CN114848671A - 一种多酚-铁离子纳米材料的制备及其在口腔感染方面的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多酚‑铁离子纳米材料的制备及其在口腔感染方面的应用,属于生物医药材料技术领域。该多酚‑铁离子纳米材料以植物多酚和金属铁离子作为原料,制备方法包括以下步骤:将所述植物多酚溶解在水中,得到多酚溶液;将氯化铁溶解在水中,得到铁离子溶液;将铁离子溶液逐滴滴加到多酚溶液中,搅拌均匀后得到所述多酚‑铁离子纳米材料。制备的多酚‑铁离子纳米材料可以实现对致龋细菌的高效杀灭,制备方法原料易得,制备过程简单快速,制备形成的纳米颗粒均一稳定。
Description
技术领域
本发明涉及一种多酚-铁离子纳米材料的制备及其在口腔感染方面的应用,属于生物医药材料技术领域。
背景技术
生物膜是由细菌在其分泌的粘液(粘多糖)内形成的结构。包裹着细菌的生物膜为细菌提供了保护,使得后者很难被清除。人类的许多疾病都是由生物膜引起的,例如龋齿(即蛀牙)。龋齿已经对公众健康构成重大威胁,是一种典型的生物膜型疾病,在致龋生物膜中,微生物创造的局部酸性pH环境,促进致龋细菌的生长和牙釉质的酸溶解,致龋生物膜难以清除,并且能够使得釉质磷灰石脱矿,从而导致龋齿的发生。由于生物膜的微酸环境,传统的抗菌剂(例如洗必泰)对致龋生物膜的治疗有限,因此需要更适用的药物治疗龋齿。
近年来,纳米材料在牙齿疾病领域的应用引起了人们的关注。氧化锌、纳米银以及氧化铁纳米酶已经被报道可以作为抗菌剂,特别是氧化铁纳米酶在酸性环境下表现出强大的抗菌功能。然而,在临床应用中,氧化铁纳米酶由于其在生理介质和适用于治疗配方的溶液中缺乏稳定性,并且会与一些生物组织结合,这会进一步对健康组织产生不利的影响。然而我们的理想条件下,治疗龋齿的药物应该具有非常好的生物相容性,并且可以选择性地杀灭致龋细菌,而不对正常细菌产生影响。
所以,为了更好解决目前口腔感染疾病中的治疗难题,提出一种稳定、具有高效杀菌、生物相容性的新材料是十分必要的。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提出了一种多酚-铁离子纳米材料的制备及其在口腔感染方面的应用,以植物多酚和金属离子Fe3+作为原料,络合形成纳米颗粒,然后利用制备的多酚-Fe3+纳米材料进行致龋细菌的高效杀灭,制备方法原料易得,制备过程简单快速,制备形成的纳米颗粒均一稳定,能够高效杀灭细菌。
为实现上述目的,本发明提供了如下方案:
本发明技术方案之一:
本发明提供了一种多酚-铁离子纳米材料,所述多酚-铁离子纳米材料的粒径为94.26nm~300nm,所述多酚为植物多酚。
进一步地,所述植物多酚包括单宁酸(Tannic acid,TA)、表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)、没食子酸(Gallic acid,GA)或咖啡酸(Caffeicacid,CA)中的一种或多种。
进一步地,所述铁离子的来源为铁盐,例如FeCl3·6H2O、Fe2(SO4)3。
技术方案之二:
本发明提供了一种上述的多酚-铁离子纳米材料的制备方法,包括以下步骤:
(1)将所述植物多酚溶解在水中,得到多酚溶液;
(2)将所述铁盐溶解在水中,得到铁离子溶液;
(3)将步骤(2)制备得到的铁离子溶液逐滴滴加到步骤(1)制备得到的多酚溶液中,搅拌均匀后得到所述多酚-铁离子纳米材料。多酚是植物中普遍存在的次生代谢产物,不仅在植物的防御机制中发挥重要作用,而且还具有其他众多的功能,包括对植物和食品的着色和调味作用、蛋白质络合作用、金属配位作用和自由基清除作用。植物多酚具有非常好的生物相容性、清除ROS、抗氧化、抗炎等有益功能,在本发明中植物多酚与金属离子络合形成植物多酚-金属离子纳米材料。
进一步地,步骤(1)中,所述多酚溶液的摩尔浓度为0.1mmol/L。
进一步地,步骤(2)中,所述铁离子溶液的摩尔浓度为0.1mmol/L。
进一步地,步骤(3)中,多酚溶液中的多酚与铁离子溶液中的铁离子的摩尔比为(1:1)~(15:1)。
进一步地,步骤(3)中,滴加的速度为每10s滴加一滴,搅拌的温度为室温25℃,时间为30min。
技术方案之三:
本发明提供了上述的多酚-铁离子纳米材料在制备口腔感染药物中的应用。
进一步地,述多酚-铁离子纳米材料在pH=4.5的条件下进行应用。
本发明公开了以下技术效果:
本发明以植物多酚和金属离子Fe3+作为原料,络合形成纳米颗粒,然后利用制备的多酚-Fe3+纳米材料进行致龋细菌的高效杀灭,制备方法原料易得,制备过程简单快速,制备形成的纳米颗粒均一稳定,能够高效杀灭细菌,具有非常好的过氧化物酶活性,在低H2O2浓度条件下,可以产生活性氧,可以用于破坏致龋生物膜,在制备治疗龋齿药物中具有广阔的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1制备得到的GA-Fe3+的扫描电镜图;
图2为实施例1制备得到的多酚-铁离子纳米材料(GA-Fe3+)的粒径测试结果图;
图3为发明实施例1中原料以及制备得到的GA-Fe3+的UV-vis吸收图;
图4为实施例2制备得到的多酚-铁离子纳米材料(TA-Fe3+)的粒径测试结果图;
图5为实施例3制备得到的多酚-铁离子纳米材料(EGCG-Fe3+)的粒径测试结果图;
图6为实施例4制备得到的多酚-铁离子纳米材料(CA-Fe3+)的粒径测试结果图;
图7为对比例1制备得到的多酚-铁离子纳米材料(EA-Fe3+)的粒径测试结果图;
图8为实施例1-4与对比例1制备得到的多酚-铁离子纳米材料的过氧化物酶活性测试结果图;
图9为不同pH下实施例1的GA-Fe3+过氧化物酶活性测试结果图;
图10为实施例1制备的GA-Fe3+对变形链球菌杀菌效果从测试结果图;
图11为实施例1制备的GA-Fe3+对变形链球菌生物膜消除效果图;
图12为实施例1-4与对比例1制备得到的多酚-铁离子纳米材料的生物毒性测试结果图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式,该详细说明不应认为是对本发明的限制,而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式,并非用于限制本发明。另外,对于本发明中的数值范围,应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明,否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料,但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入,用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时,以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下,可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化,这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等,均为开放性的用语,即意指包含但不限于。
本发明实施例中所用单宁酸(TA)来源于葡萄皮和葡萄籽,表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)来源于绿茶,没食子酸(GA)来源于掌叶大黄,咖啡酸(CA)来源于有机酸。本发明对比例所用鞣花酸(EA)来源于石榴或核桃。上述植物多酚均通过市售购买得到。
本发明所用变形链球菌(S.mutans)通过正规渠道购买得到。
以下通过实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
实施例1
(1)将没食子酸(GA)加入圆底烧瓶中,之后加水溶解,得到摩尔浓度为0.1mmol/L多酚溶液;
(2)将FeCl3·6H2O溶解在水中,得到摩尔浓度为10mmol/L铁离子溶液;
(3)将40μL步骤(2)制备得到的铁离子溶液以每10s滴加一滴的速度逐滴滴加到3.96mL步骤(1)制备得到的多酚溶液中,使多酚溶液中的多酚与铁离子溶液中的铁离子的摩尔比为99:100,停止滴加,之后在室温25℃下搅拌30min,搅拌均匀后得到多酚-铁离子纳米材料(GA-Fe3+)。
将实施例1制备得到的GA-Fe3+滴加到硅片上,静置24h并真空烘干,进行SEM测试,其扫描电镜图见图1,由图1可以看出得到的纳米材料是规则的结构。粒径测试结果图见图2,由图2可以看出结构展示出GA-Fe3+纳米材料粒径为282.7nm,形状为椭圆形,分布较为均一。
实施例1中原料以及制备得到的GA-Fe3+的UV-vis吸收图见图3,由图3可以看出,植物多酚与铁离子属于发生了螯合。
实施例2
同实施例1,区别仅在于,将没食子酸(GA)等量(物质的量相等)替换为单宁酸(TA),得到多酚-铁离子纳米材料(TA-Fe3+),形状为椭圆形,粒径测试结果图见图4,可以看出粒径为127.9nm。
实施例3
同实施例1,区别仅在于,将没食子酸(GA)等量(物质的量相等)替换为表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),得到多酚-铁离子纳米材料(EGCG-Fe3+),形状为椭圆形,粒径测试结果图见图5,可以看出粒径为94.26nm。
实施例4
同实施例1,区别仅在于,将没食子酸(GA)等量(物质的量相等)替换为咖啡酸(CA),得到多酚-铁离子纳米材料(CA-Fe3+),形状为椭圆形,粒径测试结果图见图6,可以看出粒径为202.3nm。
实施例5
(1)将单宁酸(TA)加入圆底烧瓶中,之后加水溶解,得到摩尔浓度为0.1mmol/L多酚溶液;
(2)将FeCl3·6H2O溶解在水中,得到摩尔浓度为10mmol/L铁离子溶液;
(3)将40μL步骤(2)制备得到的铁离子溶液以每10s滴加一滴的速度逐滴滴加到4mL步骤(1)制备得到的多酚溶液中,使多酚溶液中的多酚与铁离子溶液中的铁离子的摩尔比为1:1,停止滴加,之后在室温25℃下搅拌30min,搅拌均匀后得到多酚-铁离子纳米材料(TA-Fe3+),形状为椭圆形,粒径约为130nm。
实施例6
(1)将表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)加入圆底烧瓶中,之后加水溶解,得到摩尔浓度为0.1mmol/L多酚溶液;
(2)将Fe2(SO4)3溶解在水中,得到摩尔浓度为10mmol/L铁离子溶液;
(3)将40μL步骤(2)制备得到的铁离子溶液以每10s滴加一滴的速度逐滴滴加到40mL步骤(1)制备得到的多酚溶液中,使多酚溶液中的多酚与铁离子溶液中的铁离子的摩尔比为10:1,停止滴加,之后在室温25℃下搅拌30min,搅拌均匀后得到多酚-铁离子纳米材料(EGCG-Fe3+),形状为椭圆形,粒径约为100nm。
实施例7
(1)将咖啡酸(CA)加入圆底烧瓶中,之后加水溶解,得到摩尔浓度为0.1mmol/L多酚溶液;
(2)将FeCl3·6H2O溶解在水中,得到摩尔浓度为10mmol/L铁离子溶液;
(3)将40μL步骤(2)制备得到的铁离子溶液以每10s滴加一滴的速度逐滴滴加到60mL步骤(1)制备得到的多酚溶液中,使多酚溶液中的多酚与铁离子溶液中的铁离子的摩尔比为15:1,停止滴加,之后在25℃下搅拌30min,搅拌均匀后得到多酚-铁离子纳米材料(CA-Fe3+),形状为椭圆形,粒径为300nm。
对比例1
同实施例1,区别仅在于,将没食子酸(GA)等量替换为鞣花酸(EA),得到多酚-铁离子纳米材料(EA-Fe3+),粒径测试结果图见图6,可以看出粒径为800.4nm。
对比例2
同实施例1,区别仅在于,将没食子酸(GA)加入圆底烧瓶中,之后加水溶解,得到摩尔浓度为0.5mmol/L多酚溶液。
对比例3
同实施例1,区别仅在于,将FeCl3·6H2O溶解在水中,得到摩尔浓度为20mmol/L铁离子溶液。
性能测试
1.过氧化物酶活性测试
分别将150μL实施例1-4与对比例1制备得到的多酚-铁离子纳米材料与3,3',5,5'-四甲基联苯胺(200μL,12mmol)、醋酸缓冲溶液(300μL,pH=4.5)以及新开封的30%体积分数的H2O2(100μL,10mmol)混合,然后测试在400-800nm范围内的紫外-可见吸收。测试结果见图8,由图8可以看出,本发明实施例制备的纳米材料过氧化物酶活性优于对比例1,其中GA/Fe3+形成的纳米粒子具有最好的过氧化物酶活性。
2.不同pH下实施例1的GA-Fe3+过氧化物酶活性测试
将150μL实施例1制备得到的多酚-铁离子纳米材料(GA-Fe3+)与3,3',5,5'-四甲基联苯胺(200μL,摩尔浓度12mmol)、醋酸缓冲溶液(300μL,pH=4.5,pH=5.5,或pH=6.5)以及新开封的30%体积分数的H2O2(100μL,摩尔浓度10mmol)混合,然后测试在400-800nm范围内的紫外-可见吸收。测试结果见图9,由图9可以看出,在pH=4.5条件下,GA/Fe3+过氧化物酶活性最好。
3.实施例1制备的GA-Fe3+对变形链球菌杀菌效果测试
(1)将变形链球菌(S.mutans)离心分离后重悬在无菌PBS中,浓度为2*107CFU/mL;
(2)将实施例1制备的GA/Fe3+纳米材料进行过滤膜处理,然后用无菌醋酸钠缓冲溶液进行稀释,稀释浓度为0.1mmol/L;
(3)将步骤(2)稀释好的材料与变形链球菌溶液混合,并且加入新鲜的H2O2,3h后以涂布的方法评价杀菌效果,结果见图10,由图10可以看出在H2O2和GA/Fe3+同时存在的条件下具有最好的杀菌活性。
4.实施例1制备的GA-Fe3+对变形链球菌生物膜消除效果测试
(1)将变形链球菌(S.mutans)离心分离后重悬在无菌PBS中,浓度为1*108CFU/mL。然后取100μL细菌溶液置于96孔板中,放入37℃细菌恒温培养箱中静置培养1h。培养结束后将菌液吸出来,随后加入200μL BHI培养基培养24h,即得到生物膜。
(2)将实施例1制备的GA/Fe3+纳米材料进行过滤膜处理,然后用无菌醋酸钠缓冲溶液进行稀释,最后稀释好的材料加入到步骤(1)得到的生物膜中,并选择性加入新鲜的H2O2,3h后测量生物膜中细菌的数量,结果见图11,由图11可以看出在H2O2和GA/Fe3+同时存在的条件下具有最好的消除生物膜性能。
5.生物毒性测试
(1)将小鼠成纤维细胞(L929)计数后以2×104个细胞/孔的密度种植在无菌96孔板中,放置于细胞培养箱中培养;
(2)24h后,将96孔板中的培养基吸出,同时分别将含有实施例1-4与对比例1制备得到的纳米材料的培养基加入96孔板中,每组样品6个平行样,重新放置于细胞培养箱中培养。再过24h后,将96孔板中的液体吸出,加入200μL的新配制的BHI培养基和20μL的CCK-8试剂,作用1h后转移到96孔板,根据测试的OD值分析不同材料对细胞的毒性,结果见图12,由图12可以看出多酚-铁离子形成的纳米材料具有非常好的生物相容性。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进,均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种多酚-铁离子纳米材料,其特征在于,所述多酚-铁离子纳米材料为椭圆形,粒径为94.26nm~300nm,所述多酚为植物多酚。
2.根据权利要求1所述的多酚-铁离子纳米材料,其特征在于,所述植物多酚包括单宁酸、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子酸或咖啡酸中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的多酚-铁离子纳米材料,其特征在于,所述铁离子的来源为铁盐。
4.一种权利要求1~3任一项所述的多酚-铁离子纳米材料的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将所述植物多酚溶解在水中,得到多酚溶液;
(2)将所述铁盐溶解在水中,得到铁离子溶液;
(3)将步骤(2)制备得到的铁离子溶液逐滴滴加到步骤(1)制备得到的多酚溶液中,搅拌均匀后得到所述多酚-铁离子纳米材料。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述多酚溶液的摩尔浓度为0.1mmol/L。
6.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述铁离子溶液的摩尔浓度为10mmol/L。
7.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,多酚溶液中的多酚与铁离子溶液中的铁离子的摩尔比为(1:1)~(15:1)。
8.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,搅拌的温度为25℃,时间为30min。
9.权利要求1~3任一项所述的多酚-铁离子纳米材料在制备口腔感染药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述多酚-铁离子纳米材料在pH=4.5的条件下进行应用。
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