CN114736854A - 一种干细胞的培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体为一种干细胞的培养方法，步骤一、采集无菌脂肪组织放入破碎冲洗装置；步骤二、消化血细胞和组织碎片，得到消化组织液，得到消化组织液；步骤三、离心分层，获得初悬浮液；步骤四、分离初悬浮液中未分解的脂肪组织和成熟脂肪组织，再次离心获得细胞浆；步骤五、对初代脂肪干细胞悬液中的初代脂肪干细胞进行培养；本发明既能在密封环境中将脂肪组织中的脂肪干细胞提取分离，减少了提取过程中掺入细菌的可能性，还能使脂肪干细胞的数量更多，且活力强。

Description

一种干细胞的培养方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体为一种干细胞的培养方法。
背景技术
脂肪间充质干细胞，又叫脂肪干细胞(Adipose Stem Cells,脂肪干细胞)是从脂肪组织分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。研究证明脂肪干细胞在特定的培养条件下能够分化成脂肪细胞、心肌细胞和神经细胞等多种类型的细胞。脂肪干细胞具有很低的免疫原性，因此移植异体的脂肪干细胞不会引起强烈的免疫排斥，为同种异体移植脂肪干细胞提供了有利条件。脂肪干细胞来源广泛，使用抽脂或者切除脂肪的方法可以获得脂肪组织，使用脂肪干细胞不存在伦理上的问题。脂肪干细胞在体外有很强的扩增能力，可以通过体外培养的方法得到大量的脂肪干细胞。脂肪干细胞在丰胸、除皱等美容和整形等行业有很广泛的应用，而且在医疗领域脂肪干细胞也发挥着越来越多的作用。
常规的脂肪干细胞分离方法存在一些问题：首先，现有的脂肪干细胞培养方法大都需要将脂肪组织转移到不同设备中进行破碎、清洗、消化和分离，转移过程中脂肪干细胞极易沾染空气中的细菌，严重影响脂肪干细胞的提取质量，掺有细菌的脂肪干细胞注入人体会导致术后并发症多，存在极大安全隐患；其次，现有的脂肪干细胞培养方法大都采用DMEM培养基，该培养基得到的脂肪干细胞总数量少，细胞活率低。
发明内容
本发明的目的在于针对上述的不足，提供一种既能在密封环境中将脂肪组织中的脂肪干细胞提取分离，减少了提取过程中掺入细菌的可能性，还能使脂肪干细胞的数量更多，且活力强的干细胞的培养方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种干细胞的培养方法，包括如下步骤：
步骤一、采集无菌脂肪组织放入破碎冲洗装置：
将无菌脂肪组织放入破碎冲洗装置中，先将无菌脂肪组织打碎至直径为1-2mm3，再用无菌PBS溶液清洗血细胞和组织碎片，从而得到去除残留的血细胞和组织碎片；
步骤二、消化血细胞和组织碎片，得到消化组织液，得到消化组织液：
往血细胞和组织碎片中注入等体积的浓度为0.25％的Ι型胶原酶，静置消化1-2小时，期间每隔3min均匀搅拌一次，消化温度为37℃，静置消化完成后，往血细胞和组织碎片中注入等体积的含10％胎牛血清α-MEM，并混合均匀静置5min，使培养液终止消化，得到消化组织液；
步骤三、离心分层，获得初悬浮液：
将步骤二中获得的消化组织液放入离心装置中，通过离心装置将消化组织液离心，离心700r/min，离心10min后，静置30min分层，去除上清液，得到初悬浮液；
步骤四、分离初悬浮液中未分解的脂肪组织和成熟脂肪组织，再次离心获得细胞浆：
先用筛分装置中100目细胞筛过滤掉未分解的脂肪组织，再用200目细胞筛过滤掉成熟脂肪组织，收集二次悬浮液，并将二次悬浮液再次注入离心装置中离心，离心1000r/min，离心5min后，静置30min分层，去除上清液，得到初代脂肪干细胞悬液；
步骤五、对初代脂肪干细胞悬液中的初代脂肪干细胞进行培养：
将获得的初代脂肪干细胞悬液按照2-3×104/mm2的密度接种于培养瓶，加入等量的培养液和生长因子，置于37℃、CO2浓度5％、湿度95％的培养箱中进行培养，1-2天后将原培养液吸弃，更换新鲜的培养液和生长因子，弃去非贴壁细胞，以后每24小时更换培养液一次，待细胞生长达到80％融合，在培养瓶中加0.25％胰酶-EDTA进行消化，按1:3传代，获得传代培养后的人脂肪干细胞。
进一步，所述步骤一中的破碎冲洗装置包括破碎外罐，设置于所述破碎外罐一侧的破碎控制器，设置于所述破碎外罐中的外腔，设置于所述外腔中的破碎内罐，用于安装所述破碎内罐的破碎支架，以及设置于所述破碎内罐中的内腔，所述破碎外罐上设置有连通所述内腔的破碎进料口和破碎进料管，所述外腔中设置有水浴液，所述外腔的腔体内侧壁上嵌设有多根加热管和温敏开关，所述加热管用于给所述水浴液加热，所述内腔中竖直设置有破碎轴，所述破碎轴上设置有破碎叶片，所述破碎轴的顶端穿出所述破碎外罐后连接有破碎电机，所述破碎电机用于驱动所述破碎轴旋转，所述破碎内罐的底端设置有漏斗形破碎出料管，所述漏斗形破碎出料管中设置有破碎出料总阀，所述漏斗形破碎出料管的底端延伸至所述破碎外罐下方通过管三通连接有破碎第一出料管和破碎第二出料管，所述破碎进料管上设置有破碎电磁阀，所述破碎进料口中设置有破碎进料阀，所述破碎第一出料管中设置有第一滤网和第一破碎出料阀，所述破碎第二出料管中设置有第二破碎出料阀，所述温敏开关电性连接所述加热管，所述加热管、破碎电机、破碎电磁阀、破碎进料阀、破碎出料总阀、第一破碎出料阀和第二破碎出料阀均电性连接所述破碎控制器。
进一步，所述步骤三中的离心装置包括离心支架，可转动连接于所述离心支架上的离心罐，固定于所述离心支架一侧的离心控制器，用于驱动所述离心罐旋转所采用的离心电机，所述离心电机固定在所述离心支架上，所述离心罐中设置有离心腔，所述离心罐上设置有连通所述离心腔的离心进料管和离心出料管，所述离心进料管设置有离心进料阀，所述离心出料管上通过管三通连接有离心筛分管和细胞管，所述离心筛分管和细胞管上分别设置有第一离心出料阀和第二离心出料阀，所述破碎出料管的出料端正对所述离心进料管的进料端设置，所述离心罐上设置有透明玻璃窗，所述离心腔的腔体内侧壁上设置有离心固定座，所述离心固定座中竖直设置有波纹管和吸液电动伸缩杆，所述波纹管的顶端连接有L形排水管，所述波纹管的底端连接有吸液管，所述吸液管上固定套设有吸液连接座，所述吸液座管的底端设置有吸液泵，所述L形排水管的一端伸出所述离心罐设置有排水阀，所述吸液电动伸缩杆的活塞杆杆头竖直向下伸出驱动连接所述吸液连接座，所述离心固定座靠近所述透明玻璃窗设置，所述离心电机、离心进料阀、第一离心出料阀、第二离心出料阀、吸液电动伸缩杆、吸液泵和排水阀均电性连接所述离心控制器。
进一步，所述离心罐上还设置有回流管，所述回流管上设置有回流阀，所述离心支架上设置有连接管，所述回流管的进液端正对所述连接管的出液端设置；所述步骤四中的筛分装置包括筛分箱，用于驱动所述筛分箱振动筛分所采用的多个振动电机，用于安装所述振动电机所采用的底座，所述筛分箱中水平设置有所述目细胞筛和目细胞筛，所述目细胞筛和目细胞筛将所述筛分箱内部由上而下依次划分为粗过滤腔、中粗过滤腔和细过滤腔，所述粗过滤腔的顶端设置有筛分进料管，所述筛分进料管的进料端正对所述离心筛分管的出料端设置，所述粗过滤腔、中粗过滤腔和细过滤腔的一侧分别设置有粗过滤出口、中粗过滤出口和细过滤出口，所述粗过滤出口和中粗过滤出口中分别设置有第一出料阀和第二出料阀，所述细过滤出口中设置有回流泵和第三出料阀，所述连接管远离所述回流管的一端与所述细过滤出口连通，所述振动电机、第一出料阀、第二出料阀、回流泵和第三出料阀均电性连接所述离心控制器。
进一步，所述培养液为α-MEM培养基溶液，所述α-MEM培养基溶液由α-MEM干粉培养基用注射用水溶解而成，每L所述注射用水溶解所述α-MEM干粉培养基30-50g。
进一步，所述生长因子为bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)溶液，所述bFGF溶液由bFGF冻干粉用注射用水溶解而成，每L所述注射用水溶解所述bFGF冻干粉8-12μg。
本发明的有益效果是：
由上述技术方案可知，本发明的有益效果：步骤一、采集无菌脂肪组织放入破碎冲洗装置；步骤二、消化血细胞和组织碎片，得到消化组织液，得到消化组织液；步骤三、离心分层，获得初悬浮液；步骤四、分离初悬浮液中未分解的脂肪组织和成熟脂肪组织，再次离心获得细胞浆；步骤五、对初代脂肪干细胞悬液中的初代脂肪干细胞进行培养；本发明既能在密封环境中将脂肪组织中的脂肪干细胞提取分离，减少了提取过程中掺入细菌的可能性，还能使脂肪干细胞的数量更多，且活力强。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
图1为本发明的方法步骤图；
图2为本发明中破碎冲洗装置的结构示意图；
图3为本发明中离心装置的结构示意图；
图4为本发明中筛分装置的结构示意图；
附图标记：破碎外罐11；外腔111；加热管1111；温敏开关1112；破碎控制器12；破碎内罐13；内腔131；破碎轴1311；破碎叶片1312；破碎进料口14；破碎进料管15；破碎电机16；漏斗形破碎出料管17；第一出料管18；破碎第二出料管19；离心支架21；离心控制器211；离心罐22；离心腔221；离心进料管2211；离心出料管2212；离心固定座223；波纹管224；吸液电动伸缩杆225；L形排水管226；吸液管227；吸液泵228；离心筛分管23；细胞管24；离心电机25；回流管26；连接管27；筛分箱31；粗过滤腔311；粗过滤出口3111；中粗过滤腔312；中粗过滤出口3121；细过滤腔313；细过滤出口3131；振动电机32；底座33；100目细胞筛34；200目细胞筛35。
具体实施方式
参阅图1、图2、图3和图4所示，本实施例提供的是一种干细胞的培养方法，包括如下步骤：
步骤一、采集无菌脂肪组织放入破碎冲洗装置：
将无菌脂肪组织放入破碎冲洗装置中，先将无菌脂肪组织打碎至直径为1-2mm3，再用无菌PBS溶液清洗血细胞和组织碎片，从而得到去除残留的血细胞和组织碎片；
步骤二、消化血细胞和组织碎片，得到消化组织液，得到消化组织液：
往血细胞和组织碎片中注入等体积的浓度为0.25％的Ι型胶原酶，静置消化1-2小时，期间每隔3min均匀搅拌一次，消化温度为37℃，静置消化完成后，往血细胞和组织碎片中注入等体积的含10％胎牛血清α-MEM，并混合均匀静置5min，使培养液终止消化，得到消化组织液；
步骤三、离心分层，获得初悬浮液：
将步骤二中获得的消化组织液放入离心装置中，通过离心装置将消化组织液离心，离心700r/min，离心10min后，静置30min分层，去除上清液，得到初悬浮液；
步骤四、分离初悬浮液中未分解的脂肪组织和成熟脂肪组织，再次离心获得细胞浆：
先用筛分装置中100目细胞筛34过滤掉未分解的脂肪组织，再用200目细胞筛35过滤掉成熟脂肪组织，收集二次悬浮液，并将二次悬浮液再次注入离心装置中离心，离心1000r/min，离心5min后，静置30min分层，去除上清液，得到初代脂肪干细胞悬液；
步骤五、对初代脂肪干细胞悬液中的初代脂肪干细胞进行培养：
将获得的初代脂肪干细胞悬液按照2-3×104/mm2的密度接种于培养瓶，加入等量的培养液和生长因子，置于37℃、CO2浓度5％、湿度95％的培养箱中进行培养，1-2天后将原培养液吸弃，更换新鲜的培养液和生长因子，弃去非贴壁细胞，以后每24小时更换培养液一次，待细胞生长达到80％融合，在培养瓶中加0.25％胰酶-EDTA进行消化，按1:3传代，获得传代培养后的人脂肪干细胞。
参阅图1、图2、图3和图4所示，所述步骤一中的破碎冲洗装置包括破碎外罐11，设置于所述破碎外罐11一侧的破碎控制器12，设置于所述破碎外罐11中的外腔111，设置于所述外腔111中的破碎内罐13，用于安装所述破碎内罐13的破碎支架112，以及设置于所述破碎内罐13中的内腔131，所述破碎外罐11上设置有连通所述内腔131的破碎进料口14和破碎进料管15，所述外腔111中设置有水浴液，所述外腔111的腔体内侧壁上嵌设有多根加热管1111和温敏开关1112，所述加热管1111用于给所述水浴液加热，所述内腔131中竖直设置有破碎轴1311，所述破碎轴1311上设置有破碎叶片1312，所述破碎轴1311的顶端穿出所述破碎外罐11后连接有破碎电机16，所述破碎电机16用于驱动所述破碎轴1311旋转，所述破碎内罐13的底端设置有漏斗形破碎出料管17，所述漏斗形破碎出料管17中设置有破碎出料总阀，所述漏斗形破碎出料管17的底端延伸至所述破碎外罐11下方通过管三通连接有破碎第一出料管18和破碎第二出料管19，所述破碎进料管15上设置有破碎电磁阀，所述破碎进料口14中设置有破碎进料阀，所述破碎第一出料管18中设置有第一滤网和第一破碎出料阀，所述破碎第二出料管19中设置有第二破碎出料阀，所述温敏开关1112电性连接所述加热管1111，所述加热管1111、破碎电机16、破碎电磁阀、破碎进料阀、破碎出料总阀、第一破碎出料阀和第二破碎出料阀均电性连接所述破碎控制器12；本实施例中，破碎时，第一破碎出料阀和第二破碎出料阀关闭，从破碎进料口14注入无菌脂肪组织，破碎电机16驱动破碎轴1311带动破碎叶片1312高速将无菌脂肪组织打成直径为1-2mm3的碎块，通过破碎进料管15往外腔111中注入无菌PBS溶液，破碎电机16驱动破碎轴1311带动破碎叶片1312低速搅拌清洗，清洗完成后，第一破碎出料阀打开，通过漏斗形破碎出料管17和破碎第一出料管18排掉清洗液；消化时，通过加热管1111和温敏开关1112给外腔111中的水浴液恒温加热，使水浴液温度恒定为37℃，第一破碎出料阀和第二破碎出料阀均关闭，通过破碎进料管15往外腔111中注入Ι型胶原酶，破碎电机16驱动破碎轴1311带动破碎叶片1312低速搅拌混匀；消化完成后，通过破碎进料管15往外腔111中注入含10％胎牛血清α-MEM终止消化，第二破碎出料阀打开，即可将内腔131中的消化组织液排出。
参阅图1、图2、图3和图4所示，所述步骤三中的离心装置包括离心支架21，可转动连接于所述离心支架21上的离心罐22，固定于所述离心支架21一侧的离心控制器211，用于驱动所述离心罐22旋转所采用的离心电机25，所述离心电机25固定在所述离心支架21上，所述离心罐22中设置有离心腔221，所述离心罐22上设置有连通所述离心腔221的离心进料管2211和离心出料管2212，所述离心进料管2211设置有离心进料阀，所述离心出料管2212上通过管三通连接有离心筛分管23和细胞管24，所述离心筛分管23和细胞管24上分别设置有第一离心出料阀和第二离心出料阀，所述破碎出料管的出料端正对所述离心进料管2211的进料端设置，所述离心罐22上设置有透明玻璃窗，所述离心腔221的腔体内侧壁上设置有离心固定座223，所述离心固定座223中竖直设置有波纹管224和吸液电动伸缩杆225，所述波纹管224的顶端连接有L形排水管226，所述波纹管224的底端连接有吸液管227，所述吸液管227上固定套设有吸液连接座，所述吸液座管的底端设置有吸液泵228，所述L形排水管226的一端伸出所述离心罐22设置有排水阀，所述吸液电动伸缩杆225的活塞杆杆头竖直向下伸出驱动连接所述吸液连接座，所述离心固定座223靠近所述透明玻璃窗设置，所述离心电机25、离心进料阀、第一离心出料阀、第二离心出料阀、吸液电动伸缩杆225、吸液泵228和排水阀均电性连接所述离心控制器211；本实施例中，使用时，第一离心出料阀和第二离心出料阀，通过破碎第二出料管19和离心进料管2211将内腔131中的消化组织液排入离心腔221内，离心进料阀关闭，通过离心电机25驱动离心罐22高速旋转离心；离心静置后，工作人员可通过透明玻璃窗和离心控制器211控制吸液电动伸缩杆225，调整吸液泵228的高度，将离心腔221内的上清液抽走，得到初悬浮液。
参阅图1、图2、图3和图4所示，所述离心罐22上还设置有回流管26，所述回流管26上设置有回流阀，所述离心支架21上设置有连接管27，所述回流管26的进液端正对所述连接管27的出液端设置；所述步骤四中的筛分装置包括筛分箱31，用于驱动所述筛分箱31振动筛分所采用的多个振动电机32，用于安装所述振动电机32所采用的底座33，所述筛分箱31中水平设置有所述100目细胞筛34和200目细胞筛35，所述100目细胞筛34和200目细胞筛35将所述筛分箱31内部由上而下依次划分为粗过滤腔311、中粗过滤腔312和细过滤腔313，所述粗过滤腔311的顶端设置有筛分进料管314，所述筛分进料管314的进料端正对所述离心筛分管23的出料端设置，所述粗过滤腔311、中粗过滤腔312和细过滤腔313的一侧分别设置有粗过滤出口3111、中粗过滤出口3121和细过滤出口3131，所述粗过滤出口3111和中粗过滤出口3121中分别设置有第一出料阀和第二出料阀，所述细过滤出口3131中设置有回流泵和第三出料阀，所述连接管27远离所述回流管26的一端与所述细过滤出口3131连通，所述振动电机32、第一出料阀、第二出料阀、回流泵和第三出料阀均电性连接所述离心控制器211；本实施例中，使用时，离心腔221内的初悬浮液通过离心出料管2212、离心筛分管23进入粗过滤腔311，振动电机32驱动筛分箱31振动，通过100目细胞筛34过滤掉未分解的脂肪组织，通过200目细胞筛35过滤掉成熟脂肪组织，使二次悬浮液流入细过滤腔313，通过回流泵、细过滤出口3131、连接管27和回流管26将二次悬浮液抽回离心罐22进行二次离心，通过细胞管24将二次离心静置后的初代脂肪干细胞悬液排出离心罐22。
参阅图1、图2、图3和图4所示，所述培养液为α-MEM培养基溶液，所述α-MEM培养基溶液由α-MEM干粉培养基用注射用水溶解而成，每L所述注射用水溶解所述α-MEM干粉培养基30-50g；本实施例中，通过α-MEM培养基溶液作为细胞培养基，使脂肪干细胞在理想营养平衡状态下进行多代扩增而不发生分化。
参阅图1、图2、图3和图4所示，所述生长因子为bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)溶液，所述bFGF溶液由bFGF冻干粉用注射用水溶解而成，每L所述注射用水溶解所述bFGF冻干粉8-12μg；本实施例中，通过在细胞培养基中添加bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)溶液，能有效刺激脂肪干细胞繁殖，提高了脂肪干细胞的存活率。
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神所定义的范围。

Claims (6)

1.一种干细胞的培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤一、采集无菌脂肪组织放入破碎冲洗装置：
将无菌脂肪组织放入破碎冲洗装置中，先将无菌脂肪组织打碎至直径为1-2mm3，再用无菌PBS溶液清洗血细胞和组织碎片，从而得到去除残留的血细胞和组织碎片；
步骤二、消化血细胞和组织碎片，得到消化组织液：
往血细胞和组织碎片中注入等体积的浓度为0.25％的Ι型胶原酶，静置消化1-2小时，期间每隔3min均匀搅拌一次，消化温度为37℃，静置消化完成后，往血细胞和组织碎片中注入等体积的含10％胎牛血清α-MEM，并混合均匀静置5min，使培养液终止消化，得到消化组织液；
步骤三、离心分层，获得初悬浮液：
将步骤二中获得的消化组织液放入离心装置中，通过离心装置将消化组织液离心，离心700r/min，离心10min后，静置30min分层，去除上清液，得到初悬浮液；
步骤四、分离初悬浮液中未分解的脂肪组织和成熟脂肪组织，再次离心获得细胞浆：
先用筛分装置中100目细胞筛(34)过滤掉未分解的脂肪组织，再用200目细胞筛(35)过滤掉成熟脂肪组织，收集二次悬浮液，并将二次悬浮液再次注入离心装置中离心，离心1000r/min，离心5min后，静置30min分层，去除上清液，得到初代脂肪干细胞悬液；
步骤五、对初代脂肪干细胞悬液中的初代脂肪干细胞进行培养：
将获得的初代脂肪干细胞悬液按照2-3×104/mm2的密度接种于培养瓶，加入等量的培养液和生长因子，置于37℃、CO2浓度5％、湿度95％的培养箱中进行培养，1-2天后将原培养液吸弃，更换新鲜的培养液和生长因子，弃去非贴壁细胞，以后每24小时更换培养液一次，待细胞生长达到80％融合，在培养瓶中加0.25％胰酶-EDTA进行消化，按1:3传代，获得传代培养后的人脂肪干细胞。
2.根据权利要求1所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤一中的破碎冲洗装置包括破碎外罐(11)，设置于所述破碎外罐(11)一侧的破碎控制器(12)，设置于所述破碎外罐(11)中的外腔(111)，设置于所述外腔(111)中的破碎内罐(13)，用于安装所述破碎内罐(13)的破碎支架(112)，以及设置于所述破碎内罐(13)中的内腔(131)，所述破碎外罐(11)上设置有连通所述内腔(131)的破碎进料口(14)和破碎进料管(15)，所述外腔(111)中设置有水浴液，所述外腔(111)的腔体内侧壁上嵌设有多根加热管(1111)和温敏开关(1112)，所述加热管(1111)用于给所述水浴液加热，所述内腔(131)中竖直设置有破碎轴(1311)，所述破碎轴(1311)上设置有破碎叶片(1312)，所述破碎轴(1311)的顶端穿出所述破碎外罐(11)后连接有破碎电机(16)，所述破碎电机(16)用于驱动所述破碎轴(1311)旋转，所述破碎内罐(13)的底端设置有漏斗形破碎出料管(17)，所述漏斗形破碎出料管(17)中设置有破碎出料总阀，所述漏斗形破碎出料管(17)的底端延伸至所述破碎外罐(11)下方通过管三通连接有破碎第一出料管(18)和破碎第二出料管(19)，所述破碎进料管(15)上设置有破碎电磁阀，所述破碎进料口(14)中设置有破碎进料阀，所述破碎第一出料管(18)中设置有第一滤网和第一破碎出料阀，所述破碎第二出料管(19)中设置有第二破碎出料阀，所述温敏开关(1112)电性连接所述加热管(1111)，所述加热管(1111)、破碎电机(16)、破碎电磁阀、破碎进料阀、破碎出料总阀、第一破碎出料阀和第二破碎出料阀均电性连接所述破碎控制器(12)。
3.根据权利要求2所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于：所述步骤三中的离心装置包括离心支架(21)，可转动连接于所述离心支架(21)上的离心罐(22)，固定于所述离心支架(21)一侧的离心控制器(211)，用于驱动所述离心罐(22)旋转所采用的离心电机(25)，所述离心电机(25)固定在所述离心支架(21)上，所述离心罐(22)中设置有离心腔(221)，所述离心罐(22)上设置有连通所述离心腔(221)的离心进料管(2211)和离心出料管(2212)，所述离心进料管(2211)设置有离心进料阀，所述离心出料管(2212)上通过管三通连接有离心筛分管(23)和细胞管(24)，所述离心筛分管(23)和细胞管(24)上分别设置有第一离心出料阀和第二离心出料阀，所述破碎出料管的出料端正对所述离心进料管(2211)的进料端设置，所述离心罐(22)上设置有透明玻璃窗，所述离心腔(221)的腔体内侧壁上设置有离心固定座(223)，所述离心固定座(223)中竖直设置有波纹管(224)和吸液电动伸缩杆(225)，所述波纹管(224)的顶端连接有L形排水管(226)，所述波纹管(224)的底端连接有吸液管(227)，所述吸液管(227)上固定套设有吸液连接座，所述吸液座管的底端设置有吸液泵(228)，所述L形排水管(226)的一端伸出所述离心罐(22)设置有排水阀，所述吸液电动伸缩杆(225)的活塞杆杆头竖直向下伸出驱动连接所述吸液连接座，所述离心固定座(223)靠近所述透明玻璃窗设置，所述离心电机(25)、离心进料阀、第一离心出料阀、第二离心出料阀、吸液电动伸缩杆(225)、吸液泵(228)和排水阀均电性连接所述离心控制器(211)。
4.根据权利要求3所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于：所述离心罐(22)上还设置有回流管(26)，所述回流管(26)上设置有回流阀，所述离心支架(21)上设置有连接管(27)，所述回流管(26)的进液端正对所述连接管(27)的出液端设置；所述步骤四中的筛分装置包括筛分箱(31)，用于驱动所述筛分箱(31)振动筛分所采用的多个振动电机(32)，用于安装所述振动电机(32)所采用的底座(33)，所述筛分箱(31)中水平设置有所述100目细胞筛(34)和200目细胞筛(35)，所述100目细胞筛(34)和200目细胞筛(35)将所述筛分箱(31)内部由上而下依次划分为粗过滤腔(311)、中粗过滤腔(312)和细过滤腔(313)，所述粗过滤腔(311)的顶端设置有筛分进料管(314)，所述筛分进料管(314)的进料端正对所述离心筛分管(23)的出料端设置，所述粗过滤腔(311)、中粗过滤腔(312)和细过滤腔(313)的一侧分别设置有粗过滤出口(3111)、中粗过滤出口(3121)和细过滤出口(3131)，所述粗过滤出口(3111)和中粗过滤出口(3121)中分别设置有第一出料阀和第二出料阀，所述细过滤出口(3131)中设置有回流泵和第三出料阀，所述连接管(27)远离所述回流管(26)的一端与所述细过滤出口(3131)连通，所述振动电机(32)、第一出料阀、第二出料阀、回流泵和第三出料阀均电性连接所述离心控制器(211)。
5.根据权利要求1所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于：所述培养液为α-MEM培养基溶液，所述α-MEM培养基溶液由α-MEM干粉培养基用注射用水溶解而成，每L所述注射用水溶解所述α-MEM干粉培养基30-50g。
6.根据权利要求1所述的一种干细胞的培养方法，其特征在于：所述生长因子为bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)溶液，所述bFGF溶液由bFGF冻干粉用注射用水溶解而成，每L所述注射用水溶解所述bFGF冻干粉8-12μg。
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