CN114685663B

CN114685663B - 一种抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体及其应用

Info

Publication number: CN114685663B
Application number: CN202210360541.XA
Authority: CN
Inventors: 杜华茂; 邓晓雨; 陈益
Original assignee: Southwest University
Current assignee: Southwest University
Priority date: 2022-04-07
Filing date: 2022-04-07
Publication date: 2023-09-08
Anticipated expiration: 2042-04-07
Also published as: CN114685663A

Abstract

本发明公开了一种抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体及其应用，所述抗体由轻链和重链组成，所述重链的重链可变区中具有3个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、2和3所示；所述轻链的轻链可变区中具有3个互补决定区CDR1’、CDR2’和CDR3’，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4、5和6所示。本发明方案得到的抗体对高致病猪链球菌、单增李斯特菌、致病性肺炎链球菌产生的胆固醇依赖性细胞溶素(Pneumolysin O,PLY；Suilysin,SLY和Listeriolysin O,LLO)均具有中和作用，可以有效阻断毒素裂解真核细胞，亲和能力强。

Description

一种抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体及其应用

技术领域

本发明属于抗体领域，具体涉及一种抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体及其应用。

背景技术

肺炎链球菌是社区获得性肺炎主要病原体之一。3月龄以上儿童感染肺炎链球菌后常导致化脓性脑膜炎、肺炎、脓胸、急性中耳炎、鼻窦炎等疾病。儿童接种肺炎疫苗(PCV)后死亡率明显下降。目前世界各地耐药菌株广泛传播，多重耐药肺炎链球菌的出现更给临床治疗带来严峻挑战。致病性肺炎链球菌均产生溶血素(Pneumolysin O,PLY)，但是致病性肺炎链球菌缺乏N-端的分泌肽不能自动分泌，只能在自溶酶或β-内酰胺类抗生素作用导致菌体裂解后才能被释放出来。PLY会与靶细胞结合破坏血脑屏障，从而导致间质脑水肿、损伤心肌功能等问题。PLY参与肺炎链球菌致病的多个环节，包括粘附定植、侵袭、体内转运，人间传播等。肺泡巨噬细胞释放的TNF-α与PLY协同激活中性粒细胞的NLRP3炎性小体，之后成熟的IL-1β刺激γδT细胞释放IL-1728。因此，PLY是防治肺炎链球菌感染的重要靶标分子。

猪链球菌在猪咽部以共生状态存在，可引起猪脑膜炎和关节炎和链球菌中毒休克样综合征(STSLS)。致病菌株为序列7型(Sequence Typing 7,ST7)猪链球菌。目前研究表明猪溶素(Suilysin,SLY)激活NLRP3炎性小体是导致STSLS的主要原因。

李斯特菌溶血素(Listeriolysin O,LLO)能辅助单增李斯特菌从巨噬细胞中逃逸，并侵袭其它细胞。抗LLO的抗体能降低胞内单增李斯特菌的数量，并提高实验动物的存活率。

PLY、SLY、LLO同属于胆固醇依赖性细胞溶素家族(CDC)成员，目前已发现47种革兰氏阳性细菌和一种革兰氏阴性细菌(Desulfobulbus Propionicus)产生至少33种CDC毒素，这些CDC分子由471-600个氨基酸残基组成，相似性达45％，在溶液中以可溶性单体形式存在，都表现出溶血活性。因游离胆固醇可以阻断这些毒素分子的溶血作用而得名。胆固醇依赖性细胞溶素(Cholesterol dependent cytolysin,CDC)家族晶体结构分析表明，CDC分子由四个结构域(D1-D4)组成，其中D1由7个β-sheet和一个α-helix组成，D3是α/β/α束状，D4是由C-端连续的肽段折叠而成(含该家族保守的十一肽序列)的β-sandwich结构，D2以伸长的β-strains连接D1与D4。CDC分子D4与细胞膜上的胆固醇结合，并自发聚化形成环状或穹形，形成打孔前复合物，D3发生构象改变使3个α-helix形成2个Transmembraneβ-hairpins(TMHs)，随后D2发生坍塌使TMHs插入细胞膜中实现打孔。

目前，仍未有针对一种可以同时中和3种或3种以上胆固醇依赖性细胞溶素的全人源抗体，因此开发胆固醇依赖性细胞溶素的抗体，将为相关细菌感染性疾病提供更有效的预防和治疗手段。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体。

本发明还提出一种编码上述抗体的核苷酸序列。

本发明还提出含有上述核苷酸序列的表达载体和转基因细胞系。

本发明还提出一种上述抗体的应用。

在本发明的一个方面，提出了一种抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体，由轻链和重链组成，所述重链的重链可变区中具有3个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述轻链的轻链可变区中具有3个互补决定区CDR1’、CDR2’和CDR3’，其中，CDR1’的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，CDR2’的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，CDR3’的氨基酸序列如SEQID NO.6所示。

在本发明的一些实施方式中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.7所示。

在本发明的一些实施方式中，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.8所示。

在本发明的一些实施方式中，所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示。

在本发明的一些实施方式中，所述抗体的轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示。

在本发明的第二方面，提出了编码上述抗体的核酸分子。

在本发明的一些实施方式中，所述编码所述抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

在本发明的一些实施方式中，编码所述抗体的重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，编码所述抗体的轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

在本发明的第三方面，提出了含有本发明第二个方面所述核酸分子的表达盒、表达载体或转基因细胞系。

在本发明的第四方面，提出了上述胆固醇依赖性细胞溶素抗体的应用，所述应用为上述胆固醇依赖性细胞溶素抗体在制备能产生胆固醇依赖性细胞溶素的细菌所导致的感染疾病的治疗药物或诊断试剂中的应用。

在本发明的一些实施方式中，所述细菌为肺炎链球菌、猪链球菌、单增李斯特菌、产气荚膜梭菌、化脓链球菌、阴道加德菌、炭疽芽孢杆菌等能产生胆固醇依赖性细胞溶素的细菌中的一种或多种。

在本发明的一些实施方式中，所述应用为所述胆固醇依赖性细胞溶素抗体在制备猪链球菌感染、肺炎链球菌感染和/或单增李斯特菌感染的治疗药物或诊断试剂中的应用。

一种药物组合物，所述药物组合物包含上述抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体。

在本发明的一些实施方式中，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体。

在本发明的一些实施方式中，所述在本发明的一些实施方式中，所述药学上可接受的载体为药学领域常规的药物载体。

在本发明的一些实施方式中，所述药用载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、黏合剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、甜味剂和香味剂中的至少一种。

根据本发明的实施方式，至少具有以下有益效果：本发明方案提供的胆固醇依赖性细胞溶素抗体为全人源基因工程抗体，对致病性肺炎链球菌、高致病猪链球菌、单增李斯特菌产生胆固醇依赖性细胞溶素(PLY、SLY和LLO)均具有中和作用。本发明方案得到的抗体可以阻断毒素裂解细胞，中和PLY、SLY、LLO对细胞的毒性，亲和能力强，可以开发为辅助治疗药物。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，其中：

图1为本发明实施例1中的无内毒素质粒转染HEK293F细胞后细胞密度和细胞活力的检测结果图；

图2为本发明实施例1中的转染质粒7天内细胞上清中抗体的蛋白免疫印迹图；

图3为本发明实施例1中的纯化后的抗体SDS-PAGE图；

图4为本发明测试例中的抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体对SLY的亲和力结果图；

图5为本发明测试例中的抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体对PLY的亲和力结果图；

图6为本发明测试例中的抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体对LLO的亲和力结果图

图7为本发明测试例中的Western Blot检测抗体识别SLY、PLY和LLO结构域的结果图；

图8为本发明测试例中的不同浓度抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体对4HU SLY的中和作用结果图，其中“*”为p<0.05，“**”为p<0.01；

图9为本发明测试例中的不同浓度抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体对4HU LLO的中和作用结果图，其中，“**”为p<0.01；

图10为本发明测试例中的不同浓度抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体对4HU PLY的中和作用结果图，其中，“**”为p<0.01；

图11为本发明测试例中的不同浓度SLY对细胞毒性的测定结果图；

图12为本发明测试例中的不同浓度PLY对细胞毒性的测定结果图；

图13为本发明测试例中的不同浓度LLO对细胞毒性的测定结果图；

图14为本发明测试例中的抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体中和三种CDC毒素后对HEK293细胞的毒性测定结果图。

具体实施方式

以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。

实施例1

本实施例提供了一种抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体。

1、胆固醇依赖性细胞溶素的抗体的制备

实验步骤：人工合成编码胆固醇依赖性细胞溶素的抗体的重链核苷酸序列和轻链核苷酸序列(序列由上海生工生物工程有限公司进行合成)，将重链核苷酸序列和轻链核苷酸序列经EcoR I/HindⅢ(购自生工生物工程有限公司)双酶切后与经EcoR I/HindⅢ双酶切的质粒载体pcDNA3.4进行连接，得到重组表达质粒，采用无内毒素质粒提取试剂盒(购自生工生物工程有限公司)提取质粒，将质粒与转染试剂按照1：3的比例瞬时转染到密度为2-3×10⁶cells/mL的HEK293F细胞中，在37℃，140rpm条件下培养7天，取出，离心，取细胞上清进行纯化，得到抗体。统计质粒转染得到的阳性HEK293F细胞，在7天内的细胞密度和细胞活力，以及通过Western blotting检测质粒转染HEK293F细胞后，7天内细胞上清中抗体的蛋白质表达水平。

本发明方案的抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体，由轻链和重链组成，重链的重链可变区中具有3个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中，CDR1的氨基酸序列为：GDSVSSNSVA(SEQ ID NO.1)，CDR2的氨基酸序列为：TYYRSKWYN(SEQ ID NO.2)，CDR3的氨基酸序列为：VRVDNSGWGN(SEQ ID NO.3)；轻链的轻链可变区中具有3个互补决定区CDR1’、CDR2’和CDR3’，其中，CDR1’的氨基酸序列为：QSLVHRDGNTY(SEQ ID NO.4)，CDR2’的氨基酸序列为：KIS(SEQ ID NO.5)，CDR3’的氨基酸序列为MQATQFPT(SEQ ID NO.6)。

抗体重链可变区的氨基酸序列：

QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSVAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCVRVDNSGWGNWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.7)。

抗体轻链可变区的氨基酸序列：

EIVMTQSPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHRDGNTYLSWLRQRPGQPPRLLIYKISNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCMQATQFPTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO.8)。

抗体重链可变区的核苷酸序列：

CAGGTGCAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGTTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAACCCAGACACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGTAAGAGTGGATAACAGTGGCTGGGGCAACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA(SEQ IDNO.9)。

抗体轻链可变区的核苷酸序列：

GAAATTGTGATGACCCAGTCTCCACTCTCCTCACCTGTCACCCTTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTCAAAGCCTCGTACACAGAGATGGAAACACCTACTTGAGTTGGCTTCGGCAGAGGCCAGGCCAGCCTCCAAGACTCCTAATTTATAAGATTTCTAACCGGTTCTCTGGGGTCCCAGACAGATTCAGTGGCAGTGGGGCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAAGCTGAGGATGTCGGGATTTATTACTGCATGCAAGCTACACAATTTCCGACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAG(SEQ ID NO.10)。

抗体重链的核苷酸序列：

GCCAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCCCTGGCCCCCAGCAGCAAGAGCACCAGCGGCGGCACCGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCCGAGCCCGTGACCGTGAGCTGGAACAGCGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCCGCCGTGCTGCAGAGCAGCGGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCAGCAGCAGCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTGGAGCCCAAGAGCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCCCCCTGCCCCGCCCCCGAGCTGCTGGGCGGCCCCAGCGTGTTCCTGTTCCCCCCCAAGCCCAAGGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCCGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAGGACCCCGAGGTGAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCCAGAGAGGAGCAGTACAACAGCACCTACAGAGTGGTGAGCGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGAGCAACAAGGCCCTGCCCGCCCCCATCGAGAAGACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCCAGAGAGCCCCAGGTGTACACCCTGCCCCCCAGCAGAGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGAGCCTGACCTGCCTGGTGAAGGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCCCCCGTGCTGGACAGCGACGGCAGCTTCTTCCTGTACAGCAAGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGAGCCTGAGCCCCGGCAAGTGAT(SEQ ID NO.11)。

抗体重链的氨基酸序列：

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO.12)。

抗体轻链的核苷酸序列：

AGGACAGTGGCCGCCCCAAGCGTGTTCATCTTTCCCCCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCTGGCACCGCCAGCGTGGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAGGCCAAGGTCCAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTGCAGTCTGGCAATAGCCAGGAGTCCGTGACCGAGCAGGACTCTAAGGATAGCACATATTCCCTGTCTAGCACCCTGACACTGAGCAAGGCCGATTACGAGAAGCACAAGGTGTATGCCTGTGAAGTCACCCATCAGGGGCTGTCATCACCCGTCACTAAGTCATTCAATCGCGGAGAATGCTGAT(SEQ ID NO.13)。

抗体轻链的氨基酸序列：

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO.14)。

实验结果：结果如图1-2所示，从图中可以看出，图1为无内毒素质粒转染HEK293F细胞后细胞密度和细胞活力的检测结果图，从图1中可以看出，HEK293F的细胞密度随培养时间的增加呈先上升后下降的趋势，并于培养4天时达到最大，HEK293F的细胞活力随时间的增加而下降，图2为转染7天内细胞上清中抗体的蛋白免疫印迹图，从图2中可以看出，抗体浓度在培养7天时达到最大。

2、抗体的纯化

将步骤1制备得到的抗体采用购自海狸公司BeaverBeads^TM ProteinA/G AntibodyPurification Kit抗体纯化试剂盒进行纯化，将纯化得到的抗体进行SDS-PAGE凝胶电泳进行验证，验证结果如图3所示，从图中可以看出，本申请方案成功制备得到高纯度的抗体，后续实验采用纯化后的抗体进行。

测试例

1、抗体亲和能力的检测

抗体亲和能力的检测包括以下步骤：

(1)包被：用包被液将3种毒素(rSLY、rPLY和rLLO)分别稀释为500ng/mL，在ELISA板的每个孔中加入50μL稀释后的毒素，4℃过夜包被；用PBST清洗3次。

(2)封闭：每孔用200μL 1％BSA-PBS在37℃封闭1h，用PBST清洗3次。

(3)孵育一抗：将实施例1制备得到的纯化后的抗体用1％BSA-PBS稀释为100μg/mL，在离心管中将稀释后的抗体进行2倍稀释，依次加入到ELISA板中，每孔50μL抗体，37℃孵育2h。用PBST清洗3次。

(4)孵育二抗：将HRP-anti-human IgG Fc用1％BSA-PBS稀释1000倍，加入到ELISA板中，37℃孵育2h。用PBST清洗3次。

(5)TMB显色：每孔加入50μL TMB显色液，避光室温孵育10min。

(6)终止：加入50μL 2％草酸水溶液进行终止，用酶标仪在450nm处检测吸光度值。

实验结果如图4-6所示，从图中可以看出，本发明方案制备得到的胆固醇依赖性细胞溶素抗体的亲和效力以能引起50％最大效应的浓度(EC₅₀值)表示，抗胆固醇依赖性细胞溶素抗体对SLY的EC₅₀值为0.18nM，对PLY的EC₅₀值为49.91μM，对LLO的EC₅₀值为44.87μM。

2、抗体对SLY、PLY和LLO的结构域识别

分别克隆编码SLY(NCBI:CAZ52040.1)、PLY(NCBI:ABJ55138.1)、LLO(NCBI:ACF40759.1)及三种毒素的D1-3结构域和/或D4结构域的核苷酸序列，经过原核表达、镍亲和柱纯化；与实施例1制备得到的抗体进行蛋白质免疫印迹检测，具体操作方法如下：取经镍亲和柱纯化后的各重组蛋白分别进行SDS-PAGE电泳，电转至PVDF膜，用1％BSA溶液于37℃封闭2h，加入实施例1制备得到的抗体(1:1000稀释)，37℃作用1h后，用PBST缓冲液洗涤3次，加入HRP-anti-human IgG Fc(工作浓度1：1000)，37℃孵育2h。用PBST清洗3次。每孔加入50μL TMB显色液，避光室温孵育10min。最后加入50μL 2％草酸水溶液进行终止，用酶标仪在450nm处检测吸光度值。实验结果如图7所示，结果表明本发明方案制备的抗胆固醇依赖性细胞溶素抗体可以准确识别三种毒素的D1-3结构域，而非D4部分。

三种毒素的D1-3结构域和/或D4结构域的氨基酸序列如下所示：

rSLY D4氨基酸序列：

MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMASMTGGQQMGRGSNSSALTLDHSGAYVAKYNITWEEVSYNEAGEEVWEPKAWDKNGVNLTSHWSETIQIPGNARNLHVNIQECTGLAWEWWRTVYDKDLPLVGQRKITIWGTTLYPQYADEVIE(SEQ ID NO.15)。

rPLY D1-3氨基酸序列：

MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMASMTGGQQMGRGSANKAVNDFILAMNYDKKKLLTHQGESIENRFIKEGNQLPDEFVVIERKKRSLSTNTSDISVTATNDSRLYPGALLVVDETLLENNPTLLAVDRAPMTYSIDLPGLASSDSFLQVEDPSNSSVRGAVNDLLAKWHQDYGQVNNVPARMQYEKITAHSMEQLKVKFGSDFEKTGNSLDIDFNSVHSGEKQIQIVNFKQIYYTVSVDAVKNPGDVFQDTVTVEDLKQRGISAERPLVYISSVAYGRQVYLKLETTSKSDEVEAAFEALIKGVKVAPQTEWKQILDNTEVKAVILGGDPSSGARVVTGKVDMVEDLIQEGSRFTADHPGLPISYTTSFLRDNVVATFQNSTDYVETKVTAYR(SEQ ID NO.16)。

rLLO D1-3氨基酸序列

MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMASMTGGQQMGRGSKDASAFNKENSISSMAPPASPPASPKTPIEKKHADEIDKYIQGLDYNKNNVLVYHGDAVTNVPPRKGYKDGNEYIVVEKKKKSINQNNADIQVVNAISSLTYPGALVKANSELVENQPDVLPVKRDSLTLSIDLPGMTNQDNKIVVKNATKSNVNNAVNTLVERWNEKYAQAYPNVSAKIDYDDEMAYSESQLIAKFGTAFKAVNNSLNVNFGAISEGKMQEEVISFKQIYYNVNVNEPTRPSRFFGKAVTKEQLQALGVNAENPPAYISSVAYGRQVYLKLSTNSHSTKVKAAFDAAVSGKSVSGDVELTNIIKNSSFKAVIYGGSAKDEVQIIDGNLGDLRDILKKGATFNRETPGVPIAYTTNFLKLEHHHHHH(SEQ ID NO.17)。

rLLO D4氨基酸序列：

MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMASMTGGQQMGRGSDNELAVIKNNSEYIETTSKAYTDGKINIDHSGGYVAQFNISWDEINYDPEGNEIVQHKNWSENNKSKLAHFTSSIYLPGNARNINVYAKECTGLAWEWWRTVIDDRNLPLVKNRNISIWGTTLYPKYSNSVDNPIE(SEQ ID NO.18)。

3、抗体阻断rPLY、rSLY和rLLO对人红细胞的裂解作用

抗体阻断PLY、SLY和LLO对人红细胞的裂解作用通过测定阻断rSLY、rLLO和rPLY的溶血活性进行。将25μL不同浓度的rSLY、rLLO和rPLY分别与25μL的实施例1制备的抗胆固醇依赖性细胞溶素抗体等体积混和，37℃孵育30min，50μL/孔加入2％的红细胞悬液，37℃孵育1h，3000rpm离心10min，各取25μL上清至已加入50μLPBS的酶标板中，测定OD₅₉₅值。以2％Triton X-100的阳性对照、0.5％的BSA阴性对照，每个样品做三个复孔。

结果如图8-10所示，图8为不同浓度(80、160、320、640μg/mL)抗胆固醇依赖性细胞溶素抗体对4HU(4倍溶血效价)SLY的中和作用结果图；图9为不同浓度(40、150、600μg/mL)抗胆固醇依赖性细胞溶素抗体对4HU rLLO的中和作用结果图；图10为不同浓度(250、500μg/mL)抗胆固醇依赖性细胞溶素抗体对1HU和4HU rPLY的中和作用的结果图，从图中可以看出，本发明方案制备得到的抗胆固醇依赖性细胞溶素抗体能中和三种毒素对人红细胞的裂解作用，且表现为浓度的依赖性。

4、rPLY，rSLY，rLLO对HEK293的细胞毒性测定

使用xCELLigence RTCA Instrument进行细胞毒性的测定。在E-Plate 16中加入HEK293细胞悬液，每孔3×10⁴cells，待细胞指数长至3.5左右，加入不同浓度的毒素(rPLY，rSLY和rLLO)，体积均为200μL，以200μL DMEM为正常生长对照。

细胞毒性测定采用半数抑制浓度(IC₅₀)表示，结果如图11，12，13所示。图11为不同浓度rSLY(90、110、130、150μg/mL)对细胞毒性的测定结果图；图12为不同浓度rPLY(12.5、25、50、100μg/mL)对细胞毒性的测定结果图；图13为不同浓度rLLO(6.25、12.5、25、50、100μg/mL)对细胞毒性的测定结果图。经计算，rSLY的IC₅₀值为91.43μg/mL；rPLY的IC₅₀值为30μg/mL；rLLO的IC₅₀值为18μg/mL。

5、抗体中和rPLY，rSLY，rLLO后对HEK293的细胞毒性作用检测

将4倍半数抑制浓度的rPLY、rSLY、和rLLO(即120μg/mL PLY、365.72μg/mL SLY、72μg/mL LLO)分别与实施例1制备得到的纯化后的抗体等体积混合(各100μL)，37℃孵育60min后加入生长指数为3.5的HEK293细胞中，在二氧化碳培养箱中继续培养，xCELLigenceRTCA Instrument记录细胞生长情况。DMEM为正常生长对照组，将120μg/mL rPLY、365.72μg/mL rSLY、72μg/mL rLLO分别与等体积生理盐水混合作为阴性对照组。

HEK293细胞的生长结果如图14所示，结果表明本发明方案制备得到的抗胆固醇依赖性细胞溶素抗体能显著中和rPLY、rSLY及rLLO的细胞毒性。

上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

序列表

<110> 西南大学

<120> 一种抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体及其应用

<160> 18

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Val Ala

1 5 10

<210> 2

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn

1 5

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Val Arg Val Asp Asn Ser Gly Trp Gly Asn

1 5 10

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Gln Ser Leu Val His Arg Asp Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 5

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

Lys Ile Ser

1

<210> 6

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro Thr

1 5

<210> 7

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Ser Val Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala

50 55 60

Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn

65 70 75 80

Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Tyr Cys Val Arg Val Asp Asn Ser Gly Trp Gly Asn Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 8

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Arg Gln Arg Pro Gly Gln Pro

35 40 45

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Thr Gln Phe Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 9

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

caggtgcagc tgcagcagtc aggtccagga ctggtgaagc cctcgcagac cctctcactc 60

acctgtgcca tctccgggga cagtgtctct agcaacagtg ttgcttggaa ctggatcagg 120

cagtccccat cgagaggcct tgagtggctg ggaaggacat actacaggtc caagtggtat 180

aatgattatg cagtatctgt gaaaagtcga ataaccatca acccagacac atccaagaac 240

cagttctccc tgcagctgaa ctctgtgact cccgaggaca cggctgtgta ttactgtgta 300

agagtggata acagtggctg gggcaactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360

<210> 10

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gaaattgtga tgacccagtc tccactctcc tcacctgtca cccttggaca gccggcctcc 60

atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta cacagagatg gaaacaccta cttgagttgg 120

cttcggcaga ggccaggcca gcctccaaga ctcctaattt ataagatttc taaccggttc 180

tctggggtcc cagacagatt cagtggcagt ggggcaggga cagatttcac actgaaaatc 240

agcagagtgg aagctgagga tgtcgggatt tattactgca tgcaagctac acaatttccg 300

actttcggcg gagggaccaa ggtggagatc aag 333

<210> 11

<211> 994

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

gccagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 60

ggcaccgccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 120

tggaacagcg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 180

ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 240

tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agtggagccc 300

aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccccg cccccgagct gctgggcggc 360

cccagcgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tgatgatcag cagaaccccc 420

gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 480

tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc ccagagagga gcagtacaac 540

agcacctaca gagtggtgag cgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 600

gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcccgccc ccatcgagaa gaccatcagc 660

aaggccaagg gccagcccag agagccccag gtgtacaccc tgccccccag cagagaggag 720

atgaccaaga accaggtgag cctgacctgc ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 780

gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccccgtg 840

ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctga ccgtggacaa gagcagatgg 900

cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 960

cagaagagcc tgagcctgag ccccggcaag tgat 994

<210> 12

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 13

<211> 325

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

aggacagtgg ccgccccaag cgtgttcatc tttccccctt ccgacgagca gctgaagtct 60

ggcaccgcca gcgtggtgtg cctgctgaac aacttctacc ctcgggaggc caaggtccag 120

tggaaggtgg ataacgccct gcagtctggc aatagccagg agtccgtgac cgagcaggac 180

tctaaggata gcacatattc cctgtctagc accctgacac tgagcaaggc cgattacgag 240

aagcacaagg tgtatgcctg tgaagtcacc catcaggggc tgtcatcacc cgtcactaag 300

tcattcaatc gcggagaatg ctgat 325

<210> 14

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 15

<211> 145

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Leu Val Pro

1 5 10 15

Arg Gly Ser His Met Ala Ser Met Thr Gly Gly Gln Gln Met Gly Arg

20 25 30

Gly Ser Asn Ser Ser Ala Leu Thr Leu Asp His Ser Gly Ala Tyr Val

35 40 45

Ala Lys Tyr Asn Ile Thr Trp Glu Glu Val Ser Tyr Asn Glu Ala Gly

50 55 60

Glu Glu Val Trp Glu Pro Lys Ala Trp Asp Lys Asn Gly Val Asn Leu

65 70 75 80

Thr Ser His Trp Ser Glu Thr Ile Gln Ile Pro Gly Asn Ala Arg Asn

85 90 95

Leu His Val Asn Ile Gln Glu Cys Thr Gly Leu Ala Trp Glu Trp Trp

100 105 110

Arg Thr Val Tyr Asp Lys Asp Leu Pro Leu Val Gly Gln Arg Lys Ile

115 120 125

Thr Ile Trp Gly Thr Thr Leu Tyr Pro Gln Tyr Ala Asp Glu Val Ile

130 135 140

Glu

145

<210> 16

<211> 392

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Leu Val Pro

1 5 10 15

Arg Gly Ser His Met Ala Ser Met Thr Gly Gly Gln Gln Met Gly Arg

20 25 30

Gly Ser Ala Asn Lys Ala Val Asn Asp Phe Ile Leu Ala Met Asn Tyr

35 40 45

Asp Lys Lys Lys Leu Leu Thr His Gln Gly Glu Ser Ile Glu Asn Arg

50 55 60

Phe Ile Lys Glu Gly Asn Gln Leu Pro Asp Glu Phe Val Val Ile Glu

65 70 75 80

Arg Lys Lys Arg Ser Leu Ser Thr Asn Thr Ser Asp Ile Ser Val Thr

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Ser Arg Leu Tyr Pro Gly Ala Leu Leu Val Val Asp

100 105 110

Glu Thr Leu Leu Glu Asn Asn Pro Thr Leu Leu Ala Val Asp Arg Ala

115 120 125

Pro Met Thr Tyr Ser Ile Asp Leu Pro Gly Leu Ala Ser Ser Asp Ser

130 135 140

Phe Leu Gln Val Glu Asp Pro Ser Asn Ser Ser Val Arg Gly Ala Val

145 150 155 160

Asn Asp Leu Leu Ala Lys Trp His Gln Asp Tyr Gly Gln Val Asn Asn

165 170 175

Val Pro Ala Arg Met Gln Tyr Glu Lys Ile Thr Ala His Ser Met Glu

180 185 190

Gln Leu Lys Val Lys Phe Gly Ser Asp Phe Glu Lys Thr Gly Asn Ser

195 200 205

Leu Asp Ile Asp Phe Asn Ser Val His Ser Gly Glu Lys Gln Ile Gln

210 215 220

Ile Val Asn Phe Lys Gln Ile Tyr Tyr Thr Val Ser Val Asp Ala Val

225 230 235 240

Lys Asn Pro Gly Asp Val Phe Gln Asp Thr Val Thr Val Glu Asp Leu

245 250 255

Lys Gln Arg Gly Ile Ser Ala Glu Arg Pro Leu Val Tyr Ile Ser Ser

260 265 270

Val Ala Tyr Gly Arg Gln Val Tyr Leu Lys Leu Glu Thr Thr Ser Lys

275 280 285

Ser Asp Glu Val Glu Ala Ala Phe Glu Ala Leu Ile Lys Gly Val Lys

290 295 300

Val Ala Pro Gln Thr Glu Trp Lys Gln Ile Leu Asp Asn Thr Glu Val

305 310 315 320

Lys Ala Val Ile Leu Gly Gly Asp Pro Ser Ser Gly Ala Arg Val Val

325 330 335

Thr Gly Lys Val Asp Met Val Glu Asp Leu Ile Gln Glu Gly Ser Arg

340 345 350

Phe Thr Ala Asp His Pro Gly Leu Pro Ile Ser Tyr Thr Thr Ser Phe

355 360 365

Leu Arg Asp Asn Val Val Ala Thr Phe Gln Asn Ser Thr Asp Tyr Val

370 375 380

Glu Thr Lys Val Thr Ala Tyr Arg

385 390

<210> 17

<211> 411

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Leu Val Pro

1 5 10 15

Arg Gly Ser His Met Ala Ser Met Thr Gly Gly Gln Gln Met Gly Arg

20 25 30

Gly Ser Lys Asp Ala Ser Ala Phe Asn Lys Glu Asn Ser Ile Ser Ser

35 40 45

Met Ala Pro Pro Ala Ser Pro Pro Ala Ser Pro Lys Thr Pro Ile Glu

50 55 60

Lys Lys His Ala Asp Glu Ile Asp Lys Tyr Ile Gln Gly Leu Asp Tyr

65 70 75 80

Asn Lys Asn Asn Val Leu Val Tyr His Gly Asp Ala Val Thr Asn Val

85 90 95

Pro Pro Arg Lys Gly Tyr Lys Asp Gly Asn Glu Tyr Ile Val Val Glu

100 105 110

Lys Lys Lys Lys Ser Ile Asn Gln Asn Asn Ala Asp Ile Gln Val Val

115 120 125

Asn Ala Ile Ser Ser Leu Thr Tyr Pro Gly Ala Leu Val Lys Ala Asn

130 135 140

Ser Glu Leu Val Glu Asn Gln Pro Asp Val Leu Pro Val Lys Arg Asp

145 150 155 160

Ser Leu Thr Leu Ser Ile Asp Leu Pro Gly Met Thr Asn Gln Asp Asn

165 170 175

Lys Ile Val Val Lys Asn Ala Thr Lys Ser Asn Val Asn Asn Ala Val

180 185 190

Asn Thr Leu Val Glu Arg Trp Asn Glu Lys Tyr Ala Gln Ala Tyr Pro

195 200 205

Asn Val Ser Ala Lys Ile Asp Tyr Asp Asp Glu Met Ala Tyr Ser Glu

210 215 220

Ser Gln Leu Ile Ala Lys Phe Gly Thr Ala Phe Lys Ala Val Asn Asn

225 230 235 240

Ser Leu Asn Val Asn Phe Gly Ala Ile Ser Glu Gly Lys Met Gln Glu

245 250 255

Glu Val Ile Ser Phe Lys Gln Ile Tyr Tyr Asn Val Asn Val Asn Glu

260 265 270

Pro Thr Arg Pro Ser Arg Phe Phe Gly Lys Ala Val Thr Lys Glu Gln

275 280 285

Leu Gln Ala Leu Gly Val Asn Ala Glu Asn Pro Pro Ala Tyr Ile Ser

290 295 300

Ser Val Ala Tyr Gly Arg Gln Val Tyr Leu Lys Leu Ser Thr Asn Ser

305 310 315 320

His Ser Thr Lys Val Lys Ala Ala Phe Asp Ala Ala Val Ser Gly Lys

325 330 335

Ser Val Ser Gly Asp Val Glu Leu Thr Asn Ile Ile Lys Asn Ser Ser

340 345 350

Phe Lys Ala Val Ile Tyr Gly Gly Ser Ala Lys Asp Glu Val Gln Ile

355 360 365

Ile Asp Gly Asn Leu Gly Asp Leu Arg Asp Ile Leu Lys Lys Gly Ala

370 375 380

Thr Phe Asn Arg Glu Thr Pro Gly Val Pro Ile Ala Tyr Thr Thr Asn

385 390 395 400

Phe Leu Lys Leu Glu His His His His His His

405 410

<210> 18

<211> 170

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Leu Val Pro

1 5 10 15

Arg Gly Ser His Met Ala Ser Met Thr Gly Gly Gln Gln Met Gly Arg

20 25 30

Gly Ser Asp Asn Glu Leu Ala Val Ile Lys Asn Asn Ser Glu Tyr Ile

35 40 45

Glu Thr Thr Ser Lys Ala Tyr Thr Asp Gly Lys Ile Asn Ile Asp His

50 55 60

Ser Gly Gly Tyr Val Ala Gln Phe Asn Ile Ser Trp Asp Glu Ile Asn

65 70 75 80

Tyr Asp Pro Glu Gly Asn Glu Ile Val Gln His Lys Asn Trp Ser Glu

85 90 95

Asn Asn Lys Ser Lys Leu Ala His Phe Thr Ser Ser Ile Tyr Leu Pro

100 105 110

Gly Asn Ala Arg Asn Ile Asn Val Tyr Ala Lys Glu Cys Thr Gly Leu

115 120 125

Ala Trp Glu Trp Trp Arg Thr Val Ile Asp Asp Arg Asn Leu Pro Leu

130 135 140

Val Lys Asn Arg Asn Ile Ser Ile Trp Gly Thr Thr Leu Tyr Pro Lys

145 150 155 160

Tyr Ser Asn Ser Val Asp Asn Pro Ile Glu

165 170

Claims

1.一种抗胆固醇依赖性细胞溶素的抗体，由轻链和重链组成，所述重链的重链可变区中具有3个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3，其中，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述轻链的轻链可变区中具有3个互补决定区CDR1’、CDR2’和CDR3’，其中，CDR1’的氨基酸序列如SEQID NO.4所示，CDR2’的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，CDR3’的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。

3.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

4.一种编码如权利要求1-3任一项所述抗体的核酸分子。

5.根据权利要求4所述的核酸分子，其特征在于，编码所述抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，编码所述抗体的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

6.含有如权利要求4或5所述的核酸分子的表达盒、表达载体或转基因细胞系。

7.权利要求1-3任一项所述的抗体在制备猪链球菌感染、肺炎链球菌感染和/或单增李斯特菌感染的治疗药物或诊断试剂中的应用。

8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含如权利要求1-3任一项所述的抗体。