CN114752534A - 那波链霉菌zjph2021033及其在制备抗菌剂中的应用 - Google Patents

那波链霉菌zjph2021033及其在制备抗菌剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一株那波链霉菌ZJPH2022033及其在制备抗菌剂中的应用，该菌株具有专一性抑制真菌的能力，为新型抗真菌剂的发现提供了新的微生物来源和新的途径。且本发明通过发酵培养基的优化进一步显著提高了获得菌株发酵液的抗菌活性。

Description

那波链霉菌ZJPH2021033及其在制备抗菌剂中的应用
技术领域
本发明涉及那波链霉菌ZJPH2021033及其在制备抗菌剂中的中的应用，属于生物工程技术领域。
背景技术
随着抗生素的滥用使得致病细菌对其产生了耐药性，出现了超级细菌，对人的身体造成严重危害。因此，在现阶段，寻找一种既能有效预防病原菌生长又不产生耐药性的新型抗菌物质已成为众多研究者关注的焦点。天然抗菌物质因具有抗菌性强和抗菌谱广等优势，受到越来越多人的关注，其中土壤微生物代谢产物曾经是抗生素的丰富来源，如链霉素、青霉素、万古霉素等抗生素都是从土壤微生物中分离得到。而土壤中丰富存在的放线菌是产生抗菌药物最多的一类物种，也是产生抗生素最多的一类微生物，目前世界上已经发现的抗生素80％是由放线菌产生的。因此本发明利用采集的温室大棚土壤分离放线菌，并从中寻找新型天然抑菌剂。
发明内容
本发明的目的是提供从温室大棚土壤中筛选得到的，可产生具有抗菌活性物质的一株杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032和一株那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033以及由其产生的抗菌活性物质用于抗菌剂方面的应用。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
第一方面，本发明提供一株杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2022491，保藏日期：2022年4月25日，地址：中国，武汉，武汉大学，430072。
第二方面，本发明提供一种上述杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株在制备具有抗菌活性的抗菌剂中的应用，所述菌为细菌或真菌。
具体地，所述细菌为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
所述真菌为白色念珠菌(Canidiaalbicans)。
尤其优选所述细菌为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
在本发明的一种具体实施方案中，所述应用为：将所述杨浦链霉菌(Streptomycesyangpuensis)ZJPH2021032经发酵培养(30℃下培养)得到的发酵液应用于制备具有抗菌活性的抗菌剂。
所述发酵培养的过程具体是：将所述杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032接种于ISPII种子培养基中，30℃振荡培养24h后，以5％(v/v)的接种量接种到发酵培养基中，30℃振荡培养24h后，离心获得所述发酵液。
再进一步，所述ISPII种子培养基终浓度组成如下：酵母膏4.0g/L，麦芽汁10.0g/L，葡萄糖4.0g/L，溶剂为水,pH值为7.2-7.4。
优选地，所述发酵培养使用的发酵培养基终浓度组成如下：甘油10.0～15.0g/L，L-酪氨酸0.2～0.8g/L，L-天冬酰胺0.8～1.3g/L，K2HPO4 0.2～0.8g/L，MgSO4·7H2O 0.3～0.9g/L，NaCl 0.2～1.0g/L，FeSO4·7H2O 0.01～0.02g/L，溶剂为水，pH值为7.0-7.5。
优选地，所述发酵培养基终浓度组成如下：甘油15.0g/L，L-酪氨酸0.5g/L，L-天冬酰胺1.0g/L，K2HPO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，NaCl 0.5g/L，FeSO4·7H2O 0.01g/L，溶剂为水，pH值为7.2-7.4。
第三方面，本发明提供一株那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2022492，保藏日期：2022年4月25日，地址：中国，武汉，武汉大学，430072。
第四方面，本发明提供一种上述那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033在制备具有抗真菌活性的抗菌剂中的应用。
进一步，所述真菌为白色念珠菌(Canidiaalbicans)。
在本发明的一种具体实施方案中，所述应用为：将所述那波链霉菌(Streptomycesnarbonensis)ZJPH2021033经发酵培养(30℃下培养)得到的发酵液应用于制备抗真菌的抗菌剂。
所述发酵培养的过程具体是：将所述那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033接种于ISPII种子培养基中，30℃振荡培养24h后，以5％(v/v)的接种量接种到发酵培养基中，30℃振荡培养24h后，离心获得所述发酵液。
优选地，所述发酵培养使用的发酵培养基由下述成分组成：
葡萄糖35.0～45.0g/L，蛋白胨8～15g/L，溶剂为水，pH值为5.8-6.2。
优选地，所述发酵培养基由下述成分组成：葡萄糖40.0g/L，蛋白胨10.0g/L，pH值为5.8-6.2。
本发明提供一株杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株和一株那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株，所述的菌株杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032和那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033是从山东省德州市西红柿大棚土壤中分离得到，这两株菌株的发酵液具有较强的抗菌活性。
本发明分离的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株，其菌落呈不透明且在培养基上隆起，呈红色会产生红色素，菌落轮廓清晰，菌落不易挑起，显微镜下观察菌丝呈无序纤维状，属于革兰氏阳性菌，在5～40℃温度范围内均可生长，最适生长温度为26～30℃。所述菌的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株的16S rRNA序列如Seq.NO1所示。
本发明分离的那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株，其菌落呈不透明且在培养基上隆起，菌落轮廓清晰，菌落不易挑起，显微镜下菌丝呈无序纤维状，属于革兰氏阳性菌，在5～40℃温度范围内均可生长，最适生长温度为26～30℃。所述那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的16S rRNA序列如Seq.NO2所示。
本发明提供了所述杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株发酵液具有的抑菌活性。所述杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株具有较强的抗菌活性，尤其对金黄色葡萄球菌表现出与50mM硫酸链霉素阳性对照相当的抑菌活性，抗菌能力强。
本发明提供了所述那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株具有抗真菌活性。所述抑制剂具有较强的抗菌活性，专一性抑制白色念珠菌生长。
本发明对所述杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株的最优发酵培养基组成进行筛选，发现其经由以下组分组成的培养基中发酵培养后，所得发酵液具有更高的抗菌活性。
培养基M6：甘油15.0g/L，L-酪氨酸0.5g/L，L-天冬酰胺1.0g/L，K2HPO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，NaCl 0.5g/L，FeSO4·7H2O 0.01g/L，溶剂为水，pH值为7.2-7.4。
本发明对所述那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的最优发酵培养基组成进行筛选，发现其经由以下组分组成的培养基中发酵培养后，所得发酵液具有更高的抗菌活性。
培养基M3：葡萄糖40.0g/L，蛋白胨10.0g/L，溶剂为水，pH值为5.8-6.2。
本发明所述的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株，经发酵培养后所得发酵液具有较强的抗菌活性，尤其对于金黄色葡萄球菌表现出更好的抑菌活性。因此，利用该菌株的发酵液可制备相应的抗菌剂。本发明所述的那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株，经发酵培养后所得的发酵液具有专一性抑制白色念珠菌生长的活性，可以应用于制备相应的抗真菌剂。
与现有技术相比，本发明提供的可发酵产生抗菌活性物质的菌株，是本发明人从山东省德州市西红柿大棚土壤中分离获得的两株新菌株，菌株ZJPH2021032经鉴定后，命名为杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032，其发酵培养所得发酵液具有较强的抗菌活性，尤其对金黄色葡萄球菌的抗菌活性更强，可为新型抗菌剂的制备提供新菌种和新途径。菌株ZJPH2021033经鉴定后，命名为那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033，其发酵培养所得发酵液具有专一性抑制真菌生长的活性，为新型抗真菌剂的发现提供了新的菌种和新途径。通过对这两株菌株发酵培养基的优化，可以显著提高其发酵液的的抗菌活性。
附图说明
图1为杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株的系统发育树(N-J法)
图2为杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株的菌落形态图
图3为杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株的显微镜照片(400×)
图4为那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的系统发育树(N-J法)
图5为那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的菌落形态图
图6为那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的显微镜照片(400×)
具体实施方式
下面通过具体实施例进一步阐述本发明的发明内容。
以下实施例中麦芽汁购自北京索莱宝科技有限公司，Lot.No.506S031，糖度：15度。
实施例1
本实施例中所用的土壤采集自山东省德州市临邑县临南镇西红柿温室大棚(东经116.53°，北纬37.04°)。
本实施例中采用的筛选培养基为含重铬酸钾高氏一号合成培养基，各组分重量配比分别为:可溶性淀粉20.0g/L；KNO3 1.0g/L；NaCl 0.5g/L；Fe(SO4)3·7H2O 0.01g/L；MgSO40.24g/L；3H2O·K2HPO4 0.752g/L；琼脂粉20.0g/L；重铬酸钾0.075g/L，溶剂为水，pH值为7.2-7.4。
本实施例的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032和那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的筛选方法：
将采集的西红柿大棚土壤经120℃干燥2h后，称取5g干燥土壤，加入至0.9％(w/v)无菌生理盐水中，在30℃下振荡30min，然后再用无菌水梯度稀释到10-2～10-5。吸取100μL菌悬液涂布于含0.0075％(w/v)重铬酸钾的高氏一号合成培养基，30℃条件下进行筛选培养7天后转接至平板培养，挑取形态各异的单菌落至高氏一号培养基平板上划线转接3-5次进行筛选培养，直至形成单菌落纯培养物，最终获得两株不同形态的放线菌菌株。一株菌株的菌落表面隆起，与培养基紧密结合不易挑取，产白色孢子，菌落背面为红色，记为菌株ZJPH2021032；一株菌株的菌落表面微微隆起，与培养基紧密结合不易挑取，有白色孢子聚集于表面且呈火山口状，记为菌株ZJPH2021033。
实施例2
本发明的菌株ZJPH2021032和菌株ZJPH2021033的分子生物学鉴定：即对本发明的菌株ZJPH2021032和菌株ZJPH2021033采用本领域常规的方法进行16S rDNA的PCR扩增。更具体的描述为利用生工生物工程(上海)股份有限公司的细菌DNA提取试剂盒提取菌株的全基因组，然后利用生工生物工程(上海)股份有限公司合成的通用引物27F(AGTTTGATCMTGGCTCAG)，1492R(GGTTACCTTGTTACGACTT)进行PCR，PCR程序为预变性94℃5min 1cycle；变性94℃30s，退火54℃30s，延伸72℃1min，35cycles；延伸72℃10min1cycle；4℃保温。PCR产物经生工生物工程(上海)股份有限公司提供的PCR产物纯化试剂盒纯化后交由生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。测序结果如Seq.NO1和Seq.NO2所示。利用Blast比对将本发明的菌株ZJPH2021032和菌株ZJPH2021033的16S rDNA序列与EzBioCloud典型菌株数据库进行同源性比对，结果表明菌株ZJPH2021032的16S rDNA序列与杨浦链霉菌fd2-tb(Streptomyces yangpuensis fd2-tb)有98.8％的相似度，然后通过MEGA(V7.0)采用邻接法(Neighbor-Joining,NJ)构建菌株ZJPH2021032的系统发育树，结果表明本发明ZJPH2021032菌株与Streptomyces yangpuensis fd2-tb菌株有91％的同源性，根据基因同源性对比，确定菌株ZJPH2021032为链霉菌属(Streptomyces sp.)，命名为杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2022491，保藏日期为2022年4月25日；而菌株ZJPH2021033的16S rDNA序列与那波链霉菌Streptomyces narbonensis NBRC12801的序列相似性为98.72％，通过MEGA(V7.0)采用邻接法(Neighbor-Joining,NJ)构建菌株ZJPH2021033的系统发育树，结果表明本发明ZJPH2021033菌株与Streptomyces narbonensis NBRC12801菌株有76％的同源性，根据基因同源性对比，确定菌株ZJPH2021033为链霉菌属(Streptomyces sp.)，命名为那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2022492，保藏日期为2022年4月25日。
实施例3
选取采用实施例1的方法筛选得到的菌株Streptomyces yangpuensisZJPH2021032和Streptomyces narbonensis ZJPH2021033，将其接种至高氏一号合成固体培养基中，在30℃条件下倒置培养7天，观察菌落形态及菌丝体生长情况。上述菌株ZJPH2021032和ZJPH2021033的形态学特征及生理生化特征结果表明：结合图2和图5所示，本发明的菌株ZJPH2021032和菌株ZJPH2021033菌落不透明且有突起和褶皱，表面粗糙有白色孢子产生，菌落轮廓清晰，菌体不易挑起，菌株ZJPH2021032的菌株背面为红色产生红色物质，而菌株ZJPH2021033的菌株背面为棕色；如图3和图6所示，显微镜下(400×)观察两株菌株的菌丝生长形态，两株菌的菌丝细而密。另外本发明的Streptomyces yangpuensisZJPH2021032菌株和Streptomyces narbonensis ZJPH2021033菌株都属于革兰氏阳性菌，在5℃～40℃温度范围内均能够生长，最适生长温度为26℃～30℃。
实施例4
本发明所述杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株和那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株发酵液的抗菌活性
本实施例中所述的抑菌活性指示菌株选择金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，大肠杆菌(Escherichia coli)，铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aeruginosa)，白色念珠菌(Canidiaalbicans)。
本实施例中所采用的种子培养基ISPII的重量配比如下：酵母膏4.0g/L，麦芽汁10.0g/L，葡萄糖4.0g/L，溶剂为水，pH值为7.2-7.4。
本实施例中所采用的发酵培养基M1的重量配比如下：酵母膏4.0g/L，麦芽汁10.0g/L，葡萄糖4.0g/L，溶剂为水，pH值为7.2-7.4。
将分离得到的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株或那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株接种至ISPII种子培养基中，30℃振荡培养24h后以5％(v/v)的接种量接种至100mL M1发酵培养基中，于30℃振荡培养24h后离心获得发酵液，离心获得发酵液，取10μL过滤除菌的发酵液样品滴加在滤纸片上，分别以10μL经过滤除菌的50mM硫酸链霉素水溶液和无菌水作为阳性对照和阴性对照。放置在37℃恒温培养箱中静置培养24h后，观察并测量抑菌圈大小，从而获得杨浦链霉菌(Streptomycesyangpuensis)ZJPH2021032菌株和那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株发酵液的抗菌活性。
具体描述为：
A.将经平板活化培养后的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株或那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株接种至ISPII种子培养基中，30℃振荡培养24h后以5％(v/v)的接种量接种至100mL M1发酵培养基中，于30℃振荡培养24h后离心获得发酵液，经离心除去菌体后4℃保存备用；
B.将经平板活化培养后的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌以及铜绿假单胞杆菌接种于50mL新鲜的LB液体培养基，将白色念珠菌接种于50mL SDA培养基，在37℃，180rpm摇床振荡培养12h。
C.取2mL经步骤B制得的培养液，采用分光光度计测定相应培养液的OD600数值，并用无菌水稀释菌液浓度至OD600值为0.7-0.8范围(确保后续重复实验接入的实验菌株数量一致)；
D.取100μL菌悬液加到固体LB平板上，用涂布棒均匀涂布。置于37℃恒温培养箱培养30min。取出平板，向每个平板中均匀放入5片灭菌的圆形滤纸片，轻压滤纸片使得滤纸片与固体培养基完全接触。
R.根据设定的加样顺序，各取10μL经步骤A制得的发酵液过滤除菌后滴加到圆形滤纸片(滤纸片直径为6mm)的中间部分，同时每个含LB培养基的固体平板中分别设置加有与发酵液等体积的无菌水和经过滤除菌的50mM硫酸链霉素水溶液的两个滤纸片作为阴性对照和阳性对照。
F.随后将固体平板在37℃下培养24h，观察并测量抑菌圈大小，评价所述杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株和那波链霉菌(Streptomycesnarbonensis)ZJPH2021033菌株发酵液的抗菌活性。
实施例5
本实施例产生具有抗菌活性物质的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株和那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的培养及发酵方法与实施例4一致，区别仅在于：
本实施例中所用的发酵培养基为M2培养基，该培养基各组分的配比为：胰蛋白胨10.0g/L，酵母浸膏5.0g/L，NaCl 10.0g/L，溶剂为水，pH值为7.0-7.4。其他操作步骤同实施例4，这里不再赘述。
实施例6
本实施例产生具有抗菌活性物质的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株和那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的培养及发酵方法与实施例4一致，区别仅在于：
本实施例中所用的发酵培养基为M3培养基，该培养基各组分的配比为：葡萄糖40.0g/L，蛋白胨10.0g/L，溶剂为水，pH值为5.8-6.2。
其他操作步骤同实施例4，这里不再赘述。
实施例7
本实施例产生具有抗菌活性物质的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株和那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的培养及发酵方法与实施例4一致，区别仅在于：
本实施例中所用的发酵培养基为M4培养基，该培养基各组分的配比为：
M4:K2HPO4 2.0g/L，MgSO4·7H2O 2.0g/L，NaCl 2.0g/L，(NH4)2SO4 4.0g/L，CaCO34.0g/L，溶剂为水，pH值为7.0-7.4。
其他操作步骤同实施例4，这里不再赘述。
实施例8
本实施例产生具有抗菌活性物质的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株和那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的培养及发酵方法与实施例4一致，区别仅在于：
本实施例中所用的发酵培养基为M5培养基，该培养基各组分的配比为：L-天冬酰胺1.0g/L，甘油10.0g/L，K2HPO4 1.0g/L，溶剂为水，pH值为7.2-7.5。其他操作步骤同实施例4，这里不再赘述。
实施例9
本实施例产生具有抗菌活性物质的杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株和那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033菌株的培养及发酵方法与实施例4一致，区别仅在于：
本实施例中所用的发酵培养基为M6培养基，该培养基各组分的配比为：甘油15.0g/L，L-酪氨酸0.5g/L，L-天冬酰胺1.0g/L，K2HPO4 0.5g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，NaCl0.5g/L，FeSO4·7H2O 0.01g/L，溶剂为水，pH值为7.2-7.4。其他操作步骤同实施例4，这里不再赘述
表2杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032经不同发酵培养基培养后所得发酵液的抑菌活性影响
Figure BDA0003638620940000071
硫酸链霉素作为阳性对照；无菌水作为阴性对照；NI表示没有抑制作用；ND表示未检测；抑菌圈单位为毫米(mm)
从表2中可知，本发明菌株Streptomyces yangpuensis ZJPH2021032菌株的发酵液展现出对革兰氏阳性致病菌如枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌具有显著的抑菌作用，尤其对金黄色葡萄球菌展现出与50mM硫酸链霉素相当的抑制活性，而对革兰氏阴性致病菌并未展现任何抑制活性，表明杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)ZJPH2021032菌株的发酵液中产生了特异性抑制革兰氏阳性菌的天然化合物，该菌株具有开发为针对耐药革兰氏阳性菌尤其是金黄色葡萄球菌的新型抗菌剂的巨大潜力。如表2所示，菌株Streptomycesyangpuensis ZJPH2021032对于金黄色葡萄球菌的抑制活性在M6发酵培养基培养下抑制活性具有显著性提高，因用于生产抗菌剂的最佳发酵培养基种类为M6，由此可见，Streptomyces yangpuensis ZJPH2021032菌株在单纯以氨基酸做为氮源，并且含多种金属离子的培养基中培养后得到的发酵液的抗菌活性更强。
表3那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH202103经不同发酵培养基培养后所得发酵液的抑菌活性影响
Figure BDA0003638620940000081
硫酸链霉素作为阳性对照；无菌水作为阴性对照；NI表示没有抑制作用；ND表示未检测；抑菌圈单位为毫米(mm)
如表3所示本发明Streptomyces narbonensis ZJPH2021033菌株的发酵液只针对真菌白色念珠菌具有良好的抑制活性而对于四株细菌均不表现出抑制活性，可以推测出Streptomyces narbonensis ZJPH2021033菌株只会产生抗真菌天然化合物并分泌到发酵液中，且该化合物还具有专一性抑真菌能力，具有开发新型抗真菌药物的能力。除此之外，通过不同发酵培养基的优化可以发现在M3发酵培养条件下对白色念珠菌的抑制活性相对于原始发酵培养基M1(ISP II)有一定的提升，具有进一步优化的空间，同时也说明在含糖量较高，且pH值较低的发酵培养基中进行培养更有利于该抗真菌剂的产生。
Seq.NO1:Streptomyces yangpuensis ZJPH2021032菌株16S rDNA序列
CGGTGGGGGCTACATGCAGTCGACGATGAAGCCCTTCGGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTTCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATACGACTGCGGAAGGCATCTTCTGTGGTGGAAAGCTCCGGCGGTGAAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGATGTGAAAGCCCGAGGCTTAACCTCGGGTCTGCATTCGATACGGGCTAGCTAGAGTGTGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCATTACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGTTGGGAACTAGGTGTTGGCGACATTCCACGTCGTCGGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTTCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATATACCGGAAAGCATTAGAGATAGTGCCCCCCTTGTGGTCGGTATACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTGTGTTGCCAGCATGCCCTTCGGGGTGATGGGGACTCACAGGAGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGTGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCTGTGGAGGAGCGACGAATCAGCT
Seq.NO2:Streptomyces narbonensis ZJPH2021033菌株16S rDNA序列
GGGTGGGCGTCTACATGCAGTCGACGATGAGCCCTTCGGGGTGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTTCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATAACACCGGCCTTCGCATGGAGGCTGGTTAAAAGCTCCGGCGGTGAAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAATGGCCCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGGTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCATCCGATACGGGCAGGCTAGAGTGTGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCATTACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGTTGGGAACTAGGTGTTGGCGACATTCCACGTCGTCGGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTTCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCAGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATATACCGGAAAGCATTAGAGATAGTGCCCCCCTTGTGGTCGGTATACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTGTGTTGCCAGCATGCCCTTCGGGGTGATGGGGACTCACAGGAGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAAAGAGCTGCGATGCCGCGAGGCGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTTGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGGTGGCCCAACCCCTTGTGGGAGGAGCACGAACGC
序列表
<110> 浙江工业大学
<120> 那波链霉菌ZJPH2021033及其在制备抗菌剂中的应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1411
<212> DNA
<213> 杨浦链霉菌(Streptomyces yangpuensis)
<400> 1
cggtgggggc tacatgcagt cgacgatgaa gcccttcggg gtggattagt ggcgaacggg 60
tgagtaacac gtgggcaatc tgcccttcac tctgggacaa gccctggaaa cggggtctaa 120
taccggatac gactgcggaa ggcatcttct gtggtggaaa gctccggcgg tgaaggatga 180
gcccgcggcc tatcagcttg ttggtggggt aatggcctac caaggcgacg acgggtagcc 240
ggcctgagag ggcgaccggc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg 300
cagcagtggg gaatattgca caatgggcga aagcctgatg cagcgacgcc gcgtgaggga 360
tgacggcctt cgggttgtaa acctctttca gcagggaaga agcgaaagtg acggtacctg 420
cagaagaagc gccggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg gcgcaagcgt 480
tgtccggaat tattgggcgt aaagagctcg taggcggctt gtcacgtcgg atgtgaaagc 540
ccgaggctta acctcgggtc tgcattcgat acgggctagc tagagtgtgg taggggagat 600
cggaattcct ggtgtagcgg tgaaatgcgc agatatcagg aggaacaccg gtggcgaagg 660
cggatctctg ggccattact gacgctgagg agcgaaagcg tggggagcga acaggattag 720
ataccctggt agtccacgcc gtaaacgttg ggaactaggt gttggcgaca ttccacgtcg 780
tcggtgccgc agctaacgca ttaagttccc cgcctgggga gtacggccgc aaggctaaaa 840
ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggcggagca tgtggcttaa ttcgacgcaa 900
cgcgaagaac cttaccaagg cttgacatat accggaaagc attagagata gtgcccccct 960
tgtggtcggt atacaggtgg tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt 1020
aagtcccgca acgagcgcaa cccttgtcct gtgttgccag catgcccttc ggggtgatgg 1080
ggactcacag gagaccgccg gggtcaactc ggaggaaggt ggggacgacg tcaagtcatc 1140
atgcccctta tgtcttgggc tgcacacgtg ctacaatggc cggtacaatg agctgcgata 1200
ccgtgaggtg gagcgaatct caaaaagccg gtctcagttc ggattggggt ctgcaactcg 1260
accccatgaa gtcggagtcg ctagtaatcg cagatcagca ttgctgcggt gaatacgttc 1320
ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacgtc acgaaagtcg gtaacacccg aagccggtgg 1380
cccaaccctg tggaggagcg acgaatcagc t 1411
<210> 2
<211> 1410
<212> DNA
<213> 那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)
<400> 2
gggtgggcgt ctacatgcag tcgacgatga gcccttcggg gtggattagt ggcgaacggg 60
tgagtaacac gtgggcaatc tgcccttcac tctgggacaa gccctggaaa cggggtctaa 120
taccggataa caccggcctt cgcatggagg ctggttaaaa gctccggcgg tgaaggatga 180
gcccgcggcc tatcagcttg ttggtggggt aatggcccac caaggcgacg acgggtagcc 240
ggcctgagag ggcgaccggc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg 300
cagcagtggg gaatattgca caatgggcga aagcctgatg cagcgacgcc gcgtgaggga 360
tgacggcctt cgggttgtaa acctctttca gcagggaaga agcgaaagtg acggtacctg 420
cagaagaagc gccggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg gcgcaagcgt 480
tgtccggaat tattgggcgt aaagagctcg taggcggctt gtcacgtcgg gtgtgaaagc 540
ccggggctta accccgggtc tgcatccgat acgggcaggc tagagtgtgg taggggagat 600
cggaattcct ggtgtagcgg tgaaatgcgc agatatcagg aggaacaccg gtggcgaagg 660
cggatctctg ggccattact gacgctgagg agcgaaagcg tggggagcga acaggattag 720
ataccctggt agtccacgcc gtaaacgttg ggaactaggt gttggcgaca ttccacgtcg 780
tcggtgccgc agctaacgca ttaagttccc cgcctgggga gtacggccgc aaggctaaaa 840
ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cagcggagca tgtggcttaa ttcgacgcaa 900
cgcgaagaac cttaccaagg cttgacatat accggaaagc attagagata gtgcccccct 960
tgtggtcggt atacaggtgg tgcatggctg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt 1020
aagtcccgca acgagcgcaa cccttgtcct gtgttgccag catgcccttc ggggtgatgg 1080
ggactcacag gagaccgccg gggtcaactc ggaggaaggt ggggacgacg tcaagtcatc 1140
atgcccctta tgtcttgggc tgcacacgtg ctacaatggc cggtacaaag agctgcgatg 1200
ccgcgaggcg gagcgaatct caaaaagccg gtctcagttc ggattggggt ctgcaactcg 1260
accccatgaa gtcggagttg ctagtaatcg cagatcagca ttgctgcggt gaatacgttc 1320
ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacgtc acgaaagtcg gtaacacccg aagccggtgg 1380
cccaacccct tgtgggagga gcacgaacgc 1410

Claims (9)

1.一种那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2022492，保藏日期：2022年4月25日，地址：中国，武汉，武汉大学，430072。
2.如权利要求1所述的那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033在制备具有抗真菌活性的抗菌剂中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述真菌为白色念珠菌。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述应用为：将所述那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033经发酵培养得到的发酵液应用于制备所述抗菌剂。
5.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述发酵培养的温度为30℃。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述发酵培养的操作是：将所述那波链霉菌(Streptomyces narbonensis)ZJPH2021033接种在ISPII种子培养基中，30℃振荡培养24小时后，以5％的体积接种量接种到发酵培养基中，30℃振荡培养24小时后离心获得所述发酵液。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述ISPII种子培养基终浓度组成如下：酵母膏4.0g/L，麦芽汁10.0g/L，葡萄糖4.0g/L，溶剂为水，pH值为7.2-7.4。
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述发酵培养使用的发酵培养基终浓度组成如下：葡萄糖35.0～45.0g/L，蛋白胨8～15g/L，溶剂为水，pH值为5.8-6.2。
9.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述发酵培养基终浓度组成如下：葡萄糖40.0g/L，蛋白胨10.0g/L，溶剂为水，pH值为5.8-6.2。
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