CN114796532A - 放射性标记的伊文思蓝衍生物药物水溶液及其用途 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及放射性药物水溶液及其用途,所述放射性药物水溶液包括经伊文思蓝(EB)片段修饰的靶向分子与放射性金属核素形成的络合物以及稳定剂,所述稳定剂优选为龙胆酸、乙醇、甲硫氨酸中的一种或两种以上。
Description
技术领域
本申请涉及具有高化学稳定性和高放射化学稳定性的放射性药物水溶液及其制备方法,尤其涉及一种经伊文思蓝(EB)片段修饰的放射性核素络合物。
背景技术
药物分子在体内的循环半衰期能够很大程度上影响药物的有效性与可用性,尤其对于放射性标记的诊断和/或治疗类药物而言,放射性药物需要足够长的体内半衰期,以使得放射性药物与靶点充分结合,同时从其他非靶组织或器官逐渐清除,以实现其预期的诊断和/或治疗效果。在延长小分子药物的体内半衰期的方法中,对小分子进行结构修饰,使之在体内与人血清白蛋白(HSA)可逆结合,是一种常用的方法。伊文思蓝是一种偶氮染料,由于它对血清白蛋白具有高度亲和力,通常被用于血脑屏障完整性、血管通透性、血液体积和细胞活性的检测。使用伊文思蓝染料分子的结构片段对靶向分子(如DOTATATE、PSMA-617等)进行结构修饰,所得伊文思蓝衍生物分子,如DOTA-EB-TATE、EB-PSMA等,可通过分子与内源性血清白蛋白进行可逆的结合,将血清白蛋白作为药物分子的可逆载体,以延长药物分子在血液中的半衰期。已有文献(Bioconjugate Chem.2018,29,3213-3221)报道,伊文思蓝衍生物具有更长的体内循环半衰期、更高的肿瘤摄取率和肿瘤内更长的保留时间,并且由于其体内半衰期的延长,还可以进一步提高药物疗效、降低给药剂量与频次、减少药物毒性。
伊文思蓝染料的结构式如式Ⅵ所示:
在药物分子结构中引入的伊文思蓝片段与连接基团(Linker)的相对分子量较大,会极大地影响分子的理化性质,使得包含伊文思蓝衍生物的药物水溶液在处方工艺研究中面对更多挑战。例如获批用于治疗PSMA阳性的转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)药物PLUVICTOTM(lutetium Lu 177vipivotide tetraxetan)注射液中,药物活性成分(API)为[177Lu]Lu-PSMA-617,稳定剂为0.39mg/mL龙胆酸、50.0mg/mL抗坏血酸钠。在用伊文思蓝片段对[177Lu]Lu-PSMA-617进行结构修饰后,所得分子[177Lu]Lu-EB-PSMA的稳定性质与[177Lu]Lu-PSMA-617完全不同,抗坏血酸及其盐的加入不仅不能发挥稳定剂的作用,反而还会加速[177Lu]Lu-EB-PSMA的辐射分解。
目前还没有用于肿瘤的放射治疗和/或诊断的包含伊文思蓝衍生物的放射性药物获批上市。因此,需要发展包含伊文思蓝衍生物的药物水溶液的稳定处方和适宜的生产工艺。
发明内容
本申请的目的是提供一种放射性药物水溶液,其包含经伊文思蓝(EB)片段修饰的靶向分子与放射性金属核素形成的络合物以及稳定剂。进一步的,本申请还提供所述放射性药物水溶液的制备方法。具体来说,本发明涉及以下内容:
1.放射性药物水溶液,其包括:如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物、盐、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯的盐、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酰胺的盐、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯的溶剂化物、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酰胺的溶剂化物、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化物,与放射性金属核素形成的络合物,以及以总浓度为0.5-400mg/mL存在的稳定剂,
其中,
L1是—(CH2)m—,其中m是0至12的整数,其中每个CH2可以单独地用—O—、—NH(CO)—、或—(CO)NH—替换,条件是没有两个相邻的CH2基团被替换;
L2是C1-C60连接基团,任选地包括—O—、—S—、—S(O)—、—S(O)2—、—N(R)—、—C(=O)—、—C(=O)O—、—OC(=O)—、—N(R)C(=O)—、—C(=O)N(R)—、—OC(=O)O—、—N(R)C(=O)O—、—OC(=O)N(R)—、其中每个R为H或C1-C6烷基;
L3是—(CH2)n—,其中n是0至12的整数,其中每个CH2可以单独地用—O—、—NH(CO)—、或—(CO)NH—替换,条件是没有两个相邻的CH2基团被替换;
Ch是螯合基团;
Tg是靶向基团。
2.根据项1所述的药物水溶液,其中,L1为—NH(CO)—,L3为—NH(CO)CH2—。
4.根据项1所述的药物水溶液,其中,Tg选自能够靶向生长抑素受体(SSTR)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、叶酸受体(FR)、表皮生长因子受体或整合素的化合基团。
6.根据项1所述的药物水溶液,其中,式Ⅰ为式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ或式Ⅴ,
7.根据项1所述的药物水溶液,其中,所述放射性金属核素选自177Lu、99mTc、68Ga、64Cu、67Cu、111In、86Y、90Y、89Zr、186Re、188Re、153Sm、82Rb、166Ho、225Ac、212Pb、213Bi、212Bi或227Th。
8.根据项1~7中任一项所述的药物水溶液,其中,所述稳定剂选自龙胆酸及其盐、抗坏血酸及其盐、组氨酸、半胱氨酸及其盐、甲硫氨酸、硒甲硫氨酸、硫代硫酸盐、麦芽糖、肌醇、苯甲醇、海藻糖、聚维酮、烟酰胺、乙醇、姜黄素、褪黑素中的一种或两种以上,优选为龙胆酸、乙醇、甲硫氨酸中的一种或两种以上。
9.根据项8所述的药物水溶液,其中,在形成所述络合物的反应期间以及反应结束后分别加入所述稳定剂。
10.根据项9所述的药物水溶液,其中,在形成所述络合物的反应期间加入的稳定剂选自龙胆酸及其盐、抗坏血酸及其盐、组氨酸、半胱氨酸及其盐、甲硫氨酸、硒甲硫氨酸、硫代硫酸盐、麦芽糖、肌醇、苯甲醇、海藻糖、聚维酮、烟酰胺、乙醇、姜黄素、褪黑素中的一种或两种以上,优选为龙胆酸;
在形成所述络合物的反应结束后加入的稳定剂选自龙胆酸及其盐、抗坏血酸及其盐、组氨酸、半胱氨酸及其盐、甲硫氨酸、硒甲硫氨酸、硫代硫酸盐、麦芽糖、肌醇、苯甲醇、海藻糖、聚维酮、烟酰胺、乙醇、姜黄素、褪黑素中的一种或两种以上,优选为龙胆酸、乙醇或甲硫氨酸。
11.根据项10所述的药物水溶液,其中,在形成所述络合物的反应期间和反应结束后加入的稳定剂均选自龙胆酸,且所述龙胆酸在所述药物水溶液中以0.1-10mg/mL的总浓度存在,优选为0.5-5mg/mL。
12.根据项10所述的药物水溶液,其中,在形成所述络合物的反应期间加入的稳定剂为龙胆酸,在形成所述络合物的反应结束后加入的稳定剂为乙醇,并且在所述药物水溶液中龙胆酸以0.1-10mg/mL的浓度存在,优选为0.5-5mg/mL,乙醇以0-400mg/mL的浓度存在。
13.根据项10所述的药物水溶液,其中,在形成所述络合物的反应期间加入的稳定剂为龙胆酸,在形成所述络合物的反应结束后加入的稳定剂为甲硫氨酸,并且在所述药物水溶液中龙胆酸以0.1-10mg/mL的浓度存在,优选为0.5-5mg/mL,甲硫氨酸以0-50mg/mL的浓度存在。
14.根据项10的药物水溶液,其中还包括缓冲液,所述缓冲液可选自醋酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐或甲酸盐溶液;所述缓冲液中的缓冲盐在所述药物水溶液中的浓度为0.005-0.5M。
15.根据项10所述的药物水溶液,其中还包括助溶剂,所述助溶剂选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80、泊洛沙姆188、聚氧乙烯蓖麻油、司盘、乙醇、丙二醇、丙三醇、聚乙二醇(平均分子量为200~8000)、山梨醇、二甲基亚砜、十二烷基硫酸钠中的一种或两种以上,优选为聚山梨酯80。
16.根据项10所述的药物水溶液,其中还包括游离核素螯合剂,所述游离核素螯合剂可选自喷替酸及其盐;所述游离核素螯合剂在所述药物水溶液中以0.005-0.1mg/mL的浓度存在。
17.根据项1~16中任一项所述的药物水溶液,其特征在于,所述络合物在药物水溶液中以0.037-1850MBq/mL的活度浓度存在。
18.项1~17中任一项所述的药物水溶液在肿瘤的放射治疗和/或诊断中的用途。
发明效果
采用本申请提供的放射性药物水溶液具有如下有益效果:
在一个实施方案中,稳定剂可以为单独一种,也可以选择两种或两种以上的组合方式,在一些实施方案中,优选仅使用龙胆酸或龙胆酸与乙醇,乙醇具有良好的抗辐射分解的作用;同时,稳定剂优选不使用抗坏血酸。抗坏血酸的加入不利于伊文思蓝衍生物的稳定。
在一个实施方案中,在反应结束后添加喷替酸作为螯合剂,用以螯合未反应的游离核素离子,以减少游离的放射性核素离子在体内对健康组织产生不必要的照射。
在一个实施方案中,采用本申请方案的药物水溶液,在放射性药物制备后的初始放射化学纯度不低于93%,优选不低于95%,更优选地不低于97%。在一个实施方案中,采用本申请方案的伊文思蓝衍生物药物水溶液在32℃,湿度60%RH的储存条件下,其API的放射化学纯度在48小时内保持不低于90%,优选地,在72小时内保持不低于90%。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本申请做进一步的详细描述,给出的实施例是为了能够更透彻地理解本发明,并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
需要说明的是,在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解,技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异作为区分组件的方式,而是以组件在功能上的差异作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为开放式用语,故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式,然而所述描述乃以说明书的一般原则为目的,并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
本申请涉及一种放射性药物水溶液,其中包括经伊文思蓝(EB)片段修饰的靶向分子与放射性金属核素形成的络合物以及稳定剂。
在一个具体的实施方式中,所述经伊文思蓝(EB)片段修饰的靶向分子(或本申请说明书中所述“伊文思蓝衍生物分子”)为如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物、盐、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯的盐、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酰胺的盐、或此如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯的溶剂化物、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酰胺的溶剂化物、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化物。
其中,
L1是—(CH2)m—,其中m是0至12的整数,其中每个CH2可以单独地用—O—、—NH(CO)—、或—(CO)NH—替换,条件是没有两个相邻的CH2基团被替换;
L2是C1-C60连接基团,任选地包括—O—、—S—、—S(O)—、—S(O)2—、—N(R)—、—C(=O)—、—C(=O)O—、—OC(=O)—、—N(R)C(=O)—、—C(=O)N(R)—、—OC(=O)O—、—N(R)C(=O)O—、—OC(=O)N(R)—、其中每个R为H或C1-C6烷基;
L3是—(CH2)n—,其中n是0至12的整数,其中每个CH2可以单独地用—O—、—NH(CO)—、或—(CO)NH—替换,条件是没有两个相邻的CH2基团被替换;
Ch是螯合基团;
Tg是靶向基团。
伊文思蓝(Evans Blue,EB)是一种非膜渗透性的偶氮染料制剂,因其在血液中与血清白蛋白有很高的亲和力,因此利用其与白蛋白可逆结合的性质,以截短的EB片段(truncated Evans Blue,tEB)修饰靶向分子,使靶向分子能够通过tEB片段与内源性血清白蛋白进行可逆的结合,将血清白蛋白作为药物分子的可逆载体,以延长药物分子在血液中的半衰期,增加药物分子可用性,进一步增加药物分子在肿瘤中的积累与保留时间。伊文思蓝(Evans Blue,EB)染料的结构式如式Ⅵ所示:
在本申请一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合物。
在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物或盐。在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受的酯的盐。在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受的酰胺的盐。在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受的酯的溶剂化物。
在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受的酰胺的溶剂化物。在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受盐的溶剂化物。所述伊文思蓝衍生物分子可以通过常规化学方法从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。
在一个具体的实施方式中,式Ⅰ中的L1为—NH(CO)—,L3为—NH(CO)CH2—,即式Ⅰ的化合物为式Ⅶ的化合物:
在一个具体的实施方式中,式Ⅰ中的螯合基团Ch选自
螯合基团具有两个或两个以上的配位原子并能与同一中心原子结合形成环状结构的基团,其可以与通常为金属离子的单个中心原子形成两个或更多个单独的配位键。本申请中的螯合基团是具有多个N,O或S杂原子的有机基团,并且具有允许两个或更多个杂原子与相同金属离子形成键的结构。在本申请的具体实施方式中,所述螯合基团用于与放射性金属核素形成键的结构。
在本申请一个具体的实施方式中,式Ⅰ中的靶向基团Tg为能够特异性靶向某一生物靶点的化合基团。在一些实施方案中,Tg选自能够靶向生长抑素受体(SSTR)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、叶酸受体(FR)、表皮生长因子受体或整合素的化合基团。在一些具体的实施方式中,靶向基团Tg选自
在本申请一个具体的实施方式中,式Ⅰ的化合物为EB-PSMA,结构式如式Ⅱ所示:
在本申请一个具体的实施方式中,式Ⅰ的化合物为DOTA-EB-TATE,结构式如式Ⅲ所示:
在本申请一个具体的实施方式中,式Ⅰ的化合物为EB-FAPI,结构式如式Ⅳ所示:
在本申请一个具体的实施方式中,式Ⅰ的化合物为NMEB-RGD,结构式如式Ⅴ所示:
在本申请的具体实施方式中,与伊文思蓝衍生物分子形成络合物的放射性金属核素选自177Lu、99mTc、68Ga、64Cu、67Cu、111In、86Y、90Y、89Zr、186Re、188Re、153Sm、82Rb、166Ho、225Ac、212Pb、213Bi、212Bi、227Th。所述放射性金属核素可以通过螯合,或通过其它方式,如化学领域中已知的常规共价键或离子键与螯合基团Ch结合。放射性核素可以是合适的目的,例如放射治疗和/或诊断。
在本申请一个具体的实施方式中,所述放射性金属核素在药物水溶液制剂中以0.037-1850MBq/mL的体积放射性浓度存在。
在本申请的一个具体的实施方式中,所述放射性药物水溶液中的稳定剂为抗放射性分解降解稳定剂,具体的,所述稳定剂选自龙胆酸及其盐、抗坏血酸及其盐、组氨酸、半胱氨酸及其盐、甲硫氨酸、硒甲硫氨酸、硫代硫酸盐、麦芽糖、肌醇、苯甲醇、海藻糖、聚维酮、烟酰胺、乙醇、姜黄素、褪黑素中的一种或两种以上,优选为龙胆酸、乙醇、甲硫氨酸中的一种或两种以上。
在一个具体的实施方式中,所述稳定剂在药物水溶液中的总浓度为0.5-400mg/mL,例如可以为0.5、100、150、200、250、300、350、400mg/mL。优选的,为1-80mg/mL,例如可以为1、10、20、30、40、50、60、70、80mg/mL。
在一个具体的实施方式中,所述稳定剂在形成核素络合物的络合反应期间以及反应结束后分别加入。其中,所述在络合反应期间加入是指,所述稳定剂与形成络合物的放射性核素溶液和伊文思蓝衍生物分子溶液在达成足以发生络合反应的条件时共同组成反应相溶液;所述在反应结束后加入是指,发生所述络合反应一定时间、络合物已形成完成后所加入稳定剂。进一步的,在所述络合反应期间加入的稳定剂为第一稳定剂,在反应结束后加入的稳定剂为第二稳定剂。第一稳定剂一般为具有抗氧化性质的小分子化合物,用以在高辐射下降低辐射分解。第二稳定剂的主要作用是维持制剂在储存期间的稳定性。第一稳定剂和第二稳定剂可以选自相同的稳定剂,也可以选自不同的稳定剂。
在一个具体的实施方式中,第一稳定剂选自龙胆酸及其盐、抗坏血酸及其盐、组氨酸、半胱氨酸及其盐、甲硫氨酸、硒甲硫氨酸、硫代硫酸盐、麦芽糖、肌醇、苯甲醇、海藻糖、聚维酮、烟酰胺、乙醇、姜黄素、褪黑素中的一种或两种以上,优选为龙胆酸。
在一个具体的实施方式中,第二稳定剂选自龙胆酸及其盐、抗坏血酸及其盐、组氨酸、半胱氨酸及其盐、甲硫氨酸、硒甲硫氨酸、硫代硫酸盐、麦芽糖、肌醇、苯甲醇、海藻糖、聚维酮、烟酰胺、乙醇、姜黄素、褪黑素中的一种或两种以上,优选为龙胆酸、乙醇或甲硫氨酸。
在一个优选的实施方式中,所述第一稳定剂和第二稳定剂相同,均选自龙胆酸或其盐。其中,在络合发应过程中加入龙胆酸(即第一稳定剂),其在反应体系中的浓度范围为0.6-20mg/mL,优选为2-10mg/mL,例如可以为2、3、4、5、6、7、8、9、10mg/mL。在反应结束后的制剂中继续加入龙胆酸(即第二稳定剂),使龙胆酸在整个药物水溶液中以0.1-10mg/mL的总浓度存在,优选为0.5-5mg/mL,,例如可以为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、2.8、3.0、3.2、3.5、3.8、4.0、4.5、5.0mg/mL。
在另一些优选的实施方式中,所述稳定剂为两种不同的稳定剂。
在一个具体的实施方式中,在所述络合反应期间的反应体系中加入的第一稳定剂为龙胆酸或其盐。其在药物水溶液中以0.5-5mg/mL的浓度存在,优选为0.5-2mg/mL,例如可以为0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0mg/mL。在反应结束后加入的第二稳定剂为乙醇,其在药物水溶液中以0-400mg/mL的浓度存在,优选为10-120mg/mL,例如可以为10、30、50、60、70、80、100、120mg/mL。其体积分数为0%-50%,优选为1%-15%,例如可以为1%、3%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、12%、15%。
在一个具体的实施方式中,在所述络合反应期间的反应体系中加入的第一稳定剂为龙胆酸或其盐,其在药物水溶液中以0.5-5mg/mL的浓度存在,优选为0.5-2mg/mL,例如可以为0.5、0.8、1.0、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.8、2.0mg/mL。在反应结束后加入的第二稳定剂为L-甲硫氨酸,其在药物水溶液中以0-50mg/mL的浓度存在,优选为1-10mg/mL,例如可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10mg/mL。
在另一些具体的实施方式中,两种稳定剂优选不含有抗坏血酸及其盐。
在一个具体的实施方式中,所述药物水溶液中还包括缓冲液。所述缓冲液可以在所述络合反应期间加入,用以调节反应相溶液的pH,也可以在反应结束后再次加入用以调节制剂溶液的pH。两次所加入的缓冲液可以一样也可以不一样。缓冲液可以选用醋酸盐体系(如醋酸-醋酸钠体系、醋酸钠体系)、柠檬酸盐体系(如柠檬酸-柠檬酸钠体系)、磷酸盐体系(如磷酸二氢钠-磷酸氢二钠体系)、甲酸盐体系(如甲酸-甲酸钠体系)的溶液。在一个优选的实施方式中,在反应相溶液中缓冲盐的浓度为0.01-2.0M。在一个优选的实施方式中,在最终药物水溶液中总的缓冲盐浓度为0.005-0.5M。
在一个具体的实施方式中,所述药物水溶液中还包括助溶剂,其作用在于降低API在各接触材料表面(尤其是玻璃和塑料表面)的吸附。所述助溶剂选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80、泊洛沙姆188、聚氧乙烯蓖麻油、司盘、乙醇、丙二醇、丙三醇、聚乙二醇(平均分子量为200~8000)、山梨醇、二甲基亚砜、十二烷基硫酸钠中的一种或两种以上,优选为聚山梨酯80。在一个具体的实施方式中,所述助溶剂在药物水溶液中的浓度为0.01-10mg/mL,优选0.05-1.0mg/mL,例如可以为0.05、0.1、0.3、0.5、0.6、0.7、0.8、1.0mg/mL。
在一个具体的实施方式中,所述的药物水溶液中还包括游离金属核素的螯合剂。所述螯合剂的作用为与药物水溶液中未反应的游离核素离子发生络合,以减少游离的放射性核素离子在体内对健康组织产生不必要的照射。因而要求该螯合剂须具备较强的与核素离子络合的能力,即便在注射液进入生物体内被血浆稀释后,仍能在较低的浓度条件下与游离的核素离子迅速反应,该络合反应需要迅速,条件温和,在室温条件下就可完全进行。在一个具体的实施方式中,所述螯合剂为喷替酸或其盐,优选为喷替酸。所述螯合剂在药物水溶液中的浓度为0.005-0.1mg/mL,例如可以为0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1mg/mL。在该范围内,喷替酸对游离核素离子有充分的络合能力,并且该络合物在辐射分解作用下也能至少能保持至少48h的稳定性,更优的能够保持72h稳定,即不会由于该螯合剂的辐射分解而造成游离核素离子的释放。
本申请还提供了将所述药物水溶液应用于肿瘤的放射治疗和/或诊断中的方案,包括通过向患者施用有效量的所述药物水溶液,或与其他一种或多种肿瘤免疫学治疗剂共同组成的组合物。在一些具体的实施方式中,所述药物水溶液或包含其的组合物可用于治疗神经内分泌瘤、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、结直肠癌、黑色素瘤等。在另一些具体的实施方式中,本申请提供的药物水溶液或包含其的组合物还可用于制备预防或治疗糖尿病、阿尔茨海默病的药物中。
在一个具体的实施方式中,采用本申请所提供的药物水溶液,至少能够使在32℃,湿度60%RH储存条件下,API的放射化学纯度在48h内不低于90%,更优地在72h内放射化学纯度不低于90%,所述放射化学纯度为通过HPLC测定的数值。
本申请还涉及一种放射性药物水溶液的制备方法,在一个具体的实施方式中,包括如下步骤:
将含有第一稳定剂的溶液与含有放射性核素的溶液在反应容器中混合;
给定时间后,将含有所述伊文思蓝衍生物分子的溶液加入至所述反应容器,优选所述给定时间为0.1分钟~20分钟,进一步优选3分钟~10分钟;
所述伊文思蓝衍生物分子与放射性核素发生反应得到所述放射性核素络合物;
反应给定时间后向所述反应容器中加入含有第二稳定剂的溶液;
回收得到的所述放射性药物水溶液;
其中,所述伊文思蓝衍生物分子为如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物、盐、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯的盐、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酰胺的盐、或此如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯的溶剂化物、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酰胺的溶剂化物、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化物,
其中,
L1是—(CH2)m—,其中m是0至12的整数,其中每个CH2可以单独地用—O—、—NH(CO)—、或—(CO)NH—替换,条件是没有两个相邻的CH2基团被替换;
L2是C1-C60连接基团,任选地包括—O—、—S—、—S(O)—、—S(O)2—、—N(R)—、—C(=O)—、—C(=O)O—、—OC(=O)—、—N(R)C(=O)—、—C(=O)N(R)—、—OC(=O)O—、—N(R)C(=O)O—、—OC(=O)N(R)—、其中每个R为H或C1-C6烷基;
L3是—(CH2)n—,其中n是0至12的整数,其中每个CH2可以单独地用—O—、—NH(CO)—、或—(CO)NH—替换,条件是没有两个相邻的CH2基团被替换;
Ch是螯合基团;
Tg是靶向基团。
在本申请的一个实施方式中,所述放射性药物水溶液包含放射性核素络合物,所述放射性核素络合物是由放射性核素与所述伊文思蓝衍生物分子形成的。
在本申请具体的实施方式中,所述含有放射性核素的溶液为含有放射性金属元素的溶液,在一些具体的实施方式中,所述放射性核素选自177Lu、99mTc、68Ga、64Cu、67Cu、111In、86Y、90Y、89Zr、186Re、188Re、153Sm、82Rb、166Ho、225Ac、212Pb、213Bi、212Bi或227Th。在一个具体的实施方式中,所述放射性核素为177Lu,且在与伊文思蓝衍生物分子发生络合反应的步骤中,所述放射性核素的比活度不低于20Ci/mg,优选为不低于60Ci/mg,最优选为不低于80Ci/mg。过低比活度的放射性核素会影响放射性标记效率。
在本申请中,所述伊文思蓝衍生物分子为以截短的伊文思蓝片段(truncatedEvans Blue,tEB)修饰的靶向分子。在一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合物。在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物或盐。在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受的酯的盐。在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受的酰胺的盐。在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受的酯的溶剂化物。在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受的酰胺的溶剂化物。在另一些具体的实施方式中,伊文思蓝衍生物分子为式Ⅰ化合药学上可接受盐的溶剂化物。
在一个具体的实施方式中,式Ⅰ中的L1为—NH(CO)—,L3为—NH(CO)CH2—,即式Ⅰ的化合物为式Ⅶ的化合物:
在本申请一个具体的实施方式中,式Ⅰ中的靶向基团Tg为能够特异性靶向某一生物靶点的化合基团。在一些实施方案中,Tg选自能够靶向生长抑素受体(SSTR)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、叶酸受体(FR)、表皮生长因子受体或整合素的化合基团。在一些具体的实施方式中,靶向基团Tg选自
在本申请一个具体的实施方式中,式Ⅰ的化合物为EB-PSMA,结构式如式Ⅱ所示:
在本申请一个具体的实施方式中,式Ⅰ的化合物为DOTA-EB-TATE,结构式如式Ⅲ所示:
在本申请一个具体的实施方式中,式Ⅰ的化合物为EB-FAPI,结构式如式Ⅳ所示:
在本申请一个具体的实施方式中,式Ⅰ的化合物为NMEB-RGD,结构式如式Ⅴ所示:
在本申请一个具体的实施方式中,所述含有放射性核素的溶液是从原料瓶中取出后加入至所述反应容器中,并且在所述含有放射性核素的溶液被取出后,以冲洗液对原料瓶进行冲洗,以提取原料瓶中残留的核素溶液,并将冲洗后的溶液转入所述反应容器中与所述含有放射性核素的溶液混合。
在一个具体的实施方式中,所述冲洗液为水溶液,优选地选自含有第一稳定剂的溶液、含有缓冲盐的溶液、水或氯化钠注射液。
在一个优选的实施方式中,所述冲洗液选自注射用水或氯化钠注射液。
在一个优选的实施方式中,使用所述冲洗液重复所述冲洗一次或更多次。
在本申请一个具体的实施方式中,所述第一稳定剂选自龙胆酸及其盐、抗坏血酸及其盐、组氨酸、半胱氨酸及其盐、甲硫氨酸、硒甲硫氨酸、硫代硫酸盐、麦芽糖、肌醇、苯甲醇、海藻糖、聚维酮、烟酰胺、乙醇、姜黄素、褪黑素中的一种或两种以上,优选为龙胆酸。
在本申请一个具体的实施方式中,将含有第一稳定剂的溶液与含有放射性核素的溶液在反应容器中混合,经过给定时间后,再将含有所述伊文思蓝衍生物分子的溶液加入至所述反应容器。所述给定时间可使第一稳定剂与核素溶液充分接触,淬灭其中存在的辐射分解带来的大量自由基,从而保护随后加入反应体系的伊文思蓝衍生物分子不被活性自由基攻击,利于提高最终产物的初始放化纯。
在一个优选的实施方式中,所述给定时间为0.1分钟~20分钟,进一步优选为3分钟~10分钟,例如可以为3、4、5、6、7、8、9、10分钟。
在一个具体的实施方式中,将所述含有伊文思蓝衍生物分子的溶液加入至反应相溶液中与放射性核素发生反应得到所述放射性核素络合物。
在一个具体的实施方式中,所述伊文思蓝衍生物分子(标记前体)溶液选自浓度为0.05-10.0mg/mL的化合物溶液,其制备方法为将标记前体的冻干粉溶解于灭菌注射用水或乙醇中。
在一个优选的实施方式中,所述放射性核素络合物为177Lu-DOTA-EB-TATE。
在一个具体的实施方式中,所述伊文思蓝衍生物分子与放射性核素发生反应得到所述放射性核素络合物的反应过程中,存在的第一稳定剂为龙胆酸,其在上述反应相中的浓度为0.6-20.0mg/mL,优选为2-10mg/mL,最优选为3.0-5.0mg/mL,例如可以为3.0、3.2、3.5、3.8、4.0、4.2、4.5、4.8、5.0mg/mL。当龙胆酸在反应相体系中的浓度超过了控制范围,会极大地减慢反应速率,不利于整个合成过程;而龙胆酸浓度低于控制浓度时,则会由于稳定剂浓度的不足而使辐射降解杂质增加。
在一个具体的实施方式中,所述伊文思蓝衍生物分子与放射性核素发生反应所形成的反应相溶液中,所述伊文思蓝衍生物分子与放射性核素之间的摩尔比为1.5–50,优选为5–20,例如可以为5、8、10、12、15、18、20。所述摩尔比指反应体系中伊文思蓝衍生物分子(标记前体)与放射性核素的摩尔量之比。在反应相溶液中,摩尔比的提高有利于放射性核素的完全反应,使标记率提高,但未被标记的标记前体会在生物体内与API产生竞争。而过低的摩尔比使API缺乏载体,在生物体内容易被其他非特异性靶点结合而损失,达不到预想的治疗或诊断效果。
在本申请的实施方式中,还可以对所述反应相溶液中反应相的浓度进行控制。理论上,反应相浓度越高,标记反应速率越快,但同时由放射性核素引起的辐射分解效应也越强,因此反应相浓度不能过高,而过低的反应相浓度则使反应体积变大,限制大批量的核素络合物生产。对本申请的制备方法而言,在反应相溶液中,所述伊文思蓝衍生物分子浓度在0.01-1.0mg/mL范围内,优选0.05-0.5mg/mL,例如可以为0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5mg/mL。
在本申请的实施方式中,所述伊文思蓝衍生物分子与放射性核素发生络合反应的步骤中,对反应温度与时间进行控制,以此来控制达到反应标记率>90%,化学纯>90%,放化纯>90%。在一个具体的实施方式中,所述反应温度为50-100℃,优选为60-80℃,例如可以为60、62、65、68、70、72、75、78、80℃;反应时间为5-60分钟,例如可以为5、10、12、15、18、20、25、30、40、50、60分钟,优选为10-30分钟,最优选10-20分钟。
在一个具体的实施方式中,所述伊文思蓝衍生物分子与放射性核素经过上述反应时间以形成络合物反应结束后,加入所述第二稳定剂。具体的,所述第二稳定剂选自龙胆酸及其盐、抗坏血酸及其盐、组氨酸、半胱氨酸及其盐、甲硫氨酸、硒甲硫氨酸、硫代硫酸盐、麦芽糖、肌醇、苯甲醇、海藻糖、聚维酮、烟酰胺、乙醇、姜黄素、褪黑素中的一种或两种以上,优选为龙胆酸、乙醇或甲硫氨酸。
在一个具体的实施方式中,在所述放射性药物水溶液中,第二稳定剂的浓度为0-400mg/mL,例如可以为0、50、100、150、200、250、300、350、400mg/mL。
在本申请的实施方式中,所述制备方法还包括在所述伊文思蓝衍生物分子与放射性核素发生反应之前加入缓冲盐溶液,优选地,所述缓冲盐溶液存在于所述含有第一稳定剂的溶液中。
在一个具体的实施方式中,所述缓冲盐溶液选自醋酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐或甲酸盐溶液,优选为醋酸-醋酸钠缓冲盐溶液。
缓冲盐溶液的加入可以调节反应体系的pH值,控制反应相体系的pH值在3.5-6.0范围内,例如可以为,3.5、3.8、4、4.2、4.4、4.6、4.8、5、5.5、6,优选pH值为3.5-5。在一个具体的实施方式中,控制最终制剂溶液的pH值为4–6,例如可以为4、4.2、4.5、4.8、5、5.2、5.5、5.8、6。
在一个具体的实施方式中,在反应给定时间后向所述反应容器中加入含有第二稳定剂的溶液的步骤还包括向所述反应容器中加入助溶剂。
在一个具体的实施方式中,所述助溶剂选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80、泊洛沙姆188、聚氧乙烯蓖麻油、司盘、乙醇、丙二醇、丙三醇、聚乙二醇(平均分子量为200~8000)、山梨醇、二甲基亚砜、十二烷基硫酸钠中的一种或两种以上,优选为聚山梨酯80。在一个具体的实施方式中,加入所述助溶剂使其在药物水溶液中的浓度为0.01-10mg/mL,优选为0.05-1.0mg/mL、例如可以为0.05、0.1、0.3、0.5、0.6、0.7、0.8、1.0mg/mL。
在一个具体的实施方式中,在反应给定时间后向所述反应容器中加入含有第二稳定剂的溶液的步骤还包括向所述反应容器中加入游离核素螯合剂,所述螯合剂可选自喷替酸及其盐,优选为喷替酸。在一个优选的实施方式中,加入所述螯合剂使其在药物水溶液中的浓度为0.005-0.1mg/mL,例如可以为0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1mg/mL。
在一个具体的实施方式中,本申请的制备方法还包括对放射性药物水溶液进行过滤除菌,在一个具体的实施方式中,使放射性药物水溶液通过0.22μm滤膜过滤除菌。
在一个具体的实施方式中,本申请的制备方法还包括对所述放射性水溶液进行稀释,优选地,加入氯化钠注射液进行稀释以进行回收。
在一个优选的实施方式中,所述过滤除菌和稀释在加入含有第二稳定剂的溶液后进行。本申请中并不限定所述过滤除菌和稀释步骤的先后顺序,即可以先进行过滤除菌再进行稀释,或者先进行稀释,再通过滤膜过滤除菌,随后进行回收。
在一个具体的实施方式中,本申请提供了一种以如下顺序制备177Lu-DOTA-EB-TATE放射性药物水溶液的方法:
a.将含有500mCi 177Lu和盐酸的核素溶液从原料瓶转移至反应瓶中;
b.将含有2.0M甲酸-甲酸钠缓冲盐和50mg/mL龙胆酸的冲洗液1mL加入上述原料瓶中,用以冲洗原料瓶中残留的177Lu溶液;
c.将冲洗后原料瓶中的混合溶液一并转入反应瓶中;
d.用3mL注射用水加入上述原料瓶中,用以冲洗原料瓶;
e.将冲洗后原料瓶中的混合溶液一并转入反应瓶中;
f.将含有上述溶液的反应瓶于室温下静置10分钟;
g.将0.5mL DOTA-EB-TATE溶液加入反应瓶中;
h.将该反应瓶升温至90℃,反应15分钟;
i.反应结束后冷却反应瓶,向反应瓶中加入含有0.5mg/mL喷替酸、45mg/mL龙胆酸、2.0mg/mL聚山梨酯80的混合溶液10mL;
j.将所得溶液通过0.22μm滤膜过滤除菌;
k.用35mL氯化钠注射液稀释所得溶液;
l.回收所得产物。
实施例
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊要求,均为常规方法。
下述实施例中使用的前体EB-PSMA按照文献方法(Bioconjugate Chem.2018,29,3213-3221)合成得到。
下述实施例中使用的前体DOTA-EB-TATE按照文献方法(Theranostics.2018;8:735-745)合成得到。
下述实施例中使用的前体EB-FAPI按照文献方法(Theranostics.2022;12(1):422-433)合成得到。
下述实施例中所使用的龙胆酸购自成都普瑞法科技开发有限公司,喷替酸购自江西阿尔法高科药业有限公司。
其他材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1:药物水溶液中稳定剂的选择
处方(1):[177Lu]Lu-DOTA-EB-TATE药物水溶液的制备
反应相溶液的配制:在反应容器中加入10mCi无载体氯化镥[177Lu]溶液(约10μL)、20μL甲酸-甲酸钠缓冲盐溶液(其中含有50mg/mL龙胆酸)、60μL注射用水,混合均匀后,将此混合溶液在室温下静置3分钟。然后继续向该反应容器中加入10μL DOTA-EB-TATE前体溶液,并混合均匀,该混合溶液为反应相溶液。
加热反应与冷却:将上述反应相溶液置于预热至90℃的加热器中反应15分钟,反应结束后取出反应容器冷却15分钟。
配辅与稀释:在反应相溶液冷却至室温后,向反应容器中加入200μL配辅溶液,配辅溶液中含有45mg/mL龙胆酸、0.5mg/mL喷替酸和2.0mg/mL聚山梨酯80。最后向反应容器中加入氯化钠注射液将总体积稀释至1.0mL,得到最终制剂溶液。
最终制剂溶液中含有10mg/mL龙胆酸、0.1mg/mL喷替酸、0.4mg/mL聚山梨酯80,其中API分子[177Lu]Lu-DOTA-EB-TATE在校准时刻的活度浓度为10mCi/mL,校准时刻是指生产结束时间(T0)。将制剂溶液储存于稳定性箱中,储存温度设置为32℃,储存湿度设置为60%RH。
在T0时刻使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%,在T0时刻使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%。
在T0+48h时刻取出稳定箱中的制剂溶液150μL用于稳定性检验。使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为94%,使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%。
在T0+72h时刻取出稳定箱中的制剂溶液150μL用于稳定性检验。使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为92%,使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%。
处方(2):[177Lu]Lu-DOTA-EB-TATE药物水溶液的制备
反应相溶液的配制:在反应容器中加入10mCi无载体氯化镥[177Lu]溶液(约10μL)、20μL甲酸-甲酸钠缓冲盐溶液(其中含有50mg/mL龙胆酸)、160μL注射用水,混合均匀后,将此混合溶液在室温下静置3分钟。然后继续向该反应容器中加入10μL DOTA-EB-TATE前体溶液,并混合均匀,该混合溶液为反应相溶液。
加热反应与冷却:将上述反应相溶液置于预热至65℃的加热器中反应40分钟,反应结束后取出反应容器冷却15分钟。
配辅与稀释:在反应相溶液冷却至室温后,向反应容器中加入100μL配辅溶液,配辅溶液中含有0.3mg/mL喷替酸和1.0mg/mL聚山梨酯80。再加入无水乙醇50mg,最后向反应容器中加入氯化钠注射液将总体积稀释至1.0mL,得到最终制剂溶液。
最终制剂溶液中含有1mg/mL龙胆酸、50mg/mL乙醇、0.03mg/mL喷替酸、0.1mg/mL聚山梨酯80,其中API分子[177Lu]Lu-DOTA-EB-TATE在校准时刻的活度浓度为10mCi/mL,校准时刻是指生产结束时间(T0)。将制剂溶液储存于稳定性箱中,储存温度设置为32℃,储存湿度设置为60%RH。
在T0时刻使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%,在T0时刻使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%。
在T0+48h时刻取出稳定箱中的制剂溶液150μL用于稳定性检验。使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为93%,使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%。
在T0+72h时刻取出稳定箱中的制剂溶液150μL用于稳定性检验。使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为92%,使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为99%。
处方(3):[177Lu]Lu-EB-FAPI药物水溶液的制备
反应相溶液的配制:在反应容器中加入20mCi无载体氯化镥[177Lu]溶液(约20μL)、20μL醋酸铵缓冲盐溶液(其中含有50mg/mL龙胆酸)、40μL注射用水,混合均匀后,将此混合溶液在室温下静置10分钟。然后继续向该反应容器中加入20μL EB-FAPI前体溶液,并混合均匀,该混合溶液为反应相溶液。其中前体EB-FAPI为式Ⅳ的化合物,R=H。
加热反应与冷却:将上述反应相溶液置于预热至95℃的加热器中反应30分钟,反应结束后取出反应容器冷却15分钟。
配辅与稀释:在反应相溶液冷却至室温后,向反应容器中加入500μL配辅溶液,配辅溶液中含有20mg/mL甲硫氨酸、4.0mg/mL龙胆酸、0.2mg/mL喷替酸和0.8mg/mL聚山梨酯80。最后向反应容器中加入氯化钠注射液将总体积稀释至1.0mL,得到最终制剂溶液。
最终制剂溶液中含有3.0mg/mL龙胆酸、10mg/mL甲硫氨酸、0.1mg/mL喷替酸、0.4mg/mL聚山梨酯80,其中API分子[177Lu]Lu-EB-FAPI在校准时刻的活度浓度为20mCi/mL,校准时刻是指生产结束时间(T0)。将制剂溶液储存于稳定性箱中,储存温度设置为32℃,储存湿度设置为60%RH。
在T0时刻使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为98%,在T0时刻使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%。
在T0+48h时刻取出稳定箱中的制剂溶液150μL用于稳定性检验。使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为96%,使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%。
在T0+72h时刻取出稳定箱中的制剂溶液150μL用于稳定性检验。使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为93%,使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%。
处方(4):[177Lu]Lu-EB-PSMA药物水溶液的制备
反应相溶液的配制:在反应容器中加入10mCi无载体氯化镥[177Lu]溶液(约10μL)、20μL醋酸-醋酸钠缓冲盐溶液(其中含有50mg/mL龙胆酸)、60μL注射用水,混合均匀后,将此混合溶液在室温下静置3分钟。然后继续向该反应容器中加入10μL EB-PSMA前体溶液,并混合均匀,该混合溶液为反应相溶液。
加热反应与冷却:将上述反应相溶液置于预热至80℃的加热器中反应15分钟,反应结束后取出反应容器冷却15分钟。
配辅与稀释:在反应相溶液冷却至室温后,向反应容器中加入100μL配辅溶液,配辅溶液中含有30mg/mL抗坏血酸、1.0mg/mL喷替酸和4.0mg/mL聚山梨酯80。最后向反应容器中加入氯化钠注射液将总体积稀释至1.0mL,得到最终制剂溶液。
最终制剂溶液中含有1.0mg/mL龙胆酸、3.0mg/mL抗坏血酸、0.1mg/mL喷替酸、0.4mg/mL聚山梨酯80,其中API分子[177Lu]Lu-EB-PSMA在校准时刻的活度浓度为10mCi/mL,校准时刻是指生产结束时间(T0)。将制剂溶液储存于稳定性箱中,储存温度设置为32℃,储存湿度设置为60%RH。
在T0时刻使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为93%。
在T0+48h时刻取出稳定箱中的制剂溶液150μL,用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为81%。
在T0+72h时刻取出稳定箱中的制剂溶液150μL,用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为66%。
实验结果分析:采用如上述处方(1)~(3)中以龙胆酸、龙胆酸和乙醇、龙胆酸和甲硫氨酸作为稳定剂制备的药物水溶液,在48h和72h均能得到90%以上的API放化纯,明显优于处方(4)中采用的抗坏血酸的稳定剂选择。这表明本申请发明内容所提供的药物水溶液能保持更佳的稳定性。
实施例2反应温度与时间的控制
反应相溶液的配制:与处方(3)相同。
加热反应与冷却:将上述反应相溶液置于室温或已预热至不同温度的加热器中反应120分钟。考察的温度包含室温、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、95℃、100℃。
标记率检测:在反应进行至不同时间点时,取出5μCi反应相溶液进行ITLC检测,取样前后反应相溶液均置于加热器中反应,即取样过程不影响反应的持续进行。计算标记率(ITLC)=与前体分子螯合的放射性活度÷总放射性活度,考察的时间包括1、5、10、30、45、60、90、120分钟。
对标记率而言,反应温度与反应时间是两个互补的工艺条件,“在较低温度下反应较长时间”或“在较高温度下反应较短时间”均能使反应标记率(ITLC)≥99%,此时我们认为标记反应已完全进行。但考虑到高温会促使化学杂质和放射化学杂质生成,而大于60分钟的反应时间则不利于工艺过程的控制,因此选择将反应温度控制在50-100℃,将反应时间控制在5-60分钟,优选的,将反应温度控制在60-80℃,将反应时间控制在10-30分钟。
实施例3投料比例的控制
反应相溶液的配制:在反应容器中加入10mCi无载体氯化镥[177Lu]溶液(约10μL)和20μL甲酸-甲酸钠缓冲盐溶液(其中含有50mg/mL龙胆酸),将此混合溶液在室温下静置3分钟。然后继续向该反应容器中加入不同体积的注射用水与DOTA-EB-TATE前体溶液,使反应相中DOTA-EB-TATE与氯化镥[177Lu]的投料摩尔比分别为1、1.5、2、3、5、10、15、30、50,并使溶液总体积为0.1mL,将溶液混合均匀,该混合溶液为反应相溶液。
加热反应与冷却:与处方(1)相同。
配辅与稀释:与处方(1)相同。
标记率检测:取5μCi反应相溶液进行ITLC检测,计算标记率(ITLC)=与前体分子螯合的放射性活度÷总放射性活度。
当前体分子与核素的投料摩尔比为1.5-50时,其标记率≥95%,当前体分子与核素的投料摩尔比为3-50时,其标记率≥99%,此时我们认为标记反应已完全进行。
实施例4淬灭时间的控制
反应相溶液A的配制:在反应容器中依次加入10mCi无载体氯化镥[177Lu]溶液(约10μL)、10μL EB-FAPI前体溶液、60μL注射用水、20μL醋酸-醋酸钠缓冲盐溶液(其中含有50mg/mL龙胆酸),将其混合均匀,该混合溶液为反应相溶液A。其中前体EB-FAPI为式Ⅳ的化合物,R=H。
反应相溶液B的配制:在反应容器中加入10mCi无载体氯化镥[177Lu]溶液、20μL醋酸-醋酸钠缓冲盐溶液(其中含有50mg/mL龙胆酸)、60μL注射用水,混合均匀后,将此混合溶液在室温下静置3分钟(即淬灭时间)。然后继续向该反应容器中加入10μL EB-FAPI前体溶液,并混合均匀,该混合溶液为反应相溶液B。其中前体EB-FAPI为式Ⅳ的化合物,R=H。
反应相溶液C的配制:除淬灭时间为15分钟外,其余与反应相溶液B相同。
加热反应与冷却:与处方(1)相同。
配辅与稀释:与处方(1)相同。
放射化学纯度检测:配辅稀释结束后,立即取150μL反应相溶液进行HPLC检测,计算放射化学纯度(HPLC)=标记化合物的峰面积÷总峰面积。
反应相溶液A、B、C的放射化学纯度分别为93%、99%、99%。实验结果表明,在加入前体溶液之前,将含有核素溶液、缓冲盐与第一稳定剂的混合溶液静置一小段时间后(淬灭时间)再加入前体分子进行反应的投料顺序,能够明显提高API的初始放射化学纯度。因为经过一段淬灭时间,第一稳定剂与核素溶液充分接触,使溶液中由于高放射性而产生的大量自由基被第一稳定剂所淬灭,以减少后续加入前体分子时自由基对标记前体分子的破坏。淬灭时间取决于核素的种类与起始活度,笼统而言,淬灭时间控制在0.1-20分钟,优选3-10分钟。
实施例5[68Ga]Ga-EB-FAPI的标记
反应相溶液的配制:用0.1M盐酸淋洗市售锗镓发生器得到68Ga盐酸溶液,取68Ga盐酸溶液5mCi于反应容器中,加入20μL醋酸钠溶液(其中含有50mg/mL龙胆酸)、150μL注射用水,混合均匀后,将此混合溶液在室温下静置6分钟,然后向该反应容器中加入5μL EB-FAPI前体溶液,加入注射用水使溶液总体积为0.3mL,并混合均匀,该混合溶液为反应相溶液。其中前体EB-FAPI为式Ⅳ的化合物,R=H。
加热反应与冷却:将上述反应相溶液置于预热至95℃的加热器中反应30分钟,反应结束后取出反应容器冷却5分钟。
纯化:使用C18小柱对反应相溶液进行纯化,随后用0.4mL无水乙醇将标记络合物淋洗至产品瓶中。
配辅与稀释:向产品瓶中继续加入200μL配辅溶液,配辅溶液中含有45mg/mL龙胆酸、0.5mg/mL喷替酸和2.0mg/mL聚山梨酯80。最后向产品瓶中加入氯化钠注射液将总体积稀释至1.0mL,得到最终制剂溶液。
最终制剂溶液中含有9mg/mL龙胆酸、体积分数为40%的乙醇(即315.6mg/mL)、0.1mg/mL喷替酸、0.4mg/mL聚山梨酯80,其中API分子[177Lu]Lu-EB-FAPI在校准时刻的活度浓度为5mCi/mL,校准时刻是指生产结束时间(T0)。将制剂溶液储存于稳定性箱中,储存温度设置为25℃,储存湿度设置为60%RH。
在T0时刻使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为99%,在T0时刻使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%。
在T0+5h时刻取出稳定箱中的制剂溶液150μL,使用Radio-HPLC检测制剂溶液的放射化学纯度为93%,使用ITLC检测制剂溶液的放射化学纯度为100%。
虽然本案已以实施例揭露如上,然其并非用以限定本案,任何所属技术领域中具有通常知识者,在不脱离本案的精神和范围内,当可作些许的改动与润饰,故本案的保护范围当视后附的专利申请范围所界定者为准。
Claims (10)
1.放射性药物水溶液,其包括:如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯、酰胺、溶剂化物、盐、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯的盐、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酰胺的盐、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酯的溶剂化物、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的酰胺的溶剂化物、或如式Ⅰ所示的化合物或其药学上可接受的盐的溶剂化物,与放射性金属核素形成的络合物,以及以总浓度为0.5-400mg/mL存在的稳定剂,
其中,
L1是—(CH2)m—,其中m是0至12的整数,其中每个CH2可以单独地用—O—、—NH(CO)—、或—(CO)NH—替换,条件是没有两个相邻的CH2基团被替换;
L2是C1-C60连接基团,任选地包括—O—、—S—、—S(O)—、—S(O)2—、—N(R)—、—C(=O)—、—C(=O)O—、—OC(=O)—、—N(R)C(=O)—、—C(=O)N(R)—、—OC(=O)O—、—N(R)C(=O)O—、—OC(=O)N(R)—、其中每个R为H或C1-C6烷基;
L3是—(CH2)n—,其中n是0至12的整数,其中每个CH2可以单独地用—O—、—NH(CO)—、或—(CO)NH—替换,条件是没有两个相邻的CH2基团被替换;
Ch是螯合基团;
Tg是靶向基团。
2.根据权利要求1所述的药物水溶液,其中,L1为—NH(CO)—,L3为—NH(CO)CH2—。
4.根据权利要求1所述的药物水溶液,其中,Tg选自能够靶向生长抑素受体(SSTR)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、叶酸受体(FR)、表皮生长因子受体或整合素的化合基团。
7.根据权利要求1所述的药物水溶液,其中,所述放射性金属核素选自177Lu、99mTc、68Ga、64Cu、67Cu、111In、86Y、90Y、89Zr、186Re、188Re、153Sm、82Rb、166Ho、225Ac、212Pb、213Bi、212Bi或227Th。
8.根据权利要求1~7中任一项所述的药物水溶液,其中,所述稳定剂选自龙胆酸及其盐、抗坏血酸及其盐、组氨酸、半胱氨酸及其盐、甲硫氨酸、硒甲硫氨酸、硫代硫酸盐、麦芽糖、肌醇、苯甲醇、海藻糖、聚维酮、烟酰胺、乙醇、姜黄素、褪黑素中的一种或两种以上,优选为龙胆酸、乙醇、甲硫氨酸中的一种或两种以上。
9.根据权利要求8所述的药物水溶液,其中,在形成所述络合物的反应期间以及反应结束后分别加入所述稳定剂。
10.权利要求1~9中任一项所述的药物水溶液在肿瘤的放射治疗和/或诊断中的用途。
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