CN114748481A - 特罗司他马尿酸盐在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 - Google Patents
特罗司他马尿酸盐在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114748481A CN114748481A CN202210520939.5A CN202210520939A CN114748481A CN 114748481 A CN114748481 A CN 114748481A CN 202210520939 A CN202210520939 A CN 202210520939A CN 114748481 A CN114748481 A CN 114748481A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- virus
- tick
- hippurate
- borne encephalitis
- infection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 title claims abstract description 42
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 title claims abstract description 32
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 title claims abstract description 30
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 title claims abstract description 30
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 26
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims abstract description 24
- 208000004293 Chikungunya Fever Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title abstract description 19
- 201000009182 Chikungunya Diseases 0.000 title abstract description 8
- 241001502567 Chikungunya virus Species 0.000 claims description 9
- 206010057293 West Nile viral infection Diseases 0.000 claims description 9
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 claims description 6
- 206010067256 Chikungunya virus infection Diseases 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- IKGXIBQEEMLURG-NVPNHPEKSA-N rutin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-NVPNHPEKSA-N 0.000 claims 2
- 229960003232 troxerutin Drugs 0.000 claims 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- XSFPZBUIBYMVEA-CELUQASASA-N 2-benzamidoacetic acid;ethyl (2s)-2-amino-3-[4-[2-amino-6-[(1r)-1-[4-chloro-2-(3-methylpyrazol-1-yl)phenyl]-2,2,2-trifluoroethoxy]pyrimidin-4-yl]phenyl]propanoate Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1.C1=CC(C[C@H](N)C(=O)OCC)=CC=C1C1=CC(O[C@H](C=2C(=CC(Cl)=CC=2)N2N=C(C)C=C2)C(F)(F)F)=NC(N)=N1 XSFPZBUIBYMVEA-CELUQASASA-N 0.000 abstract 1
- 229950011306 telotristat etiprate Drugs 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 46
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 8
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 description 8
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 8
- 208000004006 Tick-borne encephalitis Diseases 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 5
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 5
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 5
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 4
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000256173 Aedes albopictus Species 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 2
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 241000256111 Aedes <genus> Species 0.000 description 1
- 241000256118 Aedes aegypti Species 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 208000009828 Arbovirus Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010007270 Carcinoid syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010051290 Central nervous system lesion Diseases 0.000 description 1
- 241000256054 Culex <genus> Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 229940122439 Hydroxylase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010053159 Organ failure Diseases 0.000 description 1
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 1
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000005506 Tryptophan Hydroxylase Human genes 0.000 description 1
- 108010031944 Tryptophan Hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- 241000907316 Zika virus Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- -1 small molecule compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
- A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
- A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及医药技术领域,关于特罗司他马尿酸盐(TelotristatEtiprate)在制备抗蜱传脑炎病毒(TBEV)、西尼罗病毒(WNV)、黄热病毒(YFV)和基孔肯雅热病毒(CHIKV)感染药物中的应用。所述抗TBEV、WNV、YFV和CHIKV感染药物是以特罗司他马尿酸盐为唯一的活性成份,或包含特罗司他马尿酸盐的药物组合物,所述抗TBEV、WNV、YFV和CHIKV感染药物是指预防或治疗TBEV、WNV、YFV和CHIKV感染的药物。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体涉及特罗司他马尿酸盐(Telotristat Etiprate)在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用。
背景技术
特罗司他马尿酸盐(Telotristat Etiprate)是一种口服有效的色氨酸羟化酶抑制剂,临床用于治疗类癌瘤综合征。
蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV)又称森林脑炎病毒,为黄病毒科黄病毒属。蜱传脑炎(TBE)是由TBEV引起的以中枢神经系统病变为主要特征的自然疫源性疾病。人感染病毒的主要途径是被携带TBEV的蜱虫叮咬,还可因摄入TBEV污染的奶制品而感染。TBE的分布具有明显的地域性,与传播媒介密切相关。近年来,在中国东北、俄罗斯东部及日本北部TBE的发病呈现上升趋势,疫区范围也在不断扩大。目前用于预防TBEV感染的灭活疫苗的免疫原性较低,诱导中和抗体的维持时间较短,且在林区职业人群以外可能暴露人群的接种率较低。目前无TBE特异治疗药物。
西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)属黄病毒科黄病毒属,为单股正链RNA病毒,可引起人和动物发生西尼罗河热和西尼罗病毒脑膜脑炎,库蚊是其主要的传播媒介,鸟类是该病毒的中间宿主,而人和马则是终端宿主。WNV病广泛分布于非洲、中东、欧洲的部分地区。1999年夏季,WNV首次登陆美国,随后几年内在北美和中美洲迅速传播,导致美国和加拿大等国家历史上虫媒病毒感染的最大流行。目前尚无针对WNV感染的人用疫苗以及治疗药物。虽然我国至今没有WNV感染疫情发生,但有输入性传播的可能。
黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)与寨卡病毒(ZIKV)、西尼罗河病毒(WNV)和登革热病毒(DENV)等同属黄病毒科黄病毒属,是以伊蚊为传播媒介,当前主要流行于非洲和南美洲的热带、亚热带地区。黄热病毒可引起严重危害人类健康的黄热病,表现为黄疸,出血、甚至多系统的器官衰竭。虽有减毒疫苗,但疫苗在流行区的接种覆盖率有限,每年均有疫情发生。我国近年来曾有多例输入性感染者。目前尚无针对YFV感染的特异治疗药物。
基孔肯雅热病毒(Chikungunya fever virus,CHIKV)属于披膜病毒科甲病毒属,主要由埃及伊蚊和白蚊伊蚊为传播媒介,基因组为单股正链RNA,可致基孔肯雅热,虽致死率不高,但被感染人群丧失劳动力,导致严重的社会影响与经济损失。CHIKV于1952-1953年在坦桑尼亚首次分离,随后在非洲和亚洲地区暴发流行。2005年后CHIKV再次在全球多地数次暴发,并在法国、意大利、中国出现散在的输入性病例,特别是CHIKV东中南非型E1蛋白发生突变(E1-A226V)使其可有效通过白蚊伊蚊传播,不仅对热带和亚热带地区,还对白蚊伊蚊广泛存在的温带地区的民众构成了潜在威胁。目前尚无针对CHIKV感染的疫苗以及特异治疗药物。
发明内容
本发明旨在提供特罗司他马尿酸盐的一种新用途。
本发明提供了特罗司他马尿酸盐在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用。
所述特罗司他马尿酸盐的化学结构式如下:
本发明所述的应用,其特征在于:所述抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物是以特罗司他马尿酸盐为唯一的活性成份,或包含特罗司他马尿酸盐的药物组合物。
本发明所述的应用,其特征在于:所述包含特罗司他马尿酸盐的药物组合物是指特罗司他马尿酸盐与药学上允许的一种或多种辅料构成的药物组合物。
本发明所述的应用,其特征在于:所述药物用于预防或治疗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒的感染。
本发明利用TBEV感染易感细胞的实验操作体系,从临床批准的药物小分子库中筛选可抑制TBEV感染的候选小分子药物,筛选出特罗司他马尿酸盐能有效抑制TBEV对人肝癌细胞Huh7感染,其细胞毒性低,并且对WNV、YFV、CHIKV均具有抑制作用,可作为潜在的抗TBEV、WNV、YFV、CHIKV药物,具有应用前景。
附图说明
图1.特罗司他马尿酸盐保护BHK细胞抵抗蜱传脑炎病毒感染的效果;
即BHK细胞以蜱传脑炎病毒感染,同时加入特罗司他马尿酸盐(终浓度10μM)或溶剂DMSO(终浓度0.12%),或不以蜱传脑炎病毒感染(未加病毒),72小时后加入CCK8试剂,检测450nm吸光值。
图2.特罗司他马尿酸盐对Huh7细胞的毒性;
即特罗司他马尿酸盐(终浓度20μM)以及溶剂DMSO(终浓度0.5%)分别处理Huh7细胞,72小时后加入CCK8试剂,检测450nm吸光值。
图3.特罗司他马尿酸盐(终浓度10μM)在Huh7细胞感染模型中对蜱传脑炎病毒的抑制作用。
图4.特罗司他马尿酸盐抑制蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、基孔肯雅热病毒感染的效果。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明,下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解,下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的,不应以此限制本发明的保护范围。
本发明实施例所用的特罗司他马尿酸盐可以通过市售方式购买获得。
一、病毒、药物、试剂及其他材料
1.病毒:蜱传脑炎病毒、黄热病毒由中国人民解放军海军军医大学生物医学防护教研室分离和扩增培养,西尼罗病毒、基孔肯雅热病毒利用反向遗传学技术合成,由幼仓鼠肾BHK细胞扩增培养。所有涉及病毒感染的实验操作均在海军军医大学P3实验室中进行。
2.化合物:FDA批准的2580种临床小分子药物分子库,购自美国Selleck公司。
3.人肝癌细胞系Huh7和幼仓鼠肾BHK细胞,购自中国科学院上海细胞所,由中国人民解放军海军军医大学生物医学防护教研室保存。
4.DMEM细胞培养液为美国Hyclone公司产品,用时添加10%胎牛血清、非必需氨基酸、氨苄青霉素和链霉素(各100U/ml),培养液添加剂均为美国Thermo Fisher公司产品。
5.细胞消化液,含0.25%胰蛋白酶,用磷酸盐缓冲液配制。
6.CCK8细胞活性和增殖检测试剂盒为美国MedChemExpress公司产品。
7.小鼠蜱传脑炎病毒多克隆抗体、西尼罗病毒多克隆抗体、黄热病毒多克隆抗体、基孔肯雅热病毒多克隆抗体由中国人民解放军海军军医大学生物医学防护教研室用甲醛灭活的病毒免疫小鼠而制备。
8.荧光素AlexaFluor488-标记的抗小鼠IgG为美国Thermo Fisher公司产品。
二、实验方法:
(一)从含2580种小分子化合物的FDA药物分子库中筛选抗蜱传脑炎病毒药物
用完全DMEM培养液在T75细胞培养瓶内传代培养幼仓鼠肾BHK细胞,接种于96孔板,每孔10000个细胞,DMEM培养液100μL,培养12小时。随后每孔加入50μL含1000PFU(空斑形成单位)蜱传脑炎病毒的完全DMEM培养液;同时加入50μL含FDA小分子化学药物的完全DMEM培养液,药物终浓度为10μM,每个浓度重复3孔,以加等体积溶剂DMSO作为不加药物的对照。置于37℃、5%CO2孵箱内培养。72小时后显微镜下可见加DMSO孔的全部细胞均变圆或脱落。每孔加入CCK8细胞活性和增殖检测试剂10μL,置于37℃、5%CO2孵箱内,30分钟后用多功能酶标仪检测每孔在450nm波长的吸光值,计算药物对细胞的保护率=(加药细胞450nm吸光值—DMSO孔细胞450nm吸光值)/未加病毒加DMSO的细胞450nm吸光值*100%,得到每种药物在10μM浓度时对蜱传脑炎病毒感染细胞的保护率。结果显示,特罗司他马尿酸盐对细胞具有显著的保护效果,特罗司他马尿酸盐与DSMO对照处理细胞的450nm吸光值如图1所示,计算得到特罗司他马尿酸盐的细胞保护率为98.6%。
(二)特罗司他马尿酸盐对细胞的毒性
分别将培养的人肝癌细胞系Huh7和幼仓鼠肾BHK细胞接种于96孔板,每孔10000个细胞,培养液100μL,12小时后,吸除原培养液,每孔内加入浓度梯度稀释的特罗司他马尿酸盐的完全DMEM培养液100μL,特罗司他马尿酸盐终浓度分别为2.5、5、10、20、40和80μM,每个浓度重复3孔,以80μM药物的溶剂DMSO含量作为不加药物的对照。置于37℃、5%CO2孵箱内培养。48小时后,每孔加入CCK8细胞活性和增殖检测检测试剂10μL,置于37℃、5%CO2孵箱内,30分钟后用多功能酶标仪检测每孔对450nm波长的吸光值,根据不同浓度药物处理孔与溶剂孔450nm吸光值的差异评价药物的细胞毒性。
结果显示,当浓度等于或低于20μM时,特罗司他马尿酸盐处理的两种细胞与DMSO溶剂处理的细胞均无明显差异。图2显示20μM时,特罗司他马尿酸盐处理的Huh7细胞与DMSO溶剂处理细胞的450nm吸光值。
(三)特罗司他马尿酸盐在细胞感染模型中对蜱传脑炎病毒的抑制作用
将传代培养的人肝癌细胞系Huh7接种于96孔板,每孔10000个细胞,培养液100μL,培养12小时。随后每孔加入50μL含1000PFU蜱传脑炎病毒的完全DMEM培养液;同时加入50μL含特罗司他马尿酸盐的完全DMEM培养液,药物终浓度为5μM,每个浓度重复3孔,以加等体积溶剂DMSO作为不加药物的对照,置于37℃、5%CO2孵箱内培养。
20小时后,用免疫荧光技术检测病毒对细胞的感染情况,具体操作如下:吸除培养板中的培养液,每孔加100μL甲醇,将培养板至于-20℃冰箱,20分钟后,取出培养板,吸除甲醇,每孔以磷酸盐缓冲液(PBS)洗孔一次,随后加入100μL含3%牛血清白蛋白(BSA)的PBS(以下简称3%BSA-PBS),置于水平摇床上,室温缓慢摇1小时,吸除培养板中的3%BSA-PBS,每孔加100μL含抗蜱传脑炎病毒多克隆抗体的1%BSA-PBS(抗体500倍稀释),室温缓慢摇1小时,吸除培养板中的抗蜱传脑炎病毒多克隆抗体工作液,每孔以PBS洗3次,随后加入100μL含荧光素Alexa Fluor 488-标记的抗小鼠IgG的1%BSA-PBS(荧光素抗体1500倍稀释),室温避光缓慢摇1小时,吸除培养板中的荧光素抗体工作液,每孔加入DAPI细胞核染色液100μL,室温避光缓慢摇10分钟,吸除培养板中的DAPI细胞核染色液,每孔以PBS洗3次,用细胞成像及分析系统(BioTek Cytation 5Imaging Reader)对每孔细胞的荧光分布进行拍照。每孔拍照四个视野,分析、计算绿色荧光阳性细胞的百分率,即病毒感染率。
结果如图3所示,与作为对照的DMSO溶剂处理孔相比,特罗司他马尿酸盐处理病毒感染率明显降低。结果证明,在5μM浓度时,特罗司他马尿酸盐能显著抑制蜱传脑炎病毒对Huh7细胞的感染。
(四)特罗司他马尿酸盐抑制蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、基孔肯雅热病毒感染活性的定量测定
为了观察特罗司他马尿酸盐对蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、基孔肯雅热病毒是否具有抗抑制活性,我们进一步对特罗司他马尿酸盐进行了抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、基孔肯雅热病毒活性的量化检测,即通过检测不同浓度时的抗病毒活性,计算药物对病毒的半数抑制浓度(IC50)。药物设置了连续二倍稀释的七个浓度梯度:10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625μM。检测方法中,除了药物处理设置浓度梯度外,其他与(三)中所述相同。病毒感染的细胞经病毒抗体和荧光抗体结合以及细胞核染色以后,用细胞成像及分析系统进行细胞拍照,每孔拍照四个视野,分析、计算绿色荧光阳性细胞的百分率,即病毒感染率(图4)。根据各浓度梯度药物处理孔的阳性细胞百分率,计算出特罗司他马尿酸盐对蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、基孔肯雅热病毒的IC50;蜱传脑炎病毒IC50:0.1323μM;西尼罗病毒IC50:0.2548μM;黄热病毒IC50:0.4981μM;基孔肯雅热病毒IC50:0.5545μM。
上述体外和体内实验结果均表明,特罗司他马尿酸盐具有显著的蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、基孔肯雅热病毒感染的活性,可用于制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、基孔肯雅热病毒感染的药物。
以上显示和描述了本发明的主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。
Claims (4)
1.特罗司他马尿酸盐(Telotristat Etiprate)在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物是以特罗司他马尿酸盐为唯一的活性成份,或包含特罗司他马尿酸盐的药物组合物。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:所述包含特罗司他马尿酸盐的药物组合物是指特罗司他马尿酸盐与药学上允许的一种或多种辅料构成的药物组合物。
4.根据权利要求1-3任一所述的应用,其特征在于:所述药物用于预防或治疗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒的感染。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210520939.5A CN114748481B (zh) | 2022-05-12 | 2022-05-12 | 特罗司他马尿酸盐在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210520939.5A CN114748481B (zh) | 2022-05-12 | 2022-05-12 | 特罗司他马尿酸盐在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114748481A true CN114748481A (zh) | 2022-07-15 |
CN114748481B CN114748481B (zh) | 2023-12-05 |
Family
ID=82335792
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210520939.5A Active CN114748481B (zh) | 2022-05-12 | 2022-05-12 | 特罗司他马尿酸盐在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114748481B (zh) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109890423A (zh) * | 2016-10-28 | 2019-06-14 | 塔弗达治疗有限公司 | Sstr靶向缀合物及其颗粒和制剂 |
WO2021145436A1 (ja) * | 2020-01-17 | 2021-07-22 | Karydo TherapeutiX株式会社 | 目的とする既知の薬剤又はその等価物質の新たな適応症の予測方法、予測装置、及び予測プログラム |
-
2022
- 2022-05-12 CN CN202210520939.5A patent/CN114748481B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109890423A (zh) * | 2016-10-28 | 2019-06-14 | 塔弗达治疗有限公司 | Sstr靶向缀合物及其颗粒和制剂 |
WO2021145436A1 (ja) * | 2020-01-17 | 2021-07-22 | Karydo TherapeutiX株式会社 | 目的とする既知の薬剤又はその等価物質の新たな適応症の予測方法、予測装置、及び予測プログラム |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114748481B (zh) | 2023-12-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Sotelo et al. | Pathogenicity of two recent Western Mediterranean West Nile virus isolates in a wild bird species indigenous to Southern Europe: the red-legged partridge | |
CN113082049B (zh) | 碘化钾或含有碘化钾的组合物在制备用于治疗非洲猪瘟的药物中的新用途 | |
EP3785718B1 (en) | Pharmaceutical composition for prevention or treatment of flavivirus infectious disease | |
CN114668763A (zh) | 依曲韦林在制备抗蜱传脑炎病毒西尼罗病毒黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 | |
CN106511346A (zh) | 一种可用于抑制寨卡病毒感染的小分子药物及其应用 | |
CN106038695B (zh) | 鳄梨萃取物、鳄梨醇b及(2r,4r)-1,2,4-三羟基十七碳-16-炔的用途,以及包含鳄梨萃取物的保健食品 | |
CN110354117B (zh) | 化合物Rottlerin在制备抗黄病毒属病毒感染试剂或药物中的应用 | |
CN114748481A (zh) | 特罗司他马尿酸盐在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 | |
CN115089568B (zh) | 阿达帕林在制备抗蜱传脑炎病毒西尼罗病毒黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 | |
CN115025094A (zh) | 马赛替尼在制备抗蜱传脑炎病毒西尼罗病毒黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 | |
CN114917227B (zh) | 依伐卡托在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药中的应用 | |
CN114767828A (zh) | 伊沙佐米在制备抗蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 | |
CN115006386B (zh) | 硝呋齐特在制备抗蜱传脑炎病毒西尼罗病毒黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 | |
CN115025085A (zh) | 地拉罗司在制备抗蜱传脑炎病毒西尼罗病毒黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 | |
CN115089574A (zh) | 吡美莫司在制备抗蜱传脑炎病毒西尼罗病毒黄热病毒和基孔肯雅热病毒感染药物中的应用 | |
Schoub et al. | Flaviviruses | |
Basu et al. | A new dimension in the dengue epidemiology with special reference to the genetic diversity of the virus: a review | |
Biswas et al. | Dengue fever: stages, complication, diagnosis, and prevention strategies | |
CN114796204A (zh) | 安莎三烯类化合物在抗病毒感染药物中的用途及制备方法 | |
CN108404117B (zh) | 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白在治疗寨卡病毒感染药物中的应用 | |
CN113197894B (zh) | 奥巴托克在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用 | |
CN114796204B (zh) | 安莎三烯类化合物在抗病毒感染药物中的用途及制备方法 | |
WO2019209035A1 (ko) | 플라비바이러스 감염증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
CN106727574B (zh) | 马尼地平在制备治疗黄病毒科病毒感染药物中的应用 | |
KELEŞ | West Nıle Vırus |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |