CN109890423A - Sstr靶向缀合物及其颗粒和制剂 - Google Patents

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Abstract

已设计经由连接体连接至靶向部分(诸如生长激素抑制素受体结合部分)的活性物质(诸如DM1)的缀合物和包含此类缀合物的颗粒。此类缀合物和颗粒可提供改善的活性物质时空递送；改善的生物分布和在肿瘤中的渗透；和/或降低的毒性。提供制备缀合物、颗粒及其制剂的方法。提供向有需要的受试者施用制剂以例如治疗或预防癌症的方法。

Description

SSTR靶向缀合物及其颗粒和制剂
相关申请的引用
本申请要求2016年10月28日提交的标题为SSTR靶向缀合物及其颗粒和制剂(SSTR-TARGETED CONJUGATES AND PARTICLES AND FORMULATIONS THEREOF)的美国临时专利申请号62/414,481的优先权，其内容以引用的方式整体并入本文。
发明领域
本发明大体上涉及靶向配体、其缀合物和用于药物递送的颗粒的领域。更具体地说，本发明涉及靶向生长激素抑制素(somatostatin)受体的分子例如用于治疗癌症的用途。
发明背景
纳米医学的发展通常涉及改善药物的药物性质，以及在一些情况下涉及以更具细胞特异性的方式增强靶向递送。已描述若干细胞特异性药物，并且所述药物包括单克隆抗体、适体、肽和小分子。尽管此类药物具有一些潜在优势，但许多问题已限制它们的临床应用，包括大小、稳定性、制造成本、免疫原性、不良药物动力学和其他因素。纳米颗粒药物递送系统对于全身性药物递送来说具有吸引力，因为它们可能能够延长药物在循环中的半衰期，降低药物的非特异性摄取，并且例如通过增强的渗透和滞留(EPR)作用来改善药物在肿瘤处的积累。存在有限的以纳米颗粒形式配制以供递送的治疗剂的实例，其包括(脂质体包封多柔比星(doxyrubicin))和(白蛋白结合的紫杉醇(paclitaxel)纳米颗粒)。
用于以时空调控方式向特定器官或组织中的特定患病细胞和组织(例如向癌细胞)有效递送药物或药物候选物的纳米技术的开发可潜在地克服或改善治疗挑战，诸如全身性毒性。然而，尽管递送系统的靶向可优先将药物递送至需要疗法的部位中，但从纳米颗粒释放的药物可能不能例如以有效量保持在所靶向细胞的区域中，或可能不能以相对无毒状态在循环中保持足够的时间量以降低治疗频率或允许施用更低量的药物同时仍然实现治疗作用。已经设计了包含抗体和细胞毒性有效载荷(payload)的抗体药物缀合物。然而，与较小的靶向配体相比，抗体的大小限制了实体肿瘤渗透(参见Xiang等,Theranostics,vol.5(10):1083-1097(2015)，其内容通过引用的方式整体并入本文)。较小的靶向配体还能更快地渗透实体肿瘤，这对于需要高肿瘤Cmax的有效载荷是重要的。因此，本领域需要改善的药物靶向和递送以及设计具有更深的实体肿瘤渗透的药物。
发明内容
申请人已创建了一种分子，其是生长激素抑制素受体结合部分和活性物质的缀合物，所述活性物质例如是癌症治疗剂，诸如含铂剂。此外，可将此类缀合物包封至颗粒中。缀合物和颗粒适用于向表达生长激素抑制素受体(SSTR)的细胞递送活性物质，诸如肿瘤细胞毒性剂。
申请人已开发新型缀合物和颗粒(包括聚合纳米颗粒)及其药物制剂。诸如治疗剂、预防剂或诊断剂的活性物质的缀合物经由连接体连接至可结合生长激素抑制素受体的靶向部分。相较于单独递送活性物质，缀合物和颗粒可提供改善的活性物质时空递送和/或改善的生物分布。在一些情况下，靶向部分也可充当治疗剂。在一些实施方案中，靶向剂基本上不干扰治疗剂在体内的功效。本文描述制备缀合物、颗粒和包含此类颗粒的制剂的方法。此类颗粒适用于治疗或预防易感于活性物质的疾病，例如治疗或预防癌症或感染性疾病。
缀合物包括由连接体连接的靶向配体和活性物质，其中在一些实施方案中，缀合物具有下式：
(X—Y—Z)
其中X是生长激素抑制素受体靶向部分；Y是连接体；并且Z是活性物质。在一个实施方案中，活性物质可以是DM1。
在本发明的一个方面中，提供了减少细胞增殖、增加细胞凋亡或增加细胞停滞的方法。该方法包括向细胞施用缀合物，其中缀合物包含通过连接体与生长激素抑制素受体(SSTR)靶向部分偶合的活性物质，其中活性物质是美坦新(mertansine)(DM1)。
在本发明的另一方面中，提供了治疗受试者的肿瘤、减少受试者的肿瘤体积或将DM1递送至受试者的肿瘤的方法。该方法包括向受试者施用缀合物，其中缀合物包含通过连接体与生长激素抑制素受体(SSTR)靶向部分偶合的活性物质，其中活性物质是美坦新(DM1)。
在本发明的另一方面中，提供了治疗神经内分泌癌症的方法，其中所述神经内分泌癌症选自小细胞肺癌(SCLC)、嗜铬细胞瘤、成神经细胞瘤、神经节细胞瘤、副神经节瘤、类癌、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、血管活性肠多肽分泌性肿瘤、胰多肽分泌性肿瘤、无功能性胃肠胰腺肿瘤、甲状腺髓样癌、皮肤Merkel细胞瘤、垂体腺瘤和胰腺癌。该方法包括向细胞施用缀合物，其中缀合物包含通过连接体与生长激素抑制素受体(SSTR)靶向部分偶合的活性物质，其中活性物质是美坦新(DM1)。
在本发明的又一方面中，提供了包含缀合物和额外的活性物质的药物组合物，其中缀合物包含通过连接体与生长激素抑制素受体(SSTR)靶向部分偶合的活性物质，并且其中活性物质是美坦新(DM1)。
附图简述
图1是Dreher等,JNCI,vol.98(5):335(2006)的图6。
图2A显示了SSTR2受体内化强度。图2B显示了不同时间的H524-MD肿瘤异种移植物中的SSTR2内化。图2C显示了SSTR2内化分布的水平。图2D显示了不同时间的H524肿瘤异种移植物中SSTR2内部细胞分布。
图3显示了用缀合物57处理的HCC-33异种移植物的TGI％。
图4显示了缀合物57用于hERG离子通道抑制的体外评估。虚线表示溶媒对照孔(0.3％DMSO)的平均效果。
图5显示了多种制剂的PK曲线。
发明详述
已表征至少五种生长激素抑制素受体亚型，并且肿瘤可表达各种受体亚型。(例如参见Shaer等,Int.3.Cancer 70:530-537,1997)。天然存在的生长激素抑制素和它的类似物展现与各受体亚型的差异性结合。申请人已利用该特征来创建新型颗粒以改善包含活性物质的缀合物对疾病组织靶标的靶向性。此类靶向性可例如改善活性物质在某一部位处的量，并且降低活性物质对受试者的毒性。如本文所用，“毒性”是指物质或组合物对细胞、组织生物体或细胞环境有害或有毒的能力。低毒性是指物质或组合物对细胞、组织生物体或细胞环境有害或有毒的能力降低。此类降低的毒性或低毒性可以是相对于标准量度，相对于治疗或相对于不存在治疗。
可进一步相对于受试者的重量减轻来测量毒性，其中重量减轻超过体重的15％、超过体重的20％或超过体重的30％指示有毒性。也可测量其他毒性度量，诸如患者表现度量，包括嗜睡和全身不适。嗜中性粒细胞减少症或血小板减少也可为毒性的度量。
药理学毒性指标包括升高的AST/ALT水平、神经毒性、肾损害、GI损害等。
缀合物在施用颗粒之后得以释放。相较于施用靶向颗粒或包封的非靶向药物，靶向药物缀合物利用活性分子靶向性并结合颗粒的增强的渗透和滞留作用(EPR)和改善的总体生物分布来提供更大的功效和可耐受性。
此外，预测含有连接至活性物质的生长激素抑制素靶向部分的缀合物对不表达SSTR的细胞的毒性相较于单独活性物质的毒性降低。在不受任何特定理论约束下，申请人相信该特征是因为相较于单独活性物质进入细胞的能力，缀合活性物质进入细胞的能力降低。因此，相较于单独活性物质，如本文所述的包含活性物质的缀合物和含有缀合物的颗粒通常对非SSTR表达细胞具有降低的毒性，并且对SSTR表达细胞具有至少相同或增加的毒性。
本发明的一目标在于提供改善的用于时空药物递送的化合物、组合物和制剂。
本发明的另一目标在于提供制备改善的用于时空药物递送的化合物、组合物和制剂的方法。
本发明的一目标也在于提供向有需要的个体施用该改善的化合物、组合物和制剂的方法。
I.缀合物
缀合物包含通过连接体连接至靶向部分(例如能够与SSTR结合的分子)的活性物质或其前药。缀合物可为单一活性物质与单一靶向部分之间的缀合物，例如具有结构X-Y-Z的缀合物，其中X是靶向部分，Y是连接体，并且Z是活性物质。
在一些实施方案中，缀合物含有超过一个靶向部分、超过一个连接体、超过一个活性物质或其任何组合。缀合物可具有任何数目的靶向部分、连接体和活性物质。缀合物可具有结构X-Y-Z-Y-X、(X-Y)n-Z、X-(Y-Z)n、X-Y-Zn、(X-Y-Z)n、(X-Y-Z-Y)n-Z，其中X是靶向部分，Y是连接体，Z是活性物质，并且n是1至50、2至20、例如1至5之间的整数。X、Y和Z在每次出现时可相同或不同，例如缀合物可含有超过一种类型的靶向部分、超过一种类型的连接体和/或超过一种类型的活性物质。
缀合物可含有连接至单一活性物质的超过一个靶向部分。举例来说，缀合物可包括活性物质以及各自经由不同连接体连接的多个靶向部分。缀合物可具有结构X-Y-Z-Y-X，其中每个X是可相同或不同的靶向部分，每个Y是可相同或不同的连接体，并且Z是活性物质。
缀合物可含有连接至单一靶向部分的超过一个活性物质。举例来说，缀合物可包括靶向部分以及各自经由不同连接体连接的多个活性物质。缀合物可具有结构Z-Y-X-Y-Z，其中X是靶向部分，每个Y是可相同或不同的连接体，并且每个Z是可相同或不同的活性物质。
A.活性物质
如本文所述的缀合物含有至少一个活性物质(第一活性物质)。缀合物可含有超过一个活性物质，其可与第一活性物质相同或不同。活性物质可为治疗剂、预防剂、诊断剂或营养剂。多种活性物质在本领域中是已知的，并且可用于本文所述的缀合物中。活性物质可为蛋白质或肽、小分子、核酸或核酸分子、脂质、糖、糖脂、糖蛋白、脂蛋白或其组合。在一些实施方案中，活性物质是抗原、佐剂、放射剂、成像剂(例如荧光部分)或多核苷酸。在一些实施方案中，活性物质是有机金属化合物。
抗癌剂
活性物质可为癌症治疗剂。癌症治疗剂包括例如死亡受体激动剂，诸如TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)或Fas配体或结合或活化死亡受体或以其他方式诱导凋亡的任何配体或抗体。适合的死亡受体包括但不限于TNFR1、Fas、DR3、DR4、DR5、DR6、LTβR及其组合。
诸如化学治疗剂、细胞因子、趋化因子和放射疗法剂的癌症治疗剂可用作活性物质。化学治疗剂包括例如烷基化剂、抗代谢剂、蒽环类药物(anthracyclines)、植物生物碱、拓扑异构酶抑制剂和其他抗肿瘤剂。此类药剂通常影响细胞分裂或DNA合成和功能。可用作活性物质的治疗剂的其他实例包括直接靶向某些类型的癌症(例如慢性髓性白血病、胃肠道间质瘤)中的分子异常的单克隆抗体和酪氨酸激酶抑制剂，例如甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)。
化学治疗剂包括但不限于顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、氮芥(mechlorethamine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、长春瑞滨(vinorelbine)、长春地辛(vindesine)、泰素(taxol)及其衍生物、伊立替康(irinotecan)、托泊替康(topotecan)、安吖啶(amsacrine)、依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)、替尼泊苷(teniposide)、表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、西妥昔单抗(cetuximab)和利妥昔单抗(rituximab)、贝伐单抗(bevacizumab)，及其组合。这些中的任一种可用作缀合物中的活性物质。
在一些实施方案中，活性物质可为20-表-1,25-二羟基维生素D3、4-甘薯苦醇(4-ipomeanol)、5-乙炔基尿嘧啶(5-ethynyluracil)、9-二氢泰素(9-dihydrotaxol)、阿比特龙(abiraterone)、阿西维辛(acivicin)、阿柔比星(aclarubicin)、盐酸阿考达唑(acodazole hydrochloride)、阿克罗宁(acronine)、酰基富烯(acylfulvene)、腺环戊醇(adecypenol)、阿多来新(adozelesin)、阿地白介素(aldesleukin)、全tk拮抗剂、六甲蜜胺(altretamine)、氨莫司汀(ambamustine)、安波毒素(ambomycin)、乙酸阿美蒽醌(ametantrone acetate)、阿米多克斯(amidox)、氨磷汀(amifostine)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、氨基酮戊酸(aminolevulinic acid)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、穿心莲内酯(andrographolide)、血管生成抑制剂、拮抗剂D、拮抗剂G、安雷利克斯(antarelix)、安曲霉素(anthramycin)、抗背侧化形态发生蛋白-1、抗雌激素剂、抗瘤酮(antineoplaston)、反义寡核苷酸、甘氨酸阿非迪霉素(aphidicolin glycinate)、凋亡基因调节剂、凋亡调控剂、无嘌呤核酸、ARA-CDP-DL-PTBA、精氨酸脱氨酶、天冬酰胺酶、曲林菌素(asperlin)、阿苏拉林(asulacrine)、阿他美坦(atamestane)、阿莫司汀(atrimustine)、阿西他汀1(axinastatin1)、阿西他汀2、阿西他汀3、阿扎胞苷(azacitidine)、阿扎司琼(azasetron)、阿扎毒素(azatoxin)、氮杂酪氨酸(azatyrosine)、阿扎替派(azetepa)、阿佐霉素(azotomycin)、浆果赤霉素(baccatin)III衍生物、巴览醇(balanol)、巴马司他(batimastat)、苯并二氢卟吩(benzochlorins)、苯佐替派(benzodepa)、苯甲酰基星状孢子素(benzoylstaurosporine)、β内酰胺衍生物、β-阿勒新(beta-alethine)、贝他克拉霉素B(betaclamycin B)、桦木酸(betulinic acid)、BFGF抑制剂、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、盐酸比生群(bisantrene hydrochloride)、双氮杂环丙烷基精胺(bisaziridinylspermine)、双奈法德(bisnafide)、二甲磺酸双奈法德(bisnafide dimesylate)、比曲特纳A(bistrateneA)、比折来新(bizelesin)、博来霉素(bleomycin)、硫酸博来霉素(bleomycin sulfate)、BRC/ABL拮抗剂、布里菲特(breflate)、布喹那钠(brequinar sodium)、溴匹立明(bropirimine)、布多替钛(budotitane)、白消安(busulfan)、丁硫氨酸硫酸亚胺(buthionine sulfoximine)、卡巴他赛(cabazitaxel)、放线菌素C(cactinomycin)、卡泊三醇(calcipotriol)、卡弗他丁C(calphostin C)、卡普睾酮(calusterone)、喜树碱(camptothecin)、喜树碱衍生物、金丝雀痘IL-2(canarypox IL-2)、卡培他滨(capecitabine)、卡醋胺(caracemide)、卡贝替姆(carbetimer)、卡铂(carboplatin)、甲酰胺-氨基-三唑、羧基酰胺基三唑、carest M3、卡莫司汀(carmustine)、earn700、软骨源性抑制剂、盐酸卡柔比星(carubicin hydrochloride)、卡折来新(carzelesin)、酪蛋白激酶抑制剂、粟精胺(castano spermine)、杀菌肽B(cecropin B)、西地芬戈(cedefingol)、西曲瑞克(cetrorelix)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、二氢卟吩(chlorin)、氯喹喔啉磺酰胺(chloroquinoxaline sulfonamide)、西卡前列素(cicaprost)、西罗霉素(cirolemycin)、顺铂(cisplatin)、顺式卟啉(cis-porphyrin)、克拉屈滨(cladribine)、氯米芬(clomifene)类似物、克霉唑(clotrimazole)、碰撞霉素A(collismycin A)、碰撞霉素B、考布他汀A4(combretastatin A4)、考布他汀类似物、克纳宁(conagenin)、甘蓝海绵素816(crambescidin 816)、克立那托(crisnatol)、甲磺酸克立那托(crisnatol mesylate)、念珠藻素8(cryptophycin 8)、念珠藻素A衍生物、库瑞辛A(curacin A)、环戊蒽醌(cyclopentanthraquinone)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环普拉坦(cycloplatam)、塞培霉素(cypemycin)、阿糖胞苷(cytarabine)、十八烷基磷酸阿糖胞苷(cytarabineocfosfate)、细胞溶解因子(cytolytic factor)、磷酸己烷雌酚(cytostatin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、达昔单抗(dacliximab)、更生霉素(dactinomycin)、盐酸柔红霉素(daunorubicin hydrochloride)、地西他滨(decitabine)、脱氢膜海鞘素B(dehydrodidemnin B)、地洛瑞林(deslorelin)、右异环磷酰胺(dexifosfamide)、右奥马铂(dexormaplatin)、右雷佐生(dexrazoxane)、右维拉帕米(dexverapamil)、地扎胍宁(dezaguanine)、甲磺酸地扎胍宁(dezaguanine mesylate)、地吖醌(diaziquone)、膜海鞘素B(didemnin B)、代多克斯(didox)、二乙基去甲精胺(diethylnorspermine)、二氢-5-氮杂胞苷、迪奥萨霉素(dioxamycin)、二苯基螺莫司汀(diphenyl spiromustine)、多西他赛(docetaxel)、二十二醇(docosanol)、多拉司琼(dolasetron)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、多柔比星(doxorubicin)、盐酸多柔比星(doxorubicinhydrochloride)、屈洛昔芬(droloxifene)、柠檬酸屈洛昔芬(droloxifene citrate)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、屈大麻酚(dronabinol)、达佐霉素(duazomycin)、倍癌霉素SA(duocarmycin SA)、依布硒(ebselen)、依考莫司汀(ecomustine)、依达曲沙(edatrexate)、依地福新(edelfosine)、依决洛单抗(edrecolomab)、依氟鸟氨酸(eflornithine)、盐酸依氟鸟氨酸(eflornithinehydrochloride)、榄香烯(elemene)、依沙芦星(elsamitrucin)、乙嘧替氟(emitefur)、恩洛铂(enloplatin)、恩普氨酯(enpromate)、依匹哌啶(epipropidine)、表柔比星(epirubicin)、盐酸表柔比星(epirubicin hydrochloride)、爱普列特(epristeride)、厄布洛唑(erbulozole)、红细胞基因疗法载体系统、盐酸依索比星(esorubicinhydrochloride)、雌氮芥(estramustine)、雌氮芥类似物、雌氮芥磷酸钠、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、依他硝唑(etanidazole)、依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷(etoposidephosphate)、氯苯乙嘧胺(etoprine)、依西美坦(exemestane)、法倔唑(fadrozole)、盐酸法倔唑(fadrozole hydrochloride)、法扎拉滨(fazarabine)、芬维A胺(fenretinide)、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺(finasteride)、黄酮吡醇(flavopiridol)、氟卓斯汀(flezelastine)、氟尿苷(floxuridine)、氟海星酮(fluasterone)、氟达拉滨(fludarabine)、磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)、盐酸氟代柔红霉素(fluorodaunorunicin hydrochloride)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟西他滨(flurocitabine)、福酚美克(forfenimex)、福美司坦(formestane)、磷喹酮(fosquidone)、福司曲星(fostriecin)、福司曲星钠(fostriecin sodium)、福莫司汀(fotemustine)、得克萨卟啉钆(gadolinium texaphyrin)、硝酸镓(gallium nitrate)、加洛他滨(galocitabine)、加尼瑞克(ganirelix)、明胶酶抑制剂(gelatinase inhibitor)、吉西他滨(gemcitabine)、盐酸吉西他滨(gemcitabine hydrochloride)、谷胱甘肽抑制剂(glutathione inhibitors)、亥舒凡(hepsulfam)、神经生长因子(heregulin)、六亚甲基双乙酰胺、羟基脲、金丝桃素(hypericin)、伊班膦酸(ibandronic acid)、伊达比星(idarubicin)、盐酸伊达比星(idarubicin 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hydrochloride)、莫法罗汀(mofarotene)、莫拉司亭(molgramostim)、单克隆抗体、人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin)、单磷酰基脂质a/分枝杆菌(myobacterium)细胞壁SK、莫哌达醇(mopidamol)、多药耐药基因抑制剂、基于多肿瘤抑制因子1的疗法、芥类抗癌剂、美卡普罗B(mycaperoxide B)、分支杆菌细胞壁提取物(mycobacterial cell wall extract)、霉酚酸(mycophenolic acid)、米利亚普隆(myriaporone)、n-乙酰基地那林(n-acetyldinaline)、那法瑞林(nafarelin)、那瑞替普(nagrestip)、纳洛酮/喷他佐辛(naloxone/pentazocine)、纳帕维(napavin)、萘萜二醇(naphterpin)、那托司亭(nartograstim)、奈达铂(nedaplatin)、奈莫柔比星(nemorubicin)、奈立膦酸(neridronic acid)、中性内肽酶(neutral endopeptidase)、尼鲁米特(nilutamide)、尼萨霉素(nisamycin)、一氧化氮调节剂、氮氧化物抗氧化剂、尼多林(nitrullyn)、诺考达唑(nocodazole)、诺加霉素(nogalamycin)、n-取代的苯甲酰胺、06-苄基鸟嘌呤、奥曲肽(octreotide)、奥可斯酮(okicenone)、寡核苷酸、奥那司酮(onapristone)、昂丹司琼(ondansetron)、奥莱辛(oracin)、口服细胞因子诱导剂、奥马铂(ormaplatin)、奥沙特隆(osaterone)、奥沙利铂(oxaliplatin)、奥克斯霉素(oxaunomycin)、奥昔舒伦(oxisuran)、紫杉醇(paclitaxel)、紫杉醇类似物、紫杉醇衍生物、帕劳胺(palauamine)、棕榈酰根霉素(palmitoylrhizoxin)、帕米膦酸(pamidronicacid)、人参炔三醇(panaxytriol)、帕诺米芬(panomifene)、副球菌素(parabactin)、帕折普汀(pazelliptine)、培门冬酶(pegaspargase)、培得星(peldesine)、佩里霉素(peliomycin)、戊氮芥(pentamustine)、木聚硫钠(pentosan polysulfate sodium)、喷司他汀(pentostatin)、喷托唑(pentrozole)、硫酸培洛霉素(peplomycin sulfate)、全氟溴烷(perflubron)、培磷酰胺(perfosfamide)、紫苏子醇(perillyl alcohol)、吩嗪霉素(phenazinomycin)、苯基乙酸酯/盐、磷酸酶抑制剂、溶血性链球菌制剂(picibanil)、盐酸毛果芸香碱、哌泊溴烷(pipobroman)、哌泊舒凡(piposulfan)、吡柔比星(pirarubicin)、吡曲克辛(piritrexim)、盐酸吡罗蒽醌(piroxantrone hydrochloride)、普拉色汀A(placetin A)、普拉色汀B、纤维蛋白溶酶原活化因子抑制剂(plasminogen activatorinhibitor)、铂(IV)络合物、铂化合物、铂-三胺络合物、普卡霉素(plicamycin)、普洛美坦(plomestane)、卟吩姆钠( sodium)、波非霉素(porfiromycin)、泼尼莫司汀(prednimustine)、盐酸丙卡巴肼(procarbazine hydrochloride)、丙基双吖啶酮、前列腺素J2(prostaglandin J2)、前列腺癌抗雄激素剂、蛋白酶体抑制剂、基于蛋白质A的免疫调节剂、蛋白质激酶C抑制剂、蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、嘌呤霉素(puromycin)、盐酸嘌呤霉素(puromycin hydrochloride)、紫红素(purpurins)、吡唑呋喃菌素(pyrazofurin)、吡唑并吖啶(pyrazoloacridine)、吡哆醛化血红蛋白聚氧乙烯缀合物、RAF拮抗剂、雷替曲塞(raltitrexed)、雷莫司琼(ramosetron)、RAS法尼基蛋白质转移酶抑制剂、RAS抑制剂、RAS-GAP抑制剂、脱甲基化瑞替普汀(retelliptine demethylated)、依替膦酸铼RE 186(rhenium RE 186etidronate)、根霉素(rhizoxin)、利波腺苷(riboprine)、核酶(robizymes)、RII维甲酰胺(RII retinamide)、RNAi、罗谷亚胺(rogletimide)、罗希吐碱(rohitukine)、罗莫肽(romurtide)、罗喹美克(roquinimex)、鲁比津酮Bl(rubiginone Bl)、鲁波克斯(ruboxyl)、沙芬戈(safingol)、盐酸沙芬戈(safingol hydrochloride)、沙因托品(saintopin)、萨克鲁(sarcnu)、肌肉叶绿醇A(sarcophytol A)、沙莫司亭(sargramostim)、SDI 1模拟物、司莫司汀(semustine)、衰老源性抑制剂1、有义寡核苷酸、siRNA、信号转导抑制剂、信号转导调节剂、辛曲秦(simtrazene)、单链抗原结合蛋白、西索菲兰(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、硼卡钠(sodium borocaptate)、苯基乙酸钠、索尔醇(solverol)、促生长因子结合蛋白(somatomedin binding protein)、索纳明(sonermin)、磷乙酰天冬氨酸钠(sparfosatesodium)、膦门冬酸(sparfosic acid)、司帕霉素(sparsomycin)、斯卡霉素D(spicamycinD)、盐酸锗螺胺(spirogermanium hydrochloride)、螺莫司汀(spiromustine)、螺铂(spiroplatin)、脾脏五肽(splenopentin)、海绵抑制素1(spongistatin 1)、角鲨胺(squalamine)、干细胞抑制剂、干细胞分裂抑制剂、斯提酰胺(stipiamide)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲霉素(streptozocin)、基质溶解素抑制剂(stromelysininhibitors)、萨菲诺辛(sulfinosine)、磺氯苯脲(sulofenur)、强效血管活性肠肽拮抗剂、苏拉迪塔(suradista)、舒拉明(suramin)、苦马豆碱(swainsonine)、合成糖胺聚糖、他利霉素(talisomycin)、他莫司汀(tallimustine)、甲碘化他莫昔芬(tamoxifen methiodide)、牛碘莫司汀(tauromustine)、他扎罗汀(tazarotene)、替可加兰钠(tecogalan sodium)、替加氟(tegafur)、碲吡喃(tellurapyrylium)、端粒酶抑制剂、盐酸替洛蒽醌(teloxantrone hydrochloride)、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、替罗昔隆(teroxirone)、睾内酯(testolactone)、十氧化四氯(tetrachlorodecaoxide)、四佐胺(tetrazomine)、厚果糖松草碱(thaliblastine)、沙利度胺(thalidomide)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、噻可拉林(thiocoraline)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、噻替派(thiotepa)、血小板生成素(thrombopoietin)、血小板生成素模拟物、胸腺法新(thymalfasin)、胸腺生成素受体激动剂(thymopoietin receptor agonist)、胸腺曲南(thymotrinan)、甲状腺刺激激素、噻唑呋林(tiazofurin)、本紫红素乙酯锡(tinethyl etiopurpurin)、替拉扎明(tirapazamine)、二氯化环戊二烯钛(titanocenedichloride)、盐酸托泊替康(topotecan hydrochloride)、拓扑森汀(topsentin)、托瑞米芬(toremifene)、柠檬酸托瑞米芬(toremifene citrate)、全能干细胞因子、翻译抑制剂、乙酸曲托龙(trestolone acetate)、维甲酸(tretinoin)、三乙酰基尿苷、曲西立滨(triciribine)、磷酸曲西立滨(triciribine phosphate)、三甲曲沙(trimetrexate)、葡糖醛酸三甲曲沙(trimetrexate glucuronate)、曲普瑞林(triptorelin)、托烷司琼(tropisetron)、盐酸妥布氯唑(tubulozole hydrochloride)、妥罗雄脲(turosteride)、酪氨酸激酶抑制剂、酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostins)、UBC抑制剂、乌苯美司(ubenimex)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、乌瑞替派(uredepa)、泌尿生殖窦源性生长抑制因子、尿激酶受体拮抗剂、伐普肽(vapreotide)、瓦立奥林B(variolin B)、维拉雷琐(velaresol)、藜芦明(veramine)、瓦尔丁(verdins)、维替泊芬(verteporfin)、硫酸长春碱、硫酸长春新碱(vincristine sulfate)、长春地辛(vindesine)、硫酸长春地辛(vindesine sulfate)、硫酸长春匹定(vinepidine sulfate)、硫酸长春甘酯(vinglycinate sulfate)、硫酸长春罗辛(vinleurosine sulfate)、长春瑞滨(vinorelbine)、酒石酸长春瑞滨(vinorelbinetartrate)、硫酸长春罗定(vinrosidine sulfate)、威科萨汀(vinxaltine)、硫酸长春利定(vinzolidine sulfate)、维塔辛(vitaxin)、伏氯唑(vorozole)、扎诺特隆(zanoterone)、折尼铂(zeniplatin)、亚苄维C(zilascorb)、净司他汀(zinostatin)、净司他汀斯酯(zinostatin stimalamer)或盐酸佐柔比星(zorubicin hydrochloride)。
在一些实施方案中，活性物质是小分子。在一些实施方案中，活性物质是小分子细胞毒素。在一个实施方案中，活性物质是卡巴他赛或其类似物、衍生物、前药或药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，活性物质是美坦新(DM1)或DM4，或其类似物、衍生物、前药或药学上可接受的盐。DM1或DM4通过与微管蛋白结合抑制微管组装。DM1的结构如下所示：
活性物质可为含有一个或多个金属中心的无机或有机金属化合物。在一些实例中，化合物含有一个金属中心。活性物质可为例如铂化合物、钌化合物(例如反式-[RuCl2(DMSO)4]或反式-[RuCl4(咪唑)2等)、钴化合物、铜化合物或铁化合物。
在某些实施方案中，缀合物的活性物质具有约1％至约10％、或约10％至约20％、或约20％至约30％、或约30％至约40％、或约40％至约50％、或约50％至约60％、或约60％至约70％、或约70％至约80％、或约80％至约90％、或约90％至约99％的预定摩尔重量百分比以使缀合物的组分的摩尔重量百分比的总和是100％。缀合物的活性物质的量也可用与靶向配体的比例表示。举例来说，本发明教导提供约10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10的活性物质与配体比率。
B.靶向部分
如本文所述的靶向配体(也称为靶向部分)包括可结合一种或多种SSTR(例如人SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4或SSTR5)的任何分子。此类靶向配体可为肽、抗体模拟物、核酸(例如适体)、多肽(例如抗体)、糖蛋白、小分子、碳水化合物或脂质。在一些实施方案中，靶向部分是生长激素抑制素或生长激素抑制素类似物。
本发明的细胞毒性或治疗性缀合物可采用结合生长激素抑制素受体的任何生长激素抑制素类似物。在一些实施方案中，缀合物的生长激素抑制素类似物部分含有8个至18个氨基酸，并且包括核心序列：环[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys]或环[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]。举例来说，类似物的C末端是Thr-NH2。
在一个实施方案中，靶向部分优选结合SSTR2。因此，包含靶向部分的缀合物优选结合SSTR2。缀合物与SSTR2的结合比缀合物与SSTR1、SSTR3、SSTR4或SSTR5的结合更强。
在一些实施方案中，如本文所述的缀合物具有低膜渗透性。顶端至基底侧方向和基底侧至顶端方向的膜渗透性可能都较低。不受任何理论束缚，低膜渗透性通过降低非特异性渗透性来增强SSTR的选择性摄取。低渗透性导致不表达SSTR2的细胞的摄取减少，导致对非SSTR2表达细胞的低毒性。膜渗透性可以通过本领域已知的任何方法来确定。例如，可以通过测量Caco-2单层中的表观渗透性(Papp)来确定。
在一些实施方案中，靶向部分X可选自生长激素抑制素、奥曲肽、兰瑞肽、镥氧奥曲肽(lutathera)(177Lu-DOTATATE)、90Y-DOTATOC、Tyr3-奥曲肽酸(Tyr3-octreotate)(TATE)、伐普肽、环(AA-Tyr-DTrp-Lys-Thr-Phe)(其中AA是α-N-Me赖氨酸或N-Me谷氨酸)、帕瑞肽(pasireotide)、兰瑞肽、司格列肽(seglitide)或生长激素抑制素受体结合配体的任何其他实例。在一些实施方案中，靶向部分是结合生长激素抑制素受体2和/或5的生长激素抑制素受体结合部分。在一些实施方案中，X在C末端结合连接体部分Y。在一些实施方案中，X在N末端结合连接体部分Y。在一些实施方案中，靶向部分X包含至少一个D-Phe残基，并且靶向部分X的D-Phe残基的苯环已被含连接体的部分置换。
本文描述了适用于本发明中的为肽的生长激素抑制素类似物的实例。适用的生长激素抑制素类似物的其他实例公开于以下阐述的出版物中，所述出版物各自据此以引用的方式整体并入本文：
PCT申请号WO 03/057214(2003)
美国申请号20030191134(2003)
美国申请号20030083241(2003)
美国专利号6,316,414(2001)
PCT申请号WO 02/10215(2002)
PCT申请号WO 99/22735(1999)
PCT申请号WO 98/08100(1998)
PCT申请号WO 98/44921(1998)
PCT申请号WO 98/45285(1998)
PCT申请号WO 98/44922(1998)
欧洲申请号P5164EU(发明人：G.Keri)；
Van Binst,G.等,Peptide Research,1992,5:8；
Horvath,A.等,摘要，“Conformations of Somatostatin Analogs HavingAntitumor Activity”，第22届欧洲肽专题论文集(22nd European peptide Symposium)，1992年9月13-19日，Interlaken，瑞士；
PCT申请号WO 91/09056(1991)；
欧洲申请号0 363 589 A2(1990)；
美国专利号4,904,642(1990)；
美国专利号4,871,717(1989)；
美国专利号4,853,371(1989)；
美国专利号4,725,577(1988)；
美国专利号4,684,620(1987)；
美国专利号4,650,787(1987)；
美国专利号4,603,120(1986)；
美国专利号4,585,755(1986)；
欧洲申请号0 203 031 A2(1986)；
美国专利号4,522,813(1985)；
美国专利号4,486,415(1984)；
美国专利号4,485,101(1984)；
美国专利号4,435,385(1984)；
美国专利号4,395,403(1983)；
美国专利号4,369,179(1983)；
美国专利号4,360,516(1982)；
美国专利号4,358,439(1982)；
美国专利号4,328,214(1982)；
美国专利号4,316,890(1982)；
美国专利号4,310,518(1982)；
美国专利号4,291,022(1981)；
美国专利号4,238,481(1980)；
美国专利号4,235,886(1980)；
美国专利号4,224,199(1980)；
美国专利号4,211,693(1980)；
美国专利号4,190,648(1980)；
美国专利号4,146,612(1979)；
美国专利号4,133,782(1979)；
美国专利号5,506,339(1996)；
美国专利号4,261,885(1981)；
美国专利号4,728,638(1988)；
美国专利号4,282,143(1981)；
美国专利号4,215,039(1980)；
美国专利号4,209,426(1980)；
美国专利号4,190,575(1980)；
欧洲专利号0 389 180(1990)；
欧洲申请号0 505 680(1982)；
欧洲申请号0 083 305(1982)；
欧洲申请号0 030 920(1980)；
PCT申请号WO 88/05052(1988)；
PCT申请号WO 90/12811(1990)；
PCT申请号WO 97/01579(1997)；
PCT申请号WO 91/18016(1991)；
英国申请号GB 2,095,261(1981)；
法国申请号FR 2,522,655(1983)；以及
PCT申请号WO 04/093807(2004)；
美国专利号5,620,955(1997)；
美国专利号5,723,578(1998)；
美国专利号5,843,903(1998)；
美国专利号5,877,277(1999)；
美国专利号6,156,725(2000)；
美国专利号6,307,017(2001)；
PCT申请号WO 90/03980(1990)；
PCT申请号WO 91/06563(1991)；
PCT申请号WO 91/17181(1991)；
PCT申请号WO 94/02018(1994)；
PCT申请号WO 94/21674(1994)；
PCT申请号WO 04/093807(2004)。
用于合成生长激素抑制素肽和类似物的方法被文献充分记载，并且在本领域普通技术人员的能力范围内，如上文列出的参考文献中所例示。其他合成程序在以下实例中提供。以下实例也说明用于合成本发明的靶向的细胞毒性化合物的方法。治疗剂或细胞毒性剂的特异性靶向性允许选择性地破坏表达对生物活性肽具有特异性的受体的肿瘤。举例来说，表达生长激素抑制素受体的肿瘤包括肺、乳腺、前列腺、结肠、脑、胃肠道、神经内分泌轴、肝或肾的赘生物(参见Schaer等,Int.J.Cancer,70:530-537,1997；Chave等,Br.J.Cancer 82(1):124-130,2000；Evans等,Br.J.Cancer 75(6):798-803,1997)。
在一些实施方案中，靶向部分具有治疗特征，例如靶向部分具有细胞毒性或抗血管生成性。在一些实施方案中，靶向部分对肿瘤脉管系统或血管生成血管(例如过度表达生长激素抑制素受体的那些)具有一定增加的亲和力(参见Denzler和Reubi,Cancer 85:188-198,1999；Gulec等,J.Surg.Res.97(2):131-137,2001；Woltering等,J.Surg.Res.50:245,1991)。
在一些实施方案中，本发明中使用的靶向部分(例如生长激素抑制素类似物)具有亲水性，并且因此可溶于水。在一些实施方案中，此类缀合物和含有此类缀合物的颗粒用于其中例如相较于包含疏水性类似物的缀合物，该特征是适用的治疗范式中。本文所述的亲水性类似物可溶于血液、脑脊髓液和其他体液中，以及可溶于尿中，这可促进通过肾排泄。该特征可适用于例如组合物将另外展现不期望的肝毒性的情况中。本发明也公开用于并入肽类似物中，从而允许调节类似物的亲水性以调整各种缀合的细胞毒性剂(例如下文的缀合物6)的化学和结构性质的特定亲水性要素(例如并入PEG连接体和本领域中的其他实例)。
在一些实施方案中，靶向部分是抗体模拟物，诸如单抗体(monobody)，例如ADNECTINTM(Bristol-Myers Squibb,New York,New York)、(Affibody AB,Stockholm,瑞典)、Affilin、nanofitin(affitin，诸如WO 2012/085861中所述的那些)、AnticalinTM、高亲合性多聚体(avimer)(亲合力多聚体)、DARPinTM、FynomerTM、CentyrinTM和库尼茨(Kunitz)结构域肽。在某些情况下，此类模拟物是具有约3至20kDa的摩尔质量的人工肽或蛋白质。核酸和小分子可为抗体模拟物。
在另一实例中，靶向部分可为适体，其通常是结合诸如多肽的特定靶标的寡核苷酸(例如DNA、RNA或其类似物或衍生物)。在一些实施方案中，靶向部分是多肽(例如可特异性结合肿瘤标志物的抗体)。在某些实施方案中，靶向部分是抗体或其片段。在某些实施方案中，靶向部分是抗体的Fc片段。
在某些实施方案中，缀合物的一个或多个靶向部分以约0.1％至约10％、或约1％至约10％、或约10％至约20％、或约20％至约30％、或约30％至约40％、或约40％至约50％、或约50％至约60％、或约60％至约70％、或约70％至约80％、或约80％至约90％、或约90％至约99％的预定摩尔重量百分比存在，以使缀合物的组分的摩尔重量百分比的总和是100％。缀合物的靶向部分的量也可用与活性物质的比例表示，例如以约10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10的配体与活性物质比率表示。
C.连接体
缀合物含有连接活性物质和靶向部分的一个或多个连接体。连接体Y结合于一个或多个活性物质和一个或多个靶向配体以形成缀合物。连接体Y通过独立地选自酯键、二硫化物、酰胺、酰腙、醚、氨基甲酸酯、碳酸酯和脲的官能团连接至靶向部分X和活性物质Z。或者，连接体可通过诸如通过硫醇与马来酰亚胺、叠氮化物与炔之间的缀合提供的非可裂解基团连接至靶向配体或活性药物。连接体独立地选自：烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、烯基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选被一个或多个基团取代，每个基团独立地选自：卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基甲酰基、醚、烷氧基、芳基氧基、氨基、酰胺、氨基甲酸酯、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、杂芳基、杂环基，其中所述羧基、氨基甲酰基、醚、烷氧基、芳基氧基、氨基、酰胺、氨基甲酸酯、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、杂芳基或杂环基各自任选被一个或多个基团取代，每个基团独立地选自：卤素、氰基、硝基、羟基、羧基、氨基甲酰基、醚、烷氧基、芳基氧基、氨基、酰胺、氨基甲酸酯、烷基、烯基、炔基、芳基、芳基烷基、环烷基、杂芳基、杂环基。
在一些实施方案中，连接体包含可裂解的可裂解官能团。可裂解官能团可在体内水解，或可被设计成例如通过组织蛋白酶B以酶促方式水解。如本文所用的“可裂解”连接体是指可物理或化学裂解的任何连接体。物理裂解的实例可为通过光、放射性发射或热来裂解，而化学裂解的实例包括通过氧化还原反应来裂解、水解、pH依赖性裂解或通过酶来裂解。
在一些实施方案中，连接体的烷基链可任选被一个或多个选自–O-、-C(＝O)-、-NR、-O-C(＝O)-NR-、-S-、-S-S-的原子或基团中断。连接体可选自琥珀酸、戊二酸或二乙醇酸的二羧酸酯衍生物。在一些实施方案中，连接体Y可为X’-R1-Y’-R2-Z’，并且缀合物可为根据式Ia的化合物：
其中X是上文定义的靶向部分；Z是活性物质；X’、R1、Y’、R2和Z’如本文所定义。
X’为不存在或独立地选自羰基、酰胺、脲、氨基、酯、芳基、芳基羰基、芳基氧基、芳基氨基、一种或多种天然或非天然氨基酸、硫基或琥珀酰亚胺基；R1和R2为不存在或包含烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、聚乙二醇(2-30个单元)；Y’为不存在，或为取代或未取代的1,2-二氨基乙烷、聚乙二醇(2-30个单元)或酰胺；Z’为不存在或独立地选自羰基、酰胺、脲、氨基、酯、芳基、芳基羰基、芳基氧基、芳基氨基、硫基或琥珀酰亚胺基。在一些实施方案中，连接体可使一个活性物质分子连接至两个或更多个配体，或一个配体连接至两个或更多个活性物质分子。
在一些实施方案中，连接体Y可为Am，并且缀合物可为根据式Ib的化合物：
其中A在本文中定义，m＝0-20。
式Ia中的A是间隔基单元，其为不存在或独立地选自以下取代基。对于每个取代基，虚线表示被X、Z或另一独立选择的A单元取代的位点，其中X、Z或A可连接在取代基的任一侧上：
其中z＝0-40，R是H或任选取代的烷基，并且R’是存在于天然或非天然氨基酸中的任何侧链。
在一些实施方案中，缀合物可为根据式Ic的化合物：
其中A在上文中定义，m＝0-40，n＝0-40，x＝1-5，y＝1-5，并且C是本文定义的分支要素。
式Ic中的C是含有3至6个用于共价连接间隔基单元、配体或活性药物的官能团的分支单元，所述官能团选自胺、羧酸、硫醇或琥珀酰亚胺，包括氨基酸，诸如赖氨酸、2,3-二氨基丙酸、2,4-二氨基丁酸、谷氨酸、天冬氨酸和半胱氨酸。
本发明的缀合物的非限制性实例包括以下化合物：
在一些实施方案中，活性物质Z是DM1，且生长激素抑制素受体结合剂X选自生长激素抑制素、环(AA-Tyr-DTrp-Lys-Thr-Phe)、伐普肽或TATE。在一些实施方案中，DM1用连接体Y连接至X的C末端。在一些实施方案中，DM1用连接体Y连接至X的N末端。在一些实施方案中，DM1用连接体Y连接至X，其中靶向部分X包含至少一个D-Phe残基，并且D-Phe残基的苯环已被含有连接体Y的基团置换。
包含DM1的缀合物(被称为本发明的DM1缀合物)的非限制性实例包括以下化合物：
1)基于环(AA-Tyr-DTrp-Lys-Thr-Phe)的DM1缀合物
在一些实施方案中，环(AA-Tyr-DTrp-Lys-Thr-Phe)用作生长激素抑制素受体靶向部分，并且缀合物具有以下通式结构：
在一些实施方案中，靶向部分含有能够形成酰胺键的氨基酸。在一些实施方案中，连接体经由酰胺键，即–NH-CO-或–CO-NH-(氮上的氢可被取代)结合于靶向部分。在一些实施方案中，连接体不经由酰胺键结合于靶向部分。在一些实施方案中，连接体包括酰胺键，即–NH-CO-或–CO-NH-(氮上的氢可被取代)。
包含环(AA-Tyr-DTrp-Lys-Thr-Phe)和DM1的缀合物的非限制性实例显示在2015年6月30日提交的PCT申请号PCT/US15/38569(WO2016/004048)的表1中，该申请的内容通过引用并入本文。
2)C末端DM1缀合物：
在一些实施方案中，生长激素抑制素受体靶向部分是肽，并且连接体结合于生长激素抑制素受体靶向部分的C末端。在一些实施方案中，生长激素抑制素受体靶向部分是TATE或TATE衍生物，其中连接体结合于TATE或TATE衍生物的C末端，称为基于C末端TATE的DM1缀合物。C末端DM1缀合物具有以下通式结构：
其中R选自H、烷基、芳基、羰基、酰胺、醇或胺，任选被一个或多个基团取代；并且
Ar1和Ar2独立地选自任选被一个或多个基团取代的杂环基、芳基和杂芳基。
在一些实施方案中，连接连接体和生长激素抑制素受体靶向部分的C末端的共价键是酰胺键。
其中连接体结合于生长激素抑制素受体靶向部分的C末端的DM1缀合物(其中生长激素抑制素受体靶向部分是TATE)的非限制性实例显示于2015年6月30日提交的PCT申请号PCT/US15/38569(WO2016/004048)(其内容通过引用并入本文)的表2中。
在一些实施方案中，缀合物是缀合物57。
3)N-末端DM1缀合物
在一些实施方案中，生长激素抑制素受体靶向部分是肽，并且连接体结合于生长激素抑制素受体靶向部分的N末端。在一些实施方案中，靶向部分选自奥曲肽、伐普肽和TATE。在一些实施方案中，连接连接体和生长激素抑制素受体靶向部分的N末端的共价键是酰胺键，即-NH-CO-。在一些实施方案中，连接体经由胺键(即-NH-CH2-(碳上的氢可被取代))结合于生长激素抑制素受体靶向部分的N末端。在一些实施方案中，连接体经由脲键(即–NH-CO-NH-)结合于生长激素抑制素受体靶向部分的N末端。N末端DM1缀合物具有以下通式结构：
其中R1和R2独立地选自H、OH、烷基、芳基、羰基、酯、酰胺、醚、醇或胺，任选被一个或多个基团取代；并且Ar1选自任选被一个或多个基团取代的杂环基、芳基和杂芳基。在一些实施方案中，R1或R2中的至少一个包含DM1。
其中连接体结合于生长激素抑制素受体靶向部分的N末端的DM1缀合物的非限制性实例显示于2015年6月30日提交的PCT申请号PCT/US15/38569(WO2016/004048)(其内容通过引用并入本文)的表3中。
4)D-Phe置换DM1缀合物
在一些实施方案中，生长激素抑制素受体靶向部分是诸如奥曲肽或TATE的靶向配体，其中所述靶向配体的D-Phe残基的苯基环已被含连接体的部分置换。D-Phe置换DM1缀合物具有以下通式结构：
其中R选自H、OH、烷基、芳基、羰基、酯、酰胺、醚、醇或胺，任选被一个或多个基团取代。在一些实施方案中，R包含DM1。
其中所述靶向配体的D-Phe残基的苯基环已被含连接体的部分置换的DM1缀合物的非限制性实例显示于2015年6月30日提交的PCT申请号PCT/US15/38569(WO2016/004048)(其内容通过引用并入本文)的表4中。
II.颗粒
含有一种或多种缀合物的颗粒可为聚合颗粒、脂质颗粒、固体脂质颗粒、无机颗粒或其组合(例如脂质稳定化聚合颗粒)。在一些实施方案中，颗粒是聚合颗粒或含有聚合基质。颗粒可含有本文所述的任何聚合物或其衍生物或共聚物。颗粒通常含有一种或多种生物可相容聚合物。聚合物可为生物可降解聚合物。聚合物可为疏水性聚合物、亲水性聚合物或两亲性聚合物。在一些实施方案中，颗粒含有具有与其连接的额外靶向部分的一种或多种聚合物。
可针对预期应用调整颗粒的尺寸。颗粒可为纳米颗粒或微米颗粒。颗粒可具有约10nm至约10微米、约10nm至约1微米、约10nm至约500nm、约20nm至约500nm、或约25nm至约250nm的直径。在一些实施方案中，颗粒是具有约25nm至约250nm的直径的纳米颗粒。本领域技术人员应了解，多个颗粒将具有一定范围的尺寸，并且直径应理解为颗粒尺寸分布的中位直径。
在各种实施方案中，颗粒可为纳米颗粒，即颗粒具有小于约1微米的特征性尺寸，其中颗粒的特征性尺寸是与所述颗粒具有相同体积的完美球体的直径。多个颗粒可通过平均直径(例如多个颗粒的平均直径)来表征。在一些实施方案中，颗粒的直径可具有高斯型(Gaussian-type)分布。在一些实施方案中，多个颗粒具有小于约300nm、小于约250nm、小于约200nm、小于约150nm、小于约100nm、小于约50nm、小于约30nm、小于约10nm、小于约3nm或小于约1nm的平均直径。在一些实施方案中，颗粒具有至少约5nm、至少约10nm、至少约30nm、至少约50nm、至少约100nm、至少约150nm或更大的平均直径。在某些实施方案中，多个颗粒具有约10nm、约25nm、约50nm、约100nm、约150nm、约200nm、约250nm、约300nm、约500nm等的平均直径。在一些实施方案中，多个颗粒具有约10nm至约500nm、约50nm至约400nm、约100nm至约300nm、约150nm至约250nm、约175nm至约225nm等的平均直径。在一些实施方案中，多个颗粒具有约10nm至约500nm、约20nm至约400nm、约30nm至约300nm、约40nm至约200nm、约50nm至约175nm、约60nm至约150nm、约70nm至约130nm等的平均直径。举例来说，平均直径可为约70nm至130nm。在一些实施方案中，多个颗粒具有约20nm至约220nm、约30nm至约200nm、约40nm至约180nm、约50nm至约170nm、约60nm至约150nm、或约70nm至约130nm的平均直径。在一个实施方案中，颗粒具有40至120nm的尺寸，具有在低至零离子强度(1至10mM)下接近于0mV的ζ电位，具有+5至–5mV的ζ电位值，以及零/中性或小–ve表面电荷。
A.缀合物
颗粒含有一种或多种如上所述的缀合物。缀合物可存在于颗粒的内部上、颗粒的外部上或这两者。颗粒可包含由上文描述的一种或多种缀合物和反离子形成的疏水性离子配对复合物或疏水性离子对。
疏水性离子配对(HIP)是通过库仑引力(Coulombic attraction)固持在一起的一对带相反电荷的离子之间的相互作用。如本文所用的HIP是指本发明的缀合物与它的反离子之间的相互作用，其中反离子不是H+或HO-离子。如本文所用的疏水性离子配对复合物或疏水性离子对是指由本发明的缀合物和它的反离子形成的复合物。在一些实施方案中，反离子具有疏水性。在一些实施方案中，反离子由疏水性酸或疏水性酸的盐提供。在一些实施方案中，反离子由胆酸或盐、脂肪酸或盐、脂质或氨基酸提供。在一些实施方案中，反离子带负电荷(阴离子)。带负电荷的反离子的非限制性实例包括反离子磺基琥珀酸钠(AOT)、油酸钠、十二烷基硫酸钠(SDS)、人血清白蛋白(HSA)、硫酸葡聚糖、脱氧胆酸钠、胆酸钠、阴离子脂质、氨基酸或其任何组合。在不希望受任何理论束缚下，在一些实施方案中，HIP可增加本发明缀合物的疏水性和/或亲脂性。在一些实施方案中，增加本发明缀合物的疏水性和/或亲脂性可有益于颗粒制剂，并且可提供本发明缀合物在有机溶剂中的更高溶解度。在不希望受任何理论束缚下，据信包括HIP对的颗粒制剂具有改善的配制性质，诸如载药量和/或释放特性。在不希望受任何理论束缚下，在一些实施方案中，本发明缀合物从颗粒缓慢释放可由于缀合物在水溶液中的溶解度降低而发生。此外，在不希望受任何理论束缚下，使缀合物与大的疏水性反离子复合可减缓缀合物在聚合基质内的扩散。在一些实施方案中，在无需反离子共价缀合于本发明缀合物的情况下发生HIP。
在不希望受任何理论束缚下，HIP的强度可影响本发明颗粒的载药量和释放速率。在一些实施方案中，可通过增加本发明缀合物的pKa与提供反离子的药剂的pKa之间的差值大小来增加HIP的强度。而且，在不希望受任何理论束缚下，用于形成离子对的条件可影响本发明颗粒的载药量和释放速率。
在一些实施方案中，任何适合的疏水性酸或其组合都可与本发明缀合物形成HIP对。在一些实施方案中，疏水性酸可为羧酸(诸如但不限于单羧酸、二羧酸、三羧酸)、亚磺酸、次磺酸或磺酸。在一些实施方案中，适合的疏水性酸的盐或其组合可用于与本发明缀合物形成HIP对。疏水性酸、饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、芳族酸、胆酸、聚电解质的实例、它们在水中的解离常数(pKa)和logP值公开于WO2014/043,625中，该申请的内容通过引用的方式整体并入本文。疏水性酸的强度、疏水性酸的pKa与本发明缀合物的pKa之间的差值、疏水性酸的logP、疏水性酸的相转变温度、疏水性酸与本发明缀合物的摩尔比以及疏水性酸的浓度也公开于WO2014/043,625中，该申请的内容通过引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，相比于无HIP复合物或通过不提供任何反离子以与缀合物形成HIP复合物的方法制备的颗粒，包含HIP复合物和/或通过提供反离子以与缀合物形成HIP复合物的方法制备的本发明颗粒可具有更高的载药量。在一些实施方案中，载药量可增加50％、100％、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
在一些实施方案中，当在37℃下放置在磷酸盐缓冲溶液中时，本发明颗粒可保持缀合物至少约1分钟、至少约15分钟、至少约1小时。
在一些实施方案中，颗粒中的缀合物的重量百分比是至少约0.05％、0.1％、0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％以使颗粒的组分的重量百分比的总和是100％。在一些实施方案中，颗粒中的缀合物的重量百分比是约0.5％至约10％、或约10％至约20％、或约20％至约30％、或约30％至约40％、或约40％至约50％、或约50％至约60％、或约60％至约70％、或约70％至约80％、或约80％至约90％、或约90％至约99％以使颗粒的组分的重量百分比的总和是100％。
在一些情况下，缀合物可具有小于约50,000Da、小于约40,000Da、小于约30,000Da、小于约20,000Da、小于约15,000Da、小于约10,000Da、小于约8,000Da、小于约5,000Da、或小于约3,000Da的分子量。在一些情况下，缀合物可具有约1,000Da至约50,000Da的分子量，具有约1,000Da至约40,000Da的分子量，在一些实施方案中具有约1,000Da至约30,000Da的分子量，在一些实施方案中具有约1,000Da至约50,000Da、约1,000Da至约20,000Da的分子量，在一些实施方案中具有约1,000Da至约15,000Da的分子量，在一些实施方案中具有约1,000Da至约10,000Da的分子量，在一些实施方案中具有约1,000Da至约8,000Da的分子量，在一些实施方案中具有约1,000Da至约5,000Da的分子量，以及在一些实施方案中具有约1,000Da至约3,000Da的分子量。缀合物的分子量可计算为缀合物的结构式中每个原子的原子量乘以每个原子的数目的总和。它也可通过质谱测定法、NMR、色谱法、光散射、粘度和/或本领域中已知的任何其他方法来测量。本领域中已知分子量的单位可为g/mol、道尔顿(Da)或原子质量单位(amu)，其中1g/mol＝1Da＝1amu。
B.聚合物
颗粒可含有一种或多种聚合物。聚合物可含有一种或多种以下聚酯：包括乙醇酸单元的均聚物，在本文中称为“PGA”；和包括乳酸单元的均聚物，诸如聚L-乳酸、聚D-乳酸、聚D,L-乳酸、聚L-丙交酯、聚D-丙交酯和聚D,L-丙交酯，在本文中统称为“PLA”；和包括己内酯单元的均聚物，诸如聚(ε-己内酯)，在本文中统称为“PCL”；和包括乳酸和乙醇酸单元的共聚物，诸如通过乳酸:乙醇酸的比率来表征的各种形式的聚(乳酸-共-乙醇酸)和聚(丙交酯-共-乙交酯)，在本文中统称为“PLGA”；和聚丙烯酸酯，及其衍生物。示例性聚合物也包括聚乙二醇(PEG)和以上提及的聚酯的共聚物，诸如各种形式的PLGA-PEG或PLA-PEG共聚物，在本文中统称为“聚乙二醇化聚合物”。在某些实施方案中，PEG区域可通过可裂解连接体与聚合物共价缔合以产生“聚乙二醇化聚合物”。
颗粒可含有一种或多种亲水性聚合物。亲水性聚合物包括纤维素聚合物，诸如淀粉和多糖；亲水性多肽；聚(氨基酸)，诸如聚L-谷氨酸(PGS)、γ-聚谷氨酸、聚L-天冬氨酸、聚L-丝氨酸或聚L-赖氨酸；聚亚烷基二醇和聚环氧烷，诸如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)和聚(环氧乙烷)(PEO)；聚(氧乙基化多元醇)；聚(烯醇)；聚乙烯吡咯烷酮；聚(羟基烷基甲基丙烯酰胺)；聚(羟基烷基甲基丙烯酸酯)；聚(糖)；聚(羟基酸)；聚(乙烯醇)；聚唑啉；及其共聚物。
颗粒可含有一种或多种疏水性聚合物。适合的疏水性聚合物的实例包括聚羟基酸，诸如聚(乳酸)、聚(乙醇酸)和聚(乳酸-共-乙醇酸)；聚羟基链烷酸酯，诸如聚3-羟基丁酸酯或聚4-羟基丁酸酯；聚己内酯；聚(原酸酯)；聚酐；聚(磷腈)；聚(丙交酯-共-己内酯)；聚碳酸酯，诸如酪氨酸聚碳酸酯；聚酰胺(包括合成和天然聚酰胺)、多肽和聚(氨基酸)；聚酯酰胺；聚酯；聚(二氧杂环己酮)(poly(dioxanones))；聚(亚烷基烷基化物)；疏水性聚醚；聚氨基甲酸酯；聚醚酯；聚缩醛；聚氰基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；聚甲基丙烯酸甲酯；聚硅氧烷；聚(氧基乙烯)/聚(氧基丙烯)共聚物；聚缩酮；聚磷酸酯；聚羟基戊酸酯；聚亚烷基草酸酯；聚亚烷基琥珀酸酯；聚(马来酸)，以及其共聚物。
在某些实施方案中，疏水性聚合物是脂族聚酯。在一些实施方案中，疏水性聚合物是聚(乳酸)、聚(乙醇酸)或聚(乳酸-共-乙醇酸)。
颗粒可含有一种或多种生物可降解聚合物。生物可降解聚合物可包括不溶于或微溶于水中的聚合物，所述聚合物在体内化学或酶促转化成水溶性物质。生物可降解聚合物可包括通过可水解交联基团交联以致使交联聚合物不溶于或微溶于水中的可溶性聚合物。
颗粒中的生物可降解聚合物可包括聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烃、聚亚烷基二醇、聚环氧烷、聚亚烷基对苯二甲酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯卤化物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙交酯、聚硅氧烷、聚氨基甲酸酯及其共聚物、烷基纤维素(诸如甲基纤维素和乙基纤维素)、羟基烷基纤维素(诸如羟丙基纤维素、羟基-丙基甲基纤维素和羟丁基甲基纤维素)、纤维素醚、纤维素酯、硝基纤维素、乙酸纤维素、丙酸纤维素、乙酸丁酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、羧乙基纤维素、三乙酸纤维素、硫酸纤维素钠盐、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的聚合物(诸如聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)、聚(丙烯酸十八烷基酯))、聚乙烯、聚丙烯、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(对苯二甲酸乙二酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙酸乙烯酯)、聚氯乙烯聚苯乙烯和聚乙烯吡酪烷酮、其衍生物、其线性和分支共聚物以及嵌段共聚物，及其共混物。示例性生物可降解聚合物包括聚酯、聚(原酸酯)、聚(乙烯亚胺)、聚(己内酯)、聚(羟基链烷酸酯)、聚(羟基戊酸酯)、聚酐、聚(丙烯酸)、聚乙交酯、聚(氨基甲酸酯)、聚碳酸酯、聚磷酸酯、聚磷腈、其衍生物、其线性和分支共聚物以及嵌段共聚物，及其共混物。在一些实施方案中，颗粒含有生物可降解聚酯或聚酐，诸如聚(乳酸)、聚(乙醇酸)和聚(乳酸-共-乙醇酸)。
颗粒可含有一种或多种两亲性聚合物。两亲性聚合物可为含有疏水性聚合物嵌段和亲水性聚合物嵌段的聚合物。疏水性聚合物嵌段可含有一种或多种上述疏水性聚合物或其衍生物或共聚物。亲水性聚合物嵌段可含有一种或多种上述亲水性聚合物或其衍生物或共聚物。在一些实施方案中，两亲性聚合物是含有由疏水性聚合物形成的疏水性末端和由亲水性聚合物形成的亲水性末端的二嵌段聚合物。在一些实施方案中，部分可连接至疏水性末端、亲水性末端或这两者。颗粒可含有两种或更多种两亲性聚合物。
C.脂质
颗粒可含有一种或多种脂质或两亲性化合物。举例来说，颗粒可为脂质体、脂质胶束、固体脂质颗粒或脂质稳定化聚合颗粒。脂质颗粒可由一种脂质或不同脂质的混合物制得。脂质颗粒由在生理pH下可为中性、阴离子或阳离子的一种或多种脂质形成。在一些实施方案中，脂质颗粒并入有一种或多种生物可相容脂质。可使用超过一种脂质的组合来形成脂质颗粒。举例来说，可使带电荷的脂质与在生理pH下是非离子或不带电荷的脂质组合。
颗粒可为脂质胶束。用于药物递送的脂质胶束在本领域中是已知的。脂质胶束可例如与脂质表面活性剂形成为油包水乳液。乳液是两个不混溶相的掺合物，其中添加表面活性剂以使分散的液滴稳定。在一些实施方案中，脂质胶束是微乳液。微乳液是由至少水、油和脂质表面活性剂组成的热力学稳定体系，产生液滴尺寸为小于1微米、约10nm至约500nm、或约10nm至约250nm的透明和热力学稳定体系。脂质胶束通常适用于包封疏水性活性物质，包括疏水性治疗剂、疏水性预防剂或疏水性诊断剂。
颗粒可为脂质体。脂质体是由被以球形双层形式排列的脂质所围绕的水性介质组成的小囊泡。脂质体可分类为小单层囊泡、大单层囊泡或多层囊泡。多层脂质体含有多个同心脂质双层。脂质体可用于通过将亲水性物质俘获在水性内部中或双层之间，或通过将疏水性物质俘获在双层内来包封物质。
脂质胶束和脂质体通常具有水性中心。水性中心可含有水或水和醇的混合物。适合的醇包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇(诸如异丙醇)、丁醇(诸如正丁醇、异丁醇、仲丁醇、叔丁醇)、戊醇(诸如戊醇、异丁基甲醇)、己醇(诸如1-己醇、2-己醇、3-己醇)、庚醇(诸如1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇和4-庚醇)或辛醇(诸如1-辛醇)或其组合。
颗粒可为固体脂质颗粒。固体脂质颗粒呈现为胶体胶束和脂质体的一种替代物。固体脂质颗粒在尺寸方面通常是亚微米，即约10nm至约1微米、10nm至约500nm、或10nm至约250nm。固体脂质颗粒由在室温下是固体的脂质形成。它们是通过用固体脂质替换液体油由水包油乳液产生。
适合的中性和阴离子脂质包括但不限于固醇和脂质，诸如胆固醇、磷脂、溶血脂质、溶血磷脂、鞘脂或聚乙二醇化脂质。中性和阴离子脂质包括但不限于磷脂酰胆碱(PC)(诸如卵PC、大豆PC)，包括1,2-二酰基-甘油基-3-磷酸胆碱；磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇(PI)；糖脂；鞘氨醇磷脂(sphingophospholipid)，诸如鞘磷脂(sphingomyelin)和鞘糖脂(sphingoglycolipid)(也称为1-神经酰胺基糖苷)，诸如神经酰胺吡喃半乳糖苷、神经节苷脂和脑苷脂；脂肪酸、含有羧酸基团的固醇，例如胆固醇；1,2-二酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺，包括但不限于1,2-二油烯基磷酸乙醇胺(DOPE)、1,2-二(十六烷基)磷酸乙醇胺(DHPE)、1,2-二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、1,2-二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)和1,2-二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)。脂质也可包括脂质的各种天然(例如组织源性L-α-磷脂酰：蛋黄、心脏、脑、肝、大豆)和/或合成(例如饱和和不饱和的1,2-二酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1-酰基-2-酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1,2-二庚酰基-SN-甘油基-3-磷酸胆碱)衍生物。
适合的阳离子脂质包括但不限于N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基铵盐，也称为TAP脂质，例如甲基硫酸盐。适合的TAP脂质包括但不限于DOTAP(二油酰基-)、DMTAP(二肉豆蔻酰基-)、DPTAP(二棕榈酰基-)和DSTAP(二硬脂酰基-)。脂质体中的适合的阳离子脂质包括但不限于二甲基二(十八烷基)溴化铵(DDAB)、1,2-二酰基氧基-3-三甲基铵丙烷、N-[1-(2,3-二油酰基氧基)丙基]-Ν,Ν-二甲基胺(DODAP)、1,2-二酰基氧基-3-二甲基铵丙烷、N-[1-(2,3-二油烯基氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)、1,2-二烷基氧基-3-二甲基铵丙烷、二(十八烷基)酰胺基甘氨酰基精胺(DOGS)、3-[N-(N',N'-二甲基氨基-乙烷)氨基甲酰基]胆固醇(DC-Chol)；2,3-二油酰基氧基-N-(2-(精胺甲酰胺基)-乙基)-N,N-二甲基-1-丙铵三氟乙酸盐(DOSPA)、β-丙氨酰基胆固醇、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二C14-脒、N-叔丁基-N'-十四烷基-3-十四烷基氨基-丙脒、N-(α-三甲基铵基乙酰基)双十二烷基-D-谷氨酸酯氯化物(TMAG)、二(十四酰基)-N-(三甲基铵基-乙酰基)二乙醇胺氯化物、1,3-二油酰基氧基-2-(6-羧基-精胺基)-丙基酰胺(DOSPER)和N,N,N',N'-四甲基-,N'-双(2-羟基乙基)-2,3-二油酰基氧基-1,4-丁烷二铵碘化物。在一个实施方案中，阳离子脂质可为1-[2-(酰基氧基)乙基]2-烷基(烯基)-3-(2-羟基乙基)-咪唑啉氯化物衍生物，例如1-[2-(9(Z)-十八烯酰基氧基)乙基]-2-(8(Z)-十七烯基-3-(2-羟基乙基)咪唑啉氯化物(DOTIM)和1-[2-(十六酰基氧基)乙基]-2-十五烷基-3-(2-羟基乙基)咪唑啉氯化物(DPTIM)。在一个实施方案中，阳离子脂质可为在季胺上含有羟基烷基部分的2,3-二烷基氧基丙基季铵化合物衍生物，例如1,2-二油酰基-3-二甲基-羟基乙基溴化铵(DORI)、1,2-二油烯基氧基丙基-3-二甲基-羟基乙基溴化铵(DORIE)、1,2-二油烯基氧基丙基-3-二甲基-羟基丙基溴化铵(DORIE-HP)、1,2-二油烯基-氧基-丙基-3-二甲基-羟基丁基溴化铵(DORIE-HB)、1,2-二油烯基氧基丙基-3-二甲基-羟基戊基溴化铵(DORIE-Hpe)、1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-二甲基-羟基乙基溴化铵(DMRIE)、1,2-二棕榈基氧基丙基-3-二甲基-羟基乙基溴化铵(DPRIE)和1,2-二硬脂基氧基丙基-3-二甲基-羟基乙基溴化铵(DSRIE)。
适合的固体脂质包括但不限于高级饱和醇、高级脂肪酸、鞘脂、合成酯以及高级饱和脂肪酸的甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。固体脂质可包括具有10-40个(例如12-30个)碳原子的脂族醇，诸如鲸蜡硬脂醇。固体脂质可包括具有10-40个(例如12-30个)碳原子的高级脂肪酸，诸如硬脂酸、棕榈酸、癸酸和山嵛酸。固体脂质可包括具有10-40个(例如12-30个)碳原子的高级饱和脂肪酸的甘油酯，包括甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯，诸如单硬脂酸甘油酯、甘油山嵛酸酯、甘油棕榈酰硬脂酸酯、甘油三月桂酸酯、三癸酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯和氢化蓖麻油。适合的固体脂质可包括棕榈酸鲸蜡酯、蜂蜡或环糊精。
两亲性化合物包括但不限于以0.01-60(脂质重量/聚合物重量)(例如0.1-30(脂质重量/聚合物重量))的比率并入的磷脂，诸如1,2二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二花生酰基磷脂酰胆碱(DAPC)、二山嵛酰基磷脂酰胆碱(DBPC)、二(二十三酰基)磷脂酰胆碱(DTPC)和二(二十四酰基)磷脂酰胆碱(DLPC)。可使用的磷脂包括但不限于磷脂酸、具有饱和脂质与不饱和脂质两者的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰衍生物、心磷脂和β-酰基-y-烷基磷脂。磷脂的实例包括但不限于磷脂酰胆碱，诸如二油酰基磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱、二(十五酰基)磷脂酰胆碱、二月桂酰基磷脂酰胆碱、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二花生酰基磷脂酰胆碱(DAPC)、二山嵛酰基磷脂酰胆碱(DBPC)、二(二十三酰基)磷脂酰胆碱(DTPC)、二(二十四酰基)磷脂酰胆碱(DLPC)；以及磷脂酰乙醇胺，诸如二油酰基磷脂酰乙醇胺或1-十六烷基-2-棕榈酰基甘油基磷酸乙醇胺。也可使用具有不对称酰基链(例如具有一个含6个碳的酰基链和另一个含12个碳的酰基链)的合成磷脂。
D.额外的活性物质
除缀合物中的那些之外，颗粒可含有一种或多种额外的活性物质。额外的活性物质可为如上所列的治疗剂、预防剂、诊断剂或营养剂。基于颗粒的重量，额外的活性物质可以任何量存在，例如约0.5％至约90％、约0.5％至约50％、约0.5％至约25％、约0.5％至约20％、约0.5％至约10％、或约5％至约10％(w/w)。在一个实施方案中，该物质以约0.5％至约10％载量w/w并入。
E.额外的靶向部分
除缀合物的靶向部分之外，颗粒可含有使颗粒靶向特定器官、组织、细胞类型或亚细胞区室的一个或多个靶向部分。额外的靶向部分可存在于颗粒的表面上、颗粒的内部上，或这两者上。额外的靶向部分可固定在颗粒的表面上，例如可共价连接至颗粒中的聚合物或脂质。在一些实施方案中，额外的靶向部分共价连接至两亲性聚合物或脂质以使靶向部分定向在颗粒的表面上。
III.制剂
在一些实施方案中，向人、人类患者或受试者施用组合物。出于本公开的目的，短语“活性成分”通常是指如本文所述的待递送的缀合物或包含缀合物的颗粒。
尽管对本文提供的药物组合物的描述主要涉及适合于向人施用的药物组合物，但本领域技术人员将了解此类组合物通常适合于向任何其他动物，例如向非人类动物，例如非人类哺乳动物施用。充分理解为了使组合物适合于向各种动物施用而对适合于向人施用的药物组合物进行修改，并且本领域普通兽医学药理学家可设计此类修改和/或仅以常规(如果有的话)实验进行此类修改。预期向其施用药物组合物的受试者包括但不限于人和/或其他灵长类动物；哺乳动物，包括商业相关哺乳动物，诸如牛、猪、马、绵羊、猫、狗、小鼠和/或大鼠；和/或禽类，包括商业相关禽类，诸如家禽、鸡、鸭、鹅和/或火鸡。
可通过药理学领域中已知的或今后开发的任何方法制备本文所述的药物组合物的制剂。一般来说，此类制备方法包括以下步骤：使活性成分与赋形剂和/或一种或多种其他辅助成分联合，接着如果必要和/或期望的话，则将产品划分、成形和/或包装成所需的单剂量或多剂量单位。
本发明的药物组合物可以单一单位剂量形式和/或以多个单一单位剂量形式制备、包装和/或整批销售。如本文所用，“单位剂量”是包含预定量的活性成分的药物组合物的个别量。活性成分的量通常等于将向受试者施用的活性成分的剂量，和/或此剂量的适宜分数，举例来说，诸如此剂量的一半或三分之一。
本发明的药物组合物中的活性成分、药学上可接受的赋形剂和/或任何额外成分的相对量将根据所治疗的受试者的身份、身材和/或状况，并且进一步根据施用组合物所将采用的途径而变化。举例来说，组合物可包含0.1％至100％、例如.5至50％、1-30％、5-80％、至少80％(w/w)的活性成分。
可使用一种或多种赋形剂配制本发明的缀合物或颗粒以：(1)增加稳定性；(2)允许持续或延迟释放(例如从单马来酰亚胺的储库制剂)；(3)改变生物分布(例如使单马来酰亚胺化合物靶向特定组织或细胞类型)；(4)改变单马来酰亚胺化合物在体内的释放特征。赋形剂的非限制性实例包括任何和所有的溶剂、分散介质、稀释剂或其他液体溶媒、分散或混悬助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂以及防腐剂。本发明的赋形剂也可包括但不限于类脂质、脂质体、脂质纳米颗粒、聚合物、脂质复合物、核壳纳米颗粒、肽、蛋白质、透明质酸酶、纳米颗粒模拟物及其组合。因此，本发明制剂可包括一种或多种赋形剂，各自以一定的量一起增加单马来酰亚胺化合物的稳定性。
在一些实施方案中，药物组合物包含本发明的缀合物，其pH为约4.0至约5.0。在一些实施方案中，药物组合物包含pH为约4.0至约4.8的乙酸盐缓冲液(乙酸钠和乙酸)。在一些实施方案中，药物组合物还包含甘露醇和聚乙二醇15羟基硬脂酸酯。
在一个实施方案中，提供了用于注射用溶液的组合物。该溶液包含缀合物57、甘露醇，聚乙二醇15羟基硬脂酸酯和乙酸盐水溶液缓冲液。每个剂量单位在带塞的10mL透明玻璃小瓶中含有2.5mg/mL的缀合物57(游离碱)、50mg/mL甘露醇、20mg/mL聚乙二醇15羟基硬脂酸酯和pH 4.0-4.8乙酸盐缓冲液。用20mm 灰色lyo塞塞住透明玻璃小瓶，并用20mm深蓝色flip-off密封件密封。在施用之前，将溶液用5％甘露醇注射液USP稀释。得到的稀释组合物可以静脉输注。
赋形剂
药物制剂可另外包含如适于所需特定剂型的药学上可接受的赋形剂，如本文所用，其包括任何和所有的溶剂、分散介质、稀释剂或其他液体溶媒、分散或混悬助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。Remington的The Scienceand Practice of Pharmacy,第21版,A.R.Gennaro(Lippincott,Williams&Wilkins,Baltimore,MD,2006；以引用的方式整体并入本文)公开用于配制药物组合物的各种赋形剂和用于制备其的已知技术。除非任何常规赋形剂介质诸如因产生任何不期望的生物作用或另外以有害方式与药物组合物的任何其他组分相互作用而与某一物质或其衍生物不相容，否则预期它的使用在本发明的范围内。
在一些实施方案中，药学上可接受的赋形剂的纯度是至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％。在一些实施方案中，赋形剂被批准用于人以及用于兽医学用途。在一些实施方案中，赋形剂被美国食品与药物管理局批准。在一些实施方案中，赋形剂是药物级。在一些实施方案中，赋形剂满足美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、英国药典和/或国际药典的标准。
用于制造药物组合物的药学上可接受的赋形剂包括但不限于惰性稀释剂、分散剂和/或成粒剂、表面活性剂和/或乳化剂、崩解剂、粘合剂、防腐剂、缓冲剂、润滑剂和/或油。此类赋形剂可任选被包括在药物组合物中。
示例性稀释剂包括但不限于碳酸钙、碳酸钠、磷酸钙、磷酸二钙、硫酸钙、磷酸氢钙、磷酸钠、乳糖、蔗糖、纤维素、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、氯化钠、干淀粉、玉米淀粉、糖粉等和/或其组合。
示例性成粒剂和/或分散剂包括但不限于马铃薯淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、淀粉乙醇酸钠、粘土、海藻酸、瓜尔胶(guar gum)、柑橘渣(citrus pulp)、琼脂、膨润土、纤维素和木制品、天然海绵、阳离子交换树脂、碳酸钙、硅酸盐、碳酸钠、交联聚(乙烯基-吡咯烷酮)(交聚维酮)、羧甲基淀粉钠(淀粉乙醇酸钠)、羧甲基纤维素、交联羧甲基纤维素钠(交联羧甲基纤维素)、甲基纤维素、预胶凝淀粉(淀粉1500)、微晶淀粉、水不溶性淀粉、羧甲基纤维素钙、硅酸镁铝月桂基硫酸钠、季铵化合物等和/或其组合。
示例性表面活性剂和/或乳化剂包括但不限于天然乳化剂(例如阿拉伯胶、琼脂、海藻酸、海藻酸钠、黄蓍胶、chondrux、胆固醇、黄原胶、果胶、明胶、蛋黄、酪蛋白、羊毛脂、胆固醇、蜡和卵磷脂)、胶体粘土(例如膨润土[硅酸铝]和[硅酸镁铝])、长链氨基酸衍生物、高分子量醇(例如硬脂醇、鲸蜡醇、油醇、三乙酸甘油酯单硬脂酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯，以及丙二醇单硬脂酸酯、聚乙烯醇)、卡波姆(carbomer)(例如羧基聚甲烯、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物和羧基乙烯基聚合物)、角叉菜胶、纤维素衍生物(例如羧甲基纤维素钠、粉状纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素)、脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯 聚氧乙烯脱水山梨糖醇聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯脱水山梨糖醇单棕榈酸酯脱水山梨糖醇单硬脂酸酯脱水山梨糖醇三硬脂酸酯单油酸甘油酯、脱水山梨糖醇单油酸酯)、聚氧乙烯酯(例如聚氧乙烯单硬脂酸酯聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙氧基化蓖麻油、聚氧基亚甲基硬脂酸酯和)、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如)、聚氧乙烯醚(例如聚氧乙烯月桂基醚)、聚(乙烯基-吡咯烷酮)、二乙二醇单月桂酸酯、油酸三乙醇胺、油酸钠、油酸钾、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、月桂基硫酸钠、F 68、188、溴化十六烷基三甲铵、氯化十六烷基吡啶苯扎氯铵、多库酯钠等和/或其组合。
示例性粘合剂包括但不限于淀粉(例如玉米淀粉和淀粉糊)；明胶；糖(例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露醇)；天然和合成胶(例如阿拉伯胶、海藻酸钠、爱尔兰藓的提取物、潘瓦尔胶(panwar gum)、茄替胶(ghatti gum)、伊莎珀尔果壳(isapol husk)的粘液、羧甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、乙酸纤维素、聚(乙烯基-吡咯烷酮)、硅酸镁铝和落叶松阿拉伯半乳聚糖)；海藻酸盐；聚环氧乙烷；聚乙二醇；无机钙盐；硅酸；聚甲基丙烯酸酯；蜡；水；醇；等；及其组合。
示例性防腐剂可包括但不限于抗氧化剂、螯合剂、抗微生物防腐剂、抗真菌防腐剂、醇防腐剂、酸性防腐剂和/或其他防腐剂。示例性抗氧化剂包括但不限于α生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯、单硫代甘油、焦亚硫酸钾、丙酸、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠和/或亚硫酸钠。示例性螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸单水化物、依地酸二钠、依地酸二钾、依地酸、富马酸、苹果酸、磷酸、依地酸钠、酒石酸和/或依地酸三钠。示例性抗微生物防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲醇、溴硝丙二醇、溴化十六烷基三甲铵、氯化十六烷基吡啶氯己定、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲苯酚、甲苯酚、乙醇、甘油、海克替啶(hexetidine)、咪脲、苯酚、苯氧乙醇、苯基乙醇、硝酸苯汞、丙二醇和/或硫柳汞。示例性抗真菌防腐剂包括但不限于对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯甲酸钾、山梨酸钾、苯甲酸钠、丙酸钠和/或山梨酸。示例性醇防腐剂包括但不限于乙醇、聚乙二醇、苯酚、酚类化合物、双酚、氯丁醇、羟基苯甲酸酯和/或苯基乙醇。示例性酸性防腐剂包括但不限于维生素A、维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、柠檬酸、乙酸、脱氢乙酸、抗坏血酸、山梨酸和/或植酸。其他防腐剂包括但不限于生育酚、乙酸生育酚、甲磺酸得立肟(deteroxime mesylate)、溴化十六烷基三甲铵、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、乙二胺、月桂基硫酸钠(SLS)、月桂基醚硫酸钠(SLES)、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钾、焦亚硫酸钾、GLYDANT 对羟基苯甲酸甲酯、115、 II、NEOLONE0、KATHONTM和/或
示例性缓冲剂包括但不限于柠檬酸盐缓冲溶液、乙酸盐缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液、氯化铵、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡乳醛酸钙、葡庚糖酸钙、葡萄糖酸钙、D-葡萄糖酸、甘油磷酸钙、乳酸钙、丙酸、乙酰丙酸钙、戊酸、磷酸氢钙、磷酸、磷酸钙、氢氧化磷酸钙、乙酸钾、氯化钾、葡萄糖酸钾、钾混合物、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸钾混合物、乙酸钠、碳酸氢钠、氯化钠、柠檬酸钠、乳酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钠混合物、缓血酸胺、氢氧化镁、氢氧化铝、海藻酸、无热原水、等渗盐水、林格氏溶液(Ringer’s solution)、乙醇等，和/或其组合。
示例性润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、二氧化硅、滑石、麦芽、山嵛酸甘油酯、氢化植物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、月桂基硫酸镁、月桂基硫酸钠等，及其组合。
示例性油包括但不限于杏仁油(almond oil)、杏核油(apricot kernel oil)、鳄梨油、巴巴苏油、香柠檬油、黑加仑籽油、玻璃苣油、杜松油、春黄菊油、加拿大油菜油、香菜油、巴西棕榈油、蓖麻油、肉桂油、可可脂、椰子油、鳕鱼肝油、咖啡油、玉米油、棉籽油、鸸鹋油、桉树油、夜来香油、鱼油、亚麻籽油、香叶醇、葫芦油、葡萄籽油、榛子坚果油、牛膝草(hyssop)油、肉豆蔻酸异丙酯、荷荷巴(jojoba)油、夏威夷坚果油、杂薰衣草油、薰衣草油、柠檬油、山苍子(litsea cubeba)油、澳洲坚果(macademia nut)油、锦葵油、芒果籽油、白芒花籽油、貂油、肉豆蔻油、橄榄油、橙油、橙色连鳍鲑油、棕榈油、棕榈仁油、桃仁油、花生油、罂粟籽油、南瓜籽油、油菜籽油、米糠油、迷迭香油、红花油、檀香木油、山茶花油、香薄荷油、沙棘油、芝麻油、牛油树脂、硅酮油、大豆油、向日葵油、茶树油、蓟油、椿木(tsubaki)油、香根草油、胡桃油和小麦胚芽油。示例性油包括但不限于硬脂酸丁酯、辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯、环甲硅油、癸二酸二乙酯、二甲基硅油360、肉豆蔻酸异丙酯、矿物油、辛基十二烷醇、油醇、硅酮油，和/或其组合。
根据配制者的判断，在组合物中可存在诸如可可脂和栓剂蜡、着色剂、包覆剂、甜味剂、调味剂和/或芳香剂的赋形剂。
施用
可通过产生治疗有效结果的任何途径来施用本发明的缀合物或颗粒。这些途径包括但不限于经肠、胃肠、硬膜外、口服、经皮、硬膜外(epidural/peridural)、脑内(到脑中)、脑室内(到脑室中)、上皮(施加于皮肤上)、真皮内(到皮肤自身中)、皮下(在皮肤下)、经鼻施用(通过鼻子)、静脉内(到静脉中)、动脉内(到动脉中)、肌肉内(到肌肉中)、心内(到心脏中)、骨内输注(到骨髓中)、鞘内(到脊椎管中)、腹膜内(输注或注射到腹膜中)、膀胱内输注、玻璃体内(通过眼睛)、海绵体内注射(到阴茎的基底中)、阴道内施用、子宫内、羊膜外施用、经皮(通过完整皮肤扩散以达成全身性分布)、经粘膜(通过粘膜扩散)、吹入(鼻吸)、舌下、唇下、灌肠剂、滴眼剂(到结膜上)或以滴耳剂的方式。在特定实施方案中，可以使组合物穿过血脑屏障、血管屏障或其他上皮屏障的方式施用组合物。
本文所述的制剂在适于向有需要的个体施用的药物载体中含有有效量的缀合物或颗粒。制剂可胃肠外施用(例如通过注射或输注)。可以以包括经肠、局部(例如向眼睛)或通过肺部施用的任何方式施用制剂或其变化形式。在一些实施方案中，局部施用制剂。
A.胃肠外制剂
可以溶液、混悬液或乳液形式配制缀合物或颗粒以用于胃肠外递送，诸如注射或输注。可将制剂全身性、区域性或直接施用至待治疗的器官或组织。
可使用本领域中已知的技术将胃肠外制剂制备成水性组合物。通常，可将此类组合物制备成可注射制剂，例如溶液或混悬液；适合用于在注射前添加重构介质后制备溶液或混悬液的固体形式；乳液，诸如油包水(w/o)乳液、水包油(o/w)乳液及其微乳液、脂质体或乳脂体。
载体可为含有例如水、乙醇、一种或多种多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、油(诸如植物油(例如花生油、玉米油、芝麻油等))及其组合的溶剂或分散介质。适当的流动性可例如通过使用包覆剂(诸如卵磷脂)；在分散体的情况下通过维持所需颗粒尺寸；和/或通过使用表面活性剂加以维持。在一些情况下，包括等渗剂，例如一种或多种糖、氯化钠或本领域中已知的其他适合的试剂。
可在适合与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合的水或另一溶剂或分散介质中制备缀合物或颗粒的溶液和分散体，所述赋形剂包括但不限于表面活性剂、分散剂、乳化剂、pH调节剂，及其组合。
适合的表面活性剂可为阴离子、阳离子、两亲性或非离子表面活性剂。适合的阴离子表面活性剂包括但不限于含有羧酸根、磺酸根和硫酸根离子的那些。阴离子表面活性剂的实例包括长链烷基磺酸钠、钾、铵和烷基芳基磺酸钠、钾、铵，诸如十二烷基苯磺酸钠；二烷基磺基琥珀酸钠，诸如十二烷基苯磺酸钠；二烷基磺基琥珀酸钠，诸如双-(2-乙基硫氧基)磺基琥珀酸钠；和烷基硫酸盐，诸如月桂基硫酸钠。阳离子表面活性剂包括但不限于季铵化合物，诸如苯扎氯铵、苄索氯铵、溴化十六烷基三甲铵、硬脂基二甲基苄基氯化铵、聚氧乙烯和椰油胺。非离子表面活性剂的实例包括乙二醇单硬脂酸酯、丙二醇肉豆蔻酸酯、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、聚甘油基-4-油酸酯、脱水山梨糖醇酰化物、蔗糖酰化物、PEG-150月桂酸酯、PEG-400单月桂酸酯、聚氧乙烯单月桂酸酯、聚山梨醇酯、聚氧乙烯辛基苯基醚、PEG-1000鲸蜡基醚、聚氧乙烯十三烷基醚、聚丙二醇丁基醚、401、硬脂酰基单异丙醇酰胺和聚氧乙烯氢化牛脂酰胺。两亲性表面活性剂的实例包括N-十二烷基-β-丙氨酸钠、N-月桂基-β-亚氨基二丙酸钠、肉豆蔻酰两性基乙酸盐、月桂基甜菜碱和月桂基磺基甜菜碱。
制剂可含有防腐剂以防止微生物生长。适合的防腐剂包括但不限于对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸和硫柳汞。制剂也可含有抗氧化剂以防止活性物质或颗粒降解。
通常使制剂在重构后缓冲至pH 3-8以用于胃肠外施用。适合的缓冲剂包括但不限于磷酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂和柠檬酸盐缓冲剂。如果使用10％蔗糖或5％右旋糖，则可不需要缓冲剂。
水溶性聚合物常用于供胃肠外施用的制剂中。适合的水溶性聚合物包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮、葡聚糖、羧甲基纤维素和聚乙二醇。
可通过以下步骤制备无菌可注射溶液：根据需要将缀合物或颗粒以所需量与一种或多种上文所列的赋形剂一起并入适当的溶剂或分散介质中，随后过滤灭菌。通常，通过将各种灭菌过的缀合物或颗粒并入到含有基本分散介质和来自上文所列的成分的所需其他成分的无菌溶媒中来制备分散体。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉剂的情况下，制备方法的实例包括真空干燥和冷冻干燥技术，其产生颗粒加上来自其先前无菌过滤溶液的任何额外所需成分的粉剂。可以使颗粒在性质上是多孔的方式制备粉剂，这可增加颗粒的溶出。用于制备多孔颗粒的方法在本领域中是已知的。
用于胃肠外施用的药物制剂可呈由一种或多种聚合物-药物缀合物形成的缀合物或颗粒的无菌水性溶液或混悬液形式。可接受的溶剂包括例如水、林格氏溶液、磷酸盐缓冲盐水(PBS)和等渗氯化钠溶液。制剂也可为在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂(诸如1,3-丁二醇)中的无菌溶液、混悬液或乳液。
在一些情况下，以液体形式分配或包装制剂。或者，可以例如通过冻干适合的液体制剂获得的固体形式包装用于胃肠外施用的制剂。固体可在施用之前用适当的载体或稀释剂重构。
用于胃肠外施用的溶液、混悬液或乳液可用为维持适合于经眼施用的pH所必需的有效量的缓冲剂缓冲。适合的缓冲剂为本领域技术人员所熟知，并且适用的缓冲剂的一些实例是乙酸盐、硼酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐缓冲剂。
用于胃肠外施用的溶液、混悬液或乳液也可含有一种或多种张力剂以调整制剂的等渗范围。适合的张力剂在本领域中是熟知的，并且一些实例包括甘油、蔗糖、右旋糖、甘露醇、山梨醇、氯化钠和其他电解质。
用于胃肠外施用的溶液、混悬液或乳液也可含有一种或多种防腐剂以防止眼用制剂的细菌污染。适合的防腐剂在本领域中是已知的，并且包括聚六亚甲基双胍(PHMB)、苯扎氯铵(BAK)、稳定化氧氯复合物(另外称为)、乙酸苯汞、氯丁醇、山梨酸、氯己定、苯甲醇、对羟基苯甲酸酯、硫柳汞及其混合物。
用于胃肠外施用的溶液、混悬液或乳液也可含有一种或多种本领域中已知的赋形剂，诸如分散剂、湿润剂和混悬剂。
B.粘膜局部制剂
可配制缀合物或颗粒以向粘膜表面进行局部施用。适于局部施用的剂型包括乳膏剂、软膏剂、油膏剂、喷雾剂、凝胶剂、洗剂、乳液、液体和透皮贴剂。可配制制剂以用于经粘膜、经上皮或经内皮施用。组合物含有一种或多种化学渗透增强剂、膜渗透剂、膜转运剂、软化剂、表面活性剂、稳定剂，及其组合。在一些实施方案中，可以液体制剂(诸如溶液或混悬液)、半固体制剂(诸如洗剂或软膏剂)或固体制剂形式施用缀合物或颗粒。在一些实施方案中，将缀合物或颗粒配制成液体，包括溶液和混悬液，诸如滴眼剂；或配制成半固体制剂，用于粘膜，诸如眼部，或经阴道或经直肠施用。
“表面活性剂”是降低表面张力，并且由此增加产品的乳化、起泡、分散、扩散和湿润性质的表面活性物质。适合的非离子表面活性剂包括乳化蜡、单油酸甘油酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚山梨醇酯、脱水山梨糖醇酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、环糊精、单硬脂酸甘油酯、泊洛沙姆(poloxamer)、聚维酮及其组合。在一个实施方案中，非离子表面活性剂是硬脂醇。
“乳化剂”是促进一种液体在另一液体中混悬，以及促进形成油和水的稳定混合物或乳液的表面活性物质。常见的乳化剂是：金属皂、某些动物和植物油以及各种极性化合物。适合的乳化剂包括阿拉伯胶、阴离子乳化蜡、硬脂酸钙、卡波姆、鲸蜡硬脂醇、鲸蜡醇、胆固醇、二乙醇胺、乙二醇棕榈酰硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯、单油酸甘油酯、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、羊毛脂、水合物、羊毛脂醇、卵磷脂、中链甘油三酯、甲基纤维素、矿物油和羊毛脂醇、磷酸二氢钠、单乙醇胺、非离子乳化蜡、油酸、泊洛沙姆、泊洛沙姆、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、丙二醇海藻酸酯、自乳化单硬脂酸甘油酯、柠檬酸钠脱水物、月桂基硫酸钠、脱水山梨糖醇酯、硬脂酸、葵花油、黄蓍胶、三乙醇胺、黄原胶及其组合。在一个实施方案中，乳化剂是硬脂酸甘油酯。
适合的渗透增强剂种类在本领域中是已知的，并且包括但不限于脂肪醇、脂肪酸酯、脂肪酸、脂肪醇醚、氨基酸、磷脂、卵磷脂、胆酸盐、酶、胺和酰胺、复合剂(脂质体、环糊精、改性纤维素和二酰亚胺)、大环化合物(诸如大环内酯、酮和酐以及环脲)、表面活性剂、N-甲基吡咯烷酮及其衍生物、DMSO和相关化合物、离子化合物、氮酮和相关化合物、以及溶剂(诸如醇、酮、酰胺、多元醇(例如二醇))。这些种类的实例在本领域中是已知的。
给药
本发明提供包括向有需要的受试者施用如本文所述的缀合物或含有该缀合物的颗粒的方法。可使用有效预防或治疗或成像疾病、病症和/或病况(例如与工作记忆缺陷相关的疾病、病症和/或病况)的任何量和任何施用途径来向受试者施用如本文所述的缀合物或含有该缀合物的颗粒。根据受试者的物种、年龄和一般状况、疾病的严重性、特定组合物、它的施用模式、它的作用模式等，所需的精确量将在受试者与受试者之间不同。
本发明的组合物通常以剂量单位形式配制以易于达成剂量的施用和均匀性。然而，应了解本发明组合物的总每日用量将由主治医师在合理的医学判断范围内决定。用于任何特定患者的具体治疗有效、预防有效或适当成像的剂量水平都将取决于多种因素，包括正在治疗的病症和病症的严重性；所用具体化合物的活性；所用具体组合物；患者的年龄、体重、总体健康、性别和膳食；所用具体化合物的施用时间、施用途径和排泄速率；治疗的持续时间；与所用具体化合物组合或同时使用的药物；以及医学领域中熟知的类似因素。
在一些实施方案中，本发明的组合物可一天一次或多次以足以递送每天约0.0001mg/kg至约100mg/kg、约0.001mg/kg至约0.05mg/kg、约0.005mg/kg至约0.05mg/kg、约0.001mg/kg至约0.005mg/kg、约0.05mg/kg至约0.5mg/kg、约0.01mg/kg至约50mg/kg、约0.1mg/kg至约40mg/kg、约0.5mg/kg至约30mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、或约1mg/kg至约25mg/kg受试者体重的剂量水平施用以获得所需的治疗、诊断、预防或成像作用。所需剂量可一天三次、一天两次、一天一次、每隔一天、每三天、每周、每两周、每三周或每四周加以递送。在一些实施方案中，可使用多次施用(例如两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次或更多次施用)来递送所需剂量。当采用多次施用时，可使用分次给药方案，诸如本文所述的那些。
在一些实施方案中，缀合物57和/或其药学上可接受的盐以以下剂量施用：约1mg至约50mg，例如约1mg、2mg、4mg、6mg、8mg、10mg、12mg、14mg、16mg、18mg、20mg、22mg、24mg、26mg、28mg、30mg、32mg、34mg、36mg、38mg、40mg、42mg、44mg、46mg、48mg或50mg。在一些实施方案中，缀合物57和/或其药学上可接受的盐以约18mg至约50mg或约25mg至约50mg的剂量施用。在一些实施方案中，缀合物57和/或其药学上可接受的盐以约25mg的剂量施用。在一些实施方案中，缀合物57和/或其药学上可接受的盐以25mg的剂量施用。
在药物组合物中，本发明的缀合物或颗粒的浓度可以是约0.01mg/mL至约50mg/mL、约0.1mg/mL至约25mg/mL、约0.5mg/mL至约10mg/mL或约1mg/mL至约5mg/mL。
如本文所用，“分次剂量”是将单一单位剂量或总每日剂量分成两个或更多个剂量，例如分两次或更多次施用单一单位剂量。如本文所用，“单一单位剂量”是以一个剂量/一次/单一途径/单一接触点(即单一施用事件)施用的任何治疗剂的剂量。如本文所用，“总每日剂量”是在24小时时间周期内给予或规定的量。它可以单一单位剂量形式施用。在一个实施方案中，以分次剂量向受试者施用本发明的单马来酰亚胺化合物。单马来酰亚胺化合物可仅在缓冲剂中配制或在本文所述的制剂中配制。
剂型
可将本文所述的药物组合物配制成本文所述的剂型，诸如局部、鼻内、气管内或可注射(例如静脉内、眼内、玻璃体内、肌肉内、心内、腹膜内、皮下)剂型。
液体剂型
用于胃肠外施用的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、混悬液、糖浆和/或酏剂。除活性成分之外，液体剂型也可包含本领域中常用的惰性稀释剂，包括但不限于水或其他溶剂；增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃甲醇、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，及其混合物。在胃肠外施用的某些实施方案中，组合物可与增溶剂(诸如)、醇、油、改性油、二醇、聚山梨醇酯、环糊精、聚合物和/或其组合混合。
可注射剂
可注射制剂(例如无菌可注射水性或油性混悬液)可根据已知技术加以配制，并且可包括适合的分散剂、湿润剂和/或混悬剂。无菌可注射制剂可为在无毒的胃肠外可接受的稀释剂和/或溶剂中的无菌可注射溶液、混悬液和/或乳液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。在可采用的可接受的溶媒和溶剂之中包括但不限于水、U.S.P.林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。无菌不挥发性油常规用作溶剂或混悬介质。出于该目的，可采用任何温和的不挥发性油，包括合成甘油单酯或甘油二酯。诸如油酸的脂肪酸可用于制备可注射剂。
可注射制剂可例如通过经细菌截留性过滤器过滤，和/或通过以可在使用之前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质中的无菌固体组合物形式并入灭菌剂来灭菌。
为延长活性成分的作用，期望的是减缓来自皮下或肌肉内注射的活性成分的吸收。这可通过使用水溶性不良的结晶或非晶物质的液体混悬液来实现。单马来酰亚胺化合物的吸收速率则取决于它的溶出速率，所述溶出速率又可取决于晶体大小和结晶形式。或者，可通过将单马来酰亚胺溶解或混悬于油溶媒中来实现胃肠外施用的单马来酰亚胺化合物的延迟吸收。通过形成单马来酰亚胺化合物于诸如聚丙交酯-聚乙交酯的生物可降解聚合物中的微囊基质来制备可注射储库形式。根据单马来酰亚胺化合物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可控制单马来酰亚胺化合物释放速率。其他生物可降解聚合物的实例包括但不限于聚(原酸酯)和聚(酐)。可通过将单马来酰亚胺化合物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储库型可注射制剂。
肺部制剂
在本文中描述为适用于肺部递送的制剂也可用于鼻内递送药物组合物。适合于鼻内施用的另一制剂可为包含活性成分并且具有约0.2μm至500μm的平均颗粒的粗粉剂。此类制剂可以其中进行闻嗅的方式施用，即通过鼻部通道从保持接近于鼻部的粉剂容器快速吸入来施用。
适合于经鼻施用的制剂可例如包含约少至0.1％(w/w)以及多达100％(w/w)的活性成分，并且可包含一种或多种本文所述的额外成分。可以适合于经颊施用的制剂形式制备、包装和/或销售药物组合物。此类制剂可例如呈使用常规方法制备的片剂和/或锭剂形式，并且可例如含有约0.1％至20％(w/w)的活性成分，其中其余部分可包含经口可溶解和/或可降解的组合物以及任选一种或多种本文所述的额外成分。或者，适合于经颊施用的制剂可包括包含活性成分的粉剂和/或气雾化和/或雾化溶液和/或混悬液。此类粉状、气雾化和/或气雾化制剂在分散时可具有约0.1nm至约200nm范围内的平均颗粒和/或液滴尺寸，并且可进一步包含一种或多种本文所述的任何额外成分。
在配制和/或制造药物制剂时的一般性考虑事项可例如见于Remington:TheScience and Practice of Pharmacy第21版,Lippincott Williams&Wilkins,2005(以引用的方式整体并入本文)中。
包衣或壳体
可制备具有包衣和壳体(诸如肠溶包衣和药物配制领域中熟知的其他包衣)的片剂、糖衣锭、胶囊、丸剂和颗粒剂固体剂型。它们可任选包含遮光剂，并且可具有使它们仅在或优先在肠道的某一部分中，任选以延迟方式释放活性成分的组成。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。类似类型的固体组合物可作为填充剂用于使用诸如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软质和硬质填充明胶胶囊中。
IV.制备颗粒的方法
在各种实施方案中，制备颗粒的方法包括提供缀合物；提供用于形成颗粒的基础组分，诸如PLA-PEG或PLGA-PEG；在有机溶液中合并所述缀合物和所述基础组分以形成第一有机相；以及合并所述第一有机相与第一水溶液以形成第二相；乳化所述第二相以形成乳化相；以及回收颗粒。在各种实施方案中，使乳化相进一步均质化。
在一些实施方案中，第一相包括约5至约50重量％，例如约1至约40％的固体，或约5至约30％的固体，例如约5％、10％、15％和20％的缀合物和基础组分。在某些实施方案中，第一相包括约5重量％的缀合物和基础组分。在各种实施方案中，有机相包含乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、异丙醇、乙酸异丙酯、二甲基甲酰胺、二氯甲烷(methylene chloride)、二氯甲烷(dichloromethane)、氯仿、丙酮、苯甲醇、80、80，或其组合。在一些实施方案中，有机相包括苯甲醇、乙酸乙酯，或其组合。
在各种实施方案中，水性溶液包括水、胆酸钠、乙酸乙酯或苯甲醇。在各种实施方案中，将表面活性剂添加至第一相、第二相或这两者中。在一些情况下，表面活性剂可充当本文公开的组合物的乳化剂或稳定剂。适合的表面活性剂可为阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或非离子表面活性剂。在一些实施方案中，适合于制备本文所述的组合物的表面活性剂包括脱水山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯硬脂酸酯。此类脂肪酸酯非离子表面活性剂的实例是来自ICI的80、80和表面活性剂。表面活性剂包括C12-C18脱水山梨糖醇单酯。表面活性剂包括聚(环氧乙烷)C12-C18脱水山梨糖醇单酯。表面活性剂包括聚(环氧乙烷)硬脂酸酯。在某些实施方案中，水性溶液也包含表面活性剂(例如乳化剂)，包括聚山梨醇酯。举例来说，水性溶液可包括聚山梨醇酯80。在一些实施方案中，适合的表面活性剂包括基于脂质的表面活性剂。举例来说，组合物可包括1,2-二己酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1,2-二庚酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、聚乙二醇化1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(包括PEG5000-DSPE)、聚乙二醇化1,2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(包括1,2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-5000](铵盐))。
乳化第二相以形成乳化相可在一个或两个乳化步骤中进行。举例来说，可制备初级乳液，接着乳化以形成精细乳液。可例如使用简单混合、高压均质器、探头超声发生器、搅拌棒或转子定子均质器形成初级乳液。可通过使用例如探头超声发生器或高压均质器，例如通过穿过均质器来使初级乳液形成为精细乳液。举例来说，当使用高压均质器时，所用压力可为约4000至约8000psi、约4000至约5000psi、或4000或5000psi。
可能需要溶剂蒸发或稀释来完成溶剂萃取和使颗粒固化。为更好控制萃取动力学和更加可缩放的过程，可使用经由水淬灭进行的溶剂稀释。举例来说，可将乳液稀释至冷水中以达到足以溶解所有有机溶剂以形成淬灭相的浓度。淬灭可至少部分地在约5℃或更低的温度下进行。举例来说，用于淬灭的水可在小于室温的温度(例如约0至约10℃、或约0至约5℃)下。
在各种实施方案中，通过过滤来回收颗粒。举例来说，可使用超滤膜。可使用切向流过滤系统进行示例性过滤。举例来说，通过使用孔尺寸适合于截留颗粒同时允许溶质、胶束和有机溶剂穿过的膜，可选择性分离颗粒。可使用截留分子量是约300-500kDa(-5-25nm)的示例性膜。
在各种实施方案中，在一些情况下将颗粒冷冻干燥或冻干以延长它们的储存期限。在一些实施方案中，组合物也包括冻干保护剂。在某些实施方案中，冻干保护剂选自糖、多元醇或其衍生物。在一些实施方案中，冻干保护剂选自单糖、二糖或其混合物。举例来说，冻干保护剂可为蔗糖、乳果糖、海藻糖、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、纤维二糖，或其混合物。
提供制备含有一种或多种缀合物的颗粒的方法。颗粒可为聚合颗粒、脂质颗粒，或其组合。可调整本文所述的各种方法以控制颗粒的尺寸和组成，例如一些方法最适合用于制备微米颗粒，而其他方法更适合用于制备颗粒。本领域技术人员可在不进行过度实验的情况下对用于制备具有所需特征的颗粒的方法进行选择。
i.聚合颗粒
制备聚合颗粒的方法在本领域中是已知的。可使用本领域中已知的任何适合方法制备聚合颗粒。常见的微包封技术包括但不限于喷雾干燥、界面聚合、热熔包封、相分离包封(自发性乳化微包封、溶剂蒸发微包封和溶剂去除微包封)、凝聚、低温微球体形成和相转换纳米包封(PIN)。以下呈现对这些方法的简要概述。
1.喷雾干燥
用于使用喷雾干燥技术形成聚合颗粒的方法描述于美国专利号6,620,617中。在该方法中，将聚合物溶解于诸如二氯甲烷的有机溶剂中或水中。将已知量的待并入颗粒中的一种或多种缀合物或额外活性物质混悬(在不溶性活性物质的情况下)或共同溶解(在可溶性活性物质的情况下)于聚合物溶液中。通过由压缩气体流驱动的微粒化喷嘴泵送溶液或分散体，并且将所得气雾剂悬浮于加热空气旋流器中，从而使溶剂从微滴蒸发，形成颗粒。使用该方法，可获得在0.1至10微米范围内的微球体/纳米球体。
2.界面聚合
界面聚合也可用于包封一种或多种缀合物和/或活性物质。使用该方法，将单体和缀合物或活性物质溶解于溶剂中。将第二单体溶解于不与第一溶剂混溶的第二溶剂(通常是水性的)中。通过搅拌使第一溶液混悬于第二溶液中来形成乳液。一旦乳液稳定，即添加引发剂至水相中，从而在乳液的每个液滴的界面处引起界面聚合。
3.热熔微包封
可使用如Mathiowitz等,Reactive Polymers,6:275(1987)中所述的热熔微包封方法，由诸如聚酯和聚酐的聚合物形成微球体。在采用该方法的一些实施方案中，使用分子量为3,000-75,000道尔顿的聚合物。在该方法中，首先使聚合物熔融，接着与已被筛分至小于50微米的待并入的一种或多种活性物质的固体颗粒混合。将混合物混悬于非混溶溶剂(如硅油)中，并且在连续搅拌下，加热至高于聚合物的熔点5℃。一旦乳液稳定，使它冷却直至聚合物颗粒固化。通过倾析来用石油醚洗涤所得微球体以产生自由流动粉末。
4.相分离微包封
在相分离微包封技术中，任选在待包封的一种或多种活性物质存在下搅拌聚合物溶液。当通过搅拌继续均匀混悬物质时，缓慢添加聚合物的非溶剂至溶液中以降低聚合物的溶解性。根据聚合物在溶剂和非溶剂中的溶解性，聚合物沉淀或相分离成聚合物富集相和聚合物贫乏相。在适当条件下，聚合物富集相中的聚合物将迁移至与连续相的界面，从而用外部聚合物壳体将活性物质包封在液滴中。
a.自发性乳化微包封
自发性乳化涉及通过改变温度、蒸发溶剂或添加化学交联剂来固化上面形成的乳化液体聚合物液滴。包封剂的物理和化学性质以及任选并入初期颗粒中的一种或多种活性物质的性质决定适合的包封方法。诸如疏水性、分子量、化学稳定性和热稳定性的因素影响包封。
b.溶剂蒸发微包封
用于使用溶剂蒸发技术形成微球体的方法描述于Mathiowitz等,J.ScanningMicroscopy,4:329(1990)；Beck等,Fertil.Steril.,31:545(1979)；Beck等,Am.J.Obstet.Gynecol.135(3)(1979)；Benita等,J.Pharm.Sci.,73:1721(1984)；以及美国专利号3,960,757中。将聚合物溶解于诸如二氯甲烷的挥发性有机溶剂中。任选添加待并入的一种或多种活性物质至溶液中，并且将混合物混悬于含有诸如聚(乙烯醇)的表面活性剂的水性溶液中。搅拌所得乳液直至大部分有机溶剂蒸发，从而留下固体微米颗粒/纳米颗粒。该方法适用于相对稳定的聚合物，如聚酯和聚苯乙烯。
c.溶剂去除微包封
溶剂去除微包封技术主要被设计用于聚酐，并且例如描述于WO 93/21906中。在该方法中，将待并入的物质分散或溶解于所选聚合物于诸如二氯甲烷的挥发性有机溶剂中的溶液中。通过搅拌将该混合物混悬于诸如硅油的有机油中以形成乳液。可通过该程序获得在1-300微米范围内的微球体。可并入微球体中的物质包括药物、杀虫剂、营养物、成像剂和金属化合物。
5.凝聚
使用凝聚技术包封各种物质的程序在本领域中，例如在GB-B-929 406；GB-B-92940 1；以及美国专利号3,266,987、4,794,000和4,460,563中是已知的。凝聚涉及将大分子溶液分成两个不混溶液体相。一个相是含有高浓度的聚合物包封剂(以及任选一种或多种活性物质)的致密凝聚相，而第二相含有低浓度的聚合物。在致密凝聚相内，聚合物包封剂形成纳米级或微米级液滴。凝聚可通过温度变化、添加非溶剂或添加微盐(单纯凝聚)、或通过添加另一聚合物由此形成互聚物复合物(复合凝聚)来诱导。
6.微球体的低温铸造
用于极低温铸造控制释放颗粒的方法描述于美国专利号5,019,400中。在该方法中，将聚合物溶解于任选具有一种或多种溶解或分散的活性物质的溶剂中。接着在低于使聚合物液滴冷冻的聚合物物质溶液的冷冻点的温度下将混合物雾化至含有液体非溶剂的容器中。当聚合物的液滴和非溶剂升温时，液滴中的溶剂解冻，并且被萃取至非溶剂中，从而导致微球体硬化。
7.相转换纳米包封(PIN)
也可使用相转换纳米包封(PIN)方法形成颗粒，其中将聚合物溶解于“良好”溶剂中，将待并入的物质(诸如药物)的精细颗粒混合或溶解于聚合物溶液中，并且将混合物倒入聚合物的强非溶剂中以在有利条件下自发产生聚合微球体，其中聚合物被颗粒包覆，或颗粒被分散在聚合物中。参见例如美国专利号6,143,211。所述方法可用于产生在广泛尺寸范围(包括例如约100纳米至约10微米)内的纳米颗粒和微米颗粒的单分散群体。
有利的是，乳液无需在沉淀之前形成。所述方法可用于由热塑性聚合物形成微球体。
8.乳化方法
在一些实施方案中，使用乳化溶剂蒸发方法制备颗粒。举例来说，将聚合物质溶解于水不混溶性有机溶剂中，并且与药物溶液或药物溶液的组合混合。在一些实施方案中，待包封的治疗剂、预防剂或诊断剂的溶液与聚合物溶液混合。聚合物可为但不限于以下中的一种或多种：PLA、PGA、PCL、它们的共聚物、聚丙烯酸酯、前面提及的聚乙二醇化聚合物。药物分子可包括一种或多种如上所述的缀合物和一种或多种额外活性物质。水不混溶性有机溶剂可为但不限于以下中的一种或多种：氯仿、二氯甲烷和酰基乙酸酯。可将药物溶解于但不限于以下中的一种或多种中：丙酮、乙醇、甲醇、异丙醇、乙腈和二甲亚砜(DMSO)。
添加水性溶液至所得聚合物溶液中以通过乳化产生乳化溶液。乳化技术可为但不限于探头声波处理或通过均质器进行均质化。
9.纳米沉淀
在另一实施方案中，使用纳米沉淀方法或微流体装置制备含有缀合物的纳米颗粒。使含有缀合物的聚合物质与药物或药物组合在任选含有额外聚合物的水混溶性有机溶剂中混合。额外聚合物可为但不限于以下中的一种或多种：PLA、PGA、PCL、它们的共聚物、聚丙烯酸酯、前面提及的聚乙二醇化聚合物。水混溶性有机溶剂可为但不限于以下中的一种或多种：丙酮、乙醇、甲醇、异丙醇、乙腈和二甲亚砜(DMSO)。接着添加所得混合物溶液至诸如水性溶液的聚合物非溶剂中以产生纳米颗粒溶液。
10.微流控技术
使用微流控技术制备颗粒的方法在本领域中是已知的。适合的方法包括美国专利申请公布号2010/0022680A1中所述的那些。一般来说，微流体装置包括至少两个汇合到混合器具中的通道。通道通常通过光刻、蚀刻、压印或模制聚合物表面来形成。将流体源连接至各通道，并且向所述源施加压力导致流体在通道中流动。可通过注射器、泵和/或重力来施加压力。具有聚合物、靶向部分、脂质、药物、有效载荷等的溶液的进入流汇合并混合，并且使所得混合物与聚合物非溶剂溶液组合以形成具有所需尺寸和所需的各部分在表面上的密度的颗粒。通过改变进入通道中的压力和流速以及流体源的性质和组成，可产生具有可重现尺寸和结构的颗粒。
ii.脂质颗粒
制备脂质颗粒的方法在本领域中是已知的。脂质颗粒可为使用本领域中已知的任何适合方法制备的脂质胶束、脂质体或固体脂质颗粒。用于产生的包封活性物质的脂质颗粒的常见技术包括但不限于高压均质化技术、超临界流体方法、乳化方法、溶剂扩散方法和喷雾干燥。以下呈现对这些方法的简要概述。
1.高压均质化(HPH)方法
高压均质化是一种可靠且强力技术，其用于产生具有窄尺寸分布的较小脂质颗粒，包括脂质胶束、脂质体和固体脂质颗粒。高压均质器用高压(100–2000巴)推动液体穿过狭窄间隙(在几微米的范围内)。流体可含有在室温下是液体的脂质或在室温下是固体的脂质的熔融物。流体在极短距离上加速至极高速度(超过1000Km/h)。这产生高剪切应力和空化力，破坏颗粒通常下降至亚微米范围。通常，使用5-10％脂质含量，但也已探究多达40％的脂质含量。
两种HPH方法是热均质化和冷均质化，以在大量的脂质溶液或熔融物中混合药物的相同构思起作用。
a.热均质化：
热均质化在高于脂质的熔点的温度下进行，并且因此可被视为乳液的均质化。通过高剪切混合获得药物装载的脂质熔融物和乳化剂水相的预乳液。在高于脂质的熔点的温度下进行预乳液的HPH。可调整许多参数(包括温度、压力和循环数)以产生具有所需尺寸的脂质颗粒。一般来说，较高温度由于内相的粘度降低而导致颗粒尺寸较低。然而，高温使药物和载体的降解速率增加。增加均质化压力或循环数常由于颗粒具有高动能而导致颗粒尺寸增加。
b.冷均质化
冷均质化已被开发为热均质化的替代方案。冷均质化在均质化期间没有遇到诸如温度诱导的药物降解或药物分布至水相中的问题。冷均质化特别适用于固体脂质颗粒，但可在略微修改下应用于产生脂质体和脂质胶束。在该技术中，冷却含有药物的脂质熔融物，将固体脂质研磨成脂质微米颗粒，并且将这些脂质微米颗粒分散在冷表面活性剂溶液中，从而产生预混悬液。在室温或低于室温下使预混悬液均质化，其中重力足够强以将脂质微米颗粒直接破碎成固体脂质纳米颗粒。
2.超声处理/高速均质化方法
可通过超声处理/高速均质化制备脂质颗粒，包括脂质胶束、脂质体和固体脂质颗粒。超声处理与高速均质化两者的组合特别适用于产生较小的脂质颗粒。通过该方法，形成在10nm至200nm(例如50nm至100nm)的尺寸范围内的脂质体。
3.溶剂蒸发方法
可通过溶剂蒸发方法制备脂质颗粒。将亲脂性物质溶解于在水相中乳化的水不混溶性有机溶剂(例如环己烷)中。在蒸发溶剂后，因脂质在水性介质中沉淀而形成颗粒分散液。诸如温度、压力、溶剂选择的参数可用于控制颗粒尺寸和分布。可通过增加/降低压力或增加/降低温度来调整溶剂蒸发速率。
4.溶剂乳化-扩散方法
可通过溶剂乳化-扩散方法制备脂质颗粒。首先将脂质溶解于诸如乙醇和丙酮的有机相中。酸性水相用于调整ζ电位以诱导脂质凝聚。连续流动模式允许水和醇的连续扩散，从而降低脂质溶解性，这导致热力学不稳定性并产生脂质体。
5.超临界流体方法
可由超临界流体方法制备脂质颗粒，包括脂质体和固体脂质颗粒。超临界流体方法具有替代其他制备方法中使用的有机溶剂或降低其他制备方法中使用的有机溶剂的量的优势。可在高压下将脂质、待包封的活性物质和赋形剂在超临界溶剂中溶剂化。超临界溶剂最常用的是CO2，但其他超临界溶剂在本领域中是已知的。为增加脂质的溶解性，可使用少量共溶剂。乙醇是常见的共溶剂，但可使用通常视为对于制剂安全的其他小有机溶剂。可通过使超临界溶液膨胀或通过注射至非溶剂水相中来获得脂质颗粒、脂质胶束、脂质体或固体脂质颗粒。可通过调整超临界溶剂、共溶剂、非溶剂、温度、压力等来控制颗粒形成和尺寸分布。
6.基于微乳化的方法
用于制备脂质颗粒的基于微乳化的方法在本领域中是已知的。这些方法基于稀释多相(通常是两相)体系。用于产生脂质颗粒的乳化方法通常涉及通过添加少量水性介质至较大体积的含有脂质的不混溶性有机溶液中来形成油包水乳液。搅拌混合物以使水性介质以微小的液滴形式分散在整个有机溶剂中，并且脂质在有机相与水相之间的边界处将它自身排列成单层。通过压力、温度、施加的搅拌和存在的脂质的量来控制液滴的尺寸。
油包水乳液可通过形成双重乳液来转变成脂质体混悬液。在双重乳化中，添加含有水滴的有机溶液至大体积的水性介质中并搅拌，从而产生水包油包水乳液。可通过选择脂质、温度、压力、共表面活性剂、溶剂等及其量来控制形成的脂质颗粒的尺寸和类型。
7.喷雾干燥方法
可使用与上文描述的用于制备聚合颗粒的那些方法类似的喷雾干燥方法来产生固体脂质颗粒。通常，该方法与熔点高于70℃的脂质一起使用。
在一些实施方案中，可使用单水包油乳化方法将本发明缀合物包封在聚合颗粒中。作为一非限制性实例，将缀合物和适合的聚合物或嵌段共聚物或聚合物/嵌段共聚物的混合物溶解于有机溶剂(诸如但不限于二氯甲烷(DCM)、乙酸乙酯(EtAc)或氯仿)中以形成油相。可使用诸如但不限于二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈(CAN)或苯甲醇(BA)的共溶剂来控制颗粒的尺寸和/或溶解缀合物。制剂中使用的聚合物可包括但不限于PLA97-b-PEG5、PLA35-b-PEG5和PLA16-b-PEG5共聚物。
在一些实施方案中，可通过改变本发明缀合物的亲脂性制备颗粒制剂。可通过使用缀合物与不同反离子的疏水性离子对或疏水性离子配对(HIP)来改变亲脂性。HIP改变本发明缀合物的溶解性。水溶性可下降，而在有机相中的溶解性可增加。
可使用任何适合的试剂来提供反离子以与本发明缀合物形成HIP复合物。在一些实施方案中，HIP复合物可在配制颗粒之前形成。
V.使用缀合物和颗粒的方法
适当时可施用如本文所述的缀合物或颗粒以治疗任何过度增生性疾病、代谢疾病、感染性疾病或癌症。制剂可用于免疫。可通过注射、口服或局部，通常向粘膜表面(肺、鼻、口、颊、舌下、经阴道、经直肠)或向眼部(眼内或经眼)施用制剂。
在各种实施方案中，提供用于治疗患有癌症的受试者的方法，其中该方法包括向患有癌症、被怀疑患有癌症、或具有癌症易患性的受试者施用治疗有效量的如本文所述的缀合物或颗粒。根据本发明，癌症包括特征在于细胞增殖不受控制(例如过度增殖)的任何疾病或不适。癌症的特征可在于肿瘤(例如实体肿瘤)或任何赘生物。
在一些实施方案中，癌症是实体肿瘤。大药物分子在实体肿瘤中的渗透有限。大药物分子的渗透速度很慢。另一方面，小分子如本发明的缀合物可以快速且更深地渗透实体肿瘤。关于药物的渗透深度，尽管具有更持久的药物动力学，但大分子渗透较少。小分子例如本发明的缀合物渗透更深。Dreher等人(Dreher等,JNCI,vol.98(5):335(2006)，其内容通过引用整体并入本文)研究了具有不同大小的葡聚糖向肿瘤异种移植物中的渗透。如Dreher的图6(参见本申请的图1)和表1所概述的，分子量为3.3kDa或10kDa的葡聚糖显示出快速深入地渗透到肿瘤组织中(>35um从肿瘤的血管表面起)。然而，40kDa、70kDa或2mDa大小的葡聚糖渗透远小于3.3kDa或10kDa的葡聚糖。70kDa的葡聚糖仅达到距肿瘤的血管表面约15um。本发明的缀合物具有与3.3kDa和10kDa葡聚糖相当的分子量，而抗体药物缀合物具有至少与70kDa葡聚糖一样大的分子量。因此，本发明的缀合物可以深入且迅速地渗透到实体肿瘤的核/中心。
在一个实施方案中，本发明的缀合物到达实体肿瘤中距肿瘤的血管表面至少约25μm、约30μm、约35μm、约40μm、约45μm、约50μm、约75μm、约100μm、约150μm、约200μm、约250μm、约300μm、约400μm、约500μm、约600μm、约700μm、约800μm、约900μm、约1000μm、约1100μm、约1200μm、约1300μm、约1400μm或约1500μm。零距离被定义为肿瘤的血管表面，并且每个大于零的距离被定义为在三维中测量的到最近血管表面的距离。
在另一个实施方案中，本发明的缀合物渗透至肿瘤的核。如本文所用，肿瘤的“核”是指肿瘤的中心区域。从肿瘤的核区域的任何部分到肿瘤的血管表面的距离为肿瘤的长度或宽度的约30％至约50％。从肿瘤的核区域的任何部分到肿瘤的中心点的距离小于肿瘤长度或宽度的约20％。肿瘤的核区域大致是肿瘤的中心1/3。
在另一个实施方案中，本发明的缀合物本发明的缀合物渗透至实体肿瘤的中间。如本文所提到的，肿瘤的“中间”是指肿瘤的中间区域。从肿瘤的中间区域的任何部分到肿瘤的血管表面的距离为肿瘤的长度或宽度的约15％至约30％。从肿瘤中间区域的任何部分到肿瘤中心点的距离为肿瘤长度或宽度的约20％至约35％。肿瘤的中间区域大致位于肿瘤的中心1/3和肿瘤的外边1/3之间。
在一些实施方案中，受试者可在其他情况下没有用缀合物或颗粒治疗的适应症。在一些实施方案中，方法包括使用癌细胞，包括但不限于哺乳动物癌细胞。在一些情况下，哺乳动物癌细胞是人癌细胞。
在一些实施方案中，已发现本发明教导的缀合物或颗粒抑制癌症和/或肿瘤生长。它们也可降低包括细胞增殖、侵袭性和/或转移，由此致使它们适用于治疗癌症。
在一些实施方案中，本发明教导的缀合物或颗粒可用于防止肿瘤或癌的生长，和/或防止肿瘤或癌的转移。在一些实施方案中，本发明教导的组合物可用于使癌萎缩或破坏癌。
在一些实施方案中，本文提供的缀合物或颗粒适用于抑制癌细胞的增殖。在一些实施方案中，本文提供的缀合物或颗粒适用于抑制细胞增殖，例如抑制细胞增殖的速率，防止细胞增殖，和/或诱导细胞死亡。一般来说，如本文所述的缀合物或颗粒可抑制癌细胞的细胞增殖，或抑制癌细胞的增殖和/或诱导癌细胞的细胞死亡两者。在一些实施方案中，与未经处理的细胞相比，用本发明的缀合物或颗粒处理后，细胞增殖减少至少约25％、约50％、约75％或约90％。在一些实施方案中，与未经处理的细胞相比，用本发明的缀合物或颗粒处理后，细胞周期停滞标志物磷酸化组蛋白H3(PH3或PHH3)增加了至少约50％、约75％、约100％、约200％、约400％或约600％。在一些实施方案中，与未经处理的细胞相比，用本发明的缀合物或颗粒处理后，细胞凋亡标志物裂解型caspase-3(CC3)增加了至少50％、约75％、约100％、约200％、约400％或约600％。
此外，在一些实施方案中，本发明的缀合物或颗粒在多种类型的肿瘤中有效抑制肿瘤生长，无论是以尺寸净值(重量、表面积或体积)还是以随时间变化的速率来测量。
在一些实施方案中，用本发明的缀合物或颗粒处理后，肿瘤的尺寸减少了约60％或更多。在一些实施方案中，按重量和/或面积和/或体积测量，肿瘤的尺寸减少了至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、至少约100％。
可通过本发明教导的方法治疗的癌症通常发生在哺乳动物中。哺乳动物包括例如人、非人灵长类动物、狗、猫、大鼠、小鼠、兔、雪貂、豚鼠、马、猪、绵羊、山羊和牛。在各种实施方案中，癌症是肺癌、乳腺癌(例如突变体BRCA1和/或突变体BRCA2乳腺癌、非BRCA相关乳腺癌)、结肠直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、前列腺癌、宫颈癌、肾癌、白血病、中枢神经系统癌、骨髓瘤和黑素瘤。
在一些实施方案中，癌症是神经内分泌癌症，诸如但不限于小细胞肺癌(SCLC)、肾上腺髓质肿瘤(例如，嗜铬细胞瘤、成神经细胞瘤、神经节细胞瘤或副神经节瘤)、胃肠胰腺神经内分泌肿瘤(例如类癌、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、血管活性肠多肽分泌性肿瘤、胰多肽分泌性肿瘤或无功能性胃肠胰腺肿瘤)、甲状腺髓样癌、皮肤Merkel细胞瘤、垂体腺瘤和胰腺癌。生长激素抑制素受体SSTR2在50-90％的神经内分泌癌症中过度表达。在一些实施方案中，神经内分泌癌症是原发性神经内分泌癌症。在一些实施方案中，神经内分泌癌症是神经内分泌转移。神经内分泌转移可以在受试者的肝、肺、骨或脑中。在某些实施方案中，癌症是脑癌、人肺癌、卵巢癌、胰腺癌或结肠直肠癌。
在一个实施方案中，本文所述的缀合物或颗粒或含有本文所述的缀合物或颗粒的制剂用于治疗小细胞肺癌。约12％-15％的肺癌患者患有小细胞肺癌。转移性小细胞肺癌的生存率很低。确诊后五年生存率低于5％。在美国，小细胞肺癌的发病率约为26K-30K。在这些患者中，约40％-80％是SSTR2阳性。
在一些实施方案中，本文所述的缀合物或颗粒或含有本文所述的缀合物或颗粒的制剂用于治疗表达或过度表达生长激素抑制素受体的肿瘤患者。这样的患者可以用本领域已知的任何方法鉴定，例如但不限于使用放射性核素成像剂、放射性标记的生长激素抑制素类似物成像剂、SSTR闪烁扫描术或SSTR正电子发射断层扫描术(PET)。在一个实施方案中，111铟(铟111)标记的喷曲肽(pentetreotide)闪烁扫描术(OctreoScanTM)用于鉴定表达SSTR的肿瘤的患者。在另一个实施方案中，在PET成像中使用诸如68Ga-DOTA-TATE、68Ga-DOTA-TOC或68Ga-DOTA-NOC的68Ga缀合物来鉴定表达SSTR的肿瘤患者。用铟111标记的喷曲肽闪烁扫描术检测显示阳性扫描结果的患者用本发明的缀合物或颗粒治疗。
在一个实施方案中，本文所述的缀合物或颗粒或含有本文所述的缀合物或颗粒的制剂用于治疗具有组织学证实的局部晚期或转移性高级神经内分泌癌(NEC)的患者。在一些实施方案中，患者可具有未知的原发性或任何肺外部位的小细胞和大细胞神经内分泌癌。在一些实施方案中，如果Ki-67>30％，则患者可具有明确识别的G3神经内分泌肿瘤。在一些实施方案中，如果是小细胞或大细胞组织学，则患者可以具有前列腺的神经内分泌前列腺癌(原发(de novo)或治疗-紧急)。在一些实施方案中，患者可具有混合肿瘤，例如，如果高级(小细胞或大细胞)NEC组分占>50％的原始样品或随后的活组织检查，则患者可具有混合性腺神经内分泌癌(MANEC)或混合性鳞状细胞或腺泡细胞NEC。在一些实施方案中，患者可具有去势抵抗性前列腺癌(castrate resistant prostate cancer,CRPC)。在一些实施方案中，可以通过具有或不具有任何前述病症来选择或划分患者。
在一些实施方案中，将缀合物57或其药学上可接受的盐施用到诊断患有胰腺癌、胃肠(GI)癌(如小肠癌(small intestine cancer)、胃癌(stomach cancer)、直肠癌、回肠癌、结肠癌、小肠癌(small bowel cancer)、大肠癌、胃癌(gastric cancer)等)、肺癌(如肺部的大细胞神经内分泌癌(LCNEC)、小细胞肺癌(SCLC)等)或嗜铬细胞瘤的患者。在一些实施方案中，在这种治疗之前，治疗的患者可能已经或可能尚未被诊断患有任何前述病症。
在一些实施方案中，患者患有转移性癌。在一些实施方案中，患者转移到淋巴结、肝、肺、腹膜、背部、骨、子宫外软组织、肾或脊柱。在一些实施方案中，在这种治疗之前，治疗的患者可能已经或可能尚未被诊断患有任何前述病症。
在一些实施方案中，患者已经接受在先癌症治疗疗法。在一些实施方案中，患者之前已经用lancreotide、mTOR激酶抑制剂、镥氧奥曲肽(镥-177(Lu-177)标记的生长激素抑制素类似物肽)、舒尼替尼、环磷酰胺、长春新碱、达卡巴嗪、奥曲肽、卡铂(carbo)、链脲霉素、FOLFIRI疗法(包含亚叶酸(例如甲酰四氢叶酸)、氟尿嘧啶(5-FU)和伊立替康(例如Camptosar)的联合疗法)治疗。
在一些实施方案中，患者是男性。在一些实施方案中，患者是女性。在一些实施方案中，患者至少18岁。在一些实施方案中，患者至少40岁。在一些实施方案中，患者至少60岁。
本发明的缀合物或颗粒的特征是对生物体相对较低的毒性，同时保持抑制例如减缓或停止肿瘤生长的功效。如本文所用，“毒性”是指物质或组合物对细胞、组织生物体或细胞环境有害或有毒的能力。低毒性是指物质或组合物对细胞、组织生物体或细胞环境有害或有毒的能力降低。此类降低的毒性或低毒性可以是相对于标准量度、相对于治疗或相对于不存在治疗。例如，本发明的缀合物或颗粒可具有比单独施用的活性物质部分Z更低的毒性。对于包含DM1的缀合物，其毒性低于单独施用的DM1。
可进一步相对于受试者的重量减轻来测量毒性，其中重量减轻超过体重的15％、超过体重的20％或超过体重的30％指示有毒性。也可测量其他毒性度量，诸如患者表现度量，包括嗜睡和全身不适。嗜中性粒细胞减少症、血小板减少症、白细胞(WBC)计数、全血细胞(CBC)计数也可能是毒性的度量。毒性的药理学指标包括升高的转氨酶(AST/ALT)水平、神经毒性、肾损害、GI损害等。在一个实施方案中，本发明的缀合物或颗粒不会引起受试者体重的显著变化。用本发明的缀合物或颗粒治疗后，受试者的体重减轻小于约30％、约20％、约15％、约10％或约5％。在另一个实施方案中，本发明的缀合物或颗粒不会引起受试者的AST/ALT水平的显著增加。用本发明的缀合物或颗粒治疗后，受试者的AST或ALT水平增加少于约30％、约20％、约15％、约10％或约5％。在又一个实施方案中，用本发明的缀合物或颗粒治疗后，本发明的缀合物或颗粒不引起受试者的CBC或WBC计数的显著变化。用本发明的缀合物或颗粒治疗后，受试者的CBC或WBC水平降低少于约30％、约20％、约15％、约10％或约5％。
在一些实施方案中，将缀合物57施用于患者，并且测量患者的白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白、血小板、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、血尿素氮(BUN)、肌酐、葡萄糖、白蛋白、总蛋白、钙水平、镁水平、碱性磷酸酶、总胆红素、直接胆红素、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、淀粉酶、脂肪酶、国际标准化比值(INR)、凝血酶原时间(PT)和/或活化部分凝血活酶时间(aPTT)中的任何一种或多种。
在一些实施方案中，包含缀合物57的药物组合物的治疗相关副作用(AE)可包括恶心、疲劳、丙氨酸转氨酶增加、便秘、腹泻、天冬氨酸转氨酶增加、发热、腹胀、腹痛、贫血、关节痛、血液碱性磷酸酶增加、血液肌酐增加、食欲减退、消化不良、高血压、低白蛋白血症、低血压、失眠、脂肪酶增加、四肢疼痛、感觉异常、盆腔疼痛和/或尿路感染。
在一些实施方案中，少于30％的患者群体具有任何一种或多种治疗相关副作用。在一些实施方案中，单个患者在少于整个治疗时间的30％的时间内经历了治疗相关副作用。
在一些实施方案中，用缀合物57治疗的患者具有较少的、减少的循环肿瘤细胞或没有循环肿瘤细胞。
在一些实施方案中，缀合物57在患者中具有约1.8小时的半衰期。
在一些实施方案中，本发明的缀合物或颗粒与至少一种额外的活性物质组合。活性物质可以是任何适合的药物。它可以选自本文所述的任何活性物质，如用于治疗癌症的药物。它也可能是癌症症状缓解药物。症状缓解药物的非限制性实例包括：奥曲肽或兰瑞肽；干扰素、塞庚啶(cypoheptadine)或任何其他抗组胺剂。在一些实施方案中，本发明的缀合物或颗粒与额外的活性物质不具有药物-药物干扰。在一个实施方案中，本发明的缀合物或颗粒不抑制细胞色素P450(CYP)同工酶。CYP同工酶可以包括CYP3A4咪达唑仑(Midazolam)、CYP3A4睾酮、CYP2C9、CYP2D6、CYP1A2、CYP2C8、CYP2B6和CYP2C19。额外的活性物质可以伴随本发明的缀合物或颗粒施用。
在一些实施方案中，额外的活性物质可能不结合任何生长激素抑制素受体。在一个实施方案中，额外的活性物质是癌症症状缓解药物。症状缓解药物可以减少腹泻或化疗或放疗的副作用。在一个实例中，本发明的缀合物或颗粒可以与用于类癌综合症的症状缓解药物如特罗司他(telotristat)或马尿酸特罗司他(telotristat etiprate)(LX1032,)组合。马尿酸特罗司他是特罗司他结晶的马尿酸盐，如Chen等人的WO2013059146中所公开的，其内容通过引用的方式整体并入本文。特罗司他及其盐和结晶形式可通过本领域已知的方法获得(参见Devasagayaraj等的US 7709493，其内容通过引用的方式整体并入本文)。US 7709493中公开的任何其他化合物可以与本发明的缀合物或颗粒组合。
特罗司他：
在另一个实例中，本发明的缀合物或颗粒可以与中等剂量的化疗剂例如丝裂霉素C、长春碱和顺铂组合(参见Ellis等,Br J Cancer,vol.71(2):366–370(1995)，其内容通过引用的方式整体并入本文)。
本文所述的缀合物或颗粒或含有本文所述的缀合物或颗粒的制剂可用于向有需要的个体或患者选择性组织递送治疗剂、预防剂或诊断剂。例如，本发明的DM1缀合物或颗粒用于将DM1递送至选择性组织。这些组织可以是肿瘤组织。可调整剂量方案以提供最优的所需响应(例如治疗或预防响应)。举例来说，可施用单次推注，可随时间施用若干分次剂量，或如由治疗情况的紧急性所示，可按比例降低或增加剂量。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为用于待治疗的哺乳动物受试者的单位剂量的物理离散单元；各单元含有经计算以产生所需治疗的预定量的活性化合物。
在各种实施方案中，以控制方式释放颗粒内含有的缀合物。释放可在体外或在体内。举例来说，可在某些条件下对颗粒进行释放测试，包括美国药典中指定的那些及其变化形式。
在各种实施方案中，在使颗粒暴露于释放测试的条件之后的第一小时内，小于约90％、小于约80％、小于约70％、小于约60％、小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％的颗粒内含有的缀合物被释放。在一些实施方案中，在使颗粒暴露于释放测试的条件之后的第一小时内，小于约90％、小于约80％、小于约70％、小于约60％或小于约50％的颗粒内含有的缀合物被释放。在某些实施方案中，在使颗粒暴露于释放测试的条件之后的第一小时内，小于约50％的颗粒内含有的缀合物被释放。
关于缀合物在体内释放，举例来说，可保护向受试者施用的颗粒内含有的缀合物不接触受试者的身体，并且身体也可与缀合物隔离直至缀合物从颗粒释放。
因此，在一些实施方案中，缀合物可基本上包含在颗粒内直至颗粒被递送至受试者的身体里。举例来说，在颗粒被递送至受试者的身体(例如治疗部位)里之前，总缀合物的小于约90％、小于约80％、小于约70％、小于约60％、小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％、小于约15％、小于约10％、小于约5％或小于约1％从颗粒释放。在一些实施方案中，缀合物可历经延长的时间周期或通过爆发方式(例如大量缀合物在短时间周期内被释放，在之后的一段时间基本上不释放缀合物)释放。举例来说，缀合物可历经6小时、12小时、24小时或48小时释放。在某些实施方案中，缀合物历经一周或一个月释放。
VI.试剂盒和装置
本发明提供用于方便地和/或有效地执行本发明方法的多种试剂盒和装置。通常，试剂盒包括足够量和/或数目的组分以允许使用者对受试者进行多次治疗和/或进行多次实验。
在一个实施方案中，本发明提供用于在体外或在体内抑制肿瘤细胞生长的试剂盒，其包括本发明的缀合物和/或颗粒或本发明的缀合物和/或颗粒的组合，任选与任何其他活性物质组合。
试剂盒可还包括包装和说明书和/或形成制剂组合物的递送剂。递送剂可包括盐水、缓冲溶液或本文公开的任何递送剂。可改变各组分的量以使得能够获得一致、可重现、较高浓度盐水或单纯缓冲液制剂。也可改变组分以增加缀合物和/或颗粒历经一段时间周期和/或在多种条件下在缓冲溶液中的稳定性。
本发明提供可并入本发明的缀合物和/或颗粒的装置。这些装置含有可用于立刻递送至有需要的受试者(诸如人患者)的稳定制剂。在一些实施方案中，受试者患有癌症。
装置的非限制性实例包括泵、导管、针、透皮贴剂、加压嗅觉递送装置、离子电渗装置、多层微流体装置。装置可用于根据单次、多次或分次给药方案来递送本发明的缀合物和/或颗粒。装置可用于穿过生物组织、真皮内、皮下或肌肉内递送本发明的缀合物和/或颗粒。
VII.定义
如本文所用的术语“化合物”意图包括描绘的结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。在本申请中，化合物可与缀合物互换使用。因此，如本文所用的缀合物也意在包括描绘的结构的所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。
本文所述的化合物可以是不对称的(例如具有一个或多个立体中心)。除非另外指示，否则意指所有立体异构体，诸如对映异构体和非对映异构体。含有不对称取代的碳原子的本公开化合物可以光学活性或外消旋形式分离。关于如何从光学活性起始物质制备光学活性形式的方法在本领域中是已知的，诸如通过拆分外消旋混合物或通过立体选择性合成。在本文所述的化合物中也可存在烯烃、C＝N双键等的许多几何异构体，并且所有此类稳定异构体都涵盖在本公开中。描述本公开化合物的顺式和反式几何异构体，并且可以异构体的混合物形式或以分离的异构形式分离。
本公开化合物还包括互变异构形式。互变异构形式由单键与相邻双键的交换以及伴随的质子迁移所产生。互变异构形式包括质子移变互变异构体，其是具有相同经验式和总电荷的异构质子化状态。质子移变互变异构体的实例包括酮–烯醇对、酰胺–亚氨酸对、内酰胺–内酰亚胺对、酰胺–亚氨酸对、烯胺–亚胺对和其中质子可占据杂环体系的两个或更多个位置的环状形式，诸如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-1,2,4-三唑、2H-1,2,4-三唑和4H-1,2,4-三唑、1H-异吲哚和2H-异吲哚、以及1H-吡唑和2H-吡唑。互变异构形式可处于平衡状态或通过适当的取代在空间上锁定为一种形式。
本公开化合物还包括存在于中间体或最终化合物中的原子的所有同位素。“同位素”是指具有相同原子序数，但由于核中的中子数目不同而具有不同质量数的原子。举例来说，氢的同位素包括氚和氘。
可通过常规方法制备与溶剂或水分子组合的本公开的化合物和盐以形成溶剂合物和水合物。
如本文所用的术语“受试者”或“患者”是指可例如出于实验、治疗、诊断和/或预防目的向其施用颗粒的任何生物体。典型受试者包括动物(例如哺乳动物，诸如小鼠、大鼠、兔、豚鼠、牛、猪、绵羊、马、狗、猫、仓鼠、美洲驼、非人灵长类动物和人)。
如本文所用的术语“治疗”或“预防”可包括预防疾病、病症或病况在可易患所述疾病、病症和/或病况但尚未被诊断为患有所述疾病、病症或病况的动物中发生；抑制所述疾病、病症或病况，例如阻碍它的进展；以及减轻所述疾病、病症或病况，例如导致所述疾病、病症和/或病况的消退。治疗疾病、病症或病况可包括改善特定疾病、病症或病况的至少一种症状，即使未影响潜在的病理生理学，诸如通过施用止痛剂来治疗受试者的疼痛，即使此药剂并不治疗疼痛的病因。
如本文所用的“靶标”将意指靶向的构建体所结合的部位。靶标可在体内或在体外。在某些实施方案中，靶标可为在白血病或肿瘤(例如脑、肺(小细胞和非小细胞)、卵巢、前列腺、乳腺和结肠的肿瘤以及其他癌瘤和肉瘤)中发现的癌细胞。在其他实施方案中，靶标可指靶向部分或配体所结合的分子结构，诸如半抗原、表位、受体、dsDNA片段、碳水化合物或酶。靶标可为组织类型，例如神经元组织、肠组织、胰腺组织、肝、肾、前列腺、卵巢、肺、骨髓或乳腺组织。
可充当方法或缀合物或颗粒的靶标的“靶标细胞”通常是动物细胞，例如哺乳动物细胞。本发明方法可用于在体外(即在细胞培养中)或在体内(其中细胞形成动物组织的一部分或以其他方式存在于动物组织中)改变活细胞的细胞功能。因此，靶标细胞可包括例如血液、淋巴组织、内衬于消化道(诸如口腔和咽部粘膜)的细胞、形成小肠的绒毛的细胞、内衬于大肠的细胞、内衬于动物的呼吸系统(鼻部通道/肺)的细胞(其可通过吸入本发明物来接触)、真皮/表皮细胞、阴道和直肠的细胞、内部器官的细胞(包括胎盘的细胞)和所谓的血/脑屏障等。一般来说，靶标细胞表达至少一种类型的SSTR。在一些实施方案中，靶标细胞可为以下细胞：其表达SSTR并被本文所述的缀合物靶向，并且靠近受缀合物的活性物质的释放影响的细胞。举例来说，接近于肿瘤的表达SSTR的血管可为靶标，而在该部位处释放的活性物质将影响所述肿瘤。
术语“治疗作用”是本领域公知的，并且是指由药理活性物质在动物、特别是哺乳动物、并且更特别是人中引起的局部或全身作用。因此，所述术语意指意图用于在动物(例如人)中诊断、治愈、缓和、治疗或预防疾病、病症或病况中增强期望的身体或心理发展和状况的任何物质。
术语“调节”是本领域公知的，并且是指对响应的上调(即活化或刺激)、下调(即抑制或遏制)或以组合或分开方式的这两者。调节通常是相较于可在治疗实体内部或外部的基线或参照。
如本文所用的“胃肠外施用”意指通过除通过消化道(经肠)或非侵入性局部途径以外的任何方法来施用。举例来说，胃肠外施用可包括向患者静脉内、真皮内、腹膜内、胸膜内、气管内、骨内、脑内、鞘内、肌肉内、皮下、结膜下、通过注射以及通过输注施用。
如本文所用的“局部施用”意指向皮肤、孔窍或粘膜的非侵入性施用。局部施用可局部递送，即治疗剂可在递送区域中提供局部作用，而无需全身性暴露或伴有最小程度的全身性暴露。一些局部制剂可提供全身作用，例如经由吸收进入个体的血流中。局部施用可包括但不限于皮肤性和经皮施用、经颊施用、鼻内施用、阴道内施用、膀胱内施用、经眼施用和经直肠施用。
如本文所用的“经肠施用”意指经由胃肠道吸收来施用。经肠施用可包括口服和舌下施用、经胃施用或经直肠施用。
如本文所用的“肺部施用”意指经由吸入或气管内施用来施用到肺中。如本文所用，术语“吸入”是指将空气摄取至肺泡中。空气的摄取可通过口或鼻发生。
如在本文中可互换使用的术语“足够”和“有效”是指实现一种或多种所需结果需要的量(例如质量、体积、剂量、浓度和/或时间周期)。“治疗有效量”是为实现至少一种症状或特定病况或病症的可测量的改善或预防，实现预期寿命的可测量的增加，或大体上改善患者生活质量所需的至少最小浓度。因此，治疗有效量取决于具体生物活性分子和待治疗的具体病况或病症。许多活性物质(诸如抗体)的治疗有效量在本领域中是已知的。本文所述的化合物和组合物例如用于治疗具体病症的治疗有效量可通过完全在诸如医师的本领域技术人员的技艺范围内的技术来确定。
如在本文中可互换使用的术语“生物活性物质”和“活性物质”包括但不限于在体内局部或全身起作用的生理或药理活性物质。生物活性物质是用于治疗(例如治疗剂)、预防(例如预防剂)、诊断(例如诊断剂)、治愈或缓和疾病或疾患的物质；影响身体的结构或功能的物质；或前药，所述前药在它们已被放置在预定生理环境中之后变得具有生物活性或更具活性。
术语“前药”是指在体外和/或在体内转化成生物活性形式的物质，包括小有机分子、肽、核酸或蛋白质。前药可具有适用性，因为在一些情况下，它们可比母体化合物(活性化合物)更易于施用。举例来说，前药可通过口服施用而具有生物可用性，而母体化合物并非如此。相较于母体药物，前药也可在药物组合物中具有改善的溶解性。相比于母体，前药也可具有较小毒性。前药可通过各种机理来转化成母体药物，所述机理包括酶促过程和代谢水解。Harper,N.J.(1962)Drug Latentiation,Jucker编Progress in Drug Research,4:221-294；Morozowich等(1977)Application of Physical Organic Principles toProdrug Design,E.B.Roche编Design of Biopharmaceutical Properties throughProdrugs and Analogs,APhA；Acad.Pharm.Sci.；E.B.Roche编(1977)BioreversibleCarriers in Drug in Drug Design,Theory and Application,APhA；H.Bundgaard编(1985)Design of Prodrugs,Elsevier；Wang等(1999)Prodrug approaches to theimproved delivery of peptide drug,Curr.Pharm.Design.5(4):265-287；Pauletti等(1997)Improvement in peptide bioavailability:Peptidomimetics and ProdrugStrategies,Adv.Drug.Delivery Rev.27:235-256；Mizen等(1998).The Use of Estersas Prodrugs for Oral Delivery ofβ-Lactam antibiotics,Pharm.Biotech.11:345-365；Gaignault等(1996)Designing Prodrugs and Bioprecursors I.Carrier Prodrugs,Pract.Med.Chem.671-696；M.Asgharnejad(2000).Improving Oral Drug Transport ViaProdrugs,G.L.Amidon,P.I.Lee和E.M.Topp编,Transport Processes in PharmaceuticalSystems,Marcell Dekker,第185-218页；Balant等(1990)Prodrugs for the improvementof drug absorption via different routes of administration,Eur.J.DrugMetab.Pharmacokinet.,15(2):143-53；Balimane和Sinko(1999).Involvement ofmultiple transporters in the oral absorption of nucleoside analogues,Adv.DrugDelivery Rev.,39(1-3):183-209；Browne(1997).Fosphenytoin(Cerebyx),Clin.Neuropharmacol.20(1):1-12；Bundgaard(1979).Bioreversible derivatizationof drugs--principle and applicability to improve the therapeutic effects ofdrugs,Arch.Pharm.Chemi.86(1):1-39；H.Bundgaard编(1985)Design of Prodrugs,NewYork:Elsevier；Fleisher等(1996)Improved oral drug delivery:solubilitylimitations overcome by the use of prodrugs,Adv.Drug Delivery Rev.19(2):115-130；Fleisher等(1985)Design of prodrugs for improved gastrointestinalabsorption by intestinal enzyme targeting,Methods Enzymol.112:360-81；FarquharD等(1983)Biologically Reversible Phosphate-Protective Groups,J.Pharm.Sci.,72(3):324-325；Han,H.K.等(2000)Targeted prodrug design to optimize drugdelivery,AAPS PharmSci.,2(1):E6；Sadzuka Y.(2000)Effective prodrug liposomeand conversion to active metabolite,Curr.Drug Metab.,1(1):31-48；D.M.Lambert(2000)Rationale and applications of lipids as prodrug carriers,Eur.J.Pharm.Sci.,11增刊2:S15-27；Wang,W.等(1999)Prodrug approaches to theimproved delivery of peptide drugs.Curr.Pharm.Des.,5(4):265-87。
如本文所用的术语“生物可相容”是指物质以及其任何代谢物或降解产物大体上对接受者无毒，并且对接受者不引起任何重大的不良作用。一般来说，生物可相容的物质是在向患者施用时不引发显著炎症性应答或免疫应答的物质。
如本文所用的术语“生物可降解”通常是指物质将在生理条件下降解或腐蚀成能够被受试者代谢、消除或排泄的较小单元或化学物质。降解时间随组成和形态而变。降解时间可为数小时至数周。
如本文所用的术语“药学上可接受的”是指根据诸如美国食品与药物管理局(U.S.Food and Drug Administration)的机构的指导方针，化合物、物质、组合物和/或剂型在合理医学判断的范围内适合用于与人类和动物的组织接触而无过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的益处/风险比率相称。如本文所用的“药学上可接受的载体”是指药物制剂的促进组合物在体内递送的所有组分。药学上可接受的载体包括但不限于稀释剂、防腐剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、膨胀剂、填充剂、稳定剂及其组合。
如本文所用的术语“分子量”通常是指物质的质量或平均质量。如果是聚合物或寡聚物，那么分子量可指本体聚合物的相对平均链长或相对链质量。在实践中，可以各种方式估计或表征聚合物和寡聚物的分子量，所述方式包括凝胶渗透色谱法(GPC)或毛细管粘度测定法。以不同于数均分子量(Mn)的重均分子量(Mw)来报告GPC分子量。毛细管粘度测定法以使用一组特定的浓度、温度和溶剂条件由稀聚合物溶液测定的比浓对数粘度形式提供分子量的估计值。
如本文所用的术语“小分子”通常是指分子量小于2000g/mol、小于1500g/mol、小于1000g/mol、小于800g/mol或小于500g/mol的有机分子。小分子是非聚合的和/或非寡聚的。
如本文所用的术语“亲水性”是指物质具有易与水相互作用的强极性基团。
如本文所用的术语“疏水性”是指物质对水缺乏亲和力；倾向于排斥和不吸收水以及不溶解于水中或与水混合。
如本文所用的术语“亲脂性”是指化合物对脂质具有亲和力。
如本文所用的术语“两亲性”是指分子组合亲水性质和亲脂(疏水)性质。如本文所用的“两亲性物质”是指含有疏水性或更具疏水性的寡聚物或聚合物(例如生物可降解的寡聚物或聚合物)和亲水性或更具亲水性的寡聚物或聚合物的物质。
如本文所用的术语“靶向部分”是指结合或定位于特定场所的部分。所述部分可为例如蛋白质、核酸、核酸类似物、碳水化合物或小分子。场所可为组织、特定细胞类型或亚细胞区室。在一些实施方案中，靶向部分可特异性结合所选分子。
如本文所用的术语“反应性偶合基团”是指能够与第二官能团反应以形成共价键的任何化学官能团。对反应性偶合基团的选择在本领域技术人员的能力范围内。反应性偶合基团的实例可包括伯胺(-NH2)和胺反应性连接基团，诸如异硫氰酸酯、异氰酸酯、酰基叠氮化物、NHS酯、磺酰氯、醛、乙二醛、环氧化物、环氧乙烷、碳酸酯、芳基卤化物、亚氨基酯、碳二亚胺、酐和氟苯基酯。这些缀合物中的大多数通过酰化或烷基化与胺缀合。反应性偶合基团的实例可包括醛(-COH)和醛反应性连接基团，诸如酰肼、烷氧基胺和伯胺。反应性偶合基团的实例可包括硫醇基团(-SH)和巯基反应性基团，诸如马来酰亚胺、卤代乙酰基和吡啶基二硫化物。反应性偶合基团的实例可包括光反应性偶合基团，诸如芳基叠氮化物或二氮丙啶。偶合反应可包括使用催化剂、热、pH缓冲剂、光或其组合。
如本文所用的术语“保护基”是指可被添加至和/或对另一所需官能团进行取代以保护所需官能团免遭某些反应条件，并且被选择性去除和/或置换以使所需官能团脱保护或暴露的官能团。保护基为本领域技术人员所知。适合的保护基可包括Greene和Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,(1991)中所述的那些。酸敏感性保护基包括二甲氧基三苯甲基(DMT)、氨基甲酸叔丁酯(tBoc)和三氟乙酰基(tFA)。碱敏感性保护基包括9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、异丁酰基(iBu)、苯甲酰基(Bz)和苯氧乙酰基(pac)。其他保护基包括乙酰胺基甲基、乙酰基、叔戊基氧基羰基、苄基、苄氧羰基、2-(4-联苯基)-2-丙基氧基羰基、2-溴苄氧羰基、叔丁基、叔丁氧羰基、1-苯甲氧羰基酰胺基-2,2.2-三氟乙基、2,6-二氯苄基、2-(3,5-二甲氧基苯基)-2-丙基氧基羰基、2,4-二硝基苯基、二硫杂丁二酰基、甲酰基、4-甲氧基苯磺酰基、4-甲氧基苄基、4-甲基苄基、邻硝基苯基亚磺酰基、2-苯基-2-丙基氧基羰基、α-2,4,5-四甲基苄氧羰基、对甲苯磺酰基、呫吨基、苄基酯、N-羟基琥珀酰亚胺酯、对硝基苄基酯、对硝基苯基酯、苯基酯、对硝基碳酸酯、对硝基苄基碳酸酯、三甲基甲硅烷基和五氯苯基酯。
如本文所用的术语“活化酯”是指羧酸的烷基酯，其中烷基是致使羰基易受携带氨基的分子亲核攻击的良好离去基团。因此，活化酯易受氨解，并且与胺反应以形成酰胺。活化酯含有羧酸酯基团-CO2R，其中R是离去基团。
术语“烷基”是指饱和脂族基团，包括直链烷基、支链烷基、环烷基(脂环族)基团、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。
在一些实施方案中，直链或支链烷基在它的骨架中具有30个或更少的碳原子(例如C1-C30(对于直链)、C3-C30(对于支链))、20个或更少、12个或更少、或7个或更少的碳原子。同样，在一些实施方案中，环烷基在它们的环结构中具有3-10个碳原子，例如在环结构中具有5、6或7个碳。如说明书、实施例和权利要求书通篇所用的术语“烷基”(或“低级烷基”)意图包括“未取代的烷基”与“取代的烷基”两者，其中后者是指具有一个或多个置换烃骨架的一个或多个碳上的氢的取代基的烷基部分。此类取代基包括但不限于卤素、羟基、羰基(诸如羧基、烷氧基羰基、甲酰基或酰基)、硫代羰基(诸如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)、烷氧基、磷酰基、磷酸酯基、膦酸酯基、次膦酸酯基、氨基、酰胺基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷基硫基、硫酸酯基、磺酸酯基、氨磺酰基、磺酰胺基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族或杂芳族部分。
除非另外指定碳的数目，否则如本文所用的“低级烷基”意指如上所定义的但在它的骨架结构中具有1至10个碳或1至6个碳原子的烷基。同样，“低级烯基”和“低级炔基”具有类似的链长度。在一些实施方案中，烷基是低级烷基。在一些实施方案中，在本文中指定为烷基的取代基是低级烷基。
本领域技术人员应了解在烃链上取代的部分在适当时可自身被取代。举例来说，取代的烷基的取代基可包括卤素、羟基、硝基、硫醇、氨基、叠氮基、亚氨基、酰胺基、磷酰基(包括膦酸酯基和次膦酸酯基)、磺酰基(包括硫酸酯基、磺酰胺基、氨磺酰基和磺酸酯基)和甲硅烷基以及醚、烷基硫基、羰基(包括酮、醛、羧酸酯和酯)、-CF3、-CN等。环烷基可以相同方式被取代。
如本文所用的术语“杂烷基”是指含有至少一个杂原子的直链或支链或环状含碳基团或其组合。适合的杂原子包括但不限于O、N、Si、P、Se、B和S，其中磷和硫原子任选被氧化，并且氮杂原子任选被季铵化。杂烷基可如上文对烷基所定义的那样被取代。
术语“烷基硫基”是指如上所定义的具有与其连接的硫基团的烷基。在一些实施方案中，“烷基硫基”部分用-S-烷基、-S-烯基和-S-炔基中的一个表示。代表性烷基硫基包括甲基硫基和乙基硫基。术语“烷基硫基”也涵盖环烷基、烯和环烯基团以及炔基团。“芳基硫基”是指芳基或杂芳基。烷基硫基可如上文对烷基所定义的那样被取代。
术语“烯基”和“炔基”是指在长度和可能的取代方面类似于上文描述的烷基，但分别含有至少一个双键或三键的不饱和脂族基团。
如本文所用的术语“烷氧基(alkoxyl/alkoxy)”是指如上所定义的具有与其连接的氧基团的烷基。代表性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基和叔丁氧基。“醚”是通过氧共价连接的两个烃。因此，烷基的致使该烷基成为醚的取代基是烷氧基或类似于烷氧基，诸如可用-O-烷基、-O-烯基和-O-炔基中的一个表示。芳氧基可用–O-芳基或O-杂芳基表示，其中芳基和杂芳基如下所定义。烷氧基和芳氧基可如上文对烷基所述的那样被取代。
术语“胺”和“氨基”是本领域公知的，并且是指未取代的胺与取代的胺两者，例如可用以下通式表示的部分：
其中R9、R10和R'10各自独立地表示氢、烷基、烯基、-(CH2)m-R8，或R9和R10连同它们所连接的N原子一起完成在环结构中具有4至8个原子的杂环；R8表示芳基、环烷基、环烯基、杂环或多环；并且m是0或在1至8范围内的整数。在一些实施方案中，R9或R10中仅一个可为羰基，例如R9、R10和氮一起不形成酰亚胺。在其他实施方案中，术语“胺”不涵盖酰胺，例如其中R9和R10中的一个表示羰基。在另外的实施方案中，R9和R10(以及任选R’10)各自独立地表示氢、烷基或环烷基、烯基或环烯基、或炔基。因此，如本文所用的术语“烷基胺”意指具有与其连接的取代的(如上文对烷基所述)或未取代的烷基的如上所定义的胺基团，即R9和R10中的至少一个是烷基。
术语“酰胺基”在本领域中公知为氨基取代的羰基，并且包括可用以下通式表示的部分：
其中R9和R10如上所定义。
如本文所用的“芳基”是指C5-C10元芳族、杂环、稠合芳族、稠合杂环、联芳族或联杂环环体系。从广义上来定义，如本文所用的“芳基”包括可包括0至4个杂原子的5、6、7、8、9和10元单环芳族基团，例如苯、吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、唑、噻唑、三唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等。在环结构中具有杂原子的那些芳基也可被称为“芳基杂环”或“杂芳族化合物”。芳族环可在一个或多个环位置处被一个或多个取代基取代，所述取代基包括但不限于卤素、叠氮化物、烷基、芳烷基、烯基、炔基、环烷基、羟基、烷氧基、氨基(或季铵化氨基)、硝基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯基、次膦酸酯基、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、酯、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3、-CN；及其组合。
术语“芳基”也包括具有两个或更多个环状环的多环体系，其中两个或更多个碳为两个邻接的环(即“稠环”)所共有，其中至少一个环是芳族，例如其他一个或多个环状环可为环烷基、环烯基、环炔基、芳基和/或杂环。杂环的实例包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基、苯并唑基、苯并唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3b]四氢呋喃、呋喃基、呋呫基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、假吲哚基(indolenyl)、二氢吲哚基、吲哚嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛红酰基、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异唑基、亚甲基二氧基苯基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、二唑基、1,2,3-二唑基、1,2,4-二唑基、1,2,5-二唑基、1,3,4-二唑基、唑烷基、唑基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、啡噻基、吩嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基和呫吨基。一个或多个环可如上文对“芳基”所定义的那样被取代。
如本文所用的术语“芳烷基”是指被芳基(例如芳族或杂芳族基团)取代的烷基。
如本文所用的术语“碳环”是指其中环的每个原子均是碳的芳族或非芳族环。
如本文所用的“杂环”或“杂环的”是指经由单环或双环的环碳或氮连接的环状基团，其含有3-10个环原子，例如5-6个环原子，并且任选含有1-3个双键并任选被一个或多个取代基取代，所述环原子由碳和1至4个杂原子组成，所述杂原子各自选自：非过氧化物氧、硫和N(Y)，其中Y为不存在或是H、O、(C1-C10)烷基、苯基或苄基。杂环的实例包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基、苯并唑基、苯并唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋呫基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、假吲哚基、二氢吲哚基、吲哚嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛红酰基、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异唑基、亚甲基二氧基苯基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、二唑基、1,2,3-二唑基、1,2,4-二唑基、1,2,5-二唑基、1,3,4-二唑基、唑烷基、唑基、氧杂环庚烷基、氧杂环丁烷基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、啡噻基、吩嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢吡喃基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基和呫吨基。杂环基团可任选如上文对烷基和芳基所定义的那样在一个或多个位置处被一个或多个取代基取代，所述取代基例如是卤素、烷基、芳烷基、烯基、炔基、环烷基、羟基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰胺基、磷酸酯基、膦酸酯基、次膦酸酯基、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、酮、醛、酯、杂环基、芳族或杂芳族部分、-CF3和-CN。
术语“羰基”是本领域公知的，并且包括诸如可用以下通式表示的部分：
其中X是键或表示氧或硫，并且R11表示氢、烷基、环烷基、烯基、环烯基或炔基，R'11表示氢、烷基、环烷基、烯基、环烯基或炔基。当X是氧，并且R11或R’11不是氢时，所述式表示“酯”。当X是氧，并且R11如上所定义时，所述部分在本文中称为羧基，并且特别是当R11是氢时，所述式表示“羧酸”。当X是氧，并且R'11是氢时，所述式表示“甲酸酯”。一般来说，当上式的氧原子被硫置换时，所述式表示“硫代羰基”。当X是硫，并且R11或R'11不是氢时，所述式表示“硫酯”。当X是硫，并且R11是氢时，所述式表示“硫代羧酸”。当X是硫，并且R’11是氢时，所述式表示“硫代甲酸酯”。在另一方面，当X是键，并且R11不是氢时，上式表示“酮”基团。当X是键，并且R11是氢时，上式表示“醛”基团。
如本文所用的术语“单酯”是指二羧酸的类似物，其中一个羧酸被官能化成酯，并且另一羧酸是游离羧酸或羧酸的盐。单酯的实例包括但不限于琥珀酸、戊二酸、己二酸、辛二酸、癸二酸、壬二酸、草酸和马来酸的单酯。
如本文所用的术语“杂原子”意指除碳或氢以外的任何元素的原子。杂原子的实例是硼、氮、氧、磷、硫和硒。其他适用杂原子包括硅和砷。
如本文所用，术语“硝基”意指-NO2；术语“卤素”指定-F、-Cl、-Br或-I；术语“巯基”意指-SH；术语“羟基”意指-OH；术语“磺酰基”意指-SO2-。
如本文所用的术语“取代的”是指本文所述的化合物的所有可允许取代基。在最广泛意义上，可允许取代基包括有机化合物的无环和环状、分支和未分支、碳环和杂环、芳族和非芳族的取代基。说明性取代基包括但不限于卤素、羟基或呈直链、支链或环状结构形式的含有任何数目的碳原子，例如1-14个碳原子，并且任选包括一个或多个诸如氧、硫或氮基团的杂原子的任何其他有机基团。代表性取代基包括烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、苯基、取代的苯基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、卤代、羟基、烷氧基、取代的烷氧基、苯氧基、取代的苯氧基、芳氧基、取代的芳氧基、烷基硫基、取代的烷基硫基、苯基硫基、取代的苯基硫基、芳基硫基、取代的芳基硫基、氰基、异氰基、取代的异氰基、羰基、取代的羰基、羧基、取代的羧基、氨基、取代的氨基、酰胺基、取代的酰胺基、磺酰基、取代的磺酰基、磺酸、磷酰基、取代的磷酰基、膦酰基、取代的膦酰基、聚芳基、取代的聚芳基、C3-C20环状基团、取代的C3-C20环状基团、杂环基团、取代的杂环基团、氨基酸、肽和多肽基团。
诸如氮的杂原子可具有氢取代基和/或本文所述的有机化合物的满足杂原子化合价的任何可允许取代基。应了解“取代”或“取代的”包括隐含条件，即所述取代符合取代的原子和取代基的允许化合价，并且取代产生稳定的化合物，即不自发经受例如通过重排、环化或消除进行的转化的化合物。
在一广泛方面，可允许取代基包括有机化合物的无环和环状、分支和未分支、碳环和杂环、芳族和非芳族的取代基。说明性取代基包括例如本文所述的那些。可允许取代基可为一个或多个，并且对于适当的有机化合物可为相同或不同的。诸如氮的杂原子可具有氢取代基和/或本文所述的有机化合物的满足杂原子化合价的任何可允许取代基。
在各种实施方案中，取代基选自烷氧基、芳基氧基、烷基、烯基、炔基、酰胺、氨基、芳基、芳基烷基、氨基甲酸酯、羧基、氰基、环烷基、酯、醚、甲酰基、卤素、卤代烷基、杂芳基、杂环基、羟基、酮、硝基、磷酸酯基、硫化物、亚磺酰基、磺酰基、磺酸、磺酰胺和硫酮，其各自任选被一个或多个适合的取代基取代。在一些实施方案中，取代基选自烷氧基、芳基氧基、烷基、烯基、炔基、酰胺、氨基、芳基、芳基烷基、氨基甲酸酯、羧基、环烷基、酯、醚、甲酰基、卤代烷基、杂芳基、杂环基、酮、磷酸酯基、硫化物、亚磺酰基、磺酰基、磺酸、磺酰胺和硫酮，其中所述烷氧基、芳基氧基、烷基、烯基、炔基、酰胺、氨基、芳基、芳基烷基、氨基甲酸酯、羧基、环烷基、酯、醚、甲酰基、卤代烷基、杂芳基、杂环基、酮、磷酸酯基、硫化物、亚磺酰基、磺酰基、磺酸、磺酰胺和硫酮各自可进一步被一个或多个适合的取代基取代。
取代基的实例包括但不限于卤素、叠氮化物、烷基、芳烷基、烯基、炔基、环烷基、羟基、烷氧基、氨基、硝基、巯基、亚氨基、酰胺基、膦酸酯基、次膦酸酯基、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷基硫基、磺酰基、磺酰胺基、酮、醛、硫酮、酯、杂环基、–CN、芳基、芳基氧基、全卤代烷氧基、芳烷氧基、杂芳基、杂芳基氧基、杂芳基烷基、杂芳烷氧基、叠氮基、烷基硫基、氧代、酰基烷基、羧基酯、羧酰胺基、酰基氧基、氨基烷基、烷基氨基芳基、烷基芳基、烷基氨基烷基、烷氧基芳基、芳基氨基、芳烷基氨基、烷基磺酰基、羧酰胺基烷基芳基、羧酰胺基芳基、羟基烷基、卤代烷基、烷基氨基烷基羧基、氨基羧酰胺基烷基、氰基、烷氧基烷基、全卤代烷基、芳基烷基氧基烷基等。在一些实施方案中，取代基选自氰基、卤素、羟基和硝基。
如本文所用的术语“共聚物”通常是指包含两种或多种不同单体的单一聚合物质。共聚物可具有任何形式，例如无规、嵌段或接枝。共聚物可具有任何端基，包括加帽端基或酸端基。
如本文所用的术语“平均粒度”通常是指组合物中颗粒的统计平均粒度(直径)。基本上呈球形的颗粒的直径可被称为物理或流体动力学直径。非球形颗粒的直径可指流体动力学直径。如本文所用，非球形颗粒的直径可指颗粒表面上两点之间的最大直线距离。可使用本领域中已知的方法诸如动态光散射来测量平均粒度。当第一颗粒群体的统计平均粒度在第二颗粒群体的统计平均粒度的20％内；例如在15％内或在10％内时，两个群体可被称为具有“基本上相等的平均粒度”。
如在本文中可互换使用的术语“单分散”和“均质尺寸分布”描述全都具有相同或近乎相同的尺寸的颗粒、微米颗粒或纳米颗粒的群体。如本文所用，单分散分布是指其中90％的分布位于平均粒度的5％内的颗粒分布。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”通常是指氨基酸残基的聚合物。如本文所用，所述术语也适用于氨基酸聚合物，其中一种或多种氨基酸是相应天然存在的氨基酸的化学类似物或修饰衍生物，或是非天然氨基酸。如本文一般所用的术语“蛋白质”是指氨基酸的聚合物，所述氨基酸通过肽键彼此连接以形成链长度足以产生三级和/或四级结构的多肽。根据定义，术语“蛋白质”排除小肽，小肽缺乏被视为蛋白质所必需的必要高级结构。
术语“核酸”、“多核苷酸”和“寡核苷酸”可互换用于指代呈线性或环状构象以及呈单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物。这些术语不应解释为对聚合物的长度具有限制性。所述术语可涵盖天然核苷酸的已知类似物，以及在碱基、糖和/或磷酸酯部分(如硫代磷酸酯骨架)中被修饰的核苷酸。一般来说并且除非另外规定，否则特定核苷酸的类似物具有相同碱基配对特异性；即A的类似物将与T碱基配对。术语“核酸”是本领域的术语，其是指一串至少两个碱基-糖-磷酸酯单体单元。核苷酸是核酸聚合物的单体单元。所述术语包括呈信使RNA、反义物、质粒DNA、质粒DNA的部分或源于病毒的遗传物质形式的脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。反义核酸是干扰DNA和/或RNA序列的表达的多核苷酸。术语核酸是指一串至少两个碱基-糖-磷酸酯组合。天然核酸具有磷酸酯骨架。人工核酸可含有其他类型的骨架，但与天然核酸含有相同的碱基。所述术语也包括PNAs(肽核酸)、硫代磷酸酯、以及天然核酸的磷酸酯骨架的其他变体。
蛋白质、多肽或核酸的“功能性片段”是序列与全长蛋白质、多肽或核酸不相同，但保留至少一种如同全长蛋白质、多肽或核酸的功能的蛋白质、多肽或核酸。功能性片段可具有多于、少于或相同于相应天然分子的残基数目，和/或可含有一个或多个氨基酸或核苷酸取代。用于测定核酸的功能(例如编码功能、与另一核酸杂交的能力)的方法在本领域中是熟知的。类似地，用于测定蛋白质功能的方法是熟知的。举例来说，多肽的DNA结合功能可例如通过滤纸结合测定、电泳迁移率变动测定或免疫沉淀测定来测定。DNA裂解可通过凝胶电泳来测定。可例如通过共免疫沉淀、双杂交测定或互补(例如遗传互补或生物化学互补)来测定某一蛋白质与另一蛋白质相互作用的能力。参见例如Fields等(1989)Nature 340:245-246；美国专利号5,585,245以及PCT WO 98/44350。
如本文所用，术语“连接体”是指可含有杂原子(例如氮、氧、硫等)，并且可为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50个原子长的碳链。连接体可被各种取代基取代，所述取代基包括但不限于氢原子、烷基、烯基、炔基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羟基、烷氧基、卤素、芳基、杂环基团、芳族杂环基团、氰基、酰胺、氨基甲酰基、羧酸、酯、硫醚、烷基硫醚、硫醇和脲基基团。本领域技术人员将认识到这些基团各自可又被取代。连接体的实例包括但不限于pH敏感性连接体、蛋白酶可裂解肽连接体、核酸酶敏感性核酸连接体、脂肪酶敏感性脂质连接体、糖苷酶敏感性碳水化合物连接体、缺氧敏感性连接体、光可裂解连接体、热不稳定连接体、酶可裂解连接体(例如酯酶可裂解连接体)、超声敏感性连接体和x射线可裂解连接体。
术语“药学上可接受的反离子”是指药学上可接受的阴离子或阳离子。在各种实施方案中，药学上可接受的反离子是药学上可接受的离子。举例来说，药学上可接受的反离子选自柠檬酸根、苹果酸根、乙酸根、草酸根、氯离子、溴离子、碘离子、硝酸根、硫酸根、硫酸氢根、磷酸根、酸式磷酸根、异烟酸根、乙酸根、乳酸根、水杨酸根、酒石酸根、油酸根、丹宁酸根、泛酸根、酒石酸氢根、抗坏血酸根、琥珀酸根、马来酸根、龙胆酸根、富马酸根、葡萄糖酸根、葡萄糖醛酸根、蔗糖酸根、甲酸根、苯甲酸根、谷氨酸根、甲烷磺酸根、乙烷磺酸根、苯磺酸根、对甲苯磺酸根和双羟萘酸根(即1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸根))。在一些实施方案中，药学上可接受的反离子选自氯离子、溴离子、碘离子、硝酸根、硫酸根、硫酸氢根、磷酸根、酸式磷酸根、柠檬酸根、苹果酸根、乙酸根、草酸根、乙酸根和乳酸根。在特定实施方案中，药学上可接受的反离子选自氯离子、溴离子、碘离子、硝酸根、硫酸根、硫酸氢根和磷酸根。
术语“药学上可接受的盐”是指可在本发明组合物中使用的化合物中存在的酸性或碱性基团的盐。在本发明组合物中包括的在性质上是碱性的化合物能够与各种无机和有机酸形成多种盐。可用于制备此类碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是形成无毒酸加成盐(即含有药理学上可接受的阴离子的盐)的那些，所述盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯盐、溴盐、碘盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲烷磺酸盐、乙烷磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。除以上提及的酸之外，在本发明组合物中包括的包括氨基部分的化合物也可与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。在本发明组合物中包括的在性质上是酸性的化合物能够与各种药理学上可接受的阳离子形成碱盐。此类盐的实例包括碱金属盐或碱土金属盐，并且特别是钙盐、镁盐、钠盐、锂盐、锌盐、钾盐和铁盐。
如果本文所述的化合物以酸加成盐形式获得，那么可通过使该酸盐的溶液碱化来获得游离碱。相反，如果产物是游离碱，则可根据用于从碱化合物制备酸加成盐的常规程序，通过将所述游离碱溶解于适合的有机溶剂中，以及用酸处理该溶液来生产加成盐，特别是药学上可接受的加成盐。本领域技术人员将认识到可用于制备无毒的药学上可接受的加成盐的各种合成方法学。
药学上可接受的盐可衍生自酸，所述酸选自：1-羟基-2-萘甲酸、2,2-二氯乙酸、2-羟基乙烷磺酸、2-酮戊二酸、4-乙酰胺基苯甲酸、4-氨基水杨酸、乙酸、己二酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑酸、樟脑-10-磺酸、癸酸(capric acid/decanoic acid)、己酸(caproic acid/hexanoic acid)、辛酸(caprylic acid/octanoic acid)、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙烷磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、异丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲烷磺酸、粘液酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、烟酸、硝酸、油酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、丙酸、焦谷氨酸、水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、硫氰酸、甲苯磺酸、三氟乙酸和十一碳烯酸。
术语“生物可利用”是本领域公知的，并且是指本发明物的一种形式，所述形式允许本发明物或施用量的一部分为向其施用本发明物的受试者或患者所吸收，并入所述受试者或患者中，或以其他方式在生理上可为所述受试者或患者所用。
应了解以下实施例意图说明而非限制本发明。在不脱离本发明的精神和范围下，各种其他实施例和对先前描述和实施例的修改将为本领域技术人员在阅读本公开之后显而易知，并且意图所有所述实施例或修改都包括在随附权利要求的范围内。本文参照的所有出版物和专利都据此以引用的方式整体并入本文。
实施例
实施例1：缀合物的合成、HPLC分析和膜渗透
本文所述的化合物的合成和HPLC分析用2015年6月30日提交的PCT申请号PCT/US15/38569(WO2016/004048)的实施例A、1-7和14中公开的方法进行，该申请的内容通过引用的方式并入本文。
实施例2：缀合物57对肿瘤细胞增殖的体外作用
在评价肿瘤细胞的细胞增殖抑制的体外测定中评估缀合物57。基于报道的SSTR2mRNA水平选择一系列肿瘤细胞系。通过Western染色测定进行细胞表面SSTR2受体表达的表征。Western染色的水平范围从非常强到弱或无染色。
表5A：缀合物57处理的细胞增殖IC50
增殖测定中缀合物57的活性和IC50程度与通过Wester染色观察的SSTR2的细胞表面表达相关联。
用缀合物57和DM1体外抑制SCLC细胞系的增殖
本研究的目的是确定生长激素抑制素靶向缀合物缀合物57在体外对增殖的受体依赖性抑制，并确定在以下人SSTR2表达癌细胞系中对DM1的敏感性：NCI-H69、NCI-H82、NCI-H727和HCC-33。在存在或不存在过量的奥曲肽(一种生长激素抑制素类似物)的情况下，将细胞与缀合物57一起温育6小时。使用缀合物57的三倍连续稀释液，总共十个浓度点。处理后，洗涤细胞，再额外温育72或96小时，并使用发光细胞活力测定法测量增殖。使用缀合物57的IC50来确定增殖测定中的抑制活性。为了确定DM1敏感性，使用与缀合物57测定类似的方法，其中额外的温育时间点为30分钟、1、2和4小时，并且排除用奥曲肽预处理。确定出从最敏感细胞系到最不敏感细胞系的DM1作用为：NCI-H69>HCC-33>NCI-H82>NCI-H727(表5B)。通过比较细胞系之间的结果，在这些条件下，缀合物57在NCI-H69和NCI-H82中最有效，紧接着是HCC-33，在NCI-H727中效力最小(表5C)。添加过量的奥曲肽(100μM)与缀合物57竞争结合SSTR2受体。在奥曲肽存在下，缀合物57的活性降低表明缀合物57的活性取决于其与受体的结合。在NCI-H82和NCI-H727细胞系中，在过量奥曲肽存在下，缀合物57活性没有降低，表明在这些细胞系中，缀合物57活性无法克服高浓度的奥曲肽。在NCI-H69实验中，依据测定条件，用过量的奥曲肽预温育温和地将缀合物57的活性降低1.6倍和2.4倍。在HCC-33细胞系中，与细胞用奥曲肽预温育时相比，当单独给药时，缀合物57的活性高3.2(±1.4)倍。在NCI-H69和HCC-33细胞系中观察到的在过量奥曲肽存在下缀合物57活性的小但可测量的变化支持了体外观察到的缀合物57的抗增殖作用的受体依赖性。总之，尽管在这些实验中测试的所有细胞系都表达SSTR2蛋白，但它们对缀合物57的敏感性水平不同，可能是由于该缀合物中的DM1敏感性。这些数据确定了癌细胞对缀合物57的敏感性的两个变量；对有效载荷DM1的敏感性和SSTR2结合和/或表达。
表5B：在使用多种人癌细胞系的增殖抑制测定中DM1的活性
a N/A-不适用
表5C：缀合物57体外对NCI-H69、NCI-H82、NCI-H727和HCC-33细胞增殖的抑制结果总结
实施例3：缀合物57引起的SSTR2受体内化
在高度表达SSTR2阳性(SSTR2+)肿瘤异种移植物：H524_MD肿瘤异种移植物中使用缀合物57研究SSTR2受体内化。向SSTR2+H524-MD肿瘤异种移植物给予溶媒(0.1％Solutol/5％甘露醇)、2mg/kg的缀合物57、2mg/kg的乱序重排对照(scrambled control)(BT-984)和1.4mg/kg的奥曲肽(单独的配体)(N＝3只/组)。时间点-0小时(溶媒)、15分钟、1小时、4小时、24小时和72小时。通过免疫组织化学(IHC)染色完成SSTR2评分。
图2A显示了SSTR2受体内化强度。如图2A所示，在缀合物57处理后，SSTR2受体在左上图中位于膜上而在右下图中变成大部分细胞质的。在这一染色强度分析中，在1小时、4小时和72小时，缀合物57处理产生了与化合物57的乱序重排肽形式(BT-984)以及天然形式显著不同的结果。另外，在72小时，缀合物57处理产生了与奥曲肽显著不同的结果。
图2C显示了SSTR2内化分布的水平。在右下图中，SSTR2内化达到>66％。在这一染色分布分析中，在4小时、24小时和72小时，缀合物57处理产生了与BT-984和天然形式显著不同的结果。另外，在72小时，缀合物57处理产生了与奥曲肽显著不同的结果。
图2B显示了在不同时间在H524-MD肿瘤异种移植物中的SSTR2内化。图2D显示了在不同时间在H514-MD肿瘤异种移植物中的SSTR2内部细胞分布。图2B和图2D中的‘*’表示，采用Dunn多重比较检验，缀合物57相比于BT-984和天然形式存在显著差异(*p<0.05)。图2B和图2D中的‘+’表示，采用Dunn多重比较检验，缀合物57相比于奥曲肽存在显著差异(+p<0.05)。
因此，缀合物57的处理显示出显著的受体内化/分布，支持该化合物在体内主动靶向受体(不同于乱序重排)的假设。SSTR2受体经由缀合物57的奥曲肽酸配体的结合诱导SSTR2受体的内化并内化DM-1有效载荷。令人惊讶的是，缀合物57比单独的奥曲肽引起更多的SSTR2内化。
实施例4：缀合物57在治疗SCLC中的功效
选择HCC-33(小细胞肺癌)异种移植物来研究缀合物57的功效。在一些组中，每周以1.0mg/kg、0.5mg/kg或0.33mg/kg给予缀合物57，持续30天，对于每只动物共计给药4次。在一些其他组中，以0.5mg/kg或0.25mg/kg每周两次给予缀合物57，持续30天，对于每只动物共计给药8次。
研究结果确定了多剂量具有良好的耐受性。所有组的体重都良好。下表6A和图3中显示了肿瘤消退结果。
表6A.HCC-33异种移植物的TGI％
进一步的NCI-H69研究设计包括静脉内给药缀合物57，其以1.0mg/kg配制在丙二醇(PG)中、以1.0mg/kg配制在Solutol HS15中、以0.5mg/kg配制在Solutol HS15中，每周给药两次，以及以0.33mg/kg配制在Solutol HS15中，每周给药三次。对照组给药如下：每周一次以5.0mg/kg静脉内给药SOC顺铂/每周三次以8.0mg/kg腹膜内给药依托泊苷，历经两周。阴性对照溶媒给予Solutol HS 15溶媒。所有组包含10只动物。
在SOC治疗组(顺铂和依托泊苷)中，在第11天观察到平均BW损失为5.9％。在缀合物57或溶媒治疗的动物中未观察到体重减轻。在溶媒、缀合物57或SOC治疗的动物的健康观察中记录没有副作用。然而，由于肿瘤溃疡，SOC组中的一只动物和溶媒组中的一只动物在第14天退出研究。
在第21天，每周两次用1.0mg/kg配制在PG中的缀合物57治疗导致87％TGI(2/10只小鼠肿瘤完全消退)。对配制在Solutol HS15中的缀合物57采用相同剂量和方案，观察到96％TGI(3/10只小鼠肿瘤完全消退)。对于每周两次给药0.5mg/kg配制在Solutol HS15中的缀合物57，观察到93％的TGI(1/10只小鼠肿瘤完全消退)。每周三次给药0.33mg/kg配制在Solutol HS15中的缀合物57导致76％TGI，没有小鼠肿瘤完全消退。对于顺铂/依托泊苷(SOC)治疗两周，观察到84％TGI，没有小鼠完全消退。用缀合物57和SOC剂治疗在所有评估的剂量水平和所有方案下导致明显的TGI，彼此之间没有统计学差异。所有药剂的肿瘤生长与溶媒对照治疗的小鼠的肿瘤生长显著不同(P<0.0001)。数据总结在表6B中。
表6B：在包括SOC治疗的NCI-H69缀合物57肺异种移植物模型中使用不同制剂和方案的功效评估
a MTV-平均肿瘤体积
b SEM-平均值的标准误差
c TGI-肿瘤生长抑制
d N/A＝不适用
总之，证明了在HCC-33模型中以低至每周一次0.33mg/kg的剂量水平使用缀合物57获得了高水平的统计学上显著的TGI，并且在HCC-33模型中，剂量和功效之前存在明确关系(r2＝0.81)，剂量水平增加，导致功效增加。在NCI-H69模型中，缀合物57的PG和SolutolHS15制剂具有相似的功效。
实施例5：安全性药理学
缀合物57对人Ether-à-go-go-相关基因(hERG)离子通道的活性的体外评估
这项研究的目的是评估缀合物57通过调节离子通道人Ether-à-go-go相关基因(hERG)来延长QT间期的潜力。使用lonWorks Quattro电生理平台测试缀合物57对离子通道活性的潜在抑制，该平台是一种自动化高通量膜片钳系统。测试8个不同浓度的缀合物57，从高浓度10μM开始，低浓度为0.005μM，每个浓度最少重复5次。通过三脉冲方案诱发hERG电流，其中电压首先从保持电位-80mV步进至+40mV，持续两秒钟，以使hERG通道失活。然后，使电压逐步回到-50mV，持续两秒，以诱发尾电流，然后返回保持电位，持续1秒。施加电压方案(Pre)，加入化合物，温育600秒，并在lonWorks Quattro上最后一次施加电压方案(Post)。二甲基亚砜(DMSO)用作阴性对照，西沙必利(Cisapride)用作阳性对照。如图4所示，在所有测试浓度下，缀合物57表现出小于20％的hERG抑制，而西沙必利以剂量依赖性方式抑制诱发电流。
总之，在该体外测定中，缀合物57不抑制hERG离子通道。数据显示在图4中。
比格犬静脉内施用缀合物57的体内心血管和呼吸评价
本研究旨在评价缀合物57在有意识地自由活动的未经免疫的雄性比格犬中的潜在心血管和呼吸影响。研究设计总结在表7A中。
表7A：心血管和呼吸研究设计
a每只动物在第1天用体积当量的溶媒治疗，并且在第5天用测试品以三种剂量水平之一治疗。
b在给药前至少2小时和给药后24小时连续监测体温、血压、心率、ECG和呼吸参数。
心血管及呼吸影响和一般毒性的评估依据死亡率、临床观察、体重、体温、心血管评价(即血压(收缩压、舒张压和平均动脉压)、心率、ECG(QRS持续时间和RR、PR、QT和校正的QT[QTc]间期))和呼吸评价(呼吸率、潮气量和分钟量)。在给药前至少2小时和给药后24小时连续监测动物。
缀合物57以0.16mg/kg、0.20mg/kg和0.24mg/kg的剂量水平在6分钟内单次静脉内输注到雄性比格犬，总体上耐受良好，并且不产生任何临床观察或死亡。在测试的任何剂量水平下，对QRS持续时间、ECG形态或潮气量不存在测试品相关的影响。在剂量水平为0.24mg/kg时，从给药时间到给药后1.5至2小时，缀合物57引起血压(表7B)、心率和呼吸率的统计学显著的增加，且RR、PR和QT间期减少(反映心率变化)，以及未达到统计学显著的体温升高。在给药后7至24小时，在0.24mg/kg下，观察到呼吸频率和分钟量略微增加。在给药后2至17小时，对于所有测试品治疗，观察到非剂量依赖性的血压升高。在0.24mg/kg治疗后，持续24小时监测期，分别在5或12小时开始时观察到PR和QT间期的减少。
鉴于在0.24mg/kg下观察到的即时效应的短暂性质以及在所有剂量水平下观察到的持续效应的相对小的幅度，这些变化不视为是不利的；在至多并且包括0.24mg/kg的剂量下，静脉内施用缀合物57在雄性比格犬中没有产生对心血管或呼吸功能的不利影响。
表7B：缀合物57的全段平均血压值
a给药后>0至0.25小时
b给药后>0.25至6小时
c给药后>6至24小时
总之，使用hERG离子通道抑制测定对缀合物57的体外安全性药理学评价揭示了缀合物57在10μM浓度下没有显著体外心脏毒性的证据。缀合物57的这种体外安全性药理学评价为体内心血管和呼吸研究提供了支持。在未经免疫的雄性比格犬中进行的缀合物57的体内心血管和呼吸研究导致了在以MTD给药后前两小时，血压、心率和呼吸频率的非不利的统计学显著的增加，并且RR、PR和QT间期缩短(反映心率变化)。在所有剂量下，在2至17小时，注意到血压的其他更适度、非剂量依赖但显著的变化，以及在MTD治疗后，持续整个监测期，分别在5或12小时开始观察到PR和QT间期的缩短。
实施例6：缀合物57的稳定性研究
对缀合物57进行稳定性研究。包括在稳定性方案中的测试确保在药物物质的整个保质期内监测与药物物质的外观、强度、纯度和水分有关的变化。在稳定性方案中还通过每年包括这些属性的测试来监测内毒素。加速和长期稳定性研究的结果表明了缀合物57当在-20℃±5℃的标签储存条件下储存长达3个月时的化学和物理稳定性。在5℃±3℃和25℃/60％相对湿度(RH)下均观察到显著降解，因此在3个月后，停止在这两种条件下的稳定性评价。在-20℃±5℃下3个月后未观察到纯度的显著变化。
在另一个稳定性研究中，测试了以下条件：在氮气下5℃±3℃和在氮气下-20℃±5℃。选择氮气以防止氧化并确保储存期间的对照气氛。
稳定性研究中缀合物57的包装列于表8中：
表8.稳定性包装描述
批次1在不同条件下的稳定性数据示于表9A和9B：
表9A.在-20℃±5℃储存的批次1的稳定性
表9B.在5℃±3℃储存的批次1的稳定性
批次2在不同条件下的稳定性数据示于表10A和10B中：
表10A：在25℃±2℃、60％RH±5％RH下储存的批次2的稳定性
a为便于审阅，仅显示已知的降解物和大于0.15％的生长峰或新峰。
KF：Karl Fischer滴定；RP-HPLC：反相高效液相色谱法；RTT：相对保留时间；USP：美国药典
表10B：在氮气下在5℃±3℃/环境RH下储存的批次2的稳定性
a：基于标志物保留时间的初步鉴定。
已经显示，缀合物57在-20℃下稳定至少3个月。
实施例7：缀合物57的制剂开发
缀合物57是自由流动的粉末。缀合物57的制剂开发通过筛选可为药物溶液提供稳定性和张度的条件来完成。发现缀合物57的稳定性取决于溶液的pH(目标范围：4.0至4.8)。在筛选包括柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液的多种缓冲液后，发现乙酸盐缓冲液在4.0至4.8的pH范围内为缀合物57提供最大的稳定性。缓冲剂由乙酸钠和乙酸的组合形成。总之，乙酸盐缓冲液(一种常用的胃肠外缓冲液)用于溶解缀合物57并确保在4.0至4.8的pH范围内的稳定性。
存在于缀合物57中的两种杂质的RRT为1.69和1.70，在本文中分别称为杂质A和B，被鉴定为缀合物57加合物。对这些化合物的研究表明它们在酸性乙酸盐缓冲液中在一段时间内转化回缀合物57。这两种化合物转化回缀合物57的速率取决于温度。数据提供在表11A和表11B中，显示了在室温和40℃下的这种转化。缀合物57和杂质A和B的总和保持恒定在±0.1％内，这表明该处理有效地将杂质A和B两者转化回缀合物57。
表11A：在室温下在乙酸盐缓冲液中将杂质转化回缀合物57。
表11B：在40℃下在乙酸盐缓冲液中将杂质转化回缀合物57
缀合物57是两亲性分子，因此倾向于自组装成大结构。赋形剂溶解度和相容性测试显示其不溶于盐水(溶解度小于1mg/ml)，并且与托可索仑(tocophersolan，TPGS)、超精制PEG 300、PEG 400、乙醇，右旋糖或Pluronics F68不相容。评价常用的胃肠外表面活性剂赋形剂(如聚山梨醇酯80(吐温80)和聚乙二醇15羟基硬脂酸酯(solutol，Kolliphor HS15))以重新组装和稳定缀合物57成为有组织的胶束。缀合物57与非离子表面活性剂如吐温80和solutol相容。
在以下原型制剂(缀合物57，2.5mg/ml)中进行过滤和冷冻/解冻稳定性研究：10％Solutol/5％甘露醇/5mM乙酸盐缓冲液，pH4+；2％Solutol/5％甘露醇/5mM乙酸盐缓冲液，pH4+；5％吐温80/5％甘露醇/5mM乙酸盐缓冲液，pH4+；和2％吐温80/5％甘露醇/5mM乙酸盐缓冲液，pH4+。测量过滤后和冷冻/解冻循环后的回收率和纯度。在4次冷冻/解冻循环后，所有制剂原型都是稳定的。没有观察到无菌过滤时的损失，这意味着聚集得到了很好的缓解。
还测试了原型制剂中的缀合物57的冻结溶液稳定性。制备具有2种不同表面活性剂浓度(1％或2％)的两种制剂原型。在室温下，所有4种制剂都稳定至少2周。在4℃下，所有4种制剂稳定至少4周。在-20℃下，所有4种制剂稳定至少4周。将缀合物57药物产品储存在-20℃。所有4种制剂在光照和黑暗中均稳定至少2周。所有4种制剂都经历了4次冷冻/解冻循环，其纯度变化很小或没有变化。
原型A：
原型B：
大鼠血浆中的PK比较
在大鼠血浆中测试了缀合物57的各种制剂。发现较高的表面活性剂浓度显示出更好的PK曲线。与吐温相比，具有Solutol的制剂显示出稍微更好的PK性质，如图5和下表所示。
在不同的施用试剂盒(容器和管线)中测试2％solutol HS 15制剂的临床使用稳定性。它在临床剂量下是稳定的并且与容器和非过滤的施用装置相容。
总之，聚乙二醇15羟基硬脂酸酯为缀合物57提供了很大的稳定性，因此被选为稳定和增溶赋形剂。聚乙二醇15羟基硬脂酸酯是一种水溶性非离子表面活性剂，通常用于水溶性差的药物制剂中或用于稳定药物。缀合物57溶液中使用的聚乙二醇15羟基硬脂酸酯的浓度为1％至10％、1％至5％或2％至5％(重量百分比)。在一些实施方案中，聚乙二醇15羟基硬脂酸酯的浓度为约2％(重量百分比)。
为了向用于注射用溶液的缀合物57浓缩物递送正确的张度，评价了一系列试剂，如甘露醇、蔗糖、右旋糖和盐水。甘露醇为缀合物57提供了最好的稳定性，因此被选为张度剂赋形剂。甘露醇用于为输注溶液提供所需的张度。本体灌装溶液中甘露醇的浓度为5％。
缀合物57是温度敏感的，因此在-20℃下储存。用于注射用溶液的缀合物57浓缩物小瓶具有在每瓶2mL溶液中5mg缀合物57的标签剂量，浓度2.5mg/mL。小瓶具有0.15mL的过装，以确保恒定地取出标记的2mL。
实施例8：制备包含缀合物57的注射用溶液
缀合物57通过使BT-976(一种明确表征的并且以高度化学和立体化学纯度得到的稳定化合物)与DM1(一种稳定、明确定义、明确表征且可商购的化合物)反应来合成。BT-976是类似于奥曲肽的肽生长激素抑制素类似物。它由天然L-氨基酸组成，除了苯丙氨酸(D-Phe1)和色氨酸(D-Trp4)。二硫桥连接Cys2和Cys7。硫化吡啶(PYS)基团在Cys8与半胱氨酰胺键合。BT-976肽以其乙酸盐形式制备，其中一些残留水作为天然成分。BT-976的氨基酸序列为：BT-976的化学结构是：
在乙酸和乙酸钠存在下，BT-976和DM1的偶合反应在THF和水的混合物中进行。将反应在约20℃的温度下搅拌并在一天内完成。通过HPLC监测反应，并且当BT-976相对于缀合物57峰达到NMT 4％时认为反应完成。
在真空中用乙酸乙酯经由管槽(chases)除去大部分THF，同时保持浴温<30℃。用乙酸乙酯洗涤所得溶液。分层。缀合物57位于底部水层中。上层(乙酸乙酯层)用0.2M乙酸水溶液萃取。分层。将底部水层与前述水层合并，然后加入乙腈和冰乙酸，得到缀合物57，为粗溶液。然后通过反相柱色谱法纯化缀合物57粗溶液，以产生纯化的缀合物57溶液。在等待纯化的同时，将缀合物57粗溶液在4℃下在惰性气氛下储存。
冻干：
将纯化的缀合物57溶液增泽过滤以除去颗粒(所有后续溶剂装料同样经过增泽过滤)。将所得溶液在-40至-50℃下在3小时内冷冻。将冷冻的溶液在<200mTorr的真空和T<5℃下冻干72-82小时以产生固体。将后者均质化，得到冻干的缀合物57。测试冻干的缀合物57以控制残留的乙腈(乙腈NMT 1,500ppm)。如果不满足该规格，则在T<25℃下在真空中继续干燥，直至乙腈达到NMT 1,500ppm。在满足残留的乙腈标准后，通过HPLC控制材料的纯度。规格是HPLC纯度>97.0％和DM1NMT 0.10％。对符合HPLC规格的材料进行称重，以确定总产率。相对于BT-976，总产率通常为约70％或1Wt。然后将称重材料用于后续步骤。未达到纯度标准的产品被重新纯化。
注射用溶液：
在氮气环境下处理缀合物57，并将其溶解在pH范围为3.7至4.0的乙酸盐缓冲液中，以确保控制药物物质中鉴定的两种杂质。已经显示杂质在乙酸盐缓冲液中是不稳定的并且逆转回缀合物57。将缀合物57溶解于40℃乙酸盐缓冲液中并保持8至24小时。然后，将缀合物57溶液与聚乙二醇15羟基硬脂酸酯和甘露醇混合。将溶液的pH控制在4.0至4.8内，如果需要，用储备乙酸或乙酸钠溶液调节。在一些实施方案中，将溶液的pH控制在约4.0。作为最后一步，添加额外的WFI足量(q.s.)至目标总体积。
a：如果需要调节pH，则乙酸钠和/或乙酸的量可能与该初始值略有不同。
通过两个额外的0.2μm灭菌级过滤器过滤，对本体溶液灭菌。过滤器经过完整性测试，以支持无菌保证。用溶液填充小瓶并用全自动设备加塞。小瓶由全自动设备封盖。然后对封盖的小瓶进行100％目视检查，并将其储存在-20℃(标称值)。如果在封盖后不立即进行小瓶检查，则将小瓶储存在2-8℃。
采用以下控制措施确保产品无菌：无菌操作发生在100级/A级区域；通过在预定位置安置板和主动空气采样器进行环境可行的监测；在预定位置进行环境非活性微粒监测(environmental non-viable particulate monitoring)；在无菌过滤的上游立即进行本体溶液生物负载测试；通过两个额外的0.2μm灭菌级过滤器过滤，对本体溶液灭菌；灭菌过滤器经过完整性测试。通过使用微生物培养基(例如，大豆酪蛋白消化物培养基USP)的过程模拟来验证无菌灌装过程。
缀合物57药物产品生产方法经过修改以包括保温处理，其中将缀合物57药物物质溶解于40℃乙酸盐缓冲液中，保持8至24小时，然后加入药物产品赋形剂并分配到小瓶中。
用于注射用溶液的缀合物57浓缩物是用于静脉内(iv)施用的无菌产品。在无菌灌装之前，使溶液通过两个额外的无菌0.2μm过滤器。
实施例9：1期/2a期研究
1期的目标是评估当对表达生长激素抑制素受体2的晚期癌症(包括胃肠胰或肺部或胸腺或其他神经内分泌肿瘤或小细胞肺癌或肺部大细胞神经内分泌癌)患者每三周静脉内施用时缀合物57的安全性和耐受性，并确定最大耐受剂量和推荐的2期剂量。它还表征缀合物57的急性和慢性毒性，表征了缀合物57、DM1和来自缀合物57的肽的关键药代动力学参数，评估了缀合物57诱导抗药物抗体的潜力，并通过使用标准肿瘤反应标准(RECIST 1.1)和药效学(PDc)生物标志物变化来评估初步抗肿瘤活性，所述生物标志物包括血液中的嗜铬粒蛋白A(CgA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和循环肿瘤细胞(CTC)，以及尿液中的5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)。此外，该研究探讨了通过多种方式(生长激素抑制素类似物放射成像、免疫组织化学、CTC或外来体分析)测量的肿瘤SSTR2表达和PK、疗效、安全性、抗缀合物57抗体和血液中PDc生物标志物变化之间的关系。1期研究分为两部分：1期A部分(剂量递增)和1期B部分(早期扩展)。
1期A部分(剂量递增)
1期A部分采用2参数自适应贝叶斯逻辑回归模型(BLRM)，其由控制过量用药的剂量递增(escalation with overdose control，EWOC)原则指导，以进行剂量推荐并估计最大耐受剂量(MTD)。
1期A部分的主要目标是研究当对表达SSTR2的晚期癌症(包括胃肠胰(GEP)或肺部或胸腺或其他神经内分泌肿瘤(NET)或小细胞肺癌(SCLC)或肺部的大细胞神经内分泌癌(LCNEC))患者每三周静脉内施用时缀合物57的安全性和耐受性，确定MTD，以及初步推荐的2期剂量(RP2D)。
1期A部分的第二目标是：表征缀合物57的安全性和耐受性，包括急性和慢性毒性；表征当对表达SSTR2的晚期癌症(包括GEP或肺部或胸腺或其他NET或SCLC或肺部的LCNEC)患者静脉内施用时，缀合物57、DM1和来自缀合物57的肽的PK；评估当对表达SSTR2的晚期癌症(包括GEP或肺部或胸腺或其他NET或SCLC或肺部的LCNEC)患者静脉内施用时，缀合物57在血清中诱导抗缀合物57抗体的潜力；使用RECIST 1.1定义的肿瘤反应标准和反应持续时间评估缀合物57在表达SSTR2的晚期癌症(包括GEP或肺部或胸腺或其他NET或SCLC或肺部的LCNEC)患者中的初步抗肿瘤活性。
1期A部分的探索目标是评估缀合物57在表达SSTR2的晚期癌症(包括GEP或肺部或胸腺或其他NET或SCLC或肺部的LCNEC)患者或前列腺癌患者中的初步抗肿瘤活性，其通过评价无进展生存期、总生存期和血液中的PDc生物标志物变化，包括但不限于血液中的嗜铬粒蛋白A(CgA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和循环肿瘤细胞(CTC)和尿液中的5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)；以及探索SSTR2水平(通过生长激素抑制素类似物放射性同位素成像(SARI)、免疫组织化学[IHC]、CTC或外来体测量的)、PK、功效、安全性、抗缀合物57抗体和血液中PDc生物标志物变化之间的关系。
为了使在潜在亚治疗剂量水平下治疗的患者数量最小化，第一剂量队列招募2名患者，而随后的队列招募最少3名且最多6名患者。队列1中的初始患者接受在1小时内静脉内施用的缀合物57，初始剂量1.0mg，每3周一个循环。该患者随访7天，包括在C1D8预定访视期间的评估，然后允许其他患者开始用缀合物57治疗。如果初始患者对缀合物57耐受至少7天，则第一队列将开放对另外1名患者的治疗。在评估了前2名患者的安全性和剂量限制毒性(DLT)至少3周(包括C2D1给药前评估)后，可以开始第二队列的招募。
在1期A部分期间，如果患者耐受结合物57，且没有明显的疾病进展证据，则从C3开始，患者可以将剂量增加至已经确定为SRC可耐受并且为SRC同意的剂量。对于每个患者，剂量可以仅增加一次。
缀合物57的初始剂量为1.0mg。计划的剂量水平总结在表12中。
表12：计划的缀合物57剂量水平
*实际剂量增量将是SRC的决定，但不会超过先前剂量水平的倍增剂量。分配的剂量将由SRC决定，并将以BLRM的更新结果为指导。
为了使以亚治疗剂量水平治疗的患者的数量最小化，第一剂量队列招募2名患者，而随后的队列将招募至少3名且最多6名患者。初始患者接受在1小时内静脉内施用的缀合物57，初始剂量1.0mg，每3周一个循环。将观察第一队列中用缀合物57治疗的第一名患者7天，之后允许另外的患者开始用缀合物57治疗。如果第一名患者耐受缀合物57至少7天，则第一队列将开放对另一患者的治疗。在评估前2名患者的安全性和剂量限制性毒性(DLT)至少3周后(直至C2D1)，可以开始第二队列的招募。
只要第一队列完成后没有安全性问题，随后队列的患者组在确定为合适的患者时就给药。然而，可选择在第二队列中错开给药，并且同样用于随后的队列。
在第一队列后的每个剂量递增队列中，队列内至少3名患者需要已完成C1，并且在可以开始招募下一队列前，已经对安全性和剂量限制性毒性(DLT)评估至少3周(直至C2第1天)。在登记在C1期间从以当前剂量水平招募的患者收集的安全性数据后，依次递增缀合物57剂量队列。
剂量队列中的每名患者必须已经在C1中接受缀合物57并且在可评价的C1的最后一天完成随访安全性评估，以评估DLT。在完成C1之前因DLT以外的原因而停止研究的患者将被替换。
如果DLT需要将其他患者招募进队列中，则在所有患者已在C1中接受缀合物57并在C1结束时完成随访安全性评估后，必须对该队列的所有安全性数据进行审查。基于对先前剂量水平的安全性和耐受性数据的中期评估，还可以决定将在中间剂量水平进行增加。
使用美国国家癌症研究所(NCI)癌症不良事件通用术语(CTCAE)4.03版对毒性进行分级。
尽管有关剂量递增的决定是基于对C1数据的审查而做出的，但也要从所有继续治疗的患者中收集安全性数据，SRC将定期对其进行审查。任何检测到的累积毒性可能需要稍后减少剂量或适当的其他措施，包括进一步调整RP2D。
1期B部分(早期扩展)
在1期部分B中，使用由SRC确定的初步推荐的2期剂量(RP2D)评价缀合物57。
1期B部分的主要目标是：确认在剂量递增阶段确定的MTD，并进一步研究当在表达SSTR2的晚期癌症(包括GEP或肺部或胸腺或其他NET或SCLC或肺部的LCNEC)患者或前列腺癌患者中静脉内施用时，缀合物57的推荐的2期剂量(RP2D)和方案的安全性和耐受性。
1期B部分的第二目标是在表达SSTR2的晚期癌症(包括GEP或肺部或胸腺或其他NET或SCLC或肺部的LCNEC)患者或前列腺癌患者中进一步表征缀合物57、DM1和来自缀合物57的肽的PK；当在表达SSTR2的晚期癌症(包括GEP或肺部或胸腺或其他NET或SCLC或肺部的LCNEC)患者或前列腺癌患者中静脉内施用时，进一步评估缀合物57在血清中诱导抗缀合物57抗体的潜力；使用RECIST 1.1定义的肿瘤反应标准和反应持续时间评估缀合物57在表达SSTR2的晚期癌症(包括GEP或肺部或胸腺或其他NET或SCLC或肺部的LCNEC)患者或前列腺癌患者中的初步抗肿瘤活性。
1期B部分的探索目标是进一步评估缀合物57在表达SSTR2的晚期癌症(包括GEP或肺部或胸腺或其他NET或SCLC或肺部的LCNEC)患者或前列腺癌患者中的初步抗肿瘤活性，其通过评价无进展生存期、总生存期和PDc(包括但不限于血液中的CgA、NSE、CTC和尿液中的5-HIAA)变化；以及进一步探索SSTR2水平(通过SARI、IHC、CTC或外来体来测量)、PK、功效、安全性、抗缀合物57抗体和血液中PDc生物标志物变化之间的关系。
一旦在研究的1期A部分中确定了初步RP2D，1期B部分就开始了。初步RP2D基于1期A部分中缀合物57的安全性、耐受性、PK和PDc谱的发现。初步推荐的2期剂量可以与MTD相同，或者可以低于MTD。在MTD高于SRC确定的剂量以在多个施用循环后具有可接受的安全性和耐受性特征的事件中，则可以选择低于MTD的初步RP2D。在每个剂量水平下治疗不超过12名患者(包括在1期B部分以相同剂量水平治疗的患者)，并且在1期B部分中治疗总计不超过18名患者。
2a期研究
2a期的主要目标是使用标准肿瘤反应标准(RECIST 1.1)和在表达SSTR2的肿瘤患者的4个特定肿瘤队列中的反应持续时间来评估缀合物57作为单一药物的疗效：晚期、低级或中级胰腺NET患者；晚期、低级或中级胃肠道或肺部或胸腺NET患者；晚期小细胞肺癌或肺部大细胞神经内分泌癌患者；晚期副神经节瘤、嗜铬细胞瘤、甲状腺髓样癌、Merkel细胞癌或肺外神经内分泌癌患者；和前列腺癌患者。此外，将评价缀合物57在上述特定肿瘤患者队列中的安全性、耐受性和PK。
2a期还通过评价PDc生物标志物变化(包括血液中的嗜铬粒蛋白A(CgA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和循环肿瘤细胞(CTC)和尿液中的5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA))探索了缀合物57在上述特定肿瘤患者队列中的抗肿瘤活性；并且探索了在上述特定肿瘤患者队列中通过多种形式(生长激素抑制素类似物放射成像、免疫组织化学、CTC或外来体分析)测量的肿瘤SSTR2表达和缀合物57的抗肿瘤活性之间的关系。还探索了SSTR2表达、PK、功效、安全性、抗缀合物57抗体和血液中PDc生物标志物变化之间的关系。
一旦所有患者参加了1期B部分并且已评估了直至并包括C2D1的安全性，并且SRC已审查所有安全性数据并建议继续进行2a期，则2a期可由发起者自行决定开始。
在1期B部分完成时，使用由SRC定义的RP2D来评价缀合物57。在4个扩展队列中治疗了总计多达80名患者，每个队列由不同亚组的表达SSTR2的实体瘤患者组成(每队列n＝20)以评估缀合物57在这些不同人群中的早期功效和安全性。
事件方案显示在下表13中：
表13.事件方案
禁用药物
在参与研究期间，禁止使用以下药物和治疗：
伴随使用强CYP3A4抑制剂(如酮康唑(ketoconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、克拉霉素(clarithromycin)、阿扎那韦(atazanavir)、茚地那韦(indinavir)、奈法唑酮(nefazodone)、奈非那韦(nelfinavir)、利托那韦(ritonavir)、沙奎那韦(saquinavir)、泰利霉素(telithromycin)和伏立康唑(voriconazole))。DM1(缀合物57的细胞毒性组分)主要通过CYP3A4以及在较小程度上通过CYP3A5[((曲妥珠单抗-美坦新偶联物(ado-trastuzumab emtansine))药品说明书，Genentech，Inc.，South San Francisco，CA]在体外代谢。因此，由于可能增加DM1暴露和毒性，因此禁止伴随使用强CYP3A4抑制剂。不允许使用阿瑞匹坦(aprepitant，)，CYP3A4的一种底物、中度抑制剂和诱导剂。
除缀合物57之外的任何研究药剂或装置，包括商业上可获得的用于进行实体瘤治疗研究的患者的实体瘤以外的适应症的药剂。
任何放射疗法、化疗、抗肿瘤治疗或研究药物以外的研究药物。在研究人员和药物监管员之间的讨论之后，可以允许在病灶位点进行放射以缓解。
不应施用活病毒和细菌疫苗，例如黄热病、麻疹、流感、风疹、腮腺炎、伤寒、结核分枝杆菌(BCG)、鼠疫耶尔森氏菌(EV)。在常规化疗中已经观察到这些疫苗的施用增加感染风险，并且对缀合物57的影响是未知的。允许施用灭活疫苗。灭活疫苗的实例是霍乱、黑死病、脊髓灰质炎疫苗、甲型肝炎和狂犬病。
还可以给出除了上述那些之外的其他药物，其被认为是对患者的安全性和健康所必需的。
谨慎使用的药物
在参与研究期间，应谨慎使用以下药物：
抗高血糖药物：生长激素抑制素类似物抑制胰岛素和胰高血糖素的分泌，这可能导致低血糖或高血糖。由于生长激素抑制素和缀合物57的肽组分之间的相似性，在用缀合物57治疗的患者中可能有必要对伴随使用的抗高血糖药物的剂量进行调整。
心动过缓诱导药物：心动过缓诱导药物(例如，β-阻断剂)的伴随施用可能对与生长激素抑制素类似物相关的心率降低具有累加效应。由于生长激素抑制素与缀合物57的肽组分之间的相似性，在用缀合物57治疗的患者中可能有必要对伴随使用的心动过缓诱导药物的剂量进行调整。
口服药物：生长激素抑制素类似物可以减少伴随使用的药物的肠吸收。由于生长激素抑制素和缀合物57的肽组分之间的相似性，缀合物57有可能会减少伴随使用的药物的肠吸收。
允许的药物
允许患者接受治疗医师认为是必要的适当支持性护理措施，包括但不限于以下所列项目：
恶心/呕吐：根据研究中心的指导，施用诸如5-HT3受体拮抗剂的止吐治疗。应强烈鼓励患者保持口服液的自由摄入。在缀合物57的第一个循环后，应根据标准机构实践(standard institutional practice)强烈考虑施用预防性止吐治疗。不允许使用阿瑞匹坦CYP3A4的一种底物、中度抑制剂和诱导剂。
腹泻：根据标准实践指南，应迅速地采用适当的支持性护理治疗腹泻，包括施用止泻药。不应预防性服用止泻药。应指导患者在第一次出现以下体征时开始服用止泻药：1)不成型粪便或稀粪便，2)在1天内出现比平时更多的肠部运动，或3)异常高的粪便量。如果粪便中有血液或粘液存在或者如果腹泻伴有发烧，应推迟止泻药。在这种情况下，应获得适当的诊断微生物标本，以排除感染病因。还应建议患者饮用自由量的澄清液体，以帮助防止脱水。
便秘：便秘可用粪便软化剂或润滑剂治疗。通过仔细监测电解质，允许使用渗透剂。
贫血：输血和/或促红细胞生成素可用于治疗贫血的临床指征，但应明确注释为伴随用药。在研究筛选时已经接受促红细胞生成素的患者可以继续使用它，只要他们在研究治疗开始时已经接受其超过1个月。在研究的C1期间，不应该开始预防性促红细胞生成素，但可以在C2期间和之后开始。
嗜中性粒细胞减少症：经历以下的患者可以接受集落刺激因子治疗：患有4级嗜中性粒细胞减少症持续≥5天；3/4级嗜中性粒细胞减少症，并且口腔温度≥38.5℃；或感染及3/4级嗜中性粒细胞减少症。在缀合物57治疗的第一个循环后，根据机构标准可使用包括G-CSF、聚乙二醇化G-CSF或GM-CSF在内的集落刺激因子的预防性使用。
生长激素抑制素类似物：允许使用诸如奥曲肽、兰瑞肽、帕瑞肽和其他生长激素抑制素类似物的药物，只要其使用提供控制类癌症状的益处。
生长激素抑制素类似物放射性同位素成像(SARI)
那些没有记录在C1D1的180天内获得的历史上阳性SARI的结果的患者在本研究中在进入筛选之前和接受缀合物57之前通过SARI预筛，以确保他们的神经内分泌肿瘤表达生长激素抑制素受体。该预筛必须仅使用具有区域上市许可的SARI进行，以用于生长激素抑制素受体阳性肿瘤的检测和定位。如果可使用具有上市许可的多试剂盒，则可以由研究人员自行决定使用任何方法。在C1D1的180天内具有历史上阳性SARI记录(通过111In、68Ga、99mTc(锝-99m)或与生长激素抑制素类似物连接的其他放射性同位素)的患者被认为是SSTR2表达阳性的，并且在本研究的预筛期间需要接受SARI。
铟标记的SARI
用于制备铟In 111喷曲肽的OctreoscanTM试剂盒(喷曲肽扫描)(MallinckrodtNuclear Medicine LLC,Maryland Heights MO USA)包含2部分：10ml反应小瓶和10ml小瓶的氯化111In。在使用前6小时内通过根据包装说明合并两种组分以产生111In喷曲肽来制备成像剂。在校准时，试剂盒含有111MBq/ml(3.0mCi/ml)111In，半衰期为2.8d。
扫描应根据机构指南和制造商说明进行。FOCBP应进行妊娠检测，如果怀孕则排除。在使用之前，必须立即根据包装说明确定标记率。在施用111In喷曲肽之前的晚上，应给予温和的泻药如比沙可啶或乳果糖，并持续48小时。在施用之前和之后，患者应该充分喝水合物，并且应该鼓励患者自由饮用液体以通过肾脏冲洗未结合的药剂来减少辐射剂量，以及确保适当的肠道清洁。虽然可以通过平面和单光子发射计算机断层扫描(SPECT)相机进行成像，但由于与计算机断层扫描(CT)或MRI扫描进行可能的比较，其三维功能、卓越的灵敏度以及更精确地定位肿瘤的能力，本研究中应仅使用SPECT成像进行扫描。SPECT成像的推荐辐射剂量为222MBq(6.0)mCi的111In喷曲肽，预期有效剂量当量为26mSv。
通常，在施用111In喷曲肽后4小时和24小时进行成像。在某些情况下，48小时后拍摄的图像也可用于辅助解释。研究人员和指定人员应遵循成像时间点的标准实践。
根据与肝脏的非病变区域的关系对扫描进行评分，如下表14所列。
表14：Octreoscan SSTR2评分
分数 描述
1 <sup>111</sup>In喷曲肽摄取低于正常肝组织
2 <sup>111</sup>In喷曲肽摄取等于正常肝组织
3 <sup>111</sup>In喷曲肽摄取大于正常肝组织
4 <sup>111</sup>In喷曲肽摄取大于正常脾或肾摄取
如果表14中患者的分数为3或4，则认为患者具有阳性Octreoscan。
根据制造商，111In喷曲肽的激素作用是奥曲肽的1/10。由于成像剂量低于生长激素抑制素类似物的治疗剂量，因此尽管在胰岛素瘤患者中可能发生严重的低血糖，但预计该药剂在大多数情况下不会发挥临床上显著的生长激素抑制素作用。对于怀疑患有胰岛素瘤的患者，应刚好在施用前和施用期间施用静脉内葡萄糖溶液。
在一项临床研究中，在接受111In喷曲肽的72小时内接受奥曲肽治疗的87名患者中有83名(95％)成功进行了成像。然而，在同时接受治疗剂量的短效生长激素抑制素治疗的患者中，成像灵敏度可能会降低，因此这一点应该在确定施用111In喷曲肽的时间时予以考虑。
由于111In喷曲肽主要由肾脏消除，因此应慎重考虑在肾损害患者中使用。
与111In喷曲肽相关的不良反应(在538名患者的临床试验中<1％)包括头晕、发热、潮红、头痛、低血压、肝酶变化、关节疼痛、恶心、出汗、虚弱、一例心动过缓以及一例血红蛋白和红细胞比容降低。
镓标记的SARI
至少自2001年以来，已经实践了采用生长激素抑制素类似物的68Ga衍生物的SARI。通常使用68Ga-DOTATATE(GaTate)和68Ga-DOTATOC。DOTATE(也称为DOTA-TATE或DOTA-奥曲肽酸)包含酸DOTA的酰胺，其连接放射性核素和(Tyr3)-奥曲肽酸(奥曲肽的一种衍生物)。DOTATOC(也称为依多曲肽(edotreotide)、SMT487或(DOTA0-Phe1-Tyr3)奥曲肽)也是奥曲肽衍生物，其可与放射性核素结合用于诊断和治疗。与缀合物57相比，68Ga-DOTATATE和68Ga-DOTATOC对多种人生长激素抑制素受体具有以下亲和力谱(半数最大抑制浓度)(表15)：
表15：多种生长激素抑制素类似物的亲和力谱(半数最大抑制浓度)
SSTR1 SSTR2 SSTR3 SSTR4 SSTR5
<sup>111</sup>In喷曲肽 >10 000 22 182 >1 000 237
<sup>68</sup>Ga-DOTATATE >10 000 0.2 >1 000 300 377
<sup>68</sup>Ga-DOTATOC >10 000 2.5 613 >1 000 73
缀合物57 380 0.042 58 >1 000 24
68Ga由回旋加速器产生，或从Ge-Ga发生器收集。然后将其与生长激素抑制素类似物合并。将得到的成像剂施用于患者，并且之后几乎立即使用同时正电子发射断层扫描术(PET)和CT成像。
可以为病变分配标准摄取值；但是，使用表14中列出的方案可以将患者整体归类为阳性。
药代动力学评估
对于C1D1和C3D1，在开始输注之前、在开始研究药物输注后0.5小时(±1分钟)；正好在输液结束时；以及在开始研究药物输注后1.5小时(±5分钟)、2小时(±5分钟)、4小时(±5分钟)、6小时(±5分钟)、8小时(±5分钟)和10小时(±5分钟)，采集静脉血液样品(4-6ml)，用于测定缀合物57、缀合物57的生长激素抑制素类似物肽组分(BT-979)和DM1(总数、未缀合的和游离的巯基)。如果10小时的时间点需要在中心接受住院治疗，则不收集10小时的时间点。记录每个样品的收集日期和时间。
生物标志物和药效学评估
生物标志物和药效学评估的基本原理
嗜铬粒蛋白A(CgA)是一种充分表征的生物标志物，通常在NET患者的血液中升高。已经显示它与神经内分泌肿瘤患者的肿瘤负荷、预后、治疗反应和疾病进展相关(Bajetta等,Cancer,vol.86:858(1999))。还显示出在施用生长激素抑制素类似物后，它迅速下降。因此，在基线时在NET患者的循环血液中评估CgA，如果升高，则在研究治疗期间作为潜在的预后标志物、作为对治疗和疾病进展的反应的潜在预测因子并作为急性生长激素抑制素通路特异性抑制的探索性生物标志物来跟踪。
还发现在SCLC和NET患者的血液中神经元特异性烯醇化酶(NSE)升高。虽然没有像CgA那样广泛研究，但是在SCLC和NET患者中，NSE水平升高与疾病程度、预后和化疗反应相关(Yao等,J Clin Oncol.,vol.28:69(2010))。在基线时在所有患者的循环血液中评估NSE，如果升高，则在研究治疗期间将其作为潜在的预后标志物并作为对治疗和疾病进展的反应的潜在预测因子来跟踪。
已显示治疗前在患者中检测到的循环肿瘤细胞(CTC)数量对SCLC(Hou等,J ClinOncol.,vol.30:525(2012))和NET(Khan等,J Clin Oncol.,vol.31:365(2013))患者具有预后意义。另外，已经在NET患者中测量了CTC上的SSTR2表达。在基线和研究治疗期间评估所有患者的CTC数量作为潜在的预后标志物和作为反应和疾病进展的潜在预测因子。测量CTC上的SSTR2表达以探索CTC中SSTR2表达与缀合物57的临床活性之间的关联。但是，如果在C1D1样品中未检测到CTC，则不会在随后的访视中收集CTC样品。通过目视分析在基线和研究治疗期间收集的CTC并用泛细胞角蛋白抗体染色来进行细胞凋亡的定性评估。
外来体是膜结合的磷脂纳米囊泡，其由许多类型的癌细胞主动分泌并且携带关于该癌症的分子信息，从而具有开发作为临床诊断工具而不需要肿瘤活检的潜力。最近的技术进步改善了外来体源性癌症相关蛋白的检测灵敏度(Im等,Nat Biotechnol.,vol.32:490(2014))。虽然来自表达生长激素抑制素受体的癌症患者的外来体蛋白和RNA的检测灵敏度尚不清楚，但该技术具有作为用于在患有此类癌症的患者中建立生长激素抑制素受体表达的基于血液的诊断工具的前景，并且可以有助于缀合物57和其他疗法的未来开发。因此，在筛选期间从所有患者收集血液样品用于分析外来体源性蛋白和/或RNA标志物，包括但不限于生长激素抑制素受体2和5。
嗜铬粒蛋白A(CgA)
在SCLC或肺部LCNEC患者中不收集用于CgA的样品。在所有其他患者中，如表13所示，在ClD1给药前和给药后6小时收集用于CgA的样品。如果C1D1值在正常范围内，则不进行进一步的收集。如果C1D1值中的任一个或两个都高于正常范围，则继续在C2D1和从C4的D1开始每3个循环(C4、C7、C10等)以及在EOT时收集样品。
神经元特异性烯醇化酶(NSE)
如表13中所示，在C1D1给药前的所有患者中收集用于NSE的样品。如果C1D1时的值在正常范围内，则不进行进一步的收集。如果值高于正常范围，则继续在C2D1、然后从C3的D1开始每隔一个循环(C3、C5、C7、C9等)以及在EOT时从SCLC和肺部LCNEC患者收集样品；并继续在C2D1、然后从C4的D1开始每3个循环(C4、C7、C10等)以及在EOT时从所有其他患者收集。
5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)
该测试不在肺部SCLC或LCNEC患者中进行。在所有其他患者中，不需要该测试。如果进行测试，则按表13所示进行采样。5-HIAA的量将通过24小时尿液收集来确定，从C1D1之前的任何一天的早晨开始，使得研究药物给药之前，完整的24小时样品可以被带到诊所收集直到ClD1。如果C1D1值在正常范围内，则不再收集5-HIAA样品。如果值高于正常范围，则在研究人员的自行决定下，在C2D1给药前24小时内、在C4的D1给药之前至少24小时开始每3个循环(C4、C7、C10等)以及在EOT时继续收集样品。
档案肿瘤样品
无论何时获得，收集用缀合物57治疗之前存档的患者肿瘤的一个或多个福尔马林固定的石蜡包埋的(FFPE)样品，用于通过IHC对SSTR2表达进行回顾性分析。
可选的肿瘤活检
仅对在筛选知情同意书(ICF)上签署提供可选的肿瘤活检以在筛选阶段进行肿瘤活检的患者进行活检程序。这些患者必须具有至少1个可进行活检并且被认为是低风险且具有足够大能进行活检程序的尺寸的肿瘤部位。对此肿瘤活检的同意是自愿的和可选的。如表13所示，在筛选期间(在C1D1之前14天内)进行该程序，并且将收集患者肿瘤样本的FFPE样品用于通过IHC对SSTR2表达进行回顾性分析。
循环肿瘤细胞
用于分析CTC的全血样品在表13中所示的时间点进行。这些样品在C1D1和C2D1给药前在所有患者中采集。在SCLC和肺部LCNEC患者中，从C3的D1开始每隔一个循环(C3、C5、C7、C9等)以及在EOT时继续收集CTC。在所有其他患者中，从C4的D1开始每3个循环(C4、C7、C10等)以及在EOT时继续收集CTC。如果在C1D1样品中未检测到CTC，则不会在随后的访视中收集它们。
外来体分析
如表13所示，在筛选期间收集全血，用于分析外来体源性蛋白和/或RNA，包括但不限于生长激素抑制素受体2和5。
功效评估
对所有患者进行肿瘤测量和疾病反应评估。在筛选期间，在C1D1之前28天内进行肿瘤评价研究。对于SCLC或肺部LCNEC患者，在C3之前开始，在每隔一个循环的第一次研究药物给药的7天内进行疾病反应评估。对于所有其他患者，从C4之前开始，在每3个循环的第一次研究药物给药的7天内进行疾病反应评估。在EOT之后，对那些具有稳定疾病或客观反应或未评估的肿瘤的患者随访疾病进展。对SCLC和肺部LCNEC患者大约每6周一次或按临床指示随访。其他患者大约每9周一次或按临床指示随访。
对于此类患者，应通过CT或MRI对疾病所有部位进行成像。随后的评估应使用与筛选期间使用的相同的放射成像方法。在筛选和随后的每次评价期间记录解剖测量值(在目标病变之间求和)。在可能的情况下，相同的有资质的医师的解释会减少可变性。
1期A部分的患者不需要患有可测量的疾病。1期B部分和2a期的患者需要具有可测量的疾病。
在筛选期间，肿瘤病变被分类为可测量的与不可测量的和目标与非目标，如下所述。
可测量的与不可测量的
可测量的：在至少1个维度中通过CT扫描或通过临床检查卡尺测量精确测量为≥10mm或通过胸部X射线精确测量为≥20mm的病变；记录最长的直径。对于恶性淋巴结，通过CT扫描，淋巴结在短轴上必须≥15mm。
不可测量的：所有其他病变，包括小病变(最长直径<10mm或病理性淋巴结具有≥10至<15mm的短轴)和真正不可测量的病变。
目标与非目标
目标：每个器官最多2个病变且总共5个病变(代表所有相关器官)的所有可测量的病变被鉴定为目标病变，并在筛选时测量和记录。基于它们的大小(即，具有最长直径的那些)和精确重复测量的适宜性来选择目标病变。计算所有目标病变的最长直径的总和，并将其记录在eCRF中作为基线总和最长直径。
非目标：未归类为目标病变(或疾病部位)的所有其他病变被鉴定为非目标病变并记录在eCRF中。不需要测量非目标病变。
根据表16中所述的类别和标准，研究人员使用RECIST 1.1评估目标病变和非目标病变中的疾病反应。使用表17中的类别和标准，每名患者的最佳总体反应被报告为在记录的一系列客观状态中记录的最佳反应。
表16.用于肿瘤反应的实体肿瘤反应评价标准(RECIST)1.1指南
表17.总体反应标准
CR＝完全反应；NE＝不可评价的；PD＝进展性疾病。
按照RECIST具有PR或CR的任何患者在大约6周后(并且不早于先前评估起4周)进行重复评估以确认反应。在确认评估之后，对于SCLC或肺部LCNEC患者以每隔一个循环的间隔，以及对于所有其他患者以每三个循环的间隔重新开始反应评估方案。
本发明的范围不意图限于以上说明书，而是如所附权利要求中所述。
在权利要求中，除非相反地指出或按照上下文明显是其他情况，否则诸如“一(a/an)”和“所述”或“该”的冠词可意指一个(种)或超过一个(种)。除非相反地指出或按照上下文明显是其他情况，否则如果一个、超过一个或所有群组成员存在于、用于给定产品或方法中或以其他方式与给定产品或方法相关，那么在群组的一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或描述被视为是符合的。本发明包括其中群组的恰好一个成员存在于、用于给定产品或方法中或以其他方式与给定产品或方法相关的实施方案。本发明包括其中超过一个或所有群组成员存在于、用于给定产品或方法中或以其他方式与给定产品或方法相关的实施方案。
还应注意，术语“包含”意图是开放式的并且允许但不要求包括额外的要素或步骤。当在本文中使用术语“包含”时，因此也涵盖和公开了术语“由......组成”。
在给出范围的情况下，包括端点。此外，应理解，除非另外指出或按照上下文和本领域普通技术人员的理解明显是其他情况，否则表示为范围的值可在本发明的不同实施方案中采取所述范围内的任何特定值或子范围，至范围下限单位的十分之一，除非上下文另有明确规定。
另外，应该理解，本发明的落入现有技术内的任何特定实施方案可以明确地从任何一个或多个权利要求中排除。由于这些实施方案被认为是本领域普通技术人员已知的，因此即使在本文中未明确阐述排除，也可排除它们。本发明的组合物的任何具体实施方案可以出于任何原因从任何一个或多个权利要求中排除，无论是否与现有技术的存在相关。
本文引用的所有引用来源，例如参考文献、出版物、数据库、数据库条目和技术，通过引用并入本申请，即使在引用中没有明确说明。在引用来源和本申请的陈述相互矛盾的情况下，以本申请中的陈述为准。
部分和表格标题不意图具有限制性。

Claims (32)

1.一种药物组合物，其包含缀合物和至少一种赋形剂，其中所述缀合物包含通过连接体与生长激素抑制素受体(SSTR)靶向部分偶合的活性物质，其中所述活性物质是美坦新(DM1)。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述缀合物具有以下结构：
3.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述缀合物的浓度为约2.0-约5.0mg/mL之间。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述缀合物的浓度为约2.5mg/mL。
5.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物的pH为约4.0至约5.0之间。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述组合物的pH为约4.0至约4.8之间。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其中所述组合物的pH为约4.0。
8.如权利要求6所述的药物组合物，其中所述组合物包含乙酸盐缓冲液。
9.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物还包含甘露醇。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其中所述甘露醇的浓度为约25至约75mg/mL之间。
11.如权利要求10所述的药物组合物，其中所述甘露醇的浓度为约50mg/mL。
12.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物还包含聚乙二醇15羟基硬脂酸酯。
13.如权利要求12所述的药物组合物，其中所述聚乙二醇15羟基硬脂酸酯的浓度为约10至约50mg/mL之间。
14.如权利要求13所述的药物组合物，其中所述聚乙二醇15羟基硬脂酸酯的浓度为约20mg/mL。
15.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物储存在-20℃。
16.如权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物通过静脉内(IV)输注施用。
17.一种治疗受试者肿瘤的方法，包括对受试者进行生长激素抑制素类似物放射性同位素成像(SARI)扫描，并且如果SARI结果为阳性，则向所述受试者施用包含缀合物和至少一种赋形剂的药物组合物，其中所述缀合物包含通过连接体与生长激素抑制素受体(SSTR)靶向部分偶合的活性物质，其中所述活性物质是美坦新(DM1)。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述SARI扫描包括使用与生长激素抑制素类似物连接的放射性同位素。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述放射性同位素包括111In、68Ga或99mTc。
20.如权利要求18所述的方法，其中所述SARI扫描包括使用111In喷曲肽。
21.如权利要求18所述的方法，其中所述SARI扫描包括使用生长激素抑制素类似物的68Ga衍生物。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述生长激素抑制素类似物的68Ga衍生物包含68Ga-DOTATATE或68Ga-DOTATOC。
23.如权利要求18所述的方法，其中利用单光子发射计算机断层扫描(SPECT)或同时正电子发射断层扫描(PET)和计算机断层扫描(CT)进行所述SARI扫描。
24.如权利要求17所述的方法，还包括施用至少一种额外的活性物质。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述额外的活性物质是用于治疗恶心、呕吐、腹泻、便秘、贫血、嗜中性粒细胞减少症的药物或生长激素抑制素类似物。
26.如权利要求17所述的方法，其中所述肿瘤是神经内分泌肿瘤(NET)。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述肿瘤选自胃肠胰腺(GEP)、肺部、前列腺和胸腺神经内分泌肿瘤。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述肿瘤是小细胞肺癌(SCLC)或肺部的大细胞神经内分泌癌(LCNEC)。
29.如权利要求17所述的方法，其中所述缀合物是缀合物57。
30.如权利要求29所述的方法，其中缀合物57的剂量为至少约0.016mg/kg。
31.如权利要求29所述的方法，其中缀合物57的剂量为至少约1mg、2mg、4mg、8mg、12mg、18mg、24mg、30mg、36mg、42mg或48mg。
32.如权利要求29所述的方法，其中缀合物57的剂量为约25mg。
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