CN114907164A - 一种具有防治烟草土传病害的生物有机肥、制备方法和应用 - Google Patents

一种具有防治烟草土传病害的生物有机肥、制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有防治烟草土传病害的生物有机肥、制备方法和应用，涉及生物有机肥领域，解决了现有技术中采用化学农药防控烟草黑胫病和青枯病，存在农药残留及环境污染的问题。该方法包括如下步骤：制备贝莱斯芽孢杆菌YWF‑17‑0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS‑20‑2072菌粉，制备木霉菌WSWFJ‑17孢子粉；制备油枯型有机肥；将贝莱斯芽孢杆菌YWF‑17‑0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS‑20‑2072菌粉以及木霉菌WSWFJ‑17孢子粉与油枯型有机肥复配，制得具有防治烟草土传病害的生物有机肥；复配后的生物有机肥中有效活菌数的量不低于2亿/克。本发明的生物有机肥，既能防治烟草土传病害黑胫病、青枯病，同时也能使土壤有益微生物群落种群数量增，还可大大减少化学农药的施用量，减少环境污染，提高作物安全性。

Description

一种具有防治烟草土传病害的生物有机肥、制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物有机肥技术领域，尤其涉及一种具有防治烟草土传病害的生物有机肥、制备方法和应用。
背景技术
烟草(学名：Nicotiana tabacum)属于茄科，一年生草本植物。烟草种植中，土传病害黑胫病和青枯病的发生比较严重，影响着烟草的整个生育期。
烟草黑胫病又叫烟草黑根、黑杆疯，是由烟草疫霉侵染所引起的发生在烟草上的重要土传真菌病害。烟草疫霉主要侵染烟草的根和茎基部，形成黑色凹陷的病斑，故称“黑胫病”。烟草黑胫病在烟草苗床期一般发生较少，主要为害大田期的烟株。烟草黑胫病症状因烟株生长阶段和气候条件的不同而有较大差异。烟草黑胫病的普遍发生，造成了烟草种植过程中的重大经济损失。因此，防治烟草黑胫病的发生与传播成为烟农心头病。烟草青枯病是由青枯雷尔氏杆菌引起的一种维管束细菌性土传病害，目前尚无防治烟草青枯病的特效药剂。
大量研究表明，烟草黑胫病、青枯病的防治首先需选择种植抗病品种，大力推广高起垄、高培土技术，烟田要求平整，防止积水；移栽时用55％敌克松可湿性粉剂350-400克/亩穴施；最后在发病期结合化学药剂进行防治。但随着化学农药的长期使用，农药残留及环境污染问题愈发严重，且长期使用化学农药会导致土壤中适宜烟株生长的微生物群落种群密度降低，影响土壤微生物群落的平衡，导致烟株的生长发育受到不同程度的影响。
生物防控及生态防控近几年得到广泛重视，生物防控主要是利用有益微生物与病原菌的拮抗或竞争作用降低病原对植株的侵染，而生态防控主要通过诱导土壤中的有益微生物的种群数量增加，从而通过竞争等作用实现对土传病害的防治。因此，急需研究开发新的防治烟草黑胫病、青枯病的生物防控技术。
发明内容
本发明的目的是提出一种具有防治烟草土传病害的生物有机肥、制备方法和应用，解决了现有技术中采用化学农药防控烟草黑胫病和青枯病，存在农药残留及环境污染的技术问题。本发明优选技术方案所能产生的诸多技术效果详见下文阐述。
为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明具有防治烟草土传病害的生物有机肥的制备方法，包括如下步骤：
制备贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS-20- 2072菌粉，制备木霉菌WSWFJ-17孢子粉；
通过发酵制备油枯型有机肥；
将制备的贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS- 20-2072菌粉以及木霉菌WSWFJ-17孢子粉与油枯型有机肥复配，制得具有防治烟草土传病害的生物有机肥；
其中，贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS-20- 2072菌粉中有效活菌数的量不小于1000亿/克，木霉菌WSWFJ-17孢子粉中有效活菌数的量不小于100亿/克，并且复配后的生物有机肥中有效活菌数的量不低于2亿/克。
本发明的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，其编号为YWF- 17-0003，保藏登记号为CGMCC No.23615，保藏日期2021年10月18日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其编号为YWS-20- 2072，保藏登记号为CGMCC No.20200，保藏日期2020年07月06日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明的木霉菌(Trichoderma spp.)，其编号为WSWFJ-17，保藏登记号为CGMCCNo.18270，保藏日期2019年07月22日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
根据一个优选实施方式，复配过程中，贝莱斯芽孢杆菌YWF-17- 0003菌粉、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉和木霉菌WSWFJ-17孢子粉的重量比为1∶1∶0.5。
根据一个优选实施方式，通过发酵制备油枯型有机肥包括如下步骤：将腐熟菌剂稀释后洒在油枯中，拌匀发酵15天-20天得到油枯型有机肥；其中发酵过程中各组分的重量比如下：油菜枯饼600份-800份，草炭120份-320份，石灰10份-30份，腐熟菌剂5份-10份。
根据一个优选实施方式，制备贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉包括如下步骤：
贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌种活化：将﹣80℃下保存的贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003、枯草芽孢杆菌 YWS-20-2072菌株分别在LB固体培养基上活化12h-16h，得活化的菌株；
贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072种子液制备：用无菌接种环刮取一环活化的菌株接种到50ml LB液体培养基中，分别在温度为35℃、转速为160rpm/min条件下培养24h，得种子液；
贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072发酵液制备：按照菌种、培养液体积比为1∶120的比例分别将贝莱斯芽孢杆菌 YWF-17-0003种子液和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072种子液接入到车间发酵料培养基中，在温度为36.5℃-37.5℃条件下，转速为120rpm/min条件下培养25h-30h，得发酵液，即为贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌悬液和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌悬液，并且贝莱斯芽孢杆菌YWF-17- 0003菌悬液和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌悬液中的有效活菌数均控制在20.0×108cfu/g以上；
将所得发酵液离心后添加吸附保护剂，再将添加吸附保护剂的发酵液转入喷粉设备得到贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌 YWS-20-2072菌粉，并且贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉中有效活菌数的量不小于1000亿/克。
根据一个优选实施方式，菌种活化过程中，LB液体培养基包括如下浓度的成分：细菌学蛋白胨10g/L、酵母提取粉5g/L、氯化钠10g/L；
种子液制备过程中，LB液体培养基包括如下浓度的成分：细菌学蛋白胨10g/L、酵母提取粉5g/L、氯化钠10g/L；
发酵液制备过程中，发酵料培养基包括如下质量百分数的成分：黄豆粉1.0％-1.6％、蔗糖0.1％-0.5％、蛋白胨0.2％-0.6％、玉米粉0.2％- 0.6％、碳酸钙0.3％-0.9％、鱼粉0.1％-0.3％、硫酸铵0.01％-0.08％、硫酸镁0.02％-0.05％、磷酸二氢钾0.01％-0.04％、磷酸氢二钾0.02％-0.05％、硫酸锰0.01％-0.04％、氢氧化钠0.01％-0.04％、氯化钠0.02％-0.03％、消泡剂0.5％-1.5％，余量为水，用盐酸及氢氧化钠调节pH至6.8-7.5。
根据一个优选实施方式，木霉菌WSWFJ-17孢子粉的制备过程包括如下步骤：
木霉菌WSWFJ-17种子液的制备：将保存的木霉菌WSWFJ-17活化于PDA固体培养基上，活化后接种至200mL PDA液体培养基中，置于温度28℃及转速180r/min的恒温摇床上培养72h，再将培养后的菌悬液按 1％接种量接种于1000mL PDA液体培养基中，置于温度28℃及转速 180r/min的恒温摇床上扩繁72h，制得木霉菌WSWFJ-17种子液；
木霉菌WSWFJ-17发酵液的制备：在容积为1000L的发酵罐中加入 600L专用发酵培养基，将木霉菌WSWFJ-17种子液加入到发酵罐中，在通气量35m3/h、温度28℃及转速160r/min条件下发酵48h-72h，制得木霉菌WSWFJ-17的发酵液；
固体发酵：将木霉菌WSWFJ-17的发酵液按重量比为1∶10的比例添加到固体培养基上，加水调节发酵物料含水量至60％-80％，在搅拌机中混合均匀，混合后将发酵物料平铺至发酵池中，混合物料平铺高度为 10-15cm，用黑色遮荫网覆盖发酵池顶部，在温度28℃-30℃及通气量 5m3/h条件下发酵60h，60h后打开黑色遮荫网在30℃-35℃及通气量5m3/h 条件下发酵36h，36h后将混合物料加入干燥桶中，在保持温度50-55℃下烘干，直至物料含水量降为10％-15％，烘干后粉碎，得到木霉菌 WSWFJ-17的孢子粉，并且孢子粉中的有效活菌量不小于100亿/克。
根据一个优选实施方式，木霉菌WSWFJ-17种子液制备过程中， PDA液体培养基包括如下浓度的成分：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L； PDA固体培养基包括如下浓度的成分：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂24g/L。
根据一个优选实施方式，木霉菌WSWFJ-17发酵液制备过程中，专用发酵培养基包括如下浓度的成分：酵母膏3g/L-5g/L、蛋白胨3g/L- 5g/L、玉米浆干粉8g/L-10g/L、玉米淀粉3g/L-5g/L、磷酸氢二钾0.2g/L- 0.5g/L、磷酸二氢钾0.1g/L-0.3g/L、葡萄糖10g/L-15g/L及糖蜜粉1g/L- 10g/L，调节PH至6.5-7.0；
固体发酵过程中，固体培养基包括如下重量份的组分：玉米粉50份 -100份、油枯300份-400份、草炭300份-400份、麦麸100份-200份、稻壳 100份-200份、黄豆粉50份-100份，加水调至含水量为60％-80％
本发明具有防治烟草土传病害的生物有机肥，是采用本发明中任一项技术方案的制备方法制得的。
本发明中任一项技术方案具有防治烟草土传病害的生物有机肥的应用，在烟草种植过程中，所述生物有机肥作为底肥施用，所述生物有机肥的施用量为50kg/亩-80kg/亩。
本发明提供的具有防治烟草土传病害的生物有机肥、制备方法和应用至少具有如下有益技术效果：
本发明具有防治烟草土传病害的生物有机肥，是通过贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉以及木霉菌 WSWFJ-17孢子粉与油枯型有机肥复配制得的，复配后的生物有机肥中有效活菌数的量不低于2亿/克，远高于生物有机肥标准0.2亿/克，一方面，本发明具有防治烟草土传病害的生物有机肥可以对烟草土传病害黑胫病、青枯病进行有效防控，能够在很大程度上减少化学农药的施用量，减少环境污染，提高作物安全性；另一方面，本发明具有防治烟草土传病害的生物有机肥具有油枯型有机肥，还可诱导土壤微生物种群数量增加。
本发明具有防治烟草土传病害的生物有机肥的应用，在烟草种植过程中，将生物有机肥作为底肥施用，可防治烟草土传病害黑胫病和青枯病，同时也可使土壤有益微生物群落种群数量增，还可大大减少化学农药的施用量，减少环境污染，提高作物安全性。
即本发明具有防治烟草土传病害的生物有机肥、制备方法和应用，解决了现有技术中采用化学农药防控烟草黑胫病和青枯病，存在农药残留及环境污染的技术问题。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
下面结合实施例1～3对本发明做进一步说明。
实施例1
本实施例对本发明中生防菌剂的筛选方法进行详细说明。
1、材料与方法
1.1、材料
生防菌剂：贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003、枯草芽孢杆菌YWS-20- 2072、木霉菌WSWFJ17。
病原菌：烟草黑胫病、青枯病病原菌。
培养基：PDA培养基(马铃薯200g、葡萄糖20g、水1L)、LB培养基(酵母提取粉5g、细菌学蛋白胨10g、氯化钠5g、水1L)。
1.2、方法
1.2.1分别将烟草黑胫病病原菌和青枯病病原菌活化后培养3-5天，待其长出菌落备用。
1.2.2将上述生防菌剂活化后培养得到菌悬液。
1.2.3将贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌悬液和木霉菌WSWFJ17分别吸取10-20μL点于长有烟草黑胫病的平板上，继续培养相同时间或待其空白对照长满整个平板后观察其抑菌(拮抗)效果；将枯草芽孢杆菌 YWS-20-2072和木霉菌WSWFJ17分别吸取10-20μL点于长有烟草青枯病的平板上，继续培养相同时间或待其空白对照长满整个平板后观察其抑菌(拮抗)效果。
1.2.4通过测量空白处理病原菌直径及处理病原菌直径，按下述公式计算其抑菌率。
Figure RE-GDA0003744125890000071
2、结果分析
不同种类的生防菌剂对黑胫病病原菌的抑制效果如表1所示。从表1 的结果可知：生防菌株贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003对烟草黑胫病有明显抑制作用，其抑菌率可达到75.72％，生防菌木霉菌WSWFJ17由于生长快速，能迅速长至平板内部空间，其病原菌生长速度较慢，因此得到其抑菌率为85.95％。
不同种类的生防菌剂对青枯病病原菌的抑制效果如表2所示。从表2 的结果可知：生防菌株枯草芽孢杆菌YWS-20-2072对烟草青枯病有明显抑制作用，其抑菌率可达到73.49％，生防菌木霉菌WSWFJ17由于生长快速，能迅速长至平板内部空间，其病原菌生长速度较慢，因此得到其抑菌率为85.92％。
表1生防菌剂对烟草黑胫病的拮抗试验结果表
Figure RE-GDA0003744125890000072
注：上述测量结果为两次重复计算所得抑菌率的平均值。
表2生防菌剂对烟草青枯病的拮抗试验结果表
Figure RE-GDA0003744125890000081
注：上述测量结果为两次重复计算所得抑菌率的平均值。
实施例2
本实施例对本发明中具有防治烟草土传病害的生物有机肥浸出液对烟草黑胫病拮抗试验及菌量检测试验进行详细说明。
1、试验目的
为验证生防菌剂贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003及木霉菌WSWFJ17 与油枯型有机肥互配后的浸出液对烟草黑胫病病原菌的拮抗效果，以及生物有机肥菌量检测是否符合标准要求。
2、材料与方法
2.1、材料
供试菌剂：贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉、木霉菌WSWFJ17 孢子粉。
供试有机肥：油枯型有机肥。
供试病原菌：烟草黑胫病病原菌
2.2、方法
生物有机肥菌量检测：将上述生防菌株菌粉及孢子粉与有机肥按生物有机肥标准互配后混匀制得具有防治烟草土传病害的生物有机肥，以进行供菌量检测及其浸出液对烟草黑胫病病原菌的拮抗试验。采用稀释涂布平板的方法进行平板菌落计数，取5g生物有机肥到45mL灭菌水中，并按10倍梯度进行稀释后涂板，取0.1mL涂板后于恒温培养箱中培养24-48h，并计数其平板上菌落数，计算其菌含量，计算公式如下：
菌含量(cfu/g)＝平均菌落数×稀释倍数×10
有机肥浸出液对烟草黑胫病拮抗试验：取1g生物有机肥加入到99mL水中浸泡1-2h后过滤得到生物有机肥浸出液，再将其浸出液点于放置有烟草黑胫病的PDA平板上培养，其培养方法与计算公式同上。
3、结果分析
3.1、生物有机肥菌量检测结果
生物有机肥菌量检测结果统计表如表3所示。由表3可知：加入生防菌剂的生物有机肥菌量为2.02亿/克，其中包括贝莱斯芽孢杆菌YWF-17- 0003、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072及木霉菌WSWFJ-17，符合生物有机肥大于0.2亿/克的标准要求。
表3生物有机肥菌量统计表
处理 菌含量(cfu/g)
生物有机肥 2.02×10<sup>8</sup>
3.2、生物有机肥浸出液对烟草黑胫病拮抗试验结果
生物有机肥浸出液对烟草黑胫病拮抗试验结果如表4所示。由表4可知：生物有机肥浸出液对烟草黑胫病的抑菌率为75.29％，与生防菌剂筛选时相差不大，因此可以确定生防菌剂互配有机肥对烟草黑胫病的抑制作用。
表4生物有机肥浸出液平板拮抗试验结果表
Figure RE-GDA0003744125890000091
实施例3
本实施例对本发明中具有防治烟草土传病害的生物有机肥田间防治烟草黑胫病和青枯病试验进行详细说明。
1、试验地点
试验设置在曲靖市麒麟区越州镇小马坊村，该地主要种植品种为云烟100，且往年烟草黑胫病、青枯病发病严重，试验地块土壤理化指标如下：pH 5.91、有机质34.72g/kg、全氮1.58g/kg、全磷1.17g/kg、全钾 6.64g/kg、水解性氮11.39mg/kg、有效磷34.63mg/kg、269.65mg/kg。
2、试验材料与方法
2.1、试验材料
烟草品种：云烟100。
供试肥料：生物有机肥、普通有机肥。
2.2、试验方法
根据该地区往年发病情况，在烟草移栽时施用生物有机肥作为底肥处理，分别设置以下处理：
A、生物有机肥；
B、58％甲霜灵锰锌可湿性粉剂(喷施处理)；
C、普通有机肥；
D、空白对照(不施肥)。
每个处理1亩(1100株烟)，按施肥标准50kg/亩进行底肥施入，其余管理一致。
2.3、调查方法
在移栽后60天对各处理烟草黑胫病、青枯病的发病情况进行调查和记录。按照烟草黑胫病、青枯病的发病症状进行发病调查(每个处理选择300株进行调查)，并做好记录。
按照上述调查方法得到烟草黑胫病、青枯病的发病率，并比较生物有机肥与普通有机肥及空白对照处理间的发病情况，得出结论。
3、试验结果
不同处理烟草黑胫病发病率统计结果表如表5所示。根据表5中的统计结果得出：施用本发明的生物有机肥处理的烟草黑胫病发病率仅为 3％，喷施农药58％的甲霜灵锰锌的发病率为5％，与喷施农药处理相比，本发明提供的生物有机肥的处理效果比农药处理的效果更好，发病率降低2个百分点；而普通有机肥和空白对照处理的发病率分别为17％和37％；相比于施用普通有机肥处理，施用本发明的生物有机肥可使烟草黑胫病的发病率降低14个百分点；而与空白对照相比降低34个百分点。
不同处理烟草青枯病发病率统计结果表如表6所示。根据表6中的统计结果得出：施用本发明的生物有机肥处理的烟草青枯病发病率仅为4.67％，喷施农药58％的甲霜灵锰锌的发病率为4.33％，与喷施农药处理相比，本发明提供的生物有机肥的处理效果比农药处理的略低，但相差较小；而普通有机肥和空白对照处理的发病率分别为20％和30％；相比于施用普通有机肥处理，施用本发明的生物有机肥烟草青枯病发病率降低15.33个百分点；而与空白对照相比降低25.33个百分点。
因此，本发明的生物有机肥在田间能有效抑制烟草黑胫病和青枯病的发生。
表5不同处理烟草黑胫病发病率统计结果表
处理编号 处理 发病株数 发病率/％
A 生物有机肥 9 3
B 58％甲霜灵锰锌 15 5
C 普通有机肥 51 17
D 空白对照 111 37
表6不同处理烟草青枯病发病率统计结果表
处理编号 处理 发病株数 发病率/％
A 生物有机肥 14 4.67
B 58％甲霜灵锰锌 13 4.33
C 普通有机肥 60 20
D 空白对照 90 30
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种具有防治烟草土传病害的生物有机肥的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
制备贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉，制备木霉菌WSWFJ-17孢子粉；
通过发酵制备油枯型有机肥；
将制备的贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉以及木霉菌WSWFJ-17孢子粉与油枯型有机肥复配，制得具有防治烟草土传病害的生物有机肥；
其中，贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉中有效活菌数的量不小于1000亿/克，木霉菌WSWFJ-17孢子粉中有效活菌数的量不小于100亿/克，并且复配后的生物有机肥中有效活菌数的量不低于2亿/克。
2.根据权利要求1所述的具有防治烟草土传病害的生物有机肥的制备方法，其特征在于，复配过程中，贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉和木霉菌WSWFJ-17孢子粉的重量比为1∶1∶0.5。
3.根据权利要求1所述的具有防治烟草土传病害的生物有机肥的制备方法，其特征在于，通过发酵制备油枯型有机肥包括如下步骤：
将腐熟菌剂稀释后洒在油枯中，拌匀发酵15天-20天得到油枯型有机肥；其中发酵过程中各组分的重量比如下：油菜枯饼600份-800份，草炭120份-320份，石灰10份-30份，腐熟菌剂5份-10份。
4.根据权利要求1所述的具有防治烟草土传病害的生物有机肥的制备方法，其特征在于，制备贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉包括如下步骤：
贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌种活化：将﹣80℃下保存的贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌株分别在LB固体培养基上活化12h-16h，得活化的菌株；
贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072种子液制备：用无菌接种环刮取一环活化的菌株接种到50ml LB液体培养基中，分别在温度为35℃、转速为160rpm/min条件下培养24h，得种子液；
贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003、枯草芽孢杆菌YWS-20-2072发酵液制备：按照菌种、培养液体积比为1∶120的比例分别将贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003种子液和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072种子液接入到车间发酵料培养基中，在温度为36.5℃-37.5℃条件下，转速为120rpm/min条件下培养25h-30h，得发酵液，即为贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌悬液和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌悬液，并且贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌悬液和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌悬液中的有效活菌数均控制在20.0×108cfu/g以上；
将所得发酵液离心后添加吸附保护剂，再将添加吸附保护剂的发酵液转入喷粉设备得到贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉，并且贝莱斯芽孢杆菌YWF-17-0003菌粉和枯草芽孢杆菌YWS-20-2072菌粉中有效活菌数的量不小于1000亿/克。
5.根据权利要求4所述的具有防治烟草土传病害的生物有机肥的制备方法，其特征在于，菌种活化过程中，LB液体培养基包括如下浓度的成分：细菌学蛋白胨10g/L、酵母提取粉5g/L、氯化钠10g/L；
种子液制备过程中，LB液体培养基包括如下浓度的成分：细菌学蛋白胨10g/L、酵母提取粉5g/L、氯化钠10g/L；
发酵液制备过程中，发酵料培养基包括如下质量百分数的成分：黄豆粉1.0％-1.6％、蔗糖0.1％-0.5％、蛋白胨0.2％-0.6％、玉米粉0.2％-0.6％、碳酸钙0.3％-0.9％、鱼粉0.1％-0.3％、硫酸铵0.01％-0.08％、硫酸镁0.02％-0.05％、磷酸二氢钾0.01％-0.04％、磷酸氢二钾0.02％-0.05％、硫酸锰0.01％-0.04％、氢氧化钠0.01％-0.04％、氯化钠0.02％-0.03％、消泡剂0.5％-1.5％，余量为水，用盐酸及氢氧化钠调节pH至6.8-7.5。
6.根据权利要求1所述的具有防治烟草土传病害的生物有机肥的制备方法，其特征在于，木霉菌WSWFJ-17孢子粉的制备过程包括如下步骤：
木霉菌WSWFJ-17种子液的制备：将保存的木霉菌WSWFJ-17活化于PDA固体培养基上，活化后接种至200mL PDA液体培养基中，置于温度28℃及转速180r/min的恒温摇床上培养72h，再将培养后的菌悬液按1％接种量接种于1000mL PDA液体培养基中，置于温度28℃及转速180r/min的恒温摇床上扩繁72h，制得木霉菌WSWFJ-17种子液；
木霉菌WSWFJ-17发酵液的制备：在容积为1000L的发酵罐中加入600L专用发酵培养基，将木霉菌WSWFJ-17种子液加入到发酵罐中，在通气量35m3/h、温度28℃及转速160r/min条件下发酵48h-72h，制得木霉菌WSWFJ-17的发酵液；
固体发酵：将木霉菌WSWFJ-17的发酵液按重量比为1∶10的比例添加到固体培养基上，加水调节发酵物料含水量至60％-80％，在搅拌机中混合均匀，混合后将发酵物料平铺至发酵池中，混合物料平铺高度为10-15cm，用黑色遮荫网覆盖发酵池顶部，在温度28℃-30℃及通气量5m3/h条件下发酵60h，60h后打开黑色遮荫网在30℃-35℃及通气量5m3/h条件下发酵36h，36h后将混合物料加入干燥桶中，在保持温度50-55℃下烘干，直至物料含水量降为10％-15％，烘干后粉碎，得到木霉菌WSWFJ-17的孢子粉，并且孢子粉中的有效活菌量不小于100亿/克。
7.根据权利要求6所述的具有防治烟草土传病害的生物有机肥的制备方法，其特征在于，木霉菌WSWFJ-17种子液制备过程中，PDA液体培养基包括如下浓度的成分：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L；PDA固体培养基包括如下浓度的成分：马铃薯200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂24g/L。
8.根据权利要求6所述的具有防治烟草土传病害的生物有机肥的制备方法，其特征在于，木霉菌WSWFJ-17发酵液制备过程中，专用发酵培养基包括如下浓度的成分：酵母膏3g/L-5g/L、蛋白胨3g/L-5g/L、玉米浆干粉8g/L-10g/L、玉米淀粉3g/L-5g/L、磷酸氢二钾0.2g/L-0.5g/L、磷酸二氢钾0.1g/L-0.3g/L、葡萄糖10g/L-15g/L及糖蜜粉1g/L-10g/L，调节PH至6.5-7.0；
固体发酵过程中，固体培养基包括如下重量份的组分：玉米粉50-100份、油枯300份-400份、草炭300份-400份、麦麸100份-200份、稻壳100份-200份、黄豆粉50份-100份，加水调至含水量为60％-80％。
9.一种具有防治烟草土传病害的生物有机肥，其特征在于，是采用权利要求1至8中任一项的制备方法制得的。
10.权利要求9所述的具有防治烟草土传病害的生物有机肥的应用，其特征在于，在烟草种植过程中，所述生物有机肥作为底肥施用，所述生物有机肥的施用量为50kg/亩-80kg/亩。
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