CN114668841A - 一种可激活的纳米光敏剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种可激活的纳米光敏剂及其制备方法和应用，该方法包括：在超声条件下，将MDAPORBE和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇加入到有机溶剂中，得到混合溶液；并将得到的混合溶液快速注入去离子水中，超声处理10～15分钟后，再通过旋转蒸发仪蒸发后进行超滤纯化即可。本发明制得的纳米光敏剂以含有探针MDAprobe为主体，通过MDA的亲核反应改变分子内的共轭体系，导致吸光度的变化来实现光动力、光热治疗，可以实现肿瘤特异性光动力和光热治疗。

Description

一种可激活的纳米光敏剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别地，涉及一种可激活的纳米光敏剂及其制备方法和应用。

背景技术

光疗，通常包括光动力疗法(PDT)和光热疗法(PTT)。光动力疗法会产生有毒的活性氧(ROS)，导致细胞膜中多不饱和脂肪酸(PUFA)的脂质过氧化，改变膜的流动性和结构，并增加膜的渗透性，最终导致膜完整性的丧失。光热疗法能够诱导局部热休克，直接杀死肿瘤细胞，破坏肿瘤血管，引发免疫反应破坏肿瘤细胞。

目前，大多数传统的花菁类光敏剂(PSs)溶解性和光稳定性差，不适合进一步的临床实践，限制了其在肿瘤精准治疗中的应用。同时，光敏剂会在正常组织中大量富集，大大增加了对正常组织的不良副作用。目前，在癌症特异性生物标志物的刺激下，一些纳米光敏剂能够在特定的分析物作用下激活光敏性能，以允许在激光照射下特异性破坏癌细胞，从而减少对正常组织的毒副作用。然而，大多数可激活的纳米光敏剂仅对单一分析物有反应，这种单因素激活的纳米光敏剂通常不能区分癌症病变部位与正常组织，从而导致潜在的假阳性或假阴性诊断和治疗结果。

因此，现有的光敏剂存在以下缺陷：(1)可激活光敏剂较少，容易对正常组织造成毒副作用。(2)单一激活的光敏剂容易被血液或正常组织中的分析物激活，导致假阳性结果。(3)常用光敏剂如卟啉、酞菁等水溶性差，不利于活体应用。

发明内容

针对上述现有光敏剂的存在的缺陷，解决当前常用光敏剂水溶性不足、光稳定性差以及单一因素激活导致对正常组织的毒副作用等缺点，本发明采用一种两亲性聚合物(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇)包裹丙二醛探针得到了一种可激活的纳米光敏剂，该纳米探针能够在肿瘤微酸性环境下特异性激活，从而成功区分了正常组织与肿瘤组织，成功解决了目前单因素激活的光敏剂对正常组织产生的毒副作用。在此基础上，本发明使用“预激活”策略，使用激光多次照射肿瘤，在每次激光照射后，已经激活的纳米光敏剂能够产生单线态氧从而氧化肿瘤细胞的脂质，进而产生更多丙二醛，这些额外产生的丙二醛能够进一步激活纳米光敏剂，从而实现纳米光敏剂治疗效果的显著提升，并且在激光照射下能够有效消融肿瘤，成功解决了目前纳米光敏剂治疗周期过后肿瘤复发的问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种可激活的纳米光敏剂的制备方法，包括以下步骤：

在超声条件下，将MDA PROBE和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇加入到有机溶剂溶液中，得到混合溶液；并将得到的混合溶液快速注入去离子水中，超声处理10～15分钟后，再通过旋转蒸发仪蒸发后进行超滤纯化，即得所述纳米光敏剂；

其中，MDA PROBE是由罗丹明类似物与吲哚共轭连接，化学结构式如下：

进一步的，MDA PROBE和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的质量比为1:50-200。

进一步的，所述的纳米光敏剂在超纯水和磷酸盐缓冲液中的水合粒径均为60-70nm。

进一步的，所述有机溶剂为四氢呋喃。

进一步的，混合溶液通过旋转蒸发仪蒸发的温度为40-50℃。

本发明还提供了一种可激活的纳米光敏剂，采用上述的制备方法制得。

本发明还提供了上述的一种可激活的纳米光敏剂的应用，所述的纳米光敏剂用于检测动物细胞内的丙二醛及其含量的变化。

本发明还提供了上述的一种可激活的纳米光敏剂的应用，包括所述的纳米光敏剂在荧光成像中的应用，以及在制备抗肿瘤光动力治疗药物中的应用。

进一步的，所述的纳米光敏剂的应用条件是PH为6.0-7.2的弱酸环境下。

进一步的，所述的纳米光敏剂在制备抗肿瘤光动力治疗药物中的应用条件为在生物体瘤内注入纳米光敏剂后，进行660nm激光间隔照射。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明制备了一种生物相容性良好的纳米光敏剂，所述纳米光敏剂由丙二醛(MDA)响应的分子探针(MDAprobe)和两亲聚合物二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇自组装形成，这种纳米光敏剂以含有探针MDAprobe为主体，通过MDA的亲核反应改变分子内的共轭体系，导致吸光度的变化来实现光动力、光热治疗，可以实现肿瘤特异性光动力和光热治疗。

2、本发明制备的纳米光敏剂(简称NPs)由小分子丙二醛探针MDA probe和两亲聚合物二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇制成。对于分析物丙二醛，由于MDA在中性条件(pH7.4)时是以烯醇阴离子形式存在，其反应性较低，而在弱酸性条件下(pH≤6.4)，MDA以β-羟基丙烯醛形式存在，此时反应活性会大大提高。纳米光敏剂中的MDAprobe可以被丙二醛识别并开启共轭结构。对于分子探针，MDA probe结构中含有酰肼结构，当没有分析物时，酰肼结构会导致MDA probe共轭体系不足，因此，在近红外区域没有明显吸收，导致在激光照射时无法产生有效的PDT/PTT治疗效果。当处于肿瘤微酸性环境(6.0-7.2)时，高反应活性的MDA能够以亲核反应的形式与MDA probe的酰肼结构反应，导致MDA probe生成吡唑结构，而吡唑结构会导致酰肼结构的破坏从而提高MDA probe的共轭体系，使得MDA probe在近红外区域吸收明显增加。而且，由于纳米光敏剂中负载了MDA probe，因此，纳米光敏剂具有了与MDA probe类似的功能，即仅在酸性条件下与MDA反应产生很强的近红外区域吸收，在此基础上，我们使用近红外的激光照射，纳米光敏剂就能够吸收足够的激光能力从而产生光动力和光热治疗效果，并且由于酸性条件下激活的性质，纳米光敏剂NPs也能够有效地减少对正常组织的毒副作用。

3、由于光动力治疗过程中产生的活性氧能够进攻肿瘤细胞脂质，产生更多的丙二醛，因此，在瘤内注射纳米光敏剂后，通过对肿瘤进行首次激光照射，此时产生的活性氧会促进肿瘤产生额外的丙二醛，可显著提高纳米光敏剂的开启程度，从而实现更好的光动力和光热治疗效果。由于这些作用，纳米光敏剂NPs可以大大提高光动力和光热治疗的功效，以抑制肿瘤的生长。此外，纳米光敏剂NPs具有很好的光学性质，可以用于活体荧光成像，以指导和跟踪癌症治疗。因此，本发明制备的纳米光敏剂NPs可以显著提高癌症成像和治疗的准确性和特异性，具有很大的应用前景。

4、本发明通过简单纳米共沉淀法制备纳米药物，制备流程短、操作简单、成本低。利用该纳米药物较好的光学特性，通过近红外荧光成像实现了该纳米光敏剂对肿瘤的成像及精准检测。因此，本发明制备的纳米光敏剂对癌症的诊疗具有临床指导意义。

5、本发明制备的纳米光敏剂能够在酸性条件下与MDA响应，实现荧光信号，光动力和光热治疗的开启，因此能够大大降低对正常组织的毒副作用。本发明通过“预激活”策略，能够通过多次激光照射成功实现治疗效果的提升，相比于当前治疗策略的单次激光照射，能够减少纳米光敏剂的用量，降低原材料成本，并且进一步降低对生物体的毒副作用。

除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本发明作进一步详细的说明。

附图说明

构成本申请的一部分的附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1是本发明合成纳米光敏剂的步骤；

图2是本发明制得的纳米光敏剂的粒径分布；

图3是本发明制得的纳米光敏剂在PBS中于不同浓度丙二醛孵育过夜后的吸收光谱变化图；

图4是本发明制得的纳米光敏剂对不同浓度的MDA溶液的荧光强度变化图；

图5是本发明制得的纳米光敏剂和不同分析物孵育后吸收光谱的变化图；

图6是本发明制得的纳米光敏剂在不同pH的PBS中与MDA孵育后产生单线态氧的能力曲线图；

图7是本发明制得的纳米光敏剂在不同pH的PBS中与MDA孵育后的光热性质测试结果；

图8是不同浓度纳米光敏剂条件下4T1细胞的存活率；

图9是本发明制得的纳米光敏剂与4T1细胞在不同孵育方式下4T1细胞的存活率；

图10是不同时间点记录的小鼠荧光图像；

图11是小鼠肿瘤区域升温曲线图；

图12是小鼠肿瘤的生长曲线图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明可以根据权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。

实施例1：

一种可激活的纳米光敏剂的制备方法，包括以下步骤：

在超声处理下，将MDA probe(50μg)和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(5mg)加入四氢呋喃(THF)中，使得各组分混合均匀，并快速注入去离子水中。大大过量的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇能够尽可能的包裹MDA probe，避免分子探针的损伤。持续超声处理10～15分钟后，疏水的MDA probe能够进入两亲性聚合物二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的疏水空腔，而聚乙二醇的亲水层能够裸露在颗粒表面，随后将溶液通过旋转蒸发仪在40～50℃下进行蒸发，以除去过量的THF。最后，通过超滤将纳米光敏剂溶液纯化3～5次，以除去未成功修饰的MDA probe，最终得到所述纳米光敏剂。

图1为合成所述纳米光敏剂的步骤。由图1可知：疏水的MDA PROBE在有机溶剂(例如：四氢呋喃)中与过量的两亲性聚合物二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(100倍)超声混匀，此时两者均匀分散在有机溶剂中，随后快速注射到水相中，此时疏水的MDA PROBE无法在水溶液中溶解，因此更倾向于进入过量二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的疏水空腔，而聚乙二醇亲水链将会暴露在水中，进而组装形成外表亲水，内部疏水的纳米光敏剂NPs。

以下采用实施1制得的纳米光敏剂，进行实验性能测试。具体如下：

实验测试1：粒径测试

测试纳米光敏剂在超纯水和磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的水合粒径，最终得到粒径大小约60-70nm的纳米光敏剂。这种粒径大小的纳米光敏剂能够更容易被肿瘤血管吸收，从而实现更优异的肿瘤吸收效率。

图2为纳米光敏剂的粒径分布图。纳米光敏剂在去离子水和磷酸盐缓冲液中水合粒径均大约为60-70nm，表明疏水的MDAPROBE已经成功被两亲性硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇包裹形成纳米光敏剂并且均匀的分散。其中，60-70nm的粒径由于大于10nm，因此不容易被肾脏代谢，并且聚乙二醇的存在使得纳米光敏剂不容易被巨噬细胞清除，因此能够在体内有更长的循环时间，长时间的循环也有利于材料被肿瘤区域血管摄取。

实验测试2：纳米光敏剂检测丙二醛的能力验证

采用实施例1制得的纳米光敏剂，快速将不同浓度的丙二醛溶液添加到200μL含纳米光敏剂的不同pH磷酸盐缓冲盐水(10×PBS)中，并通过吸收光谱法记录吸收光谱。

图3为纳米光敏剂在PBS中于不同浓度丙二醛(0-500微摩/升)孵育过夜后的吸收光谱变化图。从图3可以看出纳米光敏剂对丙二醛响应后伴随着730nm吸收的增强。由于纳米光敏剂是由MDA PROBE组成，由于MDA PROBE中肼的强亲核性，丙二醛中的醛基被进攻，从而导致MDA PROBE共轭体系增强，共轭体系的增加导致MDA PROBE只需要较少的能量就能够从基态跃迁至激发态，而较低的能力对应更长的波长。因此，近红外区域(730nm)的吸光度才能够明显增强。随着MDA浓度的增加，MDA PROBE被进一步的反应转化为共轭体系增加的状态，因此，近红外区域的吸光度与MDA浓度直接相关，进而能够通过730nm处吸光度信号增强的程度判断体内丙二醛的水平。

图4为纳米光敏剂对不同浓度的MDA溶液(0-500微摩/升)的荧光强度变化图，从图4可以看出纳米光敏剂在近红外区域的荧光信号随着MDA浓度的增加而增加。与图3中吸收光谱原理类似，MDAPROBE在近红外区域吸收极弱，因此，使用近红外激光激发时无法使其激发。当共轭体系恢复后，MDAPROBE能够将激发光转换为荧光信号，因此，荧光信号随着MDA浓度的增加逐渐增强，能够在使用纳米光敏剂的同时检测荧光信号强度实现MDA浓度的实时评估。

实验测试3：纳米光敏剂的选择性测试

为了进行选择性测试，将各种活性物质与纳米光敏剂一起孵育过夜，例如：PBS，·OH(500μM)，ONOO^-(500μM)，¹O₂(500μM)，tBuOOH(500μM)，HClO(500μM)，Fe³⁺(500μM)，Cu²⁺(500μM)，Hcy(500μM)，Cys(500μM)，GSH(500μM)，H₂O₂(500μM)，甲醛(500μM)，甲基乙二醛(500μM)，乙二醛(500μM)，丙二醛(400μM)。通过吸收光谱法记录吸收光谱。

图5为纳米光敏剂和不同分析物孵育后吸收光谱的变化图，可以看出纳米光敏剂对MDA有特异性识别的能力，而其他活性物种不会明显改变纳米光敏剂吸光度。由于纳米光敏剂与MDA的化学反应是特异性的，只有肼结构的两个氨基都被反应后才能够有效的增加吸光度，而丙二醛的两个醛基与两个氨基反应的产物是五元环吡唑，五元环具有更低的能量，因此，使化学反应朝右进行，更有利于MDA的识别，能够更特异性的识别MDA升高的疾病。

实验测试4：纳米光敏剂的可激活光动力能力测试

采用实施例1制备的纳米光敏剂，在不同pH的PBS缓冲液中与MDA孵育过夜后使用商业化单线态氧探针SOSG(Singlet Oxygen Sensor Green)测试660nm激光照射后单线态氧的产生。通过荧光光谱记录SOSG的荧光变化。

图6为纳米光敏剂在不同pH的PBS中与MDA孵育后产生单线态氧的能力曲线图，由于商业化单线态氧探针SOSG与单线态氧反应后荧光强度会明显增加，并且SOSG荧光强度的增强倍数与单线态氧产生正相关，所以可以通过SOSG的荧光强度增强倍数判断单线态氧的产生量。从图6可以看出纳米光敏剂在中性条件下几乎不产生单线态氧，而在弱酸条件下能够产生更多单线态氧。由前面图3可知，纳米光敏剂与MDA反应后在近红外区域吸光度会增加，因此，用特定近红外波长的光照射肿瘤部位时，聚集在肿瘤组织的纳米光敏剂会被MDA开启，进而会将周围的氧气源源不断地转换成单线态氧，而单线态氧能与附近的生物大分子发生氧化反应，产生细胞毒性进而杀伤肿瘤细胞。与肿瘤的传统疗法相比，光动力治疗的优势在于其非侵入性、微创或无创、选择性高、副作用小且耐药性小。并且在弱酸性条件下产生单线态氧，能够更有效地减少富集在正常组织中的纳米光敏剂对正常组织的毒副作用。

实验测试5：纳米光敏剂的可激活光热能力测试

采用实施例1制备的纳米光敏剂，在不同pH的PBS缓冲液中与MDA孵育过夜后使用热成像仪测试660nm激光照射后溶液温度变化。

图7为纳米光敏剂在不同pH的PBS中与MDA孵育后的光热性质测试结果，从图7可以看出纳米光敏剂在中性条件下几乎没有光热性质，而在弱酸条件下能够在660nm激光照射下迅速升温至55摄氏度(pH5.44)。纳米光敏剂与MDA反应后在近红外区域吸光度会增加，在外部光源(近红外光，因其具有更长的波长和更少的能量的光子，有助于更深地渗透到生物组织中)照射下，光敏剂被特定波段光激发，然后释放出振动能量(热量)，从而杀死目标细胞或组织。而中性条件，由于纳米光敏剂在近红外区域几乎没有吸收，因此几乎不会产生热量。

实验测试6：纳米光敏剂通过细胞毒性验证在生物体内应用前景

采用实施例1制备的纳米光敏剂，在补充有10％胎牛血清(FBS)和1％抗生素(青霉素-链霉素)的杜尔贝科改良培养基DMEM(dulbecco's modified eagle medium)培养基中培养小鼠乳腺癌(4T1)细胞。将细胞以每孔1×104个细胞的密度接种到96孔板中，并在5％CO₂/95％空气加湿的培养箱中于37℃培养12小时。然后，将更改为含有不同浓度纳米光敏剂(0-40μM的MDAprobe)的DMEM培养基孵育24小时。最后，通过标准3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，MTT)测定法评估细胞活力。

图8为不同浓度纳米光敏剂条件下4T1细胞的存活率。由图8可知，4T1细胞在不同浓度纳米光敏剂存在下并没有明显死亡，表明纳米光敏剂显示出很低的细胞毒性，可以用于生物体成像。另一方面，也说明纳米光敏剂在没有光照时是生物安全的，无害的，说明其具有进一步生物应用的潜力。

实验测试7：纳米光敏剂通过细胞毒性验证在生物体内光动力和光热治疗的应用前景

采用实施例1制得的纳米光敏剂，同时采用实验测试6中的细胞培养方法，将纳米光敏剂与4T1细胞在不同的孵育条件下通过标准MTT测定法评估细胞活力。

图9纳米光敏剂与4T1细胞在不同孵育方式下4T1细胞的存活率。4T1细胞在pH7.4时，与纳米光敏剂孵育下并没有明显死亡，表明纳米光敏剂在中性条件显示出很低的细胞毒性。当pH下降至6.5，连续光照和间隔光照都能大大降低4T1细胞的存活率，说明纳米光敏剂能够在弱酸性条件下杀死4T1细胞，而间隔光照相对于连续光照显示出更强的细胞毒性。同时，由前面图6和图7数据得知，当纳米光敏剂在弱酸和MDA共同存在时，才会展现明显地光动力和光热性质。因此，在pH＝7.4时，纳米光敏剂几乎没有开启，所以即使在光照下也不会展现出明显地细胞毒性，而pH下降至6.5，此时纳米光敏剂已经开启。而“预激活”策略通过第一次激光照射，能够在照射之后产生热和单线态氧，进一步加剧细胞的氧化应激水平，因此在第二次激光照射后能够产生更强的细胞毒性，说明“预激活”治疗策略能够更有效地用于4T1肿瘤细胞治疗。

实验测试8：纳米光敏剂用于肿瘤小鼠模型的近红外荧光成像

对于体内成像，将带有4T1肿瘤的小鼠尾静脉注射纳米光敏剂，然后用异氟烷在氧气中麻醉进行成像。在不同时间点(0min，5min，1h，2h，3.5h和4h)记录荧光图像。需要说明的是：本实验测试采用的所有动物实验均符合相关法律并获得湖南大学机构动物护理和使用委员会的批准。

图10为不同时间点记录的小鼠荧光图像。从图10可以看出：在735nm波长的光激发下，随着时间的推移，肿瘤区域的荧光信号逐渐增强，在210min达到峰值。由图4可知，纳米光敏剂与MDA反应后近红外荧光信号会明显增加，随着纳米光敏剂不断在肿瘤区域富集，其与MDA的反应逐渐达到饱和，并且在210分钟达到平台期。另一方面，荧光强度通常与吸光度正相关，并且与光动力/光热治疗效果相关，说明在注射纳米光敏剂后210分钟可能是治疗的最佳时间点，对于指导肿瘤治疗有着很大的帮助。

实验测试9：纳米光敏剂用于肿瘤小鼠模型治疗

对于体内治疗，将带有4T1肿瘤的小鼠瘤内注射纳米光敏剂，分为如下五组：(1)PBS对照组；(2)单独激光照射组；(3)单独注射纳米光敏剂组；(4)纳米光敏剂+连续光照组；(5)纳米光敏剂+间隔光照组。其中，连续光照组在瘤内注射纳米光敏剂后150分钟的时间点以0.7w/cm²的660nm激光功率照射5分钟，随后以1.1w/cm²的660nm激光功率照射照射3分钟；间隔光照组在瘤内注射纳米光敏剂后45分钟的时间点以0.7w/cm²的660nm激光功率照射5分钟，随后在注射纳米光敏剂后150分钟时间点给予1.1w/cm²的660nm激光功率照射3分钟。并从第1天开始每隔1天记录肿瘤尺寸。

图11为小鼠肿瘤区域升温曲线图，从图11可以看出：肿瘤区域在瘤内注射纳米光敏剂后在660nm激光照射下出现明显温度升高，而纳米光敏剂+间隔光照组的升温程度明显高于纳米光敏剂+连续光照组。本发明采用“预激活”策略使用两次激光照射，第一次激光照射后肿瘤区域“预激活”的纳米光敏剂产生了部分活性氧和热量能够氧化肿瘤区域的脂质，从而产生更多的MDA，而这部分的MDA能够进一步激活纳米光敏剂，从而在第二次激光照射时具有更好的治疗效果，这种“预激活”策略能够在不提高光敏剂用量的前提下，达到更好的治疗效果，更充分的利用光敏剂。

图12为小鼠肿瘤的生长曲线图，从图12可以看出肿瘤在瘤内注射纳米光敏剂后在660nm激光照射下明显消退，而纳米光敏剂+间隔光照组的肿瘤被完全抑制，纳米光敏剂+连续光照组的肿瘤在治疗后期有明显的复发迹象。肿瘤复发是光动力/光热治疗的常见问题，主要是原发部位肿瘤经正规治疗消退后，过一段时间又在原发病灶所在的组织器官上长出新的肿瘤，还有一种可能是再次出现一个与原发肿瘤没有任何关系的新肿瘤。最主要的原因是患者体内残存了肿瘤细胞，只要有肿瘤细胞存在那么复发就会成为威胁到病人生存的最大因素。因此，使用“预激活”治疗策略能够更好的抑制肿瘤复发，这对于临床应用有着巨大的指导意义。

综上所述，本发明制备了一种生物相容性良好的纳米光敏剂，所述纳米光敏剂由丙二醛(MDA)响应的分子探针(MDA probe)和两亲聚合物二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇自组装形成，这种纳米光敏剂以含有探针MDA probe为主体，通过MDA的亲核反应改变分子内的共轭体系，导致吸光度的变化来实现光动力、光热治疗，可以实现肿瘤特异性光动力和光热治疗。该纳米光敏剂通过自组装作用形成纳米颗粒，该纳米光敏剂仅在肿瘤处特异性激活，减轻对正常细胞的毒副作用，能够有效解决了商业化光敏剂本身存在的不足，极大改善了一般光敏剂存在的水溶性差、毒副作用高的问题，并结合肿瘤部位的特异性，激活纳米药物进行癌症高效治疗。此外，本发明通过简单纳米共沉淀法制备纳米药物，制备流程短、操作简单、成本低。利用该纳米药物较好的光学特性，通过近红外荧光成像实现了该纳米光敏剂对肿瘤的成像及精准检测。因此，这一纳米纳米光敏剂对癌症的诊疗具有临床指导意义。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种可激活的纳米光敏剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

在超声条件下，将MDA PROBE和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇加入到有机溶剂中，得到混合溶液；并将得到混合溶液注入去离子水中，超声处理10～15分钟后，再通过旋转蒸发仪蒸发后进行超滤纯化，即得所述纳米光敏剂；

其中，MDAPROBE的化学结构式如下：

2.根据权利要求1所述的一种可激活的纳米光敏剂的制备方法，其特征在于，MDAPROBE和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇的质量比为1:50-200。

3.根据权利要求1所述的一种可激活的纳米光敏剂的制备方法，其特征在于，所述的纳米光敏剂在超纯水和磷酸盐缓冲液中的水合粒径均为60-70nm。

4.根据权利要求1所述的一种可激活的纳米光敏剂的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为四氢呋喃。

5.根据权利要求1所述的一种可激活的纳米光敏剂的制备方法，其特征在于，混合溶液通过旋转蒸发仪蒸发的温度为40-50℃。

6.一种可激活的纳米光敏剂，其特征在于，采用如权利要求1～5所述的制备方法制得。

7.根据权利要求6所述的一种可激活的纳米光敏剂的应用，其特征在于，所述的纳米光敏剂用于检测动物细胞内的丙二醛及其含量的变化。

8.根据权利要求6所述的一种可激活的纳米光敏剂的应用，其特征在于，包括所述的纳米光敏剂在荧光成像中的应用，以及在制备抗肿瘤光动力治疗药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的一种可激活的纳米光敏剂的应用，其特征在于，所述的纳米光敏剂应用条件是PH为6.0-7.2的弱酸环境下。

10.根据权利要求8所述的一种可激活的纳米光敏剂的应用，其特征在于，所述的纳米光敏剂在制备抗肿瘤光动力治疗药物中的应用条件为在生物体瘤内注入纳米光敏剂后，进行660nm激光间隔照射。

Images