CN114846156A - Hla-h、hla-j、hla-l、hla-v和hla-y作为治疗和诊断靶 - Google Patents

Hla-h、hla-j、hla-l、hla-v和hla-y作为治疗和诊断靶 Download PDF

Info

Publication number
CN114846156A
CN114846156A CN202080090213.1A CN202080090213A CN114846156A CN 114846156 A CN114846156 A CN 114846156A CN 202080090213 A CN202080090213 A CN 202080090213A CN 114846156 A CN114846156 A CN 114846156A
Authority
CN
China
Prior art keywords
hla
ala
leu
arg
glu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080090213.1A
Other languages
English (en)
Inventor
W·维费尔
R·M·维尔茨
C·温特哈尔特
F·维费尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Interlaxson LLC
Original Assignee
Interlaxson LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Interlaxson LLC filed Critical Interlaxson LLC
Publication of CN114846156A publication Critical patent/CN114846156A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2833—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6881—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for tissue or cell typing, e.g. human leukocyte antigen [HLA] probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/60—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances involving radioactive labelled substances
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Abstract

本发明涉及产生用于治疗或预防受试者肿瘤的药物或用于检测受试者肿瘤的诊断剂的方法，包括(A)确定得自所述受试者的样品中至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽的表达，其与HLA‑H、HLA‑J、HLA‑L、HLA‑V或HLA‑Y至少85％相同，其中所述核酸分子编码所述蛋白质或多肽或由包含至少150个核苷酸的所述核酸的片段组成；以及(B)产生能抑制受试者中所述至少一种核酸分子和/或所述至少一种蛋白质或肽的表达的药物和/或产生能在体内检测受试者中所述至少一种核酸分子和/或所述至少一种蛋白质或肽的表达位点的诊断剂。

Description

HLA-H、HLA-J、HLA-L、HLA-V和HLA-Y作为治疗和诊断靶
技术领域
本发明涉及产生用于治疗或预防受试者肿瘤的药物或用于检测受试者肿瘤的诊断剂的方法，包括(A)确定得自所述受试者的样品中至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽的表达，其中所述至少一种核酸分子选自以下核酸分子：(a)编码包含SEQ ID NO:1至5任一氨基酸序列或由SEQ ID NO:1至5任一氨基酸序列组成的多肽的核酸分子，(b)包含SEQ ID NO:6至10任一核苷酸序列或由SEQ ID NO:6至10任一核苷酸序列组成的核酸分子，(c)编码与(a)的氨基酸序列至少85％相同、优选至少90％相同、最优选至少95％相同的多肽的核酸分子，(d)由与(b)的核苷酸序列至少95％相同、优选至少96％相同、最优选至少98％相同的核苷酸序列组成的核酸分子，(e)由相对于(d)的核酸分子是简并序列的核苷酸序列组成的核酸分子，(f)由(a)至(e)任一核酸分子的片段组成的核酸分子，所述片段包含至少150个核苷酸，优选至少300个核苷酸，更优选至少450个核苷酸，最优选至少600个核苷酸，及(g)对应于(a)至(f)任一核酸分子的核酸分子，其中T被替换为U，并且其中所述至少一种蛋白质或肽选自由(a)至(g)任一核酸分子编码的蛋白质或肽；以及(B)如果在(A)中所述至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽表达，则产生能抑制受试者中所述至少一种核酸分子和/或所述至少一种蛋白质或肽的表达的药物，和/或(B’)如果在(A)中所述至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽表达，产生能在体内检测受试者中所述至少一种核酸分子和/或所述至少一种蛋白质或肽的表达位点的诊断剂。
在本说明书中，引用了包括专利申请和制造商手册在内的许多文件。这些文件的公开虽然不认为与本发明的可专利性有关，但通过引用将其全部并入本文。更具体地，所有引用的文件都以引用的方式并入，就好像每个单独的文件被具体和单独指出以引用的方式并入一样。
背景技术
个性化肿瘤疗法是一种治疗策略，其核心是预测哪些患者更有可能应答特定肿瘤疗法的能力。这种方法基于肿瘤标志物与患者预后和肿瘤对疗法应答相关的观点。肿瘤标志物可以是预测疗法应答的DNA、RNA、蛋白质和代谢组学谱。
为肿瘤患者选择正确治疗是一个综合决定，其基于不断发展的分子诊断和迅速出现的生物医学文献。在临床试验中追溯可操作的基因组的改变和靶向疗法之间的关联对于肿瘤学家和研究人员的治疗来说可能具有挑战性。化疗仍然是许多肿瘤类型的癌症治疗的支柱，但缓解率有限且副作用显著。参与癌症起始、进展和耐药性的驱动分子机制越来越多地被视为治疗靶点。成功的个性化肿瘤治疗的实例已经彻底革新了肿瘤学，例如靶向乳腺癌的HER2、靶向慢性髓细胞白血病的bcr-abl或靶向非小细胞肺癌(NSCLC)的ALK。
肿瘤学中的精准医学跨越一个连续体，范围从努力鉴别诊断性生物标志物(以检测健康患者的癌症发生，以更早地鉴别肿瘤)、预后性生物标志物(以预测疾病的自然进程)、预测性生物标志物(以预测在存在特定疗法下的临床结果)以及药物基因组生物标志物(以鉴别药物代谢的改变和预测与特定治疗相关的应答和毒性)。
然而，仍然迫切需要鉴别可用于治疗/评估肿瘤以及作为治疗和诊断靶的新手段和方法以实现有效的个性化肿瘤疗法和肿瘤诊断。本发明解决了这种需要。
发明内容
因此，本发明第一方面涉及产生用于治疗或预防受试者的肿瘤的药物或用于检测受试者的肿瘤的诊断剂的方法，包括(A)确定得自所述受试者的样品中至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽的表达，其中所述至少一种核酸分子选自以下核酸分子：(a)编码包含SEQ ID NO:1至5任一氨基酸序列或由SEQ ID NO:1至5任一氨基酸序列组成的多肽的核酸分子，(b)包含SEQ ID NO:6至10任一核苷酸序列或由SEQ ID NO:6至10任一核苷酸序列组成的核酸分子，(c)编码与(a)的氨基酸序列至少85％相同、优选至少90％相同、最优选至少95％相同的多肽的核酸分子，(d)由与(b)的核苷酸序列至少95％相同、优选至少96％相同、最优选至少98％相同的核苷酸序列组成的核酸分子，(e)由相对于(d)的核酸分子是简并序列的核苷酸序列组成的核酸分子，(f)由(a)至(e)任一核酸分子的片段组成的核酸分子，所述片段包含至少150个核苷酸，优选至少300个核苷酸，更优选至少450个核苷酸，最优选至少600个核苷酸，及(g)对应于(a)至(f)任一核酸分子的核酸分子，其中T被替换为U，并且其中所述至少一种蛋白质或肽选自由(a)至(g)任一核酸分子编码的蛋白质或肽；以及(B)如果在(A)中所述至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽表达，则产生能抑制受试者中所述至少一种核酸分子和/或所述至少一种蛋白质或肽的表达的药物，和/或(B’)如果在(A)中所述至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽表达，产生能在体内检测受试者中所述至少一种核酸分子和/或所述至少一种蛋白质或肽的表达位点的诊断剂。
如本文所用，术语“药物”指在治疗或预防肿瘤方面具有药学活性的化合物或化合物组合。如本文所用，术语“诊断剂”是指可用于检测受试者中的肿瘤的化合物或化合物组合。例如及将在下文中进一步详述的，所述诊断剂可以用可检测标记进行标记，然后使其可以检测体内肿瘤病灶。肿瘤病灶是受试者中的肿瘤组织区域。可以将药物以及诊断剂施用于受试者。
所述药物的性质不受特别限制，只要如果在本发明第一方面的方法的步骤(A)中所述至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽表达，所述药物能抑制根据本发明的至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽在受试者中的表达。类似地，诊断剂的性质不受特别限制，只要如果在本发明第一方面的方法的步骤(A)中所述至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽表达，所述诊断剂能在体内检测受试者中根据本发明的至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽的表达位点。表达位点应理解是肿瘤通常在称为原发性肿瘤部位的特定身体部位起源。作为肿瘤生长的结果，肿瘤可能在身体的不同部位形成转移，即在所谓的继发性肿瘤部位。诊断剂优选能至少检测原发性肿瘤部位，更优选既能检测原发性肿瘤部位也能(至少部分)检测继发性肿瘤部位(如果存在的话)。
所述药物优选特异性抑制根据本发明的至少一种核酸分子或至少一种蛋白质或肽，以及所述诊断剂优选特异性检测根据本发明的至少一种核酸分子或至少一种蛋白质或肽。这意味着所述药物不抑制或基本上不抑制其它核酸分子或蛋白质或肽。这也意味着所述诊断剂不检测或基本上不检测其它核酸分子或蛋白质或肽。尤其是，优选除了相应选择的靶HLA核酸分子或蛋白质或肽之外，没有其它HLA核酸分子或蛋白质或肽被抑制或检测。
根据本发明的术语“受试者”是指哺乳动物，优选家畜或宠物动物，例如马、牛、猪、绵羊、山羊、狗或猫，最优选人。所述受试者可以是疑似患有癌症的受试者或已知患有癌症的受试者。在后一种情况下，受试者可以已经接受了无效的癌症疗法。也可以在治疗前后使用所述方法以确定所述疗法是否改变了表达。
肿瘤是一种不具有生理功能的且通常由不受控制的快速细胞增殖引起的组织的异常的良性或恶性的新生长。所述肿瘤优选是癌症。癌症是一种不具有生理功能的且通常由不受控制的快速细胞增殖引起的组织的异常的恶性的新生长。所述癌症优选选自乳腺癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌、膀胱癌、唾液腺癌、子宫内膜癌、胰腺癌、甲状腺癌、肾癌、肺癌、涉及上消化道的癌症、结肠癌、结肠直肠癌、前列腺癌、头颈部鳞状细胞癌、宫颈癌、胶质母细胞瘤、恶性腹水、淋巴瘤和白血病。优选的癌症将在下文中定义。
所述肿瘤或癌症优选是实体瘤或癌症。实体瘤或癌症是与非实体瘤(例如白血病)相比通常不包含囊肿或液体区域的异常组织团块。
SEQ ID NO:6-10的核酸序列分别是编码人HLA-H、HLA-J、HLA-L、HLA-V和HLA-Y的基因。优选地，根据本发明的核酸分子是基因组DNA或mRNA。在mRNA的情况下，所述核酸分子可以另外包含聚-A尾区。
SEQ ID NO:1-5的氨基酸序列分别是可溶性人HLA蛋白HLA-H、HLA-J、HLA-L、HLA-V和HLA-Y。HLA蛋白是可溶的，因为其不包含跨膜结构域。
关于HLA-L，注意的是SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:8编码HLA-L的可溶形式，并且HLA-L也可以见于SEQ ID NO:11(氨基酸序列)和SEQ ID NO:12(核苷酸序列)的膜结合形式。这种膜结合形式可以通过膜的蛋白裂解而从膜释放。这种通过从膜脱离而变得可溶的HLA形式也称为脱落的异构体；参见Rizzo et al.(2013),Mol Cell Biochem.；381(1-2):243-55。因此，如本发明第一方面定义的源自SEQ ID NO:8的核酸分子和如本发明第一方面定义的源自SEQ ID NO:3的蛋白质或肽也可以分别源自SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:11的膜结合形式。关于确定HLA-L或其衍生序列的表达，还优选将所述确定限于可溶形式，从而不确定膜结合形式。例如，这可以通过在分析之前从样品中去除细胞和细胞膜来完成。
根据本发明的术语“核酸序列”或“核酸分子”包括DNA，例如cDNA或双链或单链基因组DNA和RNA。在这方面，“DNA”(脱氧核糖核酸)是指在脱氧核糖主链上连接在一起的称为核苷酸碱基的化学构件腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)的任何链或序列。DNA可以具有一条核苷酸碱基链，或可以形成双螺旋结构的两条互补链。“RNA”(核糖核酸)是指在核糖主链上连接在一起的称为核苷酸碱基的化学构件腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)的任何链或序列。RNA通常具有一条核苷酸碱基链，例如mRNA。还包括单链和双链杂合分子，即DNA-DNA、DNA-RNA和RNA-RNA。某些核酸分子，例如下文所述的shRNA、miRNA或反义核酸分子，也可以通过本领域已知的许多手段进行修饰。这种修饰的非限制性实例包括甲基化、“加帽”、用类似物取代一个或多个天然存在的核苷酸，以及核苷酸间修饰，例如具有不带电荷的键修饰(例如膦酸甲酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)和带电荷的键修饰(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)。核酸分子，在下文中也称为多核苷酸，可以含有一个或多个额外的共价连接部分，例如蛋白质(例如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)、嵌入剂(例如吖啶、补骨脂素等)、螯合剂(例如金属、放射性金属、铁、氧化金属等)和烷化剂。多核苷酸可以通过形成甲基或乙基磷酸三酯或烷基氨基磷酸键来衍生化。进一步包括本领域已知的核酸模拟分子，例如DNA或RNA的合成或半合成衍生物和混合的聚合物。根据本发明的这种核酸模拟分子或核酸衍生物包括二硫代磷酸酯核酸、氨基磷酸酯核酸、2’-O-甲氧乙基核糖核酸、吗啉代核酸、己糖醇核酸(HNA)、肽核酸(PNA)和锁核酸(LNA)(参见Braasch and Corey,Chem Biol 2001,8:1)。LNA是一种RNA衍生物，其中核糖环受到2’-氧和4’-碳之间的亚甲基键的约束。还包括含有修饰碱基例如硫代尿嘧啶、硫代鸟嘌呤和氟尿嘧啶的核酸。核酸分子通常携带遗传信息，包括细胞机制用来制造蛋白质和/或多肽的信息。核酸分子可以另外包含启动子、增强子、应答元件、信号序列、聚腺苷酸化序列、内含子、5’-和3’-非编码区等。
如本文所用，术语“蛋白质”可与术语“多肽”互换使用，其描述了含有至少50个氨基酸的氨基酸线性分子链，包括单链蛋白质或其片段。如本文所用，术语“肽”描述了由至多49个氨基酸组成的一组分子。如本文所用，术语“肽”描述了渐增优选由至少15个氨基酸、至少20个氨基酸、至少25个氨基酸和至少40个氨基酸组成的一组分子。通过使用术语“(多)肽”来统称这组肽和多肽。(多)肽可以进一步形成由至少两个相同或不同分子组成的寡聚体。这种多聚体的相应更高阶结构相应地称为同源或异源二聚体、同源或异源三聚体等。例如，HLA蛋白包含半胱氨酸，因此包含潜在的二聚化位点。术语“(多)肽”和“蛋白质”还指天然修饰的(多)肽和蛋白质，其中所述修饰是例如通过糖基化、乙酰化、磷酸化和本领域熟知的类似修饰实现的。
根据本发明，术语“序列相同性百分比(％)”描述了两个或更多个比对的核酸或氨基酸序列与构成模板核酸或氨基酸序列全长的核苷酸或氨基酸残基数目相比，相同的核苷酸/氨基酸的匹配(“命中”)数目。换句话说，使用两个或更多个序列或子序列的比对，当在比较窗口上或在使用本领域已知的序列比较算法测量的指定区域上对(子)序列进行最大对应性比较和比对或在手动比对和目视检查时，可能确定相同的氨基酸残基或核苷酸的百分比(例如80％、85％、90％或95％相同性)。这个定义也适用于要比对的任何序列的互补序列。
与本发明有关的核苷酸和氨基酸序列分析和比对优选使用NCBI BLAST算法(Stephen F.Altschul,Thomas L.Madden,Alejandro A.
Figure BDA0003711643260000041
Jinghui Zhang,ZhengZhang,Webb Miller,and David J.Lipman(1997),Nucleic Acids Res.25:3389-3402)进行。BLAST可用于核苷酸序列(核苷酸BLAST)和氨基酸序列(蛋白质BLAST)。本领域技术人员知道比对核酸序列的其它合适程序。
如本文所定义，本发明设想至少85％相同性、优选至少90％相同性和最优选至少95％相同性的序列相同性。然而，本发明还设想渐增优选的至少97.5％、至少98.5％、至少99％、至少99.5％、至少99.8％和100％相同性的序列相同性。
如本文所用，术语“简并”是指遗传密码的简并性。密码子的简并性是遗传密码的冗余，表现为指定氨基酸的三碱基对密码子组合的多样性。遗传密码的简并性是存在同义突变的原因。
样品可以是受试者的体液或来自受试者器官的组织样品。体液的非限制性实例是全血、血浆、血清、尿液、腹膜液和胸膜液、脑脊液、泪液或溶液中的细胞。组织的非限制性实例是结肠、肝脏、乳腺、卵巢和睾丸。组织样品可通过抽吸或穿刺、切除或通过任何其它获得活检或割除细胞材料的手术方法获取。样品可以是经过处理的样品，例如已被冷冻、固定、包埋等的样品。优选的样品类型是福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样品。FFPE样品的制备是标准的医疗实践，这些样品可以保存很长时间。
在本发明的方法的上下文中，用于评估核酸分子或蛋白质或肽的表达、优选表达水平的方法在本领域中已建立。
例如，可以通过实时定量PCR(RT-qPCR)、电泳技术或DNA微阵列(Roth(2002),Curr.Issues Mol.Biol.,4:93-100)评估核酸分子的表达，其中优选RT-qPCR。在这些方法中，表达水平可以针对样品中一种或多种参考基因的(平均)表达水平进行标准化。如本文所用，术语“参考基因”是指在被检查的系统即肿瘤中在RNA转录物/mRNA水平具有相对不变的表达水平的基因。这种基因可以称为管家基因。参考基因的非限制性实例是CALM2、B2M、RPL37A、GUSB、HPRT1和GAPDH，优选CALM2和/或B2M。其它合适的参考基因是本领域技术人员已知的。
RT-qPCR在热循环仪中进行，该热循环仪能用至少一个特定波长的光束照射每个样品并检测激发的荧光团发出的荧光。热循环仪还能快速加热和冷却样品，从而利用核酸和DNA聚合酶的物理化学特性。在实时qPCR中检测PCR产物的两种常用方法是：(1)嵌入任何双链DNA的非特异性荧光染料，以及(2)由标记有仅在探针与其互补序列杂交后才允许检测的荧光报告分子的寡核苷酸组成的序列特异性DNA探针(例如TaqMan探针)。探针通常是荧光标记的探针。优选地，荧光标记的探针由用荧光报告染料和猝灭剂染料标记的寡核苷酸组成(＝双标记探针)。合适的荧光报告分子和猝灭染料/部分是本领域技术人员已知的，包括但不限于报告染料/部分6-FAMTM、JOETM、
Figure BDA0003711643260000051
和猝灭剂染料/部分dabcyl、TAMRATM、BHQTM-1、-2或-3。优选地，根据本发明使用的引物长度为15至30个核苷酸，特别是脱氧核糖核苷酸。在一个实施方案中，引物被设计成(1)特异于HLA基因或源自其的靶mRNA序列，(2)提供小于120bp(优选小于100bp)的扩增子大小，(3)是mRNA特异性的(考虑到外显子/内含子；优选不扩增基因组DNA)，(4)没有二聚化趋势和/或(5)具有从58℃至62℃范围的解链温度Tm(优选Tm约为60℃)。如前所述，根据(2)的RT-qPCR需要探针，但在根据(1)的RT-qPCR的情况下，探针可以用嵌入染料代替，例如SYBR green。
RT-qPCR在下面实施例中示例说明。用于检测HLA-H、J、L和G表达的特异性引物如表1所示。一或多个这些引物对优选用于检测HLA-H、J、L和/或G或如本文定义的由其衍生的核酸分子的表达。每个这些引物对更优选与表1所示的相应探针一起使用。
作为qPCR的一个替代方案，也可以使用电泳技术或作为另一个替代的DNA微阵列以获得本发明第一方面的核酸分子的水平。常规的mRNA鉴定和定量方法是组合凝胶电泳(提供大小信息)和序列特异性探查。Northern印迹是后者中最常用的技术。核糖核酸酶保护测定(RPA)是作为Northern印迹的更灵敏、更省力的替代方法而开发的。在溶液中用标记的核糖核苷酸探针进行杂交，然后用选择性降解单链RNA的核糖核酸酶(例如RNase A和RNase T1)的混合物消化未杂交的样品和探针。随后的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳提供了一种定量手段，也提供了探针杂交区域的大小。对于Northern印迹和RPA，定量的准确性和精密性取决于检测方法和使用的参考或标准。最常见的是，将探针用32P或33P放射性标记，在这种情况下，最终凝胶暴露在X射线胶片或荧光屏上，并分别用光密度计或荧光成像仪量化每个条带的强度。在这两种情况下，可以调整曝光时间以适应所需的灵敏度，但基于荧光的技术通常更敏感并且具有更大的动态范围。作为使用放射性的替代方法，可以将探针用抗原或半抗原标记，所述抗原或半抗原随后由辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶缀合抗体结合，并在加入底物后通过在胶片或荧光成像仪上的化学发光进行量化。在所有这些成像应用中，应该减去没有探针的凝胶的相邻区域的背景。所述凝胶形式的最大优点是任何参考标准都可以与样品同时成像。同样，对所有样品在相同条件下进行管家基因的检测。
此外，可以使用下一代测序法(NGS)(Behjati and Tarpey,Arch Dis Child EducPrac Ed.2013 Dec；98(6):236)。NGS是革新了基因组研究的一种RNA或DNA测序技术。使用NGS可以在一天内对整个人类基因组进行测序。相比之下，以前用于破译人类基因组的Sanger测序技术需要十多年才能提供最终草图。鉴于本发明，NGS可用于以开放组态(全基因组外显子组测序)进行量化或作为携带本申请中公开的相应HLA基因和异构体的聚焦面。
对于构建DNA微阵列，出现了两种技术。通常，在每种情况下，设计阵列的起点是一组对应于待探测的基因或推定基因的序列。在第一种方法中，在玻璃基材上化学合成寡核苷酸探针。由于寡核苷酸与cDNA探针杂交的效率不同，因此合成了与每个感兴趣基因互补的多种寡核苷酸探针。此外，对于阵列上的每个完全互补的寡核苷酸，构建在单个核苷酸位置具有错配的寡核苷酸并用于标准化。寡核苷酸阵列常以约104至106个探针/cm2的密度创造。DNA微阵列构建的第二种主要技术是将cDNA探针直接经机器人打印到载玻片或其它合适的基材上。使用通用引物通过PCR从普通载体中获得每个感兴趣基因的DNA克隆，纯化并扩增。探针自动沉积在大小为50-200μm的点中。在这个间距下，可以实现例如大约103个探针/cm2的密度。
蛋白质或肽的表达可以例如通过使用“与蛋白质或肽结合的分子”及优选“与蛋白质或肽特异性结合的分子”来确定。与蛋白质或肽结合的分子是指在已知条件下主要与所述蛋白质或肽结合的分子。蛋白质或肽的表达也可以通过使用Western印迹分析、质谱分析、FACS-分析、ELISA和免疫组织化学来获得。这些技术是可用于定性、半定量和/或定量检测蛋白质或肽的方法的非限制性实例。
Western印迹分析是一种广泛使用且熟知的分析技术，用于检测给定样品(例如组织匀浆或机体提取物)中的特定蛋白质或肽。其使用凝胶电泳根据(多)肽的长度分离天然或变性(变性条件)的蛋白质或肽或蛋白质的3-D结构分离(天然/非变性条件)。然后将蛋白质或肽转移到膜(通常是硝酸纤维素或PVDF)上，其中使用特异于靶蛋白质的抗体对其进行探测(检测)。
此外，质谱(MS)分析是一种广泛使用且熟知的分析技术，其中测量带电粒子的质荷比。质谱法用于确定粒子的质量，用于确定样品或分子的元素组成，以及用于阐明分子例如蛋白质、肽和其它化合物的化学结构。MS原理包括将化合物电离以产生带电分子或分子片段并测量其质荷比。
荧光激活细胞分选(FACS)分析是一种广泛使用且熟知的分析技术，其中基于每个细胞的荧光特性的特定光散射对生物细胞进行分选。可以将细胞在4％甲醛中固定，用0.2％Triton-X-100透化，并与荧光团标记的抗体(例如单克隆或多克隆抗HLA抗体)一起温育。
酶联免疫吸附测定(ELISA)也是一种广泛使用且熟知的灵敏分析技术，其中将酶与抗体或抗原连接，作为检测特定蛋白质或肽的标志物。
免疫组织化学(IHC)是最常见的免疫染色应用。它涉及通过利用抗体与生物组织中的抗原特异性结合的原理，选择性地鉴别组织切片细胞中的抗原(蛋白质)的过程。与特定装置组合，IHC可用于蛋白质表达的定量原位评估(参见Cregger et al.(2006)ArchPathol Lab Med,130:1026-1030)。定量IHC利用染色强度与绝对蛋白质水平相关的事实。
本申请人之前出人意料地发现HLA-L、HLA-H和HLA-J在本领域被错误地注释为假基因。事实上，这些基因是编码蛋白质的并且在多种癌症中检测到HLA-L、HLA-H和HLA-J的表达(PCT/EP2019/060606，EP19184729.2，EP19184681.5和EP19184717.7)。此外，在HLA-V和HLA-Y中还发现了启动子区域和开放阅读框。由于HLA-L、HLA-H、HLA-J、HLA-V和HLA-Y在本领域均被错误注释，因此HLA-L、HLA-H、HLA-J、HLA-V和HLA-Y可以统称为新HLA-组，在此称为Iw类。此外，发现膀胱癌患者中HLA-L、HLA-H和HLA-J的高表达水平与这些患者的生存负相关。这些HLA基因的表达水平越高，患者越可能在2年内死于癌症(EP19184681.5和EP19184717.7)。这些证据表明可溶性HLA形式L、H和J的表达被肿瘤用作逃避肿瘤患者免疫系统的机制。对于HLA-V和HLA-Y可以相同假设。不希望受该理论束缚，本发明人相信这些可溶性HLA由肿瘤细胞周围的云状物形成，其阻止肿瘤细胞被肿瘤患者的免疫系统识别。可见能在核酸或蛋白质水平上抑制HLA-L、HLA-H、HLA-J、HLA-V和/或HLA-Y的药物是治疗和预防肿瘤的合适手段。同样，能在核酸或蛋白质水平在体内检测HLA-L、HLA-H、HLA-J、HLA-V和/或HLA-Y位点的诊断剂能诊断受试者的肿瘤。然而，由于肿瘤细胞是异源的，并非每个肿瘤都可以使用一种或多种可溶性HLA-L、HLA-H、HLA-J、HLA-V和HLA-Y的表达来逃避免疫系统。为此，本发明第一方面的方法在核酸和/或蛋白质水平确定HLA-L、HLA-H、HLA-J、HLA-V和HLA-Y的表达(步骤A)，然后如果HLA-L、HLA-H、HLA-J、HLA-V和/或HLA-Y表达，则生产药物(步骤B)和/或诊断剂(B’)。然后，这种药物或诊断剂尤其可以用作已从其获得如在本发明第一方面的方法中使用的样品的受试者的个体化定制药物或诊断剂。所附实施例进一步示例说明了这种方法。实施例1和2显示了HLA表达的成像和检测。在实施例3和4中，显示了抗HLA诊断剂和治疗剂的产生。实施例5涉及在癌症小鼠模型中HLA表达的诊断。最后，实施例6至9示例说明了癌症患者中HLA表达的诊断以及抗HLA疗法。
根据本发明第一方面的一个优选实施方案，所述方法包括在步骤(A)中确定以下的表达：(i)至少两个如本发明第一方面所定义的SEQ ID NO:6-10的核苷酸序列的核酸分子或其衍生的核酸分子，(ii)至少两种如本发明第一方面所定义的SEQ ID NO:1-5任一氨基酸序列的蛋白质或其衍生的蛋白质或肽，和/或(iii)至少一种如权利要求1所定义的SEQID NO:6-10的核苷酸序列的核酸分子或其衍生的核酸分子及至少一种如本发明第一方面所定义的SEQ ID NO:1-5任一氨基酸序列的蛋白质或肽或其衍生的蛋白质或肽。
肿瘤不仅可以表达HLA-L、HLA-H、HLA-J、HLA-Y和HLA-V中的一种，也可以表达其两种或所有三种，以逃避肿瘤患者的免疫系统。为此，有利的是在核酸水平、蛋白质水平或其任何混合物中渐增优选确定HLA-L、HLA-H、HLA-J、HLA-Y和HLA-V中至少两种、至少三种、至少四种和所有五种的表达。
测量HLA-L、HLA-H、HLA-J、HLA-Y和HLA-V中一种以上以及任选地另外多种本文描述的HLA基因、蛋白质或肽中的一种，因为其允许编译针对待治疗的患者优化的抗HLA治疗方案。关于诊断，测量一种以上这些HLA使得可以确定HLA表达谱，例如在选择的肿瘤病灶中。
根据本发明第一方面的另一个优选实施方案，所述方法进一步包括在步骤(A)中确定HLA Ib类基因HLA-E、HLA-F和HLA-G中至少一种和/或至少一种由所述MHC Ib类基因产生的蛋白质或肽的表达。
根据本发明第一方面的另一个优选实施方案，所述方法进一步包括在步骤(A)中确定HLA I类基因HLA-A、HLA-B和HLA-C中至少一种和/或至少一种由所述MHC I类基因产生的蛋白质或肽的表达。
根据本发明第一方面的又一个优选实施方案，所述方法进一步包括在步骤(A)中确定HLA II类基因HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DRA和HLA-DRB1中至少一种和/或至少一种由所述MHC II类基因产生的蛋白质或肽的表达。
人类白细胞抗原(HLA)系统或复合体是编码人类主要组织相容性复合体(MHC)蛋白的基因复合体。这些细胞表面蛋白负责调节人体免疫系统。HLA基因复合体位于染色体6p21内的3Mbp节段上。HLA基因具有高度多态性，这意味着其具有许多不同的等位基因，使其能微调适应性免疫系统。由某些基因编码的蛋白质也被称为抗原，因其历史上被发现作为器官移植中的因子。
HLA系统分为I至III三个类别。两个主要类别是MHC I类和II类。
人类具有三个主要或经典的MHC I类基因，称为HLA-A、HLA-B和HLA-C。主要MHC I类基因在本领域中称为I类或Ia类。这些基因产生的蛋白质存在于几乎所有细胞的表面。在细胞表面，这些蛋白质与从细胞内输出的蛋白质片段(肽)结合。MHC I类蛋白质向免疫系统展示这些肽。旨在避免T细胞识别的免疫逃避策略，包括肿瘤MHC Ia类表达的丧失，常见于恶性细胞(Garrido,Curr Opin Immunol.2016Apr；39:44–51)。因此，当肿瘤细胞上调MHCIw类的表达以逃避免疫系统时，肿瘤细胞会降低MHC Ia类的表达。因此，本文所述的疗法可以包括增加HLA-A、HLA-B和HLA-C表达的化合物。在最简单的形式中，这种化合物可以是HLA-A、HLA-B和/或HLA-C或表达HLA-A、HLA-B和/或HLA-C的载体或质粒。由于肿瘤细胞下调MHC Ia类并且上调MHC Iw类以逃避免疫系统，因此检测每类至少一个成员也可以增加本发明方法的选择性。这也是因为MHC Ia类由正常细胞表达，而根据本发明人的知识，MHC Iw类不是。因此，可以更有选择性地确定正常组织和恶性组织之间的边界。
此外，人类还具有三个次要或非经典的MHC I类基因，称为HLA-E、HLA-F和HLA-G。次要MHC I类基因在本领域中称为Ib类。HLA Ib类基因HLA-E、HLA-F和HLA-G是在经典HLAIa类基因之后很久才被发现的。尽管一系列研究的结果支持HLA Ib类分子在成年生存中的功能作用，尤其是HLA-G和HLA-F在生殖和妊娠方面最为广泛及主要研究(Persson et al.(2017),Immunogenetics,DOI 10.1007/s00251-017-0988-4)。胎盘中胎儿-母体交界处HLAIb类蛋白的表达似乎对母体接受半异体胎儿很重要。与HLA Ia类的功能相反，HLA Ib类具有免疫调节和致耐受性功能。HLA-F可以是例如HLA-F1、-F2或-F3。类似地，HLA-G可以是HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6和-G7中任一个。更详细地，HLA-G的初级转录物(8个外显子；NCBI Gene Bank NM_002127.5，2019年9月16日版本)可以剪接成7个编码膜结合(HLA-G1、-G2、-G3、-G4)和可溶性(HLA-G5、-G6、-G7)蛋白质异构体的可变剪接mRNA(Carosella etal.,2008,Trends Immunol.；29(3):125-32)。HLA-G1是全长HLA-G分子，HLA-G2缺少外显子4，HLA-G3缺少外显子4和5，HLA-G4缺少外显子5。HLA-G1至-G4是膜结合分子，因为其存在由外显子6和7编码的跨膜和细胞质尾区。HLA-G5与HLA-G1相似但保留内含子5，HLA-G6缺少外显子4但保留内含子5，HLA-G7缺少外显子4但保留内含子3。由于存在包含提前终止密码子以阻止跨膜和细胞质尾区的翻译的内含子5，HLA-G5和-G6是可溶形式。由于存在包含提前终止密码子的内含子3，HLA-G7是可溶的。HLA-F也是可变剪接的。三种异构体F1、F2和F3都是膜结合异构体。没有报道HLA-E的异构体，HLA-E是膜结合的。HLA-E、HLA-F1、F2、F3和HLA-G1、G2、G3、G4、G5、G6和G7的氨基酸序列分别在SEQ ID NO:13-23中示出，编码这些氨基酸序列的核苷酸序列分别在SEQ ID NO:24-34中示出。MHC Ib类蛋白质和肽还包含其开放构象异构体形式，如上文结合HLA-L所讨论的。例如，HLA-F的开放构象异构体在现有技术中是已知的；Garcia-Beltran(2016)；Nat Immunol.2016Sep；17(9):1067–1074。例如，除了经典HLA构象和与其它HLA重链的复合物外，还有一个稳定的HLA-F开放构象(OC)，其特征在于不存在肽结合槽中结合的β2-微球蛋白和肽(Sim et al.(2017)Immunity 2017,46,972–974)。一些HLA基因例如HLA-F与其它HLA I类分子的重链形成复合物(Goodridge et al(2010)J.Immunol.2010,184,6199–6208)。这些开放构象异构体和复合物涵盖在可以根据本发明使用的HLA Ib类基因中。正如在MHC Iw类的情况下，肿瘤上调MHC Ib类的表达以逃避免疫系统一样(Würfel et.al.(2019),Int.J.Mol.Sci.2019,20,1830；doi:10.3390/ijms20081830)。因此，本文所述的疗法可以包含HLA-E、F和/或G的抑制剂。优选的Iw类抑制剂的类型实例(例如抗体、siRNA、小抗体、抗体模拟物、分子等)在下文描述并且这些优选类型比照适用于Ib抑制剂。
人类有六个主要MHC II类基因：HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DRA和HLA-DRB1。MHC II类基因为制造几乎只存在于某些免疫系统细胞表面的蛋白质提供了指导。与MHC I类蛋白质一样，这些蛋白质向免疫系统展示肽。MHC II类基因为制造几乎只存在于某些免疫系统细胞表面的蛋白质提供了指导。与MHC I类蛋白质一样，这些蛋白质向免疫系统展示肽。Axelrod et al.(2019),Clin Cancer Res,DOI:10.1158/1078-0432回顾了肿瘤细胞对MHC-II表达的生物学结果。越来越多的证据表明，肿瘤特异性MHC-II与癌症患者包括接受免疫疗法治疗的那些患者以及具有肿瘤排斥反应的小鼠模型的良好结果相关。例如，肿瘤细胞上MHC-II分子的表达可以预测对免疫检查点阻断的应答。
人类白细胞抗原(HLA)分子是被免疫系统免疫识别和随后杀死肿瘤细胞所必需的，因为肿瘤抗原必须以HLA限制方式呈递才能被T细胞受体识别。HLA-Ia表达受损会阻止细胞毒性免疫机制的激活，而HLA-II表达受损会影响抗原呈递细胞的抗原呈递能力。肿瘤细胞导致的异常HLA-Ib表达通过抑制几乎所有免疫细胞的活性来促进免疫逃避(Rodriguez(2017),Immunogenetics(2017),Oncology Letters,https://doi.org/10.3892/ol.2017.6784,pages:4415-4427和EP2561890B1及Würfel et al.(2019),Int.J.Mol.Sci.2019,20,1830；doi:10.3390/ijms20081830)。
更详细地，肿瘤细胞表面的HLA-I(a)表达改变是促进致癌作用的早期和频繁事件，因为HLA-I(a)对于肿瘤细胞的免疫识别以及肿瘤与免疫细胞之间的信号传导至关重要。一些研究报告了不同人类肿瘤中经典HLA-I(a)分子表达的全部或部分丧失，其中至少50％的多个HLA等位基因丧失是由杂合性(LOH)事件的丧失引起的。肿瘤细胞用来避免被各种免疫效应物识别的另一种HLA介导的策略是次要或非经典HLA-Ib分子的异常表达，其作为免疫感受态细胞的抑制剂配体，允许肿瘤免疫逃避。
由于上述原因，在本发明第一方面的方法中进一步评估一或多个HLA Ia类、HLAIb类和/或HLA II类基因或蛋白质或肽的表达是有利的。这个表达分析的结果提供了关于肿瘤如何逃避受试者免疫系统的进一步信息以及因此可以考虑进一步的信息以便为肿瘤患者提供对抗肿瘤的定制药物或在体内检测肿瘤部位的定制诊断剂。
例如，在检测到HLA Ib类表达的情况下，还优选将能在核酸或蛋白质水平抑制检测到的HLA Ib类的化合物掺入药物中，正如上文关于新HLA Iw类所述。类似地，在检测到HLA Ib类表达的情况下，还优选将能在核酸或蛋白质水平在体内检测HLA Ib类的位点和/或量的化合物掺入诊断剂中，正如上文关于新HLA Iw类所述。在这方面，如在上文和下文中描述的与Iw类有关的优选特征和实施方案比照适用于Ib类。
根据本发明第一方面的另一个优选实施方案，所述方法还包括在步骤(A)中确定至少一种生长因子和/或至少一种肿瘤标志物和/或在妊娠早期和癌胚消退中表达的至少一种蛋白质的表达。
生长因子是能刺激细胞生长、增殖、愈合和/或细胞分化的天然存在的物质。生长因子在肿瘤发生和肿瘤进展中的作用在例如Witsch et al.(2011),Physiology(Bethesda).2010 Apr；25(2):85–101中进行了回顾。肿瘤异常表达生长因子，其影响是肿瘤细胞可以不受控制的方式生长。在检测到生长因子表达的情况下，还优选将能在核酸或蛋白质水平抑制检测到的生长因子的化合物掺入药物中，正如上文关于新HLA Iw类所述。类似地，在检测到生长因子表达的情况下，还优选将能在核酸或蛋白质水平在体内检测生长因子的位点和/或量的化合物掺入诊断剂中，正如上文关于新HLA Iw类所述。在这方面，如本文上文和下文描述的与Iw类有关的优选特征和实施方案比照适用于生长因子。
肿瘤标志物是在血液、尿液或机体组织中发现的生物标志物，可因一种或多种类型癌症的存在而升高。有许多不同的肿瘤标志物，每一种均指示特定疾病过程，其用于肿瘤学中以帮助检测癌症的存在。本文的肿瘤标志物可以是核酸分子、蛋白质、缀合的蛋白质或肽。因此，检测肿瘤标志物可有助于诊断肿瘤。因此，在检测到肿瘤标志物表达的情况下，还优选将能在核酸或蛋白质水平在体内检测肿瘤标志物的位点和/或量的化合物掺入诊断剂中，正如上文关于新HLA Iw类所述。在这方面，如本文上文和下文描述的与Iw类有关的优选特征和实施方案比照适用于肿瘤标志物。
在妊娠早期和癌胚消退期间表达的蛋白质(例如癌胚抗原(CEA)基因家族)通常在出生后不再高表达。这些蛋白质的正常功能是构建组织架构和调节不同的信号转导。它们的异常表达导致人类恶性肿瘤的发展。特别地，CEA和CEACAM6在许多类型的人类癌症中上调。在人类恶性肿瘤中发现了其异常表达。在检测到这种蛋白质表达的情况下，还优选将能在核酸或蛋白质水平抑制检测到的蛋白质的化合物掺入药物中，正如上文关于新HLA Iw类所述。类似地，在检测到这种蛋白质表达的情况下，还优选将能在核酸或蛋白质水平在体内检测所述蛋白质的位点和/或量的化合物掺入诊断剂中，正如以上关于新HLA Iw类所述。在这方面，如本文上文和下文描述的与Iw类有关的优选特征和实施方案比照适用于这种蛋白质。
根据本发明第一方面的更优选实施方案，所述至少一种生长因子选自表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、生长分化因子-9(GDF9)、肝细胞生长因子(HGF)、肝癌衍生生长因子(HDGF)、角质细胞生长因子(KGF)、神经生长因子(NGF)、胎盘生长因子(PGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、基质细胞衍生因子1(SDF1)、转化生长因子和血管内皮生长因子。
上述生长因子列表是优选的，因为对于这些生长因子，已知其表达驱动肿瘤增殖。
根据本发明第一方面的另一个更优选的实施方案，所述至少一种肿瘤标志物选自生长抑素受体、TSH(促甲状腺素)受体、酪氨酸受体和PSMA(前列腺特异性膜抗原)。
上述肿瘤标志物列表是优选的，因为这些标志物目前用于某些肿瘤的诊断。
根据本发明第一方面的另一个优选实施方案，(i)所述药物是或包含能抑制所述至少一种核酸分子表达的小分子、适体、siRNA、shRNA、miRNA、核酶、反义核酸分子、基于CRISPR-Cas9的构建体、基于CRISPR-Cpf1的构建体、大范围核酸酶、锌指核酸酶或转录激活因子样(TAL)效应子(TALE)核酸酶，和/或(ii)所述药物是或包含能抑制所述至少一种蛋白质或肽的小分子、抗体、蛋白质药物或适体，其中所述蛋白质药物优选是抗体模拟物，并且其中所述抗体模拟物优选选自affibody、adnectin、anticalin、DARPin、avimer、nanofitin、affilin、Kunitz结构域肽和
Figure BDA0003711643260000111
和/或(iii)所述诊断剂是或包含能结合所述至少一种表达的核酸分子的小分子、适体、siRNA、shRNA、miRNA、核酶、反义核酸分子、基于CRISPR-Cas9的构建体、基于CRISPR-Cpf1的构建体、大范围核酸酶、锌指核酸酶和转录激活因子样(TAL)效应子(TALE)核酸酶，和/或(iv)所述诊断剂是或包含能结合所述至少一种表达的蛋白质或肽的小分子、抗体、蛋白质药物或适体，其中所述蛋白质药物优选是抗体模拟物，并且其中所述抗体模拟物优选选自affibody、adnectin、anticalin、DARPin、avimer、nanofitin、affilin、Kunitz结构域肽和
Figure BDA0003711643260000112
如本文所用，“小分子”优选是有机分子。有机分子涉及或属于具有碳基的化合物类别，碳原子通过碳-碳键连接在一起。术语有机的原始定义与化合物的来源有关，有机化合物是从植物或动物或微生物来源获得的那些含碳化合物，而无机化合物是从矿物来源获得的。有机化合物可以是天然的或合成的。有机分子优选是芳族分子，更优选是杂芳族分子。在有机化学中，术语芳香性用于描述具有共振键环的环状(环形)平面(扁平)分子，与具有相同原子集的其它几何或连接排列相比表现出更高的稳定性。芳族分子非常稳定，不易分解与其它物质反应。在杂芳族分子中，芳环中的至少一个原子是碳以外的原子，例如N、S或O。对于所有上述有机分子，分子量优选在200Da至1500Da的范围，更优选在300Da至1000Da的范围。
或者，根据本发明的“小分子”可以是无机化合物。无机化合物来源于矿物来源，包括所有不含碳原子的化合物(二氧化碳、一氧化碳和碳酸盐除外)。优选地，所述小分子的分子量小于约2000Da，或小于约1000Da，例如小于约500Da，甚至更优选小于约Da amu。小分子的大小可以通过本领域熟知的方法例如质谱法来确定。例如，可以基于靶分子的晶体结构设计小分子，其中可以在体内测定例如体内高通量筛选(HTS)测定中鉴定和验证与生物活性相关的位点。
根据本发明使用的术语“抗体”包含例如多克隆或单克隆抗体。此外，术语“抗体”还包含仍保留对于靶例如HLA-J的结合特异性的其衍生物或片段。抗体片段或衍生物尤其包括Fab或Fab’片段、Fd、F(ab’)2、Fv或scFv片段、单结构域VH或V-样结构域，例如VhH或V-NAR-结构域，以及多聚体形式，例如微型抗体(minibody)、双特异抗体(diabody)、三特异抗体(tribody)或三重抗体(triplebody)、四特异抗体(tetrabody)或化学缀合的Fab’-多聚体(见例如Harlow and Lane"Antibodies,A Laboratory Manual",Cold Spring HarborLaboratory Press,198；Harlow and Lane“Using Antibodies:A Laboratory Manual”Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999；Altshuler EP,Serebryanaya DV,Katrukha AG.2010,Biochemistry(Mosc).,vol.75(13),1584；Holliger P,HudsonPJ.2005,Nat Biotechnol.,vol.23(9),1126)。多聚体形式特别包括可以同时结合两种不同类型抗原的双特异性抗体。第一抗原可见于根据本发明的蛋白质上。第二抗原可以例如是在癌细胞或某些类型癌细胞上特异性表达的肿瘤标志物。双特异性抗体形式的非限制性实例是Biclonics(双特异性、全长人IgG抗体)、DART(双亲和重新靶向抗体)和BiTE(由不同抗体的两个单链可变片段(scFv)组成)分子(Kontermann and Brinkmann(2015),DrugDiscovery Today,20(7):838-847)。使用这种双特异性抗体可以将双特异性抗体的抗肿瘤作用集中到肿瘤细胞上。
术语“抗体”还包括诸如嵌合抗体(人恒定结构域、非人可变结构域)、单链和人源化抗体(除非人CDR外的人抗体)的实施方案。
用于产生抗体的各种技术在本领域中是熟知的并且描述于例如Harlow and Lane(1988)and(1999)及Altshuler et al.,2010,loc.cit.。因此，多克隆抗体可以在用抗原与添加剂和佐剂的混合物免疫后的动物的血液中获得，单克隆抗体可以通过提供由连续细胞系培养物产生的抗体的任何技术来产生。这种技术的实例描述于例如Harlow E and LaneD,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1988；Harlow E and Lane D,UsingAntibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999，并包括最初由
Figure BDA0003711643260000121
and Milstein,1975描述的杂交瘤技术，三瘤技术，人B细胞杂交瘤技术(见例如Kozbor D,1983,Immunology Today,vol.4,7；Li J,et al.2006,PNAS,vol.103(10),3557)以及产生人单克隆抗体的EBV-杂交瘤技术(Cole et al.,1985,Alan R.Liss,Inc,77-96)。此外，重组抗体可以从单克隆抗体获得或可以使用各种展示方法如噬菌体、核糖体、mRNA或细胞展示方法从头制备。用于表达重组(人源化)抗体的合适系统可以选自例如细菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞系或转基因动物或植物(见例如美国专利6,080,560；Holliger P,Hudson PJ.2005,Nat Biotechnol.,vol.23(9),11265)。此外，描述的用于产生单链抗体的技术(尤其参见美国专利4,946,778)可以适用于产生特异于例如HLA-J的表位的单链抗体。BIAcore系统中采用的表面等离子共振可用于提高噬菌体抗体的效力。
如本文所用，术语“抗体模拟物”是指与抗体一样可以特异性结合抗原如HLA-J蛋白但在结构上与抗体不相关的化合物。抗体模拟物通常是摩尔质量约为3至20kDa的人工肽或蛋白质。例如，抗体模拟物可以选自affibody、adnectin、anticalin、DARPin、avimer、nanofitin、affilin、Kunitz结构域肽、
Figure BDA0003711643260000122
三特异性结合分子和prododies。这些多肽在本领域中是熟知的并且在下文中进一步详细描述。
如本文所用，术语“affibody”是指衍生自葡萄球菌蛋白A的Z结构域的抗体模拟物家族。在结构上，affibody分子基于也可以掺入融合蛋白质中的三螺旋束结构域。affibody本身的分子量约为6kDa，在高温和酸性或碱性条件下是稳定的。通过随机化位于参与亲本蛋白质结构域的结合活性的两个α-螺旋中的13个氨基酸获得靶特异性(Feldwisch J,Tolmachev V.；(2012)Methods Mol Biol.899:103-26)。
如本文所用，术语“adnectin”(也称为“单抗体(monobody)”)涉及基于人纤连蛋白III的第10个胞外结构域(10Fn3)的分子，其采用94个残基的Ig样β-夹心折叠，具有2至3个暴露的环，但缺少中心二硫键(Gebauer and Skerra(2009)Curr Opinion in ChemicalBiology 13:245-255)。具有所需靶例如针对HLA-J的特异性的Adnectin可以通过在蛋白质的特定环中引入修饰来遗传工程化。
如本文所用，术语“anticalin”是指衍生自脂质运载蛋白的工程化蛋白质(BesteG,Schmidt FS,Stibora T,Skerra A.(1999)Proc Natl Acad Sci U S A.96(5):1898-903；Gebauer and Skerra(2009)Curr Opinion in Chemical Biology 13:245-255)。Anticalin具有八链β-桶，其在脂质运载蛋白中形成高度保守的核心单元并通过在开放端的四个结构可变环自然形成配体的结合位点。Anticalin虽然与IgG超家族不同源，但显示出迄今为止被认为是抗体结合位点的典型特征：(i)由于序列变异而导致的高结构可塑性和(ii)提高的构象灵活性，允许诱导以适应不同形状的靶。
如本文所用，术语“DARPin”是指经设计的锚蛋白重复结构域(166个残基)，其提供通常由三个重复的β-转角产生的刚性界面。DARPin通常携带对应于人工共有序列的三个重复，其中每个重复的六个位置是随机化的。因此，DARPin缺乏结构灵活性(Gebauer andSkerra,2009)。
如本文所用，术语“avimer”是指一类抗体模拟物，其由两个或更多个肽序列组成，每个肽序列具有30至35个氨基酸，其衍生自各种膜受体的A结构域并通过接头肽连接。靶分子的结合通过A结构域发生，可以通过例如噬菌体展示技术来选择对于例如HLA-J具有所需结合特异性的结构域。avimer中包含的不同A结构域的结合特异性可以但非必须相同(Weidle UH,et al.,(2013),Cancer Genomics Proteomics；10(4):155-68)。
“nanofitin”(也称为affitin)是一种抗体模拟蛋白，来源于嗜酸嗜热硫化叶杆菌(Sulfolobus acidocaldarius)的DNA结合蛋白Sac7d。Nanofitin通常具有约7kDa的分子量，通过随机化结合表面上的氨基酸而被设计为特异性结合靶分子，例如HLA-J(MouratouB,Béhar G,Paillard-Laurance L,Colinet S,Pecorari F.,(2012)Methods Mol Biol.；805:315-31)。
如本文所用，术语“affilin”是指通过使用γ-B结晶或泛素作为支架并通过随机诱变修饰这些蛋白质表面上的氨基酸而开发的抗体模拟物。例如通过噬菌体展示或核糖体展示技术选择具有例如针对HLA-J具有所需靶特异性的affilin。根据支架的不同，affilin的分子量约为10或20kDa。如本文所用，术语affilin还指affilin的二聚或多聚形式(Weidle UH,et al.,(2013),Cancer Genomics Proteomics；10(4):155-68)。
“Kunitz结构域肽”衍生自Kunitz型蛋白酶抑制剂如牛胰蛋白酶抑制剂(BPTI)、淀粉样前体蛋白(APP)或组织因子途径抑制剂(TFPI)的Kunitz结构域。Kunitz结构域具有约6kDA的分子量，可以通过展示技术例如噬菌体展示选择例如对于HLA-J具有所需靶特异性的结构域(Weidle et al.,(2013),Cancer Genomics Proteomics；10(4):155-68)。
如本文所用，术语
Figure BDA0003711643260000131
是指源自人Fyn SH3结构域的非免疫球蛋白衍生的结合多肽。Fyn SH3衍生的多肽在本领域中是熟知的并且已经描述于例如Grabulovski etal.(2007)JBC,282,p.3196-3204；WO 2008/022759；Bertschinger et al(2007)ProteinEng Des Sel 20(2):57-68；Gebauer and Skerra(2009)Curr Opinion in ChemicalBiology13:245-255或Schlatter et al.(2012),MAbs 4:4,1-12)。
如本文所用，术语“三特异性结合分子”是指具有三个结合结构域并因此能结合、优选特异性结合三个不同表位的多肽分子。这三个表位中至少一个是本发明第四方面的蛋白质的表位。两个其它表位也可以是本发明第四方面的蛋白质的表位或可以是一种或两种不同抗原的表位。三特异性结合分子优选是TriTac。TriTac是实体瘤的T细胞衔接器，由三个结合域组成，被设计为具有延长的血清半衰期，大小约为单克隆抗体的三分之一。
适体是结合特定靶分子的核酸分子或肽分子。适体通常通过从大型随机序列库中选择而产生，但天然适体也存在于核糖开关(riboswitches)中。适体可作为大分子药物用于基础研究和临床目的。适体可以与核酶结合，在其靶分子存在的情况下进行自切割。这些化合物分子具有额外的研究、工业和临床应用(Osborne et.al.(1997),Current Opinionin Chemical Biology,1:5-9；Stull&Szoka(1995),Pharmaceutical Research,12,4:465-483)。
核酸适体是一般由(通常是短的)寡核苷酸链组成的核酸种类。通常，其已经通过重复多轮的体外选择或等效的SELEX(配体通过指数富集的系统进化)工程化，以结合各种分子靶，例如小分子、蛋白质、核酸，甚至细胞、组织和生物体。
肽适体通常是被设计为干扰细胞内其它蛋白质相互作用的肽或蛋白质。它们由两端连接到蛋白质支架上的可变肽环组成。这种双重结构限制极大地增加了肽适体的结合亲和性至与抗体相当的水平(纳摩尔范围)。可变肽环通常包含10至20个氨基酸，并且支架可以是任何具有良好溶解性质的蛋白质。目前，细菌蛋白硫氧还蛋白-A是最常用的支架蛋白，可变肽环插入野生型蛋白质中的氧化还原活性位点，其为-Cys-Gly-Pro-Cys-环(SEQ IDNO:35)，两个半胱氨酸侧链能形成二硫键。可以使用不同的系统进行肽适体选择，但目前使用最广泛的是酵母双杂交系统。
适体为生物技术和治疗应用提供了实用性，因其提供的分子识别特性可与常用的生物分子、特别是抗体相媲美。除了它们的区别性识别之外，适体还提供优于抗体的优势，因为它们可以在试管中完全工程化，易于通过化学合成产生，具有所需的储存特性，并且在治疗应用中引起很少或没有免疫原性。未修饰的适体从血流中被迅速清除，半衰期为几分钟到几小时，这主要是由于核酸酶降解和通过肾脏从体内清除所致，这是适体固有的低分子量的结果。未经修饰的适体应用目前专注于治疗短暂的病症，例如血液凝固，或治疗可以局部递送的器官例如眼睛。这种快速清除在例如体内诊断成像等应用中可以是一个优势。科学家可以使用多种修饰例如2’-氟取代的嘧啶、聚乙二醇(PEG)键、融合于白蛋白或其它延长半衰期的蛋白质等，从而使适体的半衰期可以延长几天或甚至几周。
如本文所用，术语“probody”是指蛋白酶可激活的前药，例如蛋白酶可激活的抗体前药。例如，probody由原本的IgG重链和修饰的轻链组成。掩蔽肽通过可被肿瘤特异性蛋白酶切割的肽接头与轻链融合。掩蔽肽防止probody与健康组织结合，从而最小化毒副作用。此外，还可以通过probody将小分子、抗体或抗体模拟物和适体的结合和/或抑制活性限制于某些组织或细胞类型，特别是患病的组织或细胞类型。在这种probody中，小分子、抗体或抗体模拟物或适体也与限制或阻止与本发明蛋白质结合的掩蔽肽结合并且该掩蔽肽可以被蛋白酶切割。蛋白酶是通过切割称为底物的特定氨基酸序列将蛋白质消化成更小片段的酶。在正常健康组织中，蛋白酶活性受到严格控制。在癌细胞中，蛋白酶活性上调。在蛋白酶活性受到调节且最小化的健康组织或细胞中，probody的靶结合区域保持被掩盖，因此无法结合。另一方面，在蛋白酶活性上调的患病组织或细胞中，probody的靶结合区域被暴露，因此能结合和/或抑制。
根据本发明，术语“小干扰RNA(siRNA)”，也称为短干扰RNA或沉默RNA，是指长度为18至30个、优选19至25个、最优选21至23个或甚至更优选21个核苷酸的双链RNA分子，其在生物学中发挥多种作用。最值得注意的是，siRNA参与RNA干扰(RNAi)途径，其中siRNA干扰特定基因的表达。除了它们在RNAi途径中的作用外，siRNA还作用于RNAi相关途径，例如作为抗病毒机制或塑造基因组的染色质结构。
天然存在于自然界中的siRNA具有明确定义的结构：短双链RNA(dsRNA)，在任一端具有2-nt的3’突出端。每条链都有5’磷酸基团和3’羟基(-OH)基团。这种结构是dicer加工的结果，dicer是一种将长dsRNA或小发夹RNA转化为siRNA的酶。siRNA也可以外源(人工)引入细胞中以实现感兴趣基因的特异性敲低。基本上任何已知序列的基因因此可以基于与适当定制的siRNA的序列互补性而被靶向。双链RNA分子或其代谢加工产物能介导靶特异性核酸修饰，特别是RNA干扰和/或DNA甲基化。外源引入的siRNA在其3’和5’末端可以没有突出端，然而，优选至少一条RNA链具有5’-和/或3’-突出端。优选地，双链的一端具有1至5个核苷酸、更优选1至3个核苷酸、最优选2个核苷酸的3’-突出端。另一端可以是平端或具有至多6个核苷酸的3’-突出端。通常，本发明展望了任何适合充当siRNA的RNA分子。迄今为止，最有效的沉默是使用由21-nt有义链和21-nt反义链组成的siRNA双链体获得的，这两条链以具有2-nt的3’-突出端的方式配对。2-nt的3’突出端的序列对于被限制为与第一个碱基对相邻的未配对核苷酸的靶识别的特异性有很小的贡献(Elbashir et al.2001)。3’突出端中的2’-脱氧核苷酸与核糖核苷酸一样有效，但通常合成成本更低，并且可以更耐核酸酶。siRNA的递送可以使用本领域已知的任何方法来完成，例如通过将siRNA与盐水组合并通过静脉内或鼻内施用该组合，或通过在葡萄糖(例如5％葡萄糖)或阳离子脂质中配制siRNA，并且聚合物可用于通过静脉内(IV)或腹膜内(IP)的全身途径在体内递送siRNA(Fougerolles et al.(2008),Current Opinion in Pharmacology,8:280-285；Lu et al.(2008),Methods in Molecular Biology,vol.437:Drug Delivery Systems–Chapter 3:Delivering Small Interfering RNA for Novel Therapeutics).
短发夹RNA(shRNA)是一种产生紧密发夹转角的RNA序列，可用于通过RNA干扰来沉默基因表达。shRNA使用引入细胞的载体并利用U6启动子来确保shRNA始终被表达。这个载体通常被传递给子代细胞，从而使基因沉默得以遗传。shRNA发夹结构被细胞机制切割成siRNA，其然后与RNA诱导的沉默复合物(RISC)结合。这个复合物结合并切割与之结合的siRNA匹配的mRNA。用于本发明的si/shRNA优选是使用适当保护的核糖核苷亚磷酰胺和常规DNA/RNA合成仪化学合成的。RNA合成试剂的供应商是Proligo(Hamburg,Germany)，Dharmacon Research(Lafayette,CO,USA)，Pierce Chemical(part of Perbio Science,Rockford,IL,USA)，Glen Research(Sterling,VA,USA)，ChemGenes(Ashland,MA,USA)和Cruachem(Glasgow,UK)。最方便地，siRNA或shRNA得自商用RNA寡核苷酸合成供应商，这些供应商销售不同质量和成本的RNA合成产品。通常，可用于本发明的RNA是常规合成的并且容易以适合RNAi的质量提供。
实现RNAi的其它分子包括例如microRNA(miRNA)。所述RNA种类是单链RNA分子。内源存在的miRNA分子通过与互补mRNA转录物结合并通过类似于RNA干扰的过程触发所述mRNA转录物的降解来调节基因表达。因此，外源miRNA可以在引入相应细胞后用作抑制剂(例如HLA-J的抑制剂)。
核酶(来自核糖核酸酶，也称为RNA酶或催化性RNA)是催化化学反应的RNA分子。许多天然核酶催化其自身的切割或其它RNA的切割，但也发现其催化核糖体的氨基转移酶活性。已充分表征的小自切割RNA的非限制性实例是锤头核酶、发夹核酶、丁型肝炎病毒核酶和体外选择的铅依赖性核酶，而I组内含子是较大核酶的一个实例。近年来，催化自切割的原理已很好确立。在具有核酶活性的RNA分子中，锤头核酶被最佳表征。由于示出锤头结构可以整合到异源RNA序列中并且因此核酶活性可以转移到这些分子上，所以似乎可以产生几乎任何靶序列的催化反义序列，只要靶序列含有潜在的匹配切割位点即可。构建锤头核酶的基本原理如下：选择包含GUC(或CUC)三联体的RNA的感兴趣区域。取两条寡核苷酸链，每条通常有6至8个核苷酸，并在它们之间插入催化性锤头序列。最好的结果通常是用短核酶和靶序列获得的。
根据本发明也可使用的一项最近的进展是识别小化合物的适体与锤头核酶的组合。适体与靶分子结合后诱导的构象变化可以调节核酶的催化功能。
如本文所用，术语“反义核酸分子”是指与靶核酸互补的核酸。根据本发明的反义分子能与靶核酸相互作用，更具体地其能与靶核酸杂交。由于杂合体的形成，一或多个靶基因的转录和/或靶mRNA的翻译被减少或阻断。已经描述了与反义技术相关的标准方法(见例如Melani et al.,Cancer Res.(1991)51:2897-2901)。
CRISPR/Cas9以及CRISPR-Cpf1技术适用于几乎所有细胞/模型生物并可用于敲除突变、染色体缺失、DNA序列编辑和基因表达调节。基因表达调节可以通过使用与转录阻抑物缀合的催化性死亡Cas9酶(dCas9)来操作以阻抑特定基因转录，在此，例如是HLA-J基因。类似地，催化性失活的“死亡”Cpf1核酸酶(来自Prevotella和Francisella-1的CRISPR)可以与合成的转录阻抑物或激活物融合以下调内源性启动子，例如，控制如HLA-J表达的启动子。或者，锌指核酸酶(ZFN)或转录激活因子样效应子核酸酶(TALEN)的DNA结合结构域可以设计为特异性识别靶(例如HLA-J)基因或其启动子区域或其5’-UTR，从而抑制靶基因的表达。
本文还设想了作为靶向感兴趣基因或参与其表达的调节分子的抑制性核酸分子而提供的抑制剂。减少或消除靶基因或调节分子的表达的这种分子包括但不限于大范围核酸酶、锌指核酸酶和转录激活因子样(TAL)效应子(TALE)核酸酶。这种方法在Silva etal.,Curr Gene Ther.2011；11(1):11-27；Miller et al.,Nature biotechnology.2011；29(2):143-148和Klug,Annual review of biochemistry.2010；79:213-231中描述。
根据本发明第一方面的一个更优选的实施方案，将作为药物或包含在药物中的小分子、抗体、蛋白质药物或适体与细胞毒性剂融合，其中所述细胞毒性剂优选是治疗性放射性同位素，更优选是177Lu、90Y、67Cu和225Ac，和/或将作为诊断剂或包含在诊断剂中的小分子、抗体、蛋白质药物或适体与显像剂融合，其中所述显像剂优选是治疗性放射性同位素，更优选是67Ga、44Sc、111In、99mTc、57Co、131I。
根据这个优选实施方案，所述小分子、抗体、蛋白质药物或适体将以缀合物的形式产生。用于设计缀合物的可切割和不可切割接头是本领域已知的。
在这种情况下，所述小分子、抗体、蛋白质药物或适体本身可能不具有抑制作用，但抑制作用仅由缀合配偶体赋予。类似地，所述小分子、抗体、蛋白质药物或适体本身可能无法体内检测肿瘤部位，但所述检测仅由缀合配偶体实现。
在这些情况下，所述小分子、抗体、蛋白质药物或适体赋予所述药物或诊断剂与根据本发明的蛋白质或肽的位点特异性结合。
在药物的情况下，所述细胞毒性剂能够杀死产生和/或结合本发明蛋白质的细胞。因此，通过将结合本发明蛋白质的分子的靶向能力与细胞毒性剂的细胞杀伤能力相结合，所述缀合物成为可以区分健康和患病组织和细胞的抑制剂。类似地，在诊断剂的情况下，所述诊断剂能够检测(例如，使其可见)产生和/或结合本发明蛋白质的细胞。因此，通过将结合本发明蛋白质的分子的靶向能力与诊断剂的细胞杀伤能力相结合，所述缀合物成为可以体内检测肿瘤部位的诊断剂。
治疗性放射性同位素以杀死癌细胞的量直接将辐射递送至肿瘤细胞。这种同位素的实例是177Lu、90Y、67Cu和225Ac。另一方面，治疗性放射性同位素仅以允许通过放射诊断学检测辐射的量将辐射直接递送至肿瘤细胞。这种同位素的实例是67Ga、44Sc、111In、99mTc、57Co、131I。
本发明在第二方面涉及通过本发明第一方面的方法产生的药物用于治疗或预防受试者的肿瘤。
待治疗的受试者优选是从其获得用于本发明第一方面的方法中的样品的同一受试者。结果，受试者接受针对受试者中的肿瘤定制的肿瘤治疗或预防方案。
本发明在第三方面涉及通过本发明第一方面的方法产生的诊断剂用于体内检测受试者的肿瘤部位。
待诊断的受试者优选是从其获得用于本发明第一方面的方法中的样品的同一受试者。结果，受试者接受针对受试者中的肿瘤定制的肿瘤诊断。
根据本发明第三方面的优选实施方案，所述检测包括扫描受试者的整个身体，其中所述扫描优选采用全身正电子发射断层扫描(PET)扫描仪。
全身扫描仪，例如全身正电子发射断层扫描(PET)扫描仪，产生图片，优选整个人体的3D图片。
由于扫描仪的高效率，PET扫描仪特别有优势。它能够使用标准辐射剂量在短至一秒内产生图像，比传统设备快得多。此外，为了帮助减少辐射暴露，可以以仅额外几秒钟扫描时间的代价减少剂量。所述扫描仪可以评估不同组织和器官如何对不同刺激反应。使用这种扫描技术也可以更容易地评估炎症的扩散、不同疾病的影响以及癌症肿瘤的移动性。PET扫描仪优选是Explorer Total Body ScanTM。
根据本发明第三方面的优选实施方案，所述检测包括测量在受试者的肿瘤部位中所述放射性同位素的辐射剂量摄取。
根据这个实施方案，在检测中使用诊断性放射性同位素，更优选67Ga、44Sc、111In、99mTc、57Co、131I。放射性同位素优选是如上文所述的缀合物的部分。
用于测量放射性同位素在受试者的肿瘤部位的辐射剂量摄取的手段和方法在本领域中是已知的，例如来自Eberle Huguette et al.(2014)World J Nucl Med.；13(1):50–55或Francis et al.(2015)Journal of Radiation Research and AppliedSciences,8(2):182-189。例如，Siemens e.cam SPECT系统可用于成像，并且可以通过软件例如Image J软件基于图像对所述摄取进行量化。
根据本发明第三方面的更优选的实施方案，基于所测量的辐射剂量摄取来确定药物的治疗有效量，其中所述药物优选通过本发明第一方面的方法产生。
肿瘤中放射性核素摄取的量化在评估患者对治疗的应答、对关键器官的剂量和诊断肿瘤中很重要并被推荐(Francis et al.(2015)Journal of Radiation Research andApplied Sciences,8(2):182-189)。例如，诊断性放射性同位素的低摄取表明需要更高剂量的治疗性放射性同位素，反之亦然。
关于在本说明书中特别是在权利要求中表征的实施方案，旨在将在从属权利要求中提及的每个实施方案与所述从属权利要求所从属的每个(独立或从属)权利要求的每个实施方案组合。例如，在独立权利要求1列举3个选项A、B和C的情况下，从属权利要求2列举3个选项D、E和F以及权利要求3从属于权利要求1和2并列举3个选项G、H和I的情况下，应当理解说明书明确地公开了对应于以下组合的实施方案：A、D、G；A、D、H；A、D、I；A、E、G；A、E、H；A、E、I；A、F、G；A、F、H；A、F、I；B、D、G；B、D、H；B、D、I；B、E、G；B、E、H；B、E、I；B、F、G；B、F、H；B、F、I；C、D、G；C、D、H；C、D、I；C、E、G；C、E、H；C、E、I；C、F、G；C、F、H；C、F、I，除非另有特别说明。
类似地，并且在独立权利要求和/或从属权利要求没有列举选项的那些情况下，应当理解，如果从属权利要求回引多个在前的权利要求，则由此涵盖的主题的任何组合被认为被明确公开。例如，在独立权利要求1、回引权利要求1的从属权利要求2和回引权利要求2和1的从属权利要求3的情况下，权利要求3和1的主题的组合与权利要求3、2和1的主题的组合一样被清楚且明确地公开。在存在引用权利要求1至3任一项的进一步的从属权利要求4的情况下，则权利要求4和1、权利要求4、2和1、权利要求4、3和1以及权利要求4、3、2和1的主题的组合被清楚且明确地公开。
附图说明
图1：α2和3结构域、跨膜结构域和具有胞质区的相应连接肽中HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F异构体、HLA-G、HLA-H和HLA-J的蛋白质序列概要。共有序列在比对序列上方以灰色突出显示。HLA肽序列的差异也以灰色突出显示。预测的α3与其它HLA基因不同并以灰色突出显示。用于产生独特型HLA-J抗体的肽序列用褐色箭头表示，命名为“JULY抗体”。
图2：通过western印迹分析在来自患者的卵巢癌、乳腺癌和膀胱癌组织以及胎盘组织中的HLA-J蛋白表达的证据。
实施例示例说明了本发明。
实施例1：通过使用放射性核素标记的抗HLA-抗体对癌细胞成像
这个实施例描述了借助放射性核素标记的抗体产生个性化抗肿瘤疗法，其也象征着治疗诊断学。本实施例还描述了一种通过正电子发射断层扫描(PET)和计算机断层扫描(CT)检测和治疗患者中肿瘤和转移灶的体内方法。
在第一步中，使用经诊断性放射性核素标记的抗HLA抗体使所述肿瘤和转移灶的个体和独特的HLA表达模式(成人和/或胚胎和/或以前的“假基因”)可视化。在确定HLA表达模式并评估癌细胞分布和肿瘤负荷后，应用用治疗性放射性核素标记的治疗性个性化抗HLA抗体混合物。治疗应答和成功可以使用已在第一步中应用的经诊断性放射性核素标记的抗HLA抗体来监测。
为了最小化辐射暴露及最大化应用的放射性标记的抗HLA抗体的治疗效果、摄取动力学，在治疗之前确定HLA状态是有利的。
使用全身扫描仪“Explorer Total Body ScannerTM”(United Imaging,Shanghai)进行PET/CT成像以确定HLA表达模式。与其它PET/CT扫描仪相比，这个系统的灵敏度提高了40倍，总测量时间为30秒。其以高6倍的成像分辨率检测大小≥2.8mm的表达HLA的病灶。所述全身扫描仪还降低了患者的辐射负担并最小化副作用。
用于检测仅在肿瘤细胞上表达的HLA Ib类和Iw类基因的抗体例如抗HLA-G抗体(命名为“LILLY1”和“LILLY2”)和抗HLA-J抗体(命名为“JULY”)。这些抗体针对每个HLA Ib和Iw类基因独特的肽序列产生以最小化与其它HLA基因的交叉反应性(BioGenes,Berlin,Germany)。HLA-J抗体已针对HLA-J的独特α3和跨膜结构域的c末端(图1)生成。所述肽序列包括跨α3结构域、连接肽和跨膜结构域的n末端的22个氨基酸。
实施例2：HLA-J蛋白质表达的检测
为了证明HLA-J蛋白质的存在，已经在来自患者的卵巢癌、乳腺癌和膀胱癌组织和胎盘中进行了western印迹分析(n＝1)。在变性条件下，在10％SDS-PAGE凝胶中分离20μg蛋白质组织裂解物，然后湿性转移到硝酸纤维素膜上。与特异性抗HLA-J抗体“JULY”温育后，在与缀合了HPR的抗兔抗体温育后及随后应用TMB底物，观察到紫色沉淀。Western印迹分析显示存在HLA-J蛋白，观察到的大小约为55kDa(图2)。HLA-J的经计算的蛋白质大小约为26.7kDa。关于卵巢癌组织样品，可以在约100kDa检测到更多条带。这些发现可能表明HLA-J主要以二聚体和四聚体构象存在，这是由于可产生二硫键的半胱氨酸残基所致。
实施例3：用68镓标记抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G LILLY-mAb以成像
为全面评估癌细胞分布，将HLA-J抗体JULY和抗HLA-G LILLY用诊断性放射性核素镓-68标记。
镓-68是一种两性元素，根据目前的知识状况，其是从半衰期长达288天的亲代核素锗-68从Ge-68/Ga-68生成器系统中衍生的(Zhernosekov et al.,J Nucl Med 2007Oct；48(10):1741-8)。为获得放射化学性纯的镓-68，对Ge-68/Ga-68生成器进行了阳离子交换后处理，使得能够在10分钟内收集纯镓-68(Mueller et al.,Recent Results CancerRes.2013；194:77-87)。由于镓-68本身的半衰期约为68分钟，因此必须进行快速标记。根据基于盒合成系统点击化学(EZAG,Berlin,Germany)，使用螯合剂DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-N,N',N",N"'-四乙酸)将镓-68对JULY和LILLY进行标记。这个系统为产生放射性药物提供了一种自动化、快速且符合GMP的生产方法。根据欧洲药典V.8.0(EuropeanPharmacopoeia(Ph.Eur.)Vol 8(2013–2016)European Directorate of Quality ofMedicines)的专论对质量、无菌性、内毒素检测以及化学和放射化学纯度进行了检测。在细胞系中以及在来自患者的新鲜冷冻组织载玻片上检查体内的生物分布、结合亲和性和放射剂量测定。
镥-177标记的JULY和LILLY疗法的要求与镥-177PSMA治疗相似(Baum et al.,Nuklearmediziner 2015；38(02):145-152)。根据bad berka方案进行肾脏保护(Schuchardt et al.,Recent Results Cancer Res.2013；194:519-36)。
实施例4：用177镥标记抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G LILLY的疗法
镥-177是一种低能量发射β射线的放射性核素，在软组织中的平均穿透范围为650μm，半衰期为6.72天。这种发射β射线的放射性核素的范围小，但比发射α射线的放射性核素范围大50倍，这使得镥-177成为最佳的治疗放射性核素。低能量γ剂量的发射使其能够通过PET/CT进行成像和分布分析。它是根据专利DE102011051868A1通过镱-176的间接生产路线生成的。如Repetto-Llamazares et al,PLoS One.2014；9(7)所述对抗体JULY和LILLY进行标记。
根据欧洲药典V.8.0(European Pharmacopoeia(Ph.Eur.)Vol 8(2013–2016)European Directorate of Quality of Medicines)的专论对质量、无菌性、内毒素检测以及化学和放射化学纯度进行检测。在细胞系中以及在来自患者的新鲜冷冻组织载玻片上检查生物分布、结合亲和性和放射剂量测定。
实施例5：在BBN诱导的膀胱癌致癌动物模型中通过尾静脉静脉注射和膀胱滴注的全身应用后，68镓放射性标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G Lilly-mab在体内的生物分布
实验动物设置
根据George et al(Transl Oncol.2013Jun；6(3):244–255)所述，在C57BL/6/c小鼠(Charles River Laboratories International,Inc,Wilmington,MA)中用膀胱特异性致癌物N-丁基-N-(4-羟丁基)亚硝胺(BBN)诱导膀胱癌。简而言之，将动物分为两组(n＝27-30/组)。第1组作为对照，只接受自来水，而第2组用BBN处理。BBN(TCI America,Portland,OR)致癌物以0.05％的浓度在饮用水中随意供应给8至20周龄的小鼠。记录耗水量以确定BBN摄入量并进行组间比较。在8至32周龄之间的多个时间点测量体重。监测动物的肿瘤进展和存活并在32周后处死以获得膀胱和器官重量。
使用68镓放射性标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G Lilly-Mab的生物分布：
在成功发展为膀胱癌的动物以及无肿瘤小鼠中评估了生物分布。动物膀胱内注射在100μL的PBS中的6.66MBq的镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb或镓-68标记的抗HLA-GLilly-mab。注射后45分钟和90分钟，处死小鼠并制备器官以在γ计数器中测量镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb或镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb积累。摄取表示为每克组织注射的活性的百分比。分离膀胱并分成两半，其中一部分处理用于组织学和免疫组织化学，另一部分快速冷冻用于RNA分离。
进行第二设置以通过静脉注射到尾静脉中全身应用镓-68标记的抗HLA-JJULY-mAb或镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb来确定全身生物分布。注射后45分钟和90分钟，处死小鼠并制备器官以在γ计数器中测量镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb或镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb积累。摄取表示为每克组织注射的活性的百分比。分离膀胱并分成两半，其中一部分处理用于组织学和免疫组织化学，另一部分快速冷冻用于RNA分离。
使用PET-CT扫描仪监测生物分布。
用177镥放射性标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G Lilly-mAb的放射免疫治疗
对荷瘤小鼠进行放射免疫治疗，并分为9组，每组10只动物。这些组在BBN诱导后1小时、7天或14天接受膀胱内注射在100μL PBS中的0.925MBq的镥-177抗HLA-JJULY-mAb或镥-177抗HLA-G LILLY-mAb，或在BBN诱导后1小时或7天接受膀胱内注射在100μL PBS中的0.37MBq的镥-177抗HLA-J JULY-mAb或68-镓抗HLA-GLILLY-mAb，或在BBN诱导后1小时或7天接受膀胱内注射在40μL的0.9％NaCl中40μg丝裂霉素C，或在BBN诱导后1小时接受膀胱内注射2μg未标记镥-177抗HLA-JJULY-mAb或镥-177抗HLA-G LILLY-mAb。对照组在BBN诱导后1小时后接受膀胱内注射PBS。在治疗期间，对小鼠进行麻醉(90分钟)。
通过静脉注射到尾静脉中全身应用镥-177抗HLA-J JULY-mAb或68-镓抗HLA-GLILLY-mAb进行第二设置。将荷瘤小鼠分为9组，每组10只动物。这些组在BBN诱导后1小时、7天或14天静脉内接受在100μL的PBS中的0.925MBq的镥-177抗HLA-JJULY-mAb或镥-177抗HLA-G LILLY-mAb，或在BBN诱导后1小时或7天静脉内接受在100μL的PBS中的0.37MBq的镥-177抗HLA-J JULY-mAb或68-镓抗HLA-GLILLY-mAb，或在BBN诱导后1小时或7天静脉内接受在40μL的0.9％NaCl中的40μg丝裂霉素C，或在BBN诱导后1小时静脉内接受2μg未标记镥-177抗HLA-J JULY-mAb或镥-177抗HLA-G LILLY-mAb。对照组在接种肿瘤细胞后1小时后接受膀胱内注射PBS。在治疗期间，对小鼠进行麻醉(90分钟)。
使用PET-CT扫描仪监测放射免疫治疗。
组织病理学评估和组织微阵列制备
为评估膀胱组织病理学，首先切除膀胱，纵向切成两半，并固定在10％缓冲福尔马林中。然后按照标准方案将福尔马林固定的膀胱进行石蜡包埋、切片并用苏木精和伊红染色。染色的载玻片由专业病理学家进行组织病理学分级(S.S.S.)，并将膀胱分类为正常或癌性、浸润性或肌层浸润性膀胱。然后对这些进行回顾以标记用于构建组织微阵列的肿瘤区域。使用人工组织阵列仪(Beecher Instruments,Silver Spring,MD)从原始石蜡块中冲压出的0.6-mm圆柱形芯制作组织微阵列。从各个模块制作一式三份的芯以增强代表性的再现性。因此，代表180只雌性小鼠的总共540个芯用于生成五个主模块。从这些模块切下5微米切片并置于带电荷的载玻片(Fisher Scientific,Houston,TX)上并适当染色。简而言之，将这些载玻片脱蜡、再水化并通过微波或蛋白酶K预处理以进行抗原修复。然后使用相应抗体进行免疫组织化学染色。染色程序基于间接生物素-抗生物素蛋白系统，使用通用生物素酰化Ig二抗、DAB底物和苏木精复染。在省略一抗或与无关抗体(小鼠单克隆Ig)温育后获得阴性对照载玻片。
通过Ki-67染色的肿瘤细胞增殖
使用上面生成的组织微阵列，将切片针对Ki-67抗原染色并用单克隆MIB-1抗体(克隆MIB-1，小鼠IgG1，1:100，来自Dako North America Inc，Carpinteria，CA)通过免疫组织化学进行评估，所述抗体在TechMate 500Plus(Dako North America Inc)中温育25分钟并用DAB观测。使用带有×20放大物镜(Caliper,Hopkinton,MA)的CRI多光谱相机的Vectra扫描仪捕获整个组织切片的图像。使用InForm 1.2软件进行图像分析。InForm被训练用于计数每个组织切片的代表性区域中的Ki-67阳性细胞。从图像中，使用Image-ProPlus软件(Media Cybernetics Inc,Bethesda,MD)掩盖了尿路上皮以外的组织区域。使用整个组织切片的图像计算阳性染色细胞的百分比。
凋亡测定
如前所述，使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)测定法通过酶标记DNA链断裂来原位检测细胞死亡。对于阴性对照，末端脱氧核苷酸转移酶用去离子水代替，同时用1.0g/ml DNase I(DN 25；Sigma-Aldrich,St Louis,MO)预处理的切片用作阳性对照。使用如上所述Vectra扫描仪捕获图像，并使用InForm 1.2和Image-Pro Plus软件确定TUNEL阳性细胞的百分比。
HLA免疫组织化学
对于HLA-J和HLA-G的免疫组织化学染色，使用了针对HLA-J和HLA-G的兔多克隆抗体(BioGenes,Berlin,Germany)。HLA-J和HLA-G表达的评定由对组织处理不知情的病理学家(S.S.S.)使用修改版本的Allred评分进行。通过将百分比评级乘以强度获得综合分数，范围从0至9。HLA-J和-G表达评分分组为阴性(0)、低(<6)和高(≥6)。
HLA mRNA表达的分析
从雄性小鼠获得的膀胱标本用QIAshredder柱(Qiagen，Hilden，Germany)制成粉末并均质化并根据制造商的建议用Rneasy Mini Kit(Qiagen，Hilden，Germany)提取总RNA。使用TaqMan引物和探针通过定量实时聚合酶链反应(qPCR)分析对RNA进行定量。通过使用实时PCR(RT-qPCR)对被称为稳定参考/管家基因的组成型表达基因钙调蛋白2基因(CALM2)进行定量，对所有提取物测试足够的高质量RNA含量。为了通过RT-qPCR方法详细分析基因表达，使用了在感兴趣区域两侧的引物和在之间杂交的荧光标记探针。RNA特异性引物/探针序列用于通过将引物/探针序列定位于跨越外显子/外显子边界以进行RNA特异性测量。如果存在同一基因的多个异构体，则选择引物以酌情扩增所有相关或选择的剪接变体。通过常规PCR反应检查所有引物对的特异性。已经针对HLA-H、J、L和G生成了特异性引物(表1)。
Figure BDA0003711643260000221
Figure BDA0003711643260000231
上述引物和探针对应于SEQ ID NO:36至83。例如，HLA-G外显子3的正向引物、探针和反向引物分别为SEQ ID NO:36、37和38。
结果
用膀胱特异性致癌剂BBN处理导致70％肿瘤生长。在膀胱内滴注镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb或镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb(100μL中6.66MBq)后45分钟和90分钟，通过量化68镓活性分析不同器官中放射免疫缀合物的摄取。正如推测的，在局部区域膀胱内应用镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb或镓-68标记的抗HLA-GLilly-mAb确保了所述治疗化合物在膀胱中的极佳保留，而全身活性可忽略不计。这些数据表明低全身毒性，这在处死存活超过300天且没有任何疾病迹象的动物后得到证实。
为了监测在膀胱内镥-177抗HLA-J JULY-mAb和镥-177抗HLA-G LILLY-mAb处理后的治疗应答和效力，在治疗前后不同时间点记录肿瘤的PET-CT图像。在BBN诱导后14天应用镥-177抗HLA-J JULY-mAb和镥-177抗HLA-G LILLY-mAb处理后，可以观察到肿瘤负荷完全根除和降低这两种情况。此外，使用Simple PCI软件在治疗前后通过ROI对选择的小鼠肿瘤中的光发射进行量化。在BBN诱导后7天，用镥-177抗HLA-JJULY-mAb或镥-177抗HLA-GLILLY-mAb处理(0.925MBq)的小鼠膀胱内肿瘤的光发射表明膀胱内肿瘤的完全或部分缓解。
在肿瘤细胞滴注后1小时，用PBS或未标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-GLILLY-mAb处理的小鼠分别达到41天和89天的中位数生存。在BBN诱导后1小时接受0.37或0.925MBq的镥-177抗HLA-J JULY-mAb和镥-177抗HLA-G LILLY-mAb处理治疗的组均显示超过300天(P<0.001)的显著延长的中位数生存并且没有发生任何肿瘤。在90％的动物中观察到无病生存。
实施例6：68镓放射性标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G Lilly-mAb的生物分布以及在滴注到对于基于铂的新辅助剂化疗无应答的晚期肌层浸润性膀胱癌患者的膀胱后用这些镥-177放射性标记的抗体进行治疗
在患有晚期肌层浸润性膀胱癌的患者中用镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb和镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb抗体的生物分布，这些患者不应答基于铂的新辅助化疗。根据EAU泌尿外科指南(Roupret et al.,Eur Urol.2018Jan；73(1):111-122)进行滴注。使用全身PET-CT扫描仪监测生物分布。PET-CT分子成像显示68镓标记的抗HLA-JJULY-mAb和抗HLA-G Lilly-mAb主要靶向肌层浸润性膀胱癌，同时周围健康膀胱组织的摄取非常低。这个数据表明抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G LILLY-mAb的低全身毒性，从而获得一种有效的抗肿瘤疗法。
对于放射免疫治疗，患者接受了镥-177标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-GLILLY-mAb。根据EAU泌尿外科指南(Roupret et al.,Eur Urol.2018Jan；73(1):111-122)进行滴注。与通过静脉系统的全身应用相比，使用镥-177标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G LILLY-mAb的滴注疗法的优势在于较低的全身性放射毒性负担以及对肾脏功能的保护。所有患者都患有组织学证实的肌层浸润性膀胱癌。使用全身PET-CT扫描仪监测滴注治疗应答。使用制造商实施的迭代重建算法进行重建，包括基于低剂量CT的衰减和散射校正。对于定量分析，动态列表模式数据(dynamic list mode data)被重建为6幅300秒的图像。在膀胱以及所有器官中以固定大小的感兴趣区域(VOI)测量平均标准化摄取值(SUV)。
检测到HLA-J和HLA-G阳性膀胱癌。没有观察到不良副作用。使用镥-177标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G LILLY-mAb获得的捕获图像与之前使用镓-68标记的抗HLA-JJULY-mAb和镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb抗体获得的图像相似。在不同时间点获取PET-CT图像以评估治疗应答。可以观察到，通过肿瘤大小减小以及病理学完全应答，患者显示了对抗HLA-J和抗HLA-G放射免疫疗法的应答。
实施例7：68镓放射性标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G Lilly-mAb的生物分布以及使用这些镥-177放射性标记的抗体经静脉内注射到不应答基于铂的新辅助化疗的晚期肌层浸润性膀胱癌患者的治疗
用镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb和镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb抗体在患有晚期肌层浸润性膀胱癌的患者中的生物分布，这些患者不应答基于铂的新辅助化疗。根据EAU泌尿外科指南(Roupret et al.,Eur Urol.2018Jan；73(1):111-122)应用静脉注射。使用全身PET-CT扫描仪监测生物分布。PET-CT分子成像显示，68镓标记的抗HLA-JJULY-mAb和抗HLA-G Lilly-mAb主要靶向肌层浸润性膀胱癌，同时其它器官的摄取非常低。这个数据表明抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G LILLY-mAb的低全身毒性，从而获得有效的抗肿瘤疗法。
对于放射免疫治疗，患者接受了镥-177标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-GLILLY-mAb。根据EAU泌尿外科指南(Roupret et al.,Eur Urol.2018Jan；73(1):111-122)进行静脉注射。所有患者都患有组织学证实的肌层浸润性膀胱癌。使用全身PET-CT扫描仪监测放射免疫治疗应答。使用制造商实施的迭代重建算法进行重建，包括基于低剂量CT的衰减和散射校正。对于定量分析，动态列表模式数据被重建为6幅300秒的图像。在膀胱以及所有器官中以固定大小的感兴趣区域(VOI)测量平均标准化摄取值(SUV)。
检测到HLA-J和HLA-G阳性膀胱癌以及不同的转移部位，同时其它器官的摄取非常低。没有观察到不良副作用。使用镥-177标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-GLILLY-mAb获得的捕获图像与之前使用镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb和镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb抗体获得的图像相似。在不同时间点获取PET-CT图像以评估治疗应答。可以观察到，通过肿瘤大小减小以及病理学应答，患者显示了对抗HLA-J和抗HLA-G放射免疫疗法的应答。此外，转移的大小和数量也减少了。一些患者对应用的放射免疫疗法表现出完全的病理完全应答，完全没有任何转移或肿瘤。
实施例8：68镓放射性标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G Lilly-mAb的生物分布以及使用这些镥-177放射性标记的抗体在滴注到对BCG滴注是难治的非肌层浸润性膀胱癌患者的膀胱的治疗
用镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb和镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb抗体在患有晚期非肌层浸润性膀胱癌的患者中的生物分布，这些患者不应答基于铂的新辅助化疗。根据EAU泌尿外科指南(Roupret et al.,Eur Urol.2018Jan；73(1):111-122)应用滴注。使用全身PET-CT扫描仪监测生物分布。PET-CT分子成像显示，68镓标记的抗HLA-JJULY-mAb和抗HLA-G Lilly-mAb主要靶向肌层浸润性膀胱癌，同时周围健康膀胱组织的摄取非常低。这个数据表明抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G LILLY-mAb的低全身毒性，从而获得有效的抗肿瘤疗法。
对于放射免疫治疗，患者接受了镥-177标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-GLILLY-mAb。根据EAU泌尿外科指南(Roupret et al.,Eur Urol.2018Jan；73(1):111-122)进行滴注。与通过静脉系统的全身应用相比，使用镥-177标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G LILLY-mAb的滴注疗法的优势在于较低的全身性放射毒性负担以及对肾脏功能的保护。所有患者都患有组织学证实的非肌层浸润性膀胱癌。使用全身PET-CT扫描仪监测滴注治疗应答。使用制造商实施的迭代重建算法进行重建，包括基于低剂量CT的衰减和散射校正。对于定量分析，动态列表模式数据被重建为6幅300秒的图像。在膀胱以及所有器官中以固定大小的感兴趣区域(VOI)测量平均标准化摄取值(SUV)。
检测到HLA-J和HLA-G阳性膀胱癌，但未在任何其它器官中检测到。没有观察到不良副作用。使用镥-177标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G LILLY-mAb获得的捕获图像与之前使用镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb和镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb抗体获得的图像相似。在不同时间点获取PET-CT图像以评估治疗应答。可以观察到，通过肿瘤大小减小以及病理学完全应答，患者显示了对抗HLA-J和抗HLA-G放射免疫疗法的应答。
实施例9：68镓放射性标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G Lilly-mAb的生物分布以及使用这些镥-177放射性标记的抗体静脉内注射到对BCG滴注是难治的非肌层浸润性膀胱癌患者的治疗
用镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb和镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb抗体在患有晚期非肌层浸润性膀胱癌的患者中的生物分布，这些患者不应答BCG治疗。根据EAU泌尿外科指南(Roupret et al.,Eur Urol.2018Jan；73(1):111-122)应用静脉注射。使用全身PET-CT扫描仪监测生物分布。PET-CT分子成像显示，68镓标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G Lilly-mAb主要靶向非肌层浸润性膀胱癌，同时其它器官的摄取非常低。这个数据表明抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-G LILLY-mAb的低全身毒性，从而获得有效的抗肿瘤疗法。
对于放射免疫治疗，患者接受了镥-177标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-GLILLY-mAb。根据EAU泌尿外科指南(Roupret et al.,Eur Urol.2018Jan；73(1):111-122)进行静脉注射。所有患者都患有组织学证实的非肌层浸润性膀胱癌。使用全身PET-CT扫描仪监测放射免疫治疗应答。使用制造商实施的迭代重建算法进行重建，包括基于低剂量CT的衰减和散射校正。对于定量分析，动态列表模式数据被重建为6幅300秒的图像。在膀胱以及所有器官中以固定大小的感兴趣区域(VOI)测量平均标准化摄取值(SUV)。
检测到HLA-J和HLA-G阳性膀胱癌以及不同的转移部位，同时其它器官的摄取非常低。没有观察到不良副作用。使用镥-177标记的抗HLA-J JULY-mAb和抗HLA-GLILLY-mAb获得的捕获图像与之前使用镓-68标记的抗HLA-J JULY-mAb和镓-68标记的抗HLA-G Lilly-mAb抗体获得的图像相似。在不同时间点获取PET-CT图像以评估治疗应答。可以观察到，通过肿瘤大小减小以及病理学完全应答，患者显示了对抗HLA-J和抗HLA-G放射免疫疗法的应答。此外，转移灶的大小和数量也减少了。一些患者对应用的放射免疫疗法表现出完全的病理完全应答，完全没有任何转移或肿瘤。
序列表
<110> 英特莱克森有限责任公司
<120> HLA-H、HLA-J、HLA-L、HLA-V和HLA-Y作为治疗和诊断靶
<130> AC2757 PCT
<150> EP 19 20 5451.8
<151> 2019-10-25
<160> 83
<170> BiSSAP 1.3
<210> 1
<211> 221
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 可溶HLA-H
<400> 1
Met Val Leu Met Ala Pro Arg Thr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ala
1 5 10 15
Leu Ala Leu Thr Leu Thr Gln Thr Trp Ala Arg Ser His Ser Met Arg
20 25 30
Tyr Phe Tyr Thr Thr Met Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe
35 40 45
Ile Ser Val Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser
50 55 60
Asp Asp Ala Ser Pro Arg Glu Glu Pro Arg Ala Pro Trp Met Glu Arg
65 70 75 80
Glu Gly Pro Glu Tyr Trp Asp Arg Asn Thr Gln Ile Cys Lys Ala Gln
85 90 95
Ala Gln Thr Glu Arg Glu Asn Leu Arg Ile Ala Leu Arg Tyr Tyr Asn
100 105 110
Gln Ser Glu Gly Gly Ser His Thr Met Gln Val Met Tyr Gly Cys Asp
115 120 125
Val Gly Pro Asp Gly Arg Phe Leu Arg Gly Tyr Glu Gln His Ala Tyr
130 135 140
Asp Gly Lys Asp Tyr Ile Ala Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr
145 150 155 160
Ala Ala Asp Met Ala Ala Gln Ile Thr Lys Arg Lys Trp Glu Ala Ala
165 170 175
Arg Arg Ala Glu Gln Leu Arg Ala Tyr Leu Glu Gly Glu Phe Val Glu
180 185 190
Trp Leu Arg Arg Tyr Leu Glu Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln Arg Ala
195 200 205
Asp Pro Pro Gln Asp Thr Tyr Asp Pro Pro Pro His Leu
210 215 220
<210> 2
<211> 219
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 可溶HLA-J
<400> 2
Met Ala Pro Arg Thr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Thr Leu Ala Leu
1 5 10 15
Ala Glu Thr Trp Ala Gly Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ser Trp Pro Gly Arg Gly Glu Pro Ser Phe Ile Ala Val Gly Tyr
35 40 45
Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Val Asp Ser Asp Ala Val Ser Leu
50 55 60
Arg Met Lys Thr Arg Ala Arg Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro Glu Tyr
65 70 75 80
Trp Asp Leu Gln Thr Leu Gly Ala Lys Ala Gln Ala Gln Thr Asp Arg
85 90 95
Val Asn Leu Arg Thr Leu Leu Arg Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Asp
100 105 110
Pro Pro Gln Asp Thr Arg Asp Pro Pro Pro Ser Leu Asn Met Arg His
115 120 125
Asn Glu Val Leu Gly Ser Gly Leu Leu Pro Cys Gly Asp His Ile Asp
130 135 140
Leu Ala Ala Gly Trp Gly Gly Pro Asp Pro Gly His Gly Ala Arg Gly
145 150 155 160
Asp Gln Ala His Arg Gly Trp Asn Leu Pro Glu Val Gly Gly Cys Gly
165 170 175
Ser Ala Phe Trp Arg Gly Thr Glu Ile His Met Pro Cys Ala Ala Gln
180 185 190
Gly Ala Ala Gln Ala Pro His Pro Glu Met Gly His Thr Phe Leu Glu
195 200 205
Thr Ser Arg Gly Ser Lys Thr Arg Arg Phe Leu
210 215
<210> 3
<211> 246
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 可溶HLA-L
<400> 3
Met Gly Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Leu Ala Leu Thr Glu Thr Trp Ala Ala Thr Pro Val Arg Gly Trp Ser
20 25 30
Gly Gly Arg Arg Gly Trp Ser Arg Arg Gly Trp Ser Ile Gly Thr Arg
35 40 45
Arg His Gly Thr Pro Arg Ala Thr Arg Arg Phe Thr Glu Thr Cys Gly
50 55 60
Pro Cys Ser Ala Ile Thr Thr Arg Ala Arg Pro Val Thr Val Arg Leu
65 70 75 80
Arg Trp Gln Gly Leu His Arg Pro Glu Arg Gly Pro Ala Leu Leu Asp
85 90 95
Arg Arg Glu His Ser Gly Ser Asp Leu Pro Ala Gln Val Gly Ser Gly
100 105 110
Gln Ile Leu Arg Ala Gly Gln Gly Leu Pro Glu Gly Lys Cys Met Glu
115 120 125
Trp Leu Arg Arg His Leu Glu Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln His Ala
130 135 140
Asp Pro Pro Lys Ala His Val Thr Gln His Pro Ile Ser Asp His Glu
145 150 155 160
Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Gly Leu Tyr Pro Ala Glu Ile Thr
165 170 175
Leu Thr Trp Gln Gln Asp Gly Glu Asp Gln Thr Gln Asp Thr Glu Leu
180 185 190
Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Val Ala
195 200 205
Val Val Val Pro Ser Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Met Cys His Val Gln
210 215 220
His Glu Gly Leu Pro Glu Pro Leu Thr Leu Arg Trp Glu Pro Ser Ser
225 230 235 240
Gln Pro Thr Ile Pro Ile
245
<210> 4
<211> 111
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 可溶HLA-V
<400> 4
Met Ala Pro Arg Thr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ala Leu Val Leu
1 5 10 15
Thr Gln Thr Trp Ala Gly Phe His Ser Leu Arg Tyr Phe His Thr Thr
20 25 30
Met Ser Arg Pro Gly Arg Ala Asp Pro Arg Phe Leu Ser Val Gly Asp
35 40 45
Val Asp Asp Thr Gln Cys Val Arg Leu Asp Ser Asp Ala Thr Ser Pro
50 55 60
Arg Met Glu Pro Arg Ala Pro Trp Met Glu Gln Glu Gly Pro Glu Tyr
65 70 75 80
Trp Glu Glu Glu Thr Gly Thr Ala Lys Ala Lys Ala Gln Phe Tyr Arg
85 90 95
Val Asn Leu Arg Thr Leu Ser Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu Ala
100 105 110
<210> 5
<211> 206
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 可溶HLA-Y
<400> 5
Met Ala Val Val Ala Pro Arg Thr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ala
1 5 10 15
Leu Ala Leu Thr Gln Thr Trp Ala Gly Ser His Ser Met Arg Tyr Phe
20 25 30
Ser Thr Ser Val Ser Arg Pro Gly Ser Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala
35 40 45
Val Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ala
50 55 60
Ala Ser Gln Arg Met Glu Pro Arg Ala Pro Trp Met Glu Gln Glu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Tyr Trp Asp Arg Gln Thr Gln Ile Ser Lys Thr Asn Ala Gln
85 90 95
Ile Asp Leu Glu Ser Leu Arg Ile Ala Leu Arg Tyr Tyr Asn Gln Ser
100 105 110
Glu Ala Gly Ser His Thr Ile Gln Arg Met Ser Gly Cys Asp Val Gly
115 120 125
Ser Asp Gly Arg Phe Leu Arg Gly Tyr Arg Gln Asp Ala Tyr Asp Gly
130 135 140
Lys Asp Tyr Ile Ala Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala
145 150 155 160
Asp Met Ala Ala Gln Ile Thr Gln Arg Lys Trp Glu Ala Ala Arg Gln
165 170 175
Ala Glu Gln Leu Arg Ala Tyr Leu Glu Gly Glu Cys Met Glu Trp Leu
180 185 190
Arg Arg Tyr Leu Glu Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln Arg Thr
195 200 205
<210> 6
<211> 1704
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 可溶HLA-H
<400> 6
agtttctctt cttctcacaa cctgcgacgg gtccttcttc cttgatactc acgaagcgga 60
cacagttctc attcccacta ggtgtcgggt ttctagagaa gccaatcggt gccgccgcgg 120
tcccggttct aaagtcccca cgcacccacc gggactcaga ttctccccag acgccgagga 180
tggtgctcat ggcgccccga accctcctcc tgctgctctc aggggccctg gccctgaccc 240
tgacccagac ctgggcgcgc tcccactcca tgaggtattt ctacaccacc atgtcccggc 300
ccggccgcgg ggagccccgc ttcatctccg tcggctacgt ggacgatacg cagttcgtgc 360
ggttcgacag cgacgacgcg agtccgagag aggagccgcg ggcgccgtgg atggagcggg 420
aggggccaga gtattgggac cggaacacac agatctgcaa ggcccaggca cagactgaac 480
gagagaacct gcggatcgcg ctccgctact acaaccagag cgagggcggt tctcacacca 540
tgcaggtgat gtatggctgc gacgtggggc ccgacgggcg cttcctccgc gggtatgaac 600
agcacgccta cgacggcaag gattacatcg ccctgaacga ggacctgcgc tcctggaccg 660
cggcggacat ggcagctcag atcaccaagc gcaagtggga ggcggcccgt cgggcggagc 720
agctgagagc ctacctggag ggcgagttcg tggagtggct ccgcagatac ctggagaacg 780
ggaaggagac gctgcagcgc gcggaccccc cccaagacac atatgaccca ccaccccatc 840
tctgaccatg aggccaccct gaggtgctgg gccctgggct tctaccctgc ggagatcaca 900
ctgacctggc agcgggatgg ggaggaccag acccaggaca cggagctcgt ggagaccagg 960
cctgcagggg atggaacctt ccagaagtgg gcggctgtgg tggtgccttc tggagaggag 1020
cagagataca cctgccatgt gcagcatgag ggtctgcccg agcccctcac cctgagatgg 1080
gagccatctt cccagcccaa cgtccccatc gtgggcatcg ttgctggcct ggttctactt 1140
gtagctgtgg tcactggagc tgtggtcgct gctgtaatgt ggaggaagaa gagctcagat 1200
agaaaaggag ggagctactc tcaggctgca acagcaacag tgcccagggc tctgatgtgt 1260
ctctcacggc ttgaaagtgt gagacagctg ccttgtgtgg gactgagagg caagagttgt 1320
tcctgccttc cctttgtgac ttgaagaacc ctgactttct ttctacaaag gcacctgaat 1380
gtgtctgtgt tcctgtaggc ataatgtgtg gaggagggga gaccaaccca ccctcatgtc 1440
caccatgacc ctcttcccca cgctgatctg tgttccctcc ccaatcatct ttcctgttcc 1500
agagaggagg ggctgagatg tctccatctt tttctcaact ttatgtgcac tgagctgtaa 1560
cttcttactt ccctcttaaa attagaatct gagtaaacat ttactttttc aaattcttgc 1620
catgagaggt tgatgactta attaaaggag aagattccta aaatttgaga gacaaaataa 1680
atggaacaca tgagaacctt ccag 1704
<210> 7
<211> 1552
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 可溶HLA-J
<400> 7
ctatactatc tcatgcaccc aggcacaact tttccagatt taaagaaaaa gaaaaaagaa 60
ataaaagaaa aaaacctctg tctctacacc tccattccca gggagagctc cctctctggc 120
accaagctcc ctggggtgag ttttcttttt gaagagtcca ggggaacagc ctgcgacggg 180
tccttcttcc tggacactca cgacgcggac ccagttctca ctcccactga gtgtcgggtt 240
ttagggaagc caatcagcgt cgcgcggccc cggttctaaa gtccccacgc acccaccggg 300
actcggagtc tccccagacg ccgacgatgg ggtcatggcg ccccgaaccc tcctcctgct 360
gctctcgggg accctggccc tggccgagac ctgggcgggc tcccactcca tgaggtattt 420
cagcaccgcc gtttcctggc cgggccgcgg ggagcccagc ttcattgccg tgggctacgt 480
ggacgacacg cagttcgtgc gggtcgacag tgacgccgtg agtctgagga tgaagacgcg 540
ggcgcggtgg gtggagcagg aggggccgga gtattgggac ctacagacac tgggcgccaa 600
ggcccaggca cagactgacc gagtgaacct gcggaccctg ctccgctact acaaccagag 660
cgaggcggac cccccccaag acacacgtga cccacccccc tctctgaaca tgaggcataa 720
cgaggtcctg ggttctgggc ttctaccctg cggagatcac attgacctgg cagcgggatg 780
gggaggacca gacccaggac atggagctcg tggagaccag gcccacaggg gatggaacct 840
tccagaagtg ggcggttgtg gtagtgcctt ctggagagga acagagatac acatgccatg 900
tgcagcacaa ggggctgccc aagcccctca tcctgagatg ggtcacacat ttctggaaac 960
ttctcaaggt tccaagacta ggaggttcct ctaggacctc atggccctgc taccttcctg 1020
gcctctcaca ggacgttttc ttcccgcaga tagaaaagga gggagctact ctcaggctgc 1080
aagcagccaa agtgcccagg gctctgatgt gtctctcacg gcttgtaaag tgtgagacag 1140
ctgccttgtg tgggactgag aggcaagatt tgttcatgcc ttccctttgt gacttcaaga 1200
accctgactt ctctttctgc aaaggcatct gaatgtgtct gtgtccctat aggcataatg 1260
tgaggtggtg gggagaccag cccacacccg tgtccaccat gaccctgttc cccacactga 1320
cctacattcc ttccccgatc acctttcctg ttccagagaa gtggtgctgg gatgtctcca 1380
tctctgtctc aacttcatgg tgcactgagc tgtaacttct tacttcccta ttaaaattag 1440
aatctgagta taaatttact tttttcaaat tatttccatg acgggttgat gggttaatta 1500
aaggagaaga ttcctaaaat ttgagagaca aaataaatgg aagacatgag aa 1552
<210> 8
<211> 898
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 可溶HLA-L
<400> 8
acgatcccgg cactacagtc ccggcgcaac cacccgcact cagattctcc ccaaacgcca 60
aggatggggg tcatggctcc ccgaaccctc ctcctgctgc tcttgggggc cctggccctg 120
accgagacct gggccgcgac tccgtgagtc cgaggatgga gcggcgggcg ccgtgggtgg 180
agcaggaggg gctggagtat tgggaccagg agacacggaa cgccaagggc cacgcgcaga 240
tttaccgagt gaacctgcgg accctgctcc gctattacaa ccagagcgag gccggtatga 300
acagttcgcc tacgatggca aggattacat cgccctgaac gaggacctgc actcctggac 360
cgccgcgaac acagcggctc agatctccca gcacaagtgg gaagcggaca aatactcaga 420
gcaggtcagg gcctacctga gggcaagtgc atggagtggc tccgcagaca cctggagaac 480
gggaaggaga cgctgcagca cgcggatccc ccaaaggcac atgtgaccca gcaccccatc 540
tctgaccatg aggccaccct gaggtgctgg gccctgggcc tctaccctgc ggagatcaca 600
ctgacctggc agcaggatgg ggaggaccag acccaggaca cggagcttgt ggagaccagg 660
cctgcagggg acggaacctt ccagaagtgg gtggctgtag tggtgccttc cggagaggag 720
cagagataca tgtgccatgt gcagcatgag gggctgccag agcccctcac cctgagatgg 780
gagccgtctt ctcagcccac catccccatc gtgggcatcg ttgctggcct gtttctcctt 840
ggagctgtgg tcactggagc tgtggttgct gctgcgatgt ggaggaagaa aagctcag 898
<210> 9
<211> 1285
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 可溶HLA-V
<400> 9
gaaacattga gacagagcgc ttggcacaga agtagcgggg tcagggcgaa gtcccagggc 60
ctcaggcgtg gctctcagga tctcaggccc caaaggcggt gtatggattg gggaggccca 120
gcgctgggca ttccccatct ttgcagggtt tctcttctcc ctctcccaac ctgtgtcggg 180
tccttcttcc tgggtactca ccgggctgcc ccagttctca ctcccattga gtgtcgggtt 240
tctagagaag ccaatcaatg tagccgcggt cccggttcta aagttcccac gcacccaccg 300
ggactccgat tcttcccagt cgccgaggat ggtgtcatgg cgccccgaac cctgcttctg 360
ctgctctcgg gggccctggt cctgacccag acctgggcag gcttccactc cttgaggtat 420
ttccacacca ccatgtcccg gcccggccgc gcggatcccc gcttcctctc cgtgggcgac 480
gtggacgaca cgcagtgcgt gcggctcgac agcgacgcca cgagtcccag gatggagccg 540
cgggcgccgt ggatggagca ggaggggccg gaatattggg aagaggagac agggaccgcc 600
aaggccaaag cacagtttta ccgagtgaac ctgcggaccc tgagcggcta ctacaaccag 660
agtgaggcct aagtgcagct tcattccctc cctgttcgtg tggcctggac ttaatgactc 720
acttctaact gatagagtaa tgctgacata atagtttgtg attctgggtg tagaacataa 780
gactcactga agtttctact ttggttcttt ctttctctgg aatcatgagc cctgggggaa 840
gctggctgtt gtgtcataag gaggcctgtg gtccatgtga ctaggaagtg agtcctcctg 900
ggaccagaca ataagaagct aaagcctctt ccaaaagcca tgtgagagat tcttgtgtct 960
tgtgaatccc cggccccatt tgagccctca gatgattcag ccctggaaga caactagact 1020
gcaacgttgt gagaggccct gagccagaag cattcagaga aacttctcct ggattcctga 1080
ccatggataa ctgtgggaga tgataaatat ttgttgattt gagctgctaa gttgtaggtg 1140
acttgttatg cagcagtaga taactaatac agcttcacaa gagaggatga atcactgaac 1200
tttttcattt gctctaaatt cattataaga tattaaacat gtcatttgct tttaatattt 1260
aataaaaatt tccatggcta tataa 1285
<210> 10
<211> 1095
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 可溶HLA-Y
<400> 10
atggcggtcg tggcgccccg aaccctcctc ctgctactct cgggggccct ggccctgacc 60
cagacctggg cgggctccca ctccatgagg tatttctcca catccgtgtc ccggcccggc 120
agtggagagc cccgcttcat cgcagtgggc tacgtggacg acacgcagtt cgtgcggttc 180
gacagcgacg ccgcgagcca gaggatggag ccgcgggcgc cgtggatgga gcaggaggag 240
ccggagtatt gggaccggca gacacagatc tccaagacca acgcacagat tgacctagag 300
agcctgcgga tcgcgctccg ctactacaac cagagcgagg ccggttctca caccatccag 360
aggatgtctg gctgcgacgt ggggtcggac gggcgcttcc tccgcgggta ccggcaggac 420
gcctacgacg gcaaggatta catcgccctg aacgaggacc tgcgctcttg gaccgcggcg 480
gacatggcgg ctcagatcac ccagcgcaag tgggaggcgg cccgtcaggc ggagcagttg 540
agagcctacc tggagggcga gtgcatggag tggctccgca gatacctgga gaacgggaag 600
gagacgctgc agcgcacgga ccccccccca agacacatat gacccaccac cccatctctg 660
accatgaggc caccctgagg tgctgggccc tgagcttcta ccctgcggag atcacactga 720
cctggcagcg ggatggggag gaccagaccc aggacacgga gctcgtggag accaggcctg 780
caggggatgg aaccttccag aagtgggcgt ctgtggtggt gccttctgga caggagcaga 840
gatacacctg ccatgtgcag catgagggtc tgcccaagcc cctcaccctg agatgggagc 900
cgtcttccca gcccaccatc cccatcgtgg gcatccttgc tggcctggtt ctctttggag 960
ctgtgatcgc tggagctgtg gtcgctgctg tgatgtggag gaggaagagc tcagatagaa 1020
aaggagggag ctactctcag gctgcaagca gtgacagtgc ccagggctct gatgtgtctc 1080
tcacagcttg taaag 1095
<210> 11
<211> 341
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 膜结合HLA-L
<400> 11
Met Gly Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Leu Ala Leu Thr Glu Thr Trp Ala Ala Thr Pro Val Arg Gly Trp Ser
20 25 30
Gly Gly Arg Arg Gly Trp Ser Arg Arg Gly Trp Ser Ile Gly Thr Arg
35 40 45
Arg His Gly Thr Pro Arg Ala Thr Arg Arg Phe Thr Glu Thr Cys Gly
50 55 60
Pro Cys Ser Ala Ile Thr Thr Arg Ala Arg Pro Val Thr Val Arg Leu
65 70 75 80
Arg Trp Gln Gly Leu His Arg Pro Glu Arg Gly Pro Ala Leu Leu Asp
85 90 95
Arg Arg Glu His Ser Gly Ser Asp Leu Pro Ala Gln Val Gly Ser Gly
100 105 110
Gln Ile Leu Arg Ala Gly Gln Gly Leu Pro Glu Gly Lys Cys Met Glu
115 120 125
Trp Leu Arg Arg His Leu Glu Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln His Ala
130 135 140
Asp Pro Pro Lys Ala His Val Thr Gln His Pro Ile Ser Asp His Glu
145 150 155 160
Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Gly Leu Tyr Pro Ala Glu Ile Thr
165 170 175
Leu Thr Trp Gln Gln Asp Gly Glu Asp Gln Thr Gln Asp Thr Glu Leu
180 185 190
Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Val Ala
195 200 205
Val Val Val Pro Ser Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Met Cys His Val Gln
210 215 220
His Glu Gly Leu Pro Glu Pro Leu Thr Leu Arg Trp Glu Pro Ser Ser
225 230 235 240
Gln Pro Thr Ile Pro Ile Val Gly Ile Val Ala Gly Leu Phe Leu Leu
245 250 255
Gly Ala Val Val Thr Gly Ala Val Val Ala Ala Ala Met Trp Arg Lys
260 265 270
Lys Ser Ser Gly Ser Asn Cys Ala Gln Tyr Ser Asp Ala Ser His Asp
275 280 285
Thr Cys Lys Glu Asp Tyr Ala Cys Ser Cys Ser Gly Val Cys Val Leu
290 295 300
Ile Ser Phe Ser Pro Gly Cys Pro Ser Ser Leu Thr Ala Ala Gly Val
305 310 315 320
Ile Phe Pro Val Ile Asn Pro Thr Arg Trp Lys Ala Ala Pro Ala His
325 330 335
Arg Ser Leu Trp Tyr
340
<210> 12
<211> 4622
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> 膜结合HLA-L
<400> 12
acgatcccgg cactacagtc ccggcgcaac cacccgcact cagattctcc ccaaacgcca 60
aggatggggg tcatggctcc ccgaaccctc ctcctgctgc tcttgggggc cctggccctg 120
accgagacct gggccgcgac tccgtgagtc cgaggatgga gcggcgggcg ccgtgggtgg 180
agcaggaggg gctggagtat tgggaccagg agacacggaa cgccaagggc cacgcgcaga 240
tttaccgagt gaacctgcgg accctgctcc gctattacaa ccagagcgag gccggtatga 300
acagttcgcc tacgatggca aggattacat cgccctgaac gaggacctgc actcctggac 360
cgccgcgaac acagcggctc agatctccca gcacaagtgg gaagcggaca aatactcaga 420
gcaggtcagg gcctacctga gggcaagtgc atggagtggc tccgcagaca cctggagaac 480
gggaaggaga cgctgcagca cgcggatccc ccaaaggcac atgtgaccca gcaccccatc 540
tctgaccatg aggccaccct gaggtgctgg gccctgggcc tctaccctgc ggagatcaca 600
ctgacctggc agcaggatgg ggaggaccag acccaggaca cggagcttgt ggagaccagg 660
cctgcagggg acggaacctt ccagaagtgg gtggctgtag tggtgccttc cggagaggag 720
cagagataca tgtgccatgt gcagcatgag gggctgccag agcccctcac cctgagatgg 780
gagccgtctt ctcagcccac catccccatc gtgggcatcg ttgctggcct gtttctcctt 840
ggagctgtgg tcactggagc tgtggttgct gctgcgatgt ggaggaagaa aagctcaggc 900
agcaattgtg ctcagtactc tgatgcatct catgatactt gtaaagagga ctatgcctgt 960
tcctgttctg gtgtctgcgt tctgatctct ttctcccctg ggtgtccctc atctctgaca 1020
gcagcaggag tcatttttcc tgtcattaac cccacaaggt ggaaggcagc ccctgcacac 1080
agaagtctgt ggtattaaga gatgaatttt caagcccgtg cagcttttac cctatttcca 1140
gggctctttc ttggattgta ttttctatct tttccccaac ctttttaaag gaactagatt 1200
ctgaaattag cagagaagag ggatgccaca agttctcatc ttaggtaact ttctagtgga 1260
actcctcttc tgctcagctc tcctacccac tctcccttcc ctgagttgta gtaatcctag 1320
cactggctct aatgcaaact catggatcta taaagcaaag tctaacttag atttatattt 1380
gtttggaaat tgggattcat agtcaaagat tgttctttcc taagagggaa atataattgc 1440
atgctgcagt gtgcagaggg ttggtgtgaa ggagggatgc agggaggaag ggagggagga 1500
cacacaagca gcactgctgg gaaaagcaca ggcggcctgg atgtcagtgt gaggggacct 1560
tgtgctgtcg ttgctgcaaa accgcatttg gcctgaggct atgttaataa agatactgcc 1620
tttagaatag gaggtgctct acagtgatga ttcattcagc cgacatttgc tgtctgccag 1680
acatatgaca gaatgttttt gcatctgggg aaagtcattg aagtaaaatc agaaaaatct 1740
ctagccttgt ggagcatgtg ttccagtggg aagaggcaga cggtacatac actctaatat 1800
atgcagagta aatgaggaaa gtgttagaag gtgataagtg ctgtggaaca ggtgatcaga 1860
gtatgggttg tgggacagag aaggtagcta ttgtgccggg gttgtcagcg tgggccttgt 1920
tgggaaggtg acctttgatg aaatatttga aggacataaa ggaatttgtc atgagggtat 1980
ctggaagaag ttttttctag ggagtaggaa ccttcagtgt cagtgtacca gggcaggatc 2040
atgtctgtgt gttctgggaa gaacacggga tcgggtatgg ctagagcaga gagtcactga 2100
gataaggtca ggggtttggt cagatcatgt gggcataggg ctcaagtatg tgggaaggat 2160
tttgattttg aatgagatag ttttaagcag aataaagaca tgccacaact tctcttttaa 2220
aaggatcact gtagctgctc tgctgagaac agaatccaaa ggccggcgat gagcaaggca 2280
ggtgggaaaa ctgtaggaaa tgagtgcagt atttcaggct ggagatgtcg gttacttcaa 2340
ctggggtgtg agcagtggaa atagtgggac gtgattggat tcctactatt tccaatcact 2400
ttataccgca ttttctaatg gactaaatct ggggtatgag aaagaagagt aaaggatacc 2460
aaaaatgtca gactgtgact aaaaagagtt gccatcagct gagaatgaga agactagcag 2520
gagcatatga gaggagggga cgtcgcaggc agtcactatg ggagacgtgg gatctgagat 2580
gccgctgaga aataccagtg aggtagtcgg gttggcagtt ggacagatga atctggagac 2640
atttaggaga aatagacttg ggaggtgatg tcatataaca gttatttaaa gccttgagtc 2700
tgaatgacgt ctccaaggga gtgattggct gtagaagaga acaggaacaa ggactgaaca 2760
ctaggcctct gttgctaaag gatctgatca gacaacacac ctagatcaga ctgcacagtc 2820
ctgaccccac atctagaagg tacatagacc agggagttct agactttcct gtggacagga 2880
atcacctgga catcacctta agtctaagct gatctggaat cgagaatgag atttcctact 2940
tatataatgt tgctgttggc gctgatgctg ctggtcttca gatcccactt ttggtagcaa 3000
gaacacagac caggattcct aggctatgca tcagcctcgc ctgtgaggct tgttaataag 3060
caattcctgc actccatgcg caacattctg acacaggggc atctgtggag aggcctgagt 3120
attctacaac aagcccacag caaacctggt gctcagccag atttgatatc actgagatca 3180
gtagttggag aatgcccagg atggggaggg gtctcagacc cacatttaag tgttgcttta 3240
ttctgggttt tttatttatt tatttattta tttttaagga ggatgtgttt ctttaattat 3300
aagacaggat gctgagagat aaatgtcatt ttctctatca tggggtatag ccagatggaa 3360
gattgagaag tggctcacag ctcagcagaa tgaaaaaata tctgaatgct gctttctgaa 3420
actactctcc agaatgattt cacactcact ccttggagca aacaatgact tgcaaatttt 3480
tctaatttaa acataaagga gtgtacatat tggtattagt attcatttta ttttggggaa 3540
gggcactgta ttagtccata gtccgttttc acactgccga taaagacata cccaacattg 3600
ggaagaaaaa gaggtttaat tggacttaca gttccatttg gctggggagg cctcagaatc 3660
atggtgggag gcgaaaggca cttcttacat ggtggtggca agagaaaatg aggaagaagc 3720
aaatgccaaa acccctgata aacacattgg atctcaggag acttattcat tatcatgaga 3780
atagcatggg aaagactggc ccccatgatt caattacctc cccctgggtc cctcccacaa 3840
catgtgggaa ttctgggaga tacaattcaa gttgagattt gggtggggac acagccaaac 3900
cacattggac acagaaccag gtttgaagct acacagccag gaacataatc cacagccacc 3960
ctaattcaga tctctcatag gaaccactgt ccctgctcct gagcacagat gctactgcat 4020
atacctctga taccctgatg gccgacactg ggccctgtgg caaagactgc tatcactgct 4080
gctcctgaga actgctccac tactgctcct cagccatctt taccaaaatg cagtatttac 4140
tgtcccagcc tctctgtgtc atctcatcct gattagaagc ccacatgtgg ttatctaaat 4200
tgtgcagcca aagcctcttg cagtgtttaa ctgcaataat gttggggaaa gtgaattttt 4260
ctcctttgta gaaggaggta gtccctgcct tctaataaga ctcttcaaca taggaagaga 4320
attcagttgc tggaggtaga ggggtgaggg atggaaaaag aatgacaaat ttcaattcct 4380
agaatcatgt tctgagacta gaactttatc tagtacattg caggcacctg ggtttggttg 4440
agtgtataat aaatgacata gttcaactta ttcccttgac agtttgtttt ggggtccagc 4500
ttttgtctac cccagttttc acacacagat acgtggagaa gcattgtgtg atggtaaaat 4560
gtttacttga aagccttttt ccctatcttt gtctcttgct aggattaaaa acccgtatct 4620
gt 4622
<210> 13
<211> 357
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-E
<400> 13
Met Val Asp Gly Thr Leu Leu Leu Leu Leu Ser Glu Ala Leu Ala Leu
1 5 10 15
Thr Gln Thr Trp Ala Gly Ser His Ser Leu Lys Tyr Phe His Thr Ser
20 25 30
Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ser Val Gly Tyr
35 40 45
Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Asn Asp Ala Ala Ser Pro
50 55 60
Arg Met Val Pro Arg Ala Pro Trp Met Glu Gln Glu Gly Ser Glu Tyr
65 70 75 80
Trp Asp Arg Glu Thr Arg Ser Ala Arg Asp Thr Ala Gln Ile Phe Arg
85 90 95
Val Asn Leu Arg Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly
100 105 110
Ser His Thr Leu Gln Trp Met His Gly Cys Glu Leu Gly Pro Asp Gly
115 120 125
Arg Phe Leu Arg Gly Tyr Glu Gln Phe Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr
130 135 140
Leu Thr Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Val Asp Thr Ala
145 150 155 160
Ala Gln Ile Ser Glu Gln Lys Ser Asn Asp Ala Ser Glu Ala Glu His
165 170 175
Gln Arg Ala Tyr Leu Glu Asp Thr Cys Val Glu Trp Leu His Lys Tyr
180 185 190
Leu Glu Lys Gly Lys Glu Thr Leu Leu His Leu Glu Pro Pro Lys Thr
195 200 205
His Val Thr His His Pro Ile Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys
210 215 220
Trp Ala Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Gln
225 230 235 240
Asp Gly Glu Gly His Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro
245 250 255
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Ser
260 265 270
Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro
275 280 285
Glu Pro Val Thr Leu Arg Trp Lys Pro Ala Ser Gln Pro Thr Ile Pro
290 295 300
Ile Val Gly Ile Ile Ala Gly Leu Val Leu Leu Gly Ser Val Val Ser
305 310 315 320
Gly Ala Val Val Ala Ala Val Ile Trp Arg Lys Lys Ser Ser Gly Gly
325 330 335
Lys Gly Gly Ser Tyr Ser Lys Ala Glu Trp Ser Asp Ser Ala Gln Gly
340 345 350
Ser Glu Ser His Ser
355
<210> 14
<211> 442
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-F1
<400> 14
Met Ala Pro Arg Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ala Leu Ala Leu
1 5 10 15
Thr Asp Thr Trp Ala Gly Ser His Ser Leu Arg Tyr Phe Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Tyr Ile Ala Val Glu Tyr
35 40 45
Val Asp Asp Thr Gln Phe Leu Arg Phe Asp Ser Asp Ala Ala Ile Pro
50 55 60
Arg Met Glu Pro Arg Glu Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro Gln Tyr
65 70 75 80
Trp Glu Trp Thr Thr Gly Tyr Ala Lys Ala Asn Ala Gln Thr Asp Arg
85 90 95
Val Ala Leu Arg Asn Leu Leu Arg Arg Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly
100 105 110
Ser His Thr Leu Gln Gly Met Asn Gly Cys Asp Met Gly Pro Asp Gly
115 120 125
Arg Leu Leu Arg Gly Tyr His Gln His Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr
130 135 140
Ile Ser Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp Thr Val
145 150 155 160
Ala Gln Ile Thr Gln Arg Phe Tyr Glu Ala Glu Glu Tyr Ala Glu Glu
165 170 175
Phe Arg Thr Tyr Leu Glu Gly Glu Cys Leu Glu Leu Leu Arg Arg Tyr
180 185 190
Leu Glu Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln Arg Ala Asp Pro Pro Lys Ala
195 200 205
His Val Ala His His Pro Ile Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys
210 215 220
Trp Ala Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Arg
225 230 235 240
Asp Gly Glu Glu Gln Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro
245 250 255
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Pro
260 265 270
Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro
275 280 285
Gln Pro Leu Ile Leu Arg Trp Glu Gln Ser Pro Gln Pro Thr Ile Pro
290 295 300
Ile Val Gly Ile Val Ala Gly Leu Val Val Leu Gly Ala Val Val Thr
305 310 315 320
Gly Ala Val Val Ala Ala Val Met Trp Arg Lys Lys Ser Ser Asp Arg
325 330 335
Asn Arg Gly Ser Tyr Ser Gln Ala Ala Ala Tyr Ser Val Val Ser Gly
340 345 350
Asn Leu Met Ile Thr Trp Trp Ser Ser Leu Phe Leu Leu Gly Val Leu
355 360 365
Phe Gln Gly Tyr Leu Gly Cys Leu Arg Ser His Ser Val Leu Gly Arg
370 375 380
Arg Lys Val Gly Asp Met Trp Ile Leu Phe Phe Leu Trp Leu Trp Thr
385 390 395 400
Ser Phe Asn Thr Ala Phe Leu Ala Leu Gln Ser Leu Arg Phe Gly Phe
405 410 415
Gly Phe Arg Arg Gly Arg Ser Phe Leu Leu Arg Ser Trp His His Leu
420 425 430
Met Lys Arg Val Gln Ile Lys Ile Phe Asp
435 440
<210> 15
<211> 346
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-F2
<400> 15
Met Ala Pro Arg Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ala Leu Ala Leu
1 5 10 15
Thr Asp Thr Trp Ala Gly Ser His Ser Leu Arg Tyr Phe Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Tyr Ile Ala Val Glu Tyr
35 40 45
Val Asp Asp Thr Gln Phe Leu Arg Phe Asp Ser Asp Ala Ala Ile Pro
50 55 60
Arg Met Glu Pro Arg Glu Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro Gln Tyr
65 70 75 80
Trp Glu Trp Thr Thr Gly Tyr Ala Lys Ala Asn Ala Gln Thr Asp Arg
85 90 95
Val Ala Leu Arg Asn Leu Leu Arg Arg Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly
100 105 110
Ser His Thr Leu Gln Gly Met Asn Gly Cys Asp Met Gly Pro Asp Gly
115 120 125
Arg Leu Leu Arg Gly Tyr His Gln His Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr
130 135 140
Ile Ser Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp Thr Val
145 150 155 160
Ala Gln Ile Thr Gln Arg Phe Tyr Glu Ala Glu Glu Tyr Ala Glu Glu
165 170 175
Phe Arg Thr Tyr Leu Glu Gly Glu Cys Leu Glu Leu Leu Arg Arg Tyr
180 185 190
Leu Glu Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln Arg Ala Asp Pro Pro Lys Ala
195 200 205
His Val Ala His His Pro Ile Ser Asp His Glu Ala Thr Leu Arg Cys
210 215 220
Trp Ala Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Thr Leu Thr Trp Gln Arg
225 230 235 240
Asp Gly Glu Glu Gln Thr Gln Asp Thr Glu Leu Val Glu Thr Arg Pro
245 250 255
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val Pro Pro
260 265 270
Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly Leu Pro
275 280 285
Gln Pro Leu Ile Leu Arg Trp Glu Gln Ser Pro Gln Pro Thr Ile Pro
290 295 300
Ile Val Gly Ile Val Ala Gly Leu Val Val Leu Gly Ala Val Val Thr
305 310 315 320
Gly Ala Val Val Ala Ala Val Met Trp Arg Lys Lys Ser Ser Asp Arg
325 330 335
Asn Arg Gly Ser Tyr Ser Gln Ala Ala Val
340 345
<210> 16
<211> 254
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-F3
<400> 16
Met Ala Pro Arg Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ala Leu Ala Leu
1 5 10 15
Thr Asp Thr Trp Ala Gly Ser His Ser Leu Arg Tyr Phe Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Tyr Ile Ala Val Glu Tyr
35 40 45
Val Asp Asp Thr Gln Phe Leu Arg Phe Asp Ser Asp Ala Ala Ile Pro
50 55 60
Arg Met Glu Pro Arg Glu Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro Gln Tyr
65 70 75 80
Trp Glu Trp Thr Thr Gly Tyr Ala Lys Ala Asn Ala Gln Thr Asp Arg
85 90 95
Val Ala Leu Arg Asn Leu Leu Arg Arg Tyr Asn Gln Ser Glu Ala Gly
100 105 110
Ser His Thr Leu Gln Gly Met Asn Gly Cys Asp Met Gly Pro Asp Gly
115 120 125
Arg Leu Leu Arg Gly Tyr His Gln His Ala Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr
130 135 140
Ile Ser Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp Thr Val
145 150 155 160
Ala Gln Ile Thr Gln Arg Phe Tyr Glu Ala Glu Glu Tyr Ala Glu Glu
165 170 175
Phe Arg Thr Tyr Leu Glu Gly Glu Cys Leu Glu Leu Leu Arg Arg Tyr
180 185 190
Leu Glu Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln Arg Ala Glu Gln Ser Pro Gln
195 200 205
Pro Thr Ile Pro Ile Val Gly Ile Val Ala Gly Leu Val Val Leu Gly
210 215 220
Ala Val Val Thr Gly Ala Val Val Ala Ala Val Met Trp Arg Lys Lys
225 230 235 240
Ser Ser Asp Arg Asn Arg Gly Ser Tyr Ser Gln Ala Ala Val
245 250
<210> 17
<211> 337
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G1
<400> 17
Met Val Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Phe Leu Leu Leu Ser Gly Ala
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Glu Thr Trp Ala Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Ser
20 25 30
Ala Ala Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Met
35 40 45
Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ser Ala
50 55 60
Cys Pro Arg Met Glu Pro Arg Ala Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro
65 70 75 80
Glu Tyr Trp Glu Glu Glu Thr Arg Asn Thr Lys Ala His Ala Gln Thr
85 90 95
Asp Arg Met Asn Leu Gln Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu
100 105 110
Ala Ser Ser His Thr Leu Gln Trp Met Ile Gly Cys Asp Leu Gly Ser
115 120 125
Asp Gly Arg Leu Leu Arg Gly Tyr Glu Gln Tyr Ala Tyr Asp Gly Lys
130 135 140
Asp Tyr Leu Ala Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp
145 150 155 160
Thr Ala Ala Gln Ile Ser Lys Arg Lys Cys Glu Ala Ala Asn Val Ala
165 170 175
Glu Gln Arg Arg Ala Tyr Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Trp Leu His
180 185 190
Arg Tyr Leu Glu Asn Gly Lys Glu Met Leu Gln Arg Ala Asp Pro Pro
195 200 205
Lys Thr His Val Thr His His Pro Val Phe Asp Tyr Glu Ala Thr Leu
210 215 220
Arg Cys Trp Ala Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Ile Leu Thr Trp
225 230 235 240
Gln Arg Asp Gly Glu Asp Gln Thr Gln Asp Val Glu Leu Val Glu Thr
245 250 255
Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val
260 265 270
Pro Ser Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly
275 280 285
Leu Pro Glu Pro Leu Met Leu Arg Trp Lys Gln Ser Ser Leu Pro Thr
290 295 300
Ile Pro Ile Met Gly Ile Val Ala Gly Leu Val Val Leu Ala Ala Val
305 310 315 320
Val Thr Gly Ala Ala Val Ala Ala Val Leu Trp Arg Lys Lys Ser Ser
325 330 335
Asp
<210> 18
<211> 245
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G2
<400> 18
Met Val Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Phe Leu Leu Leu Ser Gly Ala
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Glu Thr Trp Ala Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Ser
20 25 30
Ala Ala Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Met
35 40 45
Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ser Ala
50 55 60
Cys Pro Arg Met Glu Pro Arg Ala Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro
65 70 75 80
Glu Tyr Trp Glu Glu Glu Thr Arg Asn Thr Lys Ala His Ala Gln Thr
85 90 95
Asp Arg Met Asn Leu Gln Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu
100 105 110
Ala Asp Pro Pro Lys Thr His Val Thr His His Pro Val Phe Asp Tyr
115 120 125
Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ile Leu Thr Trp Gln Arg Asp Gly Glu Asp Gln Thr Gln Asp Val Glu
145 150 155 160
Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala
165 170 175
Ala Val Val Val Pro Ser Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val
180 185 190
Gln His Glu Gly Leu Pro Glu Pro Leu Met Leu Arg Trp Lys Gln Ser
195 200 205
Ser Leu Pro Thr Ile Pro Ile Met Gly Ile Val Ala Gly Leu Val Val
210 215 220
Leu Ala Ala Val Val Thr Gly Ala Ala Val Ala Ala Val Leu Trp Arg
225 230 235 240
Lys Lys Ser Ser Asp
245
<210> 19
<211> 129
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G3
<400> 19
Met Val Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Phe Leu Leu Leu Ser Gly Ala
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Glu Thr Trp Ala Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Ser
20 25 30
Ala Ala Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Met
35 40 45
Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ser Ala
50 55 60
Cys Pro Arg Met Glu Pro Arg Ala Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro
65 70 75 80
Glu Tyr Trp Glu Glu Glu Thr Arg Asn Lys Gln Ser Ser Leu Pro Thr
85 90 95
Ile Pro Ile Met Gly Ile Val Ala Gly Leu Val Val Leu Ala Ala Val
100 105 110
Val Thr Gly Ala Ala Val Ala Ala Val Leu Trp Arg Lys Lys Ser Ser
115 120 125
Asp
<210> 20
<211> 245
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G4
<400> 20
Met Val Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Phe Leu Leu Leu Ser Gly Ala
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Glu Thr Trp Ala Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Ser
20 25 30
Ala Ala Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Met
35 40 45
Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ser Ala
50 55 60
Cys Pro Arg Met Glu Pro Arg Ala Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro
65 70 75 80
Glu Tyr Trp Glu Glu Glu Thr Arg Asn Thr Lys Ala His Ala Gln Thr
85 90 95
Asp Arg Met Asn Leu Gln Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu
100 105 110
Ala Ser Ser His Thr Leu Gln Trp Met Ile Gly Cys Asp Leu Gly Ser
115 120 125
Asp Gly Arg Leu Leu Arg Gly Tyr Glu Gln Tyr Ala Tyr Asp Gly Lys
130 135 140
Asp Tyr Leu Ala Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp
145 150 155 160
Thr Ala Ala Gln Ile Ser Lys Arg Lys Cys Glu Ala Ala Asn Val Ala
165 170 175
Glu Gln Arg Arg Ala Tyr Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Trp Leu His
180 185 190
Arg Tyr Leu Glu Asn Gly Lys Glu Met Leu Gln Arg Ala Lys Gln Ser
195 200 205
Ser Leu Pro Thr Ile Pro Ile Met Gly Ile Val Ala Gly Leu Val Val
210 215 220
Leu Ala Ala Val Val Thr Gly Ala Ala Val Ala Ala Val Leu Trp Arg
225 230 235 240
Lys Lys Ser Ser Asp
245
<210> 21
<211> 318
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G5
<400> 21
Met Val Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Phe Leu Leu Leu Ser Gly Ala
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Glu Thr Trp Ala Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Ser
20 25 30
Ala Ala Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Met
35 40 45
Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ser Ala
50 55 60
Cys Pro Arg Met Glu Pro Arg Ala Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro
65 70 75 80
Glu Tyr Trp Glu Glu Glu Thr Arg Asn Thr Lys Ala His Ala Gln Thr
85 90 95
Asp Arg Met Asn Leu Gln Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu
100 105 110
Ala Ser Ser His Thr Leu Gln Trp Met Ile Gly Cys Asp Leu Gly Ser
115 120 125
Asp Gly Arg Leu Leu Arg Gly Tyr Glu Gln Tyr Ala Tyr Asp Gly Lys
130 135 140
Asp Tyr Leu Ala Leu Asn Glu Asp Leu Arg Ser Trp Thr Ala Ala Asp
145 150 155 160
Thr Ala Ala Gln Ile Ser Lys Arg Lys Cys Glu Ala Ala Asn Val Ala
165 170 175
Glu Gln Arg Arg Ala Tyr Leu Glu Gly Thr Cys Val Glu Trp Leu His
180 185 190
Arg Tyr Leu Glu Asn Gly Lys Glu Met Leu Gln Arg Ala Asp Pro Pro
195 200 205
Lys Thr His Val Thr His His Pro Val Phe Asp Tyr Glu Ala Thr Leu
210 215 220
Arg Cys Trp Ala Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile Ile Leu Thr Trp
225 230 235 240
Gln Arg Asp Gly Glu Asp Gln Thr Gln Asp Val Glu Leu Val Glu Thr
245 250 255
Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala Ala Val Val Val
260 265 270
Pro Ser Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val Gln His Glu Gly
275 280 285
Leu Pro Glu Pro Leu Met Leu Arg Trp Ser Lys Glu Gly Asp Gly Gly
290 295 300
Ile Met Ser Val Arg Glu Ser Arg Ser Leu Ser Glu Asp Leu
305 310 315
<210> 22
<211> 226
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G6
<400> 22
Met Val Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Phe Leu Leu Leu Ser Gly Ala
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Glu Thr Trp Ala Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Ser
20 25 30
Ala Ala Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Met
35 40 45
Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ser Ala
50 55 60
Cys Pro Arg Met Glu Pro Arg Ala Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro
65 70 75 80
Glu Tyr Trp Glu Glu Glu Thr Arg Asn Thr Lys Ala His Ala Gln Thr
85 90 95
Asp Arg Met Asn Leu Gln Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu
100 105 110
Ala Asp Pro Pro Lys Thr His Val Thr His His Pro Val Phe Asp Tyr
115 120 125
Glu Ala Thr Leu Arg Cys Trp Ala Leu Gly Phe Tyr Pro Ala Glu Ile
130 135 140
Ile Leu Thr Trp Gln Arg Asp Gly Glu Asp Gln Thr Gln Asp Val Glu
145 150 155 160
Leu Val Glu Thr Arg Pro Ala Gly Asp Gly Thr Phe Gln Lys Trp Ala
165 170 175
Ala Val Val Val Pro Ser Gly Glu Glu Gln Arg Tyr Thr Cys His Val
180 185 190
Gln His Glu Gly Leu Pro Glu Pro Leu Met Leu Arg Trp Ser Lys Glu
195 200 205
Gly Asp Gly Gly Ile Met Ser Val Arg Glu Ser Arg Ser Leu Ser Glu
210 215 220
Asp Leu
225
<210> 23
<211> 115
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G7
<400> 23
Met Val Val Met Ala Pro Arg Thr Leu Phe Leu Leu Leu Ser Gly Ala
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Glu Thr Trp Ala Ser His Ser Met Arg Tyr Phe Ser
20 25 30
Ala Ala Val Ser Arg Pro Gly Arg Gly Glu Pro Arg Phe Ile Ala Met
35 40 45
Gly Tyr Val Asp Asp Thr Gln Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Ser Ala
50 55 60
Cys Pro Arg Met Glu Pro Arg Ala Pro Trp Val Glu Gln Glu Gly Pro
65 70 75 80
Glu Tyr Trp Glu Glu Glu Thr Arg Asn Thr Lys Ala His Ala Gln Thr
85 90 95
Asp Arg Met Asn Leu Gln Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln Ser Glu
100 105 110
Ala Ser Glu
115
<210> 24
<211> 2548
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-E
<400> 24
ctcaggactc agaggctggg atcatggtag atggaaccct ccttttactc ctctcggagg 60
ccctggccct tacccagacc tgggcgggct cccactcctt gaagtatttc cacacttccg 120
tgtcccggcc cggccgcggg gagccccgct tcatctctgt gggctacgtg gacgacaccc 180
agttcgtgcg cttcgacaac gacgccgcga gtccgaggat ggtgccgcgg gcgccgtgga 240
tggagcagga ggggtcagag tattgggacc gggagacacg gagcgccagg gacaccgcac 300
agattttccg agtgaatctg cggacgctgc gcggctacta caatcagagc gaggccgggt 360
ctcacaccct gcagtggatg catggctgcg agctggggcc cgacgggcgc ttcctccgcg 420
ggtatgaaca gttcgcctac gacggcaagg attatctcac cctgaatgag gacctgcgct 480
cctggaccgc ggtggacacg gcggctcaga tctccgagca aaagtcaaat gatgcctctg 540
aggcggagca ccagagagcc tacctggaag acacatgcgt ggagtggctc cacaaatacc 600
tggagaaggg gaaggagacg ctgcttcacc tggagccccc aaagacacac gtgactcacc 660
accccatctc tgaccatgag gccaccctga ggtgctgggc cctgggcttc taccctgcgg 720
agatcacact gacctggcag caggatgggg agggccatac ccaggacacg gagctcgtgg 780
agaccaggcc tgcaggggat ggaaccttcc agaagtgggc agctgtggtg gtgccttctg 840
gagaggagca gagatacacg tgccatgtgc agcatgaggg gctacccgag cccgtcaccc 900
tgagatggaa gccggcttcc cagcccacca tccccatcgt gggcatcatt gctggcctgg 960
ttctccttgg atctgtggtc tctggagctg tggttgctgc tgtgatatgg aggaagaaga 1020
gctcaggtgg aaaaggaggg agctactcta aggctgagtg gagcgacagt gcccaggggt 1080
ctgagtctca cagcttgtaa agcctgagac agctgccttg tgtgcgactg agatgcacag 1140
ctgccttgtg tgcgactgag atgcaggatt tcctcacgcc tcccctatgt gtcttagggg 1200
actctggctt ctctttttgc aagggcctct gaatctgtct gtgtccctgt tagcacaatg 1260
tgaggaggta gagaaacagt ccacctctgt gtctaccatg acccccttcc tcacactgac 1320
ctgtgttcct tccctgttct cttttctatt aaaaataaga acctgggcag agtgcggcag 1380
ctcatgcctg taatcccagc acttagggag gccgaggagg gcagatcacg aggtcaggag 1440
atcgaaacca tcctggctaa cacggtgaaa ccccgtctct actaaaaaat acaaaaaatt 1500
agctgggcgc agaggcacgg gcctgtagtc ccagctactc aggaggcgga ggcaggagaa 1560
tggcgtcaac ccgggaggcg gaggttgcag tgagccagga ttgtgcgact gcactccagc 1620
ctgggtgaca gggtgaaacg ccatctcaaa aaataaaaat tgaaaaataa aaaaagaacc 1680
tggatctcaa tttaattttt catattcttg caatgaaatg gacttgagga agctaagatc 1740
atagctagaa atacagataa ttccacagca catctctagc aaatttagcc tattcctatt 1800
ctctagccta ttccttacca cctgtaatct tgaccatata ccttggagtt gaatattgtt 1860
ttcatactgc tgtggtttga atgttccctc caacactcat gttgagactt aatccctaat 1920
gtggcaatac tgaaaggtgg ggcctttgag atgtgattgg atcgtaaggc tgtgccttca 1980
ttcatgggtt aatggattaa tgggttatca caggaatggg actggtggct ttataagaag 2040
aggaaaagag aactgagcta gcatgcccag cccacagaga gcctccacta gagtgatgct 2100
aagtggaaat gtgaggtgca gctgccacag agggccccca ccagggaaat gtctagtgtc 2160
tagtggatcc aggccacagg agagagtgcc ttgtggagcg ctgggagcag gacctgacca 2220
ccaccaggac cccagaactg tggagtcagt ggcagcatgc agcgccccct tgggaaagct 2280
ttaggcacca gcctgcaacc cattcgagca gccacgtagg ctgcacccag caaagccaca 2340
ggcacggggc tacctgaggc cttgggggcc caatccctgc tccagtgtgt ccgtgaggca 2400
gcacacgaag tcaaaagaga ttattctctt cccacagata ccttttctct cccatgaccc 2460
tttaacagca tctgcttcat tcccctcacc ttcccaggct gatctgaggt aaactttgaa 2520
gtaaaataaa agctgtgttt gagcatca 2548
<210> 25
<211> 1480
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-F1
<400> 25
atatttttcc cagacgcgga ggttggggtc atggcgcccc gaagcctcct cctgctgctc 60
tcaggggccc tggccctgac cgatacttgg gcgggctccc actccttgag gtatttcagc 120
accgctgtgt cgcggcccgg ccgcggggag ccccgctaca tcgccgtgga gtacgtagac 180
gacacgcaat tcctgcggtt cgacagcgac gccgcgattc cgaggatgga gccgcgggag 240
ccgtgggtgg agcaagaggg gccgcagtat tgggagtgga ccacagggta cgccaaggcc 300
aacgcacaga ctgaccgagt ggccctgagg aacctgctcc gccgctacaa ccagagcgag 360
gctgggtctc acaccctcca gggaatgaat ggctgcgaca tggggcccga cggacgcctc 420
ctccgcgggt atcaccagca cgcgtacgac ggcaaggatt acatctccct gaacgaggac 480
ctgcgctcct ggaccgcggc ggacaccgtg gctcagatca cccagcgctt ctatgaggca 540
gaggaatatg cagaggagtt caggacctac ctggagggcg agtgcctgga gttgctccgc 600
agatacttgg agaatgggaa ggagacgcta cagcgcgcag atcctccaaa ggcacacgtt 660
gcccaccacc ccatctctga ccatgaggcc accctgaggt gctgggccct gggcttctac 720
cctgcggaga tcacgctgac ctggcagcgg gatggggagg aacagaccca ggacacagag 780
cttgtggaga ccaggcctgc aggggatgga accttccaga agtgggccgc tgtggtggtg 840
cctcctggag aggaacagag atacacatgc catgtgcagc acgaggggct gccccagccc 900
ctcatcctga gatgggagca gtctccccag cccaccatcc ccatcgtggg catcgttgct 960
ggccttgttg tccttggagc tgtggtcact ggagctgtgg tcgctgctgt gatgtggagg 1020
aagaagagct cagatagaaa cagagggagc tactctcagg ctgcagccta ctcagtggtc 1080
agcggaaact tgatgataac atggtggtca agcttatttc tcctgggggt gctcttccaa 1140
ggatatttgg gctgcctccg gagtcacagt gtcttgggcc gccggaaggt gggtgacatg 1200
tggatcttgt tttttttgtg gctgtggaca tctttcaaca ctgccttctt ggccttgcaa 1260
agccttcgct ttggcttcgg ctttaggagg ggcaggagct tccttcttcg ttcttggcac 1320
catcttatga aaagggtcca gattaagatt tttgactgag tcattctaaa gtaagttgca 1380
agacccatga tactagacca ctaaatactt catcacacac ctcctaagaa taagaaccaa 1440
cattatcaca ccaaagaaaa taaataattc cataatatta 1480
<210> 26
<211> 1301
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-F2
<400> 26
tttctcactc ccattgggcg tcgcgtttct agagaagcca atcagtgtcg ccgcagttcc 60
caggttctaa agtcccacgc accccgcggg actcatattt ttcccagacg cggaggttgg 120
ggtcatggcg ccccgaagcc tcctcctgct gctctcaggg gccctggccc tgaccgatac 180
ttgggcgggc tcccactcct tgaggtattt cagcaccgct gtgtcgcggc ccggccgcgg 240
ggagccccgc tacatcgccg tggagtacgt agacgacacg caattcctgc ggttcgacag 300
cgacgccgcg attccgagga tggagccgcg ggagccgtgg gtggagcaag aggggccgca 360
gtattgggag tggaccacag ggtacgccaa ggccaacgca cagactgacc gagtggccct 420
gaggaacctg ctccgccgct acaaccagag cgaggctggg tctcacaccc tccagggaat 480
gaatggctgc gacatggggc ccgacggacg cctcctccgc gggtatcacc agcacgcgta 540
cgacggcaag gattacatct ccctgaacga ggacctgcgc tcctggaccg cggcggacac 600
cgtggctcag atcacccagc gcttctatga ggcagaggaa tatgcagagg agttcaggac 660
ctacctggag ggcgagtgcc tggagttgct ccgcagatac ttggagaatg ggaaggagac 720
gctacagcgc gcagatcctc caaaggcaca cgttgcccac caccccatct ctgaccatga 780
ggccaccctg aggtgctggg ccctgggctt ctaccctgcg gagatcacgc tgacctggca 840
gcgggatggg gaggaacaga cccaggacac agagcttgtg gagaccaggc ctgcagggga 900
tggaaccttc cagaagtggg ccgctgtggt ggtgcctcct ggagaggaac agagatacac 960
atgccatgtg cagcacgagg ggctgcccca gcccctcatc ctgagatggg agcagtctcc 1020
ccagcccacc atccccatcg tgggcatcgt tgctggcctt gttgtccttg gagctgtggt 1080
cactggagct gtggtcgctg ctgtgatgtg gaggaagaag agctcagata gaaacagagg 1140
gagctactct caggctgcag tgtgagacag cttccttgtg tgggactgag aagcaagata 1200
tcaatgtagc agaattgcac ttgtgcctca cgaacataca taaattttaa aaataaagaa 1260
taaaaatata tctttttata gataaaaaaa aaaaaaaaaa a 1301
<210> 27
<211> 912
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-F3
<400> 27
atatttttcc cagacgcgga ggttggggtc atggcgcccc gaagcctcct cctgctgctc 60
tcaggggccc tggccctgac cgatacttgg gcgggctccc actccttgag gtatttcagc 120
accgctgtgt cgcggcccgg ccgcggggag ccccgctaca tcgccgtgga gtacgtagac 180
gacacgcaat tcctgcggtt cgacagcgac gccgcgattc cgaggatgga gccgcgggag 240
ccgtgggtgg agcaagaggg gccgcagtat tgggagtgga ccacagggta cgccaaggcc 300
aacgcacaga ctgaccgagt ggccctgagg aacctgctcc gccgctacaa ccagagcgag 360
gctgggtctc acaccctcca gggaatgaat ggctgcgaca tggggcccga cggacgcctc 420
ctccgcgggt atcaccagca cgcgtacgac ggcaaggatt acatctccct gaacgaggac 480
ctgcgctcct ggaccgcggc ggacaccgtg gctcagatca cccagcgctt ctatgaggca 540
gaggaatatg cagaggagtt caggacctac ctggagggcg agtgcctgga gttgctccgc 600
agatacttgg agaatgggaa ggagacgcta cagcgcgcag agcagtctcc ccagcccacc 660
atccccatcg tgggcatcgt tgctggcctt gttgtccttg gagctgtggt cactggagct 720
gtggtcgctg ctgtgatgtg gaggaagaag agctcagata gaaacagagg gagctactct 780
caggctgcag tgtgagacag cttccttgtg tgggactgag aagcaagata tcaatgtagc 840
agaattgcac ttgtgcctca cgaacataca taaattttaa aaataaagaa taaaaatata 900
tctttttata ga 912
<210> 28
<211> 1578
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G1
<400> 28
agtgtggtac tttgtcttga ggagatgtcc tggactcaca cggaaactta gggctacgga 60
atgaagttct cactcccatt aggtgacagg tttttagaga agccaatcag cgtcgccgcg 120
gtcctggttc taaagtcctc gctcacccac ccggactcat tctccccaga cgccaaggat 180
ggtggtcatg gcgccccgaa ccctcttcct gctgctctcg ggggccctga ccctgaccga 240
gacctgggcg ggctcccact ccatgaggta tttcagcgcc gccgtgtccc ggcccggccg 300
cggggagccc cgcttcatcg ccatgggcta cgtggacgac acgcagttcg tgcggttcga 360
cagcgactcg gcgtgtccga ggatggagcc gcgggcgccg tgggtggagc aggaggggcc 420
ggagtattgg gaagaggaga cacggaacac caaggcccac gcacagactg acagaatgaa 480
cctgcagacc ctgcgcggct actacaacca gagcgaggcc agttctcaca ccctccagtg 540
gatgattggc tgcgacctgg ggtccgacgg acgcctcctc cgcgggtatg aacagtatgc 600
ctacgatggc aaggattacc tcgccctgaa cgaggacctg cgctcctgga ccgcagcgga 660
cactgcggct cagatctcca agcgcaagtg tgaggcggcc aatgtggctg aacaaaggag 720
agcctacctg gagggcacgt gcgtggagtg gctccacaga tacctggaga acgggaagga 780
gatgctgcag cgcgcggacc cccccaagac acacgtgacc caccaccctg tctttgacta 840
tgaggccacc ctgaggtgct gggccctggg cttctaccct gcggagatca tactgacctg 900
gcagcgggat ggggaggacc agacccagga cgtggagctc gtggagacca ggcctgcagg 960
ggatggaacc ttccagaagt gggcagctgt ggtggtgcct tctggagagg agcagagata 1020
cacgtgccat gtgcagcatg aggggctgcc ggagcccctc atgctgagat ggaagcagtc 1080
ttccctgccc accatcccca tcatgggtat cgttgctggc ctggttgtcc ttgcagctgt 1140
agtcactgga gctgcggtcg ctgctgtgct gtggagaaag aagagctcag attgaaaagg 1200
agggagctac tctcaggctg caatgtgaaa cagctgccct gtgtgggact gagtggcaag 1260
tccctttgtg acttcaagaa ccctgactcc tctttgtgca gagaccagcc cacccctgtg 1320
cccaccatga ccctcttcct catgctgaac tgcattcctt ccccaatcac ctttcctgtt 1380
ccagaaaagg ggctgggatg tctccgtctc tgtctcaaat ttgtggtcca ctgagctata 1440
acttacttct gtattaaaat tagaatctga gtataaattt actttttcaa attatttcca 1500
agagagattg atgggttaat taaaggagaa gattcctgaa atttgagaga caaaataaat 1560
ggaagacatg agaacttt 1578
<210> 29
<211> 1302
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G2
<400> 29
agtgtggtac tttgtcttga ggagatgtcc tggactcaca cggaaactta gggctacgga 60
atgaagttct cactcccatt aggtgacagg tttttagaga agccaatcag cgtcgccgcg 120
gtcctggttc taaagtcctc gctcacccac ccggactcat tctccccaga cgccaaggat 180
ggtggtcatg gcgccccgaa ccctcttcct gctgctctcg ggggccctga ccctgaccga 240
gacctgggcg ggctcccact ccatgaggta tttcagcgcc gccgtgtccc ggcccggccg 300
cggggagccc cgcttcatcg ccatgggcta cgtggacgac acgcagttcg tgcggttcga 360
cagcgactcg gcgtgtccga ggatggagcc gcgggcgccg tgggtggagc aggaggggcc 420
ggagtattgg gaagaggaga cacggaacac caaggcccac gcacagactg acagaatgaa 480
cctgcagacc ctgcgcggct actacaacca gagcgaggcc aaccccccca agacacacgt 540
gacccaccac cctgtctttg actatgaggc caccctgagg tgctgggccc tgggcttcta 600
ccctgcggag atcatactga cctggcagcg ggatggggag gaccagaccc aggacgtgga 660
gctcgtggag accaggcctg caggggatgg aaccttccag aagtgggcag ctgtggtggt 720
gccttctgga gaggagcaga gatacacgtg ccatgtgcag catgaggggc tgccggagcc 780
cctcatgctg agatggaagc agtcttccct gcccaccatc cccatcatgg gtatcgttgc 840
tggcctggtt gtccttgcag ctgtagtcac tggagctgcg gtcgctgctg tgctgtggag 900
aaagaagagc tcagattgaa aaggagggag ctactctcag gctgcaatgt gaaacagctg 960
ccctgtgtgg gactgagtgg caagtccctt tgtgacttca agaaccctga ctcctctttg 1020
tgcagagacc agcccacccc tgtgcccacc atgaccctct tcctcatgct gaactgcatt 1080
ccttccccaa tcacctttcc tgttccagaa aaggggctgg gatgtctccg tctctgtctc 1140
aaatttgtgg tccactgagc tataacttac ttctgtatta aaattagaat ctgagtataa 1200
atttactttt tcaaattatt tccaagagag attgatgggt taattaaagg agaagattcc 1260
tgaaatttga gagacaaaat aaatggaaga catgagaact tt 1302
<210> 30
<211> 1026
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G3
<400> 30
agtgtggtac tttgtcttga ggagatgtcc tggactcaca cggaaactta gggctacgga 60
atgaagttct cactcccatt aggtgacagg tttttagaga agccaatcag cgtcgccgcg 120
gtcctggttc taaagtcctc gctcacccac ccggactcat tctccccaga cgccaaggat 180
ggtggtcatg gcgccccgaa ccctcttcct gctgctctcg ggggccctga ccctgaccga 240
gacctgggcg ggctcccact ccatgaggta tttcagcgcc gccgtgtccc ggcccggccg 300
cggggagccc cgcttcatcg ccatgggcta cgtggacgac acgcagttcg tgcggttcga 360
cagcgactcg gcgtgtccga ggatggagcc gcgggcgccg tgggtggagc aggaggggcc 420
ggagtattgg gaagaggaga cacggaacac caaggcccac gcacagactg acagaatgaa 480
cctgcagacc ctgcgcggct actacaacca gagcgaggcc aagcagtctt ccctgcccac 540
catccccatc atgggtatcg ttgctggcct ggttgtcctt gcagctgtag tcactggagc 600
tgcggtcgct gctgtgctgt ggagaaagaa gagctcagat tgaaaaggag ggagctactc 660
tcaggctgca atgtgaaaca gctgccctgt gtgggactga gtggcaagtc cctttgtgac 720
ttcaagaacc ctgactcctc tttgtgcaga gaccagccca cccctgtgcc caccatgacc 780
ctcttcctca tgctgaactg cattccttcc ccaatcacct ttcctgttcc agaaaagggg 840
ctgggatgtc tccgtctctg tctcaaattt gtggtccact gagctataac ttacttctgt 900
attaaaatta gaatctgagt ataaatttac tttttcaaat tatttccaag agagattgat 960
gggttaatta aaggagaaga ttcctgaaat ttgagagaca aaataaatgg aagacatgag 1020
aacttt 1026
<210> 31
<211> 1302
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G4
<400> 31
agtgtggtac tttgtcttga ggagatgtcc tggactcaca cggaaactta gggctacgga 60
atgaagttct cactcccatt aggtgacagg tttttagaga agccaatcag cgtcgccgcg 120
gtcctggttc taaagtcctc gctcacccac ccggactcat tctccccaga cgccaaggat 180
ggtggtcatg gcgccccgaa ccctcttcct gctgctctcg ggggccctga ccctgaccga 240
gacctgggcg ggctcccact ccatgaggta tttcagcgcc gccgtgtccc ggcccggccg 300
cggggagccc cgcttcatcg ccatgggcta cgtggacgac acgcagttcg tgcggttcga 360
cagcgactcg gcgtgtccga ggatggagcc gcgggcgccg tgggtggagc aggaggggcc 420
ggagtattgg gaagaggaga cacggaacac caaggcccac gcacagactg acagaatgaa 480
cctgcagacc ctgcgcggct actacaacca gagcgaggcc agttctcaca ccctccagtg 540
gatgattggc tgcgacctgg ggtccgacgg acgcctcctc cgcgggtatg aacagtatgc 600
ctacgatggc aaggattacc tcgccctgaa cgaggacctg cgctcctgga ccgcagcgga 660
cactgcggct cagatctcca agcgcaagtg tgaggcggcc aatgtggctg aacaaaggag 720
agcctacctg gagggcacgt gcgtggagtg gctccacaga tacctggaga acgggaagga 780
gatgctgcag cgcgcggagc agtcttccct gcccaccatc cccatcatgg gtatcgttgc 840
tggcctggtt gtccttgcag ctgtagtcac tggagctgcg gtcgctgctg tgctgtggag 900
aaagaagagc tcagattgaa aaggagggag ctactctcag gctgcaatgt gaaacagctg 960
ccctgtgtgg gactgagtgg caagtccctt tgtgacttca agaaccctga ctcctctttg 1020
tgcagagacc agcccacccc tgtgcccacc atgaccctct tcctcatgct gaactgcatt 1080
ccttccccaa tcacctttcc tgttccagaa aaggggctgg gatgtctccg tctctgtctc 1140
aaatttgtgg tccactgagc tataacttac ttctgtatta aaattagaat ctgagtataa 1200
atttactttt tcaaattatt tccaagagag attgatgggt taattaaagg agaagattcc 1260
tgaaatttga gagacaaaat aaatggaaga catgagaact tt 1302
<210> 32
<211> 1138
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G5
<400> 32
agtgtggtac tttgtcttga ggagatgtcc tggactcaca cggaaactta gggctacgga 60
atgaagttct cactcccatt aggtgacagg tttttagaga agccaatcag cgtcgccgcg 120
gtcctggttc taaagtcctc gctcacccac ccggactcat tctccccaga cgccaaggat 180
ggtggtcatg gcgccccgaa ccctcttcct gctgctctcg ggggccctga ccctgaccga 240
gacctgggcg ggctcccact ccatgaggta tttcagcgcc gccgtgtccc ggcccggccg 300
cggggagccc cgcttcatcg ccatgggcta cgtggacgac acgcagttcg tgcggttcga 360
cagcgactcg gcgtgtccga ggatggagcc gcgggcgccg tgggtggagc aggaggggcc 420
ggagtattgg gaagaggaga cacggaacac caaggcccac gcacagactg acagaatgaa 480
cctgcagacc ctgcgcggct actacaacca gagcgaggcc agttctcaca ccctccagtg 540
gatgattggc tgcgacctgg ggtccgacgg acgcctcctc cgcgggtatg aacagtatgc 600
ctacgatggc aaggattacc tcgccctgaa cgaggacctg cgctcctgga ccgcagcgga 660
cactgcggct cagatctcca agcgcaagtg tgaggcggcc aatgtggctg aacaaaggag 720
agcctacctg gagggcacgt gcgtggagtg gctccacaga tacctggaga acgggaagga 780
gatgctgcag cgcgcggacc cccccaagac acacgtgacc caccaccctg tctttgacta 840
tgaggccacc ctgaggtgct gggccctggg cttctaccct gcggagatca tactgacctg 900
gcagcgggat ggggaggacc agacccagga cgtggagctc gtggagacca ggcctgcagg 960
ggatggaacc ttccagaagt gggcagctgt ggtggtgcct tctggagagg agcagagata 1020
cacgtgccat gtgcagcatg aggggctgcc ggagcccctc atgctgagat ggagtaagga 1080
gggagatgga ggcatcatgt ctgttaggga aagcaggagc ctctctgaag acctttaa 1138
<210> 33
<211> 862
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G6
<400> 33
agtgtggtac tttgtcttga ggagatgtcc tggactcaca cggaaactta gggctacgga 60
atgaagttct cactcccatt aggtgacagg tttttagaga agccaatcag cgtcgccgcg 120
gtcctggttc taaagtcctc gctcacccac ccggactcat tctccccaga cgccaaggat 180
ggtggtcatg gcgccccgaa ccctcttcct gctgctctcg ggggccctga ccctgaccga 240
gacctgggcg ggctcccact ccatgaggta tttcagcgcc gccgtgtccc ggcccggccg 300
cggggagccc cgcttcatcg ccatgggcta cgtggacgac acgcagttcg tgcggttcga 360
cagcgactcg gcgtgtccga ggatggagcc gcgggcgccg tgggtggagc aggaggggcc 420
ggagtattgg gaagaggaga cacggaacac caaggcccac gcacagactg acagaatgaa 480
cctgcagacc ctgcgcggct actacaacca gagcgaggcc aaccccccca agacacacgt 540
gacccaccac cctgtctttg actatgaggc caccctgagg tgctgggccc tgggcttcta 600
ccctgcggag atcatactga cctggcagcg ggatggggag gaccagaccc aggacgtgga 660
gctcgtggag accaggcctg caggggatgg aaccttccag aagtgggcag ctgtggtggt 720
gccttctgga gaggagcaga gatacacgtg ccatgtgcag catgaggggc tgccggagcc 780
cctcatgctg agatggagta aggagggaga tggaggcatc atgtctgtta gggaaagcag 840
gagcctctct gaagaccttt aa 862
<210> 34
<211> 529
<212> DNA
<213> 智人
<220>
<223> HLA-G7
<400> 34
agtgtggtac tttgtcttga ggagatgtcc tggactcaca cggaaactta gggctacgga 60
atgaagttct cactcccatt aggtgacagg tttttagaga agccaatcag cgtcgccgcg 120
gtcctggttc taaagtcctc gctcacccac ccggactcat tctccccaga cgccaaggat 180
ggtggtcatg gcgccccgaa ccctcttcct gctgctctcg ggggccctga ccctgaccga 240
gacctgggcg ggctcccact ccatgaggta tttcagcgcc gccgtgtccc ggcccggccg 300
cggggagccc cgcttcatcg ccatgggcta cgtggacgac acgcagttcg tgcggttcga 360
cagcgactcg gcgtgtccga ggatggagcc gcgggcgccg tgggtggagc aggaggggcc 420
ggagtattgg gaagaggaga cacggaacac caaggcccac gcacagactg acagaatgaa 480
cctgcagacc ctgcgcggct actacaacca gagcgaggcc agtgagtaa 529
<210> 35
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 氧化还原活性位点
<400> 35
Cys Gly Pro Cys
1
<210> 36
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex3 正向引物
<400> 36
ggccggagta ttgggaaga 19
<210> 37
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex3 探针
<400> 37
caaggcccac gcacagactg aca 23
<210> 38
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex3 反向引物
<400> 38
gcagggtctg caggttcatt 20
<210> 39
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex4 正向引物
<400> 39
ctgcggctca gatctccaa 19
<210> 40
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex4 探针
<400> 40
cgcaagtgtg aggcggccaa t 21
<210> 41
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex4 反向引物
<400> 41
caggtaggct ctcctttgtt cag 23
<210> 42
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex5 正向引物
<400> 42
caccaccctg tctttgacta tgag 24
<210> 43
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex5 探针
<400> 43
accctgaggt gctgggccct g 21
<210> 44
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex5 反向引物
<400> 44
agtatgatct ccgcagggta gaag 24
<210> 45
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex6 正向引物
<400> 45
catccccatc atgggtatcg 20
<210> 46
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex6 探针
<400> 46
tgctggcctg gttgtccttg ca 22
<210> 47
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex6 反向引物
<400> 47
ccgcagctcc agtgactaca 20
<210> 48
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex8 正向引物
<400> 48
gaccctcttc ctcatgctga ac 22
<210> 49
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex8 探针
<400> 49
cattccttcc ccaatcacct ttcctgtt 28
<210> 50
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex8 反向引物
<400> 50
catcccagcc ccttttctg 19
<210> 51
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex3-5 正向引物
<400> 51
ttcatcgcca tgggctacg 19
<210> 52
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex3-5 探针
<400> 52
cgacacgcag ttcgtgcggt tc 22
<210> 53
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex3-5 反向引物
<400> 53
atcctcggac acgccgagt 19
<210> 54
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex2/3 正向引物
<400> 54
ccgaaccctc ttcctgctgc 20
<210> 55
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex2/3 探针
<400> 55
cgagacctgg gcgggctccc 20
<210> 56
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-G Ex2/3 反向引物
<400> 56
gcgctgaaat acctcatgga 20
<210> 57
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-H Ex2/3 正向引物
<400> 57
gagagaacct gcggatcgc 19
<210> 58
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-H Ex2/3 探针
<400> 58
agcgagggcg gttctcacac catg 24
<210> 59
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-H Ex2/3 反向引物
<400> 59
ccacgtcgca gccatacat 19
<210> 60
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-H 正向引物
<400> 60
gagagaacct gcggatcgc 19
<210> 61
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-H 探针
<400> 61
accagagcga gggcggttct cacac 25
<210> 62
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-H 反向引物
<400> 62
cgggccggga catggt 16
<210> 63
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> KRT5 正向引物
<400> 63
cgccacttac cgcaagct 18
<210> 64
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> KRT5 探针
<400> 64
tggagggcga ggaatgcaga ctca 24
<210> 65
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> KRT5 反向引物
<400> 65
acagagatgt tgactggtcc aactc 25
<210> 66
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> KRT20 正向引物
<400> 66
gcgactacag tgcatattac agacaa 26
<210> 67
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> KRT20 探针
<400> 67
ttgaagagct gcgaagtcag attaaggatg ct 32
<210> 68
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> KRT20 反向引物
<400> 68
cacaccgagc attttgcagt t 21
<210> 69
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CALM2 正向引物
<400> 69
gagcgagctg agtggttgtg 20
<210> 70
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CALM2 探针
<400> 70
tcgcgtctcg gaaaccggta gc 22
<210> 71
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CALM2 反向引物
<400> 71
agtcagttgg tcagccatgc t 21
<210> 72
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-L Ex2/3 正向引物
<400> 72
cctgctccgc tattacaacc a 21
<210> 73
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-L Ex2/3 探针
<400> 73
cgaggccggt atgaacagtt cgccta 26
<210> 74
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-L Ex2/3 反向引物
<400> 74
cgttcagggc gatgtaatcc 20
<210> 75
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-L Ex5/6 正向引物
<400> 75
gctgtggttg ctgctgcg 18
<210> 76
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-L Ex5/6 探针
<400> 76
agaaaagctc aggcagcaat tgtgctcag 29
<210> 77
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-L Ex5/6 反向引物
<400> 77
catagtcctc tttacaagta tcatgagatg 30
<210> 78
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-L Ex7 正向引物
<400> 78
tcctcttctg ctcagctctc cta 23
<210> 79
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-L Ex7 探针
<400> 79
ctctcccttc cctgagttgt agtaatccta gcact 35
<210> 80
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-L Ex7 反向引物
<400> 80
gctttataga tccatgagtt tgcatta 27
<210> 81
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-J Ex4/5 正向引物
<400> 81
caaggggctg cccaagc 17
<210> 82
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-J Ex4/5 探针
<400> 82
catcctgaga tgggtcacac atttctggaa 30
<210> 83
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HLA-J Ex4/5 反向引物
<400> 83
cctcctagtc ttggaacctt gagaagt 27

Claims (15)

1.一种产生用于治疗或预防受试者中的肿瘤的药物或用于检测受试者中的肿瘤的诊断剂的方法，包括：
(A)确定得自所述受试者的样品中至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽的表达，
其中所述至少一种核酸分子选自以下核酸分子：
(a)编码包含SEQ ID NO:1至5任一氨基酸序列或由SEQ ID NO:1至5任一氨基酸序列组成的多肽的核酸分子，
(b)包含SEQ ID NO:6至10任一核苷酸序列或由SEQ ID NO:6至10任一核苷酸序列组成的核酸分子，
(c)编码与(a)的氨基酸序列至少85％相同、优选至少90％相同、最优选至少95％相同的多肽的核酸分子，
(d)由与(b)的核苷酸序列至少95％相同、优选至少96％相同、最优选至少98％相同的核苷酸序列组成的核酸分子，
(e)由相对于(d)的核酸分子是简并序列的核苷酸序列组成的核酸分子，
(f)由(a)至(e)任一核酸分子的片段组成的核酸分子，所述片段包含至少150个核苷酸，优选至少300个核苷酸，更优选至少450个核苷酸，最优选至少600个核苷酸，及
(g)对应于(a)至(f)任一核酸分子的核酸分子，其中T被替换为U，并且
其中所述至少一种蛋白质或肽选自由(a)至(g)任一核酸分子编码的蛋白质或肽；以及
(B)如果在(A)中所述至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽表达，则产生能抑制受试者中所述至少一种核酸分子和/或所述至少一种蛋白质或肽的表达的药物，和/或
(B’)如果在(A)中所述至少一种核酸分子和/或至少一种蛋白质或肽表达，则产生能在体内检测受试者中所述至少一种核酸分子和/或所述至少一种蛋白质或肽的表达位点的诊断剂。
2.根据权利要求1的方法，其中在步骤(A)中确定以下的表达：
(i)如权利要求1定义的SEQ ID NO:6至10的核苷酸序列的至少两种核酸分子或其衍生的核酸分子，
(ii)如权利要求1定义的SEQ ID NO:1至5任一氨基酸序列的至少两种蛋白质或其衍生的蛋白质或肽，和/或
(iii)如权利要求1定义的SEQ ID NO:6至10的核苷酸序列的至少一种核酸分子或其衍生的核酸分子及权利要求1定义的SEQ ID NO:1至5任一氨基酸序列的至少一种蛋白质或肽或其衍生的蛋白质或肽。
3.根据权利要求1或2的方法，进一步在步骤(A)中确定HLA Ib类基因HLA-E、HLA-F和HLA-G的至少一种和/或产自所述MHC Ib类基因的至少一种蛋白质或肽的表达。
4.根据权利要求1至3任一项的方法，进一步在步骤(A)中确定HLAI类基因HLA-A、HLA-B和HLA-C的至少一种和/或产自所述MHC I类基因的至少一种蛋白质或肽的表达。
5.根据权利要求1至4任一项的方法，进一步在步骤(A)中确定HLA II类基因HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DRA和HLA-DRB1的至少一种和/或至少一种产自所述MHC II类基因的蛋白质或肽的表达。
6.根据权利要求1-5任一项的方法，进一步在步骤(A)中确定至少一种生长因子和/或至少一种肿瘤标志物和/或在妊娠早期及癌胚消退中表达的至少一种蛋白质的表达。
7.根据权利要求6的方法，其中所述至少一种生长因子选自：表皮生长因子(EGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，生长分化因子-9(GDF9)，肝细胞生长因子(HGF)，肝癌衍生生长因子(HDGF)，角质细胞生长因子(KGF)，神经生长因子(NGF)，胎盘生长因子(PGF)，血小板衍生生长因子(PDGF)，基质细胞衍生因子1(SDF1)，转化生长因子和血管内皮生长因子。
8.根据权利要求6的方法，其中所述至少一种肿瘤标志物选自生长抑素受体、TSH受体、酪氨酸受体和PSMA。
9.根据权利要求1至8任一项的方法，其中
(i)所述药物是或包含能抑制所述至少一种核酸分子的表达的小分子、适体、siRNA、shRNA、miRNA、核酶、反义核酸分子、基于CRISPR-Cas9的构建体、基于CRISPR-Cpf1的构建体、大范围核酸酶、锌指核酸酶、或转录激活物样(TAL)效应子(TALE)核酸酶，和/或
(ii)所述药物是或包含能抑制所述至少一种蛋白质或肽的小分子、抗体、蛋白质药物或适体，
其中所述蛋白质药物优选是抗体模拟物，并且
其中所述抗体模拟物优选选自affibody、adnectin、anticalin、DARPin、avimer、nanofitin、affilin、Kunitz结构域肽和
Figure FDA0003711643250000021
和/或
(iii)所述诊断剂是或包含能与所述至少一种表达的核酸分子结合的小分子、适体、siRNA、shRNA、miRNA、核酶、反义核酸分子、基于CRISPR-Cas9的构建体、基于CRISPR-Cpf1的构建体、大范围核酸酶、锌指核酸酶和转录激活物样(TAL)效应子(TALE)核酸酶，和/或
(iv)所述诊断剂是或包含能与所述至少一种表达的蛋白质或肽结合的小分子、抗体、蛋白质药物或适体，
其中所述蛋白质药物优选是抗体模拟物，并且
其中所述抗体模拟物优选选自affibody、adnectin、anticalin、DARPin、avimer、nanofitin、affilin、Kunitz结构域肽和
Figure FDA0003711643250000022
10.根据权利要求9的方法，其中
将是药物或在药物中包含的小分子、抗体、蛋白质药物或适体与细胞毒性剂融合，其中所述细胞毒性剂优选是治疗性放射性同位素，更优选为177Lu、90Y、67Cu和225Ac，和/或
将是诊断剂或在诊断剂中包含的小分子、抗体、蛋白质药物或适体与成像剂融合，其中所述成像剂优选是治疗性放射性同位素，更优选为67Ga、44Sc、111In、99mTc、57Co、131I。
11.通过权利要求1至10任一项的方法产生的药物，用于治疗或预防受试者中的肿瘤的用途。
12.通过权利要求1至10任一项的方法产生的诊断剂，用于体内检测受试者的肿瘤部位的用途。
13.根据权利要求12的用于所述用途的诊断剂，其中所述检测包括扫描受试者的全身，其中所述扫描优选采用全身正电子发射断层显像(PET)扫描仪。
14.根据权利要求12或13的用于所述用途的诊断剂，其中所述检测包括测量受试者的肿瘤部位中所述放射性同位素的辐射剂摄取量。
15.权利要求14的用于所述用途的诊断剂，其中基于所测量的辐射剂摄取量来确定药物的治疗有效量，其中所述药物优选通过权利要求1-10任一项的方法产生。
CN202080090213.1A 2019-10-25 2020-10-19 Hla-h、hla-j、hla-l、hla-v和hla-y作为治疗和诊断靶 Pending CN114846156A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP19205451.8 2019-10-25
EP19205451 2019-10-25
PCT/EP2020/079344 WO2021078679A1 (en) 2019-10-25 2020-10-19 Hla-h, hla-j, hla-l, hla-v and hla-y as therapeutic and diagnostic targets

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114846156A true CN114846156A (zh) 2022-08-02

Family

ID=68382193

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080090213.1A Pending CN114846156A (zh) 2019-10-25 2020-10-19 Hla-h、hla-j、hla-l、hla-v和hla-y作为治疗和诊断靶

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20220363767A1 (zh)
EP (1) EP4048815A1 (zh)
JP (1) JP2022553073A (zh)
KR (1) KR20220088910A (zh)
CN (1) CN114846156A (zh)
AU (1) AU2020369092A1 (zh)
CA (1) CA3154939A1 (zh)
IL (1) IL292394A (zh)
WO (1) WO2021078679A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20210238690A1 (en) * 2018-04-26 2021-08-05 Intellexon Gmbh Hla-j and medical/diagnostic uses thereof

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US6080560A (en) 1994-07-25 2000-06-27 Monsanto Company Method for producing antibodies in plant cells
US7608413B1 (en) * 2005-03-25 2009-10-27 Celera Corporation Kidney disease targets and uses thereof
EP1892248A1 (en) 2006-08-21 2008-02-27 Eidgenössische Technische Hochschule Zürich Specific and high affinity binding proteins comprising modified SH3 domains of FYN kinase
US8168586B1 (en) * 2007-11-21 2012-05-01 Celera Corporation Cancer targets and uses thereof
DE102011051868B4 (de) 2011-07-15 2013-02-21 ITM Isotopen Technologien München AG Verfahren zur Herstellung trägerfreier hochreiner 177Lu-Verbindungen sowie trägerfreie 177Lu-Verbindungen
DE102011111631A1 (de) 2011-08-25 2013-02-28 Wolfgang Würfel Verfahren zur Herstellung von Medikamenten zur Tumorbekämpfung
CN104914242B (zh) * 2014-09-29 2017-08-11 深圳华大基因科技服务有限公司 用于癌症诊断和治疗的方法和组合物
US11913075B2 (en) * 2017-04-01 2024-02-27 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for detecting and modulating an immunotherapy resistance gene signature in cancer
KR20210100656A (ko) * 2018-12-05 2021-08-17 제넨테크, 인크. 암 면역요법을 위한 진단 방법 및 조성물

Also Published As

Publication number Publication date
AU2020369092A1 (en) 2022-05-12
KR20220088910A (ko) 2022-06-28
JP2022553073A (ja) 2022-12-21
EP4048815A1 (en) 2022-08-31
CA3154939A1 (en) 2021-04-29
US20220363767A1 (en) 2022-11-17
WO2021078679A1 (en) 2021-04-29
IL292394A (en) 2022-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102619197B1 (ko) Hsd17b13 변종 및 이것의 용도
JP2018102299A (ja) 膀胱癌の処置および診断のための方法および組成物
AU2011200600A1 (en) Mutations of the PIK3CA gene in human cancers
EP2177628A2 (en) Markers for diagnosis of cancer and its use
US20230279496A1 (en) Clear Cell Renal Cell Carcinoma Biomarkers
JP2011254830A (ja) 結腸癌に関するポリヌクレオチド
KR20140016230A (ko) 암의 진단 및 치료를 위한 방법 및 화합물
US20200300859A1 (en) Modulating biomarkers to increase tumor immunity and improve the efficacy of cancer immunotherapy
CN114846156A (zh) Hla-h、hla-j、hla-l、hla-v和hla-y作为治疗和诊断靶
KR20210134551A (ko) 유두형 신장암의 재발 및 예후 예측용 바이오 마커 및 이의 용도
US20230374609A1 (en) Hla-j and medical/diagnostic uses thereof
Jacob et al. Identification of actionable targets for breast cancer intervention using a diversity outbred mouse model
CN114341172A (zh) 医学和诊断学中的hla-h
KR20210090594A (ko) 신장암 환자의 예후 진단 및 치료 전략 결정용 병리등급 특이적 마커
Class et al. Patent application title: Marker of Prostate Cancer Inventors: Karina Dalsgaard Sorensen (Arhus C, DK) Torben Falck Orntoft (Silkeborg, DK) Torben Falck Orntoft (Silkeborg, DK) Lars Dyrskjot Andersen (Odder, DK) Assignees: REGION MIDTJYLLAND Aarhus Universitet

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination