CN114712514A - 用于局部和全身性减脂的纳米制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供用于局部和全身性减脂的纳米制剂及其应用。所述纳米制剂由油相和水相组成。油相选用甘油三酯等膜材成分，氧化应激抑制剂维生素E和内质网UPR通路抑制剂等，水相选用维生素C去离子水溶液等。本纳米制剂通过包载内质网应激抑制剂于含氧化应激抑制剂的载体中，削弱前体细胞的脂肪性分化以及脂肪细胞蓄积脂质的成熟过程中所必需的氧化应激与内质网应激，从而极大减少新生脂肪来源并且抑制已有脂肪细胞的过度生长，达到高效安全瘦身的目的。其减肥效果会因给药方式、给药位点、给药剂量不同而实现不同目的的局部和/或全身性减脂。另外，对于预防/治疗脂肪肝也有一定效果。本发明设计合理、制备简易、安全高效、容易推广。

Description

用于局部和全身性减脂的纳米制剂及其应用

技术领域

本发明属于制药领域，涉及用于局部和全身性减脂的纳米制剂及其应用。是一类可用于局部或全身减肥以及防治脂肪肝的新型纳米制剂，减少体内脂肪组织与脏器中脂肪细胞总量与脂肪细胞内脂滴储存量，治疗肥胖综合征以及保障患者形体苗条，可在医疗美容以及医用减肥和脂肪肝治疗中进行应用。

背景技术

肥胖，尤其是过度肥胖，严重困扰着人类健康与生存质量，目前已经越来越成为席卷欧美等国家的异质性的非传染性流行病之一。尽管肥胖本身并不致命，但是作为一个公认的危险因素，其常与多种毁灭性的疾病挂钩，会引发诸如心血管疾病、肿瘤、胰岛素抵抗、II型糖尿病等在内的严重并发症[Trends Cancer,2020,6(2):75-78]。因此，可想而知，作为一个本质上可防可控的慢性炎性疾病，合理控制体重或者体脂对于维持机体的健康稳定具有至关重要的意义。尽管非常但迫切且受众广泛，但遗憾的是，目前并没有很多安全特效的减脂/瘦身药物被批准上市。

事实上，体内的脂肪生成是一个复杂的且受到精致调控的生理过程，只有在脂肪组织脂肪生成失调的情况下会导致严重的肥胖，而脂肪组织的扩张主要涉及1)已有脂肪细胞的异常生长导致的过度脂肪蓄积，以及2)脂肪前体细胞分化导致的脂肪细胞过度增生两条途径[Cell Metab,2012,5(2):222-229]。而脂肪新生分化以及脂肪细胞脂质蓄积(脂质合成加摄取)过程中都会涉及胞内活性氧(ROS)大量升高导致氧化应激，以及内质网(ER)压力剧增后其应激传感器需要肌醇的激酶1α(IRE1α)-X-盒状结合蛋白1(XBP1)超活化，导致下游涉及脂质合成和摄取的通路高度激活[Cell Metab,2009,9(6):556-564]，事实上，高脂饮食本身早就被证明了会激活IRE1α-XBP1[Nat Immunol,2017,18(5):479-480]。因此，如果能同时抑制脂肪前体细胞以及已分化脂肪细胞中的氧化应激与ER应激，似乎是抑制脂肪组织无序扩张两条途径：即脂肪细胞数目以及体积的锁钥之处。

然而，虽然氧化应激与ER应激，尤其是IRE1α-XBP1通路在脂肪发生发展过程中皆处于举足轻重的位置，但是目前已上市的药物或临床以及实验室针对此通路进行的抑制手段仍然较少，氧化应激与ER应激在肥胖进程中并未引起足够的重视。目前FDA批准的、临床上用于治疗全身性肥胖的药物主要有六种：奥利司他、芬特明、芬特明/托吡酯缓释剂、氯卡色林、纳曲酮缓释剂/安非他酮缓释剂和唯一可注射剂型的利拉鲁肽[Nat RevEndocrinol,2018,14(1):12-24]。这些药物中，除了奥利司他是通过减少肠道对摄入的脂肪吸收外，其对胃肠道以及肝脏和肾脏伤害性较大[Arch Intern Med,2011,171(7):702-710]，而其余几款药物大多是通过抑制中枢神经系统途径来减少食欲或增强饱腹感而起作用，因此都有一些可预见的副作用，甚至是类似兴奋剂或者镇静剂的副作用[Nat RevEndocrinol,2018,14(1):12-24]。而目前被FDA批准的局部溶脂的药物则只有Kybella(ATX-101)一款，利用其主要活性成分脱氧胆酸的表面活性作用来无差别摧毁包括脂肪细胞在内的全体局部组织细胞，实现局部溶脂效果[Nat Rev Drug Discov,2016,15(2):73-76]，因此其安全性与生物相容性的问题仍然让人不可忽视。同时，总的来说，局部减脂与全身性减肥的效果在目前FDA批准的药物中并不兼得，即在异质的肥胖人群中，没有一款药物表现出普遍适用的安全高效的局部以及全身性减脂疗效。

所以构建一款生物相容度高，且适用于局部减脂以及全身性减肥的药物至关重要。而鉴于高脂饮食下诱导的超活化IRE1α-XBP1通路在脂肪新生以及蓄积过程中都处于重要位置，因此同时抑制局部或者全身脂肪组织以及脏器脂肪储库中高ER应激与高氧化应激有望解削减脂肪细胞数目与体积进而实现高效减脂。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于局部和全身性减脂的纳米制剂，由油相和水相组成，油相选用甘油三酯(1-70％,w/w)、卵磷脂(1-70％,w/w)等膜材成分，以及氧化应激抑制剂维生素E(0.01-60％,w/w)和脂溶性的内质网UPR通路IRE1α-XBP1抑制剂(0.01-50％,w/w)等成分，水相选用水溶性氧化应激抑制剂维生素C的去离子水溶液(0.01-30％，w/w)，或者水溶性IRE1α-XBP1抑制剂的去离子水溶液(0.01-30％，w/w)，或者去离子水。

所述纳米制剂的油水比例(油相：水相)为0.01％-30％，w/w。

所述纳米制剂为水包油型(O/W)纳米乳。包括但不局限于纳米乳，还可以扩展至其他纳米制剂，如脂质体、纳米胶束或脂质纳米粒等。

(1)除功能性的氧化应激抑制剂以及UPR通路IRE1α-XBP1抑制剂外，其他油相组分(或者主要膜材成分)可被替代为或添加其他安全性高、成药性好、生物相容高、免疫原性弱、容易获得且生产成本较低的脂质成分，包括磷脂酰甘油、脑磷脂、磷脂酰丝氨酸、心磷脂、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、大豆油、橄榄油、短链脂肪酸酯、中链脂肪酸酯、长链脂肪酸酯、硬脂酸甘油酯、蔗糖脂肪酸酯、角鲨烯、角鲨烷、胆固醇。

(2)脂溶性的氧化应激抑制剂维生素E可以被替代为其他维生素E的异构体或者消旋体、茶多酚、β-胡萝卜素、N-乙酰基-L-半胱氨酸、N,N'-二甲基硫脲、聚多巴胺、富里酸、CeO₂、MnO_2-x、Fe₃O₄、普鲁士蓝以及超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等酶类清除剂及其模拟物4-苯甲酸、卟啉氯化物、4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶1-氧基等。

(3)脂溶性的IRE1α-XBP1小分子抑制剂可以是KIRA6、KIRA7、KIRA8、舒尼替尼、舒尼替尼D10、6-溴-2-羟基-3-甲氧基苯甲醛、MKC8866、NSC95682、GSK2850163、STF083010、4μ8C、丰加霉素，与脂质成分混合后可直接穿插在纳米制剂膜材中。在油溶性抑制剂与其他膜材成分以及脂溶性的氧化应激抑制剂混合均匀后，可以采用乳化-超声法、旋转蒸发-探头超声法、薄膜分散法-探头超声法等方法制备得到相应的纳米制剂。此外，水溶性的IRE1α-XBP1小分子抑制剂则可溶解在水相中，占总水相质量的0.01％-30％，可以是KIRA8盐酸盐、3,6-DMAD盐酸盐，以探头超声或者静电吸附等方式直接结合在纳米制剂表面，其制备方法同上。

本发明的另一个目的是提供所述纳米制剂在制备用于局部和/或全身性减脂的药物中的应用。

本发明的应用通过以下两种主要途径实现：

(1)该纳米制剂本身成药，在制成O/W型制剂后直接用以体内递送，给药浓度为0.01mg/kg-1000mg/kg，给药途径为皮下多位点局部注射、静脉注射、腹腔注射、口服、吸入、腔道给药等，本制剂通过缓解皮下或内脏脂肪组织以及脏器脂肪库中待分化或分化过程中的脂肪前体细胞以及生长或成熟过程中的脂肪细胞群体内过高的内质网应激以及氧化应激，实现脂肪组织或者脏器(主要是脂肪肝)中脂肪细胞储库总体数目以及脂肪细胞内部蓄积脂滴的缩减，达到局部或者全身性瘦身以及脂肪肝的防治目的，在医疗美容以及疾病治疗中都有广泛用途。

(2)该纳米制剂制备后在微模具中继续制造微针贴片，给药浓度为0.01mg/kg-1000mg/kg，直接进行“指哪打哪”的局部减脂，在家用瘦身以及医疗美容中进行更为便捷与无痛的安全瘦身。

本发明通过双重抑制脂肪细胞数目增生以及脂滴蓄积生长过程中必备的氧化应激与ER应激，有望实现局部或者全身性瘦身以及脂肪肝的防治。首先，氧化应激抑制剂可以有效清除脂肪细胞家族中过量的ROS，这些ROS造成的氧化应激会在发育过程中的脂肪前体细胞以及生长成熟过程中的脂肪细胞群体诱导ER应激而导致下游脂肪合成摄取活跃。同时，ER应激抑制剂可以有效减少XBP1蛋白作为转录因子而造成的脂肪细胞家族成员进行大量脂质摄取、合成与蓄积行为。氧化应激和ER应激共抑制的脂肪前体细胞与脂肪细胞群体被大大削弱了脂肪性分化与脂滴发育聚集能力，即能有效抑制皮下与内脏脂肪组织中脂肪前体细胞的，进而抑制脂肪组织发生发展并实现脂肪组织缩水与消减，最终完成局部以及全身性减脂。为此，本发明着重于制备一种具有氧化应激和ER应激抑制双重功能的新型纳米制剂来高效局部和全身性减脂，并进行病理性脂肪肝的防治。

本发明的创新性在于制备了一种便于生产、成本低廉、性质稳定、安全性和生物相容性好，且依托于脂肪细胞家族对脂质纳米粒子强大亲和力与吞噬作用的脂肪组织被动靶向制剂，具有良好的生产和应用前景。皮下以及内脏脂肪组织的扩张是由已有脂肪细胞的成熟膨胀以及(潜在的)脂肪前体细胞的分化导致脂肪细胞数目填充导致的，而这两个原因的都与过度的氧化应激和ER应激相关，因此本发明同时缓解了脂肪组织发生发展过程中必需的氧化应激和ER应激，在不同的给药方式与给药位点情况下能为个体提供有效的局部或者全身性减脂。

附图说明

图1是载药纳米乳粒径(处方5)。

图2是载药纳米乳透射电镜形态(处方5)。

图3是载药纳米乳三十天粒径稳定性(处方5)。

图4是载药纳米乳24h对于人体正常细胞的细胞毒性。

图5是载药纳米乳24h对于脂肪细胞家族的细胞毒性。

图6是脂肪细胞家族对载药纳米乳的摄取水平远高于正常体细胞。

图7是载药纳米乳对不同分化阶段的脂肪前体细胞以及已分化的脂肪细胞的抑制效果。

图8是载药纳米乳处理不同分化成熟阶段脂肪细胞胞内ROS和脂质堆积水平。

图9是载药纳米乳处理不同阶段脂肪细胞家族胞内FASN、XBP1蛋白表达抑制作用。

图10是载药纳米乳KTNE显著控制高脂饮食肥老鼠肥胖进展。

图11是载药纳米乳KTNE显著降低肥胖老鼠脂肪质量/体重指数。

图12是皮下多点注射的载药纳米乳KTNE降低肥胖老鼠外周脂肪组织大小(CT图)。

图13是皮下多点注射的载药纳米乳KTNE没有任何脏器毒性。

图14是静脉、腹腔以及皮下多点注射的KTNE对肥胖老鼠减肥疗效。

图15是静脉、腹腔以及皮下注射的KTNE在不同程度上肥胖老鼠脂肪质量/体重指数。

图16是不同给药方式的KTNE显著降低肥胖老鼠外周和/内脏脂肪组织大小(CT图)。

图17是静脉、腹腔以及皮下多点注射的载药纳米乳KTNE没有任何脏器毒性。

图18是不同给药方式的载药纳米乳在皮下与内脏脂肪组织中具有不同的生物分布。

图19是不同给药方式的载药纳米乳在机体主要器官与脂肪组织中具有不同的生物分布。

图20是长效循环载药脂质体粒径。

图21是腹腔注射的长效循环载药脂质体可以有效防治脂肪肝。

图22是载有载有纳米乳的微针贴片有效减少皮下脂肪组织大小。

具体实施方式

本发明结合附图和实施实例作进一步说明。

实施例1纳米乳的处方筛选、药物负载与细胞摄取

(1)载药纳米乳的处方筛选与理化性质表征

表一：纳米乳的处方组成

首先，通过乳化超声法制备载药纳米乳(KT-NE)，并对其进行处方筛选。通过改变磷脂酰胆碱的类型(PL100M和E-80)、各脂质成分的占比以及水相的含量，筛选出稳定性较高，即处方5以PL100M为膜材时(PL100M:α-T:MCT＝0.98％:0.17％：0.81％,w/w)，用于后续研究。该处方下的纳米乳粒径约150nm(动态光散射法检测)(见图1)；在透射电子显微镜(TEM)下呈现典型的乳剂形态(见图2)；稳定性高且易于储存，在4度存放一个月粒径无明显变化(见图3)。

(2)载药纳米乳的细胞毒性实验

按照选取的梯度范围内的给药浓度(0-16μM)，测试对人正常体细胞系以及脂肪细胞家族细胞的24h细胞毒性，探究其安全性与生物相容性。对包括正常人角质形成细胞(HACAT)，肌肉细胞(C2C12)，血管内皮细胞(HUVEC)，肾细胞(HEK293)以及肝细胞(LO2)进行梯度给药24h的细胞毒性测试，发现即使是高浓度下的载药纳米乳也具有可以忽略的细胞毒性(图4)。同时，其对脂肪细胞家族的毒性也较小(图5)，高浓度时对于脂肪前体细胞有轻微毒性，这也有利于减少脂肪前体细胞的脂肪性分化，有利于后期减少脂肪细胞储库的总体数目。

(3)载药纳米乳的细胞摄取

将纳米乳用DID进行荧光标记，比较脂肪细胞家族以及正常体细胞(尤其肌肉细胞、角质形成细胞等局部注射位点体细胞)对载药纳米乳的摄取水平。以3T3-L1、诱导剂1处理的3T3-L1以及诱导剂2处理的3T3-L1等脂肪前体细胞群体以及已分化完全的脂肪细胞和角质形成细胞(HACAT)，肌肉细胞(C2C12)，血管内皮细胞(HUVEC)，肾细胞(HEK293)以及肝细胞(LO2)作为模式细胞考察对于载药纳米乳的24h摄取情况。通过荧光倒置显微镜成像结果发现，鉴于脂肪细胞家族对以脂质为主要膜材的纳米制剂(或脂质成分)有天然的亲和力以及强大的内在化特性，尤其是脂肪细胞和最初始的前体细胞3T3-L1，能够在24h内摄取远多于任何其他用于实验的正常体细胞群体(图6)，说明该载药纳米乳某种程度上可以被视为脂肪组织被动靶向制剂。

实施例2载药纳米乳抑制脂肪细胞增生以及脂滴蓄积的验证

以实施例1处方5为例，从不同分化阶段的脂肪前体细胞或脂肪细胞开始用载药纳米乳KT-NE进行处理，直到同批次的未经处理的3T3-L1细胞已经正常分化为可蓄积脂滴的脂肪细胞，并且已经保持分化完全的脂肪细胞一周，在同批次的对照脂肪细胞分化完成后的第2/4/7天用荧光倒置显微镜进行白光下的形态学拍摄。并且期间对于用KT-NE处理的实验组脂肪细胞家族成员保持正常的诱导分化措施以及培养手段，观察载药纳米乳抑制脂肪细胞增生以及脂滴蓄积的抑制水平。结果显示该载药纳米乳KT-NE能显著抑制脂肪前体细胞朝着脂肪细胞的分化，即使中途并没有改变对其的脂肪细胞谱系的定向诱导，并且，KT-NE对于已分化的脂肪细胞也能显著抑制其过度生长成熟，可以明显看到用KT-NE处理的脂肪细胞的脂滴大小以及数目明显少于未经载药纳米乳处理的正常脂肪细胞(图7)。说明该载药纳米乳KT-NE对于处于任何分化阶段的脂肪前体细胞以及脂肪细胞都能发挥明显的抑制作用，可以显著抑制脂肪细胞数目的变多以及由于脂滴积聚导致的体积变大与“变胖”。

实施例3载药纳米乳抑制氧化应激与ER应激减弱脂质堆积

纳米乳处方：

蛋黄卵磷脂E80 14-30mg

胆固醇 2-10mg

甘油三酯 6mg

α-生育酚 2mg

KIRA8 0.6-5mg

水 1mL。

KIRA8是IRE1α激酶和RNase抑制剂，可以有效减弱下游XBP1 mRNA剪切以及与之相关的脂质大量合成。从不同分化阶段的脂肪前体细胞或脂肪细胞开始用该处方下的载药纳米乳KT-NE进行处理，直到同批次的未经处理的3T3-L1细胞已经正常分化为可蓄积脂滴的脂肪细胞，并且已经胞内有大量脂质蓄积。给药期间期间实验组脂肪细胞家族成员保持正常的诱导分化措施以及培养手段。用脂滴特异性染料BODIPY 493/503染脂肪细胞胞内脂滴，用DCFH-DA检验胞内ROS含量，用Western Blotting实验测试各给药组的XBP1以及下游FASN蛋白表达水平。结果发现，载药纳米乳处理的不同分化成熟阶段脂肪细胞胞内ROS和脂质堆积水平都显著降低(图8)，同时载药纳米乳对不同分化成熟阶段脂肪细胞都能抑制FASN、XBP1蛋白表达(图9)。

实施例4载药纳米乳显著控制高脂饮食宿主肥胖进展

纳米乳处方：

蛋黄卵磷脂PL100M 25-40mg

甘油三酯 10-30mg

α-生育酚 2-10mg

KIRA7 0.2-5mg

水 1mL。

用高脂饮食持续喂养雌性C57BL/6小鼠4周来构建肥胖小鼠模型后，通过皮下脂肪带多点注射载药纳米乳(KTNE)来实现高脂饮食肥胖小鼠局部减脂。连续给药3周后，发现KTNE纳米乳可以显著控制高脂饮食肥老鼠肥胖进展，包括体重以及注射位点附近的腰围大小(图10)，并且可以显著降低肥胖老鼠脂肪质量/体重指数(图11)。Micro-CT结果显示皮下注射的KTNE可以明显降低肥胖小鼠皮下脂肪组织厚度以及范围，明显实现了肥胖小鼠的局部减脂(图12)。并且H&E切片结果显示，皮下多点注射的载药纳米乳(KTNE)没有任何的心肝脾肺肾的脏器毒性(图13)，具有较高的安全性以及生物相容性，皮下脂肪带多点注射适合局部减脂，适用于肥胖患者以及有局部减脂意图的爱美人士。

实施例5不同给药方式的载药纳米乳产生不同的局部/全身性减脂效果

纳米乳处方：

大豆卵磷脂S100 20-50mg

角鲨烯 5-30mg

N,N'-二甲基硫脲4mg

KIRA8 0.07-25mg

水 1mL。

将同等给药剂量的已经验证了具备减脂功效的氧化应激与ER应激双抑制新型纳米制剂KT-NE进行静脉注射、腹腔注射以及皮下多点注射，来验证不同给药方式是否会产生不同的局部或者全身性减肥以及减脂功效。用高脂饮食持续喂养雌性C57BL/6小鼠4周来构建肥胖小鼠模型后，以同等给药总剂量的KT-NE以静脉、腹腔以及皮下三种方式去治疗肥胖小鼠三周，观察其体重水平，腰围大小以及皮下和内脏脂肪的范围，以评估其局部或者全身性减脂药效。结果显示，相较于未经治疗的高脂饮食小鼠，同样饲养环境的用KT-NE进行静脉、腹腔以及皮下多点注射给药的小鼠具有明显更低的体重和腰围大小，尤其是腹腔注射和皮下注射组(图14)，并且具有明显更低的脂肪质量/体重指数(图15)。Micro-CT直接拍摄小鼠体脂分布时发现，三种给药方式的KT-NE都能在一定程度上降低外周脂肪组织以及内脏脂肪组织的大小和范围。其中，腹腔注射的KT-NE能更针对性地减少内脏脂肪含量，即产生了更好的全身性减肥效果，而皮下脂肪带局部多点注射的KT-NE则能更针对性地减少皮下脂肪组织含量，产生更好的局部减脂效果(图16)。H&E切片结果显示不同给药方式的载药纳米乳(KT-NE)没有产生脏器毒性(图17)，具有令人满意的安全性以及生物相容性，因此想要进行全身性减脂或者局部减脂的肥胖患者以及爱美人士在治疗时可以有选择地采取不同的给药方式以达到治疗目的。

实施例6不同给药方式的载药纳米乳具有不同的生物分布

纳米乳处方：

磷脂酰丝氨酸 15-50mg

蔗糖脂肪酸酯 8-16mg

β-胡萝卜素 1-8mg

MKC8866 0.5-20mg

水 2mL。

用高脂饮食持续喂养雌性C57BL/6小鼠4周来构建肥胖小鼠模型后，以同等给药总剂量的DIR标记的载药纳米乳以静脉、腹腔以及皮下三种方式给药，观察其在皮下脂肪组织、内脏脂肪组织以及肝脏等主要器官中的生物分布，以验证其产生不同且优越的局部或全身性减脂效果的生物分布机制。结果显示，不同给药方式的载药纳米乳在皮下与内脏脂肪组织中具有不同的生物分布(图18)，皮下局部注射的荧光载药纳米乳在皮下脂肪组织中具有明显更聚集的生物分布，说明了局部减脂的患者应选择此法进行给药，而腹腔注射的荧光载药纳米乳则在内脏脂肪组织中具有更明显的蓄积效果，说明其更支持产生全身性的减脂效果。而对于同一个体中，不同给药方式的载药纳米乳在机体主要器官与脂肪组织中具有不同的生物分布(图19)，皮下给药50％以上的药物积聚在皮下脂肪组织中，在内脏脂肪组织以及肝脏中均有一定分布；腹腔注射则80％以上药物富集在内脏脂肪组织中，其余药物主要分布在皮下脂肪组织；而静脉注射则50％以上的药物被肝脏吸收，在皮下和内脏脂肪组织中均分布较少，说明可能是一种潜在的脂肪肝治疗手段。

实施例7双抑制微环境应激的长循环脂质体的制备与应用

双抑制长效循序脂质体的组成：

二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)3-30mg，

N-二硬脂酰基磷脂酰乙醇-PEG(DSPE-PEG₂₀₀₀)0.2-3mg，

茶多酚 0.1-10mg，

GSK2850163 0.1-5mg，

水 2mL。

本发明通过旋转蒸发-探头超声法制备ER应激和氧化应激双抑制的脂质体。将处方涉及的脂质以及抑制剂充分溶解并超声分散于氯仿溶液中，在45℃的水浴中用减压旋转蒸发去除脂质溶液的有机溶剂，得到均匀完整的脂质薄膜。随后于45℃用超纯水彻底水化脂质薄膜，并在冰水浴上用探头超声得到粒径均一(150nm左右，图20)且稳定的载药脂质体。该脂质体在高脂进行5周的肥胖C57BL/6小鼠中连续腹腔给药三周，随后对其肝脏进行油红O染色，发现相比于对照组，可以明显降低肝脏切片中脂肪含量，即产生显著的脂肪肝防治效果(图21)。

实施例8新型局部和全身性减脂的锰-铁纳米粒的制备与应用

载药锰-铁纳米粒的组成：

MnCl₂·4H₂O 2g

FeCl₂·4H₂O 1.5g

FeCl₃·6H₂O 1g

MnSO₄溶液适量

4μ8C 20-1000mg。

载4μ8C的含Fe₃O₄的磁芯锰(II)的纳米粒子利用共沉淀方法制备。将FeCl₃·6H₂O溶于超纯水中并加热至60℃后，将适量的4μ8C、MnCl₂·4H₂O和FeCl₂·4H₂O溶解于FeCl₃溶液中，得到的锰(II)/Fe总摩尔比为0.3。将5％聚乙二醇₂₀₀₀(PEG₂₀₀₀)溶液加入到金属氯化物溶液中并通过超声搅拌混合。于60℃下向混合溶液中滴加2.5mol/L KOH溶液，搅拌共沉淀。沉淀物在母液中60℃陈化，分离，洗涤，干燥。将1.0g样品通过超声搅拌将分散于PEG₂₀₀₀溶液中，然后向该混合物中加入100mL 0.04mol/L的MnSO₄溶液并加热至60℃，加入0.045mol/L的KMnO₄溶液85mL，搅拌形成含4μ8C的锰–Fe/MnO₂颗粒，磁分离，用超纯水洗涤后干燥24小时。其中锰–Fe/MnO₂成分可以用于清除ROS，以及4μ8C作为缓解脂肪细胞胞内脂质堆积的抑制剂。

实施例9新型局部和全身性减脂的自组装胶束的制备与应用

载药自组装胶束的组成：

聚多巴胺25mg，

富里酸75mg，

NSC95682 3-40mg。

聚多巴胺的胺基与富里酸的羧基共轭。简而言之，将富里酸溶解在THF中，然后加入N、N'-二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，使其在25℃下活化8小时。将冰冷的n-己烷加入混合物中以沉淀活化的富里酸，随后40℃下进行干燥。聚多巴胺和活化的富里酸在二氯甲烷中孵育15小时导致形成富里酸-聚多巴胺缀合物，并使用旋转蒸发器干燥缀合物。使用稀盐酸溶解偶联物，随后用冰冷的丙酮沉淀。之后，用超纯水混合偶联物，然后过滤和冷冻干燥以获得富里酸-聚多巴胺偶联物。将NSC95682(3mg)分散到三乙胺(TEA,0.1mL)和无水DMSO(1mL)的混合物中，并在无水氮气环境下用等量的NHS和EDC在室温下活化2小时。将富里酸-聚多巴胺(3:1,100mg)加入25mL超纯水中，然后用25mL甲醇稀释并搅拌直至获得光学透明溶液，然后将活化的NSC95682逐滴加入。将混合物在室温下在氮气环境下搅拌24小时以将NSC95682结合到聚多巴胺分子上。终止后的混合物首先用pH 7的磷酸盐缓冲盐水(PBS)透析3天。试以消除多余的未反应底物，然后用超纯水透析3天。通过冻干分离聚合物。该自组装胶束中，聚多巴胺和富里酸可作为ROS清除剂，NSC95682可作为IRE1α-XBP1通路抑制剂，可有效抑制脂肪前体细胞的定向分化以及已存在脂肪细胞的过度生长成熟。

实施例10新型局部和全身性减脂的固体脂质纳米粒的制备与应用

载药固体脂质纳米粒的组成：

单硬脂酸甘油酯0.1-15mg，

PEG₂₀₀₀ 15-100mg，

α-生育酚0.1-10mg，

KIRA8 0.1-15mg。

新型局部和全身性减脂的固体脂质纳米粒可以通过溶剂扩散法制备。将KIRA8和α-生育酚溶解于单硬脂酸甘油酯和PEG₂₀₀₀混合物的固体脂质溶液中。将所得有机溶液快速分散到泊洛沙姆188溶液(0.1％，w/v)中，在400rpm的机械搅拌下，70℃的水浴搅拌5分钟。将预乳液(熔化的脂滴)冷却至室温后，透析膜(MWCO：3.5KDa)与10％聚乙烯吡咯烷酮K30溶液透析48小时，即可浓缩得到载有KIRA8的固体脂质纳米粒，具有显著的局部减脂以及全身性减肥效果。

实施例11新型局部和全身性减脂PEG-PLA胶束的制备与应用

载药PEG-PLA胶束的组成：

聚乙二醇(PEG)-聚乳酸(PLA)20-350mg，

茶多酚 0.1-10mg，

KIRA8 0.01-5mg。

将含有KIRA8和茶多酚的DMSO添加到市售的PEG-PLA偶联物的DMSO溶液中，并将混合溶液逐滴添加到pH 7.4磷酸盐缓冲液搅拌24小时。经超纯水透析24小时后即得载有KIRA8和茶多酚的PEG-PLA胶束，随后用超纯水(1-2mL)溶解即得可注射胶束溶液。ROS清除剂茶多酚和IRE1α-XBP1抑制剂KIRA8可作为活性成分，起到时空上共抑制皮下脂肪组织以及内脏脂肪组织的ER应激和氧化应激的作用。

实施例12含有载药纳米乳的减脂新型微针贴片

纳米乳处方：

磷脂酰丝氨酸 15mg

蔗糖脂肪酸酯 8mg

β-胡萝卜素2mg

MKC8866 0.5-12mg

水 1mL。

在制备得到含有ER应激和氧化应激抑制剂的减脂载药纳米乳后，使用硅胶微模具制造微针贴片，每个针腔为200μm×200μm的四边形底座，逐渐变细至600μm的高度。微针排列成15×15阵列，中心间距为500μm。首先将已制备的载药纳米乳的10％(w/w)透明质酸(HA)溶液沉积到针中然后将空腔在真空下干燥15分钟，随后沉积100μL透明质酸和胶原三肽(CTP)来作为微针基质材料以填充针腔，去除多余溶液后将该微型模具在室温下于干燥处储存过夜以形成HA-CTP水凝胶。。随后，将500μL HA溶液沉积在微针上并在25℃下在空气中保持4小时，待完全干燥后，将即可从微型模具中将载药纳米乳的微针分离出来。制备得到的微针贴片可直接置于需要进行局部减脂的患处，治疗三周后高脂饮食诱导的肥胖雌性C57BL/6小鼠的皮下脂肪明显减少(图22)。

Claims (5)

1.一种用于局部和全身性减脂的纳米制剂，其特征在于，分为油相与水相，油相选用质量比1-70％甘油三酯和1-70％卵磷脂，0.01-60％氧化应激抑制剂维生素E和0.01-50％脂溶性的内质网UPR通路IRE1α-XBP1抑制剂，水相选用质量比为0.01-30％的水溶性氧化应激抑制剂维生素C去离子水溶液，或者0.01-30％水溶性IRE1α-XBP1抑制剂去离子水溶液，或者去离子水。

2.根据权利要求1所述的纳米制剂，其特征在于，所述纳米制剂的油水比例为0.01％-30％，w/w。

3.根据权利要求1所述的纳米制剂，其特征在于，所述纳米制剂为水包油型纳米乳剂，或脂质纳米粒、脂质体和纳米胶束。

4.权利要求1所述纳米制剂在制备应用于局部和/或全身性减脂的药物中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用通过以下两种主要途径实现：

(1)该纳米制剂本身成药，在制成水包油型制剂后直接用以体内递送，给药浓度为0.01mg/kg-1000mg/kg，给药途径为皮下多位点局部注射、静脉注射、腹腔注射、口服、吸入、或腔道给药。

(2)该纳米制剂制备后在微模具中继续制造微针贴片，给药浓度为0.01mg/kg-1000mg/kg，直接进行“指哪打哪”的局部减脂。

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