CN114787191A

CN114787191A - 抗pd-l1抗体制剂

Info

Publication number: CN114787191A
Application number: CN202080085014.1A
Authority: CN
Inventors: A·惠; J·朱-希莫尼
Original assignee: Genentech Inc
Current assignee: Genentech Inc
Priority date: 2019-12-09
Filing date: 2020-12-07
Publication date: 2022-07-22
Also published as: BR112022011228A2; CL2023001140A1; CR20220322A; CA3158987A1; CL2022001486A1; KR20220113414A; EP4073120A2; US20230039268A1; WO2021118930A3; MX2022006784A; PE20221281A1; WO2021118930A2; IL293580A; JP2023504748A; AU2020399619A1; TW202128223A

Abstract

本发明提供了包含抗PD‑L1抗体的液体药物制剂，诸如用于皮下施用的液体药物制剂。本发明还提供了用于制备此类制剂的方法以及使用此类制剂的方法。

Description

抗PD-L1抗体制剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年12月9日提交的美国临时专利申请第62/945,730号的优先权权益，该临时专利申请的内容全文以引用方式并入本文。

以ASCII文本文件提交序列表

以下提交的以ASCII文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读格式(CRF)(文件名：146392049940SEQLIST.TXT，记录日期：2020年11月22日，大小：9KB)。

技术领域

本发明提供了包含抗PD-L1抗体的液体药物制剂，诸如用于皮下施用的液体药物制剂。本发明还提供了用于制备此类制剂的方法以及使用此类制剂的方法。

背景技术

抗体的药物用途在过去几年中有所增加。在许多情况下，此类抗体经由静脉内(IV)途径注射或输注。遗憾的是，可经由静脉内途径施用的抗体的量受到抗体的理化特性的限制，特别是受到其在合适的液体制剂中的溶解度和稳定性以及输注液的体积的限制。替代施用途径是皮下或肌内注射。这些注射途径要求待注射的最终溶液具有高蛋白质浓度(Shire,S.J.,Shahrokh,Z.等人,"Challenges in the development of high proteinconcentration formulations",J.Pharm.Sci.2004；93(6):1390-1402；Roskos,L.K.,Davis C.G.等人,"The clinical pharmacology of therapeutic antibodies",DrugDevelopment Research 2004；61(3):108-120)。为了增加体积，从而增加治疗剂量，已经提出使用一种或多种糖胺聚糖酶，以便增加抗体制剂可注射到其中间隙空间(WO2006/091871)。

期望提供用于皮下注射的高浓度、稳定的治疗活性抗体药物制剂。皮下注射的优点在于，其允许医生在对患者的相当短的干预时间内执行。此外，可训练患者自行进行皮下注射。通常，经由皮下途径施用的注射液被限制在约2ml。对于需要多次给药的患者，可在体表多个部位注射若干单位剂量的制剂。目前市场上没有适合皮下施用的高浓度、稳定的药用抗PD-L1抗体制剂。因此，期望提供此类用于皮下注射的治疗活性抗体的高浓度、稳定药物制剂。由于皮下(SC)组织中对水分传导的粘弹性阻力和注射时产生的反压(Aukland K.和Reed R.,"Interstitial-Lymphatic Mechanisms in the control of ExtracellularFluid Volume",Physiology Reviews",1993；73:1-78)以及由于疼痛感，在将肠胃外药物注射到皮下组织时，通常将体积限制在少于2ml。

高浓度蛋白质制剂的制备极具挑战性，并且需要使各种制剂适应所使用的特定蛋白质，因为各种蛋白质具有不同的聚集行为。至少在某些情况下，聚集体疑似引起治疗性蛋白质的免疫原性。针对蛋白质或抗体聚集体的免疫原性反应可能导致中和抗体，这可能使治疗性蛋白质或抗体无效。蛋白质聚集体的免疫原性似乎在皮下注射时最棘手，因此重复施用增加了免疫应答的风险。

PD-L1在许多癌症中过表达，并且通常与不良预后相关联(Okazaki T等人,Intern.Iramim.2007 19(7):813)(Thompson RH等人,Cancer Res 2006,66(7):3381)。有趣的是，与正常组织中的T淋巴细胞和外周血T淋巴细胞相反，大多数肿瘤浸润性T淋巴细胞主要表达PD-1，这表明肿瘤反应性T细胞上PD-1的上调可导致抗肿瘤免疫应答受损(Blood2009 114(8):1537)。这可能是由于利用表达PD-L1的肿瘤细胞与表达PD-1的T细胞相互作用所介导的PD-L1信号传导，导致T细胞活化的减弱和逃避免疫监视(Sharpe等人,Nat Rev2002)(Keir ME等人,2008Annu.Rev.Immunol.26:677)。因此，抑制PD-L1/PD-1相互作用可能会增强CD8+T细胞介导的肿瘤杀伤，

靶向PD-1及通过与PD-1相互作用进行信号传导的其他分子(诸如程序性死亡配体1(PD-L1)和程序性死亡配体2(PD-L2))的治疗方法是所关注的领域。已经提出将抑制PD-L1信号传导作为增强T细胞免疫的一种手段，用于治疗癌症和感染，包括急性和慢性(例如，持续性)感染两者。已经描述了可用于静脉输注的抗PD-L1抗体的制剂(参见US 2016/0319022)。然而，作为适合皮下注射的抗PD-L1抗体的最佳制剂尚未开发，仍然存在重要的尚未得到满足的医疗需求。

本文所引用的所有参考文献，包括专利申请、专利公开和UniProtKB/Swiss-Prot登录号通过引用整体并入本文，如同个别参考文献各自特定地和个别地指示为通过引用并入一样。

发明内容

在一个方面，本文提供了一种液体药物制剂，该制剂包含浓度为约100g/L至约150g/L的单克隆抗PD-L1抗体、浓度为约15mM至约25mM的组氨酸乙酸盐、浓度为约200mM至约280mM的蔗糖、浓度为约0.04％(w/v)至约0.08％(w/v)的聚山梨醇酯、浓度为约5mM至约15mM的蛋氨酸并且pH为约5.6至约6.0，其中单克隆抗体包含

(a)轻链可变区，其包含：

(1)HVR-L1，其包含氨基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)；

(2)HVR-L2，其包含氨基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)；

(3)HVR-L3，其包含氨基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)；

和

(b)重链可变区，其包含：

(1)HVR-H1，其包含氨基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)；

(2)HVR-H2，其包含氨基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)；

(3)HVR-H3，其包含氨基酸序列WPGGFDY(SEQ ID NO:6)。在一些实施例中，制剂中的单克隆抗体的浓度为约120g/L至约130g/L。在一些实施例中，制剂中的单克隆抗体的浓度为约125g/L。在一些实施例中，组氨酸乙酸盐的浓度为约17mM至约22mM。在一些实施例中，组氨酸乙酸盐的浓度为约20mM。在一些实施例中，蔗糖的浓度为约220mM至约260mM。在一些实施例中，蔗糖的浓度为约240mM。在一些实施例中，pH为约5.8。在一些实施例中，制剂中的聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。在一些实施例中，聚山梨醇酯的浓度为约0.05％(w/v)至约0.07％(w/v)。在一些实施例中，聚山梨醇酯的浓度为约0.06％(w/v)。在一些实施例中，蛋氨酸的浓度为约10mM。在一些实施例中，制剂进一步包含透明质酸酶。在一些实施例中，透明质酸酶为重组人透明质酸酶(rHuPH20)。在一些实施例中，透明质酸酶的浓度为约1000U/ml至约3000U/ml。在一些实施例中，透明质酸酶的浓度为约2000U/ml。

在一个方面，本文提供了一种液体药物制剂，该制剂包含浓度为约100g/L至约150g/L的单克隆抗PD-L1抗体、浓度为约15mM至约25mM的组氨酸乙酸盐、浓度为约200mM至约280mM的蔗糖、浓度为约0.01％(w/v)至约0.03％(w/v)的聚山梨醇酯并且pH为约5.3至约5.7，其中单克隆抗体包含

(a)轻链可变区，其包含：

(1)HVR-L1，其包含氨基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)；

(2)HVR-L2，其包含氨基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)；

(3)HVR-L3，其包含氨基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)；

和

(b)重链可变区，其包含：

(1)HVR-H1，其包含氨基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)；

(2)HVR-H2，其包含氨基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)；

(3)HVR-H3，其包含氨基酸序列WPGGFDY(SEQ ID NO:6)。在一些实施例中，制剂中的单克隆抗体的浓度为约120g/L至约130g/L。在一些实施例中，制剂中的单克隆抗体的浓度为约125g/L。在一些实施例中，组氨酸乙酸盐的浓度为约17mM至约22mM。在一些实施例中，组氨酸乙酸盐的浓度为约20mM。在一些实施例中，蔗糖的浓度为约220mM至约260mM。在一些实施例中，蔗糖的浓度为约240mM。在一些实施例中，pH为约5.5。在一些实施例中，制剂中的聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。在一些实施例中，聚山梨醇酯的浓度为约0.02％(w/v)。在一些实施例中，在施用于受试者之前，将制剂与透明质酸酶混合。在一些实施例中，透明质酸酶为重组人透明质酸酶(rHuPH20)。在一些实施例中，混合物中的透明质酸酶浓度为约1000U/ml至约3000U/ml。在一些实施例中，混合物中的透明质酸酶浓度为约2000U/ml。

在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，单克隆抗体未经预先冻干。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，单克隆抗体为人源化抗体。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，单克隆抗体包含：轻链可变区，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，以及重链可变区，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，单克隆抗体为全长抗体。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，单克隆抗体为IgG1抗体。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，单克隆抗体包含轻链，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，以及重链，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，单克隆抗体储存于玻璃小瓶或金属合金容器中。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，金属合金为316L不锈钢或哈氏合金。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，制剂在2-8℃下可保持稳定至少6个月。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，制剂在2-8℃下可保持稳定至少12个月。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，制剂在2-8℃下可保持稳定至少24个月。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，制剂中的抗体在储存后保留其生物活性的至少约80％。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，生物活性通过与PD-L1结合的抗体测得。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，制剂为无菌的。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，制剂适合施用于受试者。在上述两方面中任一者的一些实施例中或在本文所述的实施例中的任一者中，制剂用于皮下施用。

本文还提供了一种制品，其包含容纳根据上述方面或实施例中任一者所述的液体药物制剂的容器。在一些实施例中，容器为玻璃小瓶或金属合金容器。在一些实施例中，金属合金为316L不锈钢或哈氏合金。

本文还提供了一种试剂盒，其包含容纳根据上述方面或实施例中任一者所述的液体药物制剂的容器。

本文还提供了一种治疗受试者的疾病或疾患的方法，其包含向受试者施用有效量的根据上述方面或实施例中任一者所述的液体药物制剂，其中疾病或疾患选自由感染、癌症和炎症性疾病组成的组。在一些实施例中，疾病或疾患为癌症。在一些实施例中，癌症选自由非小细胞肺癌、小细胞肺癌、尿路上皮癌和乳腺癌组成的组。在一些实施例中，乳腺癌为三阴性乳腺癌。在一些实施例中，受试者是人。

应了解，本文所描述的各种实施例的一种、一些或所有特性可组合形成本发明的其它实施例。本发明的这些和其它方面对于本领域技术人员将变得显而易见。通过下面的详细描述进一步描述本发明的这些和其它实施例。

附图说明

专利或申请文件含有至少一幅彩色附图。在提出请求并支付必要的费用后，专利局将提供带有一幅或多幅彩图的本专利或专利申请公布的拷贝。

图1A至1C示出各种原料药(DS)制剂在多次冻/融循环后的高分子量物质(HMWS)含量(图1A)、离子交换色谱(IEC)主峰百分比(图1B)以及非还原毛细管电泳-SDS(NR CE-SDS)前峰总和(图1C)。

图2A至2C示出各种DS制剂在25℃下储存长达1个月后的酸性物质含量(图2A)、碱性物质含量(图2B)和HMWS含量(图2C)。

图3A至3B示出药品(DP)制剂在25℃下储存长达3个月后的HMWS含量(图3A)和SEC主峰百分比(图3B)。

图4A至4B示出DP制剂在25℃下储存长达3个月后的酸性物质含量(图4A)和碱性物质含量(图4B)。

图5A至5B示出DP制剂在25℃下储存长达3个月后的前峰百分比(图5A)和NR CE-SDS主峰百分比(图5B)。

图6A至6C示出DP制剂在40℃下储存长达1个月后的HMWS含量(图6A)、SEC主峰百分比(图6B)和NR CE-SDS前峰总和(图6C)。

图7A至7C示出DP制剂在40℃下储存长达1个月后的酸性物质含量(图7A)、碱性物质含量(图7B)和IEC主峰百分比(图7C)。

图8A至8B示出各种DP制剂在40℃(图8A)和25℃(图8B)下储存长达3个月时的聚山梨醇酯20的稳定性。

图9A至9B示出各种DP制剂在25℃下储存长达3个月时的rHuPH20活性测定结果。

图10A至10B示出包含不同浓度的聚山梨醇酯的制剂在同时搅拌的情况下储存24小时后的rHuPH20活性。在室温搅拌下时，较高浓度的聚山梨醇酯使rHuPH20活性保持在较高水平。

图11示出各种DP制剂在5℃与25℃之间的温度下的粘度。

具体实施方式

I.定义

在详细描述本发明之前，应当理解，本发明不限于特定的组合物或生物学系统，这些组合物或生物学系统当然可以变化。另外应当了解，本文使用的术语只是为了描述特定实施例的目的，并非旨在进行限制。如在本说明书和所附权利要求中所用，除非内容另外明确规定，否则单数形式“一个”、“一种”、“该”和“所述”包括复数指代物。因此，例如，对“分子”的提及任选地包括两个或更多此类分子的组合等。

如本文所用的术语“约”是指为此技术领域中的技术人员容易知晓的相应值的常见误差范围。在本文中提及“约”值或参数包括(且描述)涉及该值或参数本身的实施例。

应当理解，本文所述的发明的方面和实施例包括“包含”、“由以下组成”及“基本上由以下组成”所指的方面和实施例。

术语“药物制剂”是指处于允许活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对于将被施用制剂的受试者具有不可接受的毒性的另外组分的制备物。此类制剂为无菌制剂。“药用”赋形剂(媒介物、添加剂)是指可合理地施用于哺乳动物受试者以提供有效剂量的所用活性成分的赋形剂。

“无菌”制剂是无菌的或者不含或基本上不含所有活微生物及其孢子。

“冷冻”制剂是温度低于0℃的制剂。通常，冷冻制剂不经冷冻干燥，也不经过之前或之后的冻干。在某些实施例中，冷冻制剂包含用于储存的冷冻原料药(在不锈钢罐中)或冷冻药品(最终小瓶构造)。

“稳定”制剂是其中蛋白质在储存时基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的制剂。在一些实施例中，该制剂在储存时基本上保留其物理和化学稳定性以及其生物活性。储存期通常基于制剂的预期有效期进行选择。用于测量蛋白质稳定性的各种分析技术是本领域中现有的，并且综述于例如以下文献中：Peptide and ProteinDrug Delivery,247-301,Vincent Lee Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,Pubs.(1991)；以及Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10:29-90(1993)。可在选定的温度下测量选定时间段内的稳定性。可通过各种不同的方式定性和/或定量评估稳定性，包括评估聚集体形成(例如，使用尺寸排阻色谱法、通过测量浊度和/或通过目视检查)；通过使用阳离子交换色谱、成像毛细管等电聚焦(icIEF)或毛细管区带电泳评估电荷异质性；氨基末端或羧基末端序列分析；质谱分析；SDS-PAGE分析，用于比较还原态和完整抗体；肽图(例如胰蛋白酶或LYS-C)分析；评估抗体的生物活性或抗原结合功能等。不稳定可能涉及以下项中的一者或多者：聚集、脱酰胺(例如，Asn脱酰胺)、氧化(例如，Met氧化)、异构化(例如，Asp异构化)、剪切/水解/片段化(例如，铰链区片段化)、琥珀酰亚胺形成、未配对的半胱氨酸、N末端延伸、C末端处理、糖基化差异等。

如果通过目视检查颜色和/或透明度或者通过紫外线散射或者通过尺寸排阻色谱测量，蛋白质无“迹象”发生聚集、沉淀和/或变性或很少发生聚集、沉淀和/或变性，则认为该蛋白质在药物制剂中“保持其物理稳定性”。

如果给定时间的化学稳定性使得蛋白质被认为仍保留其生物活性(如下文所定义)，则认为该蛋白质在药物制剂中“保持其化学稳定性”。化学稳定性可以通过检测和定量化学改变形式的蛋白质进行评估。化学改变可能涉及尺寸改变(例如，剪切)，其可以使用例如尺寸排阻色谱、SDS-PAGE和/或基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI TOF MS)进行评估。其他类型的化学改变包括电荷变化(例如，由于脱酰胺作用而发生的变化)，其可以通过例如离子交换色谱或icIEF进行评估。

如果抗体在给定时间的生物活性为制备药物制剂时表现出的生物活性的至少约60％(在测定的误差范围内)，则认为该抗体在药物制剂中“保持其生物活性”，该生物活性在测定法(例如，抗原结合测定法)测得。抗体的其他“生物活性”测定法如下文所详述。

如本文所用，单克隆抗体的“生物活性”包括抗体与抗原结合并且导致能够在体外或体内测量的可测量的生物应答的能力。

本文所述的“脱酰胺”单克隆抗体是其中一个或多个天冬酰胺残基衍生为例如天冬氨酸或异天冬氨酸的抗体。

本文所述的“氧化”单克隆抗体是其中一个或多个色氨酸残基和/或一个或多个蛋氨酸已发生氧化的抗体。

本文所述的“糖基化”单克隆抗体是其中一个或多个赖氨酸残基已发生糖化的抗体。

“易于脱酰胺化”的抗体是包含一个或多个已发现易于脱酰胺基的残基的抗体。

“易于氧化”的抗体是包含一个或多个已发现易于氧化的残基的抗体。

“易于聚集”的抗体是发现其与其他抗体分子聚集的抗体，尤其是在冷冻和/或搅拌条件下发生聚集。

“易于片段化”的抗体是例如在其铰链区被切割成两个或更多个片段的抗体。

相对于以不同制剂配制的单克隆抗体，“减少脱酰胺、氧化、聚集或片段化”旨在防止发生脱酰胺、氧化、聚集或片段化或减少脱酰胺、氧化、聚集或片段化的数量。

配制的抗体可以为基本上纯的，并且希望是基本上均质的(例如，不含污染蛋白质等)。“基本上纯的”抗体意指基于组合物中蛋白质的总重量，包含至少约90重量％、优选至少约95重量％的抗体的组合物。“基本上均质的”抗体意指基于组合物中蛋白质的总重量，包含至少约99重量％的抗体的组合物。

“等渗”是指目标制剂具有与人血液基本上相同的渗透压。等渗制剂的渗透压通常为约250至350mOsm。等渗性可例如使用蒸气压或冰冻型渗透压计来测定。

如本文所用，“缓冲剂”是指通过其酸-碱缀合成分的作用而耐受pH值变化的缓冲溶液。在一些实施例中，本发明的缓冲剂的pH在约4.5至约7.0的范围内，优选约5.6至约7.0，例如5.6至6.9、5.7至6.8、5.8至6.7、5.9至6.6、5.9至6.5、6.0、6.0至6.4或6.1至6.3。在一个实施例中，缓冲剂的pH为5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9或7.0。例如，将pH控制在该范围内的缓冲剂的一个实例为磷酸钠。

如本文所用，“表面活性剂”是指表面活化剂，诸如非离子型表面活性剂。本文所述的表面活性剂的实例包括聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(例如，泊洛沙姆188)；Triton；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基、肉豆蔻基、亚油基或硬脂酰磺基甜菜碱；月桂基、肉豆蔻基、亚油基或硬脂酰肌氨酸；亚油基、肉豆蔻基或十六烷基甜菜碱；月桂酰氨基丙基、椰油酰胺丙基、亚油酰胺丙基、肉豆蔻基丙基、棕榈酰氨基丙基或异硬脂酰胺丙基甜菜碱(例如，月桂酰胺丙基)；肉豆蔻基胺丙基、棕榈酰丙基或异硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油酰基钠或甲基油基-牛磺酸二钠；和MONAQUAT^TM系列(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)；聚乙二醇、聚丙二醇以及乙烯与丙二醇的共聚物(例如，Pluronics、PF68等)等。在一个实施例中，本文所述的表面活性剂为聚山梨醇酯20。

在药理学意义上，在本发明的上下文中，抗体的“治疗有效量”是指在预防或治疗抗体对其治疗有效的病症的中有效的量。“病症”是将可以从用抗体进行治疗中受益的任何病状。其包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物易患所述病症的那些病理状态。

“防腐剂”是可以任选地包含在制剂中以基本上减少其中的细菌作用，从而促进例如多用途制剂的生产的化合物。潜在的防腐剂的实例包括十八烷基二甲基苄基氯化铵、六甲基氯化铵、苯扎氯铵(烷基苄基二甲基氯化铵的混合物，其中烷基为长链化合物)和苄索氯铵。其他类型的防腐剂包括芳族醇，诸如苯酚、丁醇和苄醇，烷基对羟基苯甲酸酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、邻苯二酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇和间甲酚。在一个实施例中，本文的防腐剂为苯甲醇。

如本文所用，术语“治疗”是指被设计为在临床病理过程中改变被治疗的个体或细胞的自然进程的临床干预。理想的治疗效果包括降低疾病进展速度、减缓或减轻疾病状态以及缓解或改善预后。例如，如果减轻或消除了与癌症有关的一种或多种症状，包括但不限于减少癌细胞的增殖(或破坏)、减轻疾病所致的症状、提高患有该疾病的人的生活质量、减少治疗疾病、延缓疾病进展所需的其他药物的剂量和/或延长个体的存活，则成功地“治疗”了个体。

如本文所用，“延缓疾病的进展”意指延缓、阻碍、减缓、迟滞、稳定和/或推迟疾病(诸如癌症)的发展。这种延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或待治疗的个体。对于本领域技术人员显而易见的是，充分或显著延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患该病。例如，晚期癌症，诸如转移的发展，可能被延迟。

“有效量”至少是实现可测量的改善或预防特定病症所需的最小量。本文的有效量可以根据诸如患者的疾病状态、年龄、性别和体重以及抗体在个体中引起预期应答的能力等因素而变化。有效量也是治疗有益作用超过治疗的任何毒性或有害作用的量。对于预防用途、有益或预期结果包括诸如消除或降低风险、减轻严重程度或延缓疾病发作，包括疾病的生化、组织学和/或行为症状、其并发症以及在疾病发展过程中出现的中间病理表型。对于治疗用途、有益或预期结果包括临床结果，诸如减少由疾病引起的一种或多种症状、提高患病者的生活质量、减少治疗该疾病所需的其他药物的剂量、增强其他药物的效果(诸如通过靶向、延缓疾病进展和/或延长存活)。在癌症或肿瘤的情况下，有效量的药物可能减少癌细胞的数量；减小肿瘤大小；抑制(即在某种程度上减慢或预期停止)癌细胞浸润进入周围器官中；抑制(即在某种程度上减慢并预期停止)肿瘤转移；在某种程度上抑制肿瘤的生长；以及/或在某种程度上减轻与病症有关的一种或多种症状。有效量可以一次或多次施用。出于本发明的目的，药物、化合物或药物组合物的有效量为足以直接或间接地进行预防或治疗的量。如在临床背景中所理解的，与另一药物、化合物或药物组合物结合可以达到或不能达到有效量的药物、化合物或药物组合物。因此，可以在施用一种或多种治疗剂的情况下考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其他试剂结合可以获得或实现预期结果，则可以考虑给予有效量的单一药剂。

如本文所用，“与……联合”(in conjunction with)是指除一种治疗方式之外还施用另一种治疗方式。这样，“与……联合”是指在向个体施用一种治疗方式之前、之中或之后施用另一种治疗方式。

“病症”是将从治疗获益的任何病状，包括但不限于慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患所述病症的病理性病状。

术语“细胞增殖性病症”和“增殖性病症”是指与某种程度的异常细胞增殖相关的病症。在一个实施例中，所述细胞增殖性病症为癌症。在一个实施例中，所述细胞增殖性病症为肿瘤。

如本文所用，“肿瘤”是指所有赘生性细胞生长和增殖，无论是恶性还是良性，以及所有前癌性和癌性细胞和组织。术语“癌症”、“癌性”、“细胞增生性病症”、“增生性病症”和“肿瘤”在本文中并不互相排斥。

术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中通常以细胞生长不受控制为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。此类癌症的更具体实例包括但不限于鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌或胃部癌症(包括胃肠道癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌症或肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝细胞癌、肛门癌、阴茎癌、黑色素瘤、浅表扩散性黑色素瘤、扁桃状恶性黑色素瘤、肢端雀斑样痣性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤(包括低级别/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞(SL)NHL、中级别/滤泡性NHL、中级别弥散性NHL、高级别免疫原性NHL、高级别淋巴母细胞性NHL、高级别小非裂解细胞性NHL、巨大肿块NHL、套细胞淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤和华氏巨球蛋白血症)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、毛细胞白血病、慢性粒细胞性白血病和移植后的淋巴增生性疾病(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤、水肿(诸如与脑肿瘤有关的)、Meigs综合征、脑部、以及头颈癌和相关转移相关的异常血管增生。在某些实施例中，适于通过本发明的抗体治疗的癌症包括乳腺癌、结直肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、软组织肉瘤、卡波西肉瘤、类癌瘤癌、头颈癌、卵巢癌、间皮瘤和多发性骨髓瘤。在一些实施例中，癌症选自：小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、黑素瘤、乳腺癌、胃癌、结直肠癌(CRC)和肝细胞癌。在一些实施例中，癌症选自：非小细胞肺癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤和乳腺癌，包括这些癌症的转移形式。

“化疗剂”是用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实例包括烷基化剂诸如噻替派和环磷酰胺

烷基磺酸酯诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类诸如苯佐替派、卡巴醌、美妥替派和乌瑞替派；乙烯亚胺类和甲基三聚氰胺类，包括曲他胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺；多聚乙酰(acetogenin，特别是布拉它辛和布拉它辛酮)；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，

)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙素；桦木酸；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康

CPT-11(伊立替康，

)、乙酰喜树碱、东莨菪内酯和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；卡利司他丁(callystatin)；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊苷；念珠藻素(特别是念珠藻素1和念珠藻素8)；多拉司他汀；倍癌霉素(包括合成类似物、KW-2189和CB1-TM1)；五加素；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇；海绵抑素；氮芥类诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、氮芥氧化物盐酸盐、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲洛磷胺、乌拉莫司汀；亚硝基脲类，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，诸如烯二炔类抗生素(例如，卡奇霉素，特别是卡奇霉素γ1I和卡奇霉素ωIl(参见，例如，Nicolaou等人，Angew.ChemIntl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；CDP323，口服α-4整联蛋白抑制剂；达内霉素，包括达内霉素A；埃斯佩拉霉素；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克那霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡拉比辛、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-正亮氨酸、多柔比星(包括

吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉-多柔比星、盐酸多柔比星脂质体注射液

脂质体多柔比星TLC D-99

聚乙二醇化脂质体多柔比星

和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素诸如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链脲菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，诸如甲氨蝶呤、吉西他滨

替加氟

卡培他滨

埃博霉素和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖孢苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨和氟尿苷；雄激素，诸如卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺素类，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；阿莫司汀；比生群；依达曲沙；地佛法明；秋水仙胺；地吖醌；依洛尼塞；醋酸羟吡咔唑；埃博霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登木素类化合物，诸如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基酰肼；甲苄肼；

多糖络合物(JHSNatural Products,Eugene,Oreg.)；雷佐生；根霉素；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2'-三氯三乙胺；单端孢霉烯族毒素类(特别是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；乌拉坦；长春地辛

达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；格塞图辛；阿糖胞苷("Ara-C")；三胺硫磷；紫杉烷类，例如紫杉醇(

Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、紫杉醇的白蛋白工程纳米颗粒制剂(ABRAXANE^TM)和多西他赛(

Rhome-Poulene Rorer,Antony,France)、苯丁酸氮芥；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂、草酸铂(例如，

)和卡铂；长春花，防止微管蛋白聚合形成微管，包括长春花碱

长春新碱

长春地辛

和长春瑞滨

依托泊苷(VP-16)；异磷酰胺；米托蒽醌；醛氢叶酸；诺消灵；依达曲沙；道诺霉素；氨蝶呤；伊班磷酸盐；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视色素诸如视黄酸，包括贝沙罗汀

二磷盐酸类，诸如氯磷酸盐(例如，

或

)、依替磷酸盐

NE-58095、唑来磷酸/唑来磷酸盐

阿仑磷酸盐

帕米磷酸盐

替鲁磷酸盐

或利塞磷酸盐

和曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸类，特别是那些抑制牵涉到异常细胞增殖的信号传导通路中的基因表达的可减少细胞增殖反义寡核苷酸，例如，PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)(例如，埃洛替尼(Tarceva^TM))；和VEGF-A；疫苗，诸如

疫苗和基因治疗疫苗，例如

疫苗、

疫苗和

疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如，

)；rmRH(例如，

)；BAY439006(索拉非尼；Bayer)；SU-11248(舒尼替尼，

Pfizer)；派立福辛、COX-2抑制剂(例如，塞来昔布或依托昔布)、蛋白酶体抑制剂(例如，PS341)；硼替佐米

CCI-779；替吡法尼(R11577)；索拉非尼，ABT510；Bcl-2抑制剂诸如奥伯利森钠

匹杉琼；EGFR抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂；丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂诸如雷帕霉素(西罗莫司，

)；法呢基转移酶抑制剂诸如Lonafarnib(SCH 6636,SARASAR^TM)；和上述任何药用盐、酸或衍生物；以及上述两个或更多个的组合，诸如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATIN^TM)组合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)，以及上述任何药用盐、酸或衍生物；以及上述两个或更多个的组合。

如本文所定义，化疗剂包括“抗激素剂”或“内分泌治疗剂”，其作用在于调节、减少、阻断或抑制可促进癌症生长的激素的作用。它们本身可以是激素，包括但不限于：抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括

他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、keoxifene、LY117018、奥那司酮和FARESTON.cndot.托瑞米芬；抑制芳香酶(其调节肾上腺中雌激素的产生)的芳香酶抑制剂，诸如4(5)-咪唑类、氨基戊二酰亚胺、

醋酸甲地孕酮、

依西美坦、福美他尼(formestanie)、法曲唑、

伏罗唑(vorozole)、

来曲唑和

阿那曲唑；以及抗雄激素，诸如氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环胞嘧啶核苷类似物)；反义寡核苷酸，特别是那些抑制受异常细胞增殖牵连的信号传导通路中的基因表达的寡核苷酸，诸如PKC-α、Raf和H-Ras；核酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如，

核酶)和HER2表达抑制剂；疫苗，诸如基因治疗疫苗，例如

疫苗、

疫苗和

疫苗；

rIL-2；

拓扑异构酶1抑制剂；

rmRH；长春瑞滨(Vinorelbine)和埃斯佩拉霉素(Esperamicins)(参见美国专利号4,675,187)；以及上述物质中任一者的药用盐、酸或衍生物；以及上述物质中的两种或更多种的组合。

当在本文中使用时，“生长抑制剂”是指在体外或体内抑制细胞生长的化合物或组合物。在一个实施例中，生长抑制剂是生长抑制抗体，其防止或减少表达该抗体结合的抗原的细胞的增殖。在另一个实施例中，生长抑制剂可以是显著降低S期细胞百分比的抑制剂。生长抑制剂的实例包括阻断细胞周期进程(在S期以外的地方)的试剂，例如诱导G1停滞和M期停滞的试剂。经典的M期阻滞剂包括长春花(长春新碱和长春碱)、紫杉烷类和拓扑异构酶II抑制剂(例如阿霉素、表柔比星、柔红霉素、依托泊苷和博来霉素)。那些阻滞G1的试剂也溢出到S期阻滞中，例如DNA烷基化剂，诸如他莫昔芬、泼尼松、达卡巴嗪、氮芥、顺铂、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶和ara-C。进一步的信息可见于Mendelsohn和Israel编辑的《癌症的分子基础》(The Molecular Basis of Cancer)中Murakami等人所著的第1章，标题为“细胞周期调节，癌基因和抗肿瘤药”(Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplasticdrugs)(W.B.Saunders,Philadelphia,1995)，例如，第13页。紫杉烷类(紫杉醇和多西他赛)都是抗癌药，均来源于紫杉。多西他赛(

Rhone-Poulenc Rorer)源自欧洲紫杉，是紫杉醇的半合成类似物(

Bristol-Myers Squibb)。紫杉醇和多西他赛促进微管蛋白二聚体的微管组装，并通过防止解聚作用稳定微管，从而抑制细胞的有丝分裂。

“放射疗法”是指使用定向γ射线或β射线以诱导对细胞的足够损害，从而限制细胞正常发挥功能或完全破坏细胞的能力。将理解的是，在本领域中将有许多已知方法可以确定治疗的剂量和持续时间。典型治疗为一次施用，典型剂量范围为每天10到200单位(Gray)。

用于治疗目的的“受试者”或“个体”是指被分类为哺乳动物的任何动物，包括人、家畜和农场动物以及动物园动物、运动动物或宠物，诸如狗、马、猫、牛等。在一些实施例中，哺乳动物是人。

本文的术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且具体地覆盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的抗原结合活性即可。

“分离的”抗体是已经鉴定并且自其自然环境的组分中分离和/或回收的抗体。其自然环境的污染物组分是会干扰抗体研究、诊断或治疗用途的材料，并且可以包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。在一些实施例中，将抗体纯化至(1)大于抗体重量的95％(例如通过Lowry方法测定)，在一些实施例中，大于99％重量；(2)足以获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度(例如通过使用旋转杯测序仪)，或(3)均质(在还原或非还原条件下进行SDS-PAGE，使用例如考马斯蓝或银染)。经分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为不会存在抗体天然环境的至少一种成分。然而，通常，分离的抗体将通过至少一个纯化步骤来制备。

“天然抗体”通常是约150,000道尔顿的异源四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同种型的重链之间变化。每条重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫键。每条重链在一端具有可变结构域(V_H)，其后是多个恒定结构域。每条轻链的一端具有可变结构域(V_L)，另一端具有恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐。据信特定的氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间形成界面。

术语“恒定结构域”是指免疫球蛋白分子的一部分，该部分相对于免疫球蛋白的另一部分(即可变结构域，其包含抗原结合位点)具有更保守的氨基酸序列。恒定结构域包含重链的C_H1、C_H2和C_H3结构域(统称为CH)和轻链的CHL(或CL)结构域。

抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变结构域可以称为“V_H”。轻链的可变结构域可以称为“V_L”。这些结构域通常是抗体中变化最大的部分，并且包含抗原结合位点。

术语“可变的”是指以下事实：可变结构域的某些部分在抗体之间的序列差异很大，并用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并非在抗体的可变结构域中均匀分布。它集中在轻链和重链可变结构域中的三个称为高变区(HVR)的区段中。可变结构域中保守性更高的部分称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR区，其主要采用β折叠结构，由三个HVR连接，这三个HVR形成连接β折叠结构的环并且在一些情况下形成β折叠结构的一部分。每条链中的HVR通过FR区紧密保持在一起，并且与另一条链中的HVR一起，有助于抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等人，《具有免疫学意义的蛋白质序列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第五版，美国卫生与公众服务部，国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但具有各自效应子功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性作用。

来自任何哺乳动物物种抗体(免疫球蛋白)的“轻链”基于其恒定结构域的氨基酸序列，可以配属为两种明显不同的类型中的一种，这两种类型分别称为卡帕(“κ”)和兰姆达(“λ”)。

如本文所用，术语IgG“同种型”或“亚类”是指由免疫球蛋白恒定区的化学和抗原特征定义的免疫球蛋白的任何亚类。

根据其重链恒定结构域的氨基酸序列，可以将抗体(免疫球蛋白)分为不同的类别。免疫球蛋白主要分为五类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些抗体中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、γ、ε、γ和μ。不同种类的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的，并在例如以下文献中有一般描述：Abbas等人，《细胞和分子免疫学》(Cellular and Mol.Immunology)，第四版(W.B.Saunders,Co.,2000)。抗体可以是较大融合分子的一部分，该融合分子是通过抗体与一个或多个其它蛋白质或肽的共价或非共价结合形成的。

术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，是指其基本上完整形式的抗体而不是如下文定义的抗体片段。该术语特别是指具有包含Fc区的重链的抗体。

出于本文目的的“裸抗体”是未与药物部分或放射性标记缀合的抗体。

“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选包含其抗原结合区。在一些实施例中，本文所述的抗体片段是抗原结合片段。抗体片段的示例包括Fab、Fab'、F(ab')₂和Fv片段；双体抗体；线性抗体；单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。

木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同抗原结合片段，称为“Fab”片段，每个片段都有单个抗原结合位点和残留的“Fc”片段，其名称反映其是否容易结晶的能力。胃蛋白酶处理产生的F(ab')₂片段具有两个抗原结合位点并且仍能与抗原交联。

“Fv”是包含完全的抗原结合位点的最小抗体片段。在一个实施例中，双链Fv种类由紧密和非共价结合的一个重链和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在单链Fv(scFv)物种中，一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域可通过柔性肽接头共价连接，使得轻链和重链可缔合成类似于在双链Fv物种中的“二聚体”结构。以此构型，每个可变结构域的三个HVR相互作用以在VH-VL二聚体的表面上限定抗原结合位点。六个HVR共同对抗体赋予抗原结合特异性。但是，即使单个可变结构域(或仅包含三个对抗原具有特异性的HVR的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，尽管其亲和力低于完整结合位点。

“Fab”片段含有重链可变结构域和轻链可变结构域且亦含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于Fab'片段在重链CH1结构域的羧基末端添加了一些残基，这些残基包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中关于其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离硫醇基的Fab'的命名。F(ab')₂抗体片段最初是作为在其间具有铰链半胱氨酸的成对Fab'片段而产生的。抗体片段的其他化学偶合也是已知的。

“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。一般地，scFv多肽在VH和VL结构域之间进一步包含多肽接头，使scFv形成所需的抗原结合结构。有关scFv的综述，参见例如Pluckthun的《单克隆抗体的药理学》(ThePharmacology of Monoclonal Antibodies)，第113卷，Rosenburg和Moore主编，(Springer-Verlag,New York,1994)，第269-315页。

术语“双体抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，其片段包含连接至与同一多肽链(VH-VL)中的轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)。通过使用太短以至于不允许同一条链上两个结构域之间配对的连接基，这些结构域被迫与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。双体抗体可为二价抗体或双特异性抗体。双价抗体更全面地描述于例如：EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)；以及Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三体抗体和四体抗体也在Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)中进行了描述。

本文所使用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群中获得的抗体，例如，除了可能存在的少量突变例如天然存在的突变，该抗体群包含的单个抗体是相同的。因此，修饰语“单克隆的”表明抗体的特征不是离散抗体的混合物。在某些实施例中，这样的单克隆抗体通常包括含有结合靶标的多肽序列的抗体，其中靶标结合多肽序列通过包括从多个多肽序列中选择单个靶标结合多肽序列的过程获得。例如，选择过程可以是从多个克隆，例如杂交瘤克隆、噬菌体克隆或重组DNA克隆的集合中选择独特的克隆。应当理解，可以进一步改变选择的靶结合序列，例如，以提高对靶的亲和力、使靶结合序列人源化、提高其在细胞培养物中的产生、降低其在体内的免疫原性、产生多特异性抗体等，并且包含改变的靶结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂中的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除其特异性外，单克隆抗体制剂的优势还在于其通常不受其他免疫球蛋白的污染。

修饰语“单克隆”表示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体获得的，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括例如杂交瘤方法(例如，Kohler and Milstein,Nature,256:495-97(1975)；Hongo等人,Hybridoma,14(3):253-260(1995)，Harlow等人，《抗体：实验室手册》(Antibodies：ALaboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版1988)；Hammerling等人，Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA方法(参见例如美国专利号4,816,567)、噬菌体展示技术(参见例如：Clackson等人,Nature,352:624-628(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；和Lee等人,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004))和在动物中产生具有编码人免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因座或基因的部分或全部的人抗体或类人抗体的技术(参见例如：WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits等人,Nature362:255-258(1993)；Bruggemann等人,Year in Immunol.7:33(1993)；美国专利号5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425和5,661,016；Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg等人,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild等人,Nature Biotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996)；以及Lonberg和Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。

本文中的单克隆抗体具体地包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而一条或多条链的其余部分与来自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列以及这些抗体的片段相同或同源，只要它们表现出所需的生物活性即可(参见例如：美国专利号4,816,567；以及Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855(1984))。嵌合抗体包括

抗体，其中抗体的抗原结合区来源于通过例如用目标抗原免疫猕猴而产生的抗体。

“人源化”形式的非人(例如，鼠)抗体为包含来源于非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。在一个实施例中，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体HVR的残基被来自非人类物种(供体抗体)例如小鼠、大鼠、兔或具有所需特异性、亲和力和/或能力的非人灵长类动物的HVR的残基替代。在一些情况下，人类免疫球蛋白的FR残基被相应的非人类残基取代。此外，人源化抗体可包含受体抗体或供体抗体中不存在的残基。可以进行这些修饰以进一步改善抗体性能。总体上，人源化抗体将基本上包含所有中的至少一个可变结构域，通常是两个可变结构域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，并且所有或基本上所有的FR为人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体还将任选地包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，该免疫球蛋白通常为人类免疫球蛋白。更多详情，参见例如：Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)；以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。另外参见例如：Vaswani和Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions23:1035-1038(1995)；Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；以及美国专利号6,982,321和7,087,409。

“人抗体”是具有对应于由人产生的抗体的氨基酸序列的抗体和/或使用本文所公开的用于制备人抗体的任何技术制得的抗体。人抗体的该定义特别地排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域已知的各种技术产生人抗体，包括噬菌体展示文库。Hoogenboom和Winter，J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol.,222:581(1991)。还可用于制备人类单克隆抗体的方法如Cole等人，Monoclonal Antibodies andCancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)；Boerner等人，J.Immunol.,147(1):86-95(1991)所述。另外参见van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.,5:368-74(2001)。可以通过向转基因动物施用抗原来制备人抗体，该转基因动物已经修饰以对抗原攻击产生应答而产生此类抗体，但其内源基因座已失效，例如，免疫异种小鼠(参见，例如，U.S.Pat.Nos.6,075,181和6,150,584关于XENOMOUSE^TM技术)。另外参见例如，Li等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)关于通过人类B细胞杂交瘤技术产生的人抗体。

“物种依赖性抗体”是对来自第一哺乳动物物种的抗原具有比对来自第二哺乳动物物种的抗原同源物更强的结合亲和力的抗体。通常，物种依赖性抗体与人抗原“特异性结合”(例如，其结合亲和力(Kd)值不超过约1×10^-7M、不超过约1×10^-8M、不超过约1×10^-9M)，但对来自第二非人哺乳动物物种的该抗原同源物的结合亲和力比其对该人抗原的结合亲和力弱至少约50倍或至少约500倍或至少约1000倍。物种依赖性抗体可以是如上定义的各种抗体中的任何一种，并且可以是人源化或人抗体。

如本文所用的术语“高变区”、“HVR”或“HV”是指在序列上高变和/或形成结构上限定的环的抗体可变结构域的区域。通常，抗体包含六个HVR；三个在VH中(H1、H2、H3)，并且三个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3在六个HVR中表现出最多的多样性，尤其是H3被认为在赋予抗体精细特异性方面起着独特的作用。参见例如：Xu等人,Immunity 13:37-45(2000)；Johnson和Wu,Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo,ed.,HumanPress,Totowa,N.J.,2003)。实际上，仅由重链组成的天然存在的骆驼科动物抗体在不存在轻链的情况下是有功能并稳定的。参见例如：Hamers-Casterman等人,Nature 363:446-448(1993)；Sheriff等人,Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。

许多HVR描述得到应用，并且包含于本文中。Kabat互补决定区(CDR)基于序列变异性并且是最常用的(Kabat等人，《具有免疫学意义的蛋白质序列》(Sequences of Proteinsof Immunological Interest)，第5版，美国卫生与公众服务部，国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达(1991))。相反，Chothia指的是结构环的位置(Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM HVR表示Kabat HVR和Chothia结构环之间的折衷，并且被牛津分子公司(Oxford Molecular)的AbM抗体建模软件采用。“接触”HVR基于可用的复杂晶体结构的分析结果。这些HVR中的每个的残基如下文所述。

HVR可以包括以下“扩展HVR”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)，以及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些定义中的每一个，可变结构域残基均根据上述Kabat等人的方法进行编号。

“框架”或“FR”残基是除本文定义的HVR残基以外的那些可变结构域残基。

术语“如Kabat的文献中所述的可变结构域残基编号”或“如Kabat的文献中所述的氨基酸位置编号”及其变型是指上述Kabat等人的文献中的用于抗体汇编的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用该编号系统，实际线性氨基酸序列可能包含较少或附加的氨基酸，其对应于可变结构域的FR或HVR的缩短或插入。例如，重链可变结构域可在H2的残基52之后包括单个氨基酸插入片段(根据Kabat编号的残基52a)以及重链FR残基82之后的插入残基(例如，根据Kabat编号的残基82a、82b和82c等)。可通过将抗体序列与“标准”Kabat编号序列的同源性区域进行比对来确定给定抗体的残基的Kabat编号。

当提及可变结构域中的残基(大约是轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时，通常使用Kabat编号系统(例如，Kabat等人,Sequences of Immunological Interest.第5版，美国卫生与公众服务部，国立卫生研究院，Bethesda,Md.(1991))。当提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号系统”或“EU索引”(例如，上述Kabat等人所报道的EU索引)。“Kabat所述的EU索引”是指人IgG1 EU抗体的残基编号。

表述“线性抗体”是指Zapata等人(1995Protein Eng,8(10):1057-1062)所述的抗体。简而言之，这些抗体包含一对串联的Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)，其与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区。线性抗体可以为双特异性或单特异性的。

如本文所用，术语“特异性结合”或“具有特异性”是指可测量和可再现的相互作用，诸如靶标与抗体之间的结合，在存在分子(包括生物分子)的异质群体的存在下，其确定靶标的存在。例如，与靶标(其可以是表位)特异性结合的抗体是与其结合其他靶标相比具有更大亲和力、亲合力、更容易和/或持续时间更长的结合该靶标的抗体。在一个实施例中，抗体与无关靶标的结合程度为该抗体与抗原结合的小于约10％，例如，通过放射免疫分析(RIA)所测量。在某些实施例中，与靶标特异性地结合的抗体的解离常数(Kd)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM或≤0.1nM。在某些实施例中，抗体与蛋白上的表位特异性结合，该表位在不同物种的蛋白之间具有保守性。在另一实施例中，特异性结合可以包括但不要求排他结合。

II.抗体制剂及制备

在一些实施例中，本文提供了包含如本文所述的抗PD-L1抗体的液体药物制剂，诸如用于皮下施用的液体药物制剂。在一些实施例中，制剂包含抗PD-L1抗体(例如，单克隆抗体)、蔗糖、缓冲剂和表面活性剂，其中制剂具有约5.0至约6.5的pH。在一些实施例中，制剂进一步包含蛋氨酸。在一些实施例中，制剂中的本文所述的抗PD-L1抗体的浓度为约100g/L至约150g/L。在一些实施例中，缓冲剂为组氨酸(例如，组氨酸乙酸盐)。在一些实施例中，制剂中的缓冲剂的浓度为约15mM至约25mM。在一些实施例中，制剂中的蔗糖为约200mM至约280mM。在一些实施例中，制剂中的表面活性剂为聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20)。在一些实施例中，制剂中的聚山梨醇酯的浓度为约0.005％(w/v)至约0.08％(w/v)。在一些实施例中，制剂包含浓度为约5mM至约15mM的蛋氨酸。在一些实施例中，制剂的pH值为约5.0至约6.3。在一些实施例中，本文提供了液体药物制剂，该制剂包含浓度为约100g/L至约150g/L的如本文所述的抗PD-L1抗体、浓度为约15mM至约25mM的组氨酸乙酸盐、浓度为约200mM至约280mM的蔗糖、浓度为约0.04％(w/v)至约0.08％(w/v)的聚山梨醇酯、浓度为约5mM至约15mM的蛋氨酸并且pH为约5.6至约6.0。在一些实施例中，制剂进一步包含透明质酸酶(例如，重组人透明质酸酶(rHuPh20))。在一些实施例中，制剂包含浓度为约1000U/ml至约3000U/ml的透明质酸酶(例如，rHuPh20)。在一些实施例中，制剂为无菌的。在一些实施例中，制剂适合施用于受试者。在一些实施例中，制剂用于皮下施用。

在一些实施例中，本文提供了液体药物制剂，该制剂包含浓度为约100g/L至约150g/L的如本文所述的抗PD-L1抗体、浓度为约15mM至约25mM的组氨酸乙酸盐、浓度为约200mM至约280mM的蔗糖、浓度为约0.01％(w/v)至约0.03％(w/v)的聚山梨醇酯并且pH为约5.3至约5.7。在一些实施例中，制剂为无菌的。在一些实施例中，制剂适合施用于受试者。在一些实施例中，制剂用于皮下施用。

在一些实施例中，制剂中的抗体在-20℃下可保持稳定至少约6个月、至少约12个月、至少约18个月、至少两年、至少三年或至少四年。在一些实施例中，制剂中的抗体在2-8℃下可保持稳定至少约6个月、至少约12个月、至少约18个月、至少两年或至少三年。在一些实施例中，在储存后，抗体保持其储存前(即，在药物制剂制备时)表现出的生物活性生物活性(例如，与靶标结合或疗效)的至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％。

在某些实施例中，制剂在约40℃下可保持稳定至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、14天、21天、28天或更多天。在某些实施例中，制剂在约40℃下可保持稳定至少约1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周或更多周。在某些实施例中，制剂在约25℃下可保持稳定至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月或更多个月。在某些实施例中，制剂在约5℃下可保持稳定至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月或更多个月。在某些实施例中，制剂在约-20℃下可保持稳定至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月、25个月、26个月、27个月、28个月、29个月、30个月、31个月、32个月、33个月、34个月、35个月、36个月、37个月、38个月、39个月、40个月、41个月、42个月、43个月、44个月、45个月、46个月、47个月、48个月或更多个月。在某些实施例中，制剂在5℃或-20℃下可保持稳定至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、13个月、14个月、15个月、16个月、17个月、18个月、19个月、20个月、21个月、22个月、23个月、24个月、25个月、26个月、27个月、28个月、29个月、30个月、31个月、32个月、33个月、34个月、35个月、36个月、37个月、38个月、39个月、40个月、41个月、42个月、43个月、44个月、45个月、46个月、47个月、48个月或更多个月。此外，在一些实施例中，制剂在该制剂冷冻(至例如-20℃、-40℃和-70℃)和解冻后(例如，在1次、2次、3次、4次或5次冻融循环后)保持稳定。

A.抗PD-L1抗体

在一些实施例中，制剂中的抗体为抗PD-L1抗体。PD-L1(程序性细胞死亡1配体1)，也称为PDL1、B7-H1、B7-4、CD274和B7-H，是一种跨膜蛋白，并且它与PD-1的相互作用抑制T细胞活化和细胞因子产生。在一些实施例中，本文所述的抗PD-L1抗体与人PD-L1结合。可使用本文所述的制剂配制的抗PDL1抗体的实例描述于PCT专利申请号WO 2010/077634 A1、US8,217,149和US 2016/0319022，这些专利以引用方式并入本文。

在一些实施例中，抗PD-L1抗体能够抑制PD-L1和PD-1之间和/或PD-L1和B7-1之间的结合。在一些实施例中，抗PD-L1抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，抗PD-L1抗体是选自由Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和(Fab')₂片段组成的组的抗体片段。在一些实施例中，抗PD-L1抗体为全长抗体。在一些实施例中，抗PD-L1抗体是人源化抗体。在一些实施例中，抗PD-L1抗体是人抗体。

WO 2010/077634 A1、US 8,217,149和US 2016/0319022中描述的抗PD-L1抗体可以配制为本文所述的制剂。

在一些实施例中，本文所述的制剂中的抗PD-L1抗体包含：

(a)轻链可变区，其包含：

(1)HVR-L1，其包含氨基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)；

(2)HVR-L2，其包含氨基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)；

(3)HVR-L3，其包含氨基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)；

和

(b)重链可变区，其包含：

(1)HVR-H1，其包含氨基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)；

(2)HVR-H2，其包含氨基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)；

(3)HVR-H3，其包含氨基酸序列WPGGFDY(SEQ ID NO:6)。

在又一个实施例中，本文所述的制剂中的抗PD-L1抗体包含重链和轻链序列，其中：

(a)重链可变区序列与以下重链可变区序列具有至少85％的序列一致性：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:8)，或

(b)轻链可变区序列与以下轻链可变区序列具有至少85％的序列一致性：

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYS

ASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:7)。

在一些实施例中，制剂中的所述单克隆抗体包含：轻链可变区，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，以及重链可变区，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些实施例中，制剂中的所述单克隆抗体包含：轻链可变区，其与具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性；以及重链可变区，其与具有SEQ IDNO:8的氨基酸序列的重链可变区具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。

在又一特定方面，抗体进一步包含人或鼠恒定区。在另一方面，人恒定区选自IgG1、IgG2、IgG2、IgG3和IgG4。在又一特定方面，人恒定区是IgG1。在另一方面，鼠恒定区选自IgG1、IgG2A、IgG2B和IgG3。在另一方面，鼠恒定区为IgG2A。在又一特定方面，抗体具有降低的或最小的效应子功能。在更进一步具体方面，最小的效应子功能来自“较少效应子的Fc突变”或无糖基化。在另一实施例中，无效应子Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A取代。

(a)重链序列与重链序列具有至少85％的序列同一性：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:10)，或

(b)轻链序列与轻链序列具有至少85％的序列同一性：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:9)。

在一些实施例中，提供了包含重链和轻链序列的分离的抗PD-L1抗体，其中轻链序列与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。在一些实施例中，提供了包含重链和轻链序列的分离的抗PD-L1抗体，其中重链序列与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。在一些实施例中，提供了包含重链和轻链序列的分离的抗PD-L1抗体，其中轻链序列与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性，并且重链序列与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。

在一些实施例中，提供了包含重链和轻链的分离的抗PD-L1抗体，其中所述轻链包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，并且重链包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。

在一些实施例中，本文所述的制剂中的抗PD-L1抗体包含：

(a)轻链可变区，其包含：

(1)HVR-L1，其包含氨基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)；

(2)HVR-L2，其包含氨基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)；

(3)HVR-L3，其包含氨基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)；

和

(b)重链可变区，其包含：

(1)HVR-H1，其包含氨基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)；

(2)HVR-H2，其包含氨基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)；

(3)HVR-H3，其包含氨基酸序列WPGGFDY(SEQ ID NO:6)。在一些实施例中，抗PD-L1抗体包含：轻链可变区，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，以及重链可变区，其包含SEQ IDNO:8的氨基酸序列。在一些实施例中，制剂中的所述单克隆抗体包含：轻链可变区，其与具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性；以及重链可变区，其与具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。

在一些实施例中，本文所述的制剂中的抗PD-L1抗体包含：

(a)轻链可变区，其包含：

(1)HVR-L1，其包含氨基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)；

(2)HVR-L2，其包含氨基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)；

(3)HVR-L3，其包含氨基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)；

和

(b)重链可变区，其包含：

(1)HVR-H1，其包含氨基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)；

(2)HVR-H2，其包含氨基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)；

(3)HVR-H3，其包含氨基酸序列WPGGFDY(SEQ ID NO:6)。在一些实施例中，抗PD-L1抗体包含重链和轻链序列，其中轻链序列与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。在一些实施例中，提供了包含重链和轻链序列的分离的抗PD-L1抗体，其中重链序列与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。在一些实施例中，提供了包含重链和轻链序列的分离的抗PD-L1抗体，其中轻链序列与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性，并且重链序列与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性。

在一些实施例中，分离的抗PD-L1抗体为氧化单克隆抗体。在一些实施例中，制剂中的氧化单克隆抗体包含：轻链，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，以及重链，其包含SEQID NO:10的氨基酸序列。在一些实施例中，制剂中的氧化单克隆抗体包含：重链，其包含SEQID NO:10的氨基酸序列，其中W33、W50或W101中的一者或多者被氧化。在一些实施例中，制剂中的氧化单克隆抗体包含：重链，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中M253和M429中的一者或多者被氧化。在一些实施例中，氧化单克隆抗体保持其储存前(即，在药物制剂制备时)表现出的生物活性生物活性(例如，与靶标结合或疗效)的至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％。

在一些实施例中，分离的抗PD-L1抗体为糖基化单克隆抗体。在一些实施例中，制剂中的糖基化单克隆抗体包含：轻链，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，以及重链，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一些实施例中，制剂中的糖基化单克隆抗体包含：重链，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中赖氨酸中的一者或多者被糖基化。在一些实施例中，制剂中的糖基化单克隆抗体包含：重链，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其中K65被糖基化。

在一些实施例中，分离的抗PD-L1抗体是去糖基化的。

在一些实施例中，抗PD-L1抗体为阿特珠单抗

在本文实施例中的任一者中，分离的抗PDL1抗体可与人PD-L1(例如UniProtKB/Swiss-Prot登录号Q9NZQ7.1中所示的人PD-L1)或其变体结合。

在又一个实施例中，提供了编码本文所述的抗体中的任一者的分离的核酸。在一些实施例中，核酸进一步包含适用于表达编码前述抗PD-L1抗体中的任一者的核酸的载体。在更进一步具体方面，载体在适用于表达核酸的宿主细胞中。在又一个具体方面，宿主细胞是真核细胞或原核细胞。在又一个具体方面，所述真核细胞是哺乳动物细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)。

抗体或其抗原结合片段可以使用本领域已知的方法来制备；例如，通过包括以下步骤的方法制备：在适用于产生此类抗体或片段的条件下，培养适用于表达的形式的含有编码前述抗PD-L1抗体或抗原结合片段中任一种的核酸的宿主细胞，并且回收抗体或片段。

B.抗体制备

通常，用于研究、试验和临床的抗体的各种制备方法在本领域中是公认的。使用本领域中用于产生抗体的可获得的技术制备制剂中的抗体，其示例性方法描述于WO 2010/077634 A1、US 8,217,149和US 2016/0319022中。

C.生物活性抗体

可以对如上所述产生的抗体进行一种或多种“生物活性”测定，以从治疗角度选择具有有益特性的抗体，或选择保留抗体生物活性的制剂和条件。可以测试抗体与它所针对的抗原结合的能力。例如，对于抗PD-L1抗体，可以在检测与PD-L1结合能力的测定法中评价抗体的抗原结合特性。在一些实施例中，抗体的结合可以通过例如饱和结合、ELISA和/或竞争分析(例如RIA)确定。而且，可以对抗体进行其他生物活性测定，例如，以评价其作为治疗剂的有效性。此类测定是本领域已知的，并且取决于靶抗原和抗体的预期用途。例如，可以在CD8+T细胞、淋巴细胞性脉络膜脑膜炎病毒(LCMV)小鼠模型和/或同基因肿瘤模型中，例如在美国专利8,217,149中描述的，评估抗体对PD-L1阻断的生物学作用。

为了筛选与目的抗原上特定表位结合的抗体(例如，阻断本实例的抗PDL1抗体与PD-L1结合的抗体)，需要进行常规的交叉阻断测定，例如《抗体——实验室手册》(Antibodies,A Laboratory Manual，冷泉港实验室，Harlow和David Lane编撰(1988))中所述。替代地，表位作图，例如，如在Champe等人,J.Biol.Chem.270:1388-1394(1995)中所述，可以用来确定抗体是否结合目的表位。

D.制剂的制备

在制备目标抗体之后(例如，产生可以如本文公开配制的抗体的技术将在下文详述，并且是本领域已知的)，制备包含它的药物制剂。在某些实施例中，待配制的抗体未经预先冻干，并且本文目标制剂是水性制剂。在某些实施例中，制剂用于皮下施用。在某些实施例中，抗体是全长抗体。在一些实施例中，制剂中的抗体为抗体片段，诸如F(ab')₂，在这种情况下，可能需要解决使用全长抗体时可能不会发生的问题(诸如将抗体剪接到Fab)。制剂中存在的抗体的治疗有效量例如通过考虑所需的剂量体积和施用方式来确定。制剂中如本文所述的抗体的示例性浓度为约100g/L至约150g/L或约110g/L至约140g/L或约120g/L至约130g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约100g/L至约150g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约110g/L至约140g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约120g/L至约130g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约100g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约105g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约110g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约115g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约120g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约125g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约130g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约135g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约140g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约145g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为约150g/L。制剂中如本文所述的抗体的示例性浓度为100g/L至150g/L、或110g/L至140g/L、或120g/L至130g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为100g/L至150g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为110g/L至140g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为120g/L至130g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为100g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为105g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为110g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为115g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为120g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为125g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为130g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为135g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为140g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为145g/L。在一些实施例中，制剂中的抗体的浓度为150g/L。

制备在pH缓冲溶液中包含抗体的液体药物制剂。本发明的缓冲剂的pH在约5.0至约6.5的范围内。在某些实施例中，pH在约5.3至约6.0的范围内，pH在约5.6至约6.0的范围内，在月5.7至约5.9的范围内，pH在约5.3至约5.7的范围内，pH在约5.4至约5.6的范围内，pH在约5.5至约5.8的范围内，pH在约5.0至约6.0的范围内，pH在约5.1至约5.8的范围内，pH在约5.2至约5.8的范围内，pH在约5.3至约5.8的范围内，或pH在约5.4至约5.8的范围内。在本发明的某些实施例中，制剂的pH为5.2或约5.2。在本发明的某些实施例中，制剂的pH为5.3或约5.3。在本发明的某些实施例中，制剂的pH为5.4或约5.4。在本发明的某些实施例中，制剂的pH为5.5或约5.5。在本发明的某些实施例中，制剂的pH为5.6或约5.6。在本发明的某些实施例中，制剂的pH为5.7或约5.7。在本发明的某些实施例中，制剂的pH为5.8或约5.8。在本发明的某些实施例中，制剂的pH为5.9或约5.9。在本发明的某些实施例中，制剂的pH为6.0或约6.0。将pH控制在该范围内的缓冲剂的实例包括组氨酸(例如L-组氨酸)或乙酸钠。在某些实施例中，缓冲剂包含浓度为约15mM至约25mM的乙酸组氨酸或乙酸钠。在本发明的某些实施例中，缓冲剂包含浓度为约15mM至约25mM、约16mM至约25mM、约17mM至约25mM、约18mM至约25mM、约19mM至约25mM、约20mM至约25mM、约21mM至约25mM、约22mM至约25mM、约15mM、约16mM、约17mM、约18mM、约19mM、约20mM、约21mM、约22mM、约23mM、约24mM或约25mM的组氨酸乙酸盐或乙酸钠。在某些实施例中，缓冲剂包含浓度为约15mM至约25mM的组氨酸乙酸盐。在本发明的某些实施例中，缓冲剂包含浓度为约15mM至约25mM、约16mM至约25mM、约17mM至约25mM、约18mM至约25mM、约19mM至约25mM、约20mM至约25mM、约21mM至约25mM、约22mM至约25mM、约15mM、约16mM、约17mM、约18mM、约19mM、约20mM、约21mM、约22mM、约23mM、约24mM或约25mM的组氨酸乙酸盐。在本发明的某些实施例中，缓冲剂包含浓度为约20mM的组氨酸乙酸盐。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为5.0。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为5.1。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为5.2。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为5.3。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为5.4。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为5.5。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为5.6。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为5.7。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为5.8。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为5.9。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为6.0。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为6.1。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为6.2。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为6.3。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为6.4。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为约20mM，pH为6.5。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为5.0。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为5.1。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为5.2。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为5.3。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为5.4。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为5.5。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为5.6。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为5.7。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为5.8。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为5.9。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为6.0。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为6.1。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为6.2。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为6.3。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为6.4。在一个实施例中，缓冲剂为组氨酸乙酸盐，其量为20mM，pH为6.5。

制剂进一步包含含量为约200mM至约280mM的蔗糖。在一些实施例中，制剂中的蔗糖为约210mM至约280mM、约220mM至约280mM、约230mM至约280mM、约240mM至约280mM、约200mM至约270mM、约200mM至约260mM、约200mM至约240mM、约210mM至约270mM、约220mM至约260mM、约230mM至约250mM或约235mM至约245mM。在一些实施例中，制剂中的蔗糖为约200mM、约210mM、约220mM、约230mM、约235mM、约240mM、约245mM、约250mM、约260mM、约270mM或约280mM。在一些实施例中，制剂中的蔗糖为约240mM。制剂进一步包含含量为200mM至280mM的蔗糖。在一些实施例中，制剂中的蔗糖为210mM至280mM、220mM至280mM、230mM至280mM、240mM至280mM、200mM至270mM、200mM至260mM、200mM至240mM、210mM至270mM、220mM至260mM、230mM至250mM或235mM至245mM。在一些实施例中，制剂中的蔗糖为200mM、210mM、220mM、230mM、约235mM、240mM、245mM、250mM、260mM、270mM或280mM。在一些实施例中，制剂中的蔗糖为240mM。

在一些实施例中，将表面活性剂添加至抗体制剂。示例性的表面活性剂包括非离子表面活性剂，诸如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20、80等)或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188等)。加入的表面活性剂的量应使其减少配制的抗体的聚集和/或使制剂中颗粒的形成最小化和/或减少吸附。例如，表面活性剂可以约0.005％(w/v)至约0.08％(w/v)的量存在于制剂中。在一些实施例中，表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20)为约0.005％至约0.07％、约0.005％至约0.065％、约0.005％至约0.06％、约0.01％至约0.08％、约0.015％至约0.08％、约0.02％至约0.08％、约0.01％至约0.03％、约0.01％至约0.025％、约0.01％至约0.02％、约0.015％至约0.03％、约0.02％至约0.03％、约0.015％至约0.025％、约0.02％至约0.04％、约0.05％至约0.08％、约0.055％至约0.08％、约0.06％至约0.08％、约0.05％至约0.07％、约0.05％至约0.065％、约0.055％至约0.065％、约0.06％至约0.07％、约0.06％至约0.065％、约0.055％至约0.06％或约0.055％至约0.07％。在某些实施例中，表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20)为约0.02％(w/v)。在某些实施例中，表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20)为约0.06％(w/v)。在某些实施例中，表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20)为0.02％(w/v)。在某些实施例中，表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20)为0.06％(w/v)。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.01％或约0.01％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.015％或约0.015％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.02％或约0.02％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.025％或约0.025％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.03％或约0.03％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.05％或约0.05％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.055％或约0.055％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.06％或约0.06％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.065％或约0.065％的量存在于制剂中。在某些实施例中，表面活性剂(例如聚山梨醇酯20)以0.07％或约0.07％的量存在于制剂中。

在一些实施例中，将蛋氨酸添加到抗体制剂中。在一些实施例中，制剂中的蛋氨酸为约1mM至约20mM、约5mM至约15mM、约6mM至约14mM、约7mM至约13mM、约8mM至约12mM、约9mM至约11mM、约8mM至约13mM、约8mM至约11mM、约8mM至约10mM、约9mM至约13mM、约9mM至约12mM或约9mM至约10mM。在某些实施例中，制剂中的蛋氨酸为约5mM、约6mM、约7mM、约8mM、约9mM、约10mM、约11mM、约12mM、约13mM、约14mM或约15mM。在一个特定实施例中，制剂中的蛋氨酸为约10mM。在一些实施例中，制剂中的蛋氨酸为1mM至20mM、5mM至15mM、6mM至14mM、7mM至13mM、8mM至12mM、9mM至11mM、8mM至13mM、8mM至11mM、8mM至10mM、9mM至13mM、9mM至12mM或9mM至10mM。在某些实施例中，制剂中的蛋氨酸为5mM、6mM、7mM、8mM、9mM、10mM、11mM、12mM、13mM、14mM或15mM。在一个特定实施例中，制剂中的蛋氨酸为10mM。

在某些实施例中，将透明质酸降解酶(或透明质酸酶)或透明质酸合成抑制剂添加到本文所述的抗体制剂中，在施用之前与本文所述的抗体制剂混合，或与本文所述的抗体制剂共同施用。透明质酸(玻尿酸；HA)是一种糖胺聚糖，主要存在于哺乳动物的结缔组织、皮肤、软骨和滑液中。在结缔组织中，与透明质酸相关联的结合水在组织之间形成水合基质。HA存在于许多细胞的细胞外基质中，尤其是在软结缔组织中。透明质酸酶是降解透明质酸的酶。

糖胺聚糖(GAG)是细胞外基质(ECM)的复杂的线性多糖。GAG的特征在于N-取代的己糖胺和糖醛酸(在透明质酸(HA)、硫酸软骨素(CS)、软骨素(C)、硫酸皮肤素(DS)、硫酸乙酰肝素(HS)和肝素(H)的情况下)或半乳糖(在硫酸角质素(KS)的情况下)的重复二糖结构。除HA外，均与核心蛋白共价结合。GAG与其核心蛋白在结构上被称为蛋白聚糖(PG)。

HA存在于许多细胞的细胞外基质中，尤其是在软结缔组织中。已确定HA各种生理功能，诸如在水中和血浆蛋白稳态中(Laurent T.C.等人,FASEB J.,1992；6:2397-2404)。增殖细胞中的HA产生增加，并且可能在有丝分裂中发挥作用。它还与运动和细胞迁移有关。HA似乎在细胞调节、发育和分化中发挥重要作用(Laurent等人，同上)。HA已广泛应用于临床医学领域。其组织保护和流变特性已被证明可用于眼科手术(例如，在白内障手术期间保护角膜内皮)。透明质酸蛋白质相互作用还涉及细胞外基质或“基质”的结构。

透明质酸酶是一组存在于动物界中的大致中性或酸性活性酶。透明质酸酶在底物特异性和作用机制方面有所不同(WO 2004/078140)。透明质酸酶分为三大类：

1.哺乳动物型透明质酸酶(EC 3.2.1.35)，其为内切-β-N-乙酰己糖胺酶，以四糖和六糖作为主要最终产物。它们均具有水解和转糖苷酶活性，并且能够降解透明质酸和硫酸软骨素(CS)(通常是C4-S和C6-S)。

2.细菌透明质酸酶(EC 4.2.99.1)降解透明质酸，并且在不同程度上降解CS和DS。它们是内切-β-N-乙酰氨基己糖苷酶，通过主要产生二糖最终产物的β消除反应起作用。

3.来自水蛭、其他寄生虫和甲壳类动物的透明质酸酶(EC 3.2.1.36)是内切-β-葡萄糖醛酸酶，其通过β1-3键水解而产生四糖和六糖最终产物。

哺乳动物透明质酸酶可进一步分为两组：中性活性酶和酸性活性酶。人类基因组中有六个类透明质酸酶基因，分别是HYAL1、HYAL2、HYAL3、HYAL4、HYALP1和PH20/SPAM1。HYALP1是一种假基因，并且HYAL3尚未显示出对任何已知底物具有酶活性。HYAL4是一种软骨素酶，对透明质酸几乎没有活性。HYAL1是原型酸活性酶，PH20是原型中性活性酶。酸活性透明质酸酶诸如HYAL1和HYAL2通常在中性pH(即pH 7)下缺乏催化活性。例如，HYALl在pH4.5的体外环境下几乎没有催化活性(Frost I.G.和Stern,R.,"A microtiter-basedassay for hyaluronidase activity not requiring specialized reagents",Anal.Biochemistry,1997；251:263-269)。HYAL2是一种酸活性酶，在体外具有非常低的比活性。

透明质酸酶样酶的特征还在于那些通常经由糖基磷脂酰肌醇锚定物锁定到细胞质膜的酶，诸如人HYAL2和人PH20(Danilkovitch-Miagkova等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2003；100(8):4580-4585；Phelps等人,Science1988；240(4860):1780-1782)，以及通常可溶的那些酶诸如人HYAL1(Frost,I.G.等人,"Purification,cloning,and expression of human plasma hyaluronidase",Biochem.Biophys.Res.Commun.1997；236(1):10-15)。但是，物种之间存在差异：例如，牛PH20非常松散地附着在细胞质膜上，并且不经由对磷酸脂酶敏感的锚定物进行锚定(Lalancette等人,Biol Reprod.,2001；65(2):628-36)。牛透明质酸酶的这一独特特征允许使用可溶性牛睾丸透明质酸酶作为用于临床的提取物(Wydase^TM,Hyalase^TM)。其他PH20种类是脂质锚定的酶，如果不使用洗涤剂或脂肪酶，它们通常是不可溶的。例如，人PH20经由GPI锚定物锚定到细胞质膜。制备不将脂质锚定物引入多肽的人PH20 DNA构建体的尝试导致没有催化活性的酶或不溶性酶(Arming等人,Eur.J.Biochem.,1997；1；247(3):810-4)。天然存在的猕猴精子透明质酸酶同时以可溶性和膜结合形式存在。虽然64kDa膜结合形式在pH 7.0下具有酶活性，但54kDa形式仅在pH 4.0下具有活性(Cherr等人,Dev.Biol,1996；10；175(1):142-53)。因此，可溶形式的PH20在中性条件下通常缺乏酶活性。

根据WO2006/091871和美国专利号7,767,429中的教导，可将少量可溶性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)引入制剂中以便促进治疗药物施用于皮下组织。通过在细胞外空间中快速解聚HA，sHASEGP降低了间质的粘度，从而增加了水分传导，并且允许将更大的体积安全舒适地施用于SC组织。sHASEGP通过降低间质粘度所诱导的水分传导增加可实现更高程度的分散，可能增加SC施用的治疗药物的全身生物利用度。

当注射到皮下组织时，sHASEGP对HA的解聚作用定位于SC组织中的注射部位。实验证据表明，sHASEGP在小鼠的间质空间局部失活，半衰期为13分钟至20分钟，在CD-I小鼠单次静脉内给药后在血液中未检测到全身吸收。在血管腔隙内，在剂量高达0.5mg/kg的情况下，sHASEGP在小鼠和食蟹猴中的半衰期分别为2.3分钟和5分钟。sHASEGP的快速清除，与SC组织中HA底物的持续合成相结合，导致其他共注入的分子的瞬时和局部活性渗透增强，其效果在施用后24小时至48小时内完全可逆(Bywaters G.L.等人,"Reconstitution of thedermal barrier to dye spread after Hyaluronidase injection",Br.Med.J.,1951；2(4741):1178-1183)。

除影响局部液体分散以外，sHASEGP还用作吸收促进剂。大于16千道尔顿(kDa)的大分子在很大程度上被排除在毛细血管扩散吸收之外，并且大部分经由引流淋巴结吸收。因此，皮下施用的大分子诸如治疗性抗体(分子量约150kDa)必须穿过间质基质，然后才能到达引流淋巴管，随后吸收到血管腔隙内。通过增加局部分散，sHASEGP提高了许多大分子的吸收率(Ka)。这导致峰值血液含量(C_max)增加，并且可能导致相对于在不存在sHASEGP的情况下进行SC施用，生物利用度有所增加(Bookbinder L.H.等人,"A recombinant humanenzyme for enhanced interstitial transport of therapeutics",J.Control.Release2006；114:230-241)。

动物源性透明质酸酶产品已在临床上使用了60多年，主要用于增加其他共同施用的药物的分散和吸收以及用于皮下输液(SC注射/大容量输液)(Frost G.I.,"Recombinanthuman hyaluronidase(rHuPH20):an enabling platform for subcutaneous drug andfluid administration",Expert Opinion on Drug Delivery,2007；4:427-440)。透明质酸酶的作用机制细节已详细描述于以下出版物中：Duran-Reynolds F.,"A spreadingfactor in certain snake venoms and its relation to their mode of action",CRSoc Biol Paris,1938；69-81；Chain E.,"A mucolytic enzyme in testes extracts",Nature 1939；977-978；Weissmann B.,"The transglycosylative action of testicularhyaluronidase",J.Biol.Chem.,1955；216:783-94；Tammi,R.,Saamanen,A.M.,Maibach,H.I.,Tamrni M.,"Degradation of newly synthesized high molecular masshyaluronan in the epidermal and dermal compartments of human skin in organculture",J.Invest.Dermatol.1991；97:126-130；Laurent,U.B.G.,Dahl,L.B.,Reed,R.K.,"Catabolism of hyaluronan in rabbit skin takes place locally,in lymphnodes and liver",Exp.Physiol.1991；76:695-703；Laurent,T.C.and Fraser,J.R.E.,"Degradation of Bioactive Substances:Physiology and Pathophysiology",Henriksen,J.H.(Ed)CRC Press,Boca Raton,FL；1991；第249-265页；Harris,E.N.等人,"Endocytic function,glycosaminoglycan specificity,and antibody sensitivity ofthe recombinant human 190-kDa hyaluronan receptor for endocytosis(HARE)",J.Biol.Chem.2004；279:36201-36209；Frost,G.I.,"Recombinant human hyaluronidase(rHuPH20):an enabling platform for subcutaneous drug and fluidadministration",Expert Opinion on Drug Delivery,2007；4:427-440。在欧盟国家获得批准的透明质酸酶产品包括

"Dessau"和

在美国获得批准的动物源性透明质酸酶产品包括Vitrase^TM、Hydase^TM和Amphadase^TM。

透明质酸酶产品的安全性和功效已得到广泛确认。已确定的最重要的安全风险是超敏反应和/或变应原性，这被认为与动物源性制剂的纯度不足有关(Frost,G.I.,"Recombinant human hyaluronidase(rHuPH20):an enabling platform forsubcutaneous drug and fluid administration",Expert Opinion on Drug Delivery,2007；4:427-440)。应当指出的是，英国、德国和美国在批准的动物源性透明质酸酶剂量方面存在差异。在英国，作为皮下或肌内注射液佐剂的常用剂量为1500单位，直接添加至注射液中。在美国，用于该目的的常用剂量为150单位。在皮下输液中，透明质酸酶用于帮助皮下施用相对大体积的液体。在英国，一般每500ml至1000ml皮下用液体给予1500单位的透明质酸酶。在美国，每升皮下输液150单位被认为足够。在德国，150单位至300单位被认为足以满足此目的。在英国，添加1500单位后，加快了局部麻醉剂的扩散。在德国和美国，150个单位被认为足以满足此目的。尽管存在剂量差异(英国的剂量是美国的十倍)，但分别在美国和英国上市的动物源性透明质酸酶产品的安全性特征报告无明显差异。2005年12月2日，Halozyme Therapeutics Inc.的重组人透明质酸酶可注射制剂rHuPH20(HYLENEX^TM)获得FDA批准。FDA批准将150单位剂量的HYLENEX^TM用于以下适应症的SC施用：

-作为佐剂以增加其他注射药物的吸收和分散

-用于皮下输液

-作为SC尿路造影术的佐剂，以改善不透射线药剂的吸收。

作为该监管审查的一部分，已确定rHuPH20具有与先前批准的动物源性透明质酸酶制剂相同的增强其他注射药物的分散和吸收的特性，但具有改进的安全性特征。特别地，与动物源性透明质酸酶相比，重组人透明质酸酶(rHuPH20)的使用使动物病原体和传染性海绵状脑病污染的潜在风险降至最低。

可溶性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)、其制备方法及其在药物组合物中的使用已描述于WO 2004/078140中。下文进一步概述的详细实验工作表明，要求保护的制剂出人意料地具有良好的储存稳定性并且满足获得卫生当局批准的所有必需的要求。

据信，根据本发明所述的制剂中的透明质酸酶增强了抗PD-L1抗体向体循环的递送，例如通过增加活性物质的吸收来实现(其用作渗透增强剂)。另外，据信透明质酸酶通过透明质酸(SC间质组织的细胞外成分)的可逆水解，增加了治疗性抗PD-L1抗体经由皮下施用途径向体循环中的递送。透明质酸在皮下组织中的水解暂时打开了SC组织间隙空间中的通道，从而改善了治疗性抗PD-L1抗体向体循环中的递送。此外，施用表面人疼痛减轻并且SC组织因体积引起的肿胀减少。

当局部施用时，透明质酸酶在局部具有其整体效应。换言之，透明质酸酶在几分钟内局部失活并且被代谢，并且未见其具有全身或长期影响。透明质酸酶进入血流后几分钟内快速失活，使得在不同透明质酸酶产品之间进行可比较的生物分布研究变得不切实际。由于透明质酸酶产品不能在远处发挥作用，因此该特性还使任何潜在的全身安全性问题最小化。根据本发明所述的所有透明质酸酶的统一特征是它们能够解聚透明质酸，而与化学结构、物种来源、组织来源或来自相同物种和组织的药品批次的差异无关。以下事实并不罕见：尽管它们具有不同的结构，但其活性相同(功效除外)。根据本发明所述的制剂的透明质酸酶的特征在于，对本文所述的稳定药物制剂中的抗PD-L1抗体的分子完整性无不利影响。此外，透明质酸酶仅改变抗PD-L1抗体向体循环的递送，但不具有可提供或有助于全身吸收的抗PD-L1抗体的治疗作用的特性。在根据本发明所述的稳定药物制剂的推荐储存条件下，透明质酸酶并非全身生物可利用的，并且对抗PD-L1抗体的分子完整性无不利影响。因此，它被视为根据本发明所述的抗PD-L1抗体制剂中的赋形剂。由于它不发挥治疗作用，因此其代表除治疗活性抗PD-L1抗体之外的药物形式的成分。根据本发明所述的许多合适的透明质酸酶在现有技术中是已知的。在一些实施例中，酶为人透明质酸酶，诸如称为rHuPH20的酶。rHuPH20是中性和酸活性β-1,4糖基水解酶家族的成员，其通过水解N-乙酰氨基葡糖的Ci位与葡糖醛酸的C₄位之间的β-1,4键来解聚透明质酸。透明质酸是一种多糖，存在于结缔组织(诸如皮下间质组织)和某些特殊组织(诸如脐带和玻璃体液)的细胞内基质中。透明质酸的水解暂时降低间质组织的粘度并且促进注射液或局部渗出液或分泌液的分散，从而促进它们吸收。透明质酸酶的作用是局部且可逆的，组织透明质酸在24小时至48小时内发生完全重建(Frost,G.I.,"Recombinant human hyaluronidase(rHuPH20):an enablingplatform for subcutaneous drug and fluid administration",Expert Opinion onDrug Delivery,2007；4:427-440)。通过透明质酸的水解增加结缔组织的渗透性，与透明质酸酶增加共同施用的分子分散和吸收的能力相关。

人类基因组包含若干透明质酸酶基因。仅PH20基因产物在生理细胞外条件下具有有效的透明质酸酶活性并且用作扩散剂，而酸活性透明质酸酶不具有该特性。rHuPH20是目前可用于治疗用途的第一种也是唯一一种重组人透明质酸酶。人类基因组包含若干透明质酸酶基因。仅PH20基因产物在生理细胞外条件下具有有效的透明质酸酶活性并且用作扩散剂。天然存在的人PH20蛋白具有附着在羧基末端氨基酸上的脂质锚定物，该锚定物将其锚定至细胞质膜。Halozyme开发的rHuPH20酶是一种截短的缺失变体，在负责脂质附着的羧基端缺乏此类氨基酸。其产生一种可溶性、中性pH活性酶，类似于牛睾丸制剂中存在的蛋白质。rHuPH20蛋白质由包含35个氨基酸的信号肽合成，该信号肽在分泌过程中从N端去除。成熟的rHuPH20蛋白含有与某些牛透明质酸酶制剂中存在的氨基酸序列直系同源的真实N端氨基酸序列。

PH20透明质酸酶，包括动物源性PH20和重组人rHuPH20，通过水解N-乙酰氨基葡萄糖的C₁位与葡糖醛酸的C₄位之间的β-1,4键来解聚透明质酸。四糖是最小的消化产物(Weissmann,B.,"The transglycosylative action of testicular hyaluronidase",J.Biol.Chem.,1955；216:783-94)。这种N-乙酰氨基葡萄糖/葡糖醛酸结构未见于重组生物产品的N-连接聚糖中，因此rHuPH20不影响与其一起配制的抗体的糖基化。rHuPH20酶本身每个分子具有六个N-连接聚糖，其核心结构与单克隆抗体中结构的相似。正如预期的那样，这些N连接结构不随时间推移而改变，确认rHuPH20对这些N连接聚糖结构缺乏酶活性。rHuPH20的短半衰期以及透明质酸的持续合成导致酶对组织的短暂的局部作用。

作为根据本发明所述的皮下制剂中的赋形剂的透明质酸酶可通过使用重组DNA技术来制备。通过这种方式，确保始终获得相同的蛋白质(相同的氨基酸序列)，并且避免在从组织中提取期间由共同纯化的污染蛋白质引起过敏反应。在一些实施例中，根据本发明所述的制剂中使用的透明质酸酶是人类酶，诸如rHuPH20。rHuPH20(HYLENEX^TM)的氨基酸序列是众所周知的，并且能够以CAS登记号757971-58-7获得。近似分子量为61kDa(另外参见美国专利号7,767,429)。

已经在天然来源的哺乳动物透明质酸酶与来自人类和其他哺乳动物的PH-20cDNA克隆之间进行了多重结构和功能比较。PH-20基因是用于重组产物rHuPH20的基因；但是，重组药品是由PH-20基因编码的完整蛋白质的447个氨基酸截短版本。在任何比较中，在氨基酸序列方面的结构相似性很少超过60％。功能比较表明，rHuPH20的活性与先前批准的透明质酸酶产品的活性非常相似。这些信息与过去50年的临床发现一致，即无论透明质酸酶的来源如何，透明质酸酶单位的临床安全性和功效是等效的。在根据本发明所述的抗PD-L1抗体SC制剂中使用rHuPH20，允许施用更高体积的药品并且可能增强皮下施用的抗PD-L1抗体诸如阿特珠单抗向体循环中的吸收。

已经提出通过使用少量可溶性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)促进治疗性蛋白质和抗体的皮下注射；参见WO2006/091871。已有研究表明，添加此类可溶性透明质酸酶糖蛋白(作为组合制剂或通过共同施用)促进了将治疗药物施用于皮下组织。通过在细胞外空间中快速解聚透明质酸HA，sHASEGP降低了间质的粘度，从而增加了水分传导，并且允许将更大的体积安全舒适地施用于皮下组织。sHASEGP通过降低间质粘度所诱导的水分传导增加可实现更高程度的分散，可能增加SC施用的治疗药物的全身生物利用度。

在一些实施例中，本文所述的制剂包含有效量的至少一种透明质酸酶(例如rHuPH20)，诸如约1000U/ml至约5000U/ml的量。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约1000U/ml至约4000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约1000U/ml至约3000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约1000U/ml至约2000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约2000U/ml至约4000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约2000U/ml至约3000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约1500U/ml至约3000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约1500U/ml至约2500U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约1500U/ml至约2000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约2000U/ml至约2500U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约1750U/ml至约2250U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约1900U/ml至约2100U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约1950U/ml至约2050U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以约2000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以1000U/ml至4000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以1000U/ml至3000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以1000U/ml至2000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以2000U/ml至4000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以2000U/ml至3000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以1500U/ml至3000U/ml的浓度存在。

在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以1500U/ml至2500U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以1500U/ml至2000U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以2000U/ml至2500U/ml的浓度存在。

在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以1750U/ml至2250U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以1900U/ml至2100U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以1950U/ml至约2050U/ml的浓度存在。在一些实施例中，透明质酸酶(例如，rHuPH20)在制剂中以2000U/ml的浓度存在。

本发明的包含透明质酸酶的液体药物制剂特别适用于皮下注射。本领域技术人员应当清楚地理解，此类包含抗PD-L1抗体和透明质酸酶的制剂可以以一种单一组合制剂的形式或替代性地以两种单独制剂的形式(可在临皮下注射前混合)提供以进行施用。替代性地，抗PD-L1抗体和透明质酸酶可作为单独的注射剂在身体的不同部位施用，诸如在彼此紧邻的部位。还可以将存在于根据本发明所述的制剂中的治疗剂作为连续注射剂注射，例如首先注射透明质酸酶，然后注射抗PD-L1抗体制剂。这些注射也可以以相反的顺序进行，即，首先注射抗PD-L1抗体制剂，然后注射透明质酸酶。在抗PD-L1抗体和透明质酸酶作为单独注射剂施用的情况下，蛋白质中的一者或两者必须提供有缓冲剂、一种或多种稳定剂和非离子型表面活性剂，其浓度如所附权利要求中所指定(但不包括透明质酸酶)。然后可例如在pH为约6.5的L-组氨酸/HCl缓冲剂、100mM至150mM NaCl以及0.01％(w/v)至0.1％(w/v)聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80中提供透明质酸酶。在一个实施例中，抗PD-L1抗体提供有如本文所指定的浓度的缓冲剂、一种或多种稳定剂和非离子型表面活性剂。

如上所述，透明质酸酶可以被视为抗PD-L1抗体制剂中的另一种赋形剂。透明质酸酶可以在制造抗PD-L1抗体制剂时添加至抗PD-L1抗体制剂中，或者可以在注射前不久添加。替代性地，透明质酸酶可以作为单独的注射剂提供。在后一种情况下，透明质酸酶可以在单独的小瓶中以冻干形式提供，其在皮下注射发生之前必须用合适的稀释剂复溶，或者可以由制造商作为液体制剂提供。抗PD-L1抗体制剂和透明质酸酶可以作为单独的实体获得，也可以作为试剂盒提供，该试剂盒包含两种注射成分以及有关其皮下施用的合适的说明。还可以提供有关复溶和/或施用制剂中的一者或两者的合适的说明。

因此，本发明还提供了药物组合物，其由药学活性抗PD-L1抗体或此类抗体与合适量的至少一种透明质酸酶的混合物的高浓度、稳定的药物制剂组成，呈试剂盒的形式，该试剂盒包含两种注射成分以及有关其皮下施用的合适的说明。

本发明的又一方面涉及包含根据本发明所述的液体药物制剂的注射装置。此类制剂可以由药物活性抗PD-L1抗体或此类抗体分子与如本文所概述的合适的赋形剂的混合物组成，并且可另外包含作为组合制剂或作为共同施用的单独制剂的透明质酸酶。

在一些实施例中，本文提供了液体药物制剂，该制剂包含浓度为约100g/L至约150g/L的本文所述的单克隆抗PD-L1抗体、浓度为约15mM至约25mM的组氨酸乙酸盐、浓度为约200mM至约280mM的蔗糖、浓度为约0.04％(w/v)至约0.08％(w/v)的聚山梨醇酯、浓度为约5mM至约15mM的蛋氨酸、浓度为约1000U/ml至约3000U/ml的透明质酸酶、pH为约5.6至约6.0。在一些实施例中，制剂为无菌的。在一些实施例中，制剂适合施用于受试者。在一些实施例中，制剂用于皮下施用。

在一些实施例中，本文提供了液体药物制剂，该制剂包含浓度为约125g/L的本文所述的单克隆抗PD-L1抗体、浓度为约20mM的组氨酸乙酸盐、浓度为约240mM的蔗糖、浓度为约0.06％(w/v)的聚山梨醇酯20、浓度为约10mM的蛋氨酸、浓度为约2000的rHuPH20并且pH为约5.8。在一些实施例中，制剂为无菌的。在一些实施例中，制剂适合施用于受试者。在一些实施例中，制剂用于皮下施用。

在一些实施例中，本文提供了液体药物制剂，该制剂包含浓度为约100g/L至约150g/L的本文所述的单克隆抗PD-L1抗体、浓度为约15mM至约25mM的组氨酸乙酸盐、浓度为约200mM至约280mM的蔗糖、浓度为约0.01％(w/v)至约0.03％(w/v)的聚山梨醇酯并且pH为约5.3至约5.7。在一些实施例中，在施用于受试者之前，将制剂与透明质酸酶混合。在一些实施例中，混合物中的透明质酸酶浓度为约1000U/ml至约3000U/ml。在一些实施例中，制剂为无菌的。在一些实施例中，制剂适合施用于受试者。在一些实施例中，制剂用于皮下施用。

在一些实施例中，本文提供了液体药物制剂，该制剂包含浓度为约125g/L的本文所述的单克隆抗PD-L1抗体、浓度为约20mM的组氨酸乙酸盐、浓度为约240mM的蔗糖、浓度为约0.02％(w/v)的聚山梨醇酯20并且pH为约5.5。在一些实施例中，在施用于受试者之前，将制剂与rHuPH20混合。在一些实施例中，混合物中的rHuPH20浓度为约2000U/。在一些实施例中，制剂为无菌的。在一些实施例中，制剂适合施用于受试者。在一些实施例中，制剂用于皮下施用。

在一个实施例中，制剂包含上述试剂(例如抗体、缓冲液、蔗糖和/或表面活性剂)，并且基本上不含一种或多种防腐剂诸如苯甲醇、苯酚、间甲酚、氯丁醇和苄索铵。在另一实施例中，制剂中可以包含防腐剂，特别是当制剂是多剂量制剂时。防腐剂的浓度可以在约0.1％至约2％的范围内，诸如约0.5％至约1％。制剂中可以包含一种或多种其他药学上可接受的运载体、赋形剂或稳定剂，诸如《雷明顿药物科学》(Remington'sPharmaceuticalSciences，第16版，Osol,A.编撰(1980))中描述的那些，只要它们不会不利地影响制剂的所需特征即可。可接受的运载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对受者无毒；并且包括：其他缓冲剂；助溶剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；螯合剂，诸如EDTA；金属络合物(例如锌-蛋白络合物)；可生物降解的聚合物，诸如聚酯；和/或成盐抗衡离子。本文的示例性药用的载体还包括间质药物分散剂例如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，诸如人可溶性PH20透明质酸酶糖蛋白，例如rHuPH20(

BaxterInternational,Inc.)。某些示例性sHASEGP和使用方法(包括rHuPH20)描述于美国专利公布号2005/0260186和2006/0104968中。在一个方面中，将sHASEGP与一种或多种另外的糖胺聚糖酶(诸如软骨素酶)组合。

对于所治疗的特定适应症，本文的制剂还可以包含一种以上的蛋白质，诸如具有对其他蛋白质没有不利影响的互补活性的那些蛋白质。例如，在抗体为抗PD-L1的情况下，其可以与另一种药物(例如化疗剂和抗肿瘤剂)联合组合使用。

在一些实施例中，评估或测量制剂中抗体的物理稳定性、化学稳定性或生物学活性。本领域中已知以及本文实施例中所述的任何方法均可用于评估制剂中的抗体的稳定性和生物活性。例如，制剂中的抗体的稳定性可通过以下方法进行测量，所述方法包括但不限于：尺寸排阻色谱法(SEC或SE-HPLC)、成像毛细管等电聚焦(ICIEF)、肽图分析、小体积光阻(HIAC)测定以及毛细管电泳(CE)技术诸如CE-十二烷基硫酸钠(CE-SDS)和CE-多聚糖分析。在一些实施例中，制剂中的抗体在-20℃下可保持稳定至少约6个月、至少约8个月、至少约10个月、至少约12个月、至少约14个月、至少约16个月、至少约18个月、至少约20个月、至少约21个月、至少约22个月、至少约23个月、至少约24个月、至少约3年或至少约4年。在一些实施例中，制剂中的抗体在2℃至8℃(例如，5℃)下可保持稳定至少约6个月、至少约8个月、至少约10个月、至少约12个月、至少约14个月、至少约16个月、至少约18个月、至少约20个月、至少约21个月、至少约22个月、至少约23个月或至少约24个月。在一些实施例中，在储存后的制剂中，抗体(即，抗体单体)的稳定性通过尺寸排阻色谱法来测量。在一些实施例中，在储存后的制剂中，抗体(即，抗体单体)的稳定性通过成像毛细管等电聚焦来测量。在一些实施例中，在-20℃下储存至少约6个月、至少约12个月、至少约18个月或至少约24个月后，制剂中的抗体单体与总蛋白(例如，包括抗体和聚集体)相比的百分比大于约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％或约95％。在一些实施例中，在2℃至8℃(例如，5℃)下储存至少约6个月、至少约12个月、至少约18个月或至少约24个月后，制剂中的抗体单体与总蛋白(例如，包括抗体和聚集体)相比的百分比大于约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％或约95％。在一些实施例中，在室温(例如，约15℃至25℃)搅拌至少约2小时、至少约4小时、至少约6小时、至少约8小时、至少约10小时、至少约12小时、至少约14小时、至少约16小时、至少约18小时、至少约20小时或至少约24小时后，制剂中的抗体单体与总蛋白(例如，包括抗体和聚集体)相比的百分比大于约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％或约95％。在一些实施例中，在-20℃下储存至少约6个月、至少约12个月、至少约18个月或至少约24个月后，制剂中的总聚集体(例如，高分子量物质和低分子量物质)的百分比小于约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％中的任一者。在一些实施例中，在2℃至8℃(例如，5℃)下储存至少约6个月、至少约12个月、至少约18个月或至少约24个月后，制剂中的总聚集体(例如，高分子量物质和低分子量物质)的百分比小于约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％中的任一者。在一些实施例中，在室温(例如，约15℃至25℃)搅拌至少约2小时、至少约4小时、至少约6小时、至少约8小时、至少约10小时、至少约12小时、至少约14小时、至少约16小时、至少约18小时、至少约20小时或至少约24小时后，制剂中的总聚集体(例如，高分子量物质和低分子量物质)的百分比小于约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％中的任一者。在本文实施例中的任一者中，稳定制剂可储存于玻璃小瓶、金属合金容器或静脉内(IV)输液袋中。在一些实施例中，金属合金为316L不锈钢或哈氏合金。

待用于体内施用的制剂应当是无菌的。这可以通过在制备制剂之前或之后通过无菌滤膜过滤轻松地实现。

III.治疗和施用抗体制剂的方法

可以根据已知方法将制剂施用于需要接受抗体治疗的哺乳动物(诸如人)，所述方法诸如静脉内施用(例如，作为推注液或通过一段时间内的连续输注)或通过肌内、腹腔、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入途径施用。在一个实施例中，通过静脉内施用将制剂施用于受试者。出于此类目的，可使用例如注射器或经由IV管注射制剂。在一个实施例中，通过皮下施用将制剂施用于受试者。

抗体的合适剂量(“有效量”)将取决于，例如，待治疗的病状、病状的严重程度和病程、是否出于预防或治疗目的而施用该抗体、既往治疗、患者的临床病史和对抗体的应答、所用抗体的类型以及主治医师的酌处权。抗体适合一次或经过一系列治疗施用于患者，并且可以从诊断开始的任何时间施用于患者。抗体可以单独治疗或与可用于治疗所述病症的其他药物或疗法联合施用。

作为一般性提议，向人施用的抗体的治疗有效量将在约0.01至约50mg/kg患者体重的范围内，无论通过一次或多次施用。在一些实施例中，使用的抗体以，例如约0.01至约45mg/kg、约0.01至约40mg/kg、约0.01至约35mg/kg、约0.01至约30mg/kg、约0.01至约25mg/kg、约0.01至约20mg/kg、约0.01至约15mg/kg、约0.01至约10mg/kg、约0.01至约5mg/kg或约0.01至约1mg/kg来每日施用。在一些实施例中，抗体以15mg/kg施用。然而，其他剂量方案可能有用。在一个实施例中，将本文所述的抗PD-L1抗体在21天周期的第1天以约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg或约1400mg的剂量施用于人。该剂量可以以单剂量或多剂量(例如，2或3个剂量)诸如输注的形式施用。与单一治疗相比，在联合治疗中施用的抗体剂量可以减少。疗法的进展可以通过常规技术容易地监测。

本文所述的包含抗PD-L1抗体的制剂可用于各种体外和体内诊断和治疗应用。例如，可以将包含抗体的制剂施用于受试者或个体以治疗疾病或病症(例如，由PD-1和PD-L1相互作用介导的疾病或病症)。

在一些实施例中，疾病或疾患为癌症。在一些实施例中，癌症为局部晚期或转移性的。在一些实施例中，癌症选自由以下项组成的组：实体瘤、血液癌症、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、胃癌、胶质瘤、头癌、白血病、肝癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌)、淋巴瘤、骨髓瘤、颈癌、卵巢癌、黑色素瘤、胰腺癌、肾癌、涎腺癌、胃部癌症、胸腺上皮癌、甲状腺癌和头颈部鳞状细胞癌。在一些实施例中，癌症为非小细胞肺癌。在一些实施例中，癌症为小细胞肺癌。在一些实施例中，癌症为尿路上皮癌。在一个实施例中，癌症为乳腺癌。在一些实施例中，乳腺癌为三阴性乳腺癌。在一些实施例中，接受治疗的受试者或个体具有PD-L1阳性癌细胞(例如，通过IHC检测得出)。

在一些实施例中，疾病或病症为感染。在一些实施例中，感染为持续性感染。在一些实施例中，感染为病毒感染、细菌感染、真菌感染、蠕虫感染或原生动物感染。在一些实施例中，病毒感染选自由以下项组成的组：巨细胞病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、疱疹病毒、麻疹病毒、流感病毒、人类免疫缺陷病毒、人类T淋巴细胞病毒、淋巴细胞性脉络膜脑膜炎病毒、呼吸道合胞病毒和/或鼻病毒。在一些实施例中，细菌感染选自由以下项组成的组：螺杆菌属(Helicobacter spp.)、分枝杆菌属(Mycobacteriumspp.)、卟啉单胞菌属(Porphyromonas spp.)、衣原体属(Chlamydia spp.)、沙门氏菌属(Salmonella spp.)、李斯特菌属(Listeria spp.)、链球菌属(Streptococcus spp.)、嗜血杆菌属(Haemophilus spp.)、奈瑟氏菌属(Neisseria spp.)、克雷伯氏菌属(Klebsiellaspp.)、疏螺旋体属(Borrelia spp.)、拟杆菌属(Bacterioides spp.)和密螺旋体属(Treponema spp.)。在一些实施例中，原生动物感染选自由以下项组成的组：利什曼原虫属(Leishmania spp.)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、血吸虫属(Schistosomaspp.)、弓形虫属(Toxoplasma spp.)、锥虫属(Trypanosoma spp.)和绦虫属(Taeniaspp.)。在一些实施例中，真菌感染选自选自由以下项组成的组：芽生菌病、球孢子菌病、组织胞浆菌病、念珠菌病、隐球菌病、曲霉病、毛霉菌病和肺孢子虫病。

在一些实施例中，疾病或病症为炎症性疾病。在一些实施例中，炎症性疾病选自由以下项组成的组：急性播散性脑脊髓炎、艾迪生病、阿尔茨海默病、强直性脊柱炎、抗磷脂抗体综合征、动脉粥样硬化、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、关节炎、白塞病、伯格氏病、大疱性类天疱疮、乳糜泻、恰加斯病、胆管炎、克罗恩病、皮肌炎、1型糖尿病、肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、移植物抗宿主病、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、桥本氏病、荨麻疹、高IgE综合征、特发性血小板减少性紫癜、红斑狼疮、狼疮肾炎、多发性硬化症、重症肌无力、器官移植排斥、帕金森病、天疱疮、恶性贫血、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、雷诺综合征、类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、颞动脉炎、甲状腺炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎和韦格纳肉芽肿。

在一些实施例中，可以将包含抗体的制剂与另一种治疗剂联合施用于受试者或个体以治疗疾病或病症。例如，为治疗癌症，可以将本文所述的抗PD-L1抗体制剂与另一种抗癌治疗(例如，化疗或不同的抗体治疗)联合施用。

IV.制品或试剂盒

在本发明的另一实施例中，提供了包含容器的制品或试剂盒，该容器容纳本发明的液体药物制剂，并且任选地提供其使用说明。合适的容器包括例如瓶、小瓶、袋子和注射器。容器可以由多种材料形成，例如玻璃、塑料(诸如聚氯乙烯或聚烯烃)或金属合金(诸如不锈钢或哈氏合金)。一个示例性容器为300cc金属合金容器(例如，用于在-20℃下储存)。另一个示例性容器可以为10-50cc玻璃小瓶(例如，用于在2-8℃下储存)。例如，容器可以为10cc、15cc、20cc或50cc玻璃小瓶。容器容纳制剂，并且容器上或与容器相关的标签可以指示使用说明。制品可以进一步包括从商业和用户角度出发期望的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头、注射器和带有使用说明的包装插页。在一些实施例中，制品还包括一种或多种其他试剂(例如化疗剂和抗肿瘤剂)。用于一种或多种试剂的合适容器包括例如瓶、小瓶、袋子和注射器。

该说明书被认为足以使本领域技术人员能够实施本发明。除了本文中示出和描述的之外，本发明的各种修改对于根据说明书前文的本领域技术人员而言将变得显而易见，并且落入所附权利要求的范围内。本文引用的所有出版物、专利和专利申请出于所有目的通过引用整体并入本文。

通过参考以下实例将更全面地理解本发明。但是，它们不应被解释为限制本发明的范围。应当理解，本文描述的实例和实施例仅用于说明目的，并且鉴于其的各种修改或改变将被建议给本领域技术人员，并且将被包括在本申请的精神和界限内以及本发明所附权利要求的范围内。

实例

实例1：原料药(DS)制剂稳定性

对于DS研究，将制剂灌装到不锈钢微型罐中并且置于适当的储存条件下，以评估阿特珠单抗冷冻储并加速稳定性。为配制用于研究的DS，将阿特珠单抗的超滤渗滤池缓冲液交换到适当的缓冲系统(例如，组氨酸乙酸盐、组氨酸盐酸盐、组氨酸乙酸盐与精氨酸)中，然后将聚山梨醇酯20和蛋氨酸加入该超滤渗滤材料中以配制DS。

经过多次冻融循环后的DS稳定性

图1A至1C示出各种DS制剂在多次冻/融循环后的高分子量物质(HMWS)含量(图1A)、离子交换色谱(IEC)主峰百分比(图1B)以及非还原毛细管电泳-SDS(NR CE-SDS)前峰总和(图1C)。所有制剂均包含150mg/ml或125mg/ml阿特珠单抗(在图中表示为150mg或125mg)、20mM组氨酸乙酸盐(HA)或组氨酸盐酸盐(HCl)、10mM蛋氨酸和0.06％(w/v)聚山梨醇酯20。除非另有说明，否则所有制剂的pH均为5.5。包含低浓度蔗糖(例如100mM)的制剂不足以在高蛋白质浓度下经历多次冻融循环后保持稳定性。作为这些实验的结果，对于包含组氨酸乙酸盐或组氨酸盐酸盐的制剂，选择蔗糖浓度为240mM以支持5次冻融(F/T)循环。

在25℃下的DS稳定性

图2A至2C示出各种DS制剂在25℃下储存长达1个月后的酸性物质含量(图2A)、碱性物质含量(图2B)和HMWS含量(图2C)。所有制剂均包含125mg/ml阿特珠单抗(在图中表示为125mg)、20mM组氨酸乙酸盐(HA)或组氨酸盐酸盐(HCl)、10mM蛋氨酸和0.06％(w/v)聚山梨醇酯20。在pH 5.5的制剂中，IEC显示出较低百分比的酸性物质和较高百分比的碱性物质。

实例2：药品(DP)制剂稳定性

对于DP稳定性研究，将制剂灌装到玻璃小瓶中并且置于适当的储存条件下，以评估阿特珠单抗在不同缓冲系统和赋形剂中的稳定性。在配制时，将阿特珠单抗的超滤渗滤池缓冲液交换到适当的缓冲系统(例如组氨酸乙酸盐、组氨酸盐酸盐、组氨酸乙酸盐与精氨酸)中，然后将聚山梨醇酯20、蛋氨酸和重组人透明质酸酶加入该超滤渗滤材料中以配制DP。

在25℃下的DP稳定性

图3A至3B示出DP制剂在25℃下储存长达3个月后的HMWS含量(图3A)和SEC主峰百分比(图3B)。所有制剂均包含125mg/ml阿特珠单抗(在图中表示为125mg)、20mM组氨酸乙酸盐或组氨酸盐酸盐、240mM蔗糖、10mM蛋氨酸、0.06％聚山梨醇酯20以及2000U/ml重组人透明质酸酶(rHuPH20)。与其他两种制剂相比，包含pH 5.8的组氨酸乙酸盐的制剂具有更高的SEC主峰百分比(图3B)。与其他两种制剂相比，包含pH 5.5的组氨酸盐酸盐的制剂具有更高百分比的HMWS(图3A)。总体而言，SEC分析表明，与组氨酸盐酸盐制剂相比，组氨酸乙酸盐制剂的降解速度略慢。

图4A至4B示出DP制剂在25℃下储存长达3个月后的酸性物质含量(图4A)和碱性物质含量(图4B)。所有制剂均包含125mg/ml阿特珠单抗(在图中表示为125mg)、20mM组氨酸乙酸盐或组氨酸盐酸盐、240mM蔗糖、10mM蛋氨酸、0.06％聚山梨醇酯20以及2000U/ml重组人透明质酸酶(rHuPH20)。总体而言，所有三种制剂之间的IEC主峰降解速率相似。但是，这3种制剂之间的酸性物质和碱性物质的形成有所不同。与其他两种制剂相比，包含pH 5.8的组氨酸乙酸盐的制剂具有更低百分比的碱性物质(图4B)。与包含组氨酸盐酸盐的制剂相比，包含组氨酸乙酸盐的制剂具有更高百分比的酸性物质(图4A)。

图5A至5B示出DP制剂在25℃下储存长达3个月后的前峰百分比(图5A)和NR CE-SDS主峰百分比(图5B)。所有制剂均包含125mg/ml阿特珠单抗(在图中表示为125mg)、20mM组氨酸乙酸盐或组氨酸盐酸盐、240mM蔗糖、10mM蛋氨酸、0.06％聚山梨醇酯20以及2000U/ml重组人透明质酸酶(rHuPH20)。

在40℃下的DP稳定性

图6A至6C示出DP制剂在40℃下储存长达1个月后的HMWS含量(图6A)、SEC主峰百分比(图6B)和NR CE-SDS前峰总和(图6C)。所有制剂均包含150mg/ml或125mg/ml阿特珠单抗(在图中表示为150mg或125mg)、200mM至240mM蔗糖、10mM蛋氨酸、0.06％聚山梨醇酯20和2000U/ml重组人透明质酸酶(rHuPH20)。与其他制剂相比，包含125mg/ml阿特珠单抗和组氨酸乙酸盐的制剂具有更少的HMWS(图6A)、更高的主峰百分比(图6B)和更低的NR-CE SDS前峰总和(图6C)。随着蛋白质浓度的增加，HMWS也有所增加。就pH而言，较高的pH(例如5.8)减少HMWS形成和片段化。添加精氨酸也有助于HMWS的增加。尽管精氨酸可提高溶解度，但它未能保持阿特珠单抗的物理稳定性(例如，HMWS增加)。

图7A至7C示出DP制剂在40℃下储存长达1个月后的酸性物质含量(图7A)、碱性物质含量(图7B)和IEC主峰百分比(图7C)。所有制剂均包含150mg/ml或125mg/ml阿特珠单抗(在图中表示为150mg或125mg)、200mM至240mM蔗糖、10mM蛋氨酸、0.06％聚山梨醇酯20和2000U/ml重组人透明质酸酶(rHuPH20)。与包含组氨酸盐酸盐缓冲剂或组氨酸醋酸盐+精氨酸缓冲剂的制剂相比，包含组氨酸醋酸盐缓冲剂的制剂具有更高含量的酸性物质(图7A)。与其他制剂相比，包含125mg/ml阿特珠单抗和组氨酸乙酸盐的pH 5.8的制剂具有更低含量的碱性物质(图7B)。

基于所展示的产品稳定性结果，选择包含125mg/mL阿特珠单抗和pH 5.8的组氨酸乙酸盐的制剂用作阿特珠单抗制剂。

实例3：聚山梨醇酯20稳定性

图8A至8B示出各种DP制剂在40℃(图8A)和25℃(图8B)下储存长达3个月时的聚山梨醇酯20的稳定性。所有制剂均包含125mg/ml阿特珠单抗(在图中表示为125mg)、20mM组氨酸乙酸盐或组氨酸盐酸盐、240mM蔗糖、10mM蛋氨酸、0.06％聚山梨醇酯20以及2000U/ml重组人透明质酸酶(rHuPH20)。与其他两种制剂相比，在包含组氨酸乙酸盐和pH 5.8的制剂中，聚山梨醇酯20在40℃和25℃下储存3个月后显示出更少的降解。

利用上述25℃实验的数据计算在25℃下储存6个月后聚山梨醇酯20的理论损失量。如下表所示，与其他两种制剂相比，预计在包含组氨酸乙酸盐和pH 5.8的制剂中，聚山梨醇酯20在储存6个月后显示出更少的降解。

除阿特珠单抗的产品稳定性以外，包含组氨酸乙酸盐和pH 5.8的制剂在保持聚山梨醇酯20稳定性方面最有效。

实例4：rHuPH20活性

图9A至9B示出各种DP制剂在25℃下储存长达3个月时的rHuPH20活性测定结果。所有制剂均包含150mg/ml或125mg/ml阿特珠单抗(在图中表示为150mg或125mg)、20mM组氨酸乙酸盐或组氨酸盐酸盐、240mM蔗糖、10mM蛋氨酸、0.06％聚山梨醇酯20以及2000U/ml重组人透明质酸酶(rHuPH20)。与包含pH 5.5的组氨酸乙酸盐的制剂相比，包含pH 5.8的组氨酸乙酸盐的制剂使rHuPH20活性保持在更高水平。提高pH，也提高了rHuPH20在25℃的稳定性。尽管当与其他制剂相比时，包含组氨酸盐酸盐的制剂在加速条件下提供了更出色的rHuPH20稳定性(图9B)，但组氨酸盐酸盐不太适用于阿特珠单抗。尽管在加速条件下观察到包含组氨酸乙酸盐的制剂的rHuPH20活性略有下降，但在5℃储存时未观察到这种情况。因此，选择包含组氨酸乙酸盐和pH 5.8的制剂用于阿特珠单抗。

图10A至10B示出包含不同浓度的聚山梨醇酯的制剂在同时搅拌的情况下储存24小时后的rHuPH20活性。在室温搅拌下时，较高浓度的聚山梨醇酯使rHuPH20活性保持在较高水平。需要至少0.03％(w/v)的聚山梨醇酯20以防止rHuPH20因搅拌而损失。考虑到聚山梨醇酯20释放标准以及聚山梨醇酯在保质期内可能发生的降解，该制剂选择的聚山梨醇酯20含量为0.06％(w/v)。

实例5：药品(DP)制剂粘度

图11示出各种DP制剂在5℃与25℃之间的温度下的粘度。所有制剂均包含127mg/ml至128mg/ml阿特珠单抗、20mM组氨酸乙酸盐或组氨酸盐酸盐、240mM蔗糖、10mM蛋氨酸、0.06％聚山梨醇酯20以及2000U/ml重组人透明质酸酶(rHuPH20)。在所有评估的温度下，包含组氨酸盐酸盐的制剂具有最高的粘度。

基于这些实例中描述的制剂筛选结果，对于用于皮下施用的阿特珠单抗制剂，选择包含125mg/ml阿特珠单抗、20mM组氨酸乙酸盐、240mM蔗糖、10mM蛋氨酸、0.06％聚山梨醇酯20、2000U/ml重组人透明质酸酶(rHuPH20)、pH 5.8的DP制剂。

序列表

<110> 基因泰克公司 (Genentech, Inc.)

<120> 抗 PD-L1 抗体制剂

<130> 14639-20499.40

<140> 尚未分配

<141> 与此同时

<150> US 62/945,730

<151> 2019-12-09

<160> 10

<170> 用于 Windows 的 FastSEQ，4.0 版

<210> 1

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 1

Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 2

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 3

Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr

1 5

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 4

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His

1 5 10

<210> 5

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 5

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 6

Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr

1 5

<210> 7

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 7

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 8

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 8

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 9

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 9

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 10

<211> 447

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成构建体

<400> 10

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

Claims

1.一种液体药物制剂，所述制剂包含浓度为约100g/L至约150g/L的单克隆抗PD-L1抗体、浓度为约15mM至约25mM的组氨酸乙酸盐、浓度为约200mM至约280mM的蔗糖、浓度为约0.04％(w/v)至约0.08％(w/v)的聚山梨醇酯、浓度为约5mM至约15mM的蛋氨酸并且pH为约5.6至约6.0，其中所述单克隆抗体包含

(a)轻链可变区，其包含：

(1)HVR-L1，其包含氨基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)；

(2)HVR-L2，其包含氨基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)；

(3)HVR-L3，其包含氨基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)；和

(b)重链可变区，其包含：

(1)HVR-H1，其包含氨基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)；

(2)HVR-H2，其包含氨基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)；

(3)HVR-H3，其包含氨基酸序列WPGGFDY(SEQ ID NO:6)。

2.根据权利要求1所述的液体药物制剂，其中所述制剂中的所述单克隆抗体的浓度为约120g/L至约130g/L。

3.根据权利要求1所述的液体药物制剂，其中所述制剂中的所述单克隆抗体的浓度为约125g/L。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的液体药物制剂，其中所述组氨酸乙酸盐的浓度为约17mM至约22mM。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的液体药物制剂，其中所述组氨酸乙酸盐的浓度为约20mM。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的液体药物制剂，其中所述蔗糖的浓度为约220mM至约260mM。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的液体药物制剂，其中所述蔗糖的浓度为约240mM。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的液体药物制剂，其中所述pH为约5.8。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的液体药物制剂，其中所述制剂中的所述聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的液体药物制剂，其中所述聚山梨醇酯的浓度为约0.05％(w/v)至约0.07％(w/v)。

11.根据权利要求1至9中任一项所述的液体药物制剂，其中所述聚山梨醇酯的浓度为约0.06％(w/v)。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的液体药物制剂，其中所述蛋氨酸的浓度为约10mM。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的液体药物制剂，其中所述制剂进一步包含透明质酸酶。

14.根据权利要求13所述的液体药物制剂，其中所述透明质酸酶为重组人透明质酸酶(rHuPH20)。

15.根据权利要求13或14所述的液体药物制剂，其中所述透明质酸酶的浓度为约1000U/ml至约3000U/ml。

16.根据权利要求13或14所述的液体药物制剂，其中所述透明质酸酶的浓度为约2000U/ml。

17.一种液体药物制剂，所述制剂包含浓度为约100g/L至约150g/L的单克隆抗PD-L1抗体、浓度为约15mM至约25mM的组氨酸乙酸盐、浓度为约200mM至约280mM的蔗糖、浓度为约0.01％(w/v)至约0.03％(w/v)的聚山梨醇酯并且pH为约5.3至约5.7，其中所述单克隆抗体包含

(a)轻链可变区，其包含：

(1)HVR-L1，其包含氨基酸序列RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:1)；

(2)HVR-L2，其包含氨基酸序列SASFLYS(SEQ ID NO:2)；

(3)HVR-L3，其包含氨基酸序列QQYLYHPAT(SEQ ID NO:3)；和

(b)重链可变区，其包含：

(1)HVR-H1，其包含氨基酸序列GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:4)；

(2)HVR-H2，其包含氨基酸序列AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:5)；

(3)HVR-H3，其包含氨基酸序列WPGGFDY(SEQ ID NO:6)。

18.根据权利要求17所述的液体药物制剂，其中所述制剂中的所述单克隆抗体的浓度为约120g/L至约130g/L。

19.根据权利要求17所述的液体药物制剂，其中所述制剂中的所述单克隆抗体的浓度为约125g/L。

20.根据权利要求17至19中任一项所述的液体药物制剂，其中所述组氨酸乙酸盐的浓度为约17mM至约22mM。

21.根据权利要求17至19中任一项所述的液体药物制剂，其中所述组氨酸乙酸盐的浓度为约20mM。

22.根据权利要求17至21中任一项所述的液体药物制剂，其中所述蔗糖的浓度为约220mM至约260mM。

23.根据权利要求17至21中任一项所述的液体药物制剂，其中所述蔗糖的浓度为约240mM。

24.根据权利要求17至23中任一项所述的液体药物制剂，其中所述pH为约5.5。

25.根据权利要求17至24中任一项所述的液体药物制剂，其中所述制剂中的所述聚山梨醇酯为聚山梨醇酯20。

26.根据权利要求17至25中任一项所述的液体药物制剂，其中所述聚山梨醇酯的浓度为约0.02％(w/v)。

27.根据权利要求17至26中任一项所述的液体药物制剂，其中在施用于受试者之前，将所述制剂与透明质酸酶混合。

28.根据权利要求27所述的液体药物制剂，其中所述透明质酸酶为重组人透明质酸酶(rHuPH20)。

29.根据权利要求27或28所述的液体药物制剂，其中混合物中的所述透明质酸酶浓度为约1000U/ml至约3000U/ml。

30.根据权利要求27或28所述的液体药物制剂，其中所述混合物中的所述透明质酸酶浓度为约2000U/ml。

31.根据权利要求1至30中任一项所述的液体药物制剂，其中所述单克隆抗体未经预先冻干。

32.根据权利要求1至31中任一项所述的液体药物制剂，其中所述单克隆抗体为人源化抗体。

33.根据权利要求1至32中任一项所述的液体药物制剂，其中所述单克隆抗体包含：轻链可变区，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；和重链可变区，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

34.根据权利要求1至33中任一项所述的液体药物制剂，其中所述单克隆抗体为全长抗体。

35.根据权利要求34所述的液体药物制剂，其中所述单克隆抗体为IgG1抗体。

36.根据权利要求1至35中任一项所述的液体药物制剂，其中所述单克隆抗体包含：轻链，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；和重链，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。

37.根据权利要求1至36中任一项所述的液体药物制剂，其中所述单克隆抗体储存于玻璃小瓶或金属合金容器中。

38.根据权利要求37所述的液体药物制剂，其中所述金属合金为316L不锈钢或哈氏合金。

39.根据权利要求1至38中任一项所述的液体药物制剂，其中所述制剂在2-8℃可稳定至少6个月。

40.根据权利要求1至38中任一项所述的液体药物制剂，其中所述制剂在2-8℃可稳定至少12个月。

41.根据权利要求1至38中任一项所述的液体药物制剂，其中所述制剂在2-8℃可稳定至少24个月。

42.根据权利要求39至41中任一项所述的液体药物制剂，其中所述制剂中的所述抗体在储存后保留其生物活性的至少约80％。

43.根据权利要求42所述的液体药物制剂，其中所述生物活性通过与PD-L1结合的抗体测得。

44.根据权利要求1至43中任一项所述的液体药物制剂，其中所述制剂为无菌的。

45.根据权利要求1至44中任一项所述的液体药物制剂，其中所述制剂适合施用于受试者。

46.根据权利要求1至45中任一项所述的液体药物制剂，其中所述制剂用于皮下施用。

47.一种制品，其包含容纳根据权利要求1至46中任一项所述的液体药物制剂的容器。

48.根据权利要求47所述的制品，其中所述容器为玻璃小瓶或金属合金容器。

49.根据权利要求48所述的制品，其中所述金属合金为316L不锈钢或哈氏合金。

50.一种试剂盒，其包含容纳根据权利要求1至46中任一项所述的液体药物制剂的容器。

51.一种治疗受试者的疾病或疾患的方法，其包含向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至46中任一项所述的液体药物制剂，其中所述疾病或疾患选自由感染、癌症和炎症性疾病组成的组。

52.根据权利要求51所述的方法，其中所述疾病或疾患为癌症。

53.根据权利要求52所述的方法，其中所述癌症选自由非小细胞肺癌、小细胞肺癌、尿路上皮癌和乳腺癌组成的组。

54.根据权利要求53所述的方法，其中所述乳腺癌为三阴性乳腺癌。

55.根据权利要求51至54中任一项所述的方法，其中所述受试者为人。