，如电子介体和酶等物质共同作用产生的，其检测电流有多个，产生电流的电子介体和酶也有多种。以图2中一体式多指标传感器为例，两个试剂层分别检测血糖和血酮，其试剂层组分和功能见表1。
表1各试剂层组分和功能
Figure BDA0003554466930000051
Figure BDA0003554466930000061
如图3所示，在加样过程中，待检液体分析物先到达位于加样口前端的试剂层501，试剂层501中的酶1和电子介体1等有效成分会部分溶解在待检液体分析物中，紧接着部分溶解在待检液体分析物中的酶1和电子介体1会随着待检液体分析物流动到试剂层502，试剂层502中的酶2和电子介体2等有效成分会部分溶解在待检液体分析物中，当一体式多指标传感器的毛细进样通道充满待检液体分析物后，试剂层501和试剂层502持续在待检液体分析物中溶解，在各自的试剂区内达到最大浓度，而毛细进样通道内远离试剂层501和试剂层502的浓度均较低，这样就产生了浓度差，浓度差会驱使物质向低浓度的地方扩散，并且第一试剂区403和第二试剂区404之间的浓度也有差距，因此试剂层501和试剂层502之间会发生物质的传递和交换。由于浓度差扩散导致试剂层501和试剂层502之间发生物质的传递和交换；一体式多指标传感器检测血酮和血糖的电流均会受到彼此的影响，这种影响是由于物质溶解扩散、浓度差扩散以及毛细进样通道内待检液体流动引起的对流扩散导致的物质传递和交换造成的，物质传递和交换具有不可控性，使得这种影响无法精确的被消除，因此需要从源头上抑制或消除物质的传递。
在试剂层中加入高聚物，高聚物之间可彼此连接形成网络，待检液体加入后，试剂层的主体不会瓦解，试剂主体中的酶和电子介体等物质被限制在高聚物网络中，因此可以起到限制物质扩散和传递的作用。由于高聚物的限制，酶和电子介体向血液中的溶解扩散减少，由毛细作用进样引起的对流传质携带的扩散物质也相应减少。
本试剂层的配方中根据高聚物水溶性将其分为三种，每种高聚物又列举几种具体的物质，同类高聚物之间具有近似的物理或化学性能，可根据实际情况进行选用，详见表2。但更换其它的高聚物组合后，则需要对这三种不同高聚物的配比进行微调，以达到最优的限制扩散效果。下面以高聚物组合1为实施例，包含聚乙二醇，壳聚糖和乙基纤维素，进行高聚物比例的优化。
表2试剂层中的高聚物种类
Figure BDA0003554466930000062
1.试剂层中高聚物比例的筛选：
1.1试剂层中高聚物比例筛选方法
本专利中筛选高聚物比例的方法为：如果此配比下本体电流最高、扩散电流最小，或者本体电流-扩散电流最大，那么认为此为最佳配比。对电流的定义如下：
本体电流：如果试剂层装载于第二试剂区404，那么在该区域检测的电流值为本体电流；对于第一试剂区403同理，如果试剂区装载于第一试剂区403，那么第一试剂区403区域电流为本体电流。
扩散电流：如果试剂层装载于第二试剂区404，那么在第二试剂区404以外的其他区域，例如第一试剂区403区域检测的电流值为扩散电流；对于第一试剂区403同理，如果试剂区装载于第一试剂区403，在第一试剂区403以外的其他区域，例如第二试剂区404区域检测的电流值为扩散电流。
检测方法：按照实施例一中的一体式多指标传感器的制作方法制作试纸，并对血液进行电流测试，以本体电流-扩散电流的差值作为评价标准，此电流差值越高代表相应的试剂层配方限制扩散效果越好，检测更准确。
1.2具体的筛选过程如下(以血糖为例)
1.2.1印刷试纸，详细步骤请看实施例1中的一体式多指标传感器试纸制作方法步骤。
1.2.2试剂层2的溶液配制，配方详情在高聚物的筛选实验中展示。详细配制步骤参考实施例1中的配制方法。
1.2.3第一试剂区403区域装载检测血糖的酶液。用点胶机将1μL酶液点在第一试剂区403区域，然后在45℃下烘干5min。
1.2.4在绝缘层4上依次设置胶粘层6和亲水层7，胶粘层6上的进样槽暴露试剂层，试纸制作完毕。
1.2.5获取静脉血，调整红细胞压积为42％，通过添加葡萄糖将血液的血糖水平调整为300mg/dL，充分混匀即可用于检测，注意要在15min内使用完毕，防止血糖被红细胞消耗造成浓度的降低。
1.2.6制作完成的试纸通过导线或者定制的工装连接电化学工作站或者血糖仪，用于收集检测的电流信号。以上步骤制作的试纸，检测血糖浓度为300mg/dL、Hct为42％的血液，第一试剂区403区域的血糖电流信号即为本体电流，检测第二试剂区404区域的电流信号即为扩散电流，是血糖区域物质扩散到第二试剂区404区产生的电流。
1.3高聚物的筛选结果如下：
1.3.1单一高聚物实验
水溶胀性高聚物作为限制物质扩散的主要物质之一，其优化过程采用测试扩散电流和本体电流的方法，实验结果如图6～8所示。实验发现试剂层中水溶胀性高聚物占试剂层总重量的比例为1.2％时，扩散电流从2μA下降至0.6μA，表明此比例已经将扩散电流降低约70％。这是因为此物质可将试剂层中各种有效成分固定在基底，试剂层主体在检测时间内不易崩解和脱落，从而起到限制物质的扩散的作用。但是此物质浓度过高会降低试剂层的润湿速度，没有足够的酶和电子介体参与反应则会导致本体电流的下降，所以此高聚物在限制扩散电流的同时也引起了本体电流的降低。当我们继续增加水溶胀性物质比例，扩散电流下降幅度微弱且本体电流下降增加，到达2％时，试剂层溶液对流体的流动阻力较高，已经影响了点液过程。因此水溶胀性高聚物占试剂层总重量的比例为0.1-2％，优选的，水溶胀性高聚物占试剂层总重量的比例为1.2％。
而水不溶性高聚物在水中无法溶解，分子之间相互作用力较弱，无法保护试剂层主体免于崩解，因此增加水不溶性物质，主体电流和扩散电流几乎没有变化。水溶性高聚物分子对试剂层主体的保护作用微弱，使得大部分试剂层仍会崩解产生扩散电流，试剂层配方中只含有水不溶性高聚物或水溶液高聚物时，不能降低扩散电流，且试剂层配方中只含有水溶涨性高聚物时，虽降低部分扩散电流，但同时降低了本体电流，影响了电化学检测的准确度和精密度。
单一高聚物配方如下表所示，通过调整水和高聚物含量达到不同的高聚物比例。
物质名称 水溶胀性高聚物 水不溶性高聚物 水溶性高聚物
水 80.725 80.725 80.725
10％壳聚糖(醋酸溶液) 12.000 0.000 0.000
乙基纤维素 0.000 12.000 0.000
聚乙二醇 0.000 0.000 12.000
铁氰化钾 2.050 2.050 2.050
FAD 0.010 0.010 0.010
蔗糖酯 0.010 0.010 0.010
葡萄糖脱氢酶 1.050 1.050 1.050
甘油 0.965 0.965 0.965
甘氨酸 1.250 1.250 1.250
磷酸二氢钠 0.720 0.720 0.720
缓冲物质B 1.220 1.220 1.220
1.3.2两种高聚物实验
由于水不溶性高聚物在本试剂层中不发生溶解，也不会参与电化学反应，其作用是增加试剂层的孔隙，从而增加被测物与试剂层的接触面积，加快被测物渗透试剂层的速度，提高本体电流的水平。
当其在试剂层总重量的占比超过3％会将间接降低酶和电子介体的浓度，即干燥后的试剂层的单位体积内酶和电子介体含量下降，这会降低试纸的灵敏度和检测范围，进而影响试纸的准确度和精密度。同时此类物质浓度过高，不利于试剂层与基底的固定，使得试纸发生形变后试剂层脱落几率增加。
水溶性高聚物对试剂层主体的保护作用较弱，使得试剂层仍会崩解产生扩散电流，因此水不溶性高聚物和水溶性高聚物的组合并不能降低扩散电流。
水不溶性物质优化过程如下。在1.3.1中水溶胀性物质优化的基础上优化水不溶性物质的占比，设置不同的水不溶性物质浓度梯度，查看本体电流和扩散电流的变化，依据是本体电流-扩散电流的最大值即为最优。
水溶性物质优化过程如下。在1.3.1中水溶胀性物质优化的基础上优化水溶性物质的占比，设置不同的水溶性物质浓度梯度，查看本体电流和扩散电流的变化，依据是本体电流-扩散电流的最大值即为最优。
图9展示出随着水不溶性高聚物含量增加，本体电流呈现先上升后下降的趋势。本体电流上升是因为高聚物加速被测溶液渗入试剂层，加速电化学反应，因此产生较高的电流。当水不溶性物质进一步增加，一方面会造成干燥后试剂层中的酶和电子介体含量降低，造成检测电流的下降；另外此物质过多会造成试剂层的崩解，造成本体电流的降低和扩散电流的上升，因此水不溶性高聚物占试剂层总重量的比例为0.1-3％，优选的，2.0％的占比具有最佳效果。
图10展示出随着水溶性高聚物含量增加，本体电流的上升不够明显，由于其水溶性也可以造成试剂层主体崩解，因此扩散电流也有上升。
两种高聚物配方如下表所示，通过调整水和高聚物含量达到不同的高聚物比例。
物质名称 水不溶性高聚物 水溶性高聚物
水 78.725 78.725
10％壳聚糖(醋酸溶液) 12.000 12.000
乙基纤维素 2.000 0.000
聚乙二醇 0.000 2.000
铁氰化钾 2.050 2.050
FAD 0.010 0.010
蔗糖酯 0.010 0.010
葡萄糖脱氢酶 1.050 1.050
甘油 0.965 0.965
甘氨酸 1.250 1.250
磷酸二氢钠 0.720 0.720
缓冲物质B 1.220 1.220
1.3.3三种高聚物实验
水溶性高聚物在水中具有较高的溶解度，在本试剂层中可用于加快被测物渗入试剂层的速度，有利于提高有限时间内的检测电流。在1.3.2的基础上进行水溶性高聚物的优化。
图11可以看出水溶性高聚物含量增加本体电流随之增加，但当其占试剂层总重比例超出0.2％后，继续增加含量本体电流没有继续上升，表明0.20％即可达到较好的加速润湿效果。如果比例进一步增加，扩散电流开始上升，因为过量的水溶性高聚物会导致试剂层主体的崩解。因此水溶性高聚物占试剂层总重量的比例为0.01-0.40％，优选的，0.20％具有最佳效果。
三种高聚物配方如下表所示，通过调整水和高聚物含量达到不同的高聚物比例，三种高聚物之间的质量百分比范围为：水溶性高聚物0.20％-66.67％，水溶胀性高聚物2.86％-94.79％，水不溶性高聚物4.00％-96.46％，并且三种高聚物之间的最优质量百分比为：水溶性高聚物5.88％，水溶胀性高聚物35.30％，水不溶性高聚物58.82％。
Figure BDA0003554466930000091
以上优化结果所示，只有三种高聚物同时存在时，本体电流-扩散电流的差值才能达到较大值，单一物质或者两种物质的限制扩散效果均较弱，这表明只有三种物质的共同作用才可有效地限制扩散，并最大限度提高本体电流，单一物质或两种物质无法实现此结果。综上所述，所述高聚物包括占试剂层总重量0.01-0.40％的水溶性高聚物，0.10-2.00％的水溶胀性高聚物，0.10-3.00％的的水不溶性高聚物。优选的，占试剂层总重量0.20％的水溶性高聚物，1.20％的水溶胀性高聚物，2.00％的的水不溶性高聚物比例具有最佳的限制扩散效果。
试剂层中还包括缓冲体系，稳定剂，保护剂，催化剂，及分散剂。所述缓冲体系为磷酸缓冲体系，或为Tris-HCl缓冲体系，或为柠檬酸缓冲体系，或为碳酸缓冲体系，或为醋酸缓冲体系，或为其它可以降低pH对检测影响的缓冲液。占试剂层总重量的百分比范围为0.30-3.00％，最优重量百分比为1.90％。具体的缓冲体系如下表所示。
缓冲体系 缓冲物质A 缓冲物质B
磷酸 磷酸二氢钠 磷酸氢二钠
Tris-HCl Tris 盐酸
柠檬酸 磷酸氢钠 柠檬酸
碳酸 碳酸钠 碳酸氢钠
醋酸 醋酸钠 冰醋酸
所述稳定剂为Tx-100，或为山梨醇，或为氯化钠，或为环糊精，或为甘氨酸，或上述的组合，其对试剂层前体溶液起到稳定储存的作用，占试剂层总重量的百分比范围为0.50-3.00％，最优重量百分比为1.25％。
所述保护剂为甘油，或为牛血清白蛋白，或为海藻糖，或上述的组合，其可以保护生物酶稳定存在于试剂层中，维持较长时间的稳定性，占试剂层总重量的百分比范围为0.50-5.00％，最优重量百分比为0.97％。
所述催化剂为黄素腺嘌呤二核苷酸FAD，或为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD，或为其它催化待检目标物与酶、电子介体的氧化还原反应的催化物，占试剂层总重量的百分比范围为0.001-0.10％，最优重量百分比为0.01％。
所述分散剂为烷基葡糖苷，或为脂肪酸甘油酯，或为蔗糖酯，或为脂肪酸山梨坦，或为聚山梨酯，或为聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物，或上述的组合，其提高试剂层整体的均匀程度，有利于试剂层中各类添加物的分散，占试剂层总重量的百分比范围为0.001-0.10％，最优重量百分比为0.01％。
上述试剂主体包括电子介体和酶，所述电子介体为铁氰化钾，或二茂铁及其衍生物，或吩嗪类，或黄素类，或有机染料、醌及其衍生物，或四硫富瓦烯(TTF)，或富勒烯衍生物，其用于电子传递，占试剂层总重量的百分比范围为0.50-6.00％，最优重量百分比为3.10％。
一种一体式多指标传感器的制作方法，包括以下步骤：
将电极层和绝缘层4设置在基底层1；
配制带有高聚物的试剂层，将其分别装载在试剂区，并烘干；
在绝缘层4上依次设置胶粘层6和亲水层7，胶粘层6上的进样槽暴露试剂层。
更具体的，以本实施例的具体组成为例进行说明。
1)用丝网印刷将银电极2、碳电极3和绝缘层4印刷在基底层1表面；
2)试剂层的配料表如下，其选用高聚物组合1：
试剂层501 质量(g) 试剂层502 质量(g)
水 78.525 水 78.525
10％壳聚糖(醋酸溶液) 12.000 10％壳聚糖(醋酸溶液) 12.000
乙基纤维素 2.000 乙基纤维素 2.000
聚乙二醇 0.200 聚乙二醇 0.200
铁氰化钾 2.050 二茂铁 2.050
FAD 0.010 NAD 0.010
蔗糖酯 0.010 蔗糖酯 0.010
葡萄糖脱氢酶 1.050 β-羟丁酸脱氢酶 1.050
甘油 0.965 甘油 0.965
甘氨酸 1.250 甘氨酸 1.250
磷酸二氢钠 0.720 磷酸二氢钠 0.720
磷酸氢二钠 1.220 磷酸氢二钠 1.220
以试剂层502为例，介绍试剂层溶液配制方法：
1)将0.720g磷酸二氢钠溶解于78.525g水中。
2)加入1.220g磷酸氢二钠于上述溶液中，搅拌至溶解，用pH计测量溶液pH，并调整为7.0±0.1，得到PB缓冲液。
2)将0.200g聚乙二醇加入上述PB缓冲液中，搅拌1.5小时至完全溶解。
4)在上述溶液中分别添加12.000g的10％壳聚糖醋酸溶液(脱乙酰度<50％)和2.000g的乙基纤维素，缓慢搅拌至分散均匀。
5)将0.965g甘油保护剂和1.250g甘氨酸稳定剂分别溶解于上述溶液中。
6)溶解2.050g的二茂铁电子介体2于上述溶液中，而后添加0.010g的NAD催化剂2。
7)添加1.050g的β-羟丁酸脱氢酶至上述溶液。
8)将0.010g蔗糖酯分散剂溶解于上述溶液中，充分混匀待用。
将试剂层501和试剂层502分别装载在第一试剂区403和第二试剂区404，试剂层烘干后粘贴胶粘层6和亲水层7，试纸制作完成。
实施例二
本实施例在实施例一的基础上，在阻挡层镂空402上设置物质传递阻挡层，即相邻试剂区之间设置阻挡层，阻挡层的高度大于试剂层的厚度，小于毛细进样通道的高度，阻挡层与试剂区的间距为0.25-20mm，优选为0.25mm，用于进一步阻挡试剂层501和试剂层502之间的物质扩散和传递。
当阻挡层不为高聚物时，阻挡层可以与试剂层相切设置，即阻挡层的表面刚好接触试剂层的外圈。
阻挡层材质可以是单面胶，绝缘油墨，高聚物，或者以上物质的组合：
Figure BDA0003554466930000111
Figure BDA0003554466930000121
2.阻挡层中高聚物比例的筛选
2.1阻挡层中高聚物比例筛选方法
试剂层中的高聚物优化结果显示，三种高聚物组合将本体电流从2.4μA提高至3.7μA，约提高了50％；同时限制了约70％的扩散电流，扩散电流从2.0μA降低至0.6μA。此时仍有30％的扩散电流存在，这是因为水溶性高聚物和水不溶性高聚物虽然可以提高试剂层的润湿速度，但他们也会造成部分试剂层主体的脱落和扩散。而阻挡层的作用是限制这些试剂层的扩散，将扩散电流进一步降低。优化阻挡层高聚物的比例时，我们基于试剂层中高聚物的最佳配方，观察扩散电流的变化。
2.1.1试纸制作参考实施例1中的制作方法。
2.1.2阻挡层的装载，可通过点胶/涂布的方式将阻挡层加在第二试剂区404区域并充分干燥。可选的，也可将阻挡层材料干燥成型后进行裁切，后装载于第二试剂区404区域(可以采用胶等方法固定)。
2.1.3试剂层配方：配制步骤参考实施例1中1.3.3。
Figure BDA0003554466930000122
Figure BDA0003554466930000131
2.1.4试纸点液于第一试剂区403区域，烘干，粘贴粘胶层和亲水层
2.1.5获取静脉血，调整红细胞压积为42％，通过添加葡萄糖将血液的血糖水平调整为300mg/dL，充分混匀10min以上即可用于检测。
2.1.6检测第二试剂区404区域的电流信号即为扩散电流。
2.1.7配方比例评价标准：阻挡层的高聚物比例没有严格限制，只要该比例下的高聚物易于加工，然后选取适当体积的高聚物胶体装载于阻挡层镂空402并干燥。选出扩散电流最小的高聚物装载体积即可。
2.2阻挡层高聚物的优化过程如下：
2.2.1阻挡层高聚物的种类和作用如下表所示。
Figure BDA0003554466930000132
本实验选取的高聚物配方比例为20％水溶性高聚物，35％水溶胀高聚物和45％的水不溶性高聚物，此比例高聚物配方1g加入49g水、乙醇或乙醚等有机溶剂中充分混匀，通过点液或者涂布的方式装载于阻挡层镂空402区域，并进行充分干燥。通过设置不同的装载量考察对扩散电流的限制效果。如图12所示，阻挡层中高聚物装载量在0.9-1.4mg时对扩散电流具有限制效果，优选的0.9mg的限制效果已达到较高水平，并且装载量更低。
当阻挡层装载过量，干燥后其厚度高于双面胶层的厚度，就会导致血液无法正常加满，此时第二试剂区404区域检测不到任何电流，包括扩散电流。
其他可选用的阻挡层高聚物如下，溶剂可以为乙醇，乙醚等有机溶剂：
Figure BDA0003554466930000133
Figure BDA0003554466930000141
一种一体式多指标传感器的制作方法，包括以下步骤：
1)用丝网印刷将银电极2、碳电极3和绝缘层4印刷在基底层1表面；
2)采用丝网印刷工艺将油墨阻挡层印刷在阻挡层镂空402区域；或者，阻挡层为高聚物型时，可采用20％聚乙二醇，35％海藻酸钠和45％的乙基纤维素，依次将三种物质分散在水、乙醇或乙醚等有机溶剂中，高聚物与溶剂的质量比为1：49。充分搅拌混匀，通过点液或者涂布的方式装在于阻挡层镂空402阻挡层区域，并进行充分干燥。阻挡层通过点胶/涂布的方式装载在阻挡层镂空402区域，并充分干燥；或者，单面胶阻挡层通过粘贴的方式置于阻挡层镂空402区域。
3)试剂层的配料表如下，与实施例1配料表相同：
试剂层501 质量(g) 试剂层502 质量(g)
水 78.525 水 78.525
10％壳聚糖(醋酸溶液) 12.000 10％壳聚糖(醋酸溶液) 12.000
乙基纤维素 2.000 乙基纤维素 2.000
聚乙二醇 0.200 聚乙二醇 0.200
铁氰化钾 2.050 二茂铁 2.050
FAD 0.010 NAD 0.010
蔗糖酯 0.010 蔗糖酯 0.010
葡萄糖脱氢酶 1.050 β-羟丁酸脱氢酶 1.050
甘油 0.965 甘油 0.965
甘氨酸 1.250 甘氨酸 1.250
磷酸二氢钠 0.720 磷酸二氢钠 0.720
磷酸氢二钠 1.220 磷酸氢二钠 1.220
以试剂层502为例，介绍试剂层溶液配制方法：
1)将0.720g磷酸二氢钠溶解于78.525g水中。
2)加入1.220g磷酸氢二钠于上述溶液中，搅拌至溶解，用pH计测量溶液pH，并调整为7.0±0.1，得到PB缓冲液。
3)将0.200g聚乙二醇加入上述PB缓冲液中，搅拌1.5小时至完全溶解。
4)在上述溶液中分别添加12.000g的10％壳聚糖醋酸溶液(脱乙酰度<50％)和2.000g的乙基纤维素，缓慢搅拌至分散均匀。
5)将0.965g甘油保护剂和1.250g甘氨酸稳定剂分别溶解于上述溶液中。
6)溶解2.050g的二茂铁电子介体2于上述溶液中，而后添加0.010g的NAD催化剂2。
7)添加1.050g的β-羟丁酸脱氢酶至上述溶液。
8)将0.010g蔗糖酯分散剂溶解于上述溶液中，充分混匀待用。
上述阻挡层的设置步骤可以在试剂层装载在试剂区之前，也可以是之后，不作限定。
将试剂层501和试剂层502分别装载在第一试剂区403和第二试剂区404；试剂层烘干后粘贴胶粘层6和亲水层7，试纸制作完成。
实施例三
本实施例与实施例二的不同之处在于，选用高聚物组合2：聚乙二醇、海藻酸钠和乙基纤维素，仍采用与实施例二相同的高聚物比例。
其他与实施例二相同，不再赘述。
对比实施例一
本实施例与实施例一、二的不同之处在于，试剂层不含高聚物，不设置阻挡层。其制作方法为：
1)用丝网印刷将银电极2、碳电极3和绝缘层4印刷在基底层1表面；
2)试剂层的配料表如下：
试剂层501 质量(g) 试剂层502 质量(g)
水 92.725 水 92.725
铁氰化钾 2.050 二茂铁 2.050
FAD 0.010 NAD 0.010
蔗糖酯 0.010 蔗糖酯 0.010
葡萄糖脱氢酶 1.050 β-羟丁酸脱氢酶 1.050
甘油 0.965 甘油 0.965
甘氨酸 1.250 甘氨酸 1.250
磷酸二氢钠 0.720 磷酸二氢钠 0.720
磷酸氢二钠 1.220 磷酸氢二钠 1.220
以试剂层502为例，介绍试剂层溶液配制方法：
3)将0.720g磷酸二氢钠溶解于92.725g去离子水中。
4)加入1.220g磷酸氢二钠于上述溶液中，搅拌至溶解，用pH计测量溶液pH，并调整为7.0±0.1，得到PB缓冲液。
5)将0.965g甘油保护剂和1.250g甘氨酸稳定剂分别溶解于步骤5)配制的溶液中。
6)溶解2.050g的二茂铁电子介体2于上述溶液中，而后添加0.010g的NAD催化剂2。
7)添加1.050g的β-羟丁酸脱氢酶至上述溶液。
8)将0.010g蔗糖酯分散剂溶解于上述溶液中充分混匀待用。
将试剂层501和试剂层502分别装载在第一试剂区403和第二试剂区404，试剂层烘干后粘贴胶粘层6和亲水层7，试纸制作完成。
对比实施例二
本实施例与实施例一、二的不同之处在于，试剂层不含高聚物，设置有阻挡层。其制作方法为：
1)用丝网印刷将银电极2、碳电极3和绝缘层4印刷在基底层1表面；
2)采用丝网印刷工艺将油墨阻挡层印刷在阻挡层镂空402区域；或者，单面胶阻挡层通过粘贴的方式置于阻挡层镂空402区域；阻挡层为高聚物型时，采用实施例2中的方法置于阻挡层镂空402区域。
3)试剂层的配料表如下：
试剂层501 质量(g) 试剂层502 质量(g)
水 92.725 水 92.725
铁氰化钾 2.050 二茂铁 2.050
FAD 0.010 NAD 0.010
蔗糖酯 0.010 蔗糖酯 0.010
葡萄糖脱氢酶 1.050 β-羟丁酸脱氢酶 1.050
甘油 0.965 甘油 0.965
甘氨酸 1.250 甘氨酸 1.250
磷酸二氢钠 0.720 磷酸二氢钠 0.720
磷酸氢二钠 1.220 磷酸氢二钠 1.220
以试剂层502为例，介绍试剂层溶液配制方法：
4)将0.720g磷酸二氢钠溶解于92.725g去离子水中。
5)加入1.220g磷酸氢二钠于上述溶液中，搅拌至溶解，用pH计测量溶液pH，并调整为7.0±0.1，得到PB缓冲液。
6)将0.965g甘油保护剂和1.250g甘氨酸稳定剂分别溶解于步骤5)配制的溶液中。
7)溶解2.050g的二茂铁电子介体2于上述溶液中，而后添加0.010g的NAD催化剂2。
8)添加1.050g的β-羟丁酸脱氢酶至上述溶液。
9)将0.010g蔗糖酯分散剂溶解于上述溶液中充分混匀待用。。
上述阻挡层的设置步骤可以在试剂层装载在试剂区之前，也可以是之后，不作限定。将试剂层501和试剂层502分别装载在第一试剂区403和第二试剂区404；试剂层烘干后粘贴胶粘层6和亲水层7，试纸制作完成。
应用结果
根据实施例一、二、对比实施例一和对比实施例二中的方法制备4种试纸。这4种试纸的第一试剂区403不装载任何酶液，第二试剂区装载血酮酶液，可用于检测血酮，然后用电化学工作站或者电化学检测仪器测量第一试剂区403的电流水平，待检分析物为含有3mmol/L血酮、红细胞压积42％的血液。如图5中血酮扩散电流所示，
1)如果不存在物质的扩散，则第一试剂区403的电流仅为血液的背景电流，不会有血液中酮体参与反应的电流。但是经过实测，不添加高聚物和阻挡层的第一试剂区403处扩散电流最高可达1.0μA(600mg/dL血糖的氧化电流也仅为10μA)，这会造成血糖结果偏高。
2)仅有阻挡层，扩散电流产生的时间延后，但是没有发生明显下降。
3)当在试剂层中添加高聚物后，扩散电流产生的时间延后，扩散电流发生下降。
4)当高聚物和阻挡层存在时，扩散电流得到了更好的抑制，不会对其他指标的检测造成影响。
以图4所示流程建立多指标测试系统。
由于实施例一和二、对比实施例一和二，四种试纸的试纸结构和试剂层各不相同，因此使用每种多指标检测试纸检测血糖和血酮时，检测到的电流值也不完全一致，因此在建立血糖或血酮的线性标准方程时，需要针对每一种试纸使用同样的电化学检测仪器或电化学工作站(流程图里为了与试纸对应，标注了A、B、C、D，实质为同类仪器)，最大程度上保证检测的准确性。
为了建立较为准确的线性标准方程，建立方程的血液样本分别采取血酮浓度在以下区间0.1-0.6mmol/L、0.7-1.5mmol/L、1.6-3.5mmol/L、3.6-4.5mmol/L、4.6-6.0mmol/L、6.1-8.0mmol/L中的各一值；血糖浓度在以下区间1.7-2.8mmol/L、2.9-6.1mmol/L、6.2-8.3mmol/L、8.4-13.9mmol/L、14.0-22.2mmol/L、22.3-33.3mmol/中的各一值；选取的血酮、血糖值如下表所示，选取表中6个浓度的血酮和血糖(浓度由生化仪标定)，分别加入4种试纸中，用电化学检测仪器检测电流，并通过浓度和电流的关系建立线性标准方程，将每种试纸建立的血酮浓度与电流线性标准方程和血糖浓度与电流线性标准方程输入到电化学检测仪器中。
Figure BDA0003554466930000171
在实际测试环境中，不同的用户具有不同的血糖和血酮值，当我们检验血酮准确性时，所有样品的血糖浓度调整为6.0mmol/L(6.0mmol/L为健康成人的一般浓度水平)。当检验血糖准确性时，所有样品的血酮浓度调整为3.0mmol/L(3.0mmol/L选用的是较高的浓度水平，因为健康成人的一般血酮浓度水平0.3mol/L较低，为力证高聚物与阻挡层的设计可以减少扩散电流，因此选用了较高的血酮浓度)，以此来模拟试纸的检测情况。
Figure BDA0003554466930000172
Figure BDA0003554466930000181
根据法规我们建立以下接受标准：
血糖准确性接受标准：
血糖浓度≤5.5mmol/L，测试结果与真值的偏差≤0.83mmol/L；
血糖浓度＞5.5mmol/L，测试结果与真值的偏差百分比≤15％；
血酮准确性接受标准：
血酮浓度≤1.5mmol/L，测试结果与真值的偏差≤0.3mmol/L；
血酮浓度＞1.5mmol/L，测试结果与真值的偏差百分比≤15％；
用克拉克误差网格分析方法直观的展示4种试纸的检测结果，每种试纸使用对应线性方程的电化学检测仪器，每个样本重复检测>10次。克拉克误差网格分析方法展示图如下，落在血酮和血糖上下限内表示检测值较为准确，不影响临床判断，落在Y＝X线上及附近，表明检测值与真实值之间具有完美一致性。
如图13-图16所示，当试剂层含有高聚物时，大部分检测值符合标准要求；当既含高聚物，又含阻挡层的试纸，可以做到所有检测值符合标准要求，并且落在Y＝X线上及附近的比例较大，其余试纸的检测结果大部分超出上限，并且检测值的分布远离Y＝X线，因此高聚物与阻挡层的试纸设计可以减少扩散电流的影响，使得检测结果更准确。
实施例三采用上述方法对试纸进行比较，如图17所示，结果显示部分结果超出准确度上下限。表明当前比例下，高聚物组合1相比2能带来更好的准确度，如果更换高聚物组合则需要进行配比优化实验。
上述具体实施方式用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的精神和权利要求的保护范围内，对本发明作出的任何修改和改变，都落入本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种一体式多指标传感器，其特征在于，包括：
基底层；
电极层，设于基底层上方；
绝缘层，设于电极层上方，带有至少两个试剂区；
胶粘层，设于绝缘层上方，形成有进样槽；
亲水层，设于胶粘层上方，覆盖所述进样槽，与胶粘层、绝缘层配合形成毛细进样通道；
至少两个试剂层，分别对应试剂区设置，其沿着毛细进样通道的延伸方向间隔布设，用于检测不同指标；
所述试剂层包括试剂主体和高聚物，所述高聚物为水溶性高聚物，水溶胀性高聚物，水不溶性高聚物的组合；所述水溶胀性高聚物将试剂层中有效成分固定在基底层；所述水不溶性高聚物用于增加试剂层的孔隙，以增加待测样品与试剂层的接触面积；当待测样品进入毛细进样通道内，该高聚物限制试剂主体随着待测样品扩散，以阻止或减缓相邻试剂层之间的物质传递；
所述水溶性高聚物为聚乙二醇，或羟乙基纤维素，或羟丙基纤维素，或羧甲基纤维素，或聚乙烯吡咯烷酮；所述水溶胀性高聚物为海藻酸钠，或壳聚糖；所述水不溶性高聚物为乙基纤维素，或醋酸纤维素，或聚乙烯，或聚乳酸微粒；
所述高聚物包括占试剂层总重量0.01-0.40%的水溶性高聚物，0.10-2.00%的水溶胀性高聚物， 0.10-3.00%的水不溶性高聚物。
2.根据权利要求1所述的一体式多指标传感器，其特征在于：所述试剂层还包括缓冲体系，稳定剂，保护剂，催化剂，及分散剂；所述缓冲体系为磷酸缓冲体系，或为Tris-HCl缓冲体系，或为柠檬酸缓冲体系，或为碳酸缓冲体系，或为醋酸缓冲体系；所述稳定剂为Tx-100，或为山梨醇，或为氯化钠，或为环糊精，或为甘氨酸，或上述的组合；所述保护剂为甘油，或为牛血清白蛋白，或为海藻糖，或上述的组合；所述催化剂为黄素腺嘌呤二核苷酸，或为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；所述分散剂为烷基葡糖苷，或为脂肪酸甘油酯，或为蔗糖酯，或为脂肪酸山梨坦，或为聚山梨酯，或为聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物，或上述的组合。
3.根据权利要求1所述的一体式多指标传感器，其特征在于：所述试剂主体包括电子介体和酶，所述电子介体为铁氰化钾，或二茂铁及其衍生物，或吩嗪类，或黄素类，或有机染料、醌及其衍生物，或四硫富瓦烯，或富勒烯衍生物。
4.根据权利要求1所述的一体式多指标传感器，其特征在于：所述高聚物包括占试剂层总重量0.20%的水溶性高聚物， 1.20%的水溶胀性高聚物， 2.00%的水不溶性高聚物比例具有最佳的限制扩散效果。
5.根据权利要求1所述的一体式多指标传感器，其特征在于：相邻试剂区之间设有阻挡层，其高度大于试剂层的厚度，小于毛细进样通道的高度。
6.根据权利要求5所述的一体式多指标传感器，其特征在于：所述阻挡层与试剂区的间距为0.25-20 mm。
7.根据权利要求5所述的一体式多指标传感器，其特征在于：所述阻挡层与试剂层相切设置。
8.根据权利要求5所述的一体式多指标传感器，其特征在于：所述阻挡层为绝缘油墨，其通过丝网印刷工艺设置在绝缘层；或为单面胶型，由薄膜材料覆盖胶水制成，该薄膜材料为聚酯或聚乙烯或聚氨酯；或为高聚物型，由水溶性高聚物、水溶胀性高聚物和水不溶性高聚物组成，通过印刷或者点胶的方式装载于试纸上。
9.一种如权利要求1-8中任一项所述的一体式多指标传感器的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
将电极层和绝缘层设置在基底层；
配制带有高聚物的试剂层，并将其分别装载在试剂区，并烘干；
在绝缘层上依次设置胶粘层和亲水层，胶粘层上的进样槽暴露试剂层。
10.根据权利要求9所述的一体式多指标传感器的制作方法，其特征在于：在试剂层装载在试剂区之前或之后，包括在相邻试剂区之间设置阻挡层的步骤。
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Denomination of invention: An integrated multi index sensor and its manufacturing method

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Pledgee: Zhejiang Hangzhou Yuhang Rural Commercial Bank Co.,Ltd. Science and Technology City Branch

Pledgor: Hangzhou Weice Biotechnology Co.,Ltd.

Registration number: Y2024980004386

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