CN114729023A - 阻断癌症转移或增强由dna损伤化学疗法诱导的细胞死亡的抗ccr5药剂和治疗方法 - Google Patents

Abstract

本公开涉及DNA破坏剂和乐利单抗(PRO 140)或其他抗CCR5药剂用于通过选择性靶向CCR5受体来治疗或预防癌症转移并增强DNA损伤剂的细胞杀伤能力的用途。本公开涉及使用DNA破坏剂和乐利单抗(PRO 140)或其他抗CCR5试剂来治疗或预防癌症转移并减少治疗后外周血中的循环肿瘤细胞(CTC)或推定的转移性肿瘤细胞，减少治疗后癌症相关细胞上的CCR5表达，减小治疗后的肿瘤体积。本公开可用于治疗或预防患有癌症的受试者，特别是患有转移性CCR5+癌症的受试者。

Description

阻断癌症转移或增强由DNA损伤化学疗法诱导的细胞死亡的 抗CCR5药剂和治疗方法

背景技术

对于癌症，研究已表明CCR5在肿瘤的侵袭和转移中起着重要作用。CCR5表达增加是几种癌症的疾病状态的指标。已发表的研究表明，在侵袭性乳腺癌和前列腺癌的实验室和动物模型中，阻断CCR5可以减少肿瘤转移。

一些研究表明，CCR5信号传导具有抗肿瘤作用，作为T细胞活化的共刺激分子，并增加T细胞对肿瘤微环境的趋化性。参见Gao等人，CCL5 activation of CCR5 regulatescell metabolism to enhance proliferation of breast cancer cells，OPEN BIOL.，6：160122(2016)；González-Martín等人，CCR5 in cancer immunotherapy：More than an“attractive”receptor for T cells，ONCOIMMUNOLOGY，1：106-108(2012)。然而，也有证据表明，CCL5/CCR5轴信号传导可能在某些类型的癌症(例如乳腺癌和前列腺癌)中被优先激活，并且这种信号传导促进疾病进展。例如，一些研究表明，癌细胞可以过表达CCL5、CCR5或两者，可能通过CCR5信号传导对雷帕霉素(mTOR)的机制靶标的影响而促进其生长和增殖。参见Gao等人，CCL5 activation of CCR5 regulates cell metabolism to enhanceproliferation of breast cancer cells，OPEN BIOL.，6：160122(2016)；另见Chow和Luster，Chemokines in Cancer，CANCER IMMUNOL.RES.，2(12)：1125-1131(2014)；Singh等人，Expression of CCR5 and its ligand CCL5 in pancreatic cancer(Abstract)，JIMMUNOL，196(增刊1)：51.3(2016)。另外，一些免疫抑制性免疫细胞，包括调节性T细胞(Treg)和髓源性抑制细胞(MDSC)，表达CCR5，提示CCR5信号传导可能籍以促成肿瘤生长的另一种途径。Mukaida，CCR5 antagonist，an ally to fight against metastaticcolorectal cancer，TRANSLATIONAL CANCER RESEARCH，5(增刊2)：S309-S312(2016)。此外，据报道，肿瘤微环境中的癌细胞可以利用CD4⁺和CD8⁺T细胞产生的CCL5导致肿瘤生长增加和肿瘤细胞扩散。Halama等人，Tumoral Immune Cell Exploitation in ColorectalCancer Metastases Can Be Targeted Effectively by Anti-CCR5 Therapy in CancerPatients，CANCER CELL，29：587-601(2016)。

已经进行了探索性的努力，使用抗CCR5结合剂来改变与一些癌症类型相关的CCL5/CCR5信号传导。Sicoli等人，CCR5 Receptor Antanonists Block Metastasis toBone ofy-Src Oncogene-Transformed Metastatic Prostate Cancer Cell Lines，CANCER RES.，74(23)：7103-7114(2014)；Velasco-Velázquez等人，The CCL5/CCR5 AxisPromotes Metastasis In Basal Breast Cancer，ONCOIMMUNOLOGY，2(4)：e23660(2013)；Velasco-Velázquez等人，CCR5 Antagonist Blocks Metastasis of Basal BreastCancer Cells，CANCER RES.，72(15)：3839-3850(2012)。存在各种抑制、中断、阻断、改变或修饰CCR5/CCL5受体/配体轴(即，CCR5受体/CCL5配体轴)的化合物。这些化合物中的许多已经被开发用于治疗HIV-1，所述化合物也与CCR5受体结合，并且已知其与CCL5共享一些结合共性。此类化合物包括胞外或细胞跨膜CCR5结合剂，例如PRO140(胞外)和马拉韦罗(maraviroc)(跨膜)，以及其他化合物，诸如维立韦罗(vicriviroc)、阿拉韦罗(aplaviroc)、SCH-C和TAK-779，以及抗体，诸如PA14、2D7、RoAb13、RoAb14、45523等。已经发现，最强效的抗病毒抗CCR5单克隆抗体(包括例如PRO 140)单独地或与Nt残基组合地结合EL2中的CCR5受体氨基酸残基。还确定了抗CCR5单克隆抗体的CCR5受体结合位点不同于小分子CCR5拮抗剂的受体结合位点。也就是说，可用的小分子CCR5拮抗剂，如马拉韦罗，结合由跨膜螺旋形成的疏水腔，即不结合胞外Nt或环区。第七个跨膜区中的氨基酸残基E283已经被特异性地鉴定为小分子的主要位点或相互作用，并且马拉韦罗和维立韦罗已经被发现与相同组的CCR5受体氨基酸结合。Olson等人，CCR5 Monoclonal Antibodies for HIV-1Therapy，CURR.OPIN.HIV AIDS，March，4(2)：104-111(2009)。然而，也有报道称，CCL5配体和马拉韦罗通过共享两个受体位点(Nt和ECL2)与CCR5受体对接，并且合成的CCL5衍生肽也可用于阻断CCR5受体。Secchi等人，Combination of the CCL5-Derived Peptide R4.0with Different HIV-1Blockers Reveals Wide Target Compatibility and SynergicCobinding to CCR5，ANTIMICROB AGENTS CHEMOTHER.，58(10)：6215-6223(2014)。

在一些情况下，肿瘤微环境中的癌细胞可以利用与免疫细胞活化相关的CCL5表达，使用抑制剂诸如马拉韦罗阻断CCR5信号传导可能具有抗肿瘤作用。在一项关于人结直肠癌肝转移的研究中，侵袭边缘处的CD4⁺和CD8⁺T细胞表达CCL5，这与T细胞耗竭、肿瘤增殖、侵袭性肿瘤细胞行为以及肿瘤相关巨噬细胞的基质金属蛋白酶产生增加相关联。Halama等人，Tumoral Immune Cell Exploitation in Colorectal Cancer Metastases Can BeTargeted Effectively by Anti-CCR5 Therapy in Cancer Patients，CANCER CELL，29：587-601(2016)。用马拉韦罗抑制CCL5导致肿瘤相关巨噬细胞复极化和肿瘤细胞死亡。Halama等人(2016)。

然而，抑制CCR5信号传导也可具有免疫抑制作用。已经进行了体外研究来研究马拉韦罗对活化的人T细胞的CCR5受体阻断对潜在免疫机制的作用。研究发现，通过马拉韦罗阻断CCR5不仅可以阻断CCL5和CCL2诱导的CCR5和CCR2内化过程，还可以分别抑制T细胞对其同源配体的趋化活性。此外，在高剂量下用马拉韦罗阻断CCR5往往会减少TNF-α和IFN-γ的产生。还有人指出，马拉韦罗对CCR5的作用是暂时的和可逆的。Yuan等人，In VitroImmunological Effects of Blocking CCR5 on T Cells，INFLAMMATION，38(2)：902-910(2015)；参见Arberas等人，In vitro effects of the CCR5 inhibitor maraviroc onhuman T cell function，J.ANTIMICROB.CHEMOTHER.，68(3)：577-586(2013)。

鉴于CCR5信号传导在促进肿瘤发展中的众多且有时相互矛盾的作用，需要CCR5受体的竞争性抑制剂和使用方法，其可用于抑制、减缓、中断、阻断、改变或修饰CCR5/CCL5受体/配体轴用于治疗目的，而不会触发非预期的副作用或者会减少其影响。另外，需要此类针对CCR5受体的竞争性抑制剂和使用方法，其引起的严重副作用更小和更少，能够更持久，并且由于给药需求减少和患者体验改善(由于更少的不希望的副作用，包括竞争性抑制剂本身引起的副作用)而有助于改善患者依从性。使用CCL5/CCR5轴作为治疗靶标的最佳治疗模式将需要适应两个相反的要求：需要抑制CCL5和CCR5在特定恶性疾病中的有害参与，同时保护它们在免疫中的潜在有益活性。

乳腺癌仍然是影响女性的最常见实体肿瘤，是女性中癌症相关死亡的第二大原因。转移是乳腺癌患者死亡的主要原因。目前还没有批准的专门针对转移过程的治疗方法。

此外，10％至15％的乳腺癌患者患有三阴性乳腺癌(TNBC)，其定义为缺乏雌激素受体(ER)、孕激素受体(PgR)和人表皮生长因子受体-2(HER-2)表达，它们分别是内分泌疗法和抗HER2药剂的已知靶点。约70-84％的TNBC是基底样的；相反，约70％的基底样肿瘤为TNBC(Nielson 2004，Prat 2011，Prat 2013)。

化学疗法仍然是TNBC患者的主要治疗选项，标准治疗是手术配合辅助化学疗法和放射疗法。尽管TNBC对诸如紫杉烷类和蒽环类等化学治疗剂的反应优于其他乳腺癌亚型，但预后仍然不佳。作为一种变化，新辅助化学疗法常用于三阴性乳腺癌[Hudis 2011]。这允许更高比例的保乳手术，并且从评估对化学疗法的反应，给出关于特定癌症对化学疗法的个体反应的重要线索。

由于诸如ER、PGR和HER-2等靶受体的丧失，TNBC患者不能从激素或基于曲妥珠单抗的疗法中获益。因此，手术和化学疗法(单独地或组合地)似乎是唯一可用的方式。迄今为止，有多种方法试图改善三阴性乳腺癌患者的护理，包括DNA破坏剂(如铂)、靶向EGFR和VEGF抑制剂以及PARP抑制剂；然而，没有一种疗法像预期的那样在临床上取得成功，需要开发和探索更多的靶向疗法[Aysola 2013]。因此，转移性TNBC是一种复杂疾病，其需求尚未得到满足，临床治疗方案也未经证实。

需要专门针对转移过程的改进的癌症治疗，诸如将CCR5结合剂与目前可用的疗法(诸如DNA破坏剂)一起施用，以对患者治疗选项提供有意义的改进。

发明内容

本公开涉及DNA破坏剂和乐利单抗(leronlimab，PRO 140)或其他抗CCR5药剂用于通过选择性靶向CCR5受体来治疗或预防癌症转移并增强DNA破坏剂的细胞杀伤能力的用途。本公开涉及使用DNA破坏剂和乐利单抗(PRO 140)或其他抗CCR5试剂来治疗或预防癌症转移并减少治疗后外周血中的循环肿瘤细胞(CTC)或推定的转移性肿瘤细胞，减少治疗后癌症相关细胞上的CCR5表达，减小治疗后的肿瘤体积。本公开可用于治疗或预防患有癌症的受试者，特别是患有转移性CCR5+癌症的受试者。

如本文描述的异种移植模型所示，乐利单抗可有效阻断CCR5阳性乳腺癌转移。还提供了鼠异种移植模型，其显示通过降低乳腺癌细胞转移的能力，肿瘤被更多地限制。另外，研究表明，乐利单抗可以潜在地为标准DNA损伤化学疗法提供更多的工作时间，潜在地显著提高现有癌症疗法的疗效，且副作用更少。也就是说，乐利单抗增强了DNA破坏剂杀死癌细胞的效果。

附图的几个视图的简要说明

本专利或申请文件包含至少一幅用彩色绘制的图。本专利或专利申请出版物的副本及一幅或多幅彩图将由专利局根据要求并支付必要的费用后提供。

图1A和图1B：乐利单抗结合人乳腺癌细胞中的CCR5。

图2A至图2D：PRO140阻断人乳腺癌细胞中人CCR5介导的信号传导。

图3A至图3D：乐利单抗阻断CCR5介导的人乳腺癌细胞向细胞外基质中的侵袭。

图4A和图4B：乐利单抗阻断小鼠中的乳腺癌转移。

图5A和图5B：乐利单抗增强由多柔比星(一种DNA损伤诱导化疗剂)诱导的细胞死亡。

图6A至图6C：显示了三阴性乳腺癌受试者的组织样品中的CCR5的免疫组织化学染色。图6A显示了CCR5的IHC的代表性图像。档案组织的免疫组化分析显示，CCR5+肿瘤浸润性白细胞占优势。

具体实施方式

CCR5表达增加是几种癌症(包括但不限于乳腺癌)中疾病状态的指标。

尽管转移是乳腺癌患者死亡的主要原因，但目前还没有针对转移过程的可用治疗方法。因此，需要针对转移性癌症，包括转移性乳腺癌的更好治疗。本文提供了通过向受试者施用有效量的CCR5结合剂(诸如乐利单抗)来治疗受试者的转移性乳腺癌的方法。具体而言，本公开涉及乐利单抗(PRO 140)或其他抗CCR5药剂用于通过选择性靶向癌症受试者中的CCR5受体来治疗、减少、预防或阻断癌症转移并且/或者增强DNA损伤化学疗法的细胞杀伤能力的用途。

临床前和临床数据表明，趋化因子受体及其配体，也称为趋化因子或趋化细胞因子，通过特定器官参与癌细胞向性的过程[Moser，2001][Neagu，2015][Velasco-Velazquez，2012]。C-C趋化因子受体5型(CCR5)在去分化和转化过程中选择性地在肿瘤细胞表面上重新表达(velasco-velazquez-2012)。Velasco-Velazquez等人评估了对包含2,254个乳腺癌样品的组合微阵列数据库的分析，并且显示与luminal亚型相比，CCL5/CCR5在乳腺癌的基底亚型(超过58％的样品)中的表达更高[Velasco-Velazquez，2012]。已经证明，CCR5足以诱导被CCR5抑制剂阻断的乳腺癌细胞的体外侵袭和转移[Velasco-Velazquez，2012]。CCR5抑制剂，诸如马拉韦罗，有效阻断乳腺癌肿瘤模型中的肺转移。

在乳腺癌肿瘤模型中，包括乐利单抗(PRO 140)在内的CCR5结合剂显示肿瘤体积的显著减小。另一种CCR5可能发挥作用的癌症标志是DNA修复途径。这种癌症特征减弱了细胞凋亡，有助于化学疗法抗性和肿瘤细胞永生。研究表明乳腺癌患者中C-C趋化因子配体-5(C-C Chemokine Ligand type-5，CCL5)的表达改变与疾病进展相关[Luboshits，1999][Niwa，2001][Zhang，2009]。

CCR5结合剂，诸如拮抗剂马拉韦罗和维立韦罗，显著增强了DNA损伤化学治疗剂介导的细胞杀伤。单细胞分析显示CCR5控制/Akt、核糖体生物发生和细胞存活信号传导[Jiao-2018]。

最近显示了CCR5阻断CCL5-CCR5途径在肿瘤免疫控制中的作用，并且该作用为靶向这种致命疾病提供了新的视野[de Oliveira，2017，Del Prete，2017，Lanitis，2017]。活组织检查的CCR5免疫组织化学允许选择性地选择不仅在肿瘤上而且在肿瘤微环境中的肿瘤内免疫细胞上具有CCR5表达的患者。

利用一种或多种CCR5结合剂(诸如乐利单抗(PRO 140))的靶向疗法，由于化学治疗剂(诸如卡铂)的DNA交联链断裂的协同作用，可能具有增加总反应率的潜力，并且该靶向疗法减少了继发于乐利单抗(PRO 140)对CCR5的结合的DNA修复。

词汇表

在更详细地阐述本公开之前，提供将在本文中使用的某些术语的定义可能有助于理解本公开。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的含义相同的含义。在本公开中阐述了进一步的定义。

在本说明书中，除非另有说明，否则任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应被理解为包括所述范围内的任何整数的值，并且在适当时包括其分数(例如整数的十分之一和百分之一)。此外，除非另有说明，否则本文所述的与任何物理特征诸如剂量相关的任何数值范围应理解为包括所述范围内的任何整数。如本文中所用，除非另有说明，否则术语“约”意指所示范围、数值或结构的±20％。

应当理解，本文使用的术语“一个/种”是指列举的组件中的“一个/种或多个/种”。备选方案(例如“或”)的使用应理解为意指备选方案中之一、两者或其任意组合。

如本文所用，术语“包括”、“具有”和“包含”用作同义词，这些术语及其变型旨在解释为非限制性的。

术语“基本上由......组成”将权利要求的范围限制于指定的材料或步骤，或者限制于那些实质上不影响要求保护的发明的基本特征的材料或步骤。例如，当蛋白质结构域、区域或模块或蛋白质的氨基酸序列包括延伸、缺失、突变或其任意组合(例如，氨基或羧基末端处或结构域之间的氨基酸)时，所述蛋白质结构域、区域或模块(例如，结合结构域、铰链区、接头模块)或蛋白质(其可具有一个或多个结构域、区域或模块)“基本上由”特定氨基酸序列组成，所述延伸、缺失、突变或其任意组合一起占结构域、区域或模块或蛋白质的长度的至多20％(例如，至多15％、10％、8％、6％、5％、4％、3％、2％或1％)，并且基本上不影响(即，活性降低不超过50％，诸如不超过40％、30％、25％、20％、15％、10％、5％或1％)所述结构域、区域、模块或蛋白质的活性(例如，结合蛋白的靶结合亲和力)。

如本文所用，“趋化因子”意指能刺激白细胞运动的细胞因子。趋化因子的特征可在于cys-cys或cys-X-cys，这取决于两个氨基末端半胱氨酸残基是直接相邻还是被一个氨基酸分隔。其包括但不限于CCL5(也称为RANTES)、MIP-1α、MIP-1β或SDF-1，或具有类似活性的另一种趋化因子。

如本文所用，“趋化因子受体”意指结合趋化因子的七跨膜跨细胞表面蛋白的同源家族的成员。

如本文所用，“CCR5”是结合趋化因子的C-C组成员并且其氨基酸序列包含Genbank登录号1705896中提供的序列的趋化因子受体，以及相关的多态性变体。

如本文所用，“抗体”意指包含两条重链和两条轻链并识别抗原的免疫球蛋白分子。免疫球蛋白分子可源自任何公知的种类或同种型，包括但不限于IgA、分泌型IgA、IgG和IgM。IgG亚类也为本领域技术人员所熟知，包括但不限于人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。举例来说，其包括天然存在的和非天然存在的抗体。具体而言，“抗体”包括多克隆和单克隆抗体及其单价和二价片段。此外，“抗体”包括嵌合抗体、全合成抗体、单链抗体及其片段。任选地，抗体可用可检测的标记物标记。可检测的标记物包括例如放射性标记或荧光标记。抗体可以是人或非人抗体。非人抗体可通过重组方法人源化，以降低其在人中的免疫原性。抗体的人源化方法是本领域技术人员已知的。

如本文所用，“单克隆抗体”，也称为“mAb”，用于描述其一级序列基本相同并表现出相同抗原特异性的抗体分子。单克隆抗体可以通过杂交瘤、重组、转基因或本领域技术人员已知的其他技术产生。

如本文所用，“重链”意指由一个可变结构域(VH)和三个或四个恒定结构域(CH1、CH2、CH3和CH4)组成的抗体分子的较大多肽或其片段。

如本文所用，“轻链”意指由一个可变结构域(VL)和一个恒定结构域(CL)组成的抗体分子的较小多肽或其片段。

如本文所用，抗体的“结合片段”或“抗原结合片段或部分”是指完整抗体的片段或部分，其具有或保持与被完整抗体识别的抗原靶分子结合的能力，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab’)2片段、Fab’片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、单链抗体片段，包括单链可变片段(scFv)和单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体(nanobody))片段。该术语包括免疫球蛋白的基因工程或以其他方式修饰的形式，诸如胞内抗体(intrabody)、肽抗体、嵌合抗体、完全人抗体、人源化抗体和异源缀合抗体，多特异性(例如双特异性)抗体、双抗体、三抗体、四抗体、串联二-scFv和串联三-scFv。

如本文所用，“Fab”意指免疫球蛋白的单价抗原结合片段，其由一条轻链和重链的一部分组成。其可通过简单的木瓜蛋白酶消化或重组方法获得。

如本文所用，“F(ab’)2片段”意指免疫球蛋白的二价抗原结合片段，其由两条轻链和两条重链的一部分组成。其可通过简单的胃蛋白酶消化或重组方法获得。

如本文所用，“CDR”或“互补决定区”意指抗体可变区中高度可变的氨基酸序列。

如本文所用，“人源化的”描述了其中CDR区以外的一些、大部分或全部氨基酸被来源于人免疫球蛋白分子的相应氨基酸取代的抗体。在抗体的人源化形式的一个实施方案中，CDR区之外的一些、大部分或全部氨基酸已被来自人免疫球蛋白分子的氨基酸取代，但其中一个或多个CDR区内的一些、大部分或全部氨基酸未被改变。氨基酸的小的添加、缺失、插入、取代或修饰是允许的，只要它们不会破坏所述抗体结合给定抗原的能力。合适的人免疫球蛋白分子包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgM分子。“人源化”抗体将保持与原始抗体相似的抗原特异性，例如在本公开中，结合CCR5的能力。

本领域技术人员将知道如何制备本公开的人源化抗体。各种出版物(其中一些出版物据此通过引用并入本申请)也描述了如何制备人源化抗体。例如，美国专利第4,816,567号中描述的方法包括生产嵌合抗体，该嵌合抗体具有一种抗体的可变区和另一种抗体的恒定区。美国专利第5,225,539号描述了产生人源化抗体的另一种方法。该专利描述了重组DNA技术生产人源化抗体的用途，其中一种免疫球蛋白的可变区的CDR被具有不同特异性的免疫球蛋白的CDR取代，使得人源化抗体将识别所需的靶标，但不会被人受试者的免疫系统以显著的方式识别。具体来说，定点诱变用于将CDR移植到框架上。

美国专利第5,585,089号和第5,693,761号以及WO 90/07861描述了使抗体人源化的其他方法，所述专利描述了产生人源化免疫球蛋白的方法。这些人源化免疫球蛋白具有一个或多个来自供体免疫球蛋白的CDR和可能的附加氨基酸，以及来自接受者人免疫球蛋白的框架区。这些专利描述了提高抗体对所需抗原的亲和力的方法。框架中的一些氨基酸被选择为与供体而不是受者中那些位置处的氨基酸相同。具体而言，这些专利描述了通过将小鼠单克隆抗体的CDR与人免疫球蛋白框架和恒定区组合来制备与受体结合的人源化抗体。可选择人框架区，以便与小鼠序列具有最大同源性。可使用计算机模型来鉴定框架区域中可能与CDR或特定抗原相互作用的氨基酸，然后可以在这些位置使用小鼠氨基酸来产生人源化抗体。

上述美国专利第5,585,089号和第5,693,761号以及WO 90/07861也提出了可用于设计人源化抗体的四种可能的标准。第一个提议是，对于接受者，使用与待人源化的供体免疫球蛋白异常同源的特定人免疫球蛋白的框架，或者使用许多人抗体的共有框架。第二个提议是，如果人免疫球蛋白框架中的氨基酸是罕见的，并且该位置的供体氨基酸对于人序列是典型的，那么可以选择供体氨基酸而不是接受者氨基酸。第三个提议是，在人源化免疫球蛋白链中紧邻3个CDR的位置处，可以选择供体氨基酸而不是接受者氨基酸。第四个提议是，在其氨基酸预计有侧链原子在抗体的三维模型中位于CDR的3A内、并且预测能够与CDR相互作用的框架位置处使用供体氨基酸。上述方法仅仅是本领域技术人员可以用来制备人源化抗体的一些方法的举例说明。可使用如Wu等人，J.MOL.BIOL.，284：151(1999)和美国专利第6,165,793号、第6,365,408号和第6,413,774号中所述的定向进化的方法增强人源化抗体的结合亲和力和/或特异性。

人源化抗体的可变区可以与人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区的至少一部分连接。在一个实施方案中，人源化抗体包含轻链和重链恒定区两者。重链恒定区通常包括CHI、铰链、CH2、CH3，有时还包括CH4区。在一个实施方案中，人源化抗体的恒定区是人IgG4同种型的。

本文公开的抗体或结合片段可以是标记的或未标记的。未标记的抗体可以与其他标记的抗体(第二抗体)组合使用，所述标记的抗体对人源化抗体具有反应性，诸如对人免疫球蛋白恒定区特异的抗体。或者，抗体可被直接标记。可使用多种标记物，诸如放射性核素、荧光、酶、酶底物、酶辅因子、酶抑制剂、配体(特别是半抗原)等。有多种类型的免疫测定可供利用，它们是本领域技术人员公知的，可用于检测表达CCR5的细胞或检测能够表达CCR5的细胞上的CCR5调节。

本发明还提供了具有有效大小或分子量的抗体或抗体片段-聚合物缀合物，或结合了其他半衰期延长技术，从而与未衍生化的抗体片段相比，其赋予了血清半衰期的增加、循环中平均停留时间(MRT)的增加和/或血清清除率的降低。抗体片段-聚合物缀合物可通过用惰性聚合物衍生所需的抗体片段来制备。应当理解，提供具有所需表观尺寸的缀合物或具有选定的实际分子量的任何惰性聚合物都适用于构建本公开的抗体片段-聚合物缀合物。

许多惰性聚合物适用于药物。参见，例如，Davis等人，Biomedical Polymers：Polymeric Materials and Pharmaceuticals for Biomedical Use，第441-451页(1980)。对于本文公开的抗体或抗体片段-聚合物缀合物，使用非蛋白质性质的聚合物。非蛋白质性质的聚合物通常是亲水性的合成聚合物，即原本在自然界中不存在的聚合物。然而，天然存在并通过重组或体外方法生产的聚合物也是有用的，从天然来源分离的聚合物也是有用的。亲水性聚乙烯聚合物属于本公开的范围，例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。特别有用的是聚亚烷基醚，诸如聚乙二醇(PEG)；聚氧化烯，诸如聚氧乙烯、聚氧丙烯，以及聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物(Pluronics)；聚甲基丙烯酸酯；卡波姆；支链或非支链多糖，其包含糖单体D-甘露糖、D-和L-半乳糖、岩藻糖、果糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖醛酸、唾液酸、D-半乳糖醛酸、D-甘露糖醛酸(例如，聚甘露糖醛酸或藻酸)、D-葡糖胺、D-半乳糖胺、D-葡萄糖和神经氨酸，包括同多糖和杂多糖诸如乳糖、支链淀粉、淀粉、羟乙基淀粉、直链淀粉、硫酸葡聚糖、葡聚糖、糊精、糖原或酸性粘多糖的多糖亚单位，例如透明质酸、糖醇的聚合物诸如聚山梨醇和聚甘露醇、肝素或heparon。交联前的聚合物不必是水溶性的，但优选是水溶性的，但最终的缀合物必须是水溶性的。优选地，缀合物表现出至少约0.01mg/ml，更优选至少约0.1mg/ml，还更优选至少约1mg/ml的水溶解度。在一个实施方案中，所述聚合物在缀合物形式中不应具有高免疫原性，也不应具有与静脉输注或注射不相容的粘度(如果打算通过此类途径施用缀合物的话)。

在一个实施方案中，聚合物仅包含单一的反应性基团。这有助于避免蛋白质分子的交联。然而，最大化反应条件以减少交联，或者通过凝胶过滤或离子交换色谱纯化反应产物以回收基本均一的衍生物都在本公开的范围内。在其他实施方案中，聚合物包含两个或多个反应性基团，用于将多个抗体片段连接到聚合物骨架上。

凝胶过滤或离子交换色谱可用于以基本上均质的形式回收所需衍生物。

聚合物的分子量范围可高达约500,000，优选至少约20,000D，或至少约30,000D，或至少约40,000D。所选择的分子量可取决于待实现的缀合物的有效尺寸、聚合物的性质(例如结构，诸如线性的或支化的等)和衍生化程度，即每个抗体片段的聚合物分子数，以及抗体片段上的聚合物附接位点。

聚合物可通过多功能交联剂与抗体片段共价连接，所述交联剂与聚合物和待连接的抗体片段的一个或多个氨基酸残基反应。然而，通过使衍生化的聚合物与抗体片段反应直接交联聚合物也在本公开的范围内，反之亦然。

抗体片段上的共价交联位点包括N末端氨基和存在于赖氨酸残基上的ε氨基，以及其他氨基、亚氨基、羧基、巯基、羟基或其他亲水基团。聚合物可以直接与抗体片段共价结合，而不使用多官能(通常双官能)交联剂，如美国专利第6,458,355号中所描述的。

这种聚合物的取代度将根据抗体片段上反应位点的数量、聚合物的分子量、亲水性和其它特性以及所选择的特定抗体片段衍生位点而变化。一般而言，缀合物包含1至约10个聚合物分子，但也可以预期更多数量的聚合物分子附接至本公开的抗体片段。通过使用实验矩阵可以很容易确定所需的衍生量，在该矩阵中改变时间、温度和其他反应条件以改变取代度，之后通过尺寸排阻色谱法或本领域已知的其他手段来测定缀合物的聚合物取代水平。

修饰本公开的抗体片段的官能化PEG聚合物可从Shearwater Polymers，Inc.(Huntsville，Ala.)获得。此类商购可得的PEG衍生物包括但不限于氨基-PEG、PEG氨基酸酯、PEG-酰肼、PEG-硫醇、PEG-琥珀酸酯、羧甲基化PEG、PEG-丙酸、PEG-氨基酸、PEG琥珀酰亚胺琥珀酸酯、PEG琥珀酰亚胺丙酸酯、羧甲基化PEG的琥珀酰亚胺酯、PEG的琥珀酰亚胺基碳酸酯、氨基酸PEG的琥珀酰亚胺酯、PEG-氧基羰基咪唑、PEG-碳酸硝基苯酯、PEG tresylate、PEG缩水甘油醚、PEG-醛、PEG-乙烯砜、PEG马来酰亚胺、PEG-正吡啶基-二硫化物、异官能PEG、PEG乙烯基衍生物、PEG硅烷和PEG phospholides。偶联这些PEG衍生物的反应条件将根据蛋白质、所需的PEG化程度和所用的PEG衍生物而变化。涉及PEG衍生物的选择的一些因素包括：所需的附接点(诸如赖氨酸或半胱氨酸R基团)、衍生物的水解稳定性和反应性、键联的稳定性、毒性和抗原性、分析的适用性等。可从制造商获得使用任何特定衍生物的具体说明。可通过凝胶过滤或离子交换HPLC将其缀合物与未反应的原料分离开。

如本文所用，“抗趋化因子受体抗体”意指识别趋化因子受体上的表位并与其结合的抗体。如本文所用，“抗CCR5抗体”是指识别CCR5趋化因子受体上的表位并与其结合的单克隆抗体。

如本文所用，“表位”意指形成结合抗体或其他化合物的表面的一种或多种分子的一部分。表位可以包含连续或非连续的氨基酸、碳水化合物或其他非肽基部分或寡聚体特异性表面。

如本文所用，“多肽”意指通过肽键连接的两个或多个氨基酸。

“核酸分子”或“多核苷酸”可呈RNA或DNA的形式，其包括cDNA、基因组DNA和合成DNA。核酸分子可以是双链或单链的，如果是单链的，可以是编码链或非编码链(反义链)。编码分子可具有与本领域已知的编码序列相同的编码序列，或者可具有不同的编码序列，但由于遗传密码的冗余或简并性，或者通过剪接，其可编码相同的多肽。

抗体或结合片段的“类似物”包括由于保守氨基酸取代而不同于抗体或结合片段的分子。出于将氨基酸取代分类为保守的或非保守的的目的，氨基酸可以如下分组：组I(疏水侧链)：met、ala、val、leu、ile；组II(中性亲水侧链)：cys、ser、thr；组III(酸性侧链)：asp、glu；组IV(碱性侧链)：asn、gln、his、lys、arg；组V(影响链取向的残基)：gly、pro；和组VI(芳族侧链)：trp、tyr、phe。保守取代包括同一类内氨基酸之间的取代。非保守取换是将这些类别之一的成员交换为另一类别的成员。

由于遗传密码的简并性，多种核酸序列编码本文公开的蛋白质或多肽。例如，同源核酸分子可包含与参考核苷酸序列具有至少约90％同一性的核苷酸序列。更优选地，核苷酸序列与参考核苷酸序列具有至少约95％、至少约97％、至少约98％或至少约99％同一性。同源性可使用本领域普通技术人员熟知的各种公开可用的软件工具来计算。示例性工具包括可从国家卫生研究院的国家生物技术信息中心(NCBI)的网站上获得的BLAST系统。

鉴定高度同源的核苷酸序列的一种方法是通过核酸杂交。因此，同源核酸分子在高严格条件下杂交。相关序列的鉴定也可使用聚合酶链式反应(PCR)和其他适于克隆相关核酸序列的扩增技术来实现。优选地，选择PCR引物来扩增目标核酸序列的部分，诸如CDR。

本文使用的术语“高严格条件”是指本领域熟悉的参数。核酸杂交参数可见于汇编此类方法的参考文献中，例如MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，J.Sambrook等人，编辑，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)，或CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY，F.M.Ausubel等人编辑，JohnWiley&Sons，Inc.，New York。高严格条件的一个实例是在65摄氏度下于杂交缓冲液(3.5×SSC，0.02％Ficoll，0.02％聚乙烯吡咯烷酮，0.02％牛血清白蛋白，2.5mM NaH2PO4(pII7)，0.5％SDS，2mM EDTA)中进行的杂交。SSC为0.15M氯化钠/0.015M柠檬酸钠，pH7；SDS为十二烷基硫酸钠；并且EDTA是乙二胺四乙酸。杂交后，例如在室温下于2×SSC中，然后在高达68℃的温度下于0.1-0.5×SSC/0.1×SDS中洗涤其上转移有核酸的膜。

如本文所用，术语“载体”是指能够运输另一种核酸的核酸分子。载体可以是例如质粒、粘粒、病毒或噬菌体。“表达载体”是当载体存在于合适的环境中时，能够指导由载体携带的一个或多个基因编码的蛋白质表达的载体。

核酸序列可以在与表达控制序列有效连接(即被置于确保其功能发挥的位置)后在宿主中表达。这些表达载体通常可作为附加体或者作为宿主染色体DNA的整体部分在宿主生物体中复制。通常，表达载体将包含选择标记，例如四环素或新霉素，以允许检测被所需的DNA序列转化的那些细胞。参见例如美国专利第4,704,362号，其通过引用并入本文。

一旦表达，可以根据本领域的标准方法纯化完整的抗体、其二聚体、单独轻链和重链、或本公开的其他免疫球蛋白形式或结合片段，所述标准方法包括硫酸铵沉淀、亲和柱、柱色谱、凝胶电泳等。通常参见R.Scopes，PROTEIN PURIFICATION，Springer-Verlag，NewYork(1982)。对于药物用途，至少约90-95％均一性的基本上纯的免疫球蛋白是优选的，98-99％或更高的均一性是最优选的。一旦纯化(部分地或达到所需的均一性)，然后就可将多肽用于治疗(包括体外)或用于开发和进行测定程序、免疫荧光染色等。总体参见IMMUNOLOGICAL METHODS，第I卷和第II卷，Lefkovits和Pernis编辑，Academic Press，NewYork，N.Y.(1979和1981)。

如本文所用，“抑制”意指与没有组合物时的量相比，组合物存在时所述的量减少。

如本文所用，术语“竞争性抑制剂”是指与参考分子竞争与靶标的结合，从而减弱、抑制、降低、减少或阻断参考分子对靶的作用的分子。例如，PRO 140是CCL5与CCR5受体结合的竞争性抑制剂。

如本公开中所用，“激动剂活性”是指分子与靶标的结合，其中该结合激活靶标以产生响应。

如本文所用，“CCL5激动剂活性”是指与CCL5引起的活化一致的活性。

如本公开中所用，“拮抗剂活性”是指分子与靶的这种结合，其中该结合不激活靶标而产生响应，并且该结合阻断一种或多种激动剂分子的作用。

如本文所用，“受试者”意指能够患有癌症的任何动物或人工改造的动物。人工改造的动物包括但不限于具有人免疫系统的SCID小鼠。所述动物包括但不限于小鼠、大鼠、狗、豚鼠、雪貂、兔子和灵长类动物。在一个优选实施方案中，受试者是人。

如本文所用，“治疗”是指减缓、停止或逆转给定疾病或病症的进展。在一个优选实施方案中，“治疗”意指逆转疾病或疾患的进展。在一些实施方案中，治疗包括逆转疾病或病症的进展至消除所述疾病或病症的点。

如本文所用，“预防”是指预防疾病或病症发生；延缓疾病或病症的进展；或者减轻疾病或病症的病理或症状。例如，预防癌症包括预防肿瘤的发展、减缓肿瘤的生长和延缓肿瘤的发展。

如本文所用，“施用”可使用本领域技术人员已知的任何方法来实现或进行。所述方法可包括口服、静脉内、肌内或皮下方式。

如本文所用，“有效剂量”意指足以治疗受试者或防止受试者发展癌症的量。本领域普通技术人员可以进行简单的滴定实验来确定治疗受试者所需的量。

CCR5结合剂

一方面，本公开涉及靶向CCR5受体的CCR5结合剂的用途，其作为CCR5细胞受体的竞争性抑制剂，除了DNA破坏剂之外，不提供CCL5激动剂活性。

在一个实施方案中，本公开提供了PRO 140抗体或其结合片段在治疗或预防癌症方面的用途。PRO 140是美国专利第7,122,185号和第8,821,877号(其通过引用以其整体并入本文)中描述的人源化单克隆抗体。PRO 140是鼠mAb--PA14的人源化形式，其中PA14是针对CD4+CCR5+细胞产生的。Olson等人，Differential Inhibition of HumanImmunodeficiency Virus Type 1 Fusion，gp 120 Binding and CC-Chemokine Activityof Monoclonal Antibodies to CCR5，J.VIROL.，73：4145-4155.(1999)。PRO 140与细胞表面上表达的CCR5结合，并在体外和HIV-1感染的hu-PBL-SCID小鼠模型中，以不影响CCR5趋化因子受体活性的浓度强效抑制HIV-1进入和复制。Olson等人，Differential Inhibitionof Human Immunodeficiency Virus Type 1 Fusion，gp 120 Binding and CC-ChemokineActivity of Monoclonal Antibodies to CCR5，J.VIROL.，73：4145-4155。(1999)；Trkola等人，Potent，BroRd-Spectrum Inhibition of Human Immunodeficiency Virus Type 1by the CCR5 Monoclonal Antibody PRO 140，J.VIROL.，75：579-588(2001)。

编码人源化PRO 140抗体重链和轻链的核酸已在ATCC保藏。具体而言，分别命名为pVKHuPRO140、pVg4-HuPRO140(mut B+D+I)和pVg4-HuPRO140 HG2的质粒按照并满足布达佩斯条约的要求于2002年2月22日分别以ATCC登录号PTA 4097、PTA 4099和PTA 4098保藏在ATCC，Manassas，Va.，U.S.A 20108。美国典型培养物保藏中心(ATCC)现位于10801University Boulevard，Manassas，Va.20110-2209。

在一个实施方案中，本文公开的方法包括施用称为PRO 140的人源化抗体或与PRO140竞争对CCR5受体的结合的抗体，其中PRO 140包含(i)两条轻链，每条轻链包含称为pVK：HuPRO140-VK的质粒(ATCC保藏名PTA-4097)的表达产物，和(ii)两条重链，每条重链包含称为pVg4：HuPRO140 HG2-VH的质粒(ATCC保藏命名PTA-4098)或称为pVg4：HuPRO140(mut B+D+I)-VH的质粒(ATCC保藏命名PTA-4099)的表达产物。在另外的实施方案中，PRO 140是与抗体PRO 140结合相同的表位的人源化抗体或人抗体。在另一个实施方案中，所述单克隆抗体是称为PRO 140的人源化抗体。

在另外的实施方案中，本公开涉及称为CCR5mAb004的人抗体或其结合片段的用途。CCR5mAb004是使用

技术产生的，特异性识别CCR5并结合其的完全人mAb。参见Roschke等人，Characterization of a Panel of Novel HumanMonoclonal Antibodies That Specifically Antagonize CCR5 and Block HIV Entry，44th Annual Interscience CONFERENCE ON ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY，Washington，D.C.，Oct.30-Nov.2，2004(2004)；HGS Press Release，Human GenomeSciences Characterizes Panel of Novel Human Monoclonal Antibodies ThatSpecifically Antagonize the CCR5 Receptor and Block HIV-1 Entry，Nov.2，2004(2004)；HGS Press Release，Human Genome Sciences Begins Dosing of Patients in aPhase 1 Clinical Trial of CCR5 mAb in Patients Infected With HIV-1，Mar.30，2005(2005)。

在一个实施方案中，本公开涉及由称为PA14的杂交瘤细胞系(ATCC登录号HB-12610)产生的单克隆抗体PA14、其结合片段或与单克隆抗体PA-14竞争对CCR5受体的结合的抗体在治疗或预防癌症中的用途。

在一个实施方案中，CCR5结合剂可包含小分子，例如维立韦罗、UK-427，857、马拉韦罗、GW873140、TAK-652、Takeda AMD070等。

在本文所述方法的一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含抗体的轻链。在另一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含抗体的重链。在另一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含抗体的Fab部分。在另一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含抗体的F(ab’)2部分。在另一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含抗体的Fd部分。在另一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含抗体的Fv部分。在另外的实施方案中，所述抗体或其结合片段包含抗体的可变结构域。在又一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含抗体的一个或多个CDR结构域。在又一个实施方案中，所述抗体或其结合片段包含抗体的六个CDR结构域。

趋化因子受体CCR5是嗜巨噬细胞(R5)株的主要共受体，在HIV-1的性传播中起着至关重要的作用。已经证明，CCR5的氨基末端结构域(Nt)中的酪氨酸和带负电荷的残基对于gp120与共受体的结合以及HIV-1融合和进入至关重要。对于共受体功能来说，CCR5的胞外环(ECL)1-3中的残基是不重要的，但为了最佳的病毒融合和进入，必须保持CCR5的结构域间构型(24)。这导致了这样的结论，即gp120与ECL上的漫射面形成相互作用，或者Nt通过与ECL中的残基的键保持功能构象。对嵌合共受体和抗CCR5单克隆抗体的研究也显示了胞外环对病毒进入的重要性。

G蛋白偶联受体CCR5通常在T细胞的一个亚群上表达，并充当HIV感染的共受体。CCR5是原代HIV-1分离株必需的融合共受体。PRO140是抗CCR5单克隆抗体，其在不影响CCR5趋化因子受体体外活性的浓度下强效地抑制HIV-1进入和复制。在恶性转化过程中，已知CCR5在许多癌症(乳腺癌(BCa)、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤)中的表达增加。使用小分子抑制剂的CCR5靶向癌症临床试验于2018年底开始进行。CCR5在＞50％的人BCa中表达，主要在三阴性BCa中表达。其在人BCa中的表达与不良结果相关，并且CCR5+BCa上皮细胞具有癌症干细胞的特征，在小鼠中以＞60倍的更大效率形成乳腺球并引发肿瘤。将CCR5表达重新引入CCR5阴性的BCa细胞中促进了肿瘤转移并诱导DNA修复基因的表达和活性。CCR5抑制剂乐利单抗已被用于治疗＞660名HIV患者，包括在三期研究中达到其主要终点，未报告重大不良事件。

此处，据报道，与CCR5结合的乐利单抗以98％的效率在人乳腺癌细胞系中表达。乐利单抗消除了CCL5诱导的Ca⁺²流，阻断了MDA-MB-231细胞的3D基质凝胶侵袭。CCL5(C-C趋化因子配体5)，一种已知在激活时受调节并且在正常T细胞中表达和分泌的炎症趋化因子(RANTES)，在这些免疫机制中起重要作用。CCL5作为T细胞向炎症部位迁移的关键调节因子，指导T细胞迁移至受损或感染部位。CCL5还调节T细胞分化。趋化因子的许多生物学效应是由它们与细胞表面上的趋化因子受体的相互作用介导的。在本公开中，CCL5的最相关的已知受体是CCR5受体；然而，CCR1和CCR3也是已知的CCL5受体，而CCR4和CD44是辅助受体。

CCR5受体是在淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞)、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、T细胞亚组等上表达的C-C趋化因子G偶联蛋白受体。CCR5受体以蛇形方式横跨细胞质膜七次。胞外部分代表靶向CCR5的抗体的潜在靶标，包含氨基末端结构域(Nt)和三个胞外环(ECL1、ECL2和ECL3)。CCR5的胞外部分仅包含90个氨基酸，分布在四个结构域上。这些结构域中最大的结构域位于Nt和ECL2，各约30个氨基酸。

CCL5配体和CCR5受体复合物的形成导致受体发生构象变化，激活G蛋白的亚基，诱导信号传导并导致环AMP(cAMP)、三磷酸肌醇、细胞内钙和酪氨酸激酶激活水平的变化。这些信号传导事件引起细胞极化和转录因子NF-kB的移位，这导致吞噬能力、细胞存活和促炎基因转录的增加。一旦发生G蛋白依赖性信号传导，CCL5/CCR5受体复合物通过内吞作用被内化。

已通过计算推导出与CCR5复合的CCL5的完整复杂结构。据报道，CCL5的1-15残基部分被插入到CCR5结合口袋中；CCL5的1-6个N末端结构域被埋在CCR5的跨膜区内；并且CCL5的7-15残基部分主要被CCR5的N-末端结构域和胞外环包围。CCL5残基Ala16和Arg17以及24-50残基部分的附加残基与CCR5的上部N末端结构域和胞外环界面相互作用。据进一步报道，CCL5的氨基末端的完整性对受体结合和细胞活化至关重要。另外，据报道，CCL5和HIV-1主要与大部分相同的CCR5残基相互作用，并共享相同的趋化因子受体结合口袋。

CCR5信号传导具有抗肿瘤作用，充当T细胞活化的共刺激分子，增加T细胞对肿瘤微环境的趋化性。CCL5/CCR5轴信号传导可能在某些类型的癌症(例如乳腺癌和前列腺癌)中优先被激活，并且这种信号传导促进疾病进展。癌细胞可能过表达CCL5、CCR5或两者，可能通过CCR5信号传导对雷帕霉素的机制靶标(mTOR)的作用促进其生长和增殖。另外，一些免疫抑制性免疫细胞，包括调节性T细胞(Treg)和髓源性抑制细胞(MDSC)，表达CCR5，提示CCR5信号传导可能籍以促成肿瘤生长的另一种途径。肿瘤微环境中的癌细胞可以利用CD4⁺和CD8⁺T细胞产生的CCL5来导致肿瘤生长增加以及肿瘤细胞扩散。

PRO 140(乐利单抗)与CCR5受体结合，并且已知其与CCL5共享一些结合共性。乐利单抗仅结合EL2中的CCR5受体氨基酸残基，或结合所述残基与Nt残基的组合。抗CCR5单克隆抗体与CCR5受体结合位点的这种结合不同于小分子CCR5结合剂与CCR5受体结合位点的结合。

先前已经表明，当单克隆抗体PRO 140被单独加入CD4+T细胞时，其不影响cAMP水平，但是当单克隆抗体PRO 140与CCL5一起施用时，减小了CCL5对cAMP水平的作用。类似地，尽管单独PRO 140不会影响CHO-K1细胞的趋化性，但当与CCL5一起施用时，PRO 140会减少CCL5诱导的趋化性。PRO 140对CCR5没有激动剂活性，但作为竞争性抑制剂与CCL5竞争对CCR5的结合。

乐利单抗阻断小鼠中人乳腺癌异种移植物转移。乐利单抗还增强DNA损伤诱导剂包括多柔比星在内的细胞杀伤。

已经发现，乐利单抗结合BCa细胞中的CCR5，阻断乳腺癌细胞侵袭和肿瘤转移，并增强DNA损伤诱导性的化学疗法的细胞杀伤。由于CCR5增强了DNA修复，并选择性地在癌性、而不在正常的乳腺上皮细胞上表达，因此乐利单抗可能会增强基于DNA损伤反应(DDR)的治疗的肿瘤特异性活性，从而减少化学疗法和辐照的剂量。

本文描述的研究评估了针对CCR5的人源化单克隆抗体(乐利单抗)与人乳腺癌细胞系的结合和功能相互作用。

使用方法

一方面，本公开提供了治疗或预防癌症的方法，包括向有需要的受试者施用针对CCR5细胞受体的竞争性抑制剂。在一个特定实施方案中，提供了预防癌症的方法。

在一个实施方案中，本公开提供了预防癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用自身不具有CCL5激动剂活性的针对CCR5细胞受体的竞争性抑制剂，其中所述竞争性抑制剂与CCR5细胞受体的ECL-2环结合。在另外一个实施方案中，竞争性抑制剂与CCL5竞争对CCR5细胞受体的结合。在另外一个实施方案中，竞争性抑制剂包括单克隆抗体PRO 140或其结合片段。在另外一个实施方案中，竞争性抑制剂与单克隆抗体PRO 140或其结合片段竞争结合。

在一个实施方案中，本公开提供了预防癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用：(a)PRO 140抗体或其结合片段；(b)编码PRO 140抗体或其结合片段的核酸；(c)包含编码PRO 140抗体或其结合片段的核酸的载体；或(d)宿主细胞，其包含(i)PRO 140抗体或其结合片段，(ii)编码PRO 140抗体或其结合片段的核酸，或(iii)包含编码PRO 140抗体或其结合片段的核酸的载体。在前述实施方案中，PRO 140抗体或其结合片段可以包含例如PRO140单克隆抗体或scFv。

在一个实施方案中，本公开提供了预防癌症的方法，其包括向有需要的受试者施用PRO 140抗体或其结合片段。

在一个实施方案中，将CCR5细胞受体的竞争性抑制剂，诸如PRO 140，与药学上可接受的载体一起施用。药学上可接受的载体是本领域技术人员熟知的。这种药学上可接受的载体可包括但不限于水溶液或非水溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、诸如橄榄油的植物油和诸如油酸乙酯的可注射的有机酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液、盐水和缓冲介质。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏溶液或不挥发性油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂、电解质补充剂诸如基于林格氏葡萄糖的电解质补充剂等。也可以存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。

本发明组合物的剂量将根据受试者和所使用的特定施用途径而变化。剂量范围可以从0.1μg/kg变化至100,000μg/kg。基于组合物，可以诸如通过连续泵连续输送剂量，或者以周期性间隔(例如在一个或多个分开的场合)输送剂量。本领域技术人员无需过度实验即可确定具体组合物的多剂量所需时间间隔.

在本发明方法的一个实施方案中，向受试者多次施用所述抗体或其结合片段，每次施用向受试者递送0.01mg/kg体重至50mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送0.05mg/kg体重至25mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另外的实施方案中，每次施用向受试者递送0.1mg/kg体重至10mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在又一个实施方案中，每次施用向受试者递送0.5mg/kg体重至5mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送1mg/kg体重至3mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送约2mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。

在一个实施方案中，多次施用所述抗体或其结合片段，并且第一次施用与随后的施用间隔少于一周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔至少一周。在另外的实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔一周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔2至4周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔两周。在另外的实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔四周。在又一个实施方案中，多次施用所述抗体或其结合片段，并且第一次施用与随后的施用间隔至少一个月。

在另外一个实施方案中，通过静脉输注向受试者施用所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，通过皮下注射向受试者施用所述抗体或其结合片段在另一个实施方案中，通过肌内注射向受试者施用所述抗体或其结合片段。

在一些实施方案中，以350mg至1400mg，或约525mg或约700mg或约1050mg的每周一次的剂量施用PRO 140。在一些实施方案中，以350mg至1400mg，或约525mg或约700mg或约1050mg的每周两次的剂量施用PRO 140。

在一些实施方案中，PRO 140以下述制剂形式施用，所述制剂包含：大于约100mg/mL且小于约200mg/mL的量的浓缩PRO 140；基本上由钠盐及组氨酸和甘氨酸缓冲液组成的张力调节剂(tonicifier)，其以约110mM至约120mM的组合量存在，并且其中缓冲液以约10mM至约25mM的量存在；和表面活性剂，其中所述制剂是低渗的并且总盐浓度小于100mM。

在一些实施方案中，PRO 140以这样的制剂形式施用，所述制剂包含：大于约100mg/mL且小于约200mg/mL的量的浓缩PRO 140；以大于约90mM且小于100mM的量存在的钠盐；以大于约5mM且小于约25mM的量存在的组氨酸和甘氨酸缓冲液；以大于约0.001％w/v且小于约0.2％w/v的量存在的表面活性剂；和任选地以约0.05％w/v至约1.8％w/v的量存在的稳定剂或非盐张力剂；其中所述制剂的重量摩尔渗透压浓度为约250mOsm至约280mOsm，总盐浓度小于100mM。

在一些实施方案中，PRO 140以低粘度、低渗制剂形式施用，所述制剂包含：(a)以大于约100mg/mL且小于约200mg/mL的量存在的浓缩PRO 140；(b)以选自约90mM或约95mM的量存在的钠盐；(c)以约20mM的量存在的组氨酸和甘氨酸缓冲液；(d)以0.005％至0.2％w/v的量存在的表面活性剂；和任选的(e)以足以提供约260-280mOs/kg的制剂重量摩尔渗透压浓度的量存在的稳定剂或非盐张力剂；其中制剂的总盐浓度小于100mM。

在一些实施方案中，PRO 140以低粘度低渗制剂形式施用，所述制剂包含：(a)以大于约100mg/mL且小于约200mg/mL的量存在的浓缩PRO 140；(b)以选自约90mM或约95mM的量存在的盐，其中所述盐选自氯化钠、葡糖酸钠或乳酸钠；(c)以约20mM的量存在的组氨酸和甘氨酸缓冲液；(d)以约0.005％至约0.2％w/v的量存在的表面活性剂，其中所述表面活性剂是聚山梨酯、泊洛沙姆或pluronic；和(e)以足以提供约230mOs/kg至约280mOs/kg的制剂重量摩尔渗透压浓度的量存在的稳定剂或非盐张力剂；其中所述稳定剂或非盐张力剂选自糖醇、单糖、二糖或其组合；其中所述制剂的总盐浓度小于100mM。

在一些实施方案中，PRO 140以组合物的形式施用，所述组合物包含：以大于约100mg/mL且小于约200mg/mL的量存在的PRO 140、包含以大于约90mM的浓度存在的钠盐和以110mM至120mM的组合量存在的组氨酸和甘氨酸缓冲液的张力调节剂，以及以约0.001％至约0.2％w/v的量存在的表面活性剂，其中所述组合物具有约230至约290mOs/kg的重量摩尔渗透压浓度，并且总盐浓度小于100mM。

在一些实施方案中，以包括容器和制剂以及使用说明书的制品的形式提供PRO140，所述制剂包含：浓度大于100mg/mL且小于200mg/mL的PRO 140、包含以大于约90mM的浓度存在的钠盐和以约110mM至约120mM的组合量存在的组氨酸和甘氨酸缓冲剂的张力调节剂，和以约0.005％至约0.2％的量存在的表面活性剂，并且所述制剂的总盐浓度小于100mM。

在一些实施方案中，PRO 140将以700mg乐利单抗(PRO 140)(175mg/mL)的剂量施用，作为两次注射施用，每次2mL，并在腹部的相对侧皮下施用。每小瓶乐利单抗(PRO 140)产品可包含约1.4mL浓度为175mg/mL的抗体。

在本文所述的实施方案中，不是CCR5结合剂的治疗剂可使用常规方法以常规剂量施用。

在另一个实施方案中，由于通过施用CCR5结合剂实现的协同效应，不是CCR5结合剂的治疗剂可以以较低剂量施用。

CCR5结合剂，例如乐利单抗，可以与非CCR5结合剂一起同时施用或按顺序施用。可以有效地实现一起施用，其中受试者经历了CCR5结合剂和非CCR5结合剂中每一种的治疗效果，而不论具体的施用方案或治疗有效药剂的引入顺序。

在任何前述实施方案中，癌症可以是例如乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、黑色素瘤、胃癌、卵巢癌、肺癌(非小细胞癌)、胰腺癌、肉瘤或血细胞癌。在一个特定实施方案中，癌症是乳腺癌。在一个特定实施方案中，癌症是转移性乳腺癌。

治疗转移性乳腺癌的方法

一方面，本公开提供了治疗或预防转移性乳腺癌的方法，其包括向有需要的受试者施用CCR5结合剂与另一种治疗剂的联合。

在特定的实施方案中，本文公开的方法包括将乐利单抗与DNA破坏剂，例如多柔比星或卡铂联合施用。

在一个实施方案中，将CCR5细胞受体的竞争性抑制剂诸如PRO 140与一种或多种DNA破坏剂诸如化学治疗剂联合施用，所述化学治疗剂可包括但不限于：烷化剂，诸如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，诸如苯佐替派、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替派；乙烯亚胺类和甲基蜜胺类，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲蜜胺；氮芥，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯代环磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥、盐酸甲氧氮芥、美法仑、新氮芥、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼氮芥、曲磷胺和尿嘧啶氮芥；硝基脲，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，诸如阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、加利车霉素、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、紫菜霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁和佐柔比星；抗代谢药，诸如氨甲蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、氨甲蝶呤、蝶罗呤和三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-阿扎尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷和5-FU；雄激素，诸如卡鲁睾酮、丙酸甲雄烷酮、环硫雄醇、美雄烷和睾内酯；抗肾上腺药，诸如氨鲁米特、米托坦和曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；百托布；比山群；依达曲沙、得福安；脱羧秋水仙碱；地吖醌；艾福敏；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSKTM；雷佐生；西索菲兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯三乙胺；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加胞嘧啶；阿拉伯糖苷(″Ara-C″)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷，例如紫杉醇(Taxol^TM，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)和多西他赛(Taxotere^TM，Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；异长春花碱；诺消灵；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；埃斯波霉素；和卡培他滨；和上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

在特定实施方案中，转移性乳腺癌包括转移性三阴性乳腺癌，并且所述方法包括施用乐利单抗与多柔比星的组合，或乐利单抗与卡铂的组合。

在一个实施方案中，本公开提供了治疗或预防CCR5阳性转移性乳腺癌的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的CCR5结合剂。

在另一个实施方案中，CCR5结合剂与CCL5竞争与CCR5细胞受体的结合。在另一个实施方案中，CCR5结合剂包括单克隆抗体PA14、乐利单抗或CCR5mAb004或其结合片段。在另一个实施方案中，竞争性抑制剂与单克隆抗体PA14、乐利单抗或CCR5mAb004或其结合片段竞争结合。

在一个实施方案中，本公开提供了治疗或预防CCR5阳性转移性乳腺癌的方法，其包括向有需要的受试者施用乐利单抗或其结合片段。

在任何前述实施方案中，预防转移性乳腺癌可包括减缓癌症转移或原发性肿瘤的生长或扩散，预防转移性肿瘤的形成，或者限制或减小转移性肿瘤或原发性肿瘤的生长或大小。

在一个实施方案中，将CCR5结合剂，诸如乐利单抗，与药学上可接受的载体一起施用。药学上可接受的载体是本领域技术人员熟知的。这种药学上可接受的载体可包括但不限于水溶液或非水溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、诸如橄榄油的植物油和诸如油酸乙酯的可注射的有机酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液、盐水和缓冲介质。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏溶液或不挥发性油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂、电解质补充剂诸如基于林格氏葡萄糖的电解质补充剂等。也可以存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。在一个实施方案中，如美国专利第9,956,165号(其内容通过该引用并入本文)中所公开的，以制剂的形式提供CCR5结合剂。

本公开的组合物的剂量将根据受试者和所使用的特定施用途径而变化。剂量范围可以从0.1μg/kg变化至100,000μg/kg。基于组合物，可以诸如通过连续泵连续输送剂量，或者以周期性间隔(例如在一个或多个分开的场合)输送剂量。本领域技术人员无需过度实验即可确定特定组合物的多剂量所需时间间隔.

在本发明方法的一个实施方案中，向受试者多次施用所述抗体或其结合片段，每次施用向受试者递送0.01mg/kg体重至50mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送0.05mg/kg体重至25mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另外的实施方案中，每次施用向受试者递送0.1mg/kg体重至10mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在又一个实施方案中，每次施用向受试者递送0.5mg/kg体重至5mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送1mg/kg体重至3mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送约2mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。一些实施方案包括以在约175mg至约1,400mg的范围内的量存在的剂量，包括递送诸如175mg、350mg、525mg、700mg、875mg、1050mg、1,225mg和1,400mg等某些量的CCR5结合剂的剂型。

在一个实施方案中，多次施用所述抗体或其结合片段，并且第一次施用与随后的施用间隔少于一周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔至少一周。在另外的实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔一周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔2至4周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔两周。在另外的实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔四周。在又一个实施方案中，多次施用所述抗体或其结合片段，并且第一次施用与随后的施用间隔至少一个月。

在另外一个实施方案中，通过静脉输注向受试者施用所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，通过皮下注射向受试者施用所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，通过肌内注射向受试者施用所述抗体或其结合片段。

在一个实施方案中，上述方法还可包括向受试者施用细胞疗法，例如自体或同种异体免疫疗法；小分子；化学治疗剂；或CCR5/CCL5信号传导的抑制剂。在一个实施方案中，施用CCR5/CCL5信号传导的抑制剂，所述抑制剂包括马拉韦罗、维立韦罗、阿拉韦罗、SCH-C、TAK-779、PA14抗体、2D7抗体、RoAb13抗体、RoAb14抗体或45523抗体。

在一个实施方案中，将CCR5细胞受体的竞争性抑制剂诸如PRO 140与一种或多种其他治疗性分子或治疗(诸如细胞疗法，例如自体或同种异体免疫疗法；小分子；化学治疗剂；或CCR5/CCL5信号传导的抑制剂，诸如马拉韦罗、维立韦罗、阿拉韦罗、SCH-C、TAK-779、PA14抗体、2D7抗体、RoAb13抗体、RoAb14抗体或45523抗体)联合使用。在一个实施方案中，本文公开的方法包括将PRO 140与马拉韦罗、维立韦罗、阿拉韦罗、SCH-C、TAK-779、PA14抗体、2D7抗体、RoAb13抗体、RoAb14抗体或45523抗体联合施用。

在一个实施方案中，将CCR5结合剂诸如PRO 140与一种或多种化学治疗剂一起施用，所述化学治疗剂是例如：烷化剂，诸如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸酯，诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，诸如苯佐替派、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替派；乙烯亚胺类和甲基蜜胺类，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲蜜胺；氮芥，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯代环磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥、盐酸甲氧氮芥、美法仑、新氮芥、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼氮芥、曲磷胺和尿嘧啶氮芥；硝基脲，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，诸如阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、加利车霉素、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、紫菜霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁和佐柔比星；抗代谢药，诸如氨甲蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸、氨甲蝶呤、蝶罗呤和三甲曲沙；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-阿扎尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷和5-FU；雄激素，诸如卡鲁睾酮、丙酸甲雄烷酮、环硫雄醇、美雄烷和睾内酯；抗肾上腺药，诸如氨鲁米特、米托坦和曲洛司坦；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；百托布；比山群；依达曲沙、得福安；脱羧秋水仙碱；地吖醌；艾福敏；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSKTM；雷佐生；西索菲兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯三乙胺；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加胞嘧啶；阿拉伯糖苷(″Ara-C″)；环磷酰胺；噻替派；紫杉烷，例如紫杉醇(Taxol^TM，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)和多西他赛(Taxotere^TM，Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；异长春花碱；诺消灵；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；埃斯波霉素；和卡培他滨；和上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

如本文所用，“小分子”CCR5受体拮抗剂包括例如与CCR5受体结合并抑制该受体的活性的小有机分子。在一个实施方案中，所述小分子的分子量小于1,500道尔顿。在另一个实施方案中，所述小分子的分子量小于600道尔顿。

在一个实施方案中，将诸如PRO 140的CCR5结合剂与一种或多种小分子联合施用，所述小分子是诸如SCH-C(Strizki等人，PNAS，98：12718-12723(2001))；SCH-D(SCH417670；维立韦罗)；UK-427，857(马拉韦罗；1-[(4，6-二甲基-5-嘧啶基)羰基]-4-[4-[2-甲氧基-1(R)-4-(三氟甲基)苯基]乙基-3(S)-甲基-1-哌嗪基-4-甲基哌啶)；GW873140；TAK-652；TAK-779；AMD070；AD101；1，3，4-三取代的吡咯烷(Kim等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，15：2129-2134(2005))；改性的4-哌啶基-2-苯基-1-(苯基磺酰氨基)-丁烷(Shah等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，15：977-982(2005))；Anibamine TFA、蛇孢菌素(Ophiobolin)C或19，20-环氧基细胞松弛素Q(Jayasuriya等人，J.Nat.Prod.，1036-1038(2004))；5-(哌啶-1-基)-3-苯基-戊基砜(Shankaran等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，14：3589-3593(2004))；4-(杂芳基哌啶-1-基-甲基)-吡咯烷-1-基-乙酸拮抗剂(Shankaran等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，14：3419-3424(2004))；含有4-(吡唑基)哌啶侧链的药剂(Shu等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，14：947-52(2004)；Shen等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，14：935-939(2004)；Shen等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，14：941-945(2004))；3-(吡咯烷-1-基)丙酸类似物(Lynch等人，Org.Lett.，5：2473-2475(2003))；[2-(R)-[N-甲基-N-(1-(R)-3-(S)-((4-(3-苄基-1-乙基-(1H)-吡唑-5-基)哌啶-1-基)甲基)-4-(S)-(3-氟苯基)环戊-1-基)氨基]-3-甲基丁酸(MRK-1)](Kumar等人，J.Pharmacol.Pharmacol。Exp.Ther.，304：1161-1171(2003))；带有4-氨基杂环取代的哌啶侧链的1，3，4三取代的吡咯烷(Willoughby等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，13：427-431(2003)；Lynch等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，12：3001-3004(2003)；Lynch等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，13：119-123(2003)；Hale等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，12：2997-3000(2002))；双环异噁唑烷(Lynch等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，12：677-679(2002))；CCR5拮抗剂的组合合成(Willoughby等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，11：3137-41(2001))；含杂环的化合物(Kim等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，11：3103-3106(2001))；含有乙内酰脲的拮抗剂(Kim等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，11：3099-3102(2001))；1，3，4三取代的吡咯烷(Hale等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，11：2741-2745(2001))；1-[N-(甲基)-N-(苯基磺酰基)氨基]-2-(苯基)-4-(4-(N-(烷基)-N-(苄基氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)丁烷(Finke等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，11：2475-2479(2001))；来自植物Lippia alva的化合物(Hedge等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，12：5339-5342(2004))；基于哌嗪的CCR5拮抗剂(Tagat等人，J.Med.Chem.，47：2405-2408(2004))；基于肟基-哌啶子基-哌啶的CCR5拮抗剂(Palani等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，13：709-712(2003))；SCH 351125的旋转异构体(Palani等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，13：705-708(2003))；基于哌嗪的对称杂芳基甲酰胺(McCombie等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，13：567-571(2003))；肟基-哌啶子基-哌啶酰胺(Palani等人，J.Med.Chem.，45：3143-3160(2002))；Sch-351125和Sch-350634(Este，Curr.Opin.Investig.Drugs.，3：379-383(2002))；1-[(2，4-二甲基-3-吡啶基)羰基]-4-甲基-4-[3(S)-甲基-4-[1(S)-[4-(三氟甲基)苯基]乙基]-1-哌嗪基]-哌啶N1-氧化物(Sch-350634)(Tagat等人，J.Med.Chem.，44：3343-3346(2001))；4-[(Z)-(4-溴苯基)-(乙氧基亚氨基)甲基]-1′-[(2，4-二甲基-3-吡啶基)羰基]-4′-甲基-1，4′-联哌啶氮氧化物(SCH351125)(Palani等人，J.Med.Chem.，44：3339-3342(2001))；2(S)-甲基哌嗪类(Tagat等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，11：2143-2146(2001))；哌啶-4-甲酰胺衍生物(Imamura等人，Bioorg.Med.Chem.，13：397-416，2005)；含有亚砜部分的1-苯并氮杂卓衍生物(Seto等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，13：363-386(2005))；含有吡啶N-氧化物部分的苯胺衍生物(Seto等人，Chem.Pharm.Bull.(Tokyo)，52：818-829(2004))；含有叔胺部分的1-苯并噻吩并1，1-二氧化物和1-苯并氮杂衍生物(Seto等人，Chem。Pharm.Bull.(Tokyo)，52：577-590(2004))；N-[3-(4-苄基哌啶-1-基)丙基]-N，N′-二苯基脲(Imamura等人，Bioorg.Med.Chem.，12：2295-2306(2004))；5-氧代吡咯烷-3-甲酰胺衍生物(Imamura等人，Chem.Pharm.Bull.(Tokyo)，52：63-73(2004)；带有季铵部分的苯胺衍生物(Shiraishi等人，J.Med.Chem.，43：2049-2063(2000))；AK602/ONO4128/GW873140(Nakata等人，J.Virol.，79：2087-2096(2005))；螺二酮哌嗪衍生物(Maeda等人，J.Biol.Chem.，276：35194-35200(2001)；Maeda等人，J.Virol.，78：8654-8662(2004))；和选择性CCR5拮抗剂(Thoma等人，J.Med.Chem.，47：1939-1955(2004))。

在一个实施方案中，将CCR5结合剂(诸如PRO 140)与SCH-C、SCH-D(SCH 417670或维立韦罗)、UK-427、857(马拉韦罗)、GW873140、TAK-652、TAK-779 AMD070或AD101中的一种或多种联合施用。参见美国专利第8,821,877号。

在一个实施方案中，CCR5细胞受体的竞争性结合剂(诸如PRO 140)在与DNA破坏剂联合施用时表现出协同效应。在另外的实施方案中，CCR5细胞受体的竞争性结合剂(诸如PRO 140)在与DNA破坏剂联合施用时以及与一种或多种其它治疗性分子或治疗(诸如细胞疗法、小分子、化学治疗剂或CCR5/CCL5信号传导的抑制剂)一起施用时表现出协同效应。

两种或更多种药剂之间的“协同作用”是指药剂的组合作用大于它们的加和作用。药剂之间的协同作用、加和作用或拮抗作用可通过使用组合指数(CI)法分析剂量-反应曲线来定量。大于1的CI值表示拮抗作用；等于1的CI值表示加和效应；并且小于1的CI值表示协同效应。在一个实施方案中，协同相互作用的CI值小于0.9。在另一个实施方案中，CI值小于0.8。在另一个实施方案中，CI值小于0.7。

在任何前述实施方案中，预防癌症可以包括减缓癌症的生长，预防肿瘤的形成，或者限制或减小肿瘤的生长或大小。

在一个实施方案中，将CCR5细胞受体的竞争性抑制剂，诸如PRO 140，与药学上可接受的载体一起施用。药学上可接受的载体是本领域技术人员熟知的。这种药学上可接受的载体可包括但不限于水溶液或非水溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、诸如橄榄油的植物油和诸如油酸乙酯的可注射的有机酯。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液、盐水和缓冲介质。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏溶液或不挥发性油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂、电解质补充剂诸如基于林格氏葡萄糖的电解质补充剂等。也可以存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。

本公开的组合物的剂量将根据受试者和所使用的具体施用途径而变化。剂量范围可以从0.1μg/kg变化至100,000μg/kg。基于组合物，可以诸如通过连续泵连续输送剂量，或者以周期性间隔(例如在一个或多个单独的场合)输送剂量。本领域技术人员无需过度实验即可确定特定组合物的多剂量所需时间间隔.

在本发明方法的一个实施方案中，向受试者多次施用所述抗体或其结合片段，每次施用向受试者递送0.01mg/kg体重至50mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送0.05mg/kg体重至25mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另外的实施方案中，每次施用向受试者递送0.1mg/kg体重至10mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在又一个实施方案中，每次施用向受试者递送0.5mg/kg体重至5mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送1mg/kg体重至3mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，每次施用向受试者递送约2mg/kg体重的所述抗体或其结合片段。

在一个实施方案中，多次施用所述抗体或其结合片段，并且第一次施用与随后的施用间隔少于一周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔至少一周。在另外的实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔一周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔2至4周。在另一个实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔两周。在另外的实施方案中，第一次施用与随后的施用间隔四周。在又一个实施方案中，多次施用所述抗体或其结合片段，并且第一次施用与随后的施用间隔至少一个月。

在另外的实施方案中，通过静脉输注向受试者施用所述抗体或其结合片段。在另一个实施方案中，通过皮下注射向受试者施用所述抗体或其结合片段在另一个实施方案中，通过肌内注射向受试者施用所述抗体或其结合片段。

在一个实施方案中，上述方法还可包括向受试者施用细胞疗法，例如自体或同种异体免疫疗法；小分子；化学治疗剂；或CCR5/CCL5信号传导的抑制剂。在一个实施方案中，施用CCR5/CCL5信号传导的抑制剂，所述抑制剂包括马拉韦罗、维立韦罗、阿拉韦罗、SCH-C、TAK-779、PA14抗体、2D7抗体、RoAb13抗体、RoAb14抗体或45523抗体。

在一个实施方案中，将CCR5细胞受体的竞争性抑制剂(诸如PRO 140)与一种或多种其他治疗性分子或治疗(诸如细胞疗法，例如自体或同种异体免疫疗法；小分子；化学治疗剂；或CCR5/CCL5信号传导的抑制剂，诸如马拉韦罗、维立韦罗、阿拉韦罗、SCH-C、TAK-779、PA14抗体、2D7抗体、RoAb13抗体、RoAb14抗体或45523抗体)联合施用。在一个实施方案中，本文公开的方法包括将PRO 140与马拉韦罗、维立韦罗、阿拉韦罗、SCH-C、TAK-779、PA14抗体、2D7抗体、RoAb13抗体、RoAb14抗体或45523抗体联合施用。

虽然本文所述的研究涉及乳腺癌细胞系的研究，但预期表达CCR5的其他癌症也可受益于使用乐利单抗或其他抗CCR5药物来阻断转移和/或增强由DNA损伤化学疗法诱导的细胞死亡。这种其他癌症可包括但不限于白血病癌症、淋巴瘤癌症、骨和结缔组织肉瘤、脑瘤癌症、乳腺癌、肾上腺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、直肠癌、胆囊癌、肺癌、口腔癌、皮肤癌、肾癌和成骨肉瘤癌症等中的一种。

抗CCR5药剂可包括但不限于抗体、其他蛋白质和小分子药剂，诸如马拉韦罗和维立韦罗。

DNA损伤化学治疗剂可包括但不限于蒽环类多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和阿美蒽醌及其任何衍生物。其他化学治疗剂可用于本公开，并且可受益于本公开，例如卡铂、顺铂、环磷酰胺、多西他赛、厄洛替尼、依托泊苷、氟尿嘧啶、吉西他滨、甲磺酸伊马替尼、伊立替康、甲氨蝶呤、紫杉醇、索拉非尼、舒尼替尼、拓扑替康、长春新碱或长春碱等。预期任何常规治疗剂可与本公开一起使用，并且可受益于本公开用于治疗癌症或癌症转移。

DNA破坏剂

不受理论的束缚，据信癌细胞暴露于某些DNA破坏剂会导致足够的DNA损伤，从而引发DNA损伤反应和暂时的S期阻滞，从而允许进行DNA修复。DNA损伤反应据信是由两种同源蛋白激酶(共济失调毛细血管扩张症(ATM)和共济失调毛细血管扩张症Rad3相关的(ATR))调节的。ATR通过包括检查点激酶1(Chkl)在内的数百种底物的磷酸化发出调节DNA复制、细胞周期转换和DNA修复的信号。DNA破坏剂在癌症化学治疗中有很长的使用历史。DNA损伤诱导细胞凋亡，并被广泛认为是DNA损伤抗癌药物的主要抗增殖机制。

实施例

实施例1.乐利单抗与乳腺癌细胞中表达的CCR5的结合

图1A和图1B：乐利单抗结合人乳腺癌细胞中的CCR5。

如图1A所示，为了确定乐利单抗与乳腺癌细胞中的人CCR5的结合，用人CCR5表达载体转染MDA-MB-231人乳腺癌细胞系作为模型系统。使用先前测试的来自R&D的商业化缀合有APC的小鼠抗人/小鼠/大鼠CCR5抗体(FAB1802A)(APC-αCCR5)作为阳性对照来评估CCR5阳性细胞。使用1-140g/ml的浓度，用APC-αCCR5和乐利单抗对MDA-MB-231-CCR5细胞进行染色。将缀合有Alexa Fluor 488的小鼠抗人IgG用作二抗，以测量乐利单抗结合细胞。图1A中显示了通过FACS分析乐利单抗与CCR5的结合。证实了乐利单抗与人CCR5的结合。

如图1B所示，PRO140与CCR5阳性细胞结合的效率高达98％。

实施例2.PRO140对CCL5在MDA-MB-231-CCR5细胞内诱导的Ca²⁺离子反应的影响

图2A、图2B、图2C和图2D：PRO140(乐利单抗)阻断人乳腺癌细胞中人CCR5介导的信号传导。CCR5激活诱导钙流动(Mueller等人，2002；Petkovic等人，2004)。为了评估利乐利单抗对CCR5功能的影响，我们通过活细胞图像(图2A、图2B和图2C)测量了在乐利单抗存在或不存在的情况下由CCL5在MDA-MB-231-CCR5细胞中诱导的钙反应。Fluo-4用作钙浓度指示剂。CCR5拮抗剂维立韦罗用作阳性对照(图2A和图2D)。结果表明，乐利单抗能够阻断MDA-MB-231-CCR5细胞中CCL5诱导的钙反应(对照细胞为1.23±0.10，N＝10，经PRO140处理的细胞为0.54±0.13，N＝12。CCL5诱发钙峰P＜0.001)。

实施例3.乐利单抗阻断乳腺癌细胞的3D基质胶侵袭

图3A、图3B、图3C和图3D：乐利单抗阻断CCR5介导的人乳腺癌细胞向细胞外基质的侵袭。乳腺癌细胞侵入细胞外基质的能力与肿瘤转移不同，但却是肿瘤转移的重要步骤(Zetter，1990)。为了测试PRO140阻断3D基质胶侵袭测定的能力，使用了MDA-MB-231细胞。CCL5用作诱导侵入的趋化因子。CCR5的小分子抑制剂维立韦罗用作阳性对照的形式。乐利单抗降低CCL5诱导的MDA-MB-231乳腺癌细胞侵袭，功效与维立韦罗相似(图3A，图3B)(对照为855±9，N＝8，对比乐利单抗为855±9，N＝9，P＜0.001)。我们还测试了不同剂量的乐利单抗对乳腺癌细胞侵袭的影响，结果表明175g/ml和350g/ml的乐利单抗均能够有效阻断MDA-MB-231细胞侵袭(图3C，图3D)。

实施例4.乐利单抗阻断小鼠肺转移模型中乳腺癌细胞的转移

图4A和图4B：乐利单抗阻断小鼠中的乳腺癌转移。将小鼠随机分为4组(对照组、乐利单抗、马拉韦罗和维立韦罗)。将用Luc2-GFP稳定转染的MDA-MB-231细胞通过尾静脉注射到小鼠中。每组小鼠在注射前一天接受处理。通过生物发光成像确定在肺中形成的转移肿瘤。来自对照组、乐利单抗组和马拉韦罗组的代表性小鼠的生物发光图像显示在(图4A)中。每组肿瘤大小的定量分析如(图4B)所示。肿瘤的大小由光子通量决定(x10⁸p/sec/cm²/sr)。数据显示为平均值±SE。乐利单抗显著降低了乳腺癌肿瘤向肺的转移。

实施例5.乐利单抗增强多柔比星诱导的细胞死亡

图5A和图5B：乐利单抗增强由多柔比星(一种DNA破坏诱导化疗剂)诱导的细胞死亡。用10mg/ml的乐利单抗与不同剂量的多柔比星的组合处理MDA-MB-231细胞3天。用MTT测定法测定相对细胞数量(图5A)。用马拉韦罗(100mM)与不同剂量的多柔比星的组合处理的细胞用作阳性对照(图5B)。数据显示为平均值±SEM(N＝8)。

实施例6.CCR5+转移性TNBC的乐利单抗和卡铂治疗

此处描述的是来自CCR5+转移性三阴性乳腺癌(mTNBC)患者的乐利单抗(PRO 140)联合卡铂的Ib/II期研究的中期结果。1b期的主要目的是确定PRO 140在TNBC患者中与卡铂组合使用时的安全性、耐受性和最大耐受剂量(MTD)，以确定该组合的推荐II期剂量。2b期的主要目的是评估PRO 140和卡铂组合在先前在新辅助和辅助环境下使用蒽环类和紫杉烷类治疗的CCR5+TNBC患者中对无进展生存期(PFS)的影响。

该研究的第一名受试者，受试者706-001，是一名患有IV期转移性三阴性乳腺癌的42岁女性。受试者有左乳腺癌伴右肺转移的病史。

受试者被诊断为IIA期3级浸润性导管癌(ER阴性/PR阴性/HER-2-NEU阴性)，并且先前接受过剂量密集的阿霉素(多柔比星)和环磷酰胺[ddAC]和紫杉醇。受试者在诊断后三周接受了左侧乳房肿瘤切除术和前哨淋巴结活组织检查。

受试者在诊断后10周签署了CD07_TNBC方案的筛查前知情同意书。对档案组织的免疫组织化学分析显示，CCR5+肿瘤浸润性白细胞占高度优势(图6A至图6C)。

基线目标病灶经鉴定位于右上肺中，大小为25mm。病变被描述为右肺门中的基于胸膜的大裂隙软组织密度结节。

在鉴定和测量基线病变后大约六周，受试者接受了350mg乐利单抗(PRO 140)的首次治疗(1)。每个治疗周期由21天组成。在每个周期(每21天)的第1天、第8天和第15天皮下施用乐利单抗(PRO 140)并联合在每个周期(每21天)的第1天施用卡铂AUC 5。除非另有说明，否则该治疗方案用于所有纳入mTNBC研究的受试者。

表1：乐利单抗(PRO 140)和卡铂剂量

受试者706-001

访视研究治疗管理

预筛选NA

筛选NA

NA卡铂500mg

C1D1 乐利单抗(PRO 140)350mg

C1D8 乐利单抗(PRO 140)350mg

C1D15 乐利单抗(PRO 140)350mg

C2D1 乐利单抗(PRO 140)350mg

卡铂500mg

C2D8 乐利单抗(PRO 140)350mg

C2D15 乐利单抗(PRO 140)350mg

C3D1 乐利单抗(PRO 140)350mg

卡铂500mg

C3D8 乐利单抗(PRO 140)350mg

C3D15 乐利单抗(PRO 140)350mg

C4D1 乐利单抗(PRO 140)350mg

卡铂250mg

C4D8 乐利单抗(PRO 140)350mg

C4D15 乐利单抗(PRO 140)350mg

C5D1 乐利单抗(PRO 140)350mg

卡铂600mg

C5D8 乐利单抗(PRO 140)350mg

C5D15 乐利单抗(PRO 140)350mg

C6D1 乐利单抗(PRO 140)350mg

卡铂＊

＊待定剂量信息

在基线时以及随后在每个治疗周期的第1天收集血液样品用于循环肿瘤细胞(CTC)和癌症相关巨噬细胞样细胞(CAML)评估，以评估治疗后CTC和CAML的变化，并进行CCR5表达与PD-L1表达之间的相关分析。

Creatv Microtech开发了基于大小的技术和检测方法(LifeTrac测定)，其使得能够收集和表征血液中所有与癌症相关的细胞，即CTC、上皮间充质转化细胞(EMT)和CAML。[Adams Cytometry 2015，Adams RSC 2014]。CellSieveTM过滤平台用于捕获CAML和CTC。

针对CCR5表达和PD-L1表达的结果概述如下：

表2：受试者706-001-表达CCR5和表达PD-L1的CTC、EMT和CAML。

CCR5

PD-L1

总CTC、EMT和CAML的结果概述如下：

表3：受试者706-001-CTC、EMT和CAML结果

每两个周期(每6周)结束时进行扫描。受试者在6周后接受扫描1，12周后接受扫描2，18周后接受扫描3(表4)。在扫描3时，没有发现新的肺结节。在肺结节右上叶发现的目标病灶测量为2.1x1.6cm，之前为2.4x1.9，大小减小了20％。

表4：受试者706-001-肿瘤成像

受试者706-001

目标病变

(右上叶肺结节)

基线扫描25mm

扫描2 2.4x1.9cm

扫描3 2.1x1.6cm

右肺转移显示最大标准化摄取值(SUV)为6.8(之前为15.3)。先前鉴定的右肺门淋巴结已解决。在胸部、腹部和骨盆的诊断CT上没有报告新的淋巴结病或转移疾病。

在受试者完成第6周期第1天就诊时，受试者已按照方案接受了每周一次的乐利单抗(PRO 140)注射和每三周一次的卡铂输注。在第6周期第1天就诊时，没有严重不良事件的报告。

在第一名纳入mTNBC研究的受试者接受16周的乐利单抗治疗后，在外周血中未发现可检测的循环肿瘤细胞(CTC)或推定的转移性肿瘤细胞。此外，患者在用乐利单抗治疗约11周后，癌症相关细胞上的CCR5表达大幅降低。另外，在肺结节右上叶发现的目标病变显示大小减小了超过20％(如通过肿瘤体积测量的)。这一结果是疾病结果的显著改善，并证明了乐利单抗是治疗转移性三阴性乳腺癌的一种有前途的辅助疗法。

第二名患有mTNBC的受试者被纳入mTNBC研究。从纳入公司的mTNBC 1b/2期试验中的第二名患者收集的数据表明，在使用先前描述的乐利单抗联合卡铂治疗方案治疗两周后，没有可检测的CTC水平。这位患者在仅仅两周的治疗后也显示出EMT细胞减少了70％。mTNBC试验中第二名患者的初步数据表明，用乐利单抗治疗两周后，CTC降至零。另外，第二名患者的初始CAML计数为45，经过至少两周的治疗后，CAML计数降至30。

第三名受试者被纳入mTNBC研究。在治疗开始时和开始使用前述治疗方案治疗后两周测量CTC+EMT计数。结果表明，在治疗的前两周中，第三名患者的总CTC+EMT计数下降了75％。

可将上述各种实施方案组合以提供进一步的实施方案。本说明书中提及的和/或在申请数据表中列出的所有美国专利、美国专利申请公布、美国专利申请、外国专利、外国专利申请和非专利公布，包括2019年4月1日提交的美国临时专利申请第62/827,729号，通过引用以其整体并入本文。如果需要，可以修改实施方案的各方面，以采用各种专利、申请和出版物的概念来提供进一步的实施方案。

根据以上详细描述，可以对实施方案进行这些和其他改变。总的来说，在以下权利要求中，所使用的术语不应被解释为将权利要求限制于说明书和权利要求书中公开的特定实施方案，而是应被解释为包括所有可能的实施方案以及这些权利要求享有的等同物的全部范围。因此，权利要求不受本公开内容的限制。

Claims (45)

1.一种在患有CCR5+癌症的受试者中治疗或预防癌症转移的方法，其包括施用抗CCR5药剂与DNA破坏剂的组合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症是选自以下至少一种的CCR5+癌症：白血病癌症、淋巴瘤癌症、骨和结缔组织肉瘤、脑瘤癌症、乳腺癌、肾上腺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、直肠癌、胆囊癌、肺癌、口腔癌、皮肤癌、肾癌和成骨肉瘤癌症。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症是三阴性乳腺癌(TNBC)。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗CCR5药剂包括抗体或其片段、非抗体蛋白质或其片段以及小分子药剂。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗CCR5药剂包括抗体或其片段。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗CCR5药剂是乐利单抗或其片段。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述DNA破坏剂包括多柔比星、卡铂、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和阿美蒽醌及其任何衍生物。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述DNA破坏剂包括多柔比星或卡铂。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述DNA破坏剂由多柔比星组成。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述DNA破坏剂由卡铂组成。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述受试者在治疗后表现出外周血中循环肿瘤细胞(CTC)或推定的转移性肿瘤细胞减少。

13.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述受试者在治疗后表现出在癌症相关细胞上的CCR5表达减少。

14.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述受试者在治疗后表现出肿瘤尺寸减小。

15.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述受试者表现出所述DNA破坏剂对癌细胞的杀伤增强。

16.一种延长DNA破坏性化学疗法治疗或预防CCR5+癌症的功效的方法，其包括施用抗CCR5药剂。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症是选自以下至少一种的CCR5+癌症：白血病癌症、淋巴瘤癌症、骨和结缔组织肉瘤、脑瘤癌症、乳腺癌、肾上腺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、直肠癌、胆囊癌、肺癌、口腔癌、皮肤癌、肾癌和成骨肉瘤癌症。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述癌症是三阴性乳腺癌(TNBC)。

20.根据权利要求16所述的方法，其中所述抗CCR5药剂包括抗体或其片段、非抗体蛋白质或其片段以及小分子药剂。

21.根据权利要求16所述的方法，其中所述抗CCR5药剂包括抗体或其片段。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述抗CCR5试剂是乐利单抗或其片段。

23.根据权利要求16所述的方法，其中所述DNA破坏性化学疗法选自多柔比星、卡铂、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和阿美蒽醌及其任何衍生物中的一种。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述DNA破坏剂包括多柔比星或卡铂。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述DNA破坏剂由多柔比星组成。

26.根据权利要求24所述的方法，其中所述DNA破坏剂由卡铂组成。

27.根据权利要求16-26中任一项所述的方法，其中所述受试者在治疗后表现出外周血中循环肿瘤细胞(CTC)或推定的转移性肿瘤细胞减少。

28.根据权利要求16-26中任一项所述的方法，其中所述受试者在治疗后表现出在癌症相关细胞上的CCR5表达减少。

29.根据权利要求16-26中任一项所述的方法，其中所述受试者在治疗后表现出肿瘤尺寸减小。

30.根据权利要求16-26中任一项所述的方法，其中所述受试者表现出所述DNA破坏剂对癌细胞的杀伤增强。

31.一种用于在患有癌症的受试者中治疗或预防CCR5+癌症转移的联合治疗，其包括施用抗CCR5药剂和DNA破坏性化学疗法。

32.根据权利要求31所述的联合治疗，其中所述癌症是选自以下至少一种的CCR5+癌症：白血病癌症、淋巴瘤癌症、骨和结缔组织肉瘤、脑瘤癌症、乳腺癌、肾上腺癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、直肠癌、胆囊癌、肺癌、口腔癌、皮肤癌、肾癌和成骨肉瘤癌症。

33.根据权利要求32所述的联合治疗，其中所述癌症是乳腺癌。

34.根据权利要求33所述的联合治疗，其中所述癌症是三阴性乳腺癌(TNBC)。

35.根据权利要求31所述的联合治疗，其中所述抗CCR5药剂包括抗体或其片段、非抗体蛋白或其片段以及小分子药剂。

36.根据权利要求35所述的联合治疗，其中所述抗CCR5药剂包括抗体或其片段。

37.根据权利要求36所述的联合治疗，其中所述抗CCR5药剂是乐利单抗或其片段。

38.根据权利要求31所述的联合治疗，其中所述DNA破坏性化学疗法选自多柔比星、卡铂、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、米托蒽醌和阿美蒽醌及其任何衍生物中的一种。

39.根据权利要求38所述的联合治疗，其中所述DNA破坏剂包括多柔比星或卡铂。

40.根据权利要求39所述的联合治疗，其中所述DNA破坏剂由多柔比星组成。

41.根据权利要求39所述的联合治疗，其中所述DNA破坏剂由卡铂组成。

42.根据权利要求31-41中任一项所述的联合治疗，其中所述受试者在治疗后表现出外周血中循环肿瘤细胞(CTC)或推定的转移性肿瘤细胞减少。

43.根据权利要求31-41中任一项所述的联合治疗，其中所述受试者在治疗后表现出在癌症相关细胞上的CCR5表达减少。

44.根据权利要求31-41中任一项所述的联合治疗，其中所述受试者在治疗后表现出肿瘤尺寸减小。

45.根据权利要求31-41中任一项所述的联合治疗，其中所述受试者表现出所述DNA破坏剂对癌细胞的杀伤增强。

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