CN114752647A - 利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法 - Google Patents

利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114752647A
CN114752647A CN202210364771.3A CN202210364771A CN114752647A CN 114752647 A CN114752647 A CN 114752647A CN 202210364771 A CN202210364771 A CN 202210364771A CN 114752647 A CN114752647 A CN 114752647A
Authority
CN
China
Prior art keywords
yeast
heterogeneity
intracellular
yeast strain
evaluating
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210364771.3A
Other languages
English (en)
Inventor
尹花
侯晓平
贺扬
赵玉祥
万秀娟
陈嵘
余俊红
胡淑敏
邢磊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tsingtao Brewery Co Ltd
Original Assignee
Tsingtao Brewery Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tsingtao Brewery Co Ltd filed Critical Tsingtao Brewery Co Ltd
Priority to CN202210364771.3A priority Critical patent/CN114752647A/zh
Publication of CN114752647A publication Critical patent/CN114752647A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/14—Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，属于酵母菌株评价技术领域。其技术方案包括对酵母菌株进行胁迫处理；对经过所述胁迫处理步骤处理的所述酵母菌株的胞内pH异质性进行检测；对比所述酵母菌株的胞内pH异质性越高，判断所述酵母菌株的抗逆性越好。本发明应用于酵母菌株评价技术方面，解决现有技术不能对酵母菌株的抗逆性进行准确、快速的评价的问题，具有评价周期短、结果准确的特点。

Description

利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法
技术领域
本发明属于酵母菌株评价技术领域，尤其涉及一种利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法。
背景技术
发酵菌株的特性会深刻地影响微生物发酵过程，对啤酒发酵过程而言，菌株特性影响着酵母对糖的利用、氨基酸的同化、主产物酒精的发酵、副产物的形成、啤酒风味的成熟以及啤酒的稳定性等，同时菌株特性也会影响到发酵过程工艺控制的落实。酵母细胞的活性啤酒的质量息息相关,它可以用很多反映生理状态的参数来衡量,包括:酵母细胞内质子释放能力、肝糖或海藻糖含量、发酵度试验、镁离子释放能力、电导率试验、ATP含量测定法、酸化力实验等。但由于酵母活性的差别非常细微,上述方法虽然对活性的判断有一定的作用,也很难非常准确地判断酵母活性的细微差别。
酵母菌在发酵过程中面临各种不利条件，包括氧化压力、高渗、乙醇等，以及发酵条件、原料的波动。国际上的研究发现不同菌种抗逆性有所区别，反应到生产上即为对不良或者波动发酵条件的适应性。表现“泼辣”的菌株抗逆性强，近年来的研究发现抗逆性与菌株的自身的不均一性有关。因此需要开发能够反映啤酒酵母群体异质性的手段，并研究其与发酵环境中常见胁迫抗逆性的关系，来对酵母选育和应用提供理论基础。胞内pH值是反映细胞活力的一个指标，酵母细胞通过细胞膜上的质子泵来维持适当的胞内pH，以维持细胞内各种生理活动的正常进行，一般而言，胞内pH越高，酵母细胞活力越高。
然而，一方面由于由于细胞活力的大小并不能准确反映菌株的抗逆性，另一方面现有评价方法难以非常准确地判断啤酒酵母群体中活性的细微差别，因此，基于酵母群体异质性的菌株抗逆性的快速评价对于啤酒发酵领域具有重要意义。
发明内容
针对现有技术存在的不足之处，本发明所要解决的技术问题是克服现有技术不能对酵母菌株的抗逆性进行准确、快速的评价的问题，提出一种具有评价周期短、结果准确特点的利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法。
为解决所述技术问题，本发明采用的技术方案为：
本发明提供一种利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，包括：
胁迫处理步骤，包括对酵母菌株进行胁迫处理；
检测步骤，包括对经过所述胁迫处理步骤处理的所述酵母菌株的胞内pH异质性进行检测；
评价步骤，包括对比所述酵母菌株的胞内pH异质性越高，判断所述酵母菌株的抗逆性越好。
优选的，所述检测步骤具体包括：采用流式细胞仪测定经过所述胁迫处理步骤处理的所述酵母菌株进行检测。
优选的，还包括在所述检测步骤之后及所述评价步骤之前的计算步骤；
所述计算步骤进一步包括：所述检测步骤后，根据Ratio525/575计算胞内pH，进而计算胞内pH的变异系数CV值，以所述CV值作为异质性指标。
优选的，所述CV值由以下公式计算得到：
CV＝标准差/均值×100
所述标准差为被检测的整个酵母群体的单个个体的胞内pH的标准差，所述均值是所述酵母群体单个个体细胞的胞内pH均值。
优选的，所述评价步骤具体包括：
以一定数量的酵母菌株进行检测，分别得到所述CV值的最高值和最低值，将所述最高值和最低值的范围划分为三等分，按所述CV值由低到高，将所述酵母菌株依次划分为低异质性酵母菌株，中异质性酵母菌株及高异质性酵母菌株。
优选的，所述胁迫处理步骤具体包括：
用2.0M的山梨醇溶液、14％酒精溶液或2mM过氧化氢溶液中的至少一种对待处理酵母菌株处理30min。
优选的，还包括胞内pH标准曲线绘制步骤。
优选的，所述胞内pH标准曲线绘制步骤具体包括：
活化酵母菌株；
配制pH2.4、pH3.0、pH3.6、pH4.2、pH4.8、pH5.4、pH6.0、pH6.6、pH7.2、pH7.8的梯度McIlvaine缓冲溶液；
将活化后的酵母菌株用0.1M EDTA二钠溶液洗涤，并用梯度缓冲液洗涤一次后重悬，分别在梯度McIlvaine缓冲溶液中加入10μM的CFDA-SE和50μM amphotericin B，37℃下处理1h，用流式细胞仪检测；
根据Ratio525/575与对应的pH绘制胞内pH标准曲线。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明提供一种利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，可以在较短的时间(3h)内进行高通量的酵母菌株抗逆性的评价，且评价结果准确。
附图说明
图1为本发明实施例所提供的胞内pH标准曲线；
图2为本发明实施例1所提供的平板培养实验结果；
图3为本发明实施例2所提供的平板培养实验结果；
图4为本发明实施例3所提供的平板培养实验结果。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明具体实施例中的技术方案进行详细、完整的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明总的技术方案的部分具体实施方式，而非全部的实施方式。基于本发明的总的构思，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都落于本发明保护的范围。
本发明提供一种利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，包括：
胁迫处理步骤，包括对酵母菌株进行胁迫处理；
检测步骤，包括对经过所述胁迫处理步骤处理的所述酵母菌株的胞内pH异质性进行检测；
评价步骤，包括对比所述酵母菌株的胞内pH异质性越高，判断所述酵母菌株的抗逆性越好。
传统的酵母菌株抗逆性的评价方法需要进行平板培养实验，通过不同菌株在胁迫平板上的生长能力来进行评判，评价时间长，无法做到高通量快捷评价，评价周期长达7-10天，存在评价效率低的问题。以往对菌株的研究获得的菌株特性往往是一个均值(细胞大小、活力等)，而同一菌株内部仍存在不均一的现象。胞内pH值是反映细胞活力的一个指标，酵母细胞通过细胞膜上的质子泵来维持适当的胞内pH，以维持细胞内各种生理活动的正常进行，一般而言，胞内pH越高，酵母细胞活力越高。然而，细胞活力的大小并不能准确反映菌株的抗逆性，且通过胞内pH值很难判断在胁迫处理下酵母群体中活性的细微差别，从而反映酵母对于胁迫的抗逆性。本申请技术方案通过酵母菌株的胞内pH异质性来评价酵母菌株的抗逆性，建立了高通量快捷准确的评价酵母菌株抗逆性的方法。
在一优选实施例中，所述检测步骤具体包括：采用流式细胞仪测定经过所述胁迫处理步骤处理的所述酵母菌株进行检测。流式细胞术是一种单细胞技术，具有高通量、高灵敏度、多参数精确定量测量和优越的多参数关联分析功能，正好符合获取细胞群体在生理参数上的精确分布的要求。流式细胞术所具备的细胞分选功能可以高通量、高纯度地分离、富集特定状态(或表型)的细胞亚群，这样又非常方便地为后继的深入研究提供了有力保障。因而，流式细胞术被认为是当前研究微生物群体异质性现象的一种最有力的、高效的工具，不仅能够获得微生物状态的整体均值，还能够直观地反应微生物群体内单个细胞的状态分布范围，反映出微生物的群体异质性。采用流式细胞仪，一方面可以得到细胞大小形状的分布，另一方面也通过测定胞内pH，获得细胞活力的分布(CV值，变异系数)，从而评价不同菌株的异质性。5(6)-羧基荧光素琥珀酰亚胺酯,激发波长488nm，在525nm的荧光强度依赖于pH，而在575nm的荧光强度不依赖pH，可以通过计算两者的比例来反映酵母细胞的pH。
在一优选实施例中，还包括在所述检测步骤之后及所述评价步骤之前的计算步骤；
所述计算步骤进一步包括：所述检测步骤后，根据Ratio525/575计算胞内pH，进而计算胞内pH的变异系数CV值，以所述CV值作为异质性指标。
在一优选实施例中，所述CV值由以下公式计算得到：
CV＝标准差/均值×100
所述标准差为被检测的整个酵母群体的单个个体的胞内pH的标准差，所述均值是所述酵母群体单个个体细胞的胞内pH均值。该技术方案以CV值作为异质性指标，结合流式细胞仪，实现了高通量快捷准确的评价酵母菌株抗逆性的可能，且经研究发现，经胁迫处理后检测到酵母菌株胞内pH的异质性(CV值)越高，其对应胁迫的抗逆性越好好的规律，从而建立了高通量快捷的评价酵母菌株酒精抗逆性的方法。
在一优选实施例中，所述评价步骤具体包括：
以一定数量的酵母菌株进行检测，分别得到所述CV值的最高值和最低值，将所述最高值和最低值的范围划分为三等分，按所述CV值由低到高，将所述酵母菌株依次划分为低异质性酵母菌株，中异质性酵母菌株及高异质性酵母菌株。具体的，以一定数量的菌株进行测试，分别得到CV值的最高值和最低值。在此范围内，最低1/3的菌株为低异质性，最高1/3的菌株为高异质性，中间为中异质性。
在一优选实施例中，所述胁迫处理步骤具体包括：
用2.0M的山梨醇溶液、14％酒精溶液或2mM过氧化氢溶液中的至少一种对待处理酵母菌株处理30min。进一步还包括：在pH3.0的0.05M的冰冷柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中清洗并重悬，加入40uM的CFDA-SE染料，30℃震荡培育30min，用同一冰冷缓冲液洗涤后重悬；流式细胞仪检测后，根据Ratio525/575计算胞内pH，并计算胞内pH的变异系数CV值。
在一优选实施例中，还包括胞内pH标准曲线绘制步骤。进一步的，所述胞内pH标准曲线绘制步骤具体包括：
活化酵母菌株；
配制pH2.4、pH3.0、pH3.6、pH4.2、pH4.8、pH5.4、pH6.0、pH6.6、pH7.2、pH7.8的梯度McIlvaine缓冲溶液；
将活化后的酵母菌株用0.1M EDTA二钠溶液洗涤，并用梯度缓冲液洗涤一次后重悬，分别在梯度McIlvaine缓冲溶液中加入10μM的CFDA-SE和50μM amphotericin B，37℃下处理1h，用流式细胞仪检测；
根据Ratio525/575与对应的pH绘制胞内pH标准曲线，如图1所示。
为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，下面将结合具体实施例进行描述。
实施例1
选取5株酵母菌株，活化菌株，用生理盐水洗涤；
5株酵母菌株活化后，用2.0M的山梨醇溶液处理，在pH3.0的0.05M的冰冷柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液中清洗并重悬，加入40uM的CFDA-SE染料，30℃震荡培育30min，用同一冰冷缓冲液洗涤后重悬；流式细胞仪检测后，根据Ratio525/575计算胞内pH，并计算胞内pH的变异系数CV值，结果如表1所示。
将5株酵母活化后，梯度稀释滴于2.0M的山梨醇麦汁平板上，以验证其对高渗的抗逆性。具体的，配制麦汁培养基平板，用2.0M的山梨醇溶液作为胁迫条件，将活化菌株稀释到1.2*107CFU/mL，然后以1:10的比例依次稀释4次，各取1μL点与平板上，观察菌落生长情况，在低浓度下出现菌落快的菌株为抗逆性强的菌株，结果如图2所示。
表1酵母菌株经2.0M的山梨醇溶液胁迫处理后的胞内pH的变异系数CV值
菌株 1# 2# 3# 4# 5#
CV值 48.81 59 67 63 71.1
pH均值 4.92 4.9 4.73 4.9 4.76
由表1所示，1#菌株异质性最低，5#菌株异质性最高。平板培养实验结果如图2所示，1#酵母在山梨醇平板上生长最慢，5#酵母在山梨醇平板上生长最快，其余三组酵母生长速度居中，说明高渗处理后胞内pH异质性越高，酵母对高渗的抗逆性越高。
将其中1#与5#株酵母活化后，用麦汁培养基进行逐级扩大培养，在发酵罐中进行高浓20°P工业啤酒生产。主酵结束后回收酵母，进行下一批次生产，重复进行。
由表2结果可以发现，发酵液的发酵度和成熟度(乙醛)指标：1#菌株在高浓发酵中发酵度与成熟度均低于5#菌株，随着酵母使用代数升高，趋势更加明显。
表2发酵液的发酵度和成熟度(乙醛)结果
发酵度(％) 1代 5代 10代
1# 66.5 64.3 62.2
5# 69.9 69.4 69.6
乙醛(mg/L) 1代 5代 10代
1# 18.8 21.4 36.8
5# 13.2 14.5 11.3
实施例2
选取5株酵母菌株，活化菌株，用生理盐水洗涤；
5株酵母活化后，用14％酒精溶液处理，按照实施例1方法染色后用流式细胞仪检测。
计算胞内pH均值和CV值(异质性指标)，结果如表3所示。
将5株酵母活化后，梯度稀释滴于14％的酒精麦汁平板上，以验证其对酒精的抗逆性。具体操作同实施例1，结果如图3所示。
表3酵母菌株经14％酒精溶液胁迫处理后的胞内pH的变异系数CV值
菌株 1# 2# 3# 4# 5#
CV 15.79 17.73 22 20.09 22.17
pH均值 5.35 5.31 5.39 5.35 5.21
由表所示，1#菌株异质性最低，5#菌株异质性最高。平板培养实验结果如图3所示，1#酵母在酒精平板上生长最慢，5#酵母在酒精平板上生长最快，其余三组酵母生长速度居中，说明酒精处理后胞内pH异质性越高，酵母对酒精的抗逆性越高。
将其中1#与5#株酵母活化后，用麦汁培养基进行逐级扩大培养，在发酵罐中进行高浓20°P工业啤酒生产。主酵结束后回收酵母，进行下一批次生产，重复进行。
由表4所示，发酵液的发酵度和酵母死亡率指标：1#菌株在高酒精度发酵中发酵度低于5#菌株，酵母死亡率高于5#菌株，随着酵母使用代数升高，趋势更加明显。
表4发酵液的发酵度和酵母死亡率结果
发酵度(％) 1代 5代 10代
1# 66.4 64.4 63.4
5# 69.8 69.6 69.7
酵母死亡率(％) 1代 5代 10代
1# 1.5 2.8 4.2
5# 0.4 0.5 0.6
实施例3
选取5株酵母菌株，活化菌株，用生理盐水洗涤；
5株酵母活化后，用2mM H2O2溶液处理，按照实施例1方法染色后用流式细胞仪检测。
计算胞内pH均值和CV值(异质性指标)，结果如表5所示，发现2#菌株异质性最低，1#菌株异质性最高。
表5酵母菌株2mM H2O2溶液胁迫处理后的胞内pH的变异系数CV值
菌株 1# 2# 3# 4# 5#
CV值 28.74 20.6 27.92 23.58 22.79
pH均值 5.38 5.49 5.28 5.45 5.50
将5株酵母活化后，梯度稀释滴于2mM H2O2麦汁平板上，以验证其对氧化的抗逆性。具体操作同实施例1，结果如图4所示。
可以看出，2#酵母在H2O2麦汁平板上生长最慢，1#酵母在H2O2麦汁平板上生长最快，其余三组酵母生长速度居中，说明2mM H2O2处理后胞内pH异质性越高，酵母对高渗的抗逆性越高。
将其中1#与2#株酵母活化后，用麦汁培养基进行逐级扩大培养，在发酵罐中进行工业啤酒生产。主酵结束后回收酵母，进行下一批次生产，重复进行。
结果如表6所示，啤酒氧化指标反-2-壬烯醛：1#菌株反-2-壬烯醛低于2#菌株，随着酵母使用代数升高，趋势更加明显。
表6啤酒氧化指标反-2-壬烯醛结果
反-2-壬烯醛(μg/L) 1代 5代 10代
1# 0.021 0.019 0.023
2# 0.035 0.045 0.061

Claims (8)

1.一种利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，其特征在于，包括：
胁迫处理步骤，包括对酵母菌株进行胁迫处理；
检测步骤，包括对经过所述胁迫处理步骤处理的所述酵母菌株的胞内pH异质性进行检测；
评价步骤，包括对比所述酵母菌株的胞内pH异质性越高，判断所述酵母菌株的抗逆性越好。
2.根据权利要求1所述的利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，其特征在于，所述检测步骤具体包括：采用流式细胞仪测定经过所述胁迫处理步骤处理的所述酵母菌株进行检测。
3.根据权利要求2所述的利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，其特征在于，还包括在所述检测步骤之后及所述评价步骤之前的计算步骤；
所述计算步骤进一步包括：所述检测步骤后，根据Ratio525/575计算胞内pH，进而计算胞内pH的变异系数CV值，以所述CV值作为异质性指标。
4.根据权利要求3所述的利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，其特征在于，所述CV值由以下公式计算得到：
CV＝标准差/均值×100
所述标准差为被检测的整个酵母群体的单个个体的胞内pH的标准差，所述均值是所述酵母群体单个个体细胞的胞内pH均值。
5.根据权利要求4所述的利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，其特征在于，所述评价步骤具体包括：
以一定数量的酵母菌株进行检测，分别得到所述CV值的最高值和最低值，将所述最高值和最低值的范围划分为三等分，按所述CV值由低到高，将所述酵母菌株依次划分为低异质性酵母菌株，中异质性酵母菌株及高异质性酵母菌株。
6.根据权利要求1所述的利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，其特征在于，所述胁迫处理步骤具体包括：
用2.0M的山梨醇溶液、14％酒精溶液或2mM过氧化氢溶液中的至少一种对待处理酵母菌株处理30min。
7.根据权利要求1所述的利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，其特征在于，还包括胞内pH标准曲线绘制步骤。
8.根据权利要求7所述的利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法，其特征在于，所述胞内pH标准曲线绘制步骤具体包括：
活化酵母菌株；
配制pH2.4、pH3.0、pH3.6、pH4.2、pH4.8、pH5.4、pH6.0、pH6.6、pH7.2、pH7.8的梯度McIlvaine缓冲溶液；
将活化后的酵母菌株用0.1M EDTA二钠溶液洗涤，并用梯度缓冲液洗涤一次后重悬，分别在梯度McIlvaine缓冲溶液中加入10μM的CFDA-SE和50μM amphotericin B，37℃下处理1h，用流式细胞仪检测；
根据Ratio525/575与对应的pH绘制胞内pH标准曲线。
CN202210364771.3A 2022-04-08 2022-04-08 利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法 Pending CN114752647A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210364771.3A CN114752647A (zh) 2022-04-08 2022-04-08 利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210364771.3A CN114752647A (zh) 2022-04-08 2022-04-08 利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114752647A true CN114752647A (zh) 2022-07-15

Family

ID=82329002

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210364771.3A Pending CN114752647A (zh) 2022-04-08 2022-04-08 利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114752647A (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0577915A1 (fr) * 1992-07-09 1994-01-12 N.V. Algist-Bruggeman Souches de levures transformées de manière à posséder une résistance au stress et/ou un pouvoir fermentatif amélioré
WO2014140703A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 University Of Saskatchewan Advanced process control for fermentation
US20140377408A1 (en) * 2011-12-15 2014-12-25 National University Corporation NARA Institute of Science and Technology Yeast having resistance to freezing stress
CN104458543A (zh) * 2014-12-24 2015-03-25 青岛啤酒股份有限公司 基于流式细胞技术的酵母细胞表面絮凝蛋白的检测方法
CN104745602A (zh) * 2015-04-10 2015-07-01 江南大学 一种调控光滑球拟酵母耐酸胁迫能力的转录因子Asg1p
CN104789600A (zh) * 2015-04-24 2015-07-22 江南大学 一种提高光滑球拟酵母耐酸胁迫能力的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0577915A1 (fr) * 1992-07-09 1994-01-12 N.V. Algist-Bruggeman Souches de levures transformées de manière à posséder une résistance au stress et/ou un pouvoir fermentatif amélioré
US20140377408A1 (en) * 2011-12-15 2014-12-25 National University Corporation NARA Institute of Science and Technology Yeast having resistance to freezing stress
WO2014140703A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 University Of Saskatchewan Advanced process control for fermentation
CN104458543A (zh) * 2014-12-24 2015-03-25 青岛啤酒股份有限公司 基于流式细胞技术的酵母细胞表面絮凝蛋白的检测方法
CN104745602A (zh) * 2015-04-10 2015-07-01 江南大学 一种调控光滑球拟酵母耐酸胁迫能力的转录因子Asg1p
CN104789600A (zh) * 2015-04-24 2015-07-22 江南大学 一种提高光滑球拟酵母耐酸胁迫能力的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CLAUDIA CAPUSONI, ET, AL: "Effects of Oxygen Availability on Acetic Acid Tolerance and Intracellular pH in Dekkera bruxellensis", 《 APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》, vol. 82, no. 15, 31 August 2016 (2016-08-31), pages 4673 - 4681 *
RICK ORIJ, ET.AL: "Intracellular pH is a tightly controlled signal in yeast", 《BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA》, 31 December 2011 (2011-12-31), pages 933 *
侯琦: "细菌的异质性耐药", 临床输血与检验, no. 03, 30 September 2003 (2003-09-30), pages 238 - 240 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kell et al. Quantifying heterogeneity: flow cytometry of bacterial cultures
Cramer et al. Kinetic model for nitrogen‐limited wine fermentations
US8071326B2 (en) Method and apparatus for viable and nonviable prokaryotic and eukaryotic cell quantitation
da Silva et al. Applications and perspectives of multi-parameter flow cytometry to microbial biofuels production processes
Herrero et al. Use of flow cytometry to follow the physiological states of microorganisms in cider fermentation processes
Geinitz et al. Noninvasive tool for optical online monitoring of individual biomass concentrations in a defined coculture
CN114752647A (zh) 利用群体异质性评价酵母菌株抗逆性的方法
CN108342447B (zh) 一种筛选与已知菌株表型相似的菌株的方法
Soubeyrand et al. Rehydration protocols for active dry wine yeasts and the search for early indicators of yeast activity
CN108588172B (zh) 一种用于定量检测库德里阿兹威氏毕赤酵母的选择性培养基、其制备方法及应用
Weigert et al. Application of a short intracellular pH method to flow cytometry for determining Saccharomyces cerevisiae vitality
Kobayashi et al. Physiological analysis of yeast cells by flow cytometry during serial-repitching of low-malt beer fermentation
Pettipher Preliminary evaluation of flow cytometry for the detection of yeasts in soft drinks
Wang et al. Intracellular adenosine triphosphate (ATP) content sensitively reflects subtle differences in yeast physiology
Bridge et al. An integrated approach to Penicillium systematics
Novak et al. Monitoring of brewing yeast propagation under aerobic and anaerobic conditions employing flow cytometry
EP2909330B1 (en) Automated yeast budding measurement
Layfield et al. Characterization of hybrid strains of Saccharomyces pastorianus for desiccation tolerance
Bouix et al. A rapid method for the assessment of the vitality of microorganisms using flow cytometry
Bouchez et al. Physiological significance of the cytometric distribution of fluorescent yeasts after viability staining
CN111999235A (zh) 一种利用流式细胞术快速检测有活力的食用菌原生质体数量的方法
Sigler Acidification power (AP) test and similar methods for assessment and prediction of fermentation activity of industrial microorganisms
CN112322767A (zh) 一种以酵母当量表征黄酒微生物数量的方法
Havelaar et al. Performance characteristics of methods for the bacteriological examination of water
CN104458543A (zh) 基于流式细胞技术的酵母细胞表面絮凝蛋白的检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination