CN114870017A

CN114870017A - Tmem100在调控肺癌5-氟尿嘧啶耐药的应用

Info

Publication number: CN114870017A
Application number: CN202210489212.5A
Authority: CN
Inventors: 曹卓; 潘炯伟; 叶再挺; 蔡晓平; 尹章勇; 徐存来
Original assignee: Sixth Affiliated Hospital Of Wenzhou Medical University
Current assignee: Sixth Affiliated Hospital Of Wenzhou Medical University
Priority date: 2022-05-07
Filing date: 2022-05-07
Publication date: 2022-08-09

Abstract

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及TMEM100在调控肺癌5‑氟尿嘧啶耐药的应用，本发明通过实验证明，TMEM100在肺癌耐药细胞株中表达降低；TMEM100过表达抑制肺癌耐药细胞株的活力，增强细胞对5‑FU的敏感性；TMEM100过表达降低了肺癌耐药细胞株的增殖，增强了细胞对5‑FU的敏感性；TMEM100过表达促进了肺癌耐药细胞株的凋亡，增强了细胞对5‑FU的敏感性。

Description

TMEM100在调控肺癌5-氟尿嘧啶耐药的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及TMEM100在调控肺癌5-氟尿嘧啶耐药的应用。

背景技术

肺癌（LC）是最常见的恶性肿瘤，也是癌症相关死亡的主要原因。根据组织学，LC可分为非小细胞肺癌（NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）两大类，前者占所有LC病例的85%。化疗是NSCLC患者的标准治疗策略，已被证明可有效延长患者的生存时间，其中5-氟尿嘧啶(5-FU)是一种广泛用于治疗含NSCLC的多种癌症的化疗药物。然而，有很大一部分患者出现了对5-FU的耐药性，并导致5-FU在NSCLC治疗中的临床应用受到很大限制。因此，在了解肿瘤对5-FU耐药机制的基础上提高NSCLC细胞对5-FU的敏感性是NSCLC管理的必要步骤。

最近的工作表明，TMEM100与肺腺癌临床分期相关并抑制H520和H460的克隆形成，其下调与NSCLC的较差临床结果有关。此外，过表达的TMEM100可抑制胃癌的转移并增强对化疗（顺铂和5-FU）的敏感性。然而，现阶段TMEM100是否影响NSCLC对化疗的敏感性仍不清楚，所以在应用时存在诸多问题。

发明内容

鉴于背景技术存在的不足，本发明涉及一种TMEM100在调控肺癌5-氟尿嘧啶耐药的应用，TMEM100可以增强NSCLC细胞对5-FU的敏感性。

本发明提供了TMEM100在调控肺癌5-氟尿嘧啶耐药的应用，

进一步的，所述应用是TMEM100抑制5-FU耐药肺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡、增强耐药性肺癌细胞株对5-FU的药物敏感性。

通过采用上述方案，

本发明还提供了增强TMEM100的表达在制备增强人肺癌5-FU敏感性药物中的应用。

进一步的，所述增强人肺癌5-FU敏感性药物包括TMEM100的增强剂。

本发明还提供了增强TMEM100的表达在制备减轻人结直肠癌细胞生长速率药物中的应用。

进一步的，所述减轻人结直肠癌细胞生长速率药物包括TMEM100的增强剂。

进一步的，所述增强剂根据需要的选择包括能增强TMEM100的过表达质粒或小分子化合物等。

本发明的主要优点在于：

1、发明为TMEM100提供了一种新的治疗方向，同时为肺癌化疗耐药性的治疗提供了新的选择；

2、TMEM100在5-FU耐药的肺癌细胞中表达量降低；

3、过表达TMEM100增强了肺癌耐药细胞株对5-FU的敏感性。

附图说明

图1：肺癌耐药和敏感细胞中TMEM100的表达情况。^^^p < 0.001 vs. A549 细胞。

图2：TMEM100过表达对肺癌耐药细胞活力的影响。△△△ p < 0.001 vs. A549/5-FU-NC 组。

图3：TMEM100过表达对肺癌耐药细胞增殖的影响。&&& p < 0.001 vs. NC 组。

图4：TMEM100过表达对肺癌耐药细胞凋亡的影响。&&& p < 0.001 vs. NC 组。

具体实施方式

以下将结合本发明的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述和讨论，显然，这里所描述的仅仅是本发明的一部分实例，并不是全部的实例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。

为了便于对本发明实施例的理解，下面将结合附图以具体实施例为例作进一步的解释说明，且各个实施例不构成对本发明实施例的限定。

本发明的实施例1，涉及检测肺癌耐药和敏感细胞中TMEM100的表达情况，实验方法如下：

A549/5-FU耐药细胞由A549亲代细胞生成。简言之，将稀释的5-FU (0.1-10 M)处理细胞在Dulbecco改良Eagle培养基培养超过9个月。从细胞中分离出总RNA。使用BeyoRTII First Strand cDNA Synthesis Kit通过逆转录合成cDNA。利用RIPA 裂解缓冲液提取总蛋白。蛋白质含量用BCA检测试剂盒进行鉴定。采用qRT-PCR 和western blot法测定TMEM100的表达情况，GAPDH作为内源对照。

结果见图1，TMEM100在肺癌耐药细胞株中表达降低。

本发明的实施例2，涉及TMEM100过表达对肺癌耐药细胞活力的影响，实验方法如下：

TMEM100过表达质粒转染A549/5-FU耐药细胞。采用MTT法检测细胞活力。细胞以 5×103/孔接种在 96 孔板中，用不同浓度的 5-FU（0、10、20、30、40、50 µM）处理转染细胞24或48小时。接下来，将MTT溶液加入板的每孔中培养，随后入Formazan溶液孵育至晶体完全溶解。使用酶标仪测定570 nm处的光密度值。

结果见图2，TMEM100过表达抑制肺癌耐药细胞株的活力，增强细胞对5-FU的敏感性。

本发明的实施例3，涉及TMEM100过表达对肺癌耐药细胞增殖的影响，实验方法如下：

TMEM100过表达质粒转染A549/5-FU耐药细胞。采用克隆形成法检测细胞增殖。细胞被消化并以每孔1000个的密度接种在6孔板中，培养两周。4%多聚甲醛固定细胞。随后，结晶紫染色细胞15分钟。利用显微镜观察。

结果见图3，TMEM100过表达降低了肺癌耐药细胞株的增殖，增强了细胞对5-FU的敏感性。

本发明的实施例4，涉及TMEM100过表达对肺癌耐药细胞凋亡的影响，实验方法如下：

采用流式细胞术检测TMEM100对细胞凋亡的影响。通过 Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒评估细胞凋亡。将细胞悬浮Binding Buffer中，调整细胞浓度至1×106/mL。接下来，将Annexin V-FITC与细胞悬液室温避光孵育10 min，然后加入碘化丙啶继续孵育5min。最后，结果由 Accuri C6 Plus 流式细胞仪分析。

结果见图4，TMEM100过表达促进了肺癌耐药细胞株的凋亡，增强了细胞对5-FU的敏感性。

最后应说明的是：以上所述实施例，仅为本发明的具体实施方式，用以说明本发明技术方案，而非对其限制，本发明的保护范围并不局限于此，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改或可轻易想到变化，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改、变化或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。

Claims

1.一种TMEM100在调控肺癌5-氟尿嘧啶耐药的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述应用是TMEM100抑制5-FU耐药肺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡、增强耐药性肺癌细胞株对5-FU的药物敏感性。

3.增强TMEM100的表达在制备增强人肺癌5-FU敏感性药物中的应用。

4.增强TMEM100的表达在制备减轻人结直肠癌细胞生长速率药物中的应用。

5.根据权利要求3所述的增强人肺癌5-FU敏感性药物，其特征在于：所述增强人肺癌5-FU敏感性药物包括TMEM100的增强剂。

6.根据权利要求4所述的减轻人结直肠癌细胞生长速率药物，其特征在于：所述减轻人结直肠癌细胞生长速率药物包括TMEM100的增强剂。

7.根据权利要求5或6任一所述的增强剂，其特征在于：所述增强剂根据需要的选择包括能增强TMEM100的过表达质粒或小分子化合物等。