CN114795996A - 一种含有核苷类成分的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种含有核苷类成分的组合物及其应用，该组合物包含特定比例范围的腺苷、单磷酸腺苷氧化物和四磷酸二鸟苷。本申请提供的所述组合物的活性成分相互促进并协同改善和护理皮肤，具有减小皱纹生长的效果；同时还具有高保湿能力和减少皮肤黑色素形成的多重功效。本发明的组合物可应用于制备抗皱、保湿和美白护肤品中。

Description

一种含有核苷类成分的组合物及其应用

技术领域

本发明涉及局部护理皮肤产品技术领域，具体涉及一种含有核苷类成分的组合物及其应用。

背景技术

皮肤的最外层为角质层，角质层可以由体内供给水分，也可以从体外吸收水分，以使皮肤保持适度的水分含量。然而，随着年龄的增长，细胞活性逐渐降低，代谢能力减弱，造成新生细胞数目增速低于细胞老化速度，老化细胞水合能力低下和光老化作用增强，导致皮肤缩水性和保湿性下降，加重纤维组织恶化，皮肤干燥易出细纹。此外，在干燥环境下，皮肤因为长期呈干燥状态，很容易出现红肿、干皮等症状，因此，需要及时补充肌肤水分，降低肌肤热度，使皮肤清凉和舒缓。

在目前抗皱美白的护肤产品中，较多为添加能阻碍自由基形成过氧化物，或对酪氨酸酶具有阻碍活性的物质的活性成分，如生育酚乙酸酯、视黄醇，氢醌和维生素C等，作用比较单一，同时也存在安定性差、易变色和过敏等问题。例如，氢醌皮肤刺激性强，存在严格限制添加量的问题；维生素C容易氧化或见光分解，无法稳定的存在于产品体系中，因此存在掺入化妆品中产生变色、变臭等问题，限制了其在实际的护理皮肤产品广泛的应用。

腺苷是由腺嘌呤的N9与D-核糖的C1通过β糖苷键连接而成的化合物， CAS号为58-61-7，其结构如式I所示。此外，单磷酸腺苷氧化物(结构如式 II所示，CAS号为4061-78-3)，是腺苷中腺嘌呤N1位碱基部分被氧化物取代得到的产物的一种类似物，也是腺苷衍生物的一种形式。

四磷酸二鸟苷(P1,P4-Diguanosine 5'-tetraphosphate，CAS号为4130-19-2)，是一种由4个磷酸基结合于两个鸟苷的化合物，简称为GP4G。其也是一种独特的海洋蜉蝣生物提取物，具有能够补充能量保护和修复皮肤的作用，也被称为“生命能量补充因子”。因此，在皮肤护理产品中四磷酸二鸟苷应用越来越广泛。四磷酸二鸟苷产物的形态可根据其提取工艺呈现为固态或液体。

对于皮肤护理的问题，腺苷在改进皮肤外观，如对抗皱纹和抗衰老等方面已有被报道。在中国台湾专利TWI586355专利中，公开了含有腺苷N1-氧化物或其衍生物作为活性成分，在改善因炎症引起的斑点、色素沉着、皱纹等皮肤问题。在中国专利CN106413677A公开了含有腺苷氧化物或腺苷N1-氧化物 5’-磷酸钠的组合物在抗皮肤老化方面的应用。但是，CN106413677A专利中记载了，在较高浓度下(800μM)确认不到腺苷显著地对基质金属蛋白酶-I (MMP-I)产生抑制作用；而对于腺苷N-1氧化物和腺苷N1-氧化物5’-磷酸钠，在10～20μM的浓度则可确认到显著的产生抑制作用。MMP-1是一种影响皮肤衰老过程的重要蛋白酶之一，随着MMP-1含量增加，能加快皮肤胶原蛋白的分解，而导致皮肤外观形态发生松弛，形成皱纹。综上可知，腺苷和其衍生物是一种具有潜力的化妆品原料，但腺苷和其衍生物因为分子结构的不同，在对皮肤护理的活性作用上也大大不同。此外，在现有文献均没有公开三种成分复配使用的情形，特别是特定比例范围腺苷、单磷酸腺苷氧化物及四磷酸二鸟苷所组成的复配组合物用于美肤抗皱的成方前景。

综上可见，寻求一种性能优良，具有抗皱、舒缓等美肤功效，使得活性成分能保持高活性和稳定性，并深入皮肤内部仍是日化领域研究者不懈追求的目标。

发明内容

鉴于上述需求，本发明的第一个目的是提供一种以核苷类化合物作为活性成分之一的组合物，该组合物利用各活性成分之间的协同作用，使该组合物性能优良，具有保湿、抗皱、美白等多种功效，且初判认为该组合物稳定性较高，具有较好成方前景。

本发明的上述目的通过以下方案实现：一种含有核苷类成分的组合物，所述组合物包含腺苷、单磷酸腺苷氧化物和四磷酸二鸟苷三种活性成分，所述活性成分以协同作用的分量的比率存在于组合物中，其中腺苷、腺苷氧化物与四磷酸二鸟苷的质量比为1：(1-9)：(0.1-1)。

在本发明中，所述组合物中三种活性成分的配比是实现美肤抗皱效果的重要技术关键。本领域技术人员可以理解的是，使用外用护肤品进行护理皮肤时，护肤品中的活性成分只有被肌肤吸收才能达到有效的护肤效果。当活性成分含量较低或活性成分种类较少时，对皮肤的护理效果不明显或者是效果较单一，例如市面上的具有美白功效的产品，其抗皱方面的功效一般稍差。另一方面，当护肤品中活性成分含量过多时，若不能被皮肤吸收，将残留在皮肤表面，导致形成的油脂会进一步堆积于毛孔中，从而容易造成毛孔堵塞，进而引起毛囊发炎等皮肤问题。以上情况，不仅不能对细小皱纹、痘疤等明显形态上的缺点达到改善作用，甚至有时反而会造成细小皱纹更加突出、毛囊发炎等问题。

在本方案中，腺苷和单磷酸腺苷氧化物作为活性成分发挥作用，促进组织再生，帮助修复受损组织。四磷酸二鸟苷可以水解转化成三磷酸腺苷(ATP)，从而为细胞供给能量。例如，对基质金属蛋白酶1(MMP-1)的表达影响实验中发现，单独使用腺苷和单磷酸腺苷氧化物两方组合物或四磷酸二鸟苷，对 MMP-1相对产量仅165.49％和183.56％，而复配四磷酸二鸟苷后，三方组合物使得MMP-1的相对产量降为108.24％，差距客观存在且相对明显，可知三方组合物的抑制皱纹生长效果明显更优；但是，随着四磷酸二鸟苷的过量增加，表皮角质细胞过于成熟，将导致皮肤角质增厚，且同时增加敏感肌肤的刺激性。本发明人惊奇地发现，上述所述包含腺苷、单磷酸腺苷氧化物与四磷酸二鸟苷的组合物，当三者质量比在特定范围时，具有较好的局部美肤的协同作用，且所述组合物与单一或两方成分比较，具有较优的抗皱、保湿和美白效果。在实际应用中，除了考虑活性成分的效果，活性成分之间的配伍性和稳定性也是关键考虑的因素。本发明人发现，当前述三种活性成分中，复配过高的单磷酸腺苷氧化物或四磷酸二鸟苷时，虽然具有较强的促进胶原蛋白产生能力以及抗皱效果，但在皮肤制剂中对温度变化的稳定性性质较差，容易出现变色，水油破乳分离等变质现象。综合考虑其在制备局部外用皮肤制剂中的性能，如制剂稳定性、皮肤吸收程度、质感等，认为所述的组合物在上述特定的范围内，具有更好的美肤功效性和安全稳定性。

具体的，当本发明的组合物中，所述腺苷、腺苷氧化物与四磷酸二鸟苷的质量比为1：(1-9)：(0.1-1)时，其具有较优的抗皱、保湿和美白效果，且在水溶液和乳液体系中，在低温-10℃、常温和高温45℃环境中放置1个月，稳定性均较优异。在水溶液中，复配过高的单磷酸腺苷氧化物，在低温环境中会导致体系中成分溶解度降低，观察到微量固体析出，溶液出现轻微浑浊现象。而在乳液体系中，复配过高的单磷酸腺苷氧化物或四磷酸二鸟苷，在常温和高温放置1个月后，观察到乳液出现团聚和油水分离现象，以及颜色气味亦存在不同程度的变化。这表明本含有本发明中特定范围内的活性成分组合物的，各成分配伍性较优，稳定性最高。

优选地，所述腺苷、腺苷氧化物与四磷酸二鸟苷的质量比为1：(5-8)： (0.3-0.6)；具体地，所述腺苷、腺苷氧化物与四磷酸二鸟苷的质量比可为1：6： 0.3；1：8：0.3；1：6：0.4；1：8：0.6；1：7：0.3；1：7：0.4，1：7：0.6；最优选1：7：0.4。

本发明的第二个目的是提供了一种包含上述核苷类成分组合物与添加剂组分的护肤品。在护肤品的制备中，发明人通过实验发现，如果前述组合物的含量大于5.0wt％，含量的增加并不能带来显著提升的抗皱美肤等效果，同时伴随着生产成本的提高，并可能引起皮肤刺激问题以及制剂稳定性的相关问题；如果前述组合物的含量小于0.0001％，抗皱美白效果非常微弱。具体地，按护肤品的总重计，所述组合物的含量为0.0001～5.0wt％，优选0.001～2.0wt％。

前述护肤品为本领域中常规的制剂形式，所述制剂可以包括但不限于营养液、爽肤水、凝胶、面霜和乳液等形式。本发明所述护肤品含有前述组合物作为活性成分，还可以含有护肤品常规使用的添加剂组分，例如保湿剂、增溶剂、乳化剂、防腐剂、中和剂、油脂成分和其他载体组分等中的一种或两种以上。

具体地，所述保湿剂选自甘油和1,2-丙二醇中的一种或两种以任意比例混合得到的混合物。其通常占制剂总重量的1.0-10.0％。

具体地，所述增稠剂可以本领域技术人员已知的有利于实现期望粘度的任何量与护肤组合物中的其它成分组合提供，其通常占护肤品总重量的0.1-5.0％。增稠剂可改善其它成分的混悬，还可以增加本发明的组合物的稳定性，而基本上不改变它的其它特性。所述增稠剂选自为丙烯酸共聚物、Carbopol Ultrez 21 和Carbopol 980中的一种或两种以上混合物，优选为Carbopol 980。

具体地，所述增溶剂选自吐温20和吐温80中的一种或两种的混合物，其通常占制剂总重量的0.1-5.0％。

具体地，所述乳化剂通常为表面活性剂与高分子聚合物，例如硬脂醇聚醚 -2、硬脂醇聚醚-21、月桂醇聚醚-23和聚乙二醇-200一种或两种以上以任意比例混合所得的混合物，其通常占制剂总质量的0.5-4.0％。

具体地，所述油脂成分可以为辛酸十六烷基酯、硬脂酸、椰子油、霍霍巴籽油、巴西棕榈蜡、白油和凡士林等中的一种或两种以上以任意比例混合所得的混合物，其通常占制剂总重量的5.0-20.0％。

具体地，所述中和剂选自三乙醇胺、氢氧化钾、氢氧化钾和柠檬酸中的一种或两种以上以任意比例混合所得的混合物，根据调控制剂为符合化妆品使用的要求，其通常占制剂总重量的0.05-2.0％。

具体地，所述防腐剂选自甲基异噻唑啉酮、尼泊金酯类和苯氧乙醇中的一种或两种以上以任意比例混合所得的混合物，其通常占制剂总重量的0.01-0.5％。

上述护肤品还包括水或水与有机溶剂的混合物，所述有机溶剂可为护肤品常规使用的组分，可以根据实际制备的剂型或工艺，所述有机溶剂可为本领域常用的低级醇，如乙醇、丙二醇、异丙醇和丁二醇。其用量以能溶解前述组合物为准。

本发明的一个具体的实施的技术方案，所述护肤品为乳液。具体地，所述乳液的组成如下：

其中，所述本发明的组合物中腺苷、单磷酸腺苷氧化物与四磷酸二鸟苷的质量比为1：7：0.4。该乳液具有温和亲肤，安全无刺激，有效补水、保湿，美白，修复细纹等效果，使肌肤水润光滑、有弹性，可长期使用。

本发明的第三个目的在于提供了一种前述乳液的制备工艺，该制备工艺可以保证各活性成分能稳定存在于护肤品中，并且该制备工艺适合所述乳液的规模化生产。具体地，所述制备工艺包含如下制备步骤：

(1)在将椰子油、辛酸十六烷基脂和硬脂醇聚醚-2加入搅拌锅中，升温至80～85℃搅拌溶解作为油相备用；

(2)将甘油、1,2-丙二醇和本发明的组合物溶于适量的水中，升温至75～80℃，快速搅拌10-20min，溶解均匀后作为水相备用；

(3)将水相在55～65℃和搅拌下缓慢滴加到油相中，持续快速搅拌30-40min，降温至30-35℃时加入三乙醇胺和苯氧乙醇，搅拌均匀后，出料，即得。

本发明第四个目的在于还提供了一种含有核苷类成分的组合物在制备抗皱、保湿和美白护肤品中的应用。本发明的腺苷、单磷酸腺苷氧化物混合物和四磷酸二鸟苷组合物，活性成分的联合应用使得各组分功效产生协同作用，在抗皱舒缓的同时具有保湿性能，相对于同类用途产品对皮肤抗皱保湿功效更强，可以通过本领域技术人员使用已知方法加入用于皮肤抗皱保湿化妆品中，例如，水剂、面膜、膏霜等化妆品常用剂型。本发明的制剂清爽易吸收，每天可以多次使用。使用方法为每天洁面后，涂在肌肤上，轻柔按摩吸收完全即可。

综合考虑活性成分的功效和其配伍性及稳定性，本发明具有以下有益效果：

(1)提供了一种含有核苷类成分的组合物，该组合物由特定比例范围的腺苷、单磷酸腺苷氧化物和四磷酸二鸟苷组成，该组合物利用各活性成分之间的协同作用，使该组合物性能优良，具有保湿、抗皱、美白等多种功效的同时；在各溶剂体系中呈现出较高的稳定性，具有较好成方前景；

(2)提供了一种包含前述组合物的护肤品，基于组合物的功效，该护肤品具有较好保湿、抗皱、美白等多种功效，且稳定性较高；

(3)提供了一种护肤品乳液的制备工艺，该工艺可以稳定制备该护肤品乳液，适合大规模生产；

(4)还提供了一种包含前述组合物用于制备抗皱、保湿和美白护肤品中的应用，基于各成分的协同作用，该组合物具有较单方、复方组合物更好的保湿、抗皱、美白效果。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例所用腺苷、单磷酸腺苷氧化物和四磷酸二鸟苷均为市售化妆品原料，具体的，所述腺苷的纯度≥98.0％；所述单磷酸腺苷氧化物的纯度≥98.0％；所述四磷酸二鸟苷为纯度≥90.0％，水分≤5.0％的白色粉末或颗粒。

实施例1三种活性成分不同配比对基质金属蛋白酶1(MMP-1)的表达影响

在皮肤衰老的发展过程中，基质金属蛋白酶(MMPs)的增加能加快真皮中胶原蛋白和弹性蛋白的降解，其中基质金属蛋白酶1(MMP-1)是降解胶原纤维导致皮肤失去弹性，呈松弛状态的关键酶。为了确定本发明三种活性成分具有协同性的抗皱促进的作用，采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测不同活性成分配比组合物作用于紫外线诱导造成应激状态的细胞对MMP-1的表达影响。

实验方法及条件

实验主要材料：

DMEM培养基：Gibco，Cat.No：11960044；人源真皮成纤维细胞(HDF细胞)： ATCC，Cat.No：PCS-201-012；胎牛血清(FBS)：Gibco，Cat.No：10100147；特异性的MMP-1ELISA试剂盒：Invitrogen，Cat.No：EHMMP1。

测试样品配制：按表1中组合物的质量比，称取腺苷、单磷酸腺苷氧化物和四磷酸二鸟苷原料，配制成含1.0wt％组合物的无血清DMEM培养基。

将HDF细胞以6.5×10^⁴细胞/孔的密度接种于96孔板中，使用含10％ FBS的DMEM基础培养基(100μL/孔)并置于5％CO₂培养箱中，37℃孵育 24h后，小心吸取原有培养液，用1×PBS(磷酸缓冲液)清洗后，更换为无血清DMEM培养基饥饿12h后，每孔加入0.2mL上述含组合物的实验样品溶液，空白组加入等量的无血清的DMEM培养液，置于培养箱继续孵育24h后，弃去培养液，每孔加入0.2mL的PBS，经预实验确定，使用紫外线照射 (UVB 30mJ/cm²)5min来诱导细胞MMP-1的表达，再弃去PBS，加入培养液继续培养24h。此时，发明人经预实验发现，所使用的细胞模型是有效的，且上述所使用的组合物的浓度在处理细胞时是无毒，为不会诱导细胞增殖的范围的浓度，而且细胞数量无明显降低。

采用MMP-1ELISA试剂盒定量测定孵育后所得的上清液的量，检测波长为450nm，研究MMP-1的表达变化情况。

实验结果

记录实验结果并用下式来计算MMP-1的含量：

MMP-1的相对产量(％)＝MMP-1(实验组)/MMP-1(空白对照组)×100

所得结果是相对值，以不含有组合物不作紫外线处理的培养基作空白对照，空白组的值为100，测试结果如表1所示。

表1.不同配比含量的组合物对MMP-1的表达影响

从表1中的结果可知，与空白对照组相比，经紫外线处理后会促进细胞中 MMP-1的表达上调，说明皮肤组织出现了不同程度的应激反应和损伤。而加入活性成分后可以抑制MMP-1的表达。从对比组1结果来看，不添加任何活性成分的细胞，在紫外线诱导下，MMP-1含量会显著的增加，相对于空白组增加到了188.11％。而在实验组1-5以对比组2-3中，加入腺苷、单磷酸腺苷氧化物和/或四磷酸二鸟苷后，细胞中MMP-1的表达均得到不同程度的抑制。

进一步地，从对比组4和6和实验组3可以看出，与只经紫外线处理组(对比组1)相比，复配四磷酸二鸟苷后，能增强腺苷和单磷酸腺苷氧化物组合物对MMP-1的抑制作用，实验组3使MMP-1含量降低到108.24％。随着MMP-1 含量降低，对皮肤皱纹生长的抑制作用增大。因此说明，腺苷、单磷酸腺苷氧化物和四磷酸二鸟苷三种活性成分复配使用，对减缓皮肤中皱纹的生长存在协同性的作用。

实施例2三种活性成分不同配比对I型胶原蛋白(COL-1)表达的影响

皮肤衰老过程中的一个重要变化是细胞外基质成分的降解。胶原蛋白是真皮中含量最丰富的蛋白，使皮肤保持一定的强度和弹性。当皮肤衰老时，胶原蛋白中含量最高的I型胶原所占比重逐渐降低、胶原纤维交联异常，进而导致皱纹的出现。为了进一步确定本发明三种活性成分对克服皮肤细纹增长具有协同性的作用，利用表1中的实验组和对比组进行了COL-1表达的影响实验。

实验方法及条件

除特别说明外，该实验所使用的主要材料来源同如实施例1中所述。将 HDF细胞以6.5×10^{^4}细胞/孔的密度接种于96孔板中，使用含10％FBS的 DMEM(100μL/孔)基础培养基并置于5％CO₂培养箱，37℃孵育24h后，用1×PBS(磷酸缓冲液)清洗后，小心吸除原有培养液，更换为无血清DMEM 培养基后，每孔加入0.2mL上述含组合物的实验样品溶液，空白组加入等量的无血清的DMEM培养液，继续培养48h后，小心收集细胞上清液于试管中，以5000转/分(rpm)离心10min。小心吸取上清液用于检测COL-1含量。COL-1 含量检测按照相应的ELISA试剂盒(Abcam,Cat.No:ab285250)及其说明方法进行，检测波长为450nm，参考波长为570nm。经预实验证实，所使用的细胞模型是有效的，且上述所使用的组合物的浓度在处理细胞时是无毒，并且不会诱导细胞增殖的范围的浓度。

实验结果

记录实验结果并基于下式，求得各组的COL-1的相对产量：

COL-1的相对产量(％)＝COL-1(实验组)/COL-1(空白对照组)×100

所得结果是相对值，以不含有组合物作同样处理培养基作空白对照组，测试结果如表2所示。

表2：不同配比含量的组合物对COL-1表达的影响

由表2的结果可知，与未添加活性成分的空白对照组相比，加入活性成分后均能提高细胞的COL-1产量，促进皮肤胶原蛋白的增长。本发明的组合物对COL-1表达的影响结果同实施例1的结论是一致的。从对比组4-6结果可知，只含有两种或一种活性成分的样品，对COL-1的分泌促进效果不如三种活性成分配比使用的实验组1-5和对比组2-3。具体的，与空白组相比，三种活性成分复配后，可以分别使COL-1含量提高到124.71％～141.01％；而只存在两种活性成分的，COL-1含量仅提高到102.17％～112.42％。这也表明了腺苷、单磷酸腺苷氧化物和四磷酸二鸟苷三种活性成分复配后使用，对克服皮肤细纹增长具有协同性的作用。

实施例3含有本发明组合物的配伍稳定性

基于表3和表4中成分制备了一种含有本发明组合物的水溶液和乳液，进行根据温度或时间变化的稳定性测试。取实验溶液置于-10℃的冰箱冷冻室和常温下放置1个月；待恢复常温后观察样品体系变化；将乳液样品置于常温、 -10℃的冰箱冷冻室和45℃的恒温烘箱中1个月后，待恢复常温后观察样品体系变化；另取乳液样品各4.0g装入离心试管中，经3000r/min离心20min，观察乳液是否出现油水分层现象。其中组合物的成分为表1中的空白组，实验组1-5和对比组2-3所示，在本实施例中分别对应为空白组，试验1-5和对比 2-3。

表3：含有本发明组合物的水溶液成分

成分	含量(wt％)
		本发明组合物	2.0
吐温-20	0.1
		Carbopol 980	0.2
水	补至100

上述的实验溶液的制备步骤为：在搅拌锅中，将吐温20、Carbopol 980 溶于适量的水中，再加入和本发明的组合物，升温至75～80℃，快速搅拌10-20 min，溶解均匀，降温至30-35℃时停止搅拌，出料，即得。本方法即时制备得到的实验溶液外观均匀、透明澄清、无刺激性气味。

表4：含有本发明组合物的乳液成分

上述的实验乳液的制备步骤为：将椰子油、辛酸十六烷基脂和硬脂醇聚醚 -2加入搅拌锅中，升温至80～85℃搅拌溶解作为油相备用；将甘油、1,2-丙二醇和本发明的组合物溶于适量的水中，升温至75～80℃，快速搅拌10-20min，溶解均匀后作为水相备用；将水相在55～65℃和搅拌下缓慢滴加到油相中，持续快速搅拌30-40min，降温至30-35℃时加入三乙醇胺和苯氧乙醇，搅拌均匀后，出料，即得。本方法即时制备得到的实验乳液外观均匀、细腻、除原料成分气味外，无其他刺激性气味。

表5：含有本发明组合物的的水溶液稳定性测试评价

如表5所示，含有组合物的溶液，在常温中放置1个月，所有样品液颜色和体系澄清度未发生明显变化，这说明试验和对比样品在常温环境中，性质稳定。然而，低温-10℃环境中，对比2溶液体系中，观察有微量固体析出，溶液变得轻微浑浊，这表明在组合物中，复配过高的单磷酸腺苷氧化物，在低温环境中会导致体系中成分溶解度降低，不利于体系稳定。通过前述试验也说明，间接说明，含有本发明中特定范围内的活性成分组合物的配伍性较好。

表6含有本发明组合物的乳液稳定性测试评价

如表6所示，在低温-10℃、常温和高温45℃环境中，所有试验组乳液放置1个月，外观色泽均未发生明显变化，亦未出现明显的气味以及发生破乳分离的现象。这说明制备的试验组的乳液稳定性良好。然而，在对比2和对比3 组中，乳液体系稳定性发生了不同程度的变化，而且出现了水油分离的现象。由此，该试验进一步表明，含有本发明中特定范围内的活性成分组合物在水溶液和乳液体系中，稳定性和配伍性均较优异。

实施例4含有本发明组合物的乳液功效评价

试验对象：应用实施例3中空白组和试验组3制备的乳液。

志愿者选择：选择5例健康女性。所有受试者试验前1周内局部未使用过皮肤抗皱、美白保湿等护肤品和采用其他方法治疗。

使用方法：开始测试前，志愿者统一清洁双手前臂内侧，用纸巾擦拭干净，标记3×3cm²的测试区域。志愿者按2±0.1mg/cm²的用量，在受试区域涂抹，接触皮肤涂抹3min后，正式计时；每隔24h涂抹使用一次。在皮肤水分含量正式测试期间志愿者在温度20±2℃、湿度50±5％房间活动；接着在测试的30 天里，志愿者正常参加工作生活，但要求避免直接日晒和使用其他类护肤品。试验仪器：德国CK公司生产的MPA580皮肤测试仪；德国CK公司生产的CM825皮肤水份测试仪；每次测量进行3次读数，取平均值。

表7与使用前相比，志愿者测试皮肤区域黑色素含量减少率

时间	空白组	试验组3
			10天	0.03％	1.12％
20天	0.08％	3.54％
			30天	0.18％	4.86％

采用不含有活性成分的乳液作为空白对照组。从表7中的结果表明，与空白组相比，使用本发明的乳液能起到抑制黑色素增长的功效，使得黑色素含量呈现出不同程度的下降。使用30天后，对皮肤黑色素的增加具有明显的抑制效果，使得黑色素减少率达到4.86％。这也表明，在本发明的特定的比例下，同时复合腺苷及其氧化物和四磷酸二鸟苷，均能对黑色素的产生较佳的抑制效果。此外，在测试过程中，所有志愿者均未出现，如瘙痒，红疹、红肿等皮肤刺激过敏现象。

表8与使用前相比，志愿者测试皮肤区域水分正变化率

时间	空白组	试验组3
			0.5h	6.7％	30.6％
2h	4.2％	25.3％
			6h	3.5％	21.0％
10h	2.6％	17.9％

由表8保湿测试结果可知，随着时间增加，使用乳液后对皮肤的保湿趋势变化基本一致，水分会呈降低的趋势，但添加活性成分的实验组即时(0.5h) 和长时(10h)保湿效果优异，均明显优于不添加活性成分的空白组。

通过上述乳液功效评价试验可知，含有2.0wt％所述腺苷、单磷酸腺苷氧化物和四磷酸二鸟苷质量比为7：1：0.4组合物的乳液，具有改善皮肤水份含量和和提升皮肤的白度方面的显著作用。

在重复的实验中，供试样品在对应组亦表现出基本一致的效果，可见本发明的组合物在制剂的成方前景是客观存在。

综上所有，本发明所述含有特定比例范围的腺苷、单磷酸腺苷氧化物和四磷酸二鸟苷三种核苷类活性成分的组合物具有较好的保湿、抗皱、美白效果。具体的，在体外评价细胞试验中，实验组表现出对MMP-1分泌较对照组显著更强的抑制作用和对COL-1分泌的促进作用，即具有较好的抗皱功效；在组合物配伍稳定性试验中，实验组在低温、常温和高温测试条件中亦体现为较对照组更好的稳定性；在人体功效评价中，实验组中的配比组合物证实具有较佳的美白和保湿效果，显示出最好的成方前景。特别地，所述腺苷、腺苷氧化物与四磷酸二鸟苷的质量比为1：7：0.4的组合物，在抗皱功效和活性成分配伍性及稳定性均能保持较佳的水平。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种含有核苷类成分的组合物，其特征在于，所述组合物包含腺苷、单磷酸腺苷氧化物和四磷酸二鸟苷，所述腺苷、所述单磷酸腺苷氧化物与所述四磷酸二鸟苷的质量比为1：(1-9)：(0.1-1)。

2.根据权利要求1所述的含有核苷类成分的组合物，其特征在于，所述腺苷、所述单磷酸腺苷氧化物与所述四磷酸二鸟苷的质量比为1：(5-8)：(0.3-0.6)。

3.根据权利要求1所述的含有核苷类成分的组合物，其特征在于，所述腺苷、单磷酸腺苷氧化物与四磷酸二鸟苷的质量比1：6：0.3或1：8：0.3或1：6：0.4或1：8：0.6或1：7：0.3或1：7：0.4或1：7：0.6。

4.一种护肤品，所述护肤品包含权利要求1-3任意一项所述含有核苷类成分组合物与添加剂组分组成，其特征在于，所述护肤品中包含0.0001～5.0wt％所述含有核苷类成分组合物。

5.根据权利要求4所述的护肤品，其特征在于，所述护肤品中优选包含0.001～2.0wt％所述含有核苷类成分组合物。

6.根据权利要求4或5所述的护肤品，其特征在于添加剂组分选自保湿剂、增溶剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、中和剂、油脂成分中的一项或两项以上。

7.根据权利要求6所述的护肤品，其特征在于，所述保湿剂选自甘油和1,2-丙二醇中的一种或两种以任意比例混合得到的混合物，所述保湿剂占护肤品总重量的1.0-10.0％；所述增稠剂选自为丙烯酸共聚物、Carbopol Ultrez 21和Carbopol980中的一种或两种以上混合物，所述增稠剂占护肤品总重量的0.1-5.0％；所述增溶剂选自吐温20和吐温80的一种或两种以上混合物，所述增稠剂占护肤品总重量的0.1-5.0％；所述乳化剂通常为表面活性剂与高分子聚合物，例如硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-21、月桂醇聚醚-23和聚乙二醇-200一种或两种以上以任意比例混合所得的混合物，所述乳化剂占护肤品总质量的0.5-4.0％；所述油脂成分可以为辛酸十六烷基酯、硬脂酸、椰子油、霍霍巴籽油、巴西棕榈蜡、白油和凡士林等中的一种或两种以上以任意比例混合所得的混合物，所述油脂成分占护肤品总质量的5.0-20.0％；所述中和剂选自三乙醇胺、氢氧化钾、氢氧化钾和柠檬酸中的一种或两种以上以任意比例混合所得的混合物，所述中和剂占护肤品总重量的0.05-2.0％；所述防腐剂选自甲基异噻唑啉酮、尼泊金酯类和苯氧乙醇中的一种或两种以上以任意比例混合所得的混合物，所述防腐剂占制剂总重量的0.01-0.5％。

8.根据权利要求6所述的护肤品，其特征在于所述护肤品的组成如下：本发明组合物2.0wt％、1,2-丙二醇1.5wt％、甘油2.0wt％、三乙醇胺0.2wt％，椰子油8.0wt％、辛酸十六烷基脂5.0wt％、硬脂醇聚醚-2 1.0wt％、苯氧乙醇0.2wt％、水补至100wt％；所述本发明的组合物中腺苷、单磷酸腺苷氧化物与四磷酸二鸟苷的质量比为1：7：0.4。

9.一种制备如权利要求8所述护肤品的制备工艺，其特征在于所述制备工艺包含如下步骤：

(1)在将椰子油、辛酸十六烷基脂和硬脂醇聚醚-2加入搅拌锅中，升温至80～85℃搅拌溶解作为油相备用；

(2)将甘油、1,2-丙二醇和本发明的组合物溶于适量的水中，升温至75～80℃，快速搅拌10-20min，溶解均匀后作为水相备用；

(3)将水相在55～65℃和搅拌下缓慢滴加到油相中，持续快速搅拌30-40min，降温至30-35℃时加入苯氧乙醇，搅拌均匀后，出料即得。

10.一种如权利要求1～3任一项所述的含有核苷类成分的组合物在制备抗皱、保湿和美白护肤品中的应用。