CN114829403A - 抗pd-l1/抗b7-h3多特异性抗体及其用途 - Google Patents

抗pd-l1/抗b7-h3多特异性抗体及其用途 Download PDF

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Abstract

本公开提供了抗PD‑L1/抗B7‑H3多特异性抗体，其能够有效阻断PD‑L1与其受体PD‑1之间的相互作用，以及抑制B7‑H3蛋白的T细胞抑制作用。该多特异性抗体可以对PD‑L1蛋白和B7‑H3蛋白二者具有高结合亲和力。

Description

抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体及其用途
技术领域
提供了抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体及其用途。
背景技术
程序性死亡配体1(PD-L1)，也称为分化簇274(CD274)或B7同源物1(B7-H1)，是一种40kDa的1型跨膜蛋白，被认为在特定事件诸如妊娠、组织同种异基因移植物、自身免疫性疾病和其他疾病状态(诸如肝炎)期间在抑制免疫系统中起主要作用。PD-L1与PD-1或B7.1的结合传递抑制信号，其减少淋巴结中CD8+T细胞的增殖，并且此外补充，PD-1还能够通过细胞凋亡来控制外来抗原特异性T细胞在淋巴结中的聚积，而这又由基因Bcl-2的下调介导。
已经表明，PD-L1的上调可能使癌症逃避宿主免疫系统。一项对来自肾细胞癌患者的肿瘤标本的分析发现，PD-L1的高肿瘤表达与肿瘤侵袭性增加和死亡风险增加有关。许多PD-L1抑制剂作为免疫肿瘤疗法正在开发中，并在临床试验中显示出良好的结果。
B7-H3(CD276)是B7家族的成员，是包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域的跨膜蛋白。由于外显子重复，B7-H3的两个胞外结构域由一对(2Ig B7-H3)或两对相同(4IgB7-H3)的免疫球蛋白可变结构域和免疫球蛋白恒定结构域组成。这两种形式之间的功能差异尚未得到证实。B7-H3的胞内结构域很短并且没有已知的基序(Chapoval AI,Ni J,LauJS,Wilcox RA,Flies DB,Liu D,等人NatImmunol 2001；2:269-74.)。
B7-H3蛋白具有与B7家族的其他成员20～27％的氨基酸序列同一性。人B7-H3具有与小鼠B7-H388％的氨基酸序列同一性。小鼠B7-H3具有一种亚型(2IgB7-H3)，而人B7-H3具有两种亚型(2Ig B7-H3、4Ig B7-H3)。在人组织中确认了4Ig B7-H3。
发现小鼠B7-H3与CD8+T细胞的TLT1结合，从而增强T细胞增殖、细胞因子产生和细胞毒性，因此提示TLT2可以作为B7-H3受体。然而，随后在小鼠或人中均未发现这种相互作用的证据(M.Loos,D.M.Hedderich,and D.M.Hedderich,等人BMC Cancer,vol.9,article463,2009)。
B7-H3蛋白并不总是在正常组织中的自然杀伤细胞(NK细胞)或抗原呈递细胞(APC)中表达，但其表达可以被诱导。虽然B7-1和B7-2的表达主要局限于免疫细胞诸如抗原呈递细胞，但B7-H3蛋白不仅存在于人的成骨细胞、成纤维细胞、成纤维细胞样滑膜细胞和上皮细胞中，还存在于肝、肺、膀胱、睾丸、前列腺、乳房、胎盘和淋巴管器官中。这种广泛的表达模式表明B7-H3具有更多不同的免疫学和非免疫学功能，特别是在外周组织中。
近年来，B7-H3表达已经在多种实体癌诸如非小细胞肺癌、肾细胞癌、神经母细胞瘤、结直肠癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、前列腺癌、子宫内膜癌、肝细胞癌、乳腺癌、宫颈癌、骨肉瘤、口腔癌、膀胱癌、胶质瘤、黑色素瘤等中证实，并且已经报道了其在恶性血液病诸如急性白血病、多发性骨髓瘤、各种淋巴瘤中表达(Zhimeng Yea,Zhuojun Zhengb等人,CellPhysiol Biochem(2016),Elodie Picarda,Kim C.Ohaegbulam and Xingxing Zang,clinical cancer research(2016),Wei Zhang,Yanfang Wang,Jing Wang等人,international journal of oncology(2015))。
B7-H3是一种属于免疫检查点配体的蛋白质。免疫检查点蛋白的作用是控制人体内的免疫细胞，以防止它们做出错误的异常行为。当免疫检查点蛋白在癌细胞中过表达时，免疫细胞接收到癌细胞作为正常信号发出的异常信号，并将癌细胞识别为健康细胞。免疫检查点抑制剂是一种抗癌免疫治疗剂，它阻断癌细胞的这种异常信号，从而通过患者自身的免疫功能来治疗癌症。作为免疫检查点配体之一的B7-H3与T细胞表面上的B7-H3受体结合并诱导T细胞免疫反应的抑制，但仍然没有揭示B7-H3结合什么受体。
能够阻断这种免疫检查点配体的抗体通过部分或完全中和免疫检查点配体与免疫检查点受体的相互作用并抑制免疫检查点，从而重新激活免疫细胞的降低的活性，来显示出抗癌免疫治疗作用。尚未发现与B7-H3结合的受体，但与B7-H3结合的抗B7-H3抗体可通过阻断免疫检查点受体与B7-H3之间的结合并抑制这样的免疫检查点，从而重新激活免疫细胞的降低的活性，从而可以显示出抗癌免疫治疗作用。换言之，可以预期阻断与B7-H3受体结合的抗B7-H3单克隆抗体具有抗癌治疗作用。(Elodie Picarda,Kim C.Ohaegbulamand Xingxing Zang,Clin Cancer Res,2017 Jul 12；22)。美国专利号8,802,091和9,371,39公开了B7-H3的抗体。
公开内容
技术问题
提供了抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体及其用途。
技术方案
本公开提供了抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，其能够有效阻断PD-L1与其受体PD-1之间的相互作用，以及抑制B7-H3蛋白的T细胞抑制作用。所公开的多特异性抗体可以对PD-L1(例如，人PD-L1蛋白)和B7-H3(例如，人B7-H3蛋白)两者具有高结合亲和力。本公开还提供了包括抗PD-L1抗体和分离的抗B7-H3抗体的组合疗法。
实验数据表明，与单药给药相比，抗B7-H3抗体和抗PD-1抗体的组合治疗以同基因方式表现出优异的癌症生长抑制功效。此外，抗B7-H3/抗PD-L1双特异性抗体的组合效果甚至更加明显。
此外，在所有测试的双特异性抗体中，“1+1”形式明显优于“2+2”形式。这样的结果也令人惊讶，因为“2+2”形式被认为更有效，因为每个分子对PD-L1和B7-H3二者都有更多的结合位点，并且可能在结构上更稳定。
抗-B7-H3/抗-PD-L1双特异性抗体尤其是“1+1”形式的那些的优异活性被认为归因于靶癌细胞上如何表达B7-H3和PD-L1蛋白。还预期抗B7-H3抗体和/或抗PD-L1抗体的表位有助于显著协同作用。例如，与所有其他已知的治疗性抗PD-L1抗体不同，本公开的抗PD-L1抗体和片段与PD-L1蛋白的IgC结构域结合。因此，在一种实施方式中，提供了抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体，其包括对人PD-L1蛋白具有结合特异性的抗PD-L1单元和对人B7-H3蛋白具有结合特异性的抗B7-H3单元。双特异性抗体优选具有1+1形式，但也可以采用2+2形式，如下文进一步描述的。
例如，在1+1形式中，双特异性抗体具有Fc片段，并且抗PD-L1和抗B7-H3结合片段两者位于Fc片段的N端侧(或替代地，位于Fc片段的C端侧)。抗PD-L1和抗B7-H3结合片段各自可以独立地选自Fab片段、单链Fab片段(scFab)、单域抗体(sdAb)、单链可变片段(scFv)和抗原结合部分，或任何其他抗原结合片段。
在一个实例中，PD-L1结合位点是Fab片段并且B7-H3结合位点是scFab片段。在一个实例中，PD-L1结合位点是Fab片段并且B7-H3结合位点是scFv片段。在一个实例中，PD-L1结合位点是scFab片段并且B7-H3结合位点是Fab。在一个实例中，PD-L1结合位点是scFv片段并且B7-H3结合位点是Fab。顾名思义，1+1形式对于PD-L1结合是单价体，并且对于B7-H3结合是单价体。
在2+2形式中，全抗体(Fab和Fc)可以在Fc片段的C端侧融合到两个抗原结合片段。在一种实施方式中，全抗体对PD-L1具有特异性，并且两个抗原结合片段对B7-H3具有特异性。在一种实施方式中，全抗体对B7-H3具有特异性，并且两个抗原结合片段对PD-L1具有特异性。抗原结合片段可以选自Fab片段、单链Fab片段(scFab)、单域抗体(sdAb)、单链可变片段(scFv)和抗原结合部分，或任何其他抗原结合片段。
在任何上述实例中，抗PD-L1结合单元可以特异性结合人PD-L1蛋白的免疫球蛋白C(Ig C)结构域，其中所述Ig C结构域由氨基酸残基133-225组成。在一些实施方式中，抗PD-L1结合单元可特异性结合人PD-L1蛋白的氨基酸残基Y134、K162和N183。抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体可以包括：抗PD-L1抗体或其抗原结合片段作为PD-L1靶向部分，其能够特异性识别和/或结合PD-L1蛋白；以及抗B7-H3抗体或其抗原结合片段作为B7-H3靶向部分，其能够特异性识别和/或结合B7-H3蛋白。
抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体可以包括抗PD-L1抗体或其抗原结合片段作为PD-L1靶向部分。
在实施方式中，多特异性抗体中包括的抗PD-L1抗体或其片段可以特异性结合PD-L1(例如人PD-L1)蛋白的免疫球蛋白C(IgC)结构域。在一些实施方式中，IgC结构域由人PD-L1蛋白的氨基酸残基133-225组成。在一些实施方式中，抗PD-L1抗体或其片段可以结合选自人PD-L1蛋白的Y134、K162和N183的氨基酸残基中的至少一种。在一些实施方式中，抗PD-L1抗体或其片段不结合PD-L1蛋白的免疫球蛋白V(IgV)结构域，并且例如，IgV结构域由人PD-L1蛋白的氨基酸残基19-127组成。
抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，包括抗PD-L1抗体或其抗原结合片段和抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，
其中所述抗PD-L1抗体或其片段包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：1和294组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：2、3和295组成的组的氨基酸序列的VHCDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：4、5、6、7、8、9、10、11和296组成的组的氨基酸序列的VHCDR3；(4)具有选自由SEQ ID NO：12、13、14和297组成的组的氨基酸序列的VL CDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：15和298组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQID NO：16、17、18、19和299组成的组的氨基酸序列的VL CDR3；以及
所述抗B7-H3抗体或其片段包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：20、21、22和23组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：24、25、26、27、28和29组成的组的氨基酸序列的VH CDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：30、31、32、33和34组成的组的氨基酸序列的VH CDR3；(4)具有选自由SEQ ID NO：35、36、37、38和39组成的组的氨基酸序列的VLCDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：40、41、42、43、44和45组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQ ID NO：46、47、48、49和50组成的组的氨基酸序列的VL CDR3。
在实施方式中，所述抗PD-L1抗体或其片段包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：1和294组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：2、3和295组成的组的氨基酸序列的VH CDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：4、5和296组成的组的氨基酸序列的VHCDR3；(4)具有选自由SEQ ID NO：12和297组成的组的氨基酸序列的VL CDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：15和298组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQ ID NO：16和299组成的组的氨基酸序列的VL CDR3；以及
所述抗B7-H3抗体或其片段包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：20和21组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：24和25组成的组的氨基酸序列的VH CDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：30和31组成的组的氨基酸序列的VH CDR3；(4)具有选自由SEQID NO：35和36组成的组的氨基酸序列的VL CDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：40和41组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQ ID NO：46和47组成的组的氨基酸序列的VL CDR3。
在实施方式中，所述抗PD-L1抗体或其片段包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：1和294组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：3和295组成的组的氨基酸序列的VH CDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：5和296组成的组的氨基酸序列的VH CDR3；(4)具有选自由SEQ ID NO：12和297组成的组的氨基酸序列的VL CDR1；(5)具有选自由SEQID NO：15和298组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQ ID NO：16和299组成的组的氨基酸序列的VL CDR3；以及
所述抗B7-H3抗体或其片段包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：20和21组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：24和25组成的组的氨基酸序列的VH CDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：30和31组成的组的氨基酸序列的VH CDR3；(4)具有选自由SEQID NO：35和36组成的组的氨基酸序列的VL CDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：40和41组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQ ID NO：46和47组成的组的氨基酸序列的VL CDR3。
在实施方式中，所述抗PD-Ll抗体或其片段包括轻链可变区，所述轻链可变区具有选自由SEQ ID NO:122、124、126、128、130、132、134、136、138、140和209组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ ID NO：122、124、126、128、130、132、134、136、138、140和209组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
在实施方式中，所述抗PD-L1抗体或其片段包括轻链可变区，所述轻链可变区具有选自由SEQ ID NO：130和209组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ ID NO：130和209组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
在实施方式中，所述抗B7-H3抗体或其片段包括轻链可变区，所述轻链可变区具有选自由SEQ ID NO：57、58、59、60、61和62组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ IDNO：57、58、59、60、61和62组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
在实施方式中，所述抗B7-H3抗体或其片段包括轻链可变区，所述轻链可变区具有选自由SEQ ID NO：57和58组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ ID NO：57和58组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
在实施方式中，所述抗PD-Ll抗体或其片段包括重链可变区，所述重链可变区具有选自由SEQ ID NO:121、123、125、127、129、131、133、135、137、139和211组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ ID NO:121、123、125、127、129、131、133、135、137、139和211组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
在实施方式中，所述抗PD-L1抗体或其片段包括重链可变区，所述重链可变区具有选自由SEQ ID NO：129和211组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ ID NO：129和211组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
在实施方式中，所述抗B7-H3抗体或其片段包括重链可变区，所述重链可变区具有选自由SEQ ID NO：51、52、53、54、55和56组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ IDNO：51、52、53、54、55和56组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
在实施方式中，所述抗B7-H3抗体或其片段包括重链可变区，所述重链可变区具有选自由SEQ ID NO：51和52组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ ID NO：51和52组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
在实施方式中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段能够与选自PD-L1蛋白的Y134、K162和N183的氨基酸残基中的至少一种结合。
在实施方式中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段不结合PD-L1蛋白的免疫球蛋白V(Ig V)结构域，其中所述Ig V结构域由氨基酸残基19-127组成。
在实施方式中，所述抗B7-H3抗体或其抗原结合片段重新激活被B7-H3免疫检查点抑制的T细胞的活性。
在实施方式中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段和所述抗B7-H3抗体或其抗原结合片段各自独立地为嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。
在实施方式中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段和所述抗B7-H3抗体或其抗原结合片段各自独立地选自由以下组成的组：全IgG、Fab、Fab'、F(ab')2、scFab、dsFv、Fv、scFv、scFv-Fc、scFab-Fc、双抗体、微型抗体、scAb、dAb、半IgG及其组合。
本发明的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体为IgG X scFv形式。
在其他实施方式中，本发明的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体为(HC+LC)X scFab-Fc形式。
在实施方式中，本发明的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体还包括抗4-1BB抗体或其抗原结合片段。所述抗4-1BB抗体或其抗原结合片段可以选自由以下组成的组：全IgG、Fab、Fab'、F(ab')2、scFab、dsFv、Fv、scFv、scFv-Fc、scFab-Fc、双抗体、微型抗体、scAb、dAb、半IgG及其组合。
在实施方式中，多核苷酸可以是编码本文公开的重链和/或轻链可变区的多核苷酸。
在实施方式中，分离的多核苷酸可以是编码本文公开的重链和/或轻链的多核苷酸。
在实施方式中，提供了包含所述多核苷酸的载体。
在实施方式中，提供了由所述载体转化的细胞系。
另一实施方式提供了制备与PD-L1或B7-H3特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片段的方法，包括从细胞系中分离抗体或其抗原结合片段的步骤。
另一实施方式提供了药物组合物，其包括本发明的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体和药学上可接受的载体。
在实施方式中，所述药物组合物是用于治疗和/或预防与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病(例如癌症)的药物组合物。
另一实施方式提供了在有需要的患者中治疗癌症的方法，包括向所述患者给药有效量的本发明的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体。
另一实施方式提供了检测生物样品中的PD-L1或B7-H3的方法，包括将本文所述的抗体或其抗原结合片段与需要检测PD-L1或B7-H3表达的生物样品接触的步骤。所述方法还可包括在接触步骤之后测量用抗体或其抗原结合片段处理(接触)的生物样品中的抗原-抗体应答的步骤。
在实施方式中，所述方法可以在体外或体内进行。
在其他实施方式中，提供了包括抗体或其抗原结合片段或包括抗体或抗原结合片段的组合物的试剂盒。根据使用该试剂盒的具体目的，该试剂盒可以作为用于PD-L1或B7-H3检测的试剂盒或用于癌症治疗的给药试剂盒或用于癌症治疗的试剂盒提供，并且根据其具体目的，可以包括附加组分。例如，可以还包括用于免疫分析的组分，例如用于检测或诊断的试剂盒的缓冲液和说明书，或者用于抗体给药或癌症治疗的试剂盒的给药装置和说明书。
抗B7-H3抗体或其抗原结合片段可以(1)特异性识别或结合表达于源自人、小鼠或猴的细胞表面上的B7-H3，或(2)特异性识别或结合B7-H3的胞外结构域，其可能存在或不存在于细胞表面上。
本发明的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体显示出作为免疫检查点抑制剂的作用，其激活活性被免疫检查点配体B7-H3蛋白降低的T细胞，从而通过激活免疫细胞有效地用于癌症治疗。
此外，该抗体可用于例如将药物递送至特定癌症等，或通过特异性结合检测、诊断和/或靶向癌症。
此外，本文公开的单克隆抗体具有跨物种反应性，具有对人、猴和小鼠B7-H3的结合亲和力。与对小鼠或猴B7-H3不显示结合亲和力的其他人抗体相比，这对于药物等的开发可能非常有用。例如，单克隆抗体或使用该抗体的各种形式的治疗剂可以通过在进行高成本的基于猴的实验之前在低成本的小鼠模型中获得初步结果来更经济有效地进行药物开发。
另一实施方式提供了本发明的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体在制备用于治疗或预防与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病的药物中的用途。
另一实施方式提供了本发明的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体用于治疗或预防与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病的用途。
有利效果
本发明的特异性结合PD-L1和B7-H3的抗体或其抗原结合片段以协同方式显示出优异的癌细胞增殖抑制活性和显著优异的抗癌活性，从而有效地预防或治疗疾病诸如癌症。
附图说明
图1a示出了本发明的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体的“2+2形式”。
图1b示出了本发明的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体的“1+1形式”。
图2示意性地示出了根据实施方式的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体的作用机制。
图3展示了PD-L1变体的选择标准，以鉴定Hu1210-41结合所需的残基。
图4示出了根据实施方式涉及与抗PD-L1抗体结合的Y134、K162和N183残基(球体)的位置。
图5a和5b是根据本发明的一种实施方式制备的抗B7-H3抗体与B7-H3蛋白的胞外结构域(ECD)的结合能力的分析(ELISA)结果。结果表明，每种抗体都以浓度依赖性方式与人B7-H3蛋白的胞外结构域结合。
图6是根据本发明的一种实施方式制备的抗B7-H3抗体与属于B7家族的其他蛋白质的ECD的结合能力的分析(ELISA)结果。结果表明，根据本发明的一种实施方式制备的每种抗体不与其他蛋白质结合并且仅特异性识别B7-H3蛋白。
图7是通过ELISA分析根据本发明的一种实施方式制备的抗B7-H3抗体的跨物种反应性的结果。结果表明，每种抗体都以浓度依赖性方式与猴(猕猴)B7-H3和小鼠B7-H3结合。
图8是通过ELISA比较根据本发明一种实施方式制备的各种抗B7-H3抗体与小鼠B7-H3蛋白的结合能力程度的结果。结果表明，抗体与小鼠B7-H3的结合程度不同，但每种抗体都以浓度依赖性方式与小鼠B7-H3蛋白结合。相比之下，用作比较组抗体的84D抗体不与小鼠B7-H3蛋白结合。
图9是根据本发明的一种实施方式制备的抗B7-H3抗体与细胞表面表达B7-H3抗原的结合能力的测量(FACS)结果。MCF-7细胞系是过表达B7-H3的细胞系，而Jurkat是不表达B7-H3的细胞系。结果表明本发明的抗B7-H3抗体与过表达B7-H3的细胞系MCF-7特异性结合，但不与不表达B7-H3的细胞系Jurkat结合。
图10是根据本发明的一种实施方式制备的抗B7-H3抗体对不同抗体浓度的细胞表面上表达的B7-H3抗原的结合能力的测量(FACS)结果。结果表明，每种抗体都以浓度依赖性方式与表达B7-H3的癌细胞系(MCF-7、DLD-1、HCC1954和HCT116)结合。抗体对其他各种癌细胞系中表达的B7-H3的结合能力描述于表19。
为了将针对特定抗原的抗体在体内用作用于治疗等的抗体，与细胞表面表达抗原结合是必要的因素。在一些抗体的情况下，它们与纯化的抗原结合，但不与细胞表面上表达的抗原结合。在这种情况下，给药到体内的抗体不能与体内的细胞结合，因此不能在体内作为用于治疗等的抗体。因此，该结果表明，本发明的抗B7-H3抗体可与细胞表面B7-H3结合并在体内显示活性，因此通常用作用于治疗的抗体。
图11是抗B7-H3抗体与小鼠来源的癌细胞系(CT26、B16F10和TC-1)的结合能力的测量(FACS)结果。结果表明，每种B7-H3单克隆抗体也特异性识别小鼠来源的癌细胞系表面上表达的B7-H3。
图12是根据本发明的一种实施方式制备的抗B7-H3抗体的ADCC诱导能力的测量结果。根据本发明的一种实施方式制备的抗体显示仅对人B7-H3阳性细胞系(包括MCF-7、Calu-6、DLD-1和Mino)具有特异性的ADCC诱导。在人B7-H3阴性细胞系Jurkat中未观察到ADCC。这表明该抗体可以有效地用于癌细胞的死亡，因为它仅与表达B7-H3的癌细胞特异性结合并诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。特别地，这表明本发明的抗B7-H3抗体可以更有效地用于癌症治疗，因为与比较抗体84D相比，它具有更低的EC50和更强的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性信号强度。
图13a示出了被B7-H3蛋白抑制的T细胞活性以及由此抑制的干扰素γ的产生。结果表明，B7-H3蛋白以浓度依赖性方式抑制干扰素γ的产生。
图13b表明根据本发明的一种实施方式制备的抗B7-H3抗体可以重新激活如图9a中被B7-H3蛋白抑制的T细胞活性，其通过干扰素γ产生来测量。图9a和图9b的结果意味着本发明的抗B7-H3单克隆抗体可以中和或阻断B7-H3蛋白对T细胞的免疫抑制。换言之，本发明的B7-H3抗体可以通过使活性被抑制的T细胞重新激活来诱导T细胞对癌细胞的死亡，这表明本发明的B7-H3抗体可以有效地用于癌症治疗。
图14示出了当与抗PD-1抗体一起使用时，根据本发明的一种实施方式制备的抗B7-H3抗体通过干扰素对T细胞激活的影响，其通过γ产生测量。结果表明，单独或与抗癌免疫抗体一起的抗B7-H3抗体可通过激活T细胞有效地促进干扰素γ的产生。这表明该抗体可通过单独或与其他抗癌免疫抗体组合激活T细胞来有效用于治疗癌症。
图15的结果证实,在移植小鼠B7-H3阳性癌细胞系CT26的同基因肿瘤移植模型中,当根据本发明的一种实施方式制备的抗B7-H3抗体与抗PD-1抗体共同给药时，肿瘤生长得到抑制并且存活率改善。抗PD-L1抗体通过免疫检查点抑制起作用。结果表明，单独或与抗癌免疫抗体一起的抗B7-H3抗体可通过激活T细胞有效地促进干扰素γ的产生。这表明该抗体可通过单独或与其他抗癌免疫抗体组合激活T细胞来有效用于治疗癌症。
图16是在移植小鼠B7-H3阳性癌细胞系CT26的同基因肿瘤移植模型中,当根据本发明的一种实施方式制备的抗B7-H3抗体与抗PD-a抗体共同给药时，分析肿瘤中的肿瘤浸润淋巴细胞流动的结果。结果表明，通过抗B7-H3抗体和抗PD-1抗体的共同给药，CD8+T细胞的活性增加并且调节性T细胞的增殖被抑制。这意味着抗B7-H3抗体和免疫检查点抑制剂抗PD-1抗体共同给药的抗癌作用通过CD8+T细胞和调节性T细胞的变化而出现。
图17是根据本发明实施方式制备的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体与细胞表面上表达的PD-L1和B7-H3结合能力的分析(FACS)结果。
图18是根据本发明实施方式制备的1+1形式抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体对在细胞表面上表达的PD-L1和B7-H3的结合亲和力的分析(FACS)结果。
图19是根据本发明实施方式制备的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体的体外肿瘤杀伤效力的分析(IG4TCR工程化T细胞测定)结果。
图20是根据本发明实施方式制备的1+1形式抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)能力的分析结果。
图21是根据本发明的实施方式制备的1+1形式C4IxB6和B5xB6双特异性抗体的体外肿瘤杀伤效力的分析(IG4TCR工程化T细胞测定)结果。
图22是使用RKO-PBMC人源化小鼠模型分析根据本发明实施方式的1+1形式双特异性抗体的肿瘤生长抑制的结果。
图23是三特异性抗体促进4-1BB信号能力的分析结果。
具体实施方式
定义
应当注意，术语“一个(a)”或“一个(an)”实体是指该一个或多个实体，例如“抗体”，应理解为代表一个或多个抗体。因此，术语“一个(a)”(或“一个(an)”)、“一个或多个”和“至少一个”在本文中可以互换使用。
如本文所用，术语“多肽”旨在涵盖单数“多肽”以及复数“多肽”，并且是指由通过酰胺键(也称为肽键)线性连接的单体(氨基酸)组成的分子。术语“多肽”是指两个或更多个氨基酸的任何链或多条链，而不是指产物的特定长度。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白质”、“氨基酸链”或用于指两个或更多个氨基酸的链或多条链的任何其他术语都包括在“多肽”的定义中，并且术语“多肽”可以用来代替这些术语中的任何一个，或与这些术语中的任何一个互换使用。术语“多肽”还意指多肽的表达后修饰的产物，包括但不限于糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/封闭基团衍生、蛋白水解切割或通过非天然存在的氨基酸进行修饰。多肽可以源自天然生物来源或通过重组技术产生，但不一定翻译自指定的核酸序列。其可以任何方式产生，包括通过化学合成。此外，“多肽片段”是指与全长蛋白质相比，具有氨基末端的氨基酸序列缺失、羧基末端的氨基酸序列缺失和/或内部缺失的多肽。与全长蛋白质相比，片段还可以包括修饰的氨基酸。在一种实施方式中，片段的长度可以为约5至900个氨基酸，例如，长度为至少5、6、8、10、14、20、50、70、100、110、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850或更多个氨基酸。考虑到本发明的目的，有用的多肽片段包括包含抗原结合结构域的抗体的免疫功能片段。在PD-L1或B7-H3结合抗体的情况下，这样的有用片段包括：包含重链或轻链的1、2或3个的CDR序列，或包含重链或轻链的可变区或恒定区的抗体链的全部或部分，但不限于此。
如本文所用，多肽诸如例如抗原结合片段、蛋白质或抗体的“变体”是与另一个多肽序列相比其中一个或多个氨基酸残基被插入、缺失、添加和/或替换的多肽，并且包括融合多肽。此外，蛋白质变体包括通过蛋白酶切割、磷酸化或其他翻译后修饰进行修饰，但保持本文公开的抗体的生物学活性，例如与B7-H3的特异性结合和生物学活性的蛋白质变体。变体可以具有与本文公开的抗体或其抗原结合片段的序列约99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、90％、89％、88％、87％、86％、85％、84％、83％、82％、81％或80％的同一性。
如本文所用，术语多肽的“衍生物”是指通过与其他化学部分缀合而化学修饰的多肽，其不同于插入、缺失、添加或替换变体。
如本文所用，如本文关于细胞、核酸(例如DNA或RNA)所用的术语“分离的”分别是指与存在于大分子的天然来源中的其他DNA或RNA分离的分子。如本文所用，术语“分离的”还指当通过重组DNA技术产生时基本上不含细胞材料、病毒材料或培养基的核酸或肽，或当化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品的核酸或肽。此外，“分离的核酸”意在包括不作为片段天然存在并且不会在天然状态下发现的核酸片段。术语“分离的”在本文中还用于指从其他细胞蛋白质或组织中分离的细胞或多肽。分离的多肽意在包括纯化的和重组的多肽二者。
如本文所用，关于多肽或多核苷酸的术语“重组”意指天然不存在的多肽或多核苷酸形式，其非限制性实例可通过组合通常不会一起出现的多核苷酸或多肽来产生。
“同源性”或“同一性”或“相似性”是指两个肽之间或两个核酸分子之间的序列相似性。同源性可以通过比较每个序列中的位置来确定，该序列可出于比较目的而对齐。当比较的序列中的位置被相同的碱基或氨基酸占据时，则分子在该位置是同源的。序列之间的同源性程度是序列共享的匹配或同源位置的数量的函数。“不相关”或“非同源”序列具有与本公开的序列之一小于40％的同一性，但优选小于25％的同一性。
多核苷酸或多核苷酸区域(或多肽或多肽区域)具有与另一个序列一定百分比(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％)的“序列同一性”意味着，当对齐时，在比较两个序列时相同的碱基(或氨基酸)的百分比。
术语“载体”是指用于将编码蛋白质的核酸分子递送至宿主细胞的任何分子，包括例如核酸、质粒、噬菌体或病毒。
术语“表达载体”是指适合于转化宿主细胞并包括与表达载体可操作地连接并调节编码靶向蛋白的异源序列的表达的核酸序列的载体。表达载体还可以与编码序列可操作地连接，并且在转录、翻译和存在内含子的情况下，它可以包括调节RNA剪接或影响它的序列。
术语“可操作地连接”是指待连接的核酸序列被定位以便在适当的条件下执行靶向功能。例如，在包含编码序列和调节序列的载体中，如果编码序列的转录在适当条件下受到调节序列的影响，则其可操作地被连接。
术语“宿主细胞”是指被靶向核酸序列转化或待转化的可以表达靶基因的细胞。该术语包括宿主细胞的后代，只要表达靶向基因即可，而不管宿主细胞的身份和形式和基因组成。
术语“转导”通常是指通过噬菌体将核酸从一种细菌移动到另一种细菌。例如，它包括使用不能复制的逆转录病毒将核酸移动到真核细胞。
术语“转染”是指细胞摄取外部或外源DNA，并且在这种情况下，DNA通过细胞膜引入细胞。这可以指本领域已知的方法，例如，Sambrook等人,Molecular Cloning:ALaboratory Manual,4th ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,N.Y.(2012),Ausubel等人,Current Protocols in Molecular Biology,GreenePublishing Associates。
当应用于多核苷酸时，术语“编码”是指这样的多核苷酸，如果在其天然状态下或当通过本领域技术人员熟知的方法操作时，该多核苷酸可以被转录和/或翻译以产生多肽和/或其片段的mRNA,则说它“编码”多肽。反义链是这种核酸的互补链，并且可以由此推导出编码序列。
如本文所用，“抗体”、“抗原结合区域或位点”或“抗原结合多肽”是指特异性识别并结合抗原的多肽或多肽复合物。抗体可以是完全抗体及其任何抗原结合片段或单链。因此，术语“抗体”包括包含这样的分子的任何蛋白质或肽，该分子包括具有与抗原结合的生物学活性的免疫球蛋白分子的至少一部分。这样的实例包括但不限于重链或轻链或其配体结合部分的互补决定区(CDR)、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、框架(FR)区，或其任何部分，或结合蛋白的至少一部分。
在一种实施方式中，抗体包括单克隆抗体、单特异性抗体、双特异性抗体、三特异性抗体、双抗体、多特异性抗体、多抗体、微抗体、域抗体、抗体模拟物(或合成抗体)、嵌合抗体、人源化抗体或抗体融合物(或抗体缀合物)及其片段，但不限于此，并且包括本文公开的各种形式的抗体。
如本文所用，术语“抗原”或“免疫原”是指这样的分子或分子的一部分，其可以被例如抗原结合蛋白(例如，抗体或其免疫功能性抗原结合片段)结合并且可以用于产生可以与动物体内的抗原结合的抗体。抗原可包含一个或多个可与不同抗体或其片段相互作用的表位。
如本文所用，术语“抗体片段”或“抗原结合片段”包括与全长链相比缺少一些氨基酸但可以特异性结合抗原的抗体部分。该片段可以在可以特异性结合靶抗原，或者可以与其他抗体或抗原结合片段竞争结合特定表位的方面被认为具有生物学活性。一方面，该片段包括至少一个存在于全长轻链或重链中的CDR，并且在一些实施方式中，它包括短链重链和/或轻链或其部分。该生物活性片段可以通过重组DNA技术产生，或者可以例如通过酶促或化学切割完整抗体产生。免疫功能性免疫球蛋白片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2、scFab、dsFv、Fv、scFv、scFv-Fc、scFab-Fc、双抗体、微型抗体、scAb、dAb、半IgG或其组合，但不限于此。此外，它可以来源于任何哺乳动物，包括人、小鼠、大鼠、骆驼或兔，但不限于此。抗体的功能部分，例如本文所述的一个或多个CDR，可以通过共价键与第二蛋白质或小分子化合物连接，从而用作针对特定靶标的靶标治疗剂。术语“抗体片段”包括适配体、镜像异构体(spiegelmer)和双抗体。术语“抗体片段”还包括通过与特定抗原结合形成复合物而起到抗体作用的任何合成或基因工程蛋白质。
在本文中，“Fc”区包括包含抗体的CH2和CH3结构域的两个重链片段。这2个重链片段通过两个或更多个二硫键和CH3结构域的疏水相互作用而相互组合。
在本文中，“Fab片段”由1条轻链和1条仅包括CH1和可变区的重链组成。Fab分子的重链不能与其他重链分子形成二硫键。
在本文中，“Fab'片段”除了包括Fab片段外，还包括重链CH1和CH2结构域之间的区域，它可以在Fab'片段的两分子的两条重链之间形成二硫键，以形成F(ab')2分子。
在本文中，“F(ab')2片段”包括两条轻链和两条重链，所述两条重链包括可变区、CH1和位于CH1和CH2结构域之间的恒定区的一部分，如上所述，并且因此2条重链之间形成链内二硫键。因此，F(ab')2片段由两个Fab’片段组成，两个Fab’片段通过它们之间的二硫键相互相遇。
在本文中，“Fv区”是包括重链和轻链的各可变区但不包括恒定区的抗体。scFv是Fv通过柔性接头连接的片段。scFv-Fc是Fc与scFv连接的片段。微型抗体是CH3与scFv连接的抗体。双抗体包括两个scFv分子。“单链可变片段”或“scFv”是指免疫球蛋白的重链(VH)和轻链(VL)可变区的融合蛋白。在一些方面，这些区域与十至约25个氨基酸的短接头肽相连。接头可以富含甘氨酸以用于柔性，以及丝氨酸或苏氨酸以用于溶解度，并且可以将VH的N端与VL的C端连接起来，反之亦然。尽管去除了恒定区并引入了接头，该蛋白质仍保留了原始免疫球蛋白的特异性。ScFv分子在本领域中是已知的并且描述于例如美国专利5,892,019中。
在本文中，“短链抗体(scAb)”是包括重链或轻链恒定区的一个可变区的单条多肽链，其中重链和轻链可变区通过柔性接头连接。短链抗体可以参考例如美国专利号5,260,203，在此通过援引公开。
在本文中，“域抗体(dAb)”是仅包括重链可变区或轻链可变区的免疫功能性免疫球蛋白片段。在一种实施方式中，两个或更多个VH区通过肽接头由共价键连接，以形成二价域抗体。这种二价域抗体的两个VH区可以靶向相同或不同的抗原。
在本文中，“二价抗原结合蛋白”或“二价抗体”包括2个抗原结合位点。这种二价抗体中包括的两个抗原结合位点可以具有相同的抗原特异性，或者可以是分别结合不同抗原的双特异性抗体。
本文中，“多特异性抗原结合蛋白”或“多特异性抗体”靶向两种或更多种抗原或表位，优选靶向两种(即双特异性)或三种(例如三特异性)抗原或表位，更优选靶向两种抗原或表位。
在本文中，“双特异性”、“双重特异性”抗原结合蛋白或抗体是具有2个不同抗原结合位点的杂合抗原结合蛋白或抗体。这种双特异性抗体是一种多特异性抗原结合蛋白或多特异性抗体，并且它可以通过已知的各种方法产生，例如杂交瘤的融合或Fab'片段的连接。例如,可参考Songsivilai和Lachmann,1990,Clin.Exp.Immunol.79:315-321；Kostelny等人,1992,J.Immunol.148:1547-1553等。双特异性抗原结合蛋白或抗体的2个抗原结合位点所结合的彼此不同的2个表位可以位于相同或不同的蛋白质靶标上。
在本文中，“三特异性”抗原结合蛋白或抗体是具有3个不同抗原结合位点的杂合抗原结合蛋白或抗体。
在本文中，“多特异性抗体”包括双特异性抗体和三特异性抗体，优选双特异性抗体。
术语“抗体”包括可在生物化学上区分的各种广泛类别的多肽。本领域技术人员将理解，重链被分类为γ、μ、α、δ或ε(γ、μ、α、δ、ε)，其中有一些亚类(例如，γ1-γ4)。正是这条链的性质决定了抗体的“类别”分别为IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5等具有很好的特征，并且已知可赋予功能特化。鉴于本公开，这些类别和同种型中的每一种的修饰版本对于本领域技术人员来说是容易辨别的，并且因此在本公开的范围内。所有免疫球蛋白类别显然都在本公开的范围内，以下讨论通常针对免疫球蛋白分子的IgG类别。关于IgG，标准免疫球蛋白分子包括两条相同的分子量约为23,000道尔顿的轻链多肽和两条相同的分子量为53,000-70,000的重链多肽。这四条链通常通过二硫键以“Y”构型连接，其中轻链包围重链，这从“Y”的口开始并继续通过可变区。
本公开的抗体、抗原结合多肽、其变体或衍生物包括但不限于多克隆、单克隆、多特异性、人、人源化、灵长类化或嵌合抗体、单链抗体、表位结合片段，例如，Fab、Fab'和F(ab')2、Fd、Fvs、单链Fvs(scFv)、单链抗体、二硫键连接的Fvs(sdFv)、包括VL或VH结构域的片段、由Fab表达文库产生的片段和抗独特型(抗Id)抗体(包括例如本文公开的针对LIGHT抗体的抗Id抗体)。本公开的免疫球蛋白或抗体分子可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。
轻链分类为κ或λ(κ、λ)。每个重链类别可以与κ或λ轻链结合。通常，当免疫球蛋白由杂交瘤、B细胞或基因工程宿主细胞产生时，轻链和重链彼此共价键合，两条重链的“尾”部分通过共价二硫键或非共价键相互键合。在重链中，氨基酸序列从Y构型叉形端的N端延伸到每条链底部的C端。
轻链和重链都分为结构和功能同源区。术语“恒定”和“可变”在功能上使用。在这方面，应当理解轻链(VL)和重链(VH)部分的可变结构域决定抗原识别和特异性。相反，轻链(CK)和重链(CH1、CH2或CH3)的恒定结构域赋予重要的生物学特性，例如分泌、跨胎盘移动性、Fc受体结合、补体结合等。按照惯例，恒定区结构域的编号随着它们远离抗体的抗原结合位点或氨基末端而增加。N端部分是可变区，C端部分是恒定区；CH3和CK结构域实际上分别包括重链和轻链的羧基末端。
如上所述，可变区允许抗体选择性识别和特异性结合抗原上的表位。即，抗体的VL结构域和VH结构域或互补决定区(CDR)的子集组合形成限定三维抗原结合位点的可变区。这种四元抗体结构形成了存在于Y的每条臂末端的抗原结合位点。更具体地，抗原结合位点由VH和VL链中的每一条上的三个CDR(即CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)限定。在一些情况下，例如源自骆驼物种或基于骆驼科免疫球蛋白工程化的某些免疫球蛋白分子，完整的免疫球蛋白分子可能仅由重链组成，而没有轻链。参见例如，Hamers-Casterman等人,Nature 363:446-448(1993)。
在天然存在的抗体中，每个抗原结合结构域中存在的六个“互补决定区”或“CDR”是短的、不连续的氨基酸序列，当抗体在水性环境中呈现其三维构象时，它们被特异性定位以形成抗原结合结构域。抗原结合结构域中的其余氨基酸(称为“框架”区域)显示出较少的分子间变异性。框架区主要采用β-折叠构象，CDR形成连接β-折叠结构的环，在某些情况下形成β-折叠结构的一部分。因此，框架区起到形成支架的作用，该支架通过链间、非共价相互作用将CDR定位在正确的方向上。由定位的CDR形成的抗原结合结构域限定了与免疫反应性抗原上的表位互补的表面。该互补表面促进抗体与其关联表位的非共价结合。对于任何给定的重链或轻链可变区，本领域普通技术人员可以容易地分别鉴定包括CDR和框架区的氨基酸，因为它们已经被精确定义(参见www.bioinf.org.uk:Dr.Andrew C.R.Martin'sGroup；“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”Kabat,E.,等人,U.S.Department of Health and Human Services,(1983)；以及Chothia和Lesk,J.MoI.Biol.,196:901-917(1987))。
在本领域内使用和/或接受的术语有两个或更多个定义的情况下，除非明确相反地说明，否则本文使用的术语的定义旨在包括所有这样的含义。具体的实例是使用术语“互补决定区”(“CDR”)来描述在重链和轻链多肽的可变区内发现的非连续抗原结合位点。该特定区域已经在以下中进行了描述：Kabat等人,U.S.Dept.of Health and Human Services,“Sequences of Proteins of Immunological Interest”(1983)以及Chothia等人,J.MoI.Biol.196:901-917(1987)，其全部内容通过援引并入本文。当相互比较时，根据Kabat和Chothia的CDR定义包括氨基酸残基的重叠或子集。然而，应用任一定义来指代抗体或其变体的CDR旨在落入如本文所定义和使用的术语的范围内。作为比较，在下表中列出了包括由上述引用的每篇参考文献定义的CDR的合适的氨基酸残基。包括特定CDR的确切残基数将根据CDR的序列和大小而变化。给定抗体的可变区氨基酸序列，本领域技术人员可以常规确定哪些残基包括特定CDR。
【表1】
Figure BDA0003657430010000211
Kabat等人还定义了适用于任何抗体的可变结构域序列的编号系统。本领域普通技术人员可以明确地将这种“Kabat编号”系统分配给任何可变结构域序列，而不依赖于序列本身之外的任何实验数据。如本文所用，“Kabat编号”是指以下中提出的编号系统：Kabat等人,U.S.Dept.of Health and Human Services,“Sequence of Proteins ofImmunological Interest”(1983)。
本文公开的抗体可以来自任何动物来源，包括鸟类和哺乳动物。优选地，抗体是人、鼠、驴、兔、山羊、豚鼠、骆驼、美洲驼、马或鸡抗体。在另一实施方式中，可变区可以起源于软骨鱼(condricthoid)(例如，来自鲨鱼)。
如本文所用，术语“重链恒定区”包括源自免疫球蛋白重链的氨基酸序列。如上所述，本领域普通技术人员将理解重链恒定区可以被修饰，使得它们的氨基酸序列不同于天然存在的免疫球蛋白分子。
本文公开的抗体的重链恒定区可以来源于不同的免疫球蛋白分子。例如，多肽的重链恒定区可以包括源自IgG1分子的CH1结构域和源自IgG3分子的铰链区。在另一实例中，重链恒定区可包括部分源自IgG1分子和部分源自IgG3分子的铰链区。在另一实例中，重链部分可以包括部分源自IgG1分子和部分源自IgG4分子的嵌合铰链。
如本文所用，术语“轻链恒定区”包括源自抗体轻链的氨基酸序列。优选地，轻链恒定区包括恒定κ结构域或恒定λ结构域中的至少一种。
“轻链-重链对”是指可以通过轻链的CL结构域和重链的CH1结构域之间的二硫键形成二聚体的轻链和重链的集合。
“特异性结合”或“具有特异性”通常是指抗体通过其抗原结合结构域与表位结合，并且该结合需要抗原结合结构域和表位之间的一些互补性。根据该定义，当抗体通过其抗原结合结构域与该表位结合时，该抗体被称为“特异性结合”该表位，而不是与随机、不相关的表位结合。术语“特异性”在本文中用于限定特定抗体结合特定表位的相对亲和力。例如，可以被认为抗体“A”对给定表位比抗体“B”具有更高的特异性，或者可以说抗体“A”与表位“C”的结合比它对相关表位“D”的特异性更高。优选地，抗体以“高亲和力”结合抗原(或表位)，即KD为1×10-7M或更小，更优选5×10-8M或更小，更优选3×10-8M或更小，更优选1×10- 8M或更小，更优选25×10-9M或更小，或者甚至更优选1×10-9M或更小。
如本文所用，“亲和力”是抗体或其抗原结合片段与抗原之间相互作用的强度，并且它由抗原的性质诸如抗原的大小、形状和/或电荷以及抗体或抗原结合片段的CDR序列决定。用于确定亲和力的方法是本领域已知的。
在本文中，“表位”是分子的被抗原结合蛋白或抗体结合或被它们识别的部分，并且包括可以特异性结合抗原结合蛋白(诸如例如抗体或T细胞受体)的任何决定因子。表位可以是连续的或不连续的，并且例如，在多肽序列中，它是彼此之间不连续的，但在分子的一个方面，如构象表位，它可以是由一种抗原结合蛋白结合的氨基酸残基，但不是连续的并且彼此远离定位。在一种实施方式中，表位包括类似于用于抗体生产的抗原的三维结构，但它在一个方面可以是模拟物，它可以不包括在表位中发现的残基或可以仅包括一些残基。通常，表位是蛋白质，但也可以是其他种类的材料，诸如核酸。表位决定因子可以是由分子诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基在表面上形成的化学活性基团，或可以具有特定的三维结构特性和/或特定电荷特性。通常，对特定靶抗原特异的抗体识别存在于蛋白质和/或聚合物的复合物中的靶抗原的表位。
如本文所用，术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”可指治疗性治疗和预防性或预防措施，其中目的是防止或减缓(减轻)不希望的生理变化或疾患，例如癌症的进展。有益的或期望的临床结果包括但不限于减轻症状、减轻疾病程度、稳定(即不恶化)疾病状态、延迟或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态，以及缓解(无论是部分缓解还是全部缓解)，无论是可检测到还是不可检测。“治疗”还可以意味着与未接受治疗的预期生存期相比延长生存期。需要治疗的人包括已经患有病症或疾患的人以及倾向于患有病症或疾患的人或要预防病症或疾患的人。
“受试者”或“个体”或“动物”或“患者”或“哺乳动物”可以指需要诊断、预后或治疗的任何受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括人类、家畜、农场动物以及动物园、运动或宠物动物，例如狗、猫、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、马、牛、奶牛等。
如本文所用，诸如“需要治疗的患者”或“需要治疗的受试者”的短语包括将受益于给药本公开用于例如检测、诊断程序和/或治疗的抗体或组合物的受试者，例如哺乳动物受试者。
本公开提供了抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，其能够有效阻断PD-L1与其受体PD-1之间的相互作用，以及抑制B7-H3蛋白的T细胞抑制作用。多特异性抗体可以对PD-L1蛋白(例如，人PD-L1蛋白)和B7-H3蛋白(例如，人B7-H3蛋白)两者具有高结合亲和力。
抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体可以包括：抗PD-L1抗体或其抗原结合片段作为PD-L1靶向部分，其能够特异性识别和/或结合PD-L1蛋白，以及抗B7-H3抗体或其抗原结合片段作为B7-H3靶向部分，其能够特异性识别和/或结合B7-H3蛋白。
抗PD-L1抗体
抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体可以包括抗PD-L1抗体或其抗原结合片段作为PD-L1靶向部分。抗PD-L1抗体或其抗原结合片段可以表现出对PD-L1的强结合和抑制活性，并且可用于治疗和诊断用途。
PD-L1蛋白是一种40kDa的1型跨膜蛋白。PD-L1蛋白可以是人PD-L1蛋白，并且人PD-L1蛋白可以选自由GenBank登录号NP_001254635.1、NP_001300958.1、NP_054862.1等代表的蛋白质组成的组，但可不限于此。人PD-L1蛋白包括胞外部分，该部分包括N端免疫球蛋白V(IgV)结构域(氨基酸19-127)和C端免疫球蛋白C(IgC)结构域(氨基酸133-225)。与预先存在的抗PD-L1抗体(其结合PD-L1的IgV结构域，从而破坏PD-1和PD-L1之间的结合)不同，多特异性抗体中包括的抗PD-L1抗体或其片段可能不与PD-L1蛋白的免疫球蛋白V(IgV)结构域结合，而是与PD-L1的IgC结构域结合，以有效抑制PD-L1，从而改善治疗效果。
特别地，多特异性抗体中包括的抗PD-L1抗体或其片段可以特异性结合PD-L1蛋白的免疫球蛋白C(IgC)结构域。在人PD-L1蛋白的情况下，Ig C结构域包括人PD-L1蛋白全长的氨基酸残基133-225或基本上由其组成。更具体地，抗PD-L1抗体或其片段可以结合选自人PD-L1蛋白的氨基酸残基Y134、K162和N183中的至少一种。在一些实施方式中，抗PD-L1抗体或其片段可以结合选自人PD-L1蛋白的氨基酸残基Y134、K162和N183中的至少两种。在一些实施方式中，抗PD-L1抗体或其片段不结合PD-L1蛋白的免疫球蛋白V(IgV)结构域，其中IgV结构域由人PD-L1蛋白的氨基酸残基19-127组成。
在实施方式中，抗PD-L1抗体或其片段能够对人PD-L1蛋白具有特异性。
抗PD-L1抗体或其片段可以包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：1和294组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：2、3和295组成的组的氨基酸序列的VHCDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：4、5、6、7、8、9、10、11和296组成的组的氨基酸序列的VHCDR3；(4)具有选自由SEQ ID NO：12、13、14和297组成的组的氨基酸序列的VL CDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：15和298组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQID NO：16、17、18、19和299组成的组的氨基酸序列的VL CDR3。
根据本发明一种实施方式的抗体或抗原结合片段的重链和轻链可变区中包括的抗PD-L1的CDR序列如下表2所示。
【表2】
Figure BDA0003657430010000251
Figure BDA0003657430010000261
在一种实施方式中，上表中公开的每个轻链可变区的CDR和每个重链可变区的CDR可以自由组合。
在一些实施方式中，抗体或其片段包括不超过一个、不超过两个或不超过三个上述替换。在一些实施方式中，抗体或其片段包括SEQ ID NO：1或294的VH CDR1，SEQ ID NO：2、3或295的VH CDR2，SEQ ID NO：4、5、6、7、8、9、10、11或296的VH CDR3，SEQ ID NO：12、13、14或297的VL CDR1，SEQ ID NO：15或298的VL CDR2，和SEQ ID NO：16、17、18、19或299的VLCDR3。
例如，抗PD-L1抗体或其片段可以包括：具有SEQ ID NO：1或294的氨基酸序列的VHCDR1；具有SEQ ID NO：2、3或295的氨基酸序列的VH CDR2；具有SEQ ID NO：4、5或296的氨基酸序列的VH CDR3；具有SEQ ID NO：12或297的氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：15或298的氨基酸序列的VL CDR2；以及具有SEQ ID NO：16或299的氨基酸序列的VL CDR3。
例如，抗PD-L1抗体或其片段可以包括：具有SEQ ID NO：1或294的氨基酸序列的VHCDR1；具有SEQ ID NO：3或295的氨基酸序列的VH CDR2；具有SEQ ID NO：5或296的氨基酸序列的VH CDR3；具有SEQ ID NO：12或297的氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：15或298的氨基酸序列的VL CDR2；以及具有SEQ ID NO：16或299的氨基酸序列的VL CDR3。
回复突变可用于保留抗PD-L1抗体的某些特征。在一些实施方式中，本公开的抗PD-L1抗体，特别是人或人源化抗体，可以包括一种或多种回复突变。在一些实施方式中，重链可变区(VH)中的回复突变(即，包括在特定位置的氨基酸)是选自以下的一种或多种：根据Kabat编号在重链可变区的(a)位置44处的Ser，(b)位置49处的Ala，(c)位置53处的Ala，(d)位置91处的Ile，(e)位置1处的Glu，(f)位置37处的Val，(g)位置40处的Thr，(h)位置53处的Val，(i)位置54处的Glu，(j)位置77处的Asn，(k)位置94处的Arg，和(l)位置108处的Thr，及其组合。在一些实施方式中，VH回复突变选自根据Kabat编号在重链可变区的(a)位置44处的Ser、(b)位置49处的Ala、(c)位置53处的Ala和/或(d)位置91处的Ile，及其组合。
在一些实施方式中，轻链可变区(VL)中的回复突变是选自以下的一种或多种：根据Kabat编号在轻链可变区的(a)位置22处的Ser，(b)位置42处的Gln，(c)位置43处的Ser，(d)位置60处的Asp，和(e)位置63处的Thr，及其组合。
在一些实施方式中，抗PD-L1抗体或其片段包括重链恒定区、轻链恒定区、Fc区或其组合。在一些实施方式中，轻链恒定区可以是κ或λ链恒定区。在一些实施方式中，抗体是IgG、IgM、IgA、IgE或IgD的同种型，例如人IgG、人IgM、人IgA、人IgE或人IgD。在一些实施方式中，同种型可以是IgG，例如人IgG，诸如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一些实施方式中，片段(抗PD-L1抗体的抗原结合片段)可以是包括抗体的重链CDR和/或轻链CDR的任何片段，并且例如，它可以选自但不限于由以下组成的组：Fab、Fab'、F(ab')2、Fd(包括重链可变区和CHl结构域)、Fv(重链可变区和/或轻链可变区)、单链Fv(scFv；包括任何顺序的重链可变区和轻链可变区以及重链可变区和轻链可变区之间的肽接头,或基本上由其组成)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)、scFab(单链Fab)、scFab-Fc(包括scFab和Fc区)、半IgG(包括一条轻链和一条重链)等。
不受限制地,抗PD-L1抗体或其片段是嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。一方面，抗体或其片段不是天然存在的，或化学合成的或重组合成的。
本公开的抗体与PD-L1的结合可以使用本领域中充分确立的一种或多种技术来评估。例如，在优选的实施方式中，可以通过流式细胞术测定来测试抗体，其中抗体与表达人PD-L1的细胞系反应，诸如已经被转染以在其细胞表面上表达PD-L1，例如人PD-L1或猴PD-L1(例如，恒河猴或猕猴)或小鼠PD-L1的CHO细胞。其他适用于流式细胞术测定的细胞包括抗CD3刺激的CD4+活化T细胞，其表达天然PD-L1。还有其他合适的结合测定包括ELISA测定，例如使用重组PD-L1蛋白。另外地或替代地，可以在Biacore分析中测试抗体的结合，包括结合动力学(例如，KD值)。本公开的抗体的优选结合亲和力包括具有4.25x10-9M或更小的解离常数或KD的那些。
鉴于这些抗体中的每一个都可以结合PD-L1，诸如人PD-L1，CDR序列或VH和VL序列可以“混合和匹配”以产生本公开的其他抗PD-L1结合分子。优选地，当CDR序列或VH和VL链混合和匹配时，例如，来自特定VH/VL对的VH序列替换为结构相似的VH序列。同样，优选地将来自特定VH/VL对的VL序列替换为结构相似的VL序列。
抗B7-H3抗体
抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体可以包括抗B7-H3抗体或其抗原结合片段作为B7-H3靶向部分。抗B7-H3抗体或其抗原结合片段可特异性识别人B7-H3，并显示与猴和小鼠B7-H3的交叉反应性。抗B7-H3抗体或其抗原结合片段可以抑制或阻断B7-H3免疫检查点，从而重新激活活性被B7-H3免疫检查点降低或抑制的T细胞。因此，该抗体或抗原结合片段可有效地用于重新激活被B7-H3免疫检查点抑制的T细胞和通过这种B7-H3免疫检查点抑制治疗需要重新激活的各种疾病。
被本文所述的抗体或其抗原结合片段识别的B7-H3(B7同源物3，CD276)可以指属于免疫球蛋白(Ig)超家族的B7家族的跨膜蛋白，并且包括胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域。抗体识别的B7-H3可以是存在于细胞膜中或不存在于细胞膜中的胞外结构域。抗体识别的B7-H3可以是存在于细胞膜中或不存在于细胞膜中的胞外结构域。B7-H3人蛋白由534个氨基酸组成，并且公开为NCBI参考序列：NP_001019907.1。除非从本文使用的上下文中显而易见，否则B7-H3是指人B7-H3，但该抗体具有特异性结合猴和小鼠B7-H3的能力。猴B7-H3蛋白由534个氨基酸组成，并且公开为NCBI参考序列：XP_005560056.1。小鼠B7-H3蛋白由316个氨基酸组成，并且公开为NCBI参考序列：NP_598744.1。
本文公开的抗B7-H3抗体是包括一个或多个如本文公开的互补决定区或位点(CDR)的多肽。
该抗体特异性结合人、猴和小鼠来源的B7-H3胞外结构域，并且它可以特异性结合在细胞表面上表达的B7-H3的胞外结构域的分离形式或胞外结构域。
抗B7-H3抗体或其片段可以包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：20、21、22和23组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：24、25、26、27、28和29组成的组的氨基酸序列的VH CDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：30、31、32、33和34组成的组的氨基酸序列的VH CDR3；(4)具有选自由SEQ ID NO：35、36、37、38和39组成的组的氨基酸序列的VLCDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：40、41、42、43、44和45组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQ ID NO：46、47、48、49和50组成的组的氨基酸序列的VL CDR3。
将包括在根据本发明的一种实施方式的抗体或抗原结合片段的重链和轻链可变区中的抗B7-H3的氨基酸的CDR序列公开于下表中。
【表3】
Figure BDA0003657430010000291
Figure BDA0003657430010000301
在一些实施方式中，抗体或其片段包括不超过一个、不超过两个或不超过三个上述替换。在一些实施方式中，抗体或其片段包括：SEQ ID NO：20或21的VH CDR1，SEQ ID NO：24或25的VH CDR2，SEQ ID NO：30或31的VH CDR3，SEQ ID NO：35或36的VL CDR1，SEQ IDNO：40或41的VL CDR2，和SEQ ID NO：46或47的VL CDR3。
例如，抗B7-H3抗体或其片段可以包括：具有SEQ ID NO：20或21的氨基酸序列的VHCDR1；具有SEQ ID NO：24或25的氨基酸序列的VHCDR2；具有SEQ ID NO：30或31的氨基酸序列的VH CDR3；具有SEQ ID NO：35或36的氨基酸序列的VL CDR1；具有SEQ ID NO：40或41的氨基酸序列的VL CDR2；以及具有SEQ ID NO：46或47的氨基酸序列的VL CDR3。
在一种实施方式中，上表中公开的每个轻链可变区的CDR和每个重链可变区的CDR可以自由组合。
在一种实施方式中，包括轻链和重链CDR序列的抗体或抗原结合片段的重链和轻链可变区可以在下表中举例说明。
【表4】
Figure BDA0003657430010000311
Figure BDA0003657430010000321
在其他实施方式中，上表中公开的重链和轻链可变区可以自由组合以制备各种形式的抗体，并且例如可以形成单抗体诸如scFv或域抗体。
本文公开的重链和轻链可变区中的每一个可以结合靶向各种重链和轻链恒定区以分别形成完整抗体的重链和轻链。此外，也可以将与这样的恒定区结合的重链和轻链序列各自组合以形成完整的抗体结构。
抗体的重链和轻链的任何可变区都可以与恒定区的至少一部分连接。可以根据是否需要抗体依赖性细胞介导的细胞毒性、抗体依赖性细胞吞噬作用和/或补体依赖性细胞毒性等来选择恒定区。例如，人同种型IgG1和IgG3具有补体依赖性细胞毒性，而人同种型IgG2和IgG4不具有细胞毒性。人IgG1和IgG3还诱导比人IgG2和IgG4更强的细胞介导的效应功能。例如，重链可变区可以结合IgG(诸如IgG1、IgG2、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgG4)的恒定区，并且轻链可变区可以结合κ或λ恒定区。对于恒定区，可以根据需要使用适当的一种，例如，可以使用人或小鼠来源的一种。在一种实施方式中，使用人重链恒定区IgG1，并且这可以由SEQ ID NO：157的序列表示。在其他实施方式中，作为轻链恒定区，使用人λ区，并且这可以由SEQ ID NO：161表示。
本文公开的任何可变区可以与恒定区结合，从而形成重链和轻链序列。在一种实施方式中，本文公开的重链可变区可以与人IgGl恒定区结合，以形成包括选自SEQ ID NO：282至286和292的氨基酸序列或基本上由其组成的重链(全长)。在其他实施方式中，本文公开的轻链可变区可以与人λ恒定区结合，以形成包括选自SEQ ID NO：287至291和293的氨基酸序列或基本上由其组成的轻链(全长)。轻链和重链可以组合成各种组合，从而形成由两条轻链和两条重链组成的完整抗体。
在其他实施方式中，抗体可包括由以下序列表示的重链和轻链的组合或基本上由其组成：SEQ ID NO：282和287；SEQ ID NO：283和288；SEQ ID NO：284和289；SEQ ID NO：285和290；SEQ ID NO：286和291；SEQ ID NO：292和289，或SEQ ID NO：292和293。
然而，与本文公开的可变区组合的此类恒定区序列是示例性的，并且本领域技术人员知道可以使用其他恒定区，包括IgG1重链恒定区、IgG3或IgG4重链恒定区、任何κ或λ轻链链恒定区、为稳定性、表达、可制造性或其他靶向特性等而修饰的恒定区。
在一些实施方式中，抗PD-L1抗体的抗原结合片段可以是包括抗体的重链CDR和/或轻链CDR的任何片段，并且例如，它可以选自但不限于由以下组成的组：Fab、Fab'、F(ab')2、Fd(包括重链可变区和CHl结构域)、Fv(重链可变区和/或轻链可变区)、单链Fv(scFv；包括任何顺序的重链可变区和轻链可变区以及重链可变区和轻链可变区之间的肽接头,或基本上由其组成)、单链抗体、二硫键连接的Fv(sdFv)、scFab(单链Fab)、scFab-Fc(包括scFab和Fc区)、半IgG(包括一条轻链和一条重链)等。
本发明包括与本文公开的一种或多种氨基酸序列具有实质序列同一性的一种或多种氨基酸序列。实质同一性是指保持存在序列变异的本文公开的效果。在一种实施方式中，它具有与表4中公开的重链可变区约90％、95％或99％的同一性。在其他实施方式中，它具有与表4中公开的轻链可变区约90％、95％或99％的同一性。例如，在与本文公开的抗体或抗原结合片段显示90％、95％或99％同一性的变体的情况下，任何变异都发生在可变区框架中而不是CDR中。
抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体
在实施方式中，在包括PD-L1靶向部分和B7-H3靶向部分的多特异性抗体中，PD-L1靶向部分和B7-H3靶向部分之一可以是全长抗体，并且另一个可以是包括重链CDR、轻链CDR或其组合的抗原结合片段(例如，scFv)。靶向PD-L1和B7-H3蛋白之一的全长抗体和靶向另一种蛋白的抗原结合片段可以直接或通过肽接头化学连接(例如，共价连接)。抗原结合片段(例如，scFv)可以直接或通过肽接头连接到全长抗体的N端(例如，全长抗体的轻链或重链的N端)、全长抗体的C端(例如，全长抗体的重链(或Fc或CH3结构域)的C端)，或其两者(参见图1a)。
在实施方式中，多特异性抗体可包括全长抗PD-L1抗体、抗B7-H3抗体的抗原结合片段(例如，scFv)和它们之间的肽接头。在其他实施方式中，多特异性抗体可以包括全长抗B7-H3抗体、抗PD-L1抗体的抗原结合片段(例如，scFv)和它们之间的肽接头(参见图1a)。
在实施方式中，多特异性抗体中包括的scFv可以包括任意顺序的重链可变区和轻链可变区。例如，多特异性抗体中包括的scFv可以包括在从N端到C端的方向上的重链可变区和轻链可变区，以及任选地在它们之间的肽接头，或替代地，多特异性抗体中包括的scFv可以包括在从N端到C端的方向上的轻链可变区和重链可变区，以及任选地在它们之间的肽接头。
scFv可以包括额外的修饰(scFv的VL100和VH44处的氨基酸突变为半胱氨酸)以产生二硫键桥，将VL100-VH44分别融合至可变轻链和可变重链，以用于稳定scFv。
本公开的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体可以是IgG X scFv形式抗体，其也可以称为“2+2形式抗体”。IgG X scFv形式抗体可以具有scFv通过接头与全长IgG抗体的重链的每个Fc区的C端连接的结构(参见图1a)，并且包括重组分和轻组分。
如本文所用，“重组分”是指本公开的实施方式的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体的组分，其包括：i)抗PD-L1抗体的重链，和抗B7-H3抗体的可变重链和可变轻链，或ii)抗B7-H3抗体的重链，和抗PD-L1抗体的可变重链和可变轻链。
如本文所用，“轻组分”是指本公开的实施方式的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体的组分，其包括：i)如果重组分包括抗PD-L1抗体的重链，则抗PD-L1抗体的轻链，或ii)如果重组分包括抗B7-H3抗体的重链，则抗B7-H3的轻链。
在另一实施方式中，在包括PD-L1靶向部分和B7-H3靶向部分的多特异性抗体中，PD-L1靶向部分和B7-H3靶向部分均不是全长抗体。在这种情况下，PD-L1靶向部分和B7-H3靶向部分中的任何一个可以包括一个重链(HC)和一个轻链(LC)，并且另一个可以包括scFab-Fc。“scFab-Fc”是指包括scFab和与其连接的Fc的结构。在该结构中，scFab可以直接或通过肽接头化学连接(例如，共价连接)到Fc区。
在实施方式中，多特异性抗体可包括抗PD-L1抗体的HC+LC(其也可称为半IgG)和抗B7-H3抗体的scFab-Fc。在其他实施方式中，多特异性抗体可包括抗B7-H3抗体的HC+LC和抗PD-L1抗体的scFab-Fc。这些类型的多特异性抗体可称为(HC+LC)X scFab-Fc形式抗体，或也称为“1+1形式抗体”。
换言之，(HC+LC)X scFab-Fc形式抗体可以具有IgG抗体的任一臂(VH、CH1和轻链)被scFab替换的结构(从N端到C端的顺序VL-CL-VH-CH1)(参见图1b)。scFab的C端可以通过接头连接到Fc链的N端。换言之，(HC+LC)X scFab-Fc形式抗体可以包括半IgG和scFab-Fc。
在实施方式中，1+1形式抗体还可以包括在每个Fc的C端的scFv以形成三特异性抗体。三特异性抗体可以具有scFv通过接头与1+1形式的多特异性抗体连接的结构。scFv可以与除PD-L1或B7-H3之外的靶标结合。例如，scFv可以与人4-1BB蛋白结合。
术语“4-1BB”是指CD137或TNFRSF9(TNF受体25超家族成员9)，是TNF受体超家族(TNFRSF)的成员，并且是一种在免疫细胞(先天性和适应性免疫细胞二者)激活后表达的共刺激分子。如本文所用，4-1BB可以源自哺乳动物，例如智人(人)(NCBI登录号NP_001552)。
对多特异性抗体使用肽接头可导致抗体的高纯度。
如本文所用，术语“肽接头”可以是包括1至100个，特别是2至50个任何氨基酸的那些，并且可以包括任何种类的氨基酸而没有任何限制。肽接头可以包括例如Gly、Asn和/或Ser残基，并且还包括中性氨基酸诸如Thr和/或Ala。适合于肽接头的氨基酸序列可以是相关领域已知的那些。同时，肽接头的长度可以在不影响融合蛋白功能的范围内进行各种确定。例如，肽接头可通过包括总共约1至约100、约2至约50、或约5至约25个选自由Gly、Asn、Ser、Thr和Ala组成的组的一种或多种而形成。在一种实施方式中，肽接头可以表示为(GmSl)n(m、l和n独立地为约1至约70的整数，特别是约1至约64的整数)。例如，肽接头的实例总结如下：
Figure BDA0003657430010000371
可以通过应用旋钮入孔(knobs-into-hole)技术来促进多特异性抗体(2+2形式或1+1形式)中两条重链的异二聚化。例如，将旋钮(knob)突变(T366W)引入重链的CH3结构域，并将三个形成孔(hole)的突变(T366S、L368A和Y407V)引入另一重链的CH3结构域。
在另一实施方式中，PD-L1靶向部分和B7-H3靶向部分二者可以是全长抗体或包括重链CDR、轻链CDR或其组合的抗原结合片段。
在实施方式中，全长抗体可以是全长免疫球蛋白形式(例如，IgG、IgM、IgA、IgE或IgD，诸如人IgG、人IgM、人IgA、人IgE或人IgD)，并且抗原结合片段可以选自由以下组成的组：Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、scFv、单链抗体、sdFv、scFab(单链Fab)、scFab-Fc(包括scFab和Fc区)、半IgG(包括一条轻链和一条重链)等，如上所述。例如，全长抗体可以是全长人IgG(人IgG1、人IgG2、人IgG3或人IgG4)形式，并且抗原结合片段可以是scFv。
例如，本文所述的抗体可包括柔性接头序列，或可被修饰以添加功能部分(例如，PEG、药物、毒素或标记)。
本文所述的抗体或变体可包括被修饰的衍生物，例如，通过将任何类型的分子共价连接至抗体，使得共价连接不会阻止抗体与抗原(例如，表位)结合。例如，但不限于，抗体可以被修饰，例如，通过选自由以下组成的组的至少一种：糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/封闭基团的衍生化、蛋白水解切割、与细胞配体或其他蛋白质连接等。多种化学修饰中的任一种可以通过已知技术进行，包括但不限于特异性化学切割、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。另外，抗体可以包含一种或多种非典型氨基酸。
多特异性抗体与每种靶蛋白的结合特异性和/或亲和力可以通过任何常规测定来确定，例如体外测定，诸如免疫沉淀、放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA)，但不限于此。
人源化抗体是衍生自结合期望抗原的非人物种抗体的抗体分子，其具有来自非人物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区。通常，人框架区中的框架残基将被来自CDR供体抗体的相应残基替换，以改变、优选改善抗原结合。
此外，本领域技术人员已知的标准技术可用于在编码本公开的抗体的核苷酸序列中引入突变。
多特异性抗体的治疗用途
本文提供的多特异性抗体能够同时阻断PD-L1和B7-H3的活性，从而在免疫疗法和/或癌症疗法中表现出改善的效果，例如通过激活免疫应答。鉴于本公开的多特异性抗体抑制PD-L1与PD-1分子结合并刺激抗原特异性T细胞应答的能力，本公开内容还提供了使用本公开的抗体来刺激、增强或上调抗原特异性T细胞应答的组合物或体外和体内方法。
实施方式提供了包括如上所述的多特异性抗体的药物组合物。药物组合物还可包括药学上可接受的载体。该药物组合物可用于刺激免疫应答(例如，抗原特异性T细胞应答)，和/或治疗和/或预防与PD-L1、B7-H3或它们两者相关的疾病。
另一实施方式提供了在有此需要的受试者中刺激免疫应答(例如，抗原特异性T细胞应答)和/或治疗和/或预防与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病的方法，包括向受试者给药药学有效量的多特异性抗体或药物组合物。在给药步骤之前，该方法可以进一步确定需要治疗和/或预防与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病的受试者的步骤。
与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病可以选自癌症(或肿瘤)、感染性疾病、自身免疫反应、神经系统疾患等。
在实施方式中，受试者可以选自哺乳动物，包括人，例如患有癌症哺乳动物细胞的哺乳动物(例如人)。在其他实施方式中，受试者可以是从哺乳动物分离(隔离)的细胞，例如患有选自癌症、感染性疾病、自身免疫反应、神经系统疾患等的疾病的哺乳动物(例如，癌细胞或从哺乳动物的感染区分离(隔离)的细胞，或T细胞，例如肿瘤浸润性T淋巴细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞或其组合)。
另一实施方式提供了多特异性抗体或药物组合物在治疗和/或预防癌症中的用途。另一实施方式提供了多特异性抗体在制备用于治疗和/或预防癌症的药物组合物中的用途。
在本文提供的药物组合物、方法和/或用途中，与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病可以是与PD-L1、B7-H3或其两者的活化(例如异常活化或过度活化)和/或过度产生(过表达)相关的疾病。例如，该疾病可以是癌症。
癌症可以是实体癌或血癌，优选实体癌，包括但不限于乳腺癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、肝癌、肺癌、结直肠癌、胰腺癌、皮肤癌、膀胱癌、睾丸癌、子宫癌、前列腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、神经母细胞瘤、脑癌、结肠癌、鳞状细胞癌、黑色素瘤、骨髓瘤、宫颈癌、甲状腺癌、头颈癌和肾上腺癌。
多特异性抗体的给药可以通过一种或多种本领域公知的技术进行。
本公开的抗体的“治疗有效剂量”优选导致疾病症状的严重性降低、疾病无症状期的频率和持续时间增加，或预防由于疾病折磨引起的损伤或残疾。例如，对于荷瘤受试者的治疗，相对于未治疗的受试者，“治疗有效剂量”优选将肿瘤生长抑制至少约20％，更优选至少约40％，甚至更优选至少约60％，还更优选至少约80％。治疗有效量的治疗化合物可以减小受试者的肿瘤大小，或以其他方式改善受试者的症状，受试者通常是人或可以是另一种哺乳动物。
药物组合物可以包括有效量的多特异性抗体和可接受的载体。在一些实施方式中，所述组合物还包括第二抗癌剂(例如，免疫检查点抑制剂)。
在具体实施方式中，术语“药学上可接受的”可指经联邦或州政府的监管机构批准或在美国药典或其他公认的药典中列出用于动物，更特别地用于人。此外，“药学上可接受的载体”通常是无毒的固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料或任何类型的制剂助剂。
包括本公开的抗体或其抗原结合片段的组合物还可包括药学上可接受的载体。药学上可接受的载体是通常用于制备制剂的载体。
多特异性抗体的诊断用途
在来自患有某种癌症(例如，肿瘤细胞)的患者的生物样品(例如，细胞、组织、血液、血清等)中观察到PD-L1和/或B7-H3的过表达和/或过度激活，和/或具有过表达PD-L1和/或B7-H3的细胞的患者可能对多特异性抗体的治疗有应答。因此，本公开的多特异性抗体也可用于诊断和预后目的。
实施方式提供了用于诊断与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病的药物组合物，该组合物包括多特异性抗体。在另一实施方式中，提供了多特异性抗体用于诊断与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病的用途。
编码抗体的多核苷酸和制备抗体的方法
实施方式提供了编码多特异性抗体的多核苷酸。特别地，实施方式提供了编码IgGX scFv形式的多特异性抗体的重链的多核苷酸。其他实施方式提供了编码IgG X scFv形式的多特异性抗体的轻链的多核苷酸。IgG X scFv形式可以指一种多特异性抗体，其包括靶向(结合于)PD-L1和B7-H3蛋白之一的全长IgG抗体和靶向(结合于)另一蛋白的scFv片段，其中scFv直接(没有肽接头)或通过肽接头连接到全长IgG抗体的C端和/或N端。
在实施方式中，当IgG X scFv形式的多特异性抗体包括针对PD-L1的全长IgG抗体和针对B7-H3的scFv片段时，编码多特异性抗体的重链的多核苷酸可以编码针对PD-L1的全长IgG抗体的重链和直接或通过肽接头连接到全长IgG抗体的C端和/或N端的针对B7-H3的scFv片段；并且编码多特异性抗体的轻链的多核苷酸可以编码针对PD-L1的全长IgG抗体的轻链。
在另一实施方式中，当IgG X scFv形式的多特异性抗体包括针对B7-H3的全长IgG抗体和针对PD-L1的scFv片段时，编码多特异性抗体的重链的多核苷酸可以编码针对B7-H3的全长IgG抗体的重链和直接或通过肽接头连接到全长IgG抗体的C端和/或N端的针对PD-L1的scFv片段；并且编码多特异性抗体的轻链的多核苷酸可以编码针对B7-H3的全长IgG抗体的轻链。
特别地，实施方式提供了编码(HC+LC)X scFab-Fc形式抗体(1+1形式抗体)的多核苷酸。(HC+LC)X scFab-Fc形式抗体可以具有IgG抗体的任一臂(VH、CH1和轻链)被scFab替换的结构(从N端到C端的顺序VL-CL-VH-CH1)。scFab的C端可以通过接头连接到Fc链的N端。“scFab-Fc”是指包括scFab和与其连接的Fc的结构。换言之，(HC+LC)X scFab-Fc形式抗体可以包括半IgG(一条重链和一条轻链)和scFab-Fc。
特别地，实施方式提供了编码三特异性抗体的多核苷酸。三特异性抗体可以具有scFv通过接头与1+1形式的多特异性抗体连接的结构。scFv可以与除PD-L1或B7-H3之外的靶标结合。例如，scFv可以与人4-1BB蛋白结合。
另一实施方式提供了包括编码多特异性抗体重链的多核苷酸、编码多特异性抗体轻链的多核苷酸或其两者的重组载体。另一实施方式提供了用重组载体转染的重组(宿主)细胞。
另一实施方式提供了制备多特异性抗体的方法，包括在细胞中表达编码多特异性抗体的重链的多核苷酸、编码多特异性抗体的轻链的多核苷酸。表达多核苷酸的步骤可以通过在允许多核苷酸表达的条件下培养包括多核苷酸(例如，在重组载体中)的细胞来进行。该方法还可包括在表达或培养步骤之后从细胞培养物中分离和/或纯化多特异性抗体。
实施例
以下，将通过实施例详细说明本发明。
以下实施例仅旨在说明本发明，而不是解释为限制本发明。
实施例1：抗PD-L1单克隆抗体的制备
1.1.抗人PD-L1小鼠单克隆抗体的制备及其分析
如国际申请公开WO2017-215590中所公开的，使用杂交瘤技术产生抗人PD-L1小鼠单克隆抗体。
下表提供了杂交瘤上清液(称为杂交瘤HL1210-3)的可变区的氨基酸和多核苷酸序列。
【表5】
Figure BDA0003657430010000421
Figure BDA0003657430010000431
1.2.HL1210-3小鼠mAb的人源化
mAb HL1210-3可变区基因用于根据本领域常用和如国际申请公开WO 2017-215590中公开的方法产生人源化Mab。
一些所得人源化抗体的氨基酸和核苷酸序列示出在SEQ ID NO.67至SEQ IDNO.120中。
人源化VH和VK(VLκ)基因是合成产生的，然后分别克隆到包含人γ1和人κ恒定结构域的载体中。人VH和人VK的配对产生了40种人源化抗体(见表6至9)。
【表6】
Figure BDA0003657430010000432
Figure BDA0003657430010000441
【表7】
Figure BDA0003657430010000442
【表8】
Figure BDA0003657430010000443
【表9】
Figure BDA0003657430010000444
1.3.全人抗PD-L1抗体的制备
也已经从噬菌体文库中筛选了全人抗PD-L1抗体。
抗原：人PD-L1胞外结构域(ECD)avi-His-生物素标记的蛋白质(B3568B,Biointron)。
全人初始噬菌体文库的制备：使用噬菌粒载体构建噬菌体文库，该载体由从健康人受试者的PBMC中扩增的抗体基因片段组成。其被构建为Fab噬菌体文库。文库大小为2×1011。
针对PD-L1 ECD蛋白的噬菌体文库溶液淘选。噬菌体文库首先通过与BSA包被的链霉亲和素Dynabeads一起孵育来进行阴性筛选。将所得噬菌体与PD-L1-ECD-avi-his-生物素蛋白一起孵育，并用Kingfihser磁珠系统洗涤。通过胰蛋白酶洗脱结合物。随后测试洗脱的噬菌体(输出1)结合抗原的效价并与大肠杆菌共培养。进行了三轮淘选和筛选。输出2和输出3的效价显著增加。
从输出2和3中挑选出单个克隆，然后在96深孔板中培养。对培养上清液进行IgG浓度和抗原结合效价评估。筛选出277个阳性克隆并进行测序。后序列分析鉴定了128个独特的序列。对所有这些克隆进行ELISA结合分析。鉴定了17个顶级序列，并选择了B12克隆。B12的六(6)个CDR序列如表10所示，并且B12的重可变区和轻可变区的序列如表11所示。
【表10】
Figure BDA0003657430010000451
【表11】
Figure BDA0003657430010000452
Figure BDA0003657430010000461
1.4.PD-L1表位的鉴定
进行该研究以鉴定参与PD-L1与本公开的抗体结合的氨基酸残基。
构建了PD-L1的丙氨酸扫描文库。简而言之，在Integral Molecular的蛋白质工程平台上生成了217个PD-L1突变克隆。通过高通量流式细胞术一式两份地确定Hu1210-41Fab与PD-L1突变文库中每个变体的结合。每个原始数据点都减去了背景荧光，并相对于与PD-L1野生型(WT)的反应性进行归一化。对于每个PD-L1变体，将平均结合值作为表达的函数绘图。为了鉴定初步关键克隆(带叉号的圆圈)，应用了>70％WT与对照Mab(MIH1Mab，内部制备)结合和<30％WT对Hu1210-41Fab反应性的阈值(虚线)(图3)。PD-L1的Y134、K162和N183被鉴定为Hu1210-41结合所需的残基。N183A克隆与Hu1210-41Fab的低反应性表明它是Hu1210-41结合的主要能量贡献者，Y134和K162的贡献较小。
在3D PD-L1结构上鉴定了关键残基(球体)，如图4所示。因此，这些残基Y134、K162和N183构成了PD-L1的负责与本公开的各种实施方式的抗体结合的表位。
有趣的是，Y134、K162和N183都位于PD-L1蛋白的IgC结构域内。PD-1和PD-L1二者的胞外部分具有IgV结构域和IgC结构域。众所周知，PD-L1通过它们的IgV结构域之间的结合与PD-1结合。然而，与此类常规抗体不同的是，Hu1210-41与IgC结构域结合，这在抑制PD-1/PD-L1结合方面被认为是无效的。令人惊讶的是，Hu1210-41的这种不同表位可能有助于Hu1210-41的优异活性。
1.5.抗PD-L1抗体的抗体工程
实施例1.5尝试使用诱变鉴定基于Hu1210-41的进一步改进的抗体。
使用以下任一策略构建了四个子库用于抗PD-L1单克隆抗体的抗体工程。在策略1中，通过高度随机突变进行重链可变结构域VH CDR3或VL-CDR3的诱变。在策略2中，通过具有受控突变率的CDR步移(CDR walking)生成由(VH-CDR3、VL-CDR3和VL-CDR1)或(VH-CDR1、VH-CDR2和VL-CDR2)组成的两个CDR组合文库。
生物淘选：通过在苛刻的洗涤条件之前缩短孵育/结合时间来调整噬菌体淘选方法。简而言之，将100μl磁性链霉亲和素珠(Invitrogen,USA)在室温下用1ml MPBS封闭1小时。在另一个管中，将文库噬菌体与1ml MPBS中的100μl5磁性链霉亲和素珠预孵育(每轮5x10^11～12)以去除不希望的结合物。磁体颗粒浓缩器用于分离噬菌体和珠。将生物素化的PD-L1蛋白添加到噬菌体中并在室温下孵育2小时，并使用头顶摇床轻轻混合。在磁性颗粒浓缩器中分离来自溶液的携带噬菌体的珠，并弃去上清液。用新鲜的洗涤缓冲液洗涤珠，用PBST洗涤十次，并且用PBS(pH7.4)洗涤十次。添加0.8ml的PBS(Sigma,USA)中的0.25％胰蛋白酶并在37℃下孵育20分钟以洗脱噬菌体。将输出噬菌体滴定并拯救用于下一轮淘选，逐轮降低抗原浓度。
ELISA筛选和接合/解离率排名
从所需的淘选输出中挑选和诱导克隆；进行噬菌体ELISA用于初步筛选；通过测序分析阳性克隆；发现了独特的热点。
下表示出了鉴定的突变。如下所示，热点突变残基和/或其替换物带有下划线。
【表12】
Figure BDA0003657430010000471
Figure BDA0003657430010000481
这些抗体的可变区的氨基酸序列如下表所示。
【表13】
Figure BDA0003657430010000482
Figure BDA0003657430010000491
【表14】
Figure BDA0003657430010000492
【表15】
Figure BDA0003657430010000501
1.6.PD-L1的蛋白质动力学
为了探索人源化抗体的结合动力学，本实施例使用Biacore进行亲和力排序。H12和B6如下表所示。
【表16】
抗体 KD(M) kon(1/Ms) kdis(1/s) Chi
H12 6.122E-09 7.124E+04 4.361E-04 0.0415
B6 4.248E-09 9.827E+04 4.175E-04 0.0766
如上表所示，测试的抗PD-L1抗体显示出高PD-L1结合亲和力。
实施例2.抗B7-H3单克隆抗体的制备
2.1.抗B7-H3单克隆抗体的制备及其分析
2.1.1.抗原的制备
购买用于噬菌体展示性能以用于制备抗B7-H3抗体的抗原并使用。在人B7-H3的情况下，包括了NP_001019907.1的氨基酸序列的第1至461并且使用了C端连接有组氨酸标签(His标签)的重组B7-H3蛋白质(2318-B3/CF,R&D Systems)。
购买用于以下实施例的ELISA分析、SPR分析或T细胞活性分析的抗原并如下使用。在人B7-H3的情况下，包括了NP_001019907.1的氨基酸序列的第1至461并使用了C端连接有组氨酸标签(His标签)的重组B7-H3蛋白质和C端连接有人IgG1的Fc区的蛋白质(SinoBiological,11188-H02H)。
2.1.2:通过噬菌体文库筛选的抗体分选制备
文库噬菌体的制备
将具有对各种抗原具有结合多样性的人源scFv(单链可变片段)文库(Mol.CellsOT,225-235,2009年2月28日)基因的2x1010个大肠杆菌在包含2X YT(Amresco,J902-500G)、氨苄青霉素100μg/ml和2％葡萄糖(sigma,G7021)的培养基中在37℃培养2小时至3小时后，使得OD600值为0.5至0.7。用培养的大肠杆菌感染辅助噬菌体后，将其在2X YT[2X YT,氨苄青霉素100μg/ml,1mM IPTG(Duchefa,I1401)]培养基中于30℃培养16小时，从而诱导噬菌体包装。然后，在将培养的细胞在4℃、4500rpm的条件下离心20分钟后，将4％PEG 8000(sigma,P2139)和3％NaCl(Samchun,S2097)添加到上清液中并充分融化，然后在冰上反应1小时。在4℃、8000rpm的条件下再次离心后，将PBS(磷酸盐缓冲盐水，Gibco 10010-023)添加到沉淀中并使其悬浮。将悬浮液在4℃、1200rpm的条件下离心10分钟后，将上清液放入新管中，使用前储存在4℃下。
通过噬菌体展示的淘选
为了分选与人B7-H3蛋白结合的抗体，使用实施例2的连接有组氨酸标签(His标签)的重组B7-H3蛋白，如下共进行3次淘选。
具体而言，通过向免疫管(maxisorp 444202)中加入1ml的2μg/ml浓度的重组人B7-H3蛋白，在37℃、200rpm的条件下1小时使蛋白质吸附于试管表面上。然后，除去上清液，将包含3％脱脂乳的溶液加入试管中并在室温下反应1小时。通过这样，脱脂乳被吸附于免疫管表面上，而重组人B7-H3蛋白未吸附，从而阻断了非特异性结合。除去上清液后，将1012CFU的实施例2.1.2中制备的噬菌体文库混合在包含3％脱脂乳的溶液中，放入免疫测试，并使其在37℃、150rpm的条件下反应1小时，从而使人B7-H3蛋白特异性噬菌体与抗原结合。
然后，用PBS-T(磷酸盐缓冲盐水-0.05％吐温20)溶液洗涤并除去非特异性结合的噬菌体，并通过加入1ml 100mM三乙胺溶液收集剩余的抗原特异性噬菌体抗体。由于三乙胺溶液的pH较低，在用1M Tris缓冲溶液(pH 7.4)中和收集的噬菌体后，在37℃、120rpm的条件下感染生长至OD600下0.8～1的ER2537大肠杆菌1小时30分钟。将培养液在4℃、4500rpm的条件下离心15分钟，除去上清液，通过在包含氨苄青霉素的2X YT琼脂培养基上涂抹感染的大肠杆菌，将沉淀的细胞在37℃下培养16小时或更长时间。次日，将所有培养的大肠杆菌刮出并悬浮在5ml 2X YT氨苄青霉素培养液中，添加505甘油，将一部分储存在-80℃，并且将另一部分用于制备噬菌体用于下一步实验。在包含氨苄青霉素的2X TB中接种20μl培养的大肠杆菌并使其生长后，感染辅助噬菌体并将淘选再重复两次，从而扩增并浓缩人B7-H3蛋白特异性噬菌体库。
单克隆筛选
为了从通过淘选获得的噬菌体库中分选与人B7-H3蛋白特异性结合的单克隆抗体，进行如下实验。
为了从浓缩库中分离单克隆，在将噬菌体库涂抹在LB-氨苄青霉素琼脂培养基上并培养后，确保单菌落。然后，将单克隆接种到每孔添加了200μl超级肉汤(SB)培养基的96孔板中并培养过夜后，将一部分转移到其他板中以制成细胞原液。将1mM IPTG加入剩余的细胞培养液中，并将其在30℃下培养16小时，以诱导scFv产生。将培养的培养液在4℃、6000rpm的条件下离心后，弃上清液并仅得到细胞，然后将细胞用TES溶液裂解以及然后再离心，仅得到上清液备用。
然后，如下通过使用ELISA方法选择表达与B7-H3-His抗原(2318-B3/CF,R&DSystems)结合的可溶性单克隆scFv的克隆(Steinberger.Rader and BarbasIII.2000.Phage display vectors.In:Phage Display Laboratory Manual.1sted.ColdSpringHarborLaboratoryPress.NY.USA.pp.11.9-11.12)。具体而言，将每孔100ng的实施例2中制备的重组人B7-H3-his蛋白置于96孔板(Nunc-Immuno Plates,NUNC,Rochester,NY,USA)上，并使其在4℃下吸附过夜。次日，在用PBST(磷酸盐缓冲盐水-0.05％吐温20)洗涤蛋白质后，为防止非特异性结合，加入每孔200μL的包含3％BSA的PBS缓冲液，并使其在37℃下反应2小时。然后，再次用PBST洗涤后，加入每孔100μl包含预先离心和制备的噬菌体的上清液，并使其在37℃下反应约1小时。然后，在用PBST洗涤后，为了检测与人B7-H3结合的噬菌体，将抗HAHRP(辣根过氧化物酶)结合抗体(Roche，12 013 819 001)在包含1％BSA的PBS中1:5000稀释,每孔加入100μl，并使其在37℃下反应约1小时。再次用PBST洗涤后，加入100μl的TMB(四甲基联苯胺，Thermo，34028)显色。在室温下反应5～10分钟后，加入50ml 1NH2SO4以完成反应。测量450nm处的吸光度以分选值为1.0或更高的克隆。
从中分选出7个与重组人B7-H3蛋白结合的抗体克隆(B5、C4I、D8G、F6V、10F11、D8GM1和D8G M3)，并且每个抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列和CDR序列如下表。
【表17】
Figure BDA0003657430010000531
【表18】
Figure BDA0003657430010000532
Figure BDA0003657430010000541
编码可变区和CDR序列的核酸序列包括在以下全长核酸序列中，顺序为B5、C4I、D8G、F6V、10F11、D8GM1和D8GM3，分别为：SEQ ID NO：145(重链)和151(轻链)；SEQ ID NO：146(重链)和152(轻链)；SEQ ID NO：147(重链)和153(轻链)；SEQ ID NO：148(重链)和154(轻链)；SEQ ID NO：149(重链)和155(轻链)；SEQ ID No：150(重链)和153(轻链)；以及SEQID NO：150(重链)和156(轻链)。在核酸序列中，编码恒定区的核酸序列为SEQ ID NO：158至160(重链)和SEQ ID NO：161至163(轻链)。
实施例2.2.将抗B7-H3scFv转化为全IgG形式及其产生
2.2.1.将抗B7-H3scFv克隆成全IgG形式
为了将实施例2.1中获得的每种人B7-H3特异性单克隆噬菌体抗体转化为全IgG形式，合成了编码实施例2.1中获得的每个克隆的重链和轻链可变区的核酸(Genotech，韩国)。合成了编码重链和轻链恒定区(分别为SEQ ID NO：157和161)蛋白的人IgG1亚型(重链恒定区SEQ ID NO：158(C4I、D8G、10F11、D8G M1、D8G M3克隆)、159(B5克隆)、160(F6V克隆)和轻链恒定区162(C4I、D8G、10F11、D8G M1、D8G M3克隆)、163(B5克隆)和164(F6V克隆))的基因并与编码每个重链和轻链可变区的核酸连接。将编码各抗体的轻链和重链的核酸分别克隆到基于pcDNA3.1的表达载体中，并获得了在CHO-S等哺乳动物细胞系中编码抗体核酸的载体。此外，为了使用常规抗B7-H3抗体依诺妥珠单抗(Enoblituzumab)作为对照组抗体，该抗体的可变区序列从专利(US 8,802,091)中获得并获得基因，将其以与上述方法相同方式克隆并命名为84D使用。
该IgG形式的抗体公开为以下重链和轻链全长序列，顺序为B5、C4I、D8G、F6V、10F11、D8G M1和D8G M3，分别为：SEQ ID NO：145(重链)和151(轻链)；SEQ ID NO：146(重链)和152(轻链)；SEQ ID NO：147(重链)和153(轻链)；SEQ ID NO：148(重链)和154(轻链)；SEQ ID NO：149(重链)和155(轻链)；SEQ ID No：150(重链)和153(轻链)；以及SEQ ID NO：150(重链)和156(轻链)。
2.2.2.抗B7-H3抗体的表达
为了表达抗B7-H3抗体，使用了Theremo公司开发的ExpiCHO-STM(Thermo Fisher,A29127)细胞，并且按照制造商的ExpiCHOTM表达系统试剂盒(Thermo Fisher,A29133)方案进行抗体的表达。
简要描述制备方法，将ExpiCHO-S细胞在8％CO2、37℃条件的摇动培养箱中在120rpm的条件下培养。在转染当天，通过添加ExpiCHOTM表达培养基(Thermo Fisher，A2910001)以6x106个细胞/ml的细胞浓度稀释ExpiCHO-S细胞并进行制备。
然后，将表达来自实施例2.2.1的重链和轻链的每种载体在OptiPROTM SFM培养基(Thermo Fisher,12309050)中分别以1μg每ml培养基稀释，并且将ExpiCHO表达系统中包括的3.2μl每ml的ExpiFectamineTMCHO在OptiPROTM SFM培养基中稀释。将载体和ExpiFectamineTMCHO混合物彼此混合，并在室温下反应5分钟，然后将混合物加入到制备的细胞中并将其在8％CO2、37℃、120rpm的条件下培养20小时。在20小时中，在分别将2.2μl/ml和240μl/ml的Enhencer1,ExpiCHOTMFeed(均包括在ExpiCHOTM表达系统试剂盒(ThermoFisher，A29133))添加到细胞中后，将其在8％CO2、37℃、120rpm的条件下培养约7天至10天。
培养后，将细胞培养液在4℃、6000rpm的条件下离心30分钟，然后分离上清液并冷藏。
2.2.3.抗B7-H3抗体的分离和纯化
将平衡缓冲溶液(50mM Tris-HCl，pH7.5，100mM NaCl)通过Mab selectsure(GEHealthcare，5ml)以使其平衡后，将实施例2.2.2的培养液通过柱(Mab selectsure(GEHealthcare,5ml))以使表达的抗体与柱结合。然后，在用50mM柠檬酸钠(pH 3.4)、100mMNaCl溶液洗脱后，将其用1M Tris-HCl(pH 9.0)中和，使得最终pH为7.2。将缓冲溶液用PBS(磷酸盐缓冲盐水，pH 7.4)交换。
2.3.抗B7-H3抗体与B7-H3的结合特异性的分析
2.3.1.抗B7-H3IgG抗体与重组B7-H3抗原的结合特异性的分析(ELISA)
为了确认实施例2.1和2.2中选择和制备的抗B7-H3IgG抗体对B7-H3抗原的特异性结合能力，进行了基于ELISA的溶液结合测试。
具体而言，在将重组人B7-H3蛋白以1μg/ml的浓度稀释并将其以每孔100μl加入96孔板(Nunc-Immuno Plates，NUNC)后，使其在4℃下反应16小时用于包被。此处使用实施例2.1中使用的重组人B7-H3蛋白。
然后，在去除蛋白质并用PBST洗涤后，将包含1％BSA(牛血清白蛋白)的PBS缓冲液以每孔200μl加入，并使其在37℃下反应2小时以阻断非特异性结合。然后，在96孔板上以10μg/ml的浓度稀释实施例2.2中制备的抗B7-H3抗体后，每孔加入100μl，并使其在37℃下反应1小时。然后用PBST洗涤。为了检测与人B7-H3结合的抗体，将HRP连接的抗人IgG F(ab')2抗体(山羊抗人IgG F(ab')2交叉吸附二抗,HRP,Pierce,31414)在包含1％牛血清白蛋白(BSA)的PBS中1:10,000稀释，每孔加入100μl并使其在37℃下反应约1小时。再次用PBST洗涤后，加入100μl的TMB(四甲基联苯胺，Sigma，T0440)显色。在室温下反应5～10分钟后，加入50μl 1N H2SO4以完成反应，并使用酶标仪(molecular device)测量450nm和650nm处的吸光度。
结果在图5a和图5b中描述。作为使用ELISA方法测量结合能力的结果，证实抗B7-H3抗体以浓度依赖性方式与人B7-H3的胞外结构域结合。
2.3.2.抗B7-H3抗体与B7家族其他蛋白的结合能力的分析
B7家族蛋白彼此共有20～40％的相同氨基酸，具有结构相关性诸如免疫球蛋白结构域重复性。因此，如下分析了本发明的抗B7-H3抗体是否特异性结合B7-H3蛋白，而不结合其他B7家族蛋白。
为了确认免疫特异性结合能力，购买并使用了具有结构相似性的B7家族组分蛋白：B7-1(Sino Biological,Cat#:10698-H08H)、B7-2(Sino Biological,Cat#:10699-H08H)、B7-DC(Sino Biological,Cat#:10292-H08H)、B7-H1(Sino Biological,Cat#:10084-H08H)、B7-H2(Sino Biological,Cat#:11559-H08H)、B7-H4(Sino Biological,Cat#:10738-H08H)、B7-H5(Sino Biological,Cat#:13482-H08H)、B7-H6(SinoBiological,Cat#:16140-H08H)、B7-H7(Sino Biological,Cat#:16139-H02H)。
具体而言，在将重组人B7家族蛋白以1μg/ml的浓度稀释并将其以每孔100μl加入96孔板(Nunc-Immuno Plates，NUNC)后，使其在4℃下反应16小时用于包被。使用实施例2.1中使用的重组蛋白。
然后，在去除蛋白质并用PBST洗涤后，每孔加入200μl的包含1％BSA(牛血清白蛋白)的PBS缓冲液，并使其在37℃下反应2小时以阻断非特异性结合。然后，在96孔板上以10μg/ml稀释实施例2.2中制备的抗B7-H3抗体后，每孔加入100μl，并使其在37℃下反应1小时。然后用PBST洗涤。为了检测与抗原结合的抗体，将HRP连接的抗人IgG F(ab')2抗体(山羊抗人IgG F(ab')2交叉吸附二抗,HRP,Pierce,31414)在包含1％牛血清白蛋白(BSA)的PBS中1:10,000稀释。每孔加入100μl并使其在37℃下反应约1小时再次用PBST洗涤后，加入100μl的TMB(四甲基联苯胺，Sigma，T0440)显色。在室温下反应5～10分钟后，加入50μl H2SO4以完成反应，并使用酶标仪(molecular device)测量450nm和650nm处的吸光度。
结果在图6中描述。作为使用ELISA方法测量结合能力的结果，证实抗B7-H3抗体仅与B7-H3特异性结合，而不与其他B7家族蛋白特异性结合。
2.3.3.抗B7-H3抗体对人、猴和小鼠B7-H3的跨物种反应性分析
为了在临床进展到人类之前估计抗B7-H3抗体的抗体功效和免疫调节活性，啮齿动物或灵长类动物模型中的估计很重要。人B7-H3的序列在猴和小鼠中具有90％或更多的同一性。通过ELISA分析方法如下分析实施例2.2中制备的本发明的抗B7-H3抗体与小鼠或猴B7-H3的交叉反应性。
为了确认跨物种反应性，购买并使用了C端连接有组氨酸标签(His标签)的重组小鼠B7-H3蛋白(Sino Biological,Cat#:50973-M08H)和C端连接有人IgG1的Fc区的重组猴B7-H3蛋白(Sino Biological,Cat#:90806-C02H)的抗原。
在将重组人B7-H3、小鼠B7-H3和猴B7-H3蛋白稀释为1μg/ml的浓度并将其以每孔100μl加入96孔板(Nunc-Immuno Plates，NUNC)后，使其在4℃下反应16小时并且包被。对于使用的重组蛋白，使用了购买用于在实施例2.1中分析的产品。
然后，在去除蛋白质并用PBST洗涤后，加入每孔200μl的包含1％BSA(牛血清白蛋白)的PBS缓冲液，并使其在37℃下反应2小时以阻断非特异性结合。然后，在96孔板上将实施例2.2中制备的抗B7-H3抗体以某浓度稀释至10μg/ml后，每孔加入100μl，并使其在37℃下反应1小时。然后，在用PBST洗涤后，为了检测与人B7-H3、小鼠B7-H3和猴B7-H3结合的抗体，将HRP连接的抗人IgG F(ab')2抗体(山羊抗人IgG F(ab')2交叉吸附二抗,HRP,Pierce,31414)在包含1％牛血清白蛋白(BSA)的PBS中1:10,000稀释，每孔加入100μl并使其在37℃下反应约1小时。再次用PBST洗涤后，加入100μl的TMB(四甲基联苯胺，Sigma，T0440)显色。在室温下反应5～10分钟后，加入50μl H2SO4以完成反应，并使用酶标仪(moleculardevice)测量450nm和650nm处的吸光度。
结果在图7和图8中描述。作为使用ELISA方法测量结合能力的结果，证实抗B7-H3抗体与人、猴和小鼠B7-H3特异性结合。显示本发明的抗B7-H3抗体与人和猴B7-H3的结合程度相似，但与小鼠B7-H3的结合程度相对低(图7)。观察到抗B7-H3抗体与小鼠B7-H3的结合程度在克隆之间存在差异，并且用作比较抗体的84D抗体不与小鼠B7-H3蛋白结合(图8)。
2.3.4.抗B7-H3抗体与细胞表面表达B7-H3抗原的结合能力的测量
然后，通过FACS分析，测量了实施例2.2中制备的本发明的抗B7-H3抗体与细胞表面上表达的人B7-H3结合的能力。
对于实验，使用了表达人B7-H3的癌细胞系MCF-7(人乳腺癌细胞系，
Figure BDA0003657430010000581
HTB-22TM)、DLD1(结直肠腺癌细胞系，
Figure BDA0003657430010000582
CCL-221TM)、HCC1954(TNM阶段IIA,3级,导管癌,
Figure BDA0003657430010000583
CRL-2338TM)和HCT116(结肠癌细胞，
Figure BDA0003657430010000591
CCL-247TM)以及不表达人B7-H3的癌细胞系Jurkat(急性T细胞白血病,
Figure BDA0003657430010000592
TIB-152TM)。
具体而言，将各细胞系解离并用PBS缓冲液洗涤后，对细胞数进行计数并调整为每孔2x105个细胞，并且通过加入200μl PBS进行制备。将实施例2.2的抗B7-H3抗体和对照组抗体(84D)中的每一种在包含1％BSA的PBS中稀释至10μg/ml或更高的某浓度后与预先制备的细胞在4℃下反应1小时。使用PBS缓冲液洗涤两次后，将FITC标记的抗人Fc FITC(山羊抗人IgG FITC缀合物，Fc特异性，Sigma，F9512，浓度：2.0mg/ml)以1:500稀释并以每孔100μl处理，并使其在4℃下反应1小时。阴性对照组仅用FITC标记的抗人Fc FITC处理。再次使用PBS缓冲液洗涤两次后，使用FACSCalibur装置测量抗B7-H3IgG的结合程度。
将每种B7-H3单克隆抗体处理的实验组中人B7-H3-单克隆抗体-FITC结合和阴性对照组结合的峰移结果进行比较。结果由用B7-H3单克隆抗体处理的实验组中的峰移值除以阴性对照组中的峰移值(平均荧光强度比)来表示，并在图9和图10中描述。作为使用FACS方法测量结合能力的结果，证实抗B7-H3抗体以浓度依赖性方式特异性与细胞表面上表达的人B7-H3结合。
2.3.5.抗B7-H3IgG抗体在各种癌症类型中与细胞表面表达B7-H3抗原的结合能力的测量
然后，通过FACS分析，确认了本发明的抗B7-H3抗体是否与各种癌细胞系中的细胞表面表达B7-H3结合。
使用多种癌细胞A2780(人卵巢癌,ECACC,93112519)、SKOV-3(人卵巢腺癌,
Figure BDA0003657430010000593
HTB-77TM)、OVCAR-3(人卵巢腺癌,
Figure BDA0003657430010000594
HTB-161TM)、HCT116(结肠癌细胞,ThermoFIshcer Sci)、HT29(结直肠腺癌,
Figure BDA0003657430010000595
HTB-38TM)、DLD-1(结直肠腺癌细胞系,
Figure BDA0003657430010000596
CCL-221TM)、Calu-6(非小细胞肺癌,
Figure BDA0003657430010000597
HTB-56TM)、HCC1954(TNM阶段IIA,3级,导管癌,
Figure BDA0003657430010000598
CRL-2338TM)、HCC1187(TNM阶段IIA,
Figure BDA0003657430010000599
CLC-2322TM)、肾癌细胞系786-0(肾细胞腺癌,
Figure BDA00036574300100005910
CRL-1932TM)、A498(肾癌,
Figure BDA00036574300100005911
HTB-44TM)、Panc-1(胰腺上皮样癌,
Figure BDA0003657430010000601
CRL-1469TM)、NCI-N87(胃癌,
Figure BDA0003657430010000602
CRL-5822TM)、HeLa(宫颈腺癌,
Figure BDA0003657430010000603
CCL-2TM)、JeKo-1(淋巴瘤,
Figure BDA0003657430010000604
CRL-3006TM)以及FACSCalibur(BD Biosciences)装置，如下测量抗B7-H3抗体与B7-H3的结合程度。
将各细胞系解离并用PBS缓冲液洗涤后，对细胞数进行计数并调整为2x105个细胞/200μl PBS，然后用10μg/ml的实施例2.2中制备的B7-H3单克隆抗体处理。允许在4℃下反应1小时。反应后的细胞在PBS中洗涤后，将FITC标记的恒定区(Fc)特异性抗体(山羊抗人IgG FITC缀合物，Fc特异性，Sigma，F9512，浓度：2.0mg/ml))1:500稀释并每孔加入100μl。并允许在4℃下反应1小时。反应后，将细胞在PBS中洗涤并使用FACSCalibur装置进行分析。阴性对照组仅用FITC标记的恒定区(Fc)特异性抗体处理。为了比较不同癌细胞系中B7-H3的表达程度，将用B7-H3单克隆抗体处理的实验组的峰移值除以阴性对照组的峰移值(MFI比，平均荧光强度比)。结果如下表19所示。
【表19】
Figure BDA0003657430010000605
Figure BDA0003657430010000611
(MFI比:抗B7-H3的MFI/二抗的MFI)
(N/D:未确定)
作为使用FACS方法测量结合能力的结果，确认了本发明的抗B7-H3抗体与源自卵巢癌、结直肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、肾癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌和淋巴瘤的各种癌细胞系结合。另外，确认了本发明的抗B7-H3抗体与相同浓度的作为比较组使用的抗体84D相比显示出更高的结合能力，因此与细胞表面上表达的B7-H3的结合程度优异。
2.3.6.抗B7-H3抗体与小鼠来源癌细胞的小鼠B7-H3抗原的结合能力的测量(FACS)
然后，通过FACS分析，测量了本发明的抗B7-H3抗体与细胞表面表达小鼠B7-H3的结合能力。在实施例2.3.3中通过ELISA方法确认了抗B7-H3抗体与人B7-H3和小鼠B7-H3重组蛋白二者结合。为了确认本发明的抗B7-H3抗体是否与小鼠癌细胞系的细胞表面上表达的小鼠B7-H3结合，使用了小鼠来源的癌细胞系CT26(小家鼠结肠癌,
Figure BDA0003657430010000612
CRL-2638TM)、B16F10(小家鼠皮肤黑色素瘤,
Figure BDA0003657430010000613
CRL-6475TM)、TC-1(小家鼠肺肿瘤,
Figure BDA0003657430010000614
CRL-2493TM)。
对于每个细胞系，将细胞解离并用PBS缓冲液洗涤。对细胞数进行计数并调整为每孔2x105个细胞。添加200μl PBS。在含1％BSA的PBS中以10μg/ml或更高的浓度制备细胞。将实施例2.2中制备的抗B7-H3抗体和比较抗体(84D)中的每一种与上述制备的细胞在4℃下反应1小时。
使用PBS缓冲液洗涤细胞后，每孔添加100μl以1:500稀释的FITC标记的抗人FcFITC(Sigma,F9512)，并允许在4℃下反应1小时。对于对照组，仅处理FITC标记的抗人FcFITC。再次使用PBS缓冲液洗涤两次后，使用FACSCalibur装置测量抗B7-H3IgG抗体的结合程度。
将用B7-H3单克隆抗体处理的实验组的峰移值与阴性对照组的峰移值进行比较。结果在图11中描述。使用FACS方法的测量结果，确认了本发明的抗B7-H3抗体与细胞表面上表达的小鼠B7-H3特异性结合。
2.4.抗B7-H3抗体对B7-H3的亲和力的测量
通过SPR法测量抗原B7-H3与抗B7-H3抗体的结合亲和力。首先，在60秒的接触时间、60秒的稳定期和30μl/min的流速下，在蛋白A芯片(GE healthcare,Cat.No.29127556)上以50RU捕获用1X HBS-EP缓冲液稀释的抗B7-H3抗体。使用1X HBS-EP缓冲液，将抗原B7-H3(R&D systems,2318-B3-050/CF)从100nM到3.125nM连续两倍稀释。此时，额外制备1XHBS-EP缓冲液作为空白。在捕获抗B7-H3抗体的芯片上制备的B7-H3抗原以30μl/min的流速流动，缔合时间为60秒，并且解离时间为180秒。使用10mM甘氨酸-HCl pH1.5(GEHealthcare，目录号BR100354)以30μl/min的流动时间和30秒的接触时间进行再生。结果在下表20中描述。
【表20】抗B7-H3抗体对B7-H3的亲和力的测量结果
Figure BDA0003657430010000621
2.5.小鼠同基因肿瘤移植模型中抗B7-H3抗体和抗PD-1抗体的共同给药的抗癌功效分析
为了在动物模型中确认抗体的免疫检查点抑制的功效，当抗体在人和小鼠之间具有跨物种反应性时，可以使用小鼠同基因肿瘤移植模型。
如实施例2.3.3和2.3.6所确认的，本发明的抗B7-H3抗体对小鼠B7-H3抗原具有跨物种反应性。通过如下在小鼠同基因肿瘤模型中与抗小鼠PD-1抗体RMP1-14(BioXCell，BE0146)联合治疗确认了本发明的抗B7-H3抗体对肿瘤增殖的抑制功效。
CT26是源自小鼠(BALB/c)的结肠癌和过表达小鼠B7-H3的细胞系。在实施例2.3.3-2.3.6中确认了实施例2中制备的抗B7-H3抗体与CT26小鼠癌细胞系表面上表达的小鼠B7-H3结合(图11)。
为详细说明实验方法，将CT26(BALB/c来源)细胞系解离并用PBS缓冲液洗涤后，对细胞数进行计数并调整为每孔5x105个细胞。将制备的细胞通过皮下注射给药到小鼠(BALB/c，6周龄，Samtako)中，并且当肿瘤大小为50～100mm3时，给药抗体，每次200μg，以三天的间隔给药5次，共1mg。使用卡尺通过测量肿瘤的最长直径(D1)和垂直于它的直径(D2)，得到体积(0.5*D1*D22)，来计算对照组、抗PD-1(RMP1-14)抗体单药治疗组以及抗PD-1抗体和抗B7-H3抗体联合治疗组各自的肿瘤大小(图15)。
当肿瘤大小大于2000mm3或在肿瘤观察期间出现溃疡时，处死相应小鼠。在完成抗体给药后的总共30天的观察期内测量存活率和肿瘤的大小。
结果示于图15。结果，与单独用抗PD-1(RMP1-14)抗体治疗的组相比，在抗PD-1和抗B7-H3抗体共同给药的组中确认了肿瘤增殖抑制作用和存活率提高。该结果意味着，当本发明的抗B7-H3抗体显示出免疫检查点抑制功效和抗PD-1抗体通过与另一种免疫抑制剂不同的机制激活免疫细胞时，抗癌治疗效果增强。如实施例2.3.3中可以确认的，本发明的抗B7-H3抗体对小鼠B7-H3的结合能力与人B7-H3相比相对较低。尽管对小鼠B7-H3具有低结合能力，但与抗PD-1抗体的单药给药相比，本发明的抗B7-H3抗体在与抗PD-1抗体在同基因肿瘤移植模型中共同给药时显示出明显的癌症生长抑制功效和存活率提高。与小鼠同基因肿瘤移植模型中的结果相比，本发明的抗B7-H3抗体通过与人B7-H3更强的结合预期在人中具有更强的免疫检查点抑制作用。
2.6.小鼠同基因肿瘤移植模型中抗B7-H3抗体和抗PD-1抗体的共同给药引起的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)变化的分析
肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)是指离开血流并向肿瘤移动的白细胞。肿瘤浸润淋巴细胞可包括T细胞和B细胞，并且包括单核和多形核免疫细胞，根据肿瘤的类型和阶段而变化，并与疾病预后有关。特别是，可以通过分析肿瘤浸润淋巴细胞来研究免疫抗癌抗体的机制。
为了分析抗B7-H3抗体(F6V)和抗PD-1抗体(RMP-14-1)共同给药(combi)的抗癌作用机制，分析了肿瘤浸润淋巴细胞。实验采用与实施例2.8相同的方法进行。在各抗体的3次给药完成后，从小鼠中分离肿瘤，以获得肿瘤浸润淋巴细胞。
收获的肿瘤浸润细胞用PMA 50ng/ml和离子霉素1μM再刺激，并分析免疫细胞的变化(图16)。在抗癌免疫反应中起主要作用的代表性免疫细胞是细胞毒性T细胞和调节性T细胞。作为实验的结果，在从本发明的抗B7-H3抗体和抗PD-1抗体共同给药的小鼠分离的肿瘤浸润淋巴细胞中，清楚地观察到细胞毒性T细胞的活化和调节性T细胞的增殖抑制。
在从本发明的抗B7-H3抗体和抗PD-1抗体共同给药的小鼠分离的肿瘤浸润淋巴细胞中，CD8+T细胞中的IFNγ+颗粒酶B+水平显著增加，并且观察到CD8+T细胞中颗粒酶B的释放增加。
在从本发明的抗B7-H3抗体和抗PD-1抗体共同给药的小鼠分离的肿瘤浸润淋巴细胞中，使用抗Foxp3抗体(eBioscience，FJK-16s)确认了调节性T细胞的频率和细胞数，并使用抗Ki67(BD，B56)抗体确认了调节性T细胞的增殖能力。
结果在图16中描述。作为实验的结果，确认了在抗B7-H3抗体和抗PD-1共同给药的组中，不仅调节性T细胞数量减少，而且显示调节性T细胞增殖能力的Ki67+频率也降低了。这样的结果意味着抗B7-H3抗体和抗PD-1抗体的共同给药同时诱导细胞毒性T细胞活性的增加和调节性T细胞的抑制，从而通过免疫激活显示出抗癌作用。
实施例3.抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体的制备
示例性选择实施例1制备的抗PD-L1B6和B12克隆以及实施例2制备的抗B7-H3克隆中的B5和C4I克隆，以制备全长IgG X scFv和(HC+LC)X scFab-Fc形式的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体(PD-L1xB7-H3双特异性抗体)。抗PD-L1B6和B12克隆包括κ型轻链。
3.1.IgG X scFv形式(2+2形式)双特异性抗体
为了制备2+2形式的双特异性抗体，当PD-L1或B7-H3置于全IgG部分中时，使用IgG1。
将具有编码PD-L1xB7-H3双特异性抗体的IgG抗体的重链的核苷酸序列的DNA片段1插入pcDNA 3.4(Invitrogen，A14697；质粒1)，并且将具有编码PD-L1xB7-H3双特异性抗体的IgG抗体的轻链的核苷酸序列的DNA片段2插入pcDNA 3.4(Invitrogen，A14697；质粒2)。然后，使用编码具有15个氨基酸长度的由(GGGGS)3组成的接头肽的DNA片段4，将编码scFv的DNA片段3融合在插入质粒1中的DNA片段1的对应于IgG抗体的Fc区的C端的部分，以构建用于表达双特异性抗体的载体。此外，为了稳定scFv，应用额外的修饰以产生二硫键，将VL100-VH44分别融合到可变轻链和可变重链。换言之，scFv的VL100和VH44处的氨基酸突变为半胱氨酸。
重链、轻链、scFv和DNA片段的序列总结在下表21至24中：(粗体表示CDR)
【表21】
Figure BDA0003657430010000651
Figure BDA0003657430010000661
【表22】
Figure BDA0003657430010000662
Figure BDA0003657430010000671
【表23】
Figure BDA0003657430010000672
Figure BDA0003657430010000681
【表24】
Figure BDA0003657430010000682
Figure BDA0003657430010000691
3.2.(HC+LC)X scFab-Fc形式(1+1形式)双特异性抗体
基于人IgG1同种型制备1+1形式的双特异性抗体。PD-L1xB7-H3双特异性抗体包括Fc区和两个结合臂。一个臂包括典型的轻链和重链。另一个臂包括单链Fab片段(scFab)，其中轻链的C端通过(GS)9(G4S)6(GS)8接头(64个氨基酸长度)连接到VH结构域的N端。scFab的C端连接到Fc结构域的N端，以形成scFab-Fc结构。因此，scFab-Fc结构包括重链和通过接头与重链N端连接的轻链。scFab-Fc结构的对应物是典型的重链(HC)+轻链(LC)结构(见图1b)。
通过应用旋钮入孔技术实现1+1形式双特异性抗体的两条重链的异二聚化。将旋钮突变(T366W)引入重链的CH3结构域，并将三个形成孔的突变(T366S、L368A和Y407V)引入scFab-Fc的CH3结构域。
将具有编码双特异性抗体的典型IgG重链的核苷酸序列的DNA片段1插入pcDNA3.4(Invitrogen，A14697；质粒1)，并且将具有编码双特异性抗体的典型IgG轻链的核苷酸序列的DNA片段2插入pcDNA 3.4(Invitrogen，A14697；质粒2)。将具有编码双特异性抗体的scFab-Fc结构的核苷酸序列的DNA片段3插入pcDNA3.4(Invitrogen，A14697；质粒3)。
重链、轻链、scFab-Fc和DNA片段的序列总结在下表25至29中：(粗体表示CDR)
【表25】
Figure BDA0003657430010000692
Figure BDA0003657430010000701
【表26】
Figure BDA0003657430010000711
Figure BDA0003657430010000721
【表27】
Figure BDA0003657430010000722
Figure BDA0003657430010000731
【表28】
Figure BDA0003657430010000732
Figure BDA0003657430010000741
【表29】
Figure BDA0003657430010000742
Figure BDA0003657430010000751
3.3.双特异性抗体的产生和分离
使用(ExpiFectamineTMCHO试剂盒,Thermo,A29129)将构建的载体在ExpiCHO-STM细胞(Thermo Fisher,A29127)中瞬时表达，在配备旋转振荡器的CO2培养箱中，在ExpiCHOTM表达培养基(Thermo,A29100-01)中在30至37℃的条件下培养7至15天。将质粒DNA(250μg)和ExpiFectamin CHO试剂(800μL)与
Figure BDA0003657430010000752
I培养基混合(最终体积为20mL)并在室温下静置5分钟。将混合溶液添加到在ExpiCHO表达培养基中培养的6x106ExpiCHO细胞中，并在空气中8％CO2的湿润气氛下在37℃的摇床培养箱中轻轻混合。在转染后18小时，将1.5mL ExpiFectamin CHO转染增强子1和60mL ExpiFectamin CHO转染进料添加到每个烧瓶中。
通过重组蛋白A亲和色谱(Hitrap Mabselect Sure,GE Healthcare,28-4082-55)和使用HiLoad 26/200Superdex200制备级柱(GE Healthcare,28-9893-36)的凝胶过滤色谱从细胞培养上清液中纯化每种BsAb。进行SDS-PAGE(NuPage 4-12％Bis-Tris凝胶,NP0321)和使用SE-HPLC柱(SWXL SE-HPLC柱，TOSOH，G3000SWXL)的尺寸排阻HPLC(Agilent，1200系列)分析以检测和确认每种BsAb的大小和纯度。使用Amicon Ultra 15 30K装置(Merck，UFC903096)通过超滤将纯化的蛋白质在PBS中浓缩，并使用nanodrop(Thermo，Nanodrop One)估计蛋白质浓度。在2+2形式双特异性抗体的情况下，当应用双载体系统时，轻链与重链的重量比可以为1:1至1:3。替代地，在1+1形式的双特异性抗体的情况下，应用三载体系统，轻链、重链和scFab-Fc之间的重量比可以为1:1:2至1:1:5。
制备的PD-L1xB7-H3双特异性抗体如下：
【表30】
Figure BDA0003657430010000761
【表31】
Figure BDA0003657430010000762
实施例4.双特异性抗体PD-L1xB7-H3的表征
4.1.用于形式比较的细胞结合测定(FACS)
为了评估抗原结合特性，通过FACS分析候选抗体与哺乳动物表达的B7-H3和PD-L1二者的结合。简而言之，将RKO细胞与双特异性抗体一起孵育。通过FACS缓冲液(PBS中的1％BSA)洗涤后，将FITC-抗人IgG抗体添加到每个孔中，并在4℃下孵育1小时。通过FACSCaliber评估FITC的MFI。结果在图17中描述。
如图17所示，测试的双特异性抗体显示出与细胞表面上表达的PD-L1和B7-H3的结合能力，并且可以有效地与RKO细胞上表达的PD-L1和B7-H3结合。此外，在B5xB6和C4IxB6克隆二者中，1+1形式的双特异性抗体显示出比2+2形式的双特异性抗体甚至更高的结合效力。
4.2.用于克隆比较的细胞结合测定(FACS)
为了评估抗原结合特性，与单特异性抗体相比，通过FACS分析了1+1形式双特异性抗体与哺乳动物表达的B7-H3和PD-L1二者的结合。简而言之，将RKO细胞(人结肠癌细胞系)与抗体一起孵育。通过FACS缓冲液(PBS中的1％BSA)洗涤后，将FITC-抗人IgG抗体添加到每个孔中，并在4℃下孵育1小时。通过FACS Caliber评估FITC的MFI。结果在图18中描述。
如图18所示，所有测试的1+1形式的双特异性抗体都显示出比单特异性抗体更好的结合亲和力。
4.3.用于形式比较的基于细胞的功能测定
为了评估IG4 TCR T细胞的体外肿瘤细胞杀伤效力，通过IG4TCR工程化T细胞测定法分析候选抗体。具体而言，生成了识别HLA-A*02限制性黑色素瘤抗原NY-ESO-1的IG4TCR的慢病毒载体。对于转导，在Lenti-Pac 293Ta细胞系(GeneCopoeia)中产生表达IG4TCR的慢病毒，并通过Dyna珠人T-激活因子CD3/CD28(Gibco)激活人T细胞。激活后72小时，通过表达IG4TCR的慢病毒转导人T细胞，并用hIL-2扩增7天。
将荧光素酶标记的A2-ESO+肿瘤细胞以每孔特定密度一式三份接种到平底96孔板中。24小时后，在样品存在的情况下，以指定的效应物:靶标(E:T)比共培养表达IG4TCR的人T细胞。将板在37℃和5％CO2下孵育48小时，并根据制造商的说明书通过One-Glo荧光素酶测定系统(Promega)测量相对荧光素酶活性。结果在图19中描述。
如图19所示，测试的双特异性抗体显示出比单特异性抗体更好的T细胞杀伤效力，并且1+1形式的双特异性抗体显示出甚至比2+2形式的双特异性抗体更好的T细胞杀伤效力。
4.4.用于克隆比较的基于细胞的功能测定
为了评估抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，分析了1+1形式的候选抗体。使用ADCC Reporter Bioassay(Promega,G7018)试剂盒确认抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体的ADCC能力。按照制造商的方案进行实验方法，并使用RKO细胞(B7-H3/PD-L1阳性细胞系)和KatoIII细胞(B7-H3/PD-L1阴性细胞系)进行测定。其结果在图20中描述。
如图20所示，在1+1形式双特异性抗体中，C41xB6双特异性抗体表现出比其他克隆最优异的ADCC活性，其次是B5xB6双特异性抗体。
4.5.用于表征C4IxB6和B5xB6的基于细胞的功能测定
使用ADCC Reporter Bioassay(Promega,G7018)试剂盒确认1+1形式的B7-H3xPD-L1双特异性抗体的ADCC能力。按照制造商的方案进行实验方法，并使用RKO细胞和KatoIII细胞进行测定。
4.6.用于表征C4IxB6和B5xB6的基于细胞的功能测定
为了评估IG4TCR T细胞的体外肿瘤细胞杀伤效力，通过IG4TCR工程化T细胞测定法分析1+1形式的C4IxB6和B5xB6双特异性抗体。具体而言，生成了识别HLA-A*02限制性黑色素瘤抗原NY-ESO-1的IG4TCR的慢病毒载体。对于转导，在Lenti-Pac 293Ta细胞系(GeneCopoeia)中产生表达IG4TCR的慢病毒，并通过Dyna珠人T-激活因子CD3/CD28(Gibco)激活人T细胞。激活后72小时，通过表达IG4TCR的慢病毒转导人T细胞，并用hIL-2扩增7天。
将荧光素酶标记的A2-ESO+肿瘤细胞(B7-H3/PD-L1阳性A375-PD-L1细胞系)以每孔特定密度一式三份接种到平底96孔板中。24小时后，在样品存在的情况下，以指定的效应物:靶标(E:T)比共培养表达IG4TCR的人T细胞。将板在37℃和5％CO2下孵育48小时，并根据制造商的说明书通过One-Glo荧光素酶测定系统(Promega)测量相对荧光素酶活性。结果在图21中描述。
如图21所示，C4IxB6双特异性抗体显示出比B5xB6双特异性抗体更好的肿瘤细胞杀伤效力。
4.7.用于表征C4IxB6和B5xB6的体内功效测试
为了评估1+1形式的双特异性抗体对肿瘤生长的抑制作用，使用RKO-PBMC人源化小鼠模型进行体内功效测试。具体而言，NSG小鼠(6-8周)购自Jackson实验室。将5x106个RKO细胞皮下接种到每只动物的右下胁腹。在分组当天，通过侧尾静脉静脉内递送1x107个人PBMC细胞(Stem express，USA)。用以下抗体对小鼠以Q3D进行腹腔给药6次：同种型对照(G1,10mg/kg)、抗PD-L1单特异性抗体(G2-B6,5mg/kg)、抗B7-H3单特异性抗体(G3-C4I,5mg/kg)、抗PD-L1(B6,5mg/kg)和抗B7-H3(C4I,5mg/kg)单特异性抗体的组合(G4)以及B7-H3xPD-L1双特异性抗体(G5-C4IxB6,10mg/kg)。结果在图22中描述。
如图22所示，C4IxB6双特异性抗体治疗组是其他治疗组中最有效的。双特异性抗体治疗导致的肿瘤生长抑制甚至优于每种单克隆抗体的组合。
实施例5.抗PD-L1/抗B7-H3/抗4-1BB三特异性抗体的制备
将实施例3中制备的C4IxB6双特异性抗体和C4IxB12双特异性抗体进一步修饰以产生(HC+LC)X scFab-Fc X scFv形式的抗PD-L1/抗B7-H3/抗4-1BB三特异性抗体。三特异性抗体包括结合4-1BB蛋白的scFv片段以及1+1形式的双特异性抗体，并且结合4-1BB蛋白的scFv片段(1A10克隆)通过接头连接至双特异性抗体的每个Fc结构域的C端。
将具有编码双特异性抗体的典型IgG重链的核苷酸序列的DNA片段1插入pcDNA3.4(Invitrogen，A14697；质粒1)，并且将具有编码双特异性抗体的典型IgG轻链的核苷酸序列的DNA片段2插入pcDNA 3.4(Invitrogen，A14697；质粒2)。将具有编码双特异性抗体的scFab-Fc结构的核苷酸序列的DNA片段3插入pcDNA3.4(Invitrogen，A14697；质粒3)。然后，使用编码具有15个氨基酸长度的由(GGGGS)3组成的接头肽的DNA片段5，将编码scFv的DNA片段4融合在插入质粒1和3中的DNA片段1和3的对应于IgG抗体的Fc区的C端的部分，以构建用于表达三特异性抗体的载体。此外，为了稳定scFv，应用额外的修饰以产生二硫键，将VL100-VH44分别融合到可变轻链和可变重链。换言之，scFv的VL100和VH44处的氨基酸突变为半胱氨酸。
三特异性抗体的制备、生产和分离按照实施例3所述的方法进行。
重链、轻链、scFab-Fc、scFv和DNA片段的序列总结在下表32和33中：
【表32】
Figure BDA0003657430010000801
Figure BDA0003657430010000811
Figure BDA0003657430010000821
【表33】
Figure BDA0003657430010000822
Figure BDA0003657430010000831
Figure BDA0003657430010000841
Figure BDA0003657430010000851
实施例6.三特异性抗体的体外活性
为了评估三特异性抗体促进4-1BB信号的能力，进行了基于细胞的4-1BB测定。在该测定中，GloResponseTM NFκB-luc2/4-1BB Jurkat细胞系(Promega,cat#CS196004)用作效应细胞，并且表达PD-L1和B7-H3的癌细胞系用作靶细胞。GloResponseTM NFκB-luc2/4-1BB Jurkat细胞系经过基因修饰，以在应答元件下游稳定表达4-1BB和荧光素酶。在抗体与4-1BB受体结合后诱导荧光素酶表达。实验方法按照制造商的方案进行。结果在图23中描述。
如图23所示，C4IxB6x1A10和C4IxB12x1A10三特异性抗体显示出优异的4-1BB信号激活。
本公开的范围不受所描述的具体实施方式的限制，所述具体实施方式旨在作为本公开的各个方面的单一说明，并且功能等效的任何组合物或方法都在本公开的范围内。对本领域技术人员显而易见的是，在不背离本公开的精神或范围的情况下，可以对本公开的方法和组合物进行各种修改和变化。因此，本公开旨在覆盖本公开的修改和变化，只要它们落入所附权利要求及其等同物的范围内。
本说明书中提及的所有出版物和专利申请都通过援引并入本文，其程度与每个单独的出版物或专利申请被具体地和单独地指示通过援引并入的程度相同。
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1 5 10 15
Gly
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<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR1
<400> 12
Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala Val Ala
1 5 10
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR1
<400> 13
Lys Ala Lys Gln Asp Val Thr Pro Ala Val Ala
1 5 10
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR1
<400> 14
Lys Ala Ser Gln Asp Val Trp Pro Ala Val Ala
1 5 10
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR2
<400> 15
Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR3
<400> 16
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR3
<400> 17
Met Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR3
<400> 18
Gln Gln His Ser Thr Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR3
<400> 19
Gln Gln His Ser Asp Ala Pro Leu Thr
1 5
<210> 20
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR1
<400> 20
Asp Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR1
<400> 21
Gly Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 22
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR1
<400> 22
Ser Tyr Ser Met Ser
1 5
<210> 23
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR1
<400> 23
Ser Tyr Gly Met Ser
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR2
<400> 24
Ser Ile Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 25
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR2
<400> 25
Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 26
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR2
<400> 26
Gly Ile Tyr Ser Asp Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 27
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR2
<400> 27
Gly Ile Ser Pro Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 28
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR2
<400> 28
Gly Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 29
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR2
<400> 29
Gly Ile Tyr Ser Asp Ala Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 30
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR3
<400> 30
Asn Leu Ile Pro Leu Asp Tyr
1 5
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR3
<400> 31
Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr
1 5
<210> 32
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR3
<400> 32
Met Leu His Arg Phe Asp Tyr
1 5
<210> 33
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR3
<400> 33
Asp Ala Trp Ile Ala Arg Leu Leu Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 34
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VH CDR3
<400> 34
Asn Arg Leu Arg Phe Asp Tyr
1 5
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR1
<400> 35
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ala Val Ser
1 5 10
<210> 36
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR1
<400> 36
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser
1 5 10
<210> 37
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR1
<400> 37
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ser Val Thr
1 5 10
<210> 38
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR1
<400> 38
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ala Val Thr
1 5 10
<210> 39
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR1
<400> 39
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ser Val Thr
1 5 10
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR2
<400> 40
Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser
1 5
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR2
<400> 41
Ala Asn Ser His Arg Pro Ser
1 5
<210> 42
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR2
<400> 42
Ala Asp Ser Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR2
<400> 43
Tyr Asn Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 44
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR2
<400> 44
Ser Asp Ser His Arg Pro Ser
1 5
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR2
<400> 45
Ala Asp Val Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 46
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR3
<400> 46
Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu Asn Ala Tyr Val
1 5 10
<210> 47
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR3
<400> 47
Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 48
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR3
<400> 48
Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Asn Ala Tyr Val
1 5 10
<210> 49
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR3
<400> 49
Gly Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 50
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的VL CDR3
<400> 50
Gly Thr Trp Asp Ala Ser Leu Asn Ala Tyr Val
1 5 10
<210> 51
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的重链可变区
<400> 51
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asn Leu Ile Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 52
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的重链可变区
<400> 52
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 53
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的重链可变区
<400> 53
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Tyr Ser Asp Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Met Leu His Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 54
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的重链可变区
<400> 54
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Pro Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ala Trp Ile Ala Arg Leu Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 55
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的重链可变区
<400> 55
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asn Arg Leu Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 56
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的重链可变区
<400> 56
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Tyr Ser Asp Ala Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Met Leu His Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 57
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的轻链可变区
<400> 57
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 58
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的轻链可变区
<400> 58
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 59
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的轻链可变区
<400> 59
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ser Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asp Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 60
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的轻链可变区
<400> 60
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ala Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 61
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的轻链可变区
<400> 61
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ser Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ala Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 62
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗B7-H3抗体的轻链可变区
<400> 62
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ser Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asp Val Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 63
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HL1210-3 VH
<400> 63
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Gly Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Phe Gly Lys Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 64
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HL1210-3 VL
<400> 64
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 65
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HL1210-3 VH
<400> 65
gaagtgaaac tggtggagtc tgggggagac ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatgaca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccggagaaga gtctggagtg ggtcgcaacc attagtgatg gtggtggtta catctactat 180
tcagacagtg tgaaggggcg atttaccatc tccagagaca atgccaagaa caacctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgag gtctgaggac acggccttgt atatttgtgc aagagaattt 300
ggtaagcgct atgctttgga ctactggggt caaggaacct cagtcaccgt ctcctca 357
<210> 66
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HL1210-3 VL
<400> 66
gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cggtaggaga cagggtcagc 60
atctcctgca aggccagtca ggatgtgact cctgctgtcg cctggtatca acagaagcca 120
ggacaatctc ctaaactact gatttactcc acatcctccc ggtacactgg agtccctgat 180
cgcttcactg gcagtggatc tgggacggat ttcactttca ccatcagcag tgtgcaggct 240
gaagacctgg cagtttatta ctgtcagcaa cattatacta ctccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa a 321
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<213> 人工序列
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35 40 45
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50 55 60
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35 40 45
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50 55 60
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100 105 110
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<220>
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Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
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1 5 10 15
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<213> 人工序列
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100 105 110
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<211> 119
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<213> 人工序列
<220>
<223> HU1210 VH.5d
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<213> 人工序列
<220>
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<211> 107
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 88
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VL.1a
<400> 89
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VK.2
<400> 90
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VK.2a
<400> 91
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 92
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VK.2c
<400> 93
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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<210> 94
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HL1210-VH
<400> 94
gaggtgaagc tggtggagag cggcggagat ctggtgaagc ctggcggcag cctgaagctg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gaggcagacc 120
cccgagaaga gcctggagtg ggtggccacc atcagcgatg gcggcggcta catctactac 180
agcgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa caacctgtac 240
ctgcagatga gcagcctgag gagcgaggac accgccctgt acatctgcgc cagggagttc 300
ggcaagaggt acgccctgga ctactgggga cagggcacca gcgtgaccgt gagcagc 357
<210> 95
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.1
<400> 95
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgaagc ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaag gcctggagtg ggtgagcacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 96
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.1a
<400> 96
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgaagc ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaag gcctggagtg ggtggccacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 97
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.1b
<400> 97
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgaagc ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaaa gcctggagtg ggtggccacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt acatctgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 98
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.2
<400> 98
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgaagc ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctggat cagacaggcc 120
cctggcaaag gcctggagtg ggtgagcacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 99
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.2a
<400> 99
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgaagc ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctggat cagacaggcc 120
cctggcaaag gcctggagtg ggtggccacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 100
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.2b
<400> 100
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgaagc ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaaa gcctggagtg ggtggccacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt acatctgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 101
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.3
<400> 101
gaggtgcagc tgctggagag cggaggagga ctggtgcaac ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaag gcctggagtg ggtgagcacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 102
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.3a
<400> 102
gaggtgcagc tgctggagag cggaggagga ctggtgcaac ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaaa gcctggagtg ggtggccacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt acatctgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 103
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.4
<400> 103
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgcaac ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaag gcctggagtg ggtgagcacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggatgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 104
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.4a
<400> 104
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgcaac ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaag gcctggagtg ggtggccacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggatgaggac accgccgtgt actactgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 105
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.4b
<400> 105
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgcaac ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaaa gcctggagtg ggtggccacc atctccgatg gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggatgaggac accgccgtgt acatctgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 106
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.4c
<400> 106
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgcaac ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaaa gcctggagtg ggtggccacc atctccgaag gcggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggatgaggac accgccgtgt acatctgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 107
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.4d (H12 VH)
<400> 107
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgcaac ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaaa gcctggagtg ggtggccacc atctccgatg cgggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggatgaggac accgccgtgt acatctgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 108
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.4e
<400> 108
gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgcaac ccggaggcag cctgagactg 60
agctgcgctg ccagcggctt caccttcagc agctacgaca tgagctgggt gagacaggcc 120
cctggcaaaa gcctggagtg ggtggccacc atctccgatg ttggcggcta catctattac 180
tccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag ggatgaggac accgccgtgt acatctgcgc cagggagttc 300
ggcaaaaggt acgccctgga ctactggggc cagggcacaa ccgtgaccgt gagcagc 357
<210> 109
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VH.5
<400> 109
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgcaac ctggaggctc cctgaggctg 60
tcctgtgccg cttccggctt caccttcagc tcctacgata tgagctgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg gcctggagtg ggtggccacc atctccgacg gaggcggcta catctactac 180
tccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac 240
ctgcagatga actctctcag ggctgaggac accgccgtgt attactgcgc cagggagttt 300
ggcaagaggt acgccctgga ttactggggc cagggcacac tggtgacagt gagctcc 357
<210> 110
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HU1210 VH.5a
<400> 110
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgcaac ctggaggctc cctgaggctg 60
tcctgtgccg cttccggctt caccttcagc tcctacgata tgagctgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg gcctggagtg ggtggccacc atctccgacg gaggcggcta catctactac 180
tccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac 240
ctgcagatga actctctcag ggctgaggac accgccgtgt atatctgcgc cagggagttt 300
ggcaagaggt acgccctgga ttactggggc cagggcacac tggtgacagt gagctcc 357
<210> 111
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HU1210 VH.5b
<400> 111
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgcaac ctggaggctc cctgaggctg 60
tcctgtgccg cttccggctt caccttcagc tcctacgata tgagctgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg gcctggagtg ggtggccacc atctccgacg gaggcggcta catctactac 180
tccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa caacctgtac 240
ctgcagatga actctctcag ggctgaggac accgccgtgt atatctgcgc cagggagttt 300
ggcaagaggt acgccctgga ttactggggc cagggcacac tggtgacagt gagctcc 357
<210> 112
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HU1210 VH.5C
<400> 112
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgcaac ctggaggctc cctgaggctg 60
tcctgtgccg cttccggctt caccttcagc tcctacgata tgagctgggt gaggcagacc 120
cctgagaaga gcctggagtg ggtggccacc atctccgacg gaggcggcta catctactac 180
tccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa caacctgtac 240
ctgcagatga actctctcag ggctgaggac accgccgtgt atatctgcgc cagggagttt 300
ggcaagaggt acgccctgga ttactggggc cagggcacac tggtgacagt gagctcc 357
<210> 113
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HU1210 VH.5d
<400> 113
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgcaac ctggaggctc cctgaggctg 60
tcctgtgccg cttccggctt caccttcagc tcctacgata tgagctgggt gaggcaggct 120
cctggaaagg gcctggagtg ggtggccacc atctccgacg gaggcggcta catctactac 180
tccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac 240
ctgcagatga actctctcag ggctgaggac accgccgtgt atatctgcgc cagggagttt 300
ggcaagaggt acgccctgga ttactggggc cagggcacaa ccgtgacagt gagctcc 357
<210> 114
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> HL1210-VK
<400> 114
gacatcgtga tgacccagag ccacaagttc atgagcacca gcgtgggcga tagggtgagc 60
atcagctgca aggccagcca ggatgtgacc cctgccgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggccagagcc ccaagctgct gatctacagc accagcagca ggtacaccgg cgtgcccgac 180
aggttcacag gaagcggcag cggcaccgac ttcaccttca ccatcagcag cgtgcaggcc 240
gaggacctgg ccgtgtacta ctgccagcag cactacacca cccctctgac cttcggcgcc 300
ggcaccaagc tggagctgaa g 321
<210> 115
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VK.1 (H12 VL)
<400> 115
gacatccaga tgacccagag ccctagcagc ctgagcgcta gcgtgggcga cagggtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggatgtgacc cctgccgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc accagcagca ggtacaccgg cgtgcccagc 180
aggtttagcg gaagcggcag cggcaccgac ttcaccttca ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacatcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cccctctgac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa g 321
<210> 116
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VK.1a
<400> 116
gacatccaga tgacccagag ccctagcagc ctgagcgcta gcgtgggcga cagggtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggatgtgacc cctgccgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaagtccc ccaagctgct gatctacagc accagcagca ggtacaccgg cgtgcccagc 180
aggtttagcg gaagcggcag cggcaccgac ttcaccttca ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacatcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cccctctgac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa g 321
<210> 117
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VK.2
<400> 117
gacattcaga tgacccagtc ccctagcagc ctgtccgctt ccgtgggcga cagggtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggacgtgaca cctgctgtgg cctggtatca acagaagcct 120
ggcaaggctc ctaagctcct gatctacagc acatcctccc ggtacaccgg agtgccctcc 180
aggtttagcg gcagcggctc cggcaccgat ttcaccctga ccatttcctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cacccctgac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgg 324
<210> 118
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VK.2a
<400> 118
gacattcaga tgacccagtc ccctagcagc ctgtccgctt ccgtgggcga cagggtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggacgtgaca cctgctgtgg cctggtatca acagaagcct 120
ggcaaggctc ctaagctcct gatctacagc acatcctccc ggtacaccgg agtgcccgac 180
aggtttaccg gcagcggctc cggcaccgat ttcaccctga ccatttcctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cacccctgac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgg 324
<210> 119
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VK.2b
<400> 119
gacattcaga tgacccagtc ccctagcagc ctgtccgctt ccgtgggcga cagggtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggacgtgaca cctgctgtgg cctggtatca acagaagcct 120
ggccagagcc ctaagctcct gatctacagc acatcctccc ggtacaccgg agtgcccgac 180
aggtttaccg gcagcggctc cggcaccgat ttcaccctga ccatttcctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cacccctgac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgg 324
<210> 120
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Hu1210 VK.2c
<400> 120
gacattcaga tgacccagtc ccctagcagc ctgtccgctt ccgtgggcga cagggtgacc 60
atcagctgca aggccagcca ggacgtgaca cctgctgtgg cctggtatca acagaagcct 120
ggccagagcc ctaagctcct gatctacagc acatcctccc ggtacaccgg agtgcccgac 180
aggtttaccg gcagcggctc cggcaccgat ttcaccctga ccatttcctc cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cacccctgac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgg 324
<210> 121
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> WT-VH
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Phe Gly Lys Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 122
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> WT-VK
<400> 122
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 123
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B3-VH
<400> 123
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Phe Gly Lys Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 124
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B3-VK
<400> 124
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Lys Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Met Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 125
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4-VH
<400> 125
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Phe Gly Lys Arg Tyr Ala Leu Asp Ser Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 126
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C4-VK
<400> 126
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Trp Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Ser Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 127
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B1-VH
<400> 127
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ile Phe Asn Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 128
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B1-VK
<400> 128
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 129
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B6-VH
<400> 129
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
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100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 130
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B6-VK
<400> 130
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 131
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C3-VH
<400> 131
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu His Phe Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 132
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C3-VK
<400> 132
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 133
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C6-VH
<400> 133
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Tyr Phe Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 134
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C6-VK
<400> 134
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 135
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-VH
<400> 135
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Leu His Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 136
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-VK
<400> 136
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 137
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-VH
<400> 137
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 138
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-VK
<400> 138
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 139
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> A3-VH
<400> 139
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Phe Gly Lys Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 140
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> A3-VK
<400> 140
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Ser Asp Ala Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 141
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> H12-VH
<400> 141
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Phe Gly Lys Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 142
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B6-VH
<400> 142
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 143
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> H12-VL
<400> 143
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 144
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B6-VL
<400> 144
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 145
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链（全长）编码基因
<400> 145
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc gactacgcta tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtcctcc atctcttccg gctccggctc tatctactac 180
gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagaatctg 300
atccctctgg actattgggg ccagggcaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 360
ggaccctctg tgttccctct ggctccttcc agcaagtcta cctctggtgg aaccgctgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ttactttcct gagcctgtga ccgtgtcttg gaactccggt 480
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctctgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgaccgt gccttctagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtccacc atgtcctgct ccagaactgc tcggcggtcc ctccgttttc 720
ctgtttccac ctaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctacaga 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgaaaaga ccatctccaa ggctaagggc 1020
cagcctcggg aacctcaagt gtacaccttg ccaccttcca gagaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgacctgcct cgtgaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtctaacg gccagccaga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgaca gtggacaagt ctcggtggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gttctgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggcaaa 1338
<210> 146
<211> 1337
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链（全长）编码基因
<400> 146
gaagtccaac tcctggagtc cggtggtggt ctcgttcaac ccggaggtag tctccgtctg 60
agttgtgcag cttctggttt caccttttca ggttactata tgtcctgggt acgccaggca 120
cctggaaaag gcttggaatg ggtctccctt attagtccaa gcagtggtag tatttactac 180
gctgactctg taaaaggtcg tttcactatt tcaagagaca acagcaagaa cacactttac 240
ttgcaaatga atagcctgag ggccgaagac accgccgtct attactgtgc caaaggcttg 300
acaaaatttg attactgggg acaaggtaca ttggtgactg ttagctcagc ctccaccaag 360
ggcccctccg tgttccccct ggccccctcc tccaagtcca cctccggcgg caccgccgcc 420
ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gagcccgtga ccgtgtcctg gaactccggc 480
gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc 540
ctgtcctccg tcgtgaccgt gccctcctcc tccctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgccctcc ctgccccgcc cccgagctgc tgggcggccc ctccgtgttc 720
ctgttccctc ctaagcccaa ggacaccctg atgatctccc ggacccccga ggtgacttgc 780
tggtggtgga cgtgtcccac gaggaccccg aggtgaagtt caactggtac gtggacggcg 840
tggaggtgca caacgccaag accaagcccc gggaggagca gtacaactcc acctaccggg 900
tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag tacaagtgca 960
aggtgtccaa caaggccctg cccgccccca tcgagaagac catctccaag gccaagggcc 1020
agccccggga gccccaggtg tacaccctgc ccccctcccg ggaggagatg accaagaacc 1080
aggtgtccct gacctgcctg gtgaagggct tctacccctc cgacatcgcc gtggagtggg 1140
agtccaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccccgtgctg gactccgacg 1200
gctccttctt cctgtactcc aagctgaccg tggacaagtc ccggtggcag cagggcaacg 1260
tgttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag aagtccctgt 1320
ccctgtcccc cggcaag 1337
<210> 147
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链（全长）编码基因
<400> 147
gaggtccagc tcctggagag cggaggagga ttggttcaac ccggaggatc actccgtttg 60
agttgcgcag ccagtggatt cactttttct agttattcaa tgtcctgggt tcgtcaggcc 120
cccggcaagg gattggagtg ggtcagcggg atatatagcg atggatcaaa tacctattat 180
gctgatagcg tgaaagggcg atttactata tcacgggaca attccaagaa tacattgtac 240
cttcagatga actcccttag ggccgaagac actgccgtgt actattgtgc aaagatgctt 300
catcgttttg attattgggg gcaaggaact ctggtgactg tctcaagcgc ctccaccaag 360
ggcccctccg tgttccccct ggccccctcc tccaagtcca cctccggcgg caccgccgcc 420
ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gagcccgtga ccgtgtcctg gaactccggc 480
gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc 540
ctgtcctccg tcgtgaccgt gccctcctcc tccctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgccctcc ctgccccgcc cccgagctgc tgggcggccc ctccgtgttc 720
ctgttccctc ctaagcccaa ggacaccctg atgatctccc ggacccccga ggtgacttgc 780
gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccc gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc cgggaggagc agtacaactc cacctaccgg 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcccgccccc atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc 1020
cagccccggg agccccaggt gtacaccctg cccccctccc gggaggagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccct ccgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagtccaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tccctgtccc ccggcaag 1338
<210> 148
<211> 1353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链（全长）编码基因
<400> 148
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc gactacgcta tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gattggagtg ggtgtccgga atttcccctg gcggctctaa cacctactac 180
gccgattccg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc caaggatgcc 300
tggatcgcca gactgctgct gttcgattat tggggccagg gcacactggt caccgtgtcc 360
tctgcttcta ccaagggacc ctctgtgttc cctctggctc cttccagcaa gtctacctct 420
ggtggaaccg ctgctctggg ctgcctggtc aaggattact ttcctgagcc tgtgaccgtg 480
tcttggaact ccggtgctct gacatctggc gtgcacacct ttccagctgt gctgcagtcc 540
tctggcctgt actctctgtc ctctgtcgtg accgtgcctt ctagctctct gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa ccacaagcct tccaacacca aggtggacaa gaaggtggaa 660
cccaagtcct gcgacaagac ccacacctgt cctccatgtc ctgctccaga actgctcggc 720
ggtccctccg ttttcctgtt tccacctaag cctaaggaca ccctgatgat ctctcggacc 780
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tctcacgagg atcccgaagt gaagttcaat 840
tggtacgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagtac 900
aactccacct acagagtggt gtccgtgctg accgtgctgc accaggattg gctgaacggc 960
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag gccctgcctg ctcctatcga aaagaccatc 1020
tccaaggcta agggccagcc tcgggaacct caggtgtaca ccctgcctcc atctcgggaa 1080
gagatgacca agaaccaggt gtccctgacc tgcctcgtga agggattcta cccttccgat 1140
atcgccgtgg aatgggagtc caatggccag cctgagaaca actacaagac aacccctcct 1200
gtgctggact ccgacggctc attcttcctg tactccaagc tgacagtgga caagtctcgg 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt ctcctgttct gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1320
acccagaagt ccctgtctct gtcccctggc aaa 1353
<210> 149
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链（全长）编码基因
<400> 149
gaggttcagc tccttgaatc aggggggggt cttgtccagc ccggaggttc ccttcgcttg 60
agctgtgcag catcagggtt taccttcagt tcttatggga tgtcttgggt acgtcaggca 120
cctggcaaag gtctcgaatg ggtcagtggt atatattctg gcggaagcag taagtactac 180
gccgatagcg taaaaggtcg tttcaccatc tctagggaca attccaagaa taccttgtac 240
ttgcagatga acagtctccg agctgaagat acagctgtct actattgtgc taaaaacagg 300
cttcgattcg attattgggg ccagggtact cttgttactg tcagtagtgc ctccaccaag 360
ggcccctccg tgttccccct ggccccctcc tccaagtcca cctccggcgg caccgccgcc 420
ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gagcccgtga ccgtgtcctg gaactccggc 480
gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc 540
ctgtcctccg tcgtgaccgt gccctcctcc tccctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgccctcc ctgccccgcc cccgagctgc tgggcggccc ctccgtgttc 720
ctgttccctc ctaagcccaa ggacaccctg atgatctccc ggacccccga ggtgacttgc 780
gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccc gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc cgggaggagc agtacaactc cacctaccgg 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcccgccccc atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc 1020
cagccccggg agccccaggt gtacaccctg cccccctccc gggaggagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccct ccgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagtccaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tccctgtccc ccggcaag 1338
<210> 150
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链编码基因
<400> 150
gaggtccagc tcctggagag cggaggagga ttggttcaac ccggaggatc actccgtttg 60
agttgcgcag ccagtggatt cactttttct agttattcaa tgtcctgggt tcgtcaggcc 120
cccggcaagg gattggagtg ggtcagcggg atatatagcg atgcttcaaa tacctattat 180
gctgatagcg tgaaagggcg atttactata tcacgggaca attccaagaa tacattgtac 240
cttcagatga actcccttag ggccgaagac actgccgtgt actattgtgc aaagatgctt 300
catcgttttg attattgggg gcaaggaact ctggtgactg tctcaagcgc ctccaccaag 360
ggcccctccg tgttccccct ggccccctcc tccaagtcca cctccggcgg caccgccgcc 420
ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gagcccgtga ccgtgtcctg gaactccggc 480
gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc 540
ctgtcctccg tcgtgaccgt gccctcctcc tccctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgccctcc ctgccccgcc cccgagctgc tgggcggccc ctccgtgttc 720
ctgttccctc ctaagcccaa ggacaccctg atgatctccc ggacccccga ggtgacttgc 780
gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccc gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc cgggaggagc agtacaactc cacctaccgg 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcccgccccc atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc 1020
cagccccggg agccccaggt gtacaccctg cccccctccc gggaggagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccct ccgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagtccaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tccctgtccc ccggcaag 1338
<210> 151
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链（全长）编码基因
<400> 151
cagtctgttc tgactcagcc tccttctgct tctggcaccc ctggccagag agtgaccatc 60
tcttgttccg gctcctcctc caacatcggc tctaacgccg tgtcctggta tcagcagttg 120
cctggcacag cccctaagct gctgatctac tacaactctc acagaccctc cggcgtgccc 180
gacagattct ctggctctaa gtctggcacc tccgccagcc tggctatctc tggactgaga 240
tctgaggacg aggccgacta ctactgcggc tcttgggatg cctctctgaa cgcttatgtg 300
ttcggcggag gcaccaagct gacagtgttg ggacaaccta aggccgctcc tagcgtgacc 360
ctgtttcctc catcttctga ggaactgcag gccaacaagg ctaccctcgt gtgcctgatc 420
tctgactttt accctggcgc tgtgaccgtg gcctggaagg ctgatagttc tcctgtgaag 480
gccggcgtgg aaaccaccac accttccaag cagtccaaca acaaatacgc cgcctcctcc 540
tacctgtctc tgacccctga acagtggaag tcccaccggt cctactcttg ccaagtgacc 600
catgagggct ccaccgtgga aaagacagtg gcccctgctg agtgctct 648
<210> 152
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链（全长）编码基因
<400> 152
cagtctgtgc ttacccaacc tcctagtgca agtggtaccc ctggacaacg agtaacaatc 60
agttgcactg gtagttcaag taatatagga tctaacgacg taagttggta tcagcaactt 120
cctggtacag cacctaagtt gctcatttac gcaaactccc atagaccctc tggcgtccct 180
gatcgtttca gcggtagtaa atccggtaca tcagcttcct tggctatatc tggtctcaga 240
tccgaggacg aagctgacta ttactgtggg agttgggatg actctttgtc cggctacgtt 300
tttggaggag gcaccaagtt gacagtgctg ggtcagccca aggccgcccc ctccgtgacc 360
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
tccgacttct accccggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgactcctc ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac cccctccaag cagtccaaca acaagtacgc cgcctcctcc 540
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctactcctg ccaggtgacc 600
cacgagggct ccaccgtgga gaagaccgtg gcccccgccg agtgctcc 648
<210> 153
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链（全长）编码基因
<400> 153
caatctgtgc tgacccaacc acccagtgct tcaggcacac ccggacagag ggtgactata 60
agttgcagcg ggtcaagttc aaatatcgga agcaattccg tgacctggta ccaacagctc 120
cccggtactg caccaaagct ccttatctat gctgattctc agcggcctag tggagtgcct 180
gatcggttca gcggttcaaa gtccggtacc tccgcttctt tggcaataag tggattgcgc 240
tccgaggatg aggcagatta ttattgcggg acatgggata gcagtcttaa tgcctacgta 300
ttcggcggtg gtaccaaact tacagttctc ggccagccca aggccgcccc ctccgtgacc 360
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
tccgacttct accccggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgactcctc ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac cccctccaag cagtccaaca acaagtacgc cgcctcctcc 540
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctactcctg ccaggtgacc 600
cacgagggct ccaccgtgga gaagaccgtg gcccccgccg agtgctcc 648
<210> 154
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链（全长）编码基因
<400> 154
cagtctgttc tgactcagcc tccttctgct tctggcaccc ctggccagag agtgaccatc 60
tcttgttccg gctcctcctc caacatcggc tctaacgctg tgacctggta tcagcagctg 120
cctggcacag cccctaaact gctgatctac tacaacaaca agcggccctc tggcgtgccc 180
gacagattct ctggatctaa gtccggcacc tctgccagcc tggctatctc tggactgaga 240
tctgaggacg aggccgacta ctactgcggc acctgggatg attctctgtc cggctatgtg 300
ttcggcggag gcacaaaact gacagtgctg ggacagccta aggccgctcc ttctgtgacc 360
ctgtttcctc catcctctga ggaactgcag gccaacaagg ctaccctcgt gtgcctgatc 420
tctgactttt atcctggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ctgatagttc tcctgtgaag 480
gccggcgtgg aaaccaccac accttccaag cagtccaaca acaaatacgc cgcctcctcc 540
tacctgtctc tgacccctga acagtggaag tcccaccggt cctactcttg ccaagtgacc 600
catgagggct ccaccgtgga aaagacagtg gcccctgctg agtgctct 648
<210> 155
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链（全长）编码基因
<400> 155
caaagcgttt tgactcagcc tccttcagct tctggaactc caggacaacg tgtcaccatc 60
agttgcaccg gctcttcctc caacatcgga agtaacagcg ttacctggta tcagcagctc 120
ccaggcactg ccccaaagct cttgatatac tcagactccc atcgaccatc cggagttcct 180
gacagattca gcggttcaaa atctggtact tctgcatcac ttgccatttc cggtctccga 240
tcagaagacg aagctgacta ttattgtgga acctgggatg cctcccttaa cgcttacgtt 300
ttcggaggtg gcaccaagct cacagttctc ggacagccca aggccgcccc ctccgtgacc 360
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
tccgacttct accccggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgactcctc ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac cccctccaag cagtccaaca acaagtacgc cgcctcctcc 540
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctactcctg ccaggtgacc 600
cacgagggct ccaccgtgga gaagaccgtg gcccccgccg agtgctcc 648
<210> 156
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链编码基因
<400> 156
caatctgtgc tgacccaacc acccagtgct tcaggcacac ccggacagag ggtgactata 60
agttgcagcg ggtcaagttc aaatatcgga agcaattccg tgacctggta ccaacagctc 120
cccggtactg caccaaagct ccttatctat gctgatgtgc agcggcctag tggagtgcct 180
gatcggttca gcggttcaaa gtccggtacc tccgcttctt tggcaataag tggattgcgc 240
tccgaggatg aggcagatta ttattgcggg acatgggata gcagtcttaa tgcctacgta 300
ttcggcggtg gtaccaaact tacagttctc ggccagccca aggccgcccc ctccgtgacc 360
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
tccgacttct accccggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgactcctc ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac cccctccaag cagtccaaca acaagtacgc cgcctcctcc 540
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctactcctg ccaggtgacc 600
cacgagggct ccaccgtgga gaagaccgtg gcccccgccg agtgctcc 648
<210> 157
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链恒定区
<400> 157
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 158
<211> 1001
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链恒定区编码基因
<400> 158
gcctccacca agggcccctc cgtgttcccc ctggccccct cctccaagtc cacctccggc 60
ggcaccgccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 120
tggaactccg gcgccctgac ctccggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagtcctcc 180
ggcctgtact ccctgtcctc cgtcgtgacc gtgccctcct cctccctggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaacca caagccctcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagccc 300
aagtcctgcg acaagaccca cacctgccct ccctgccccg cccccgagct gctgggcggc 360
ccctccgtgt tcctgttccc tcctaagccc aaggacaccc tgatgatctc ccggaccccc 420
gaggtgactt gcgtggtggt ggacgtgtcc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 540
tccacctacc gggtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtgtc caacaaggcc ctgcccgccc ccatcgagaa gaccatctcc 660
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgcccccctc ccgggaggag 720
atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc ctggtgaagg gcttctaccc ctccgacatc 780
gccgtggagt gggagtccaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtcccggtgg 900
cagcagggca acgtgttctc ctgctccgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 960
cagaagtccc tgtccctgtc ccccggcaag tgagcggccg c 1001
<210> 159
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链恒定区编码基因
<400> 159
gcttctacca agggaccctc tgtgttccct ctggctcctt ccagcaagtc tacctctggt 60
ggaaccgctg ctctgggctg cctggtcaag gattactttc ctgagcctgt gaccgtgtct 120
tggaactccg gtgctctgac atctggcgtg cacacctttc cagctgtgct gcagtcctct 180
ggcctgtact ctctgtcctc tgtcgtgacc gtgccttcta gctctctggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaacca caagccttcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggaaccc 300
aagtcctgcg acaagaccca cacctgtcca ccatgtcctg ctccagaact gctcggcggt 360
ccctccgttt tcctgtttcc acctaagcct aaggacaccc tgatgatctc tcggacccct 420
gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtct cacgaggatc ccgaagtgaa gttcaattgg 480
tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ctagagagga acagtacaac 540
tccacctaca gagtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa 600
gagtacaagt gcaaggtgtc caacaaggcc ctgcctgctc ctatcgaaaa gaccatctcc 660
aaggctaagg gccagcctcg ggaacctcaa gtgtacacct tgccaccttc cagagaagag 720
atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc ctcgtgaagg gcttctaccc ttccgatatc 780
gccgtggaat gggagtctaa cggccagcca gagaacaact acaagacaac ccctcctgtg 840
ctggactccg acggctcatt cttcctgtac tccaagctga cagtggacaa gtctcggtgg 900
cagcagggca acgtgttctc ctgttctgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 960
cagaagtccc tgtctctgtc ccctggcaaa 990
<210> 160
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链恒定区编码基因
<400> 160
gcttctacca agggaccctc tgtgttccct ctggctcctt ccagcaagtc tacctctggt 60
ggaaccgctg ctctgggctg cctggtcaag gattactttc ctgagcctgt gaccgtgtct 120
tggaactccg gtgctctgac atctggcgtg cacacctttc cagctgtgct gcagtcctct 180
ggcctgtact ctctgtcctc tgtcgtgacc gtgccttcta gctctctggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaacca caagccttcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggaaccc 300
aagtcctgcg acaagaccca cacctgtcct ccatgtcctg ctccagaact gctcggcggt 360
ccctccgttt tcctgtttcc acctaagcct aaggacaccc tgatgatctc tcggacccct 420
gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtct cacgaggatc ccgaagtgaa gttcaattgg 480
tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ctagagagga acagtacaac 540
tccacctaca gagtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa 600
gagtacaagt gcaaggtgtc caacaaggcc ctgcctgctc ctatcgaaaa gaccatctcc 660
aaggctaagg gccagcctcg ggaacctcag gtgtacaccc tgcctccatc tcgggaagag 720
atgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc ctcgtgaagg gattctaccc ttccgatatc 780
gccgtggaat gggagtccaa tggccagcct gagaacaact acaagacaac ccctcctgtg 840
ctggactccg acggctcatt cttcctgtac tccaagctga cagtggacaa gtctcggtgg 900
cagcagggca acgtgttctc ctgttctgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 960
cagaagtccc tgtctctgtc ccctggcaaa 990
<210> 161
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链恒定区
<400> 161
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
20 25 30
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
35 40 45
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
50 55 60
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
65 70 75 80
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
85 90 95
Lys Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
100 105
<210> 162
<211> 315
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链恒定区编码基因
<400> 162
cagcccaagg ccgccccctc cgtgaccctg ttccccccct cctccgagga gctgcaggcc 60
aacaaggcca ccctggtgtg cctgatctcc gacttctacc ccggcgccgt gaccgtggcc 120
tggaaggccg actcctcccc cgtgaaggcc ggcgtggaga ccaccacccc ctccaagcag 180
tccaacaaca agtacgccgc ctcctcctac ctgtccctga cccccgagca gtggaagtcc 240
caccggtcct actcctgcca ggtgacccac gagggctcca ccgtggagaa gaccgtggcc 300
cccgccgagt gctcc 315
<210> 163
<211> 315
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链恒定区编码基因
<400> 163
caacctaagg ccgctcctag cgtgaccctg tttcctccat cttctgagga actgcaggcc 60
aacaaggcta ccctcgtgtg cctgatctct gacttttacc ctggcgctgt gaccgtggcc 120
tggaaggctg atagttctcc tgtgaaggcc ggcgtggaaa ccaccacacc ttccaagcag 180
tccaacaaca aatacgccgc ctcctcctac ctgtctctga cccctgaaca gtggaagtcc 240
caccggtcct actcttgcca agtgacccat gagggctcca ccgtggaaaa gacagtggcc 300
cctgctgagt gctct 315
<210> 164
<211> 315
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链恒定区编码基因
<400> 164
cagcctaagg ccgctccttc tgtgaccctg tttcctccat cctctgagga actgcaggcc 60
aacaaggcta ccctcgtgtg cctgatctct gacttttatc ctggcgccgt gaccgtggcc 120
tggaaggctg atagttctcc tgtgaaggcc ggcgtggaaa ccaccacacc ttccaagcag 180
tccaacaaca aatacgccgc ctcctcctac ctgtctctga cccctgaaca gtggaagtcc 240
caccggtcct actcttgcca agtgacccat gagggctcca ccgtggaaaa gacagtggcc 300
cctgctgagt gctct 315
<210> 165
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.01中的重组分中B5的重链
<400> 165
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asn Leu Ile Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 166
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.01中的重组分的连接子
<400> 166
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 167
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.01中的B6的scFv的VL
<400> 167
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 168
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.01中的B6的scFv的连接子
<400> 168
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 169
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.01中的B6的scFv的VH
<400> 169
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 170
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.01中的轻组分
<400> 170
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 171
<211> 2124
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.01中的重组分
<400> 171
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc gactacgcta tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtcctcc atctcttccg gctccggctc tatctactac 180
gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagaatctg 300
atccctctgg actattgggg ccagggcaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 360
ggaccctctg tgttccctct ggctccttcc agcaagtcta cctctggtgg aaccgctgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ttactttcct gagcctgtga ccgtgtcttg gaactccggt 480
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctctgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgaccgt gccttctagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtccacc atgtcctgct ccagaactgc tcggcggtcc ctccgttttc 720
ctgtttccac ctaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctaccgg 900
gtggtgtccg tgctgaccgt tctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgaaaaga ccatctctaa ggccaagggc 1020
cagccccggg aacctcaagt gtacaccttg cctcccagcc gggaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgacctgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtctaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggct ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggaaaagg cggcggagga tctggcggag gtggaagcgg aggcggtgga 1380
tctgacatcc agatgaccca gtctccatcc agcctgtctg cttccgtggg cgacagagtg 1440
accatcacat gcaaggccag ccaggatgtg acccctgccg ttgcctggta tcaacagaag 1500
cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tccacctcca gcagatacac aggcgtgccc 1560
tccagattct ccggctctgg ctctggcacc gactttacct ttacaatttc cagcctgcag 1620
cctgaggaca ttgccaccta ctactgccag cagcactaca ccacacctct gacctttggc 1680
tgcggcacca agctggaaat caagagaggt ggcggaggta gcggtggtgg tggtagtggc 1740
ggaggcggct ctggtggtgg cggatctgaa gtgcagttgg tggaatctgg cggcggattg 1800
gttcagccag gcggatctct gagactgtct tgtgccgcca gcggcttcac cttctcctct 1860
tacgacatgt cctgggtccg acaggcccca ggcaaatgtc tggaatgggt cgccaccatc 1920
tctgatgctg gcggctacat ctattaccgg gactccgtga agggcagatt caccatcagc 1980
cgggacaatg ccaagaactc cctgtacctg cagatgaact ctctgcgcga cgaggacacc 2040
gctgtgtaca tctgtgctag agagctgcct tggagatacg ccctggacta ctggggacag 2100
ggaactaccg tgactgtgtc ctcc 2124
<210> 172
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.01中的轻组分
<400> 172
cagtctgttc tgactcagcc tccttctgct tctggcaccc ctggccagag agtgaccatc 60
tcttgttccg gctcctcctc caacatcggc tctaacgccg tgtcctggta tcagcagttg 120
cctggcacag cccctaagct gctgatctac tacaactctc acagaccctc cggcgtgccc 180
gacagattct ctggctctaa gtctggcacc tccgccagcc tggctatctc tggactgaga 240
tctgaggacg aggccgacta ctactgcggc tcttgggatg cctctctgaa cgcttatgtg 300
ttcggcggag gcaccaagct gacagtgttg ggacaaccta aggccgctcc tagcgtgacc 360
ctgtttcctc catcttctga ggaactgcag gccaacaagg ctaccctcgt gtgcctgatc 420
tctgactttt accctggcgc tgtgaccgtg gcctggaagg ctgatagttc tcctgtgaag 480
gccggcgtgg aaaccaccac accttccaag cagtccaaca acaaatacgc cgcctcctcc 540
tacctgtctc tgacccctga acagtggaag tcccaccggt cctactcttg ccaagtgacc 600
catgagggct ccaccgtgga aaagacagtg gcccctgctg agtgctct 648
<210> 173
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.02中的重组分中C41的重链
<400> 173
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 174
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.02中的重组分的连接子
<400> 174
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 175
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.02中的B6的scFv的VL
<400> 175
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 176
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.02中的B6的scFv的连接子
<400> 176
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 177
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.02中的B6的scFv的VH
<400> 177
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 178
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.02中的轻组分
<400> 178
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 179
<211> 2124
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.02中的重组分
<400> 179
gaagttcagc tgctggaatc tggcggcgga ttggttcaac ctggcggctc tctgagactg 60
tcttgtgccg cttctggctt caccttctcc ggctactaca tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtccctg atctcccctt cctccggctc tatctactac 180
gccgactccg tgaagggcag attcaccatc tctcgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc taagggcctg 300
accaagttcg actactgggg ccagggaacc ctggtcacag tttcctctgc tagcaccaag 360
ggcccctctg tgttccctct ggccccttcc tctaaatcca cctctggcgg aaccgctgct 420
ctgggctgtc tggtcaagga ctacttccct gagcccgtga ccgtgtcttg gaattctggc 480
gctctgacca gcggagtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctccgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgacagt gccttccagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtcctcc atgtcctgct ccagaactgc tgggcggacc ctccgtgttc 720
ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatctccc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtccca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctaccgg 900
gtggtgtccg tgctgaccgt tctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgcccct atcgaaaaga ccatctctaa ggccaagggc 1020
cagccccggg aacctcaagt gtacaccttg cctcccagcc gggaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgacctgcct ggttaagggc ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtctaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggct ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggaaaagg cggcggagga tctggcggag gtggaagcgg aggcggtgga 1380
tctgacatcc agatgaccca gtctccatcc agcctgtctg cttccgtggg cgacagagtg 1440
accatcacat gcaaggccag ccaggatgtg acccctgccg ttgcctggta tcaacagaag 1500
cctggcaagg cccctaagct gctgatctac tccacctcca gcagatacac aggcgtgccc 1560
tccagattct ccggctctgg ctctggcacc gactttacct ttacaatttc cagcctgcag 1620
cctgaggaca ttgccaccta ctactgccag cagcactaca ccacacctct gacctttggc 1680
tgcggcacca agctggaaat caagagaggt ggcggaggta gcggtggtgg tggtagtggc 1740
ggaggcggct ctggtggtgg cggatctgaa gtgcagttgg tggaatctgg cggcggattg 1800
gttcagccag gcggatctct gagactgtct tgtgccgcca gcggcttcac cttctcctct 1860
tacgacatgt cctgggtccg acaggcccca ggcaaatgtc tggaatgggt cgccaccatc 1920
tctgatgctg gcggctacat ctattaccgg gactccgtga agggcagatt caccatcagc 1980
cgggacaatg ccaagaactc cctgtacctg cagatgaact ctctgcgcga cgaggacacc 2040
gctgtgtaca tctgtgctag agagctgcct tggagatacg ccctggacta ctggggacag 2100
ggaactaccg tgactgtgtc ctcc 2124
<210> 180
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.02中的轻组分
<400> 180
cagtctgtgc ttacccaacc tcctagtgca agtggtaccc ctggacaacg agtaacaatc 60
agttgcactg gtagttcaag taatatagga tctaacgacg taagttggta tcagcaactt 120
cctggtacag cacctaagtt gctcatttac gcaaactccc atagaccctc tggcgtccct 180
gatcgtttca gcggtagtaa atccggtaca tcagcttcct tggctatatc tggtctcaga 240
tccgaggacg aagctgacta ttactgtggg agttgggatg actctttgtc cggctacgtt 300
tttggaggag gcaccaagtt gacagtgctg ggtcagccca aggccgcccc ctccgtgacc 360
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
tccgacttct accccggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgactcctc ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac cccctccaag cagtccaaca acaagtacgc cgcctcctcc 540
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctactcctg ccaggtgacc 600
cacgagggct ccaccgtgga gaagaccgtg gcccccgccg agtgctcc 648
<210> 181
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.03中的重组分中B6的重链
<400> 181
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 182
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.03中的重组分的连接子
<400> 182
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 183
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.03中的B5的scFv的VL
<400> 183
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 184
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.03中的B5的scFv的连接子
<400> 184
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 185
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.03中的B5的scFv的VH
<400> 185
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asn Leu Ile Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 186
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.03中的轻组分
<400> 186
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 187
<211> 2130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.03中的重组分
<400> 187
gaagtgcagc tggttgaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctccggctt caccttctcc agctacgata tgtcctgggt ccgacaggcc 120
cctggcaagt ctttggaatg ggtcgccacc atctctgacg ctggcggcta catctactac 180
cgggactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa ctccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg cgacgaggat accgccgtgt acatctgtgc tagagagctg 300
ccttggagat acgccctgga ttattggggc cagggcacca cagtgaccgt gtcctctgct 360
tctaccaagg gacccagcgt gttccctctg gctccttcca gcaagtctac ctctggcgga 420
acagctgctc tgggctgcct ggtcaaggac tactttcctg agcctgtgac agtgtcctgg 480
aactctggcg ctctgacatc tggcgtgcac acctttccag cagtgctgca gtcctccggc 540
ctgtactctc tgtcctctgt cgtgaccgtg ccttccagct ctctgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaagaaggt ggaacccaag 660
tcctgcgaca agacccacac ctgtcctcca tgtcctgctc cagaactgct gggcggaccc 720
tccgtgttcc tgttccctcc aaagcctaag gacaccctga tgatctcccg gacccctgaa 780
gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccac gaggatcccg aagtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccta gagaggaaca gtacgcctcc 900
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtt ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 960
tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg cctgccccta tcgaaaagac catctctaag 1020
gccaagggcc agccccggga acctcaagtg tacaccttgc ctcccagccg ggaagagatg 1080
accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gttaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1140
gtggaatggg agtccaatgg ccagcctgag aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg 1200
gactccgacg gctcattctt cctgtactcc aagctgaccg tggacaagtc cagatggcag 1260
cagggcaacg tgttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag 1320
aagtccctgt ctctgtcccc tggaaaaggc ggcggaggat ctggcggagg tggaagcgga 1380
ggcggtggat ctcagtctgt tctgacccag cctccttccg cttctggcac acctggacag 1440
agagtgacca tctcttgctc cggctcctcc tccaacatcg gctctaatgc cgtgtcctgg 1500
tatcagcagc tgcctggcac agctcccaaa ctgctgatct actacaactc ccaccggcct 1560
tccggcgtgc ccgatagatt ttccggctct aagtccggca cctctgccag cctggctatc 1620
tctggcctga gatctgagga cgaggccgac tactactgcg gctcttggga tgcctctctg 1680
aacgcctacg tgttcggctg tggcacaaag ctgacagtgc ttggaggtgg tggtagtggt 1740
ggtggcggtt caggtggcgg aggaagcggc ggaggcggat ctgaagttca gctgttggaa 1800
tctggcggcg gactggttca acctggcgga tctctgagac tgtcttgtgc cgcctctggc 1860
ttcaccttct ccgactacgc tatgtcttgg gtccgacagg cccctggcaa gtgtctggaa 1920
tgggtttcct ccatctcctc cggcagcggc tctatctact acgccgactc tgtgaagggc 1980
agattcacca tcagccggga caactccaag aacaccctgt acctgcagat gaactccctg 2040
agagccgagg acaccgccgt gtactactgt gccaagaatc tgatccctct ggactactgg 2100
ggccagggca cactggttac agtgtcctct 2130
<210> 188
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.03中的轻组分
<400> 188
gacatccaga tgacccagag ccctagcagc ctgagcgcta gcgtgggcga cagggtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggatgtgacc cctgccgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc accagcagca ggtacaccgg cgtgcccagc 180
aggtttagcg gaagcggcag cggcaccgac ttcaccttca ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacatcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cccctctgac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gagaaccgtg gccgctccct ccgtgttcat cttcccacca 360
tctgacgagc agctgaagtc cggcaccgct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc taccctgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccaggga 600
ctgtctagcc ccgtgaccaa gtccttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 189
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.04中的重组分中B6的重链
<400> 189
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 190
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.04中的重组分的连接子
<400> 190
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 191
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.04中的C4I的scFv的VL
<400> 191
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 192
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.04中的C4I的scFv的连接子
<400> 192
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 193
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.04中的C4I的scFv的VH
<400> 193
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 194
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.04中的轻组分
<400> 194
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 195
<211> 2130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.04中的重组分
<400> 195
gaagtgcagc tggttgaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctccggctt caccttctcc agctacgata tgtcctgggt ccgacaggcc 120
cctggcaagt ctttggaatg ggtcgccacc atctctgacg ctggcggcta catctactac 180
cgggactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa ctccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg cgacgaggat accgccgtgt acatctgtgc tagagagctg 300
ccttggagat acgccctgga ttattggggc cagggcacca cagtgaccgt gtcctctgct 360
tctaccaagg gacccagcgt gttccctctg gctccttcca gcaagtctac ctctggcgga 420
acagctgctc tgggctgcct ggtcaaggac tactttcctg agcctgtgac agtgtcctgg 480
aactctggcg ctctgacatc tggcgtgcac acctttccag cagtgctgca gtcctccggc 540
ctgtactctc tgtcctctgt cgtgaccgtg ccttccagct ctctgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaagaaggt ggaacccaag 660
tcctgcgaca agacccacac ctgtcctcca tgtcctgctc cagaactgct gggcggaccc 720
tccgtgttcc tgttccctcc aaagcctaag gacaccctga tgatctcccg gacccctgaa 780
gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccac gaggatcccg aagtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccta gagaggaaca gtacgcctcc 900
acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtt ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 960
tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg cctgccccta tcgaaaagac catctctaag 1020
gccaagggcc agccccggga acctcaagtg tacaccttgc ctcccagccg ggaagagatg 1080
accaagaacc aggtgtccct gacctgcctg gttaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1140
gtggaatggg agtccaatgg ccagcctgag aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg 1200
gactccgacg gctcattctt cctgtactcc aagctgaccg tggacaagtc cagatggcag 1260
cagggcaacg tgttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaatca ctacacccag 1320
aagtccctgt ctctgtcccc tggaaaaggc ggcggaggat ctggcggagg tggaagcgga 1380
ggcggtggat ctcagtctgt tctgacccag cctccttccg cttctggcac acctggacag 1440
agagtgacca tctcttgcac cggctcctcc agcaacatcg gctctaacga cgtgtcctgg 1500
tatcagcagc tgcctggcac agctcccaaa ctgctgatct acgccaacag ccacagacct 1560
tccggcgtgc ccgatagatt ctccggctct aagtctggca cctctgccag cctggctatc 1620
tccggcctga gatctgagga cgaggccgac tactactgcg gctcttggga cgattccctg 1680
tccggctatg tgttcggctg tggcacaaag ctgacagtgc ttggaggtgg tggtagtggt 1740
ggtggcggtt caggtggcgg aggaagcggc ggaggcggat ctgaagttca gctgttggaa 1800
tctggcggcg gactggttca acctggcgga tctctgagac tgtcttgtgc cgcctctggc 1860
ttcaccttca gcggctacta catgtcttgg gtccgacagg cccctggcaa gtgtctggaa 1920
tgggtttccc tgatctcccc tagctccggc tccatctact acgccgactc tgtgaagggc 1980
agattcacca tcagccggga caactccaag aacaccctgt acctgcagat gaactccctg 2040
agagccgagg acaccgccgt gtactattgt gctaagggcc tgaccaagtt cgactactgg 2100
ggccagggaa ccctggtcac agtctcttct 2130
<210> 196
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.04中的轻组分
<400> 196
gacatccaga tgacccagag ccctagcagc ctgagcgcta gcgtgggcga cagggtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggatgtgacc cctgccgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc accagcagca ggtacaccgg cgtgcccagc 180
aggtttagcg gaagcggcag cggcaccgac ttcaccttca ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacatcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cccctctgac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gagaaccgtg gccgctccct ccgtgttcat cttcccacca 360
tctgacgagc agctgaagtc cggcaccgct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc taccctgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccaggga 600
ctgtctagcc ccgtgaccaa gtccttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 197
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.05中的B5的(HC+LC)的重链
<400> 197
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asn Leu Ile Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 198
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.05中的B5的(HC+LC)的轻链
<400> 198
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 199
<211> 727
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.05中的B6的scFab-Fc
<400> 199
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
210 215 220
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
260 265 270
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
275 280 285
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
290 295 300
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
305 310 315 320
Lys Ser Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile
325 330 335
Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
340 345 350
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp
355 360 365
Thr Ala Val Tyr Ile Cys Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu
370 375 380
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
385 390 395 400
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
405 410 415
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
420 425 430
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
435 440 445
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
450 455 460
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
465 470 475 480
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
485 490 495
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
500 505 510
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
515 520 525
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
530 535 540
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
545 550 555 560
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
565 570 575
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
580 585 590
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
595 600 605
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
610 615 620
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
625 630 635 640
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
645 650 655
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
660 665 670
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser
675 680 685
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
690 695 700
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
705 710 715 720
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
725
<210> 200
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.05中的B6的scFab-Fc的VL
<400> 200
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 201
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> B6的scFab-Fc的连接子
<400> 201
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
<210> 202
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.05中的B6的scFab-Fc的VH
<400> 202
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 203
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.05中的重链
<400> 203
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc gactacgcta tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtcctcc atctcttccg gctccggctc tatctactac 180
gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagaatctg 300
atccctctgg actattgggg ccagggcaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 360
ggaccctctg tgttccctct ggctccttcc agcaagtcta cctctggtgg aaccgctgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ttactttcct gagcctgtga ccgtgtcttg gaactccggt 480
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctctgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgaccgt gccttctagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtccacc atgtcctgct ccagaactgc tcggcggtcc ctccgttttc 720
ctgtttccac ctaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctacaga 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgaaaaga ccatctccaa ggctaagggc 1020
cagcctcggg aacctcaagt gtacaccttg ccaccttcca gagaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgtggtgcct cgtgaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtctaacg gccagccaga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgaca gtggacaagt ctcggtggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gttctgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggcaaa 1338
<210> 204
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.05中的轻链
<400> 204
cagtctgttc tgactcagcc tccttctgct tctggcaccc ctggccagag agtgaccatc 60
tcttgttccg gctcctcctc caacatcggc tctaacgccg tgtcctggta tcagcagttg 120
cctggcacag cccctaagct gctgatctac tacaactctc acagaccctc cggcgtgccc 180
gacagattct ctggctctaa gtctggcacc tccgccagcc tggctatctc tggactgaga 240
tctgaggacg aggccgacta ctactgcggc tcttgggatg cctctctgaa cgcttatgtg 300
ttcggcggag gcaccaagct gacagtgttg ggacaaccta aggccgctcc tagcgtgacc 360
ctgtttcctc catcttctga ggaactgcag gccaacaagg ctaccctcgt gtgcctgatc 420
tctgactttt accctggcgc tgtgaccgtg gcctggaagg ctgatagttc tcctgtgaag 480
gccggcgtgg aaaccaccac accttccaag cagtccaaca acaaatacgc cgcctcctcc 540
tacctgtctc tgacccctga acagtggaag tcccaccggt cctactcttg ccaagtgacc 600
catgagggct ccaccgtgga aaagacagtg gcccctgctg agtgctct 648
<210> 205
<211> 2181
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.05中的B6的scFab-Fc
<400> 205
gatatccaga tgacccagtc tccttccagc ctgtctgcct ctgtgggcga cagagtgacc 60
atcacatgca aggccagcca ggatgtgacc cctgccgttg cttggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc acctcctcca gatacacagg cgtgccctcc 180
agattctccg gctctggctc tggcaccgac tttaccttta caatctccag cctgcagcct 240
gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cacctctgac ctttggccag 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gcggacagtg gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctata gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagtc ccgtgaccaa gtctttcaac agaggcgagt gtggctccgg cagcggaagt 660
ggttctggaa gcggatctgg ttccggaagt ggcagcggag gcggaggatc tggtggcgga 720
ggaagtggcg gaggcggtag tggtggtggt ggatcaggtg gtggcggatc cggcggaggt 780
ggtagcggtt ctggttcagg atctggatct ggcagcggct ccggttctgg atccgaagtg 840
cagctggttg aatctggcgg tggactggtt cagcctggcg gatctctgag actgtcttgt 900
gccgcctccg gcttcacctt ctccagctac gatatgtcct gggtccgaca ggcccctggc 960
aagtctttgg aatgggtcgc caccatctct gacgctggcg gctacatcta ctaccgggac 1020
tctgtgaagg gcagattcac catcagccgg gacaacgcca agaactccct gtacctgcag 1080
atgaacagcc tgcgcgacga ggacaccgcc gtgtatatct gtgctagaga gctgccttgg 1140
agatacgccc tggattattg gggccaggga accacggtta ccgtgtcctc tgcttctacc 1200
aagggaccca gcgtgttccc tctggctcct agctccaagt ctacctctgg cggaacagct 1260
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttt cctgagcctg tgacagtgtc ctggaactct 1320
ggcgctctga catctggcgt gcacaccttt ccagcagtgc tgcagtcctc cggcctgtac 1380
tctctgtcct ctgtcgtgac agtgccctcc tctagcctgg gcacccagac ctacatctgc 1440
aatgtgaacc acaagccttc caacaccaag gtcgacaaga aggtggaacc caagtcctgc 1500
gacaagaccc acacatgccc tccatgtcct gctccagaac tgctcggagg cccctccgtg 1560
tttctgttcc ctccaaagcc taaggacacc ctgatgatct ctcggacccc tgaagtgacc 1620
tgcgtggtgg tcgatgtgtc tcacgaggat cccgaagtga agttcaattg gtacgtggac 1680
ggcgtggaag tgcacaacgc taagaccaag cctagagagg aacagtacaa ctccacctac 1740
agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa agagtacaag 1800
tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgct cctatcgaaa agaccatcag caaggccaag 1860
ggccagccta gggaacccca ggtgtacacc ttgcctccaa gccgggaaga gatgaccaag 1920
aaccaggtgt ccctgtcctg tgccgtgaag ggcttctacc cctctgatat cgccgtggaa 1980
tgggagagca atggccagcc tgagaacaac tacaagacaa cccctcctgt gctggactcc 2040
gatggctcat tcttcctggt gtccaagctg actgtggaca agtccagatg gcagcagggc 2100
aacgtgttct cctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca atcactacac ccagaagtcc 2160
ctgtctctga gcccaggcaa a 2181
<210> 206
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.06中的B5的(HC+LC)的重链
<400> 206
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asn Leu Ile Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 207
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.06中的B5的(HC+LC)的轻链
<400> 207
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 208
<211> 727
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.06中的B6的scFab-Fc
<400> 208
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ser Ile Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
210 215 220
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
260 265 270
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly
275 280 285
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
290 295 300
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
305 310 315 320
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys
325 330 335
Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
340 345 350
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
355 360 365
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Ala Leu Trp Asp Asp Ala Phe
370 375 380
Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
385 390 395 400
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
405 410 415
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
420 425 430
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
435 440 445
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
450 455 460
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
465 470 475 480
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
485 490 495
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
500 505 510
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
515 520 525
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
530 535 540
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
545 550 555 560
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
565 570 575
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
580 585 590
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
595 600 605
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
610 615 620
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
625 630 635 640
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
645 650 655
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
660 665 670
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser
675 680 685
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
690 695 700
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
705 710 715 720
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
725
<210> 209
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.06中的B12的scFab-Fc的VL
<400> 209
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ser Ile Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 210
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.06中的B12的scFab-Fc的连接子
<400> 210
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
<210> 211
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.06中的B12的scFab-Fc的VH
<400> 211
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ala Leu Trp Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 212
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.06中的重链
<400> 212
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc gactacgcta tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtcctcc atctcttccg gctccggctc tatctactac 180
gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagaatctg 300
atccctctgg actattgggg ccagggcaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 360
ggaccctctg tgttccctct ggctccttcc agcaagtcta cctctggtgg aaccgctgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ttactttcct gagcctgtga ccgtgtcttg gaactccggt 480
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctctgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgaccgt gccttctagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtccacc atgtcctgct ccagaactgc tcggcggtcc ctccgttttc 720
ctgtttccac ctaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctacaga 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgaaaaga ccatctccaa ggctaagggc 1020
cagcctcggg aacctcaagt gtacaccttg ccaccttcca gagaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgtggtgcct cgtgaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtctaacg gccagccaga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgaca gtggacaagt ctcggtggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gttctgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggcaaa 1338
<210> 213
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.06中的轻链
<400> 213
cagtctgttc tgactcagcc tccttctgct tctggcaccc ctggccagag agtgaccatc 60
tcttgttccg gctcctcctc caacatcggc tctaacgccg tgtcctggta tcagcagttg 120
cctggcacag cccctaagct gctgatctac tacaactctc acagaccctc cggcgtgccc 180
gacagattct ctggctctaa gtctggcacc tccgccagcc tggctatctc tggactgaga 240
tctgaggacg aggccgacta ctactgcggc tcttgggatg cctctctgaa cgcttatgtg 300
ttcggcggag gcaccaagct gacagtgttg ggacaaccta aggccgctcc tagcgtgacc 360
ctgtttcctc catcttctga ggaactgcag gccaacaagg ctaccctcgt gtgcctgatc 420
tctgactttt accctggcgc tgtgaccgtg gcctggaagg ctgatagttc tcctgtgaag 480
gccggcgtgg aaaccaccac accttccaag cagtccaaca acaaatacgc cgcctcctcc 540
tacctgtctc tgacccctga acagtggaag tcccaccggt cctactcttg ccaagtgacc 600
catgagggct ccaccgtgga aaagacagtg gcccctgctg agtgctct 648
<210> 214
<211> 2181
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.06中的B12的scFab-Fc
<400> 214
gatatccaga tgacccagtc tccttccaca ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgatc 60
atcacctgta gagccagccg gggcatctct tcttggctgg cttggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ctaacctgct gatctctaag gcctcctctc tggaatccgg cgtgcccagc 180
agattttccg gctctggctc tggcaccgac tttaccctga caatctccag cctgcagcct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tccagcagca tccctctgac atttggcgga 300
ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtc gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctaca gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagcc ctgtgaccaa gtctttcaac agaggcgagt gcggctccgg aagcggaagt 660
ggatcaggtt ctggatctgg cagcggtagc ggcagtggtg gcggaggttc tggcggtggc 720
ggatcaggcg gcggaggaag cggaggcgga ggcagtggcg gaggtggaag tggcggaggc 780
ggatctggaa gtggaagcgg ttctggctca ggatctggtt caggctctgg aagccaggtc 840
cagctgttgg aatctggcgg aggacttgtt cagcctggcg gctctctgag actgtcttgt 900
gccgcttctg gcttcacctt ctccagctac tggatgtcct gggtccgaca ggctcctggc 960
aaaggactgg aatgggtcgc caacatcaag caggacggct ccgagaagta ctacgtggac 1020
tccgtgaagg gcagattcac catctctcgg gacaacgcca agaactccct gtacctgcag 1080
atgaacagcc tgagagccga ggacaccgcc gtgtactact gtgctagagt ggccctgtgg 1140
gacgacgcct ttgatatctg gggacagggc acaatggtta ccgtgtcctc tgcttctacc 1200
aagggaccca gcgtgttccc tctggctcct agctccaagt ctacctctgg cggaacagct 1260
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttt cctgagcctg tgacagtgtc ctggaactct 1320
ggcgctctga catctggcgt gcacaccttt ccagcagtgc tgcagtcctc cggcctgtac 1380
tctctgtcct ctgtcgtgac agtgccctcc tctagcctgg gcacccagac ctacatctgc 1440
aatgtgaacc acaagccttc caacaccaag gtcgacaaga aggtggaacc caagtcctgc 1500
gacaagaccc acacatgccc tccatgtcct gctccagaac tgctcggagg cccctccgtg 1560
tttctgttcc ctccaaagcc taaggacacc ctgatgatct ctcggacccc tgaagtgacc 1620
tgcgtggtgg tcgatgtgtc tcacgaggat cccgaagtga agttcaattg gtacgtggac 1680
ggcgtggaag tgcacaacgc taagaccaag cctagagagg aacagtacaa ctccacctac 1740
agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa agagtacaag 1800
tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgct cctatcgaaa agaccatcag caaggccaag 1860
ggccagccta gggaacccca ggtgtacacc ttgcctccaa gccgggaaga gatgaccaag 1920
aaccaggtgt ccctgtcctg tgccgtgaag ggcttctacc cctctgatat cgccgtggaa 1980
tgggagagca atggccagcc tgagaacaac tacaagacaa cccctcctgt gctggactcc 2040
gatggctcat tcttcctggt gtccaagctg actgtggaca agtccagatg gcagcagggc 2100
aacgtgttct cctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca atcactacac ccagaagtcc 2160
ctgtctctga gcccaggcaa a 2181
<210> 215
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.07中的C4I的(HC+LC)的重链
<400> 215
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 216
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.07中的C4I的(HC+LC)的轻链
<400> 216
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 217
<211> 727
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.07中的B6的scFab-Fc
<400> 217
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
210 215 220
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
260 265 270
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
275 280 285
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
290 295 300
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
305 310 315 320
Lys Ser Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile
325 330 335
Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
340 345 350
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp
355 360 365
Thr Ala Val Tyr Ile Cys Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu
370 375 380
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
385 390 395 400
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
405 410 415
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
420 425 430
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
435 440 445
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
450 455 460
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
465 470 475 480
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
485 490 495
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
500 505 510
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
515 520 525
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
530 535 540
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
545 550 555 560
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
565 570 575
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
580 585 590
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
595 600 605
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
610 615 620
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
625 630 635 640
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
645 650 655
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
660 665 670
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser
675 680 685
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
690 695 700
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
705 710 715 720
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
725
<210> 218
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.07中的B6的scFab-Fc的VL
<400> 218
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 219
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.07中的B6的scFab-Fc的连接子
<400> 219
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
<210> 220
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.07中的B6的scFab-Fc的VH
<400> 220
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 221
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.07中的重链
<400> 221
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc ggttactata tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtccctt attagtccaa gctccggctc tatctactac 180
gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggcttg 300
acaaaatttg actattgggg ccagggcaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 360
ggaccctctg tgttccctct ggctccttcc agcaagtcta cctctggtgg aaccgctgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ttactttcct gagcctgtga ccgtgtcttg gaactccggt 480
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctctgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgaccgt gccttctagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtccacc atgtcctgct ccagaactgc tcggcggtcc ctccgttttc 720
ctgtttccac ctaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctacaga 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgaaaaga ccatctccaa ggctaagggc 1020
cagcctcggg aacctcaagt gtacaccttg ccaccttcca gagaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgtggtgcct cgtgaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtctaacg gccagccaga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgaca gtggacaagt ctcggtggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gttctgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggcaaa 1338
<210> 222
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.07中的轻链
<400> 222
cagtctgtgc ttacccaacc tcctagtgca agtggtaccc ctggacaacg agtaacaatc 60
agttgcactg gtagttcaag taatatagga tctaacgacg taagttggta tcagcaactt 120
cctggtacag cacctaagtt gctcatttac gcaaactccc atagaccctc tggcgtccct 180
gatcgtttca gcggtagtaa atccggtaca tcagcttcct tggctatatc tggtctcaga 240
tccgaggacg aagctgacta ttactgtggg agttgggatg actctttgtc cggctacgtt 300
tttggaggag gcaccaagtt gacagtgctg ggtcagccca aggccgcccc ctccgtgacc 360
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
tccgacttct accccggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgactcctc ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac cccctccaag cagtccaaca acaagtacgc cgcctcctcc 540
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctactcctg ccaggtgacc 600
cacgagggct ccaccgtgga gaagaccgtg gcccccgccg agtgctcc 648
<210> 223
<211> 2181
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.07中的B6的scFab-Fc
<400> 223
gatatccaga tgacccagtc tccttccagc ctgtctgcct ctgtgggcga cagagtgacc 60
atcacatgca aggccagcca ggatgtgacc cctgccgttg cttggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc acctcctcca gatacacagg cgtgccctcc 180
agattctccg gctctggctc tggcaccgac tttaccttta caatctccag cctgcagcct 240
gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cacctctgac ctttggccag 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gcggacagtg gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctata gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagtc ccgtgaccaa gtctttcaac agaggcgagt gtggctccgg cagcggaagt 660
ggttctggaa gcggatctgg ttccggaagt ggcagcggag gcggaggatc tggtggcgga 720
ggaagtggcg gaggcggtag tggtggtggt ggatcaggtg gtggcggatc cggcggaggt 780
ggtagcggtt ctggttcagg atctggatct ggcagcggct ccggttctgg atccgaagtg 840
cagctggttg aatctggcgg tggactggtt cagcctggcg gatctctgag actgtcttgt 900
gccgcctccg gcttcacctt ctccagctac gatatgtcct gggtccgaca ggcccctggc 960
aagtctttgg aatgggtcgc caccatctct gacgctggcg gctacatcta ctaccgggac 1020
tctgtgaagg gcagattcac catcagccgg gacaacgcca agaactccct gtacctgcag 1080
atgaacagcc tgcgcgacga ggacaccgcc gtgtatatct gtgctagaga gctgccttgg 1140
agatacgccc tggattattg gggccaggga accacggtta ccgtgtcctc tgcttctacc 1200
aagggaccca gcgtgttccc tctggctcct agctccaagt ctacctctgg cggaacagct 1260
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttt cctgagcctg tgacagtgtc ctggaactct 1320
ggcgctctga catctggcgt gcacaccttt ccagcagtgc tgcagtcctc cggcctgtac 1380
tctctgtcct ctgtcgtgac agtgccctcc tctagcctgg gcacccagac ctacatctgc 1440
aatgtgaacc acaagccttc caacaccaag gtcgacaaga aggtggaacc caagtcctgc 1500
gacaagaccc acacatgccc tccatgtcct gctccagaac tgctcggagg cccctccgtg 1560
tttctgttcc ctccaaagcc taaggacacc ctgatgatct ctcggacccc tgaagtgacc 1620
tgcgtggtgg tcgatgtgtc tcacgaggat cccgaagtga agttcaattg gtacgtggac 1680
ggcgtggaag tgcacaacgc taagaccaag cctagagagg aacagtacaa ctccacctac 1740
agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa agagtacaag 1800
tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgct cctatcgaaa agaccatcag caaggccaag 1860
ggccagccta gggaacccca ggtgtacacc ttgcctccaa gccgggaaga gatgaccaag 1920
aaccaggtgt ccctgtcctg tgccgtgaag ggcttctacc cctctgatat cgccgtggaa 1980
tgggagagca atggccagcc tgagaacaac tacaagacaa cccctcctgt gctggactcc 2040
gatggctcat tcttcctggt gtccaagctg actgtggaca agtccagatg gcagcagggc 2100
aacgtgttct cctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca atcactacac ccagaagtcc 2160
ctgtctctga gcccaggcaa a 2181
<210> 224
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.08中的C4I的(HC+LC)的重链
<400> 224
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 225
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.08中的C4I的(HC+LC)的轻链
<400> 225
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 226
<211> 727
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.08中的B12的scFab-Fc
<400> 226
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ser Ile Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
210 215 220
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
260 265 270
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly
275 280 285
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
290 295 300
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
305 310 315 320
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys
325 330 335
Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
340 345 350
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
355 360 365
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Ala Leu Trp Asp Asp Ala Phe
370 375 380
Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
385 390 395 400
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
405 410 415
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
420 425 430
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
435 440 445
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
450 455 460
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
465 470 475 480
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
485 490 495
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
500 505 510
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
515 520 525
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
530 535 540
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
545 550 555 560
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
565 570 575
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
580 585 590
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
595 600 605
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
610 615 620
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
625 630 635 640
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
645 650 655
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
660 665 670
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser
675 680 685
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
690 695 700
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
705 710 715 720
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
725
<210> 227
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.08中的B12的scFab-Fc的VL
<400> 227
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ser Ile Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 228
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.08中的B12的scFab-Fc的连接子
<400> 228
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
<210> 229
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.08中的B12的scFab-Fc的VH
<400> 229
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ala Leu Trp Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 230
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.08中的重链
<400> 230
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc ggttactata tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtccctt attagtccaa gctccggctc tatctactac 180
gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggcttg 300
acaaaatttg actattgggg ccagggcaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 360
ggaccctctg tgttccctct ggctccttcc agcaagtcta cctctggtgg aaccgctgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ttactttcct gagcctgtga ccgtgtcttg gaactccggt 480
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctctgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgaccgt gccttctagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtccacc atgtcctgct ccagaactgc tcggcggtcc ctccgttttc 720
ctgtttccac ctaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctacaga 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgaaaaga ccatctccaa ggctaagggc 1020
cagcctcggg aacctcaagt gtacaccttg ccaccttcca gagaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgtggtgcct cgtgaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtctaacg gccagccaga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgaca gtggacaagt ctcggtggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gttctgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggcaaa 1338
<210> 231
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.08中的轻链
<400> 231
cagtctgtgc ttacccaacc tcctagtgca agtggtaccc ctggacaacg agtaacaatc 60
agttgcactg gtagttcaag taatatagga tctaacgacg taagttggta tcagcaactt 120
cctggtacag cacctaagtt gctcatttac gcaaactccc atagaccctc tggcgtccct 180
gatcgtttca gcggtagtaa atccggtaca tcagcttcct tggctatatc tggtctcaga 240
tccgaggacg aagctgacta ttactgtggg agttgggatg actctttgtc cggctacgtt 300
tttggaggag gcaccaagtt gacagtgctg ggtcagccca aggccgcccc ctccgtgacc 360
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
tccgacttct accccggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgactcctc ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac cccctccaag cagtccaaca acaagtacgc cgcctcctcc 540
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctactcctg ccaggtgacc 600
cacgagggct ccaccgtgga gaagaccgtg gcccccgccg agtgctcc 648
<210> 232
<211> 2181
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.08中的B12的scFab-Fc
<400> 232
gatatccaga tgacccagtc tccttccaca ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgatc 60
atcacctgta gagccagccg gggcatctct tcttggctgg cttggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ctaacctgct gatctctaag gcctcctctc tggaatccgg cgtgcccagc 180
agattttccg gctctggctc tggcaccgac tttaccctga caatctccag cctgcagcct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tccagcagca tccctctgac atttggcgga 300
ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtc gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctaca gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagcc ctgtgaccaa gtctttcaac agaggcgagt gcggctccgg aagcggaagt 660
ggatcaggtt ctggatctgg cagcggtagc ggcagtggtg gcggaggttc tggcggtggc 720
ggatcaggcg gcggaggaag cggaggcgga ggcagtggcg gaggtggaag tggcggaggc 780
ggatctggaa gtggaagcgg ttctggctca ggatctggtt caggctctgg aagccaggtc 840
cagctgttgg aatctggcgg aggacttgtt cagcctggcg gctctctgag actgtcttgt 900
gccgcttctg gcttcacctt ctccagctac tggatgtcct gggtccgaca ggctcctggc 960
aaaggactgg aatgggtcgc caacatcaag caggacggct ccgagaagta ctacgtggac 1020
tccgtgaagg gcagattcac catctctcgg gacaacgcca agaactccct gtacctgcag 1080
atgaacagcc tgagagccga ggacaccgcc gtgtactact gtgctagagt ggccctgtgg 1140
gacgacgcct ttgatatctg gggacagggc acaatggtta ccgtgtcctc tgcttctacc 1200
aagggaccca gcgtgttccc tctggctcct agctccaagt ctacctctgg cggaacagct 1260
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttt cctgagcctg tgacagtgtc ctggaactct 1320
ggcgctctga catctggcgt gcacaccttt ccagcagtgc tgcagtcctc cggcctgtac 1380
tctctgtcct ctgtcgtgac agtgccctcc tctagcctgg gcacccagac ctacatctgc 1440
aatgtgaacc acaagccttc caacaccaag gtcgacaaga aggtggaacc caagtcctgc 1500
gacaagaccc acacatgccc tccatgtcct gctccagaac tgctcggagg cccctccgtg 1560
tttctgttcc ctccaaagcc taaggacacc ctgatgatct ctcggacccc tgaagtgacc 1620
tgcgtggtgg tcgatgtgtc tcacgaggat cccgaagtga agttcaattg gtacgtggac 1680
ggcgtggaag tgcacaacgc taagaccaag cctagagagg aacagtacaa ctccacctac 1740
agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa agagtacaag 1800
tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgct cctatcgaaa agaccatcag caaggccaag 1860
ggccagccta gggaacccca ggtgtacacc ttgcctccaa gccgggaaga gatgaccaag 1920
aaccaggtgt ccctgtcctg tgccgtgaag ggcttctacc cctctgatat cgccgtggaa 1980
tgggagagca atggccagcc tgagaacaac tacaagacaa cccctcctgt gctggactcc 2040
gatggctcat tcttcctggt gtccaagctg actgtggaca agtccagatg gcagcagggc 2100
aacgtgttct cctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca atcactacac ccagaagtcc 2160
ctgtctctga gcccaggcaa a 2181
<210> 233
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.09中的B6的(HC+LC)的重链
<400> 233
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 234
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.09中的B6的(HC+LC)的轻链
<400> 234
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 235
<211> 726
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.09中的C4I的scFab-Fc
<400> 235
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
210 215 220
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
225 230 235 240
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
245 250 255
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
260 265 270
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly
275 280 285
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
290 295 300
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
305 310 315 320
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly
325 330 335
Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
340 345 350
Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
355 360 365
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp
370 375 380
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
385 390 395 400
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
405 410 415
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
420 425 430
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
435 440 445
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
450 455 460
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
465 470 475 480
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
485 490 495
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
500 505 510
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
515 520 525
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
530 535 540
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
545 550 555 560
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
565 570 575
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
580 585 590
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
595 600 605
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
610 615 620
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
625 630 635 640
Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
645 650 655
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
660 665 670
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys
675 680 685
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
690 695 700
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
705 710 715 720
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
725
<210> 236
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.09中的C4I的scFab-Fc的VL
<400> 236
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 237
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.09中的C4I的scFab-Fc的连接子
<400> 237
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
<210> 238
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.09中的C4I的scFab-Fc的VH
<400> 238
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 239
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.09中的重链
<400> 239
gaagtgcagc tggttgaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctccggctt caccttctcc agctacgata tgtcctgggt ccgacaggcc 120
cctggcaagt ctttggaatg ggtcgccacc atctctgacg ctggcggcta catctactac 180
cgggactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa ctccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg cgacgaggac accgccgtgt atatctgtgc tagagagctg 300
ccttggagat acgccctgga ttattggggc cagggcacaa cggttaccgt gtcctctgct 360
tctaccaagg gaccctctgt gttccctctg gctccttcca gcaagtctac ctctggtgga 420
accgctgctc tgggctgcct ggtcaaggat tactttcctg agcctgtgac cgtgtcttgg 480
aactccggtg ctctgacatc tggcgtgcac acctttccag ctgtgctgca gtcctctggc 540
ctgtactctc tgtcctctgt cgtgaccgtg ccttctagct ctctgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaaccacaa gccttccaac accaaggtgg acaagaaggt ggaacccaag 660
tcctgcgaca agacccacac ctgtccacca tgtcctgctc cagaactgct cggcggtccc 720
tccgttttcc tgtttccacc taagcctaag gacaccctga tgatctctcg gacccctgaa 780
gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtctcac gaggatcccg aagtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccta gagaggaaca gtacaactcc 900
acctacagag tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 960
tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg cctgctccta tcgaaaagac catctccaag 1020
gctaagggcc agcctcggga acctcaagtg tacaccttgc caccttccag agaagagatg 1080
accaagaacc aggtgtccct gtggtgcctc gtgaagggct tctacccttc cgatatcgcc 1140
gtggaatggg agtctaacgg ccagccagag aacaactaca agacaacccc tcctgtgctg 1200
gactccgacg gctcattctt cctgtactcc aagctgacag tggacaagtc tcggtggcag 1260
cagggcaacg tgttctcctg ttctgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctgt ctctgtcccc tggcaaa 1347
<210> 240
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.09中的轻链
<400> 240
gacatccaga tgacccagag ccctagcagc ctgagcgcta gcgtgggcga cagggtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggatgtgacc cctgccgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc accagcagca ggtacaccgg cgtgcccagc 180
aggtttagcg gaagcggcag cggcaccgac ttcaccttca ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacatcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cccctctgac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gagaaccgtg gccgctccct ccgtgttcat cttcccacca 360
tctgacgagc agctgaagtc cggcaccgct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctact ccctgtcctc taccctgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccaccaggga 600
ctgtctagcc ccgtgaccaa gtccttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 241
<211> 2178
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> ABLPNB.09中的C4I的scFab-Fc
<400> 241
cagtctgttc tgacccagcc tccttccgct tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
tcttgcaccg gctcctccag caacatcggc tctaacgacg tgtcctggta tcagcagctg 120
cctggcacag ctcccaaact gctgatctac gccaacagcc acagaccttc cggcgtgccc 180
gatagattct ccggctctaa gtctggcacc tctgccagcc tggctatctc cggactgaga 240
tctgaggacg aggccgacta ctactgcggc tcttgggacg attccctgtc cggctatgtt 300
ttcggcggag gcaccaagct gacagtgctg ggacaaccta aggccgctcc ttccgtgaca 360
ctgttccctc catcctccga ggaactgcag gccaacaagg ctaccctcgt gtgcctgatc 420
tccgactttt accctggcgc tgtgaccgtg gcctggaagg ctgatagttc tcctgtgaag 480
gccggcgtgg aaaccaccac accttccaag cagtccaaca acaaatacgc cgcctcctcc 540
tacctgtctc tgacccctga acagtggaag tcccaccggt cctacagctg ccaagtgacc 600
catgagggct ccaccgtgga aaagacagtg gcccctgctg agtgttccgg ctctggtagt 660
ggttctggct ccggaagcgg atctggctct ggttctggat ctggtggcgg aggatctggc 720
ggaggtggaa gcggaggcgg aggaagtggt ggcggcggaa gcggcggtgg tggctcaggc 780
ggtggcggta gcggcagtgg atcaggatct ggaagtggca gcggctctgg atcaggttcc 840
gaagtgcagc tgttggagtc aggtggtgga ctggttcagc ctggcggatc cctgagactg 900
tcttgtgctg cctctggctt caccttcagc ggctactaca tgtcttgggt ccgacaggct 960
cccggcaaag gactggaatg ggtgtccctg atcagcccct cctctggctc tatctactac 1020
gccgactccg tgaagggcag attcaccatc tctcgggaca actccaagaa caccctgtac 1080
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc taagggcctg 1140
accaagttcg actactgggg ccagggaaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 1200
ggacccagcg tgttccctct ggctcctagc tccaagtcta cctctggcgg aacagctgct 1260
ctgggctgcc tggtcaagga ctactttcct gagcctgtga cagtgtcctg gaactctggc 1320
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gcagtgctgc agtcctccgg cctgtactct 1380
ctgtcctctg tcgtgacagt gccctcctct agcctgggca cccagaccta catctgcaat 1440
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtc gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 1500
aagacccaca catgccctcc atgtcctgct ccagaactgc tcggaggccc ctccgtgttt 1560
ctgttccctc caaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 1620
gtggtggtcg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 1680
gtggaagtgc acaacgctaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctacaga 1740
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 1800
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgaaaaga ccatcagcaa ggccaagggc 1860
cagcctaggg aaccccaggt gtacaccttg cctccaagcc gggaagagat gaccaagaac 1920
caggtgtccc tgtcctgtgc cgtgaagggc ttctacccct ctgatatcgc cgtggaatgg 1980
gagagcaatg gccagcctga gaacaactac aagacaaccc ctcctgtgct ggactccgat 2040
ggctcattct tcctggtgtc caagctgact gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 2100
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagtccctg 2160
tctctgagcc caggcaaa 2178
<210> 242
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的C4I的(HC+LC)的重链
<400> 242
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 243
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的连接子
<400> 243
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 244
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的1A10的scFv
<400> 244
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Tyr Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
130 135 140
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
145 150 155 160
Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu
165 170 175
Trp Val Ser Trp Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp
180 185 190
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
195 200 205
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ala Arg Asp Ala Gln Arg Asn Ser Met Arg Glu Phe Asp Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 245
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的C4I的(HC+LC)的轻链
<400> 245
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 246
<211> 993
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的B6的scFab-Fc+1A10的scFv
<400> 246
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
210 215 220
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
260 265 270
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
275 280 285
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
290 295 300
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
305 310 315 320
Lys Ser Leu Glu Trp Val Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile
325 330 335
Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
340 345 350
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp
355 360 365
Thr Ala Val Tyr Ile Cys Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu
370 375 380
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
385 390 395 400
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
405 410 415
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
420 425 430
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
435 440 445
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
450 455 460
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
465 470 475 480
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
485 490 495
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
500 505 510
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
515 520 525
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
530 535 540
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
545 550 555 560
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
565 570 575
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
580 585 590
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
595 600 605
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
610 615 620
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
625 630 635 640
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
645 650 655
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
660 665 670
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser
675 680 685
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
690 695 700
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
705 710 715 720
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
725 730 735
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala
740 745 750
Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser
755 760 765
Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly
770 775 780
Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Asp Ser His Arg Pro Ser Gly
785 790 795 800
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu
805 810 815
Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala
820 825 830
Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys
835 840 845
Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
850 855 860
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly
865 870 875 880
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
885 890 895
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
900 905 910
Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Ser Trp Ile Ser Tyr Ser Gly Gly
915 920 925
Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
930 935 940
Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
945 950 955 960
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Ala Gln Arg Asn Ser
965 970 975
Met Arg Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
980 985 990
Ser
<210> 247
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的B6的轻链
<400> 247
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Thr Pro Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Thr Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 248
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的连接子
<400> 248
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
<210> 249
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的B6的重链
<400> 249
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Asp Ala Gly Gly Tyr Ile Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ile Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Pro Trp Arg Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 250
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的连接子
<400> 250
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 251
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的1A10的scFv
<400> 251
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Tyr Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
130 135 140
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
145 150 155 160
Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu
165 170 175
Trp Val Ser Trp Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp
180 185 190
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
195 200 205
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ala Arg Asp Ala Gln Arg Asn Ser Met Arg Glu Phe Asp Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 252
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的C4I的(HC+LC)的重链
<400> 252
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc ggttactata tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtccctt attagtccaa gctccggctc tatctactac 180
gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggcttg 300
acaaaatttg actattgggg ccagggcaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 360
ggaccctctg tgttccctct ggctccttcc agcaagtcta cctctggtgg aaccgctgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ttactttcct gagcctgtga ccgtgtcttg gaactccggt 480
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctctgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgaccgt gccttctagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtccacc atgtcctgct ccagaactgc tcggcggtcc ctccgttttc 720
ctgtttccac ctaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctacaga 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgaaaaga ccatctccaa ggctaagggc 1020
cagcctcggg aacctcaagt gtacaccctg cctcctagca gagaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgtggtgcct ggtcaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtccaatg gccagcctga gaacaactac aagaccacac ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggaaaa 1338
<210> 253
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的连接子
<400> 253
ggcggcggag gatctggcgg aggtggaagc ggaggcggtg gatct 45
<210> 254
<211> 753
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的1A10的scFv
<400> 254
cagtctgttc tgacccagcc tccttccgct tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
tcttgctccg gctcctcctc caacatcggc aacaactacg tgacctggta tcagcagctg 120
cccggcacag ctcccaaact gctgatctac gccgactctc acagaccttc cggcgtgccc 180
gatagattct ccggctctaa gtctggcacc tctgccagcc tggctatctc cggcctgaga 240
tctgaggacg aggccgacta ctactgcgcc acctgggatt attccctgtc cggctacgtg 300
ttcggctgcg gcacaaaact gacagtgctt ggaggtggtg gtagtggtgg tggcggttca 360
ggtggcggag gaagcggcgg aggcggatct gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga 420
ctggttcaac ctggcggatc tctgagactg tcttgtgccg cctccggctt taccttctcc 480
tcctacgaca tgtcttgggt ccgacaggcc cctggcaagt gtctggaatg ggtttcctgg 540
atctcctact ccggcggctc catctactac gccgattccg tgaagggcag attcaccatc 600
agccgggaca actccaagaa caccctgtac ctgcagatga actccctgag agccgaggac 660
accgccgtgt actactgtgc cagagatgcc cagcggaaca gcatgagaga gttcgactat 720
tggggccagg gcaccctggt cacagtctct tct 753
<210> 255
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的C4I的(HC+LC)的轻链
<400> 255
cagtctgtgc ttacccaacc tcctagtgca agtggtaccc ctggacaacg agtaacaatc 60
agttgcactg gtagttcaag taatatagga tctaacgacg taagttggta tcagcaactt 120
cctggtacag cacctaagtt gctcatttac gcaaactccc atagaccctc tggcgtccct 180
gatcgtttca gcggtagtaa atccggtaca tcagcttcct tggctatatc tggtctcaga 240
tccgaggacg aagctgacta ttactgtggg agttgggatg actctttgtc cggctacgtt 300
tttggaggag gcaccaagtt gacagtgctg ggtcagccca aggccgcccc ctccgtgacc 360
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
tccgacttct accccggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgactcctc ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac cccctccaag cagtccaaca acaagtacgc cgcctcctcc 540
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctactcctg ccaggtgacc 600
cacgagggct ccaccgtgga gaagaccgtg gcccccgccg agtgctcc 648
<210> 256
<211> 2979
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的B6的scFab-Fc+1A10的scFv
<400> 256
gatatccaga tgacccagtc tccttccagc ctgtctgcct ctgtgggcga cagagtgacc 60
atcacatgca aggccagcca ggatgtgacc cctgccgttg cttggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc acctcctcca gatacacagg cgtgccctcc 180
agattctccg gctctggctc tggcaccgac tttaccttta caatctccag cctgcagcct 240
gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cacctctgac ctttggccag 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gcggacagtg gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctata gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagtc ccgtgaccaa gtctttcaac agaggcgagt gtggctccgg cagcggaagt 660
ggttctggaa gcggatctgg ttccggaagt ggcagcggag gcggaggatc tggtggcgga 720
ggaagtggcg gaggcggtag tggtggtggt ggatcaggtg gtggcggatc cggcggaggt 780
ggtagcggtt ctggttcagg atctggatct ggcagcggct ccggttctgg atccgaagtg 840
cagctggttg aatctggcgg tggactggtt cagcctggcg gatctctgag actgtcttgt 900
gccgcctccg gcttcacctt ctccagctac gatatgtcct gggtccgaca ggcccctggc 960
aagtctttgg aatgggtcgc caccatctct gacgctggcg gctacatcta ctaccgggac 1020
tctgtgaagg gcagattcac catcagccgg gacaacgcca agaactccct gtacctgcag 1080
atgaacagcc tgcgcgacga ggacaccgcc gtgtatatct gtgctagaga gctgccttgg 1140
agatacgccc tggattattg gggccaggga accacggtta ccgtgtcctc tgcttctacc 1200
aagggaccca gcgtgttccc tctggctcct agctccaagt ctacctctgg cggaacagct 1260
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttt cctgagcctg tgacagtgtc ctggaactct 1320
ggcgctctga catctggcgt gcacaccttt ccagcagtgc tgcagtcctc cggcctgtac 1380
tctctgtcct ctgtcgtgac agtgccctcc tctagcctgg gcacccagac ctacatctgc 1440
aatgtgaacc acaagccttc caacaccaag gtcgacaaga aggtggaacc caagtcctgc 1500
gacaagaccc acacatgccc tccatgtcct gctccagaac tgctcggagg cccctccgtg 1560
tttctgttcc ctccaaagcc taaggacacc ctgatgatct ctcggacccc tgaagtgacc 1620
tgcgtggtgg tcgatgtgtc tcacgaggat cccgaagtga agttcaattg gtacgtggac 1680
ggcgtggaag tgcacaacgc taagaccaag cctagagagg aacagtacaa ctccacctac 1740
agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa agagtacaag 1800
tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgct cctatcgaaa agaccatcag caaggccaag 1860
ggccagccta gggaacccca ggtgtacacc ctgcctccta gcagagaaga gatgaccaag 1920
aaccaggtgt ccctgtcctg tgccgtgaag ggcttctacc cttccgatat cgccgtggaa 1980
tgggagtcca atggccagcc tgagaacaac tacaagacca cacctcctgt gctggactcc 2040
gacggctcat tcttcctggt gtccaagctg accgtggaca agtctaggtg gcagcagggc 2100
aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 2160
ctgagcctgt ctcctggaaa aggcggcgga ggatctggcg gaggtggaag cggaggcggt 2220
ggatctcagt ctgttctgac ccagcctcct tccgcttctg gcacacctgg acagagagtg 2280
accatctctt gctccggctc ctcctccaac atcggcaaca actacgtgac ctggtatcag 2340
cagctgcccg gcacagctcc caaactgctg atctacgccg actctcacag accttccggc 2400
gtgcccgata gattctccgg ctctaagtct ggcacctctg ccagcctggc tatctccggc 2460
ctgagatctg aggacgaggc cgactactac tgcgccacct gggattattc cctgtccggc 2520
tacgtgttcg gctgcggcac aaaactgaca gtgcttggag gtggtggtag tggtggtggc 2580
ggttcaggtg gcggaggaag cggcggaggc ggatctgaag ttcagctgtt ggaatctggc 2640
ggcggactgg ttcaacctgg cggatctctg agactgtctt gtgccgcctc cggctttacc 2700
ttctcctcct acgacatgtc ttgggtccga caggcccctg gcaagtgtct ggaatgggtt 2760
tcctggatct cctactccgg cggctccatc tactacgccg attctgtgaa gggcagattc 2820
accatcagcc gggacaactc caagaacacc ctgtacctgc agatgaactc cctgagagcc 2880
gaggacaccg ccgtgtacta ctgtgccaga gatgcccagc ggaacagcat gagagagttc 2940
gactattggg gccagggcac cctggtcaca gtctcttct 2979
<210> 257
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的B6的轻链
<400> 257
gatatccaga tgacccagtc tccttccagc ctgtctgcct ctgtgggcga cagagtgacc 60
atcacatgca aggccagcca ggatgtgacc cctgccgttg cttggtatca gcagaagcct 120
ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc acctcctcca gatacacagg cgtgccctcc 180
agattctccg gctctggctc tggcaccgac tttaccttta caatctccag cctgcagcct 240
gaggatatcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cacctctgac ctttggccag 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gcggacagtg gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctata gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagtc ccgtgaccaa gtctttcaac agaggcgagt gt 642
<210> 258
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的连接子
<400> 258
ggctccggca gcggaagtgg ttctggaagc ggatctggtt ccggaagtgg cagcggaggc 60
ggaggatctg gtggcggagg aagtggcgga ggcggtagtg gtggtggtgg atcaggtggt 120
ggcggatccg gcggaggtgg tagcggttct ggttcaggat ctggatctgg cagcggctcc 180
ggttctggat cc 192
<210> 259
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的B6的重链
<400> 259
gaagtgcagc tggttgaatc tggcggtgga ctggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctccggctt caccttctcc agctacgata tgtcctgggt ccgacaggcc 120
cctggcaagt ctttggaatg ggtcgccacc atctctgacg ctggcggcta catctactac 180
cgggactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa ctccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgcg cgacgaggac accgccgtgt atatctgtgc tagagagctg 300
ccttggagat acgccctgga ttattggggc cagggaacca cggttaccgt gtcctctgct 360
tctaccaagg gacccagcgt gttccctctg gctcctagct ccaagtctac ctctggcgga 420
acagctgctc tgggctgcct ggtcaaggac tactttcctg agcctgtgac agtgtcctgg 480
aactctggcg ctctgacatc tggcgtgcac acctttccag cagtgctgca gtcctccggc 540
ctgtactctc tgtcctctgt cgtgacagtg ccctcctcta gcctgggcac ccagacctac 600
atctgcaatg tgaaccacaa gccttccaac accaaggtcg acaagaaggt ggaacccaag 660
tcctgcgaca agacccacac atgccctcca tgtcctgctc cagaactgct cggaggcccc 720
tccgtgtttc tgttccctcc aaagcctaag gacaccctga tgatctctcg gacccctgaa 780
gtgacctgcg tggtggtcga tgtgtctcac gaggatcccg aagtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca caacgctaag accaagccta gagaggaaca gtacaactcc 900
acctacagag tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 960
tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg cctgctccta tcgaaaagac catcagcaag 1020
gccaagggcc agcctaggga accccaggtg tacaccctgc ctcctagcag agaagagatg 1080
accaagaacc aggtgtccct gtcctgtgcc gtgaagggct tctacccttc cgatatcgcc 1140
gtggaatggg agtccaatgg ccagcctgag aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg 1200
gactccgacg gctcattctt cctggtgtcc aagctgaccg tggacaagtc taggtggcag 1260
cagggcaacg tgttctcctg ctctgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgtctcc tggaaaa 1347
<210> 260
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的连接子
<400> 260
ggcggcggag gatctggcgg aggtggaagc ggaggcggtg gatct 45
<210> 261
<211> 753
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的1A10的scFv
<400> 261
cagtctgttc tgacccagcc tccttccgct tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
tcttgctccg gctcctcctc caacatcggc aacaactacg tgacctggta tcagcagctg 120
cccggcacag ctcccaaact gctgatctac gccgactctc acagaccttc cggcgtgccc 180
gatagattct ccggctctaa gtctggcacc tctgccagcc tggctatctc cggcctgaga 240
tctgaggacg aggccgacta ctactgcgcc acctgggatt attccctgtc cggctacgtg 300
ttcggctgcg gcacaaaact gacagtgctt ggaggtggtg gtagtggtgg tggcggttca 360
ggtggcggag gaagcggcgg aggcggatct gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga 420
ctggttcaac ctggcggatc tctgagactg tcttgtgccg cctccggctt taccttctcc 480
tcctacgaca tgtcttgggt ccgacaggcc cctggcaagt gtctggaatg ggtttcctgg 540
atctcctact ccggcggctc catctactac gccgattctg tgaagggcag attcaccatc 600
agccgggaca actccaagaa caccctgtac ctgcagatga actccctgag agccgaggac 660
accgccgtgt actactgtgc cagagatgcc cagcggaaca gcatgagaga gttcgactat 720
tggggccagg gcaccctggt cacagtctct tct 753
<210> 262
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的C4I的(HC+LC)的重链
<400> 262
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 263
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的C4I的(HC+LC)的连接子
<400> 263
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 264
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的1A10的scFv
<400> 264
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Tyr Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
130 135 140
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
145 150 155 160
Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu
165 170 175
Trp Val Ser Trp Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp
180 185 190
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
195 200 205
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ala Arg Asp Ala Gln Arg Asn Ser Met Arg Glu Phe Asp Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 265
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的C4I的(HC+LC)的轻链
<400> 265
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 266
<211> 993
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的B12的scFab-Fc+1A10的scFv
<400> 266
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ser Ile Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
210 215 220
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
260 265 270
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly
275 280 285
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
290 295 300
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
305 310 315 320
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys
325 330 335
Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
340 345 350
Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
355 360 365
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Ala Leu Trp Asp Asp Ala Phe
370 375 380
Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
385 390 395 400
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
405 410 415
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
420 425 430
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
435 440 445
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
450 455 460
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
465 470 475 480
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
485 490 495
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
500 505 510
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
515 520 525
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
530 535 540
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
545 550 555 560
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
565 570 575
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
580 585 590
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
595 600 605
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
610 615 620
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
625 630 635 640
Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
645 650 655
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
660 665 670
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser
675 680 685
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
690 695 700
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
705 710 715 720
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
725 730 735
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala
740 745 750
Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser
755 760 765
Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly
770 775 780
Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Asp Ser His Arg Pro Ser Gly
785 790 795 800
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu
805 810 815
Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala
820 825 830
Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys
835 840 845
Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
850 855 860
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly
865 870 875 880
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
885 890 895
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
900 905 910
Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Ser Trp Ile Ser Tyr Ser Gly Gly
915 920 925
Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
930 935 940
Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
945 950 955 960
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Ala Gln Arg Asn Ser
965 970 975
Met Arg Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
980 985 990
Ser
<210> 267
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的B12的轻链
<400> 267
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Arg Ala Ser Arg Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Ser Ile Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 268
<211> 64
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的连接子
<400> 268
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5 10 15
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
<210> 269
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的B12的重链
<400> 269
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ala Leu Trp Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 270
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的连接子
<400> 270
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 271
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的1A10的scFv
<400> 271
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Tyr Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
130 135 140
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
145 150 155 160
Ser Tyr Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu
165 170 175
Trp Val Ser Trp Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp
180 185 190
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
195 200 205
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ala Arg Asp Ala Gln Arg Asn Ser Met Arg Glu Phe Asp Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 272
<211> 1338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的C4I的(HC+LC)的重链
<400> 272
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc ggttactata tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtccctt attagtccaa gctccggctc tatctactac 180
gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggcttg 300
acaaaatttg actattgggg ccagggcaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 360
ggaccctctg tgttccctct ggctccttcc agcaagtcta cctctggtgg aaccgctgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ttactttcct gagcctgtga ccgtgtcttg gaactccggt 480
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctctgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgaccgt gccttctagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtccacc atgtcctgct ccagaactgc tcggcggtcc ctccgttttc 720
ctgtttccac ctaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctacaga 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgaaaaga ccatctccaa ggctaagggc 1020
cagcctcggg aacctcaagt gtacaccctg cctcctagca gagaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgtggtgcct ggtcaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtccaatg gccagcctga gaacaactac aagaccacac ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggaaaa 1338
<210> 273
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的C4I的(HC+LC)的连接子
<400> 273
ggcggcggag gatctggcgg aggtggaagc ggaggcggtg gatct 45
<210> 274
<211> 753
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的1A10的scFv
<400> 274
cagtctgttc tgacccagcc tccttccgct tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
tcttgctccg gctcctcctc caacatcggc aacaactacg tgacctggta tcagcagctg 120
cccggcacag ctcccaaact gctgatctac gccgactctc acagaccttc cggcgtgccc 180
gatagattct ccggctctaa gtctggcacc tctgccagcc tggctatctc cggcctgaga 240
tctgaggacg aggccgacta ctactgcgcc acctgggatt attccctgtc cggctacgtg 300
ttcggctgcg gcacaaaact gacagtgctt ggaggtggtg gtagtggtgg tggcggttca 360
ggtggcggag gaagcggcgg aggcggatct gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga 420
ctggttcaac ctggcggatc tctgagactg tcttgtgccg cctccggctt taccttctcc 480
tcctacgaca tgtcttgggt ccgacaggcc cctggcaagt gtctggaatg ggtttcctgg 540
atctcctact ccggcggctc catctactac gccgattccg tgaagggcag attcaccatc 600
agccgggaca actccaagaa caccctgtac ctgcagatga actccctgag agccgaggac 660
accgccgtgt actactgtgc cagagatgcc cagcggaaca gcatgagaga gttcgactat 720
tggggccagg gcaccctggt cacagtctct tct 753
<210> 275
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的C4I的(HC+LC)的轻链
<400> 275
cagtctgtgc ttacccaacc tcctagtgca agtggtaccc ctggacaacg agtaacaatc 60
agttgcactg gtagttcaag taatatagga tctaacgacg taagttggta tcagcaactt 120
cctggtacag cacctaagtt gctcatttac gcaaactccc atagaccctc tggcgtccct 180
gatcgtttca gcggtagtaa atccggtaca tcagcttcct tggctatatc tggtctcaga 240
tccgaggacg aagctgacta ttactgtggg agttgggatg actctttgtc cggctacgtt 300
tttggaggag gcaccaagtt gacagtgctg ggtcagccca aggccgcccc ctccgtgacc 360
ctgttccccc cctcctccga ggagctgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
tccgacttct accccggcgc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgactcctc ccccgtgaag 480
gccggcgtgg agaccaccac cccctccaag cagtccaaca acaagtacgc cgcctcctcc 540
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctactcctg ccaggtgacc 600
cacgagggct ccaccgtgga gaagaccgtg gcccccgccg agtgctcc 648
<210> 276
<211> 2979
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的B12的scFab-Fc+1A10的scFv
<400> 276
gatatccaga tgacccagtc tccttccaca ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgatc 60
atcacctgta gagccagccg gggcatctct tcttggctgg cttggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ctaacctgct gatctctaag gcctcctctc tggaatccgg cgtgcccagc 180
agattttccg gctctggctc tggcaccgac tttaccctga caatctccag cctgcagcct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tccagcagca tccctctgac atttggcgga 300
ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtc gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctaca gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagcc ctgtgaccaa gtctttcaac agaggcgagt gcggctccgg aagcggaagt 660
ggatcaggtt ctggatctgg cagcggtagc ggcagtggtg gcggaggttc tggcggtggc 720
ggatcaggcg gcggaggaag cggaggcgga ggcagtggcg gaggtggaag tggcggaggc 780
ggatctggaa gtggaagcgg ttctggctca ggatctggtt caggctctgg aagccaggtc 840
cagctgttgg aatctggcgg aggacttgtt cagcctggcg gctctctgag actgtcttgt 900
gccgcttctg gcttcacctt ctccagctac tggatgtcct gggtccgaca ggctcctggc 960
aaaggactgg aatgggtcgc caacatcaag caggacggct ccgagaagta ctacgtggac 1020
tccgtgaagg gcagattcac catctctcgg gacaacgcca agaactccct gtacctgcag 1080
atgaacagcc tgagagccga ggacaccgcc gtgtactact gtgctagagt ggccctgtgg 1140
gacgacgcct ttgatatctg gggacagggc acaatggtta ccgtgtcctc tgcttctacc 1200
aagggaccca gcgtgttccc tctggctcct agctccaagt ctacctctgg cggaacagct 1260
gctctgggct gcctggtcaa ggactacttt cctgagcctg tgacagtgtc ctggaactct 1320
ggcgctctga catctggcgt gcacaccttt ccagcagtgc tgcagtcctc cggcctgtac 1380
tctctgtcct ctgtcgtgac agtgccctcc tctagcctgg gcacccagac ctacatctgc 1440
aatgtgaacc acaagccttc caacaccaag gtcgacaaga aggtggaacc caagtcctgc 1500
gacaagaccc acacatgccc tccatgtcct gctccagaac tgctcggagg cccctccgtg 1560
tttctgttcc ctccaaagcc taaggacacc ctgatgatct ctcggacccc tgaagtgacc 1620
tgcgtggtgg tcgatgtgtc tcacgaggat cccgaagtga agttcaattg gtacgtggac 1680
ggcgtggaag tgcacaacgc taagaccaag cctagagagg aacagtacaa ctccacctac 1740
agagtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggattggc tgaacggcaa agagtacaag 1800
tgcaaggtgt ccaacaaggc cctgcctgct cctatcgaaa agaccatcag caaggccaag 1860
ggccagccta gggaacccca ggtgtacacc ctgcctccta gcagagaaga gatgaccaag 1920
aaccaggtgt ccctgtcctg tgccgtgaag ggcttctacc cttccgatat cgccgtggaa 1980
tgggagtcca atggccagcc tgagaacaac tacaagacca cacctcctgt gctggactcc 2040
gacggctcat tcttcctggt gtccaagctg accgtggaca agtctaggtg gcagcagggc 2100
aacgtgttct cctgctctgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 2160
ctgagcctgt ctcctggaaa aggcggcgga ggatctggcg gaggtggaag cggaggcggt 2220
ggatctcagt ctgttctgac ccagcctcct tccgcttctg gcacacctgg acagagagtg 2280
accatctctt gctccggctc ctcctccaac atcggcaaca actacgtgac ctggtatcag 2340
cagctgcccg gcacagctcc caaactgctg atctacgccg actctcacag accttccggc 2400
gtgcccgata gattctccgg ctctaagtct ggcacctctg ccagcctggc tatctccggc 2460
ctgagatctg aggacgaggc cgactactac tgcgccacct gggattattc cctgtccggc 2520
tacgtgttcg gctgcggcac aaaactgaca gtgcttggag gtggtggtag tggtggtggc 2580
ggttcaggtg gcggaggaag cggcggaggc ggatctgaag ttcagctgtt ggaatctggc 2640
ggcggactgg ttcaacctgg cggatctctg agactgtctt gtgccgcctc cggctttacc 2700
ttctcctcct acgacatgtc ttgggtccga caggcccctg gcaagtgtct ggaatgggtt 2760
tcctggatct cctactccgg cggctccatc tactacgccg attctgtgaa gggcagattc 2820
accatcagcc gggacaactc caagaacacc ctgtacctgc agatgaactc cctgagagcc 2880
gaggacaccg ccgtgtacta ctgtgccaga gatgcccagc ggaacagcat gagagagttc 2940
gactattggg gccagggcac cctggtcaca gtctcttct 2979
<210> 277
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的B12的轻链
<400> 277
gatatccaga tgacccagtc tccttccaca ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgatc 60
atcacctgta gagccagccg gggcatctct tcttggctgg cttggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ctaacctgct gatctctaag gcctcctctc tggaatccgg cgtgcccagc 180
agattttccg gctctggctc tggcaccgac tttaccctga caatctccag cctgcagcct 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tccagcagca tccctctgac atttggcgga 300
ggcaccaagg tggaaatcaa gcggacagtc gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctaca gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagcc ctgtgaccaa gtctttcaac agaggcgagt gc 642
<210> 278
<211> 192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的连接子
<400> 278
ggctccggaa gcggaagtgg atcaggttct ggatctggca gcggtagcgg cagtggtggc 60
ggaggttctg gcggtggcgg atcaggcggc ggaggaagcg gaggcggagg cagtggcgga 120
ggtggaagtg gcggaggcgg atctggaagt ggaagcggtt ctggctcagg atctggttca 180
ggctctggaa gc 192
<210> 279
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的B12的重链
<400> 279
caggtccagc tgttggaatc tggcggagga cttgttcagc ctggcggctc tctgagactg 60
tcttgtgccg cttctggctt caccttctcc agctactgga tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtcgccaac atcaagcagg acggctccga gaagtactac 180
gtggactccg tgaagggcag attcaccatc tctcgggaca acgccaagaa ctccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc tagagtggcc 300
ctgtgggacg acgcctttga tatctgggga cagggcacaa tggttaccgt gtcctctgct 360
tctaccaagg gacccagcgt gttccctctg gctcctagct ccaagtctac ctctggcgga 420
acagctgctc tgggctgcct ggtcaaggac tactttcctg agcctgtgac agtgtcctgg 480
aactctggcg ctctgacatc tggcgtgcac acctttccag cagtgctgca gtcctccggc 540
ctgtactctc tgtcctctgt cgtgacagtg ccctcctcta gcctgggcac ccagacctac 600
atctgcaatg tgaaccacaa gccttccaac accaaggtcg acaagaaggt ggaacccaag 660
tcctgcgaca agacccacac atgccctcca tgtcctgctc cagaactgct cggaggcccc 720
tccgtgtttc tgttccctcc aaagcctaag gacaccctga tgatctctcg gacccctgaa 780
gtgacctgcg tggtggtcga tgtgtctcac gaggatcccg aagtgaagtt caattggtac 840
gtggacggcg tggaagtgca caacgctaag accaagccta gagaggaaca gtacaactcc 900
acctacagag tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 960
tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg cctgctccta tcgaaaagac catcagcaag 1020
gccaagggcc agcctaggga accccaggtg tacaccctgc ctcctagcag agaagagatg 1080
accaagaacc aggtgtccct gtcctgtgcc gtgaagggct tctacccttc cgatatcgcc 1140
gtggaatggg agtccaatgg ccagcctgag aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg 1200
gactccgacg gctcattctt cctggtgtcc aagctgaccg tggacaagtc taggtggcag 1260
cagggcaacg tgttctcctg ctctgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgtctcc tggaaaa 1347
<210> 280
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的连接子
<400> 280
ggcggcggag gatctggcgg aggtggaagc ggaggcggtg gatct 45
<210> 281
<211> 753
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的1A10的scFv
<400> 281
cagtctgttc tgacccagcc tccttccgct tctggcacac ctggacagag agtgaccatc 60
tcttgctccg gctcctcctc caacatcggc aacaactacg tgacctggta tcagcagctg 120
cccggcacag ctcccaaact gctgatctac gccgactctc acagaccttc cggcgtgccc 180
gatagattct ccggctctaa gtctggcacc tctgccagcc tggctatctc cggcctgaga 240
tctgaggacg aggccgacta ctactgcgcc acctgggatt attccctgtc cggctacgtg 300
ttcggctgcg gcacaaaact gacagtgctt ggaggtggtg gtagtggtgg tggcggttca 360
ggtggcggag gaagcggcgg aggcggatct gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga 420
ctggttcaac ctggcggatc tctgagactg tcttgtgccg cctccggctt taccttctcc 480
tcctacgaca tgtcttgggt ccgacaggcc cctggcaagt gtctggaatg ggtttcctgg 540
atctcctact ccggcggctc catctactac gccgattctg tgaagggcag attcaccatc 600
agccgggaca actccaagaa caccctgtac ctgcagatga actccctgag agccgaggac 660
accgccgtgt actactgtgc cagagatgcc cagcggaaca gcatgagaga gttcgactat 720
tggggccagg gcaccctggt cacagtctct tct 753
<210> 282
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链(全长)
<400> 282
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Gly Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asn Leu Ile Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 283
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链(全长)
<400> 283
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 284
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链(全长)
<400> 284
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Tyr Ser Asp Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Met Leu His Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 285
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链(全长)
<400> 285
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Pro Gly Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ala Trp Ile Ala Arg Leu Leu Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 286
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链(全长)
<400> 286
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Tyr Ser Gly Gly Ser Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asn Arg Leu Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 287
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链(全长)
<400> 287
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 288
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链(全长)
<400> 288
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 289
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链(全长)
<400> 289
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ser Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asp Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 290
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链(全长)
<400> 290
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ala Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 291
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链(全长)
<400> 291
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ser Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ala Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 292
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：重链
<400> 292
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Tyr Ser Asp Ala Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Met Leu His Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 293
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的：轻链
<400> 293
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ser Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asp Val Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 294
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VH CDR1
<400> 294
Ser Tyr Trp Met Ser
1 5
<210> 295
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VH CDR2
<400> 295
Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 296
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VH CDR3
<400> 296
Val Ala Leu Trp Asp Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 297
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR1
<400> 297
Arg Ala Ser Arg Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 298
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR2
<400> 298
Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser
1 5
<210> 299
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗PD-L1抗体的VL CDR3
<400> 299
Gln Gln Ser Ser Ser Ile Pro Leu Thr
1 5
<210> 300
<211> 712
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的C4I的HC+1A10的scFv
<400> 300
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val
450 455 460
Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr
465 470 475 480
Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Thr
485 490 495
Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
500 505 510
Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys
515 520 525
Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp
530 535 540
Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr
545 550 555 560
Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser
565 570 575
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
580 585 590
Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
595 600 605
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
610 615 620
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Ser
625 630 635 640
Trp Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
645 650 655
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
660 665 670
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
675 680 685
Arg Asp Ala Gln Arg Asn Ser Met Arg Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
690 695 700
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
705 710
<210> 301
<211> 2136
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体01中的C4I的HC+1A10的scFv
<400> 301
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc ggttactata tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtccctt attagtccaa gctccggctc tatctactac 180
gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggcttg 300
acaaaatttg actattgggg ccagggcaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 360
ggaccctctg tgttccctct ggctccttcc agcaagtcta cctctggtgg aaccgctgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ttactttcct gagcctgtga ccgtgtcttg gaactccggt 480
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctctgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgaccgt gccttctagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtccacc atgtcctgct ccagaactgc tcggcggtcc ctccgttttc 720
ctgtttccac ctaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctacaga 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgaaaaga ccatctccaa ggctaagggc 1020
cagcctcggg aacctcaagt gtacaccctg cctcctagca gagaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgtggtgcct ggtcaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtccaatg gccagcctga gaacaactac aagaccacac ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggaaaagg cggcggagga tctggcggag gtggaagcgg aggcggtgga 1380
tctcagtctg ttctgaccca gcctccttcc gcttctggca cacctggaca gagagtgacc 1440
atctcttgct ccggctcctc ctccaacatc ggcaacaact acgtgacctg gtatcagcag 1500
ctgcccggca cagctcccaa actgctgatc tacgccgact ctcacagacc ttccggcgtg 1560
cccgatagat tctccggctc taagtctggc acctctgcca gcctggctat ctccggcctg 1620
agatctgagg acgaggccga ctactactgc gccacctggg attattccct gtccggctac 1680
gtgttcggct gcggcacaaa actgacagtg cttggaggtg gtggtagtgg tggtggcggt 1740
tcaggtggcg gaggaagcgg cggaggcgga tctgaagttc agctgttgga atctggcggc 1800
ggactggttc aacctggcgg atctctgaga ctgtcttgtg ccgcctccgg ctttaccttc 1860
tcctcctacg acatgtcttg ggtccgacag gcccctggca agtgtctgga atgggtttcc 1920
tggatctcct actccggcgg ctccatctac tacgccgatt ccgtgaaggg cagattcacc 1980
atcagccggg acaactccaa gaacaccctg tacctgcaga tgaactccct gagagccgag 2040
gacaccgccg tgtactactg tgccagagat gcccagcgga acagcatgag agagttcgac 2100
tattggggcc agggcaccct ggtcacagtc tcttct 2136
<210> 302
<211> 712
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的C4I的HC+1A10的scFv
<400> 302
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Thr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly
435 440 445
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val
450 455 460
Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr
465 470 475 480
Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Thr
485 490 495
Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala
500 505 510
Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys
515 520 525
Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp
530 535 540
Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr
545 550 555 560
Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser
565 570 575
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
580 585 590
Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
595 600 605
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
610 615 620
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val Ser
625 630 635 640
Trp Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
645 650 655
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
660 665 670
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
675 680 685
Arg Asp Ala Gln Arg Asn Ser Met Arg Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
690 695 700
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
705 710
<210> 303
<211> 2136
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 三特异性抗体02中的C4I的HC+1A10的scFv
<400> 303
gaagttcagc tgttggaatc tggcggcgga ttggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg cctctggctt caccttctcc ggttactata tgtcctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gactggaatg ggtgtccctt attagtccaa gctccggctc tatctactac 180
gccgactctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca actccaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc caagggcttg 300
acaaaatttg actattgggg ccagggcaca ctggttaccg tgtcctctgc ttctaccaag 360
ggaccctctg tgttccctct ggctccttcc agcaagtcta cctctggtgg aaccgctgct 420
ctgggctgcc tggtcaagga ttactttcct gagcctgtga ccgtgtcttg gaactccggt 480
gctctgacat ctggcgtgca cacctttcca gctgtgctgc agtcctctgg cctgtactct 540
ctgtcctctg tcgtgaccgt gccttctagc tctctgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggaacccaa gtcctgcgac 660
aagacccaca cctgtccacc atgtcctgct ccagaactgc tcggcggtcc ctccgttttc 720
ctgtttccac ctaagcctaa ggacaccctg atgatctctc ggacccctga agtgacctgc 780
gtggtggtgg atgtgtctca cgaggatccc gaagtgaagt tcaattggta cgtggacggc 840
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct agagaggaac agtacaactc cacctacaga 900
gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc 960
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctcct atcgaaaaga ccatctccaa ggctaagggc 1020
cagcctcggg aacctcaagt gtacaccctg cctcctagca gagaagagat gaccaagaac 1080
caggtgtccc tgtggtgcct ggtcaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggaatgg 1140
gagtccaatg gccagcctga gaacaactac aagaccacac ctcctgtgct ggactccgac 1200
ggctcattct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt ccagatggca gcagggcaac 1260
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaatc actacaccca gaagtccctg 1320
tctctgtccc ctggaaaagg cggcggagga tctggcggag gtggaagcgg aggcggtgga 1380
tctcagtctg ttctgaccca gcctccttcc gcttctggca cacctggaca gagagtgacc 1440
atctcttgct ccggctcctc ctccaacatc ggcaacaact acgtgacctg gtatcagcag 1500
ctgcccggca cagctcccaa actgctgatc tacgccgact ctcacagacc ttccggcgtg 1560
cccgatagat tctccggctc taagtctggc acctctgcca gcctggctat ctccggcctg 1620
agatctgagg acgaggccga ctactactgc gccacctggg attattccct gtccggctac 1680
gtgttcggct gcggcacaaa actgacagtg cttggaggtg gtggtagtgg tggtggcggt 1740
tcaggtggcg gaggaagcgg cggaggcgga tctgaagttc agctgttgga atctggcggc 1800
ggactggttc aacctggcgg atctctgaga ctgtcttgtg ccgcctccgg ctttaccttc 1860
tcctcctacg acatgtcttg ggtccgacag gcccctggca agtgtctgga atgggtttcc 1920
tggatctcct actccggcgg ctccatctac tacgccgatt ccgtgaaggg cagattcacc 1980
atcagccggg acaactccaa gaacaccctg tacctgcaga tgaactccct gagagccgag 2040
gacaccgccg tgtactactg tgccagagat gcccagcgga acagcatgag agagttcgac 2100
tattggggcc agggcaccct ggtcacagtc tcttct 2136

Claims (30)

1.一种抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，包括抗PD-L1抗体或其抗原结合片段和抗B7-H3抗体或其抗原结合片段，
其中所述抗PD-L1抗体或其片段包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：1和294组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：2、3和295组成的组的氨基酸序列的VHCDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：4、5、6、7、8、9、10、11和296组成的组的氨基酸序列的VHCDR3；(4)具有选自由SEQ ID NO：12、13、14和297组成的组的氨基酸序列的VL CDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：15和298组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQID NO：16、17、18、19和299组成的组的氨基酸序列的VL CDR3；以及
所述抗B7-H3抗体或其片段包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：20、21、22和23组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：24、25、26、27、28和29组成的组的氨基酸序列的VH CDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：30、31、32、33和34组成的组的氨基酸序列的VHCDR3；(4)具有选自由SEQ ID NO：35、36、37、38和39组成的组的氨基酸序列的VL CDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：40、41、42、43、44和45组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQ ID NO：46、47、48、49和50组成的组的氨基酸序列的VL CDR3。
2.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，
其中，所述抗PD-L1抗体或其片段包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：1和294组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：2、3和295组成的组的氨基酸序列的VHCDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：4、5和296组成的组的氨基酸序列的VH CDR3；(4)具有选自由SEQ ID NO：12和297组成的组的氨基酸序列的VL CDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：15和298组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQ ID NO：16和299组成的组的氨基酸序列的VL CDR3；以及
所述抗B7-H3抗体或其片段包括：(1)具有选自由SEQ ID NO：20和21组成的组的氨基酸序列的VH CDR1；(2)具有选自由SEQ ID NO：24和25组成的组的氨基酸序列的VH CDR2；(3)具有选自由SEQ ID NO：30和31组成的组的氨基酸序列的VH CDR3；(4)具有选自由SEQ IDNO：35和36组成的组的氨基酸序列的VL CDR1；(5)具有选自由SEQ ID NO：40和41组成的组的氨基酸序列的VL CDR2；以及(6)具有选自由SEQ ID NO：46和47组成的组的氨基酸序列的VL CDR3。
3.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，
其中，所述抗PD-Ll抗体或其片段包括轻链可变区，所述轻链可变区具有选自由SEQ IDNO:122、124、126、128、130、132、134、136、138、140和209组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ ID NO：122、124、126、128、130、132、134、136、138、140和209组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
4.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，
其中，所述抗B7-H3抗体或其片段包括轻链可变区，所述轻链可变区具有选自由SEQ IDNO：57、58、59、60、61和62组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ ID NO：57、58、59、60、61和62组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
5.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，
其中，所述抗PD-Ll抗体或其片段包括重链可变区，所述重链可变区具有选自由SEQ IDNO:121、123、125、127、129、131、133、135、137、139和211组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ ID NO：121、123、125、127、129、131、133、135、137、139和211组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
6.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，
其中，所述抗B7-H3抗体或其片段包括重链可变区，所述重链可变区具有选自由SEQ IDNO：51、52、53、54、55和56组成的组的氨基酸序列；或具有与选自由SEQ ID NO：51、52、53、54、55和56组成的组的氨基酸序列至少90％序列同一性的肽。
7.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，
其中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段能够与选自PD-L1蛋白的Y134、K162和N183的氨基酸残基中的至少一种结合。
8.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，
其中，所述抗B7-H3抗体或其抗原结合片段重新激活被B7-H3免疫检查点抑制的T细胞的活性。
9.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，
其中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段和所述抗B7-H3抗体或其抗原结合片段各自独立地为嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。
10.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，
其中，所述抗PD-L1抗体或其抗原结合片段和所述抗B7-H3抗体或其抗原结合片段各自独立地选自由以下组成的组：全IgG、Fab、Fab'、F(ab')2、scFab、dsFv、Fv、scFv、scFv-Fc、scFab-Fc、双抗体、微型抗体、scAb、dAb、半IgG及其组合。
11.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，其为IgG X scFv形式的形式。
12.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，其为(HC+LC)X scFab-Fc形式的形式。
13.根据权利要求1所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，还包括抗4-1BB抗体或其抗原结合片段。
14.根据权利要求13所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体，
其中，所述抗4-1BB抗体或其抗原结合片段选自由以下组成的组：全IgG、Fab、Fab'、F(ab')2、scFab、dsFv、Fv、scFv、scFv-Fc、scFab-Fc、双抗体、微型抗体、scAb、dAb、半IgG及其组合。
15.一种抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体，包括对人PD-L1蛋白具有结合特异性的抗PD-L1单元和对人B7-H3蛋白具有结合特异性的抗B7-H3单元。
16.根据权利要求15所述的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体，其包括Fc片段。
17.根据权利要求16所述的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体，其中，所述抗PD-L1单元包括位于所述Fc片段的N端侧的PD-L1结合位点，并且所述抗B7-H3单元包括位于所述Fc片段的N端侧的B7-H3结合位点。
18.根据权利要求17所述的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体，其中，所述PD-L1结合位点和所述B7-H3结合位点各自独立地选自由以下组成的组：Fab片段、单链Fab片段(scFab)、单域抗体(sdAb)、scFv和结合部分。
19.根据权利要求18所述的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体，其中，所述PD-L1结合位点为Fab片段，并且所述B7-H3结合位点为scFab片段。
20.根据权利要求18所述的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体，其中，所述PD-L1结合位点为scFab片段，并且所述B7-H3结合位点为Fab。
21.根据权利要求15-20中任一项所述的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体，其对于PD-L1结合为单价体并且对于B7-H3结合为单价体。
22.根据权利要求15-21中任一项所述的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体，其中，所述抗PD-L1结合单元能够特异性结合于所述人PD-L1蛋白的免疫球蛋白C(Ig C)结构域，其中所述Ig C结构域由氨基酸残基133-225组成。
23.根据权利要求22所述的抗PD-L1/抗B7-H3双特异性抗体，其中，所述抗PD-L1结合单元能够特异性结合于所述人PD-L1蛋白的氨基酸残基Y134、K162和N183。
24.一种药物组合物，包括根据权利要求1至23中任一项所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体和药学上可接受的载体。
25.根据权利要求24所述的药物组合物，用于治疗或预防与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病。
26.根据权利要求25所述的药物组合物，其中，所述与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病是癌症。
27.一种在有需要的患者中治疗癌症的方法，包括向所述患者给药有效量的根据权利要求1至23中任一项所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体。
28.根据权利要求27所述的方法，其中，所述癌症选自由以下组成的组：乳腺癌、肾癌、卵巢癌、胃癌、肝癌、肺癌、结直肠癌、胰腺癌、皮肤癌、膀胱癌、睾丸癌、子宫癌、前列腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、神经母细胞瘤、脑癌、结肠癌、鳞状细胞癌、黑色素瘤、骨髓瘤、宫颈癌、甲状腺癌、头颈癌和肾上腺癌。
29.根据权利要求1至23中任一项所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体在制备用于治疗或预防与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病的药物中的用途。
30.根据权利要求1至23中任一项所述的抗PD-L1/抗B7-H3多特异性抗体用于治疗或预防与PD-L1、B7-H3或其两者相关的疾病的用途。
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